Biologia-celula-24

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Sombra
RejillaBomba
Metal en
evaporación
Muestra
BIOLOGÍA CELULAR10
DIFRACCIÓN DE RAYOS X
Esta técnica instrumental proporciona mayor resolu-
ción que las técnicas más perfeccionadas de microsco-
pía electrónica. Consiste básicamente en hacer atrave-
sar un haz fino de rayos X sobre el material que se ha
de analizar y colocar detrás una placa fotográfica que
recoge el espectrograma.
La técnica se basa en que las radiaciones se difrac-
tan al encontrar pequeños obstáculos. Si un rayo de
luz blanca (longitud de onda = 550 nm) incide sobre
un retículo de 1000 líneas por mm, por ejemplo, se di-
fractará dando las diferentes bandas del espectro. A
partir de los ángulos de difracción pueden calcularse
los espacios del retículo. Si en vez de luz blanca se uti-
lizan rayos X (longitud de onda = 0.1 nm), el enrejado
mencionado sería demasiado amplio para que se pro-
dujera difracción. Pero se pueden utilizar redes de di-
fracción mucho más pequeñas, tales como cristales,
cuyas moléculas constituyen verdaderos retículos de
dimensiones moleculares capaces de difractar radia-
ciones de tan pequeña longitud de onda. Del mismo
modo, en vez de estos cristales puede emplearse ma-
terial biológico, cuya organización molecular resulta
mucho más compleja.
Sabiendo el ángulo de incidencia de un punto del es-
pectrograma y la longitud de onda del haz incidente, se
puede calcular el espacio que produce la difracción. Es
posible, de este modo, deducir la disposición de los áto-
mos individuales de las moléculas que forman el mate-
rial examinado. Los rayos X tienen un poder de penetra-
ción mucho mayor que el de los electrones y se pueden
utilizar con materiales muy gruesos.
RADIOAUTOGRAFÍA
Esta técnica se basa en la sensibilidad de las emulsio-
nes fotográficas a las radiaciones ionizantes. Como en
las células no existen normalmente elementos radiac-
tivos, si a un tejido de un organismo se le suministran
moléculas marcadas con isótopos radiactivos (que se
seleccionan de modo que sólo se incorporen a una o
varias sustancias determinadas), se puede seguir el
camino de esos isótopos por el tejido y, por tanto, de
dichas sustancias, viendo a qué tipos celulares del te-
mario es dispersado de manera inelástica, esto es, cam-
bia de dirección y pierde energía en forma de rayos X.
Como el número de capas electrónicas y las energías
relativas son características de cada átomo, se produce
un espectro de energías de rayos X, que se expresa en
kiloelectronvoltios. El análisis de este espectro, median-
te un analizador de rayos X acoplado a un microscopio
electrónico, sirve para identificar y cuantificar los áto-
mos de la muestra, lo que hace de él un instrumento
analítico.
Figura 1.3. Imagen a poco aumento (X5000) de una cé-
lula tratada mediante criofractura-réplica y sombreado me-
tálico. Los orgánulos celulares seccionados no quedan en
el mismo plano sino que aparecen por encima o por debajo
de la superficie del corte. N: núcleo mostrando los poros
nucleares (flechas). G: complejo de Golgi. M: mitocondria.
(Tomado de NCI Frederick). 
Figura 1.4. Preparación de
una muestra con sombreado
metálico.
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