Biologia-celula-30

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BIOLOGÍA CELULAR16
bolo y el vaso y se destruyen lo suficiente como para que
sus orgánulos queden libres, pero no para que se rom-
pan. Unos 20 minutos de homogeneizado bastan para
obtener este efecto.
El homogeneizado se somete a la 1ª centrifugación,
que se realiza a unas 1000 veces la fuerza de la grave-
dad (1000 G), durante unos 20 minutos. El resultado es
que los núcleos se sedimentan, mientras que los demás
orgánulos celulares quedan en el sobrenadante.
Éste se somete a la 2ª centrifugación (10 000 G duran-
te 20 minutos). El sedimento formado está compuesto
por mitocondrias, lisosomas y peroxisomas.
El sobrenadante se somete a la 3ª centrifugación
(105 000 G; 2 horas). El sedimento consiste en retículo
endoplasmático rugoso y ribosomas libres (la denomi-
nada fracción microsómica). El sobrenadante consiste
en citoplasma fundamental con microtúbulos y filamen-
tos, retículo endoplasmático liso, complejo de Golgi y
membrana plasmática (fracción citosólica).
Para separar el retículo endoplasmático de los ribo-
somas en la fracción microsómica se resuspende ésta y
se trata con un detergente (desoxicolato de sodio); des-
pués se centrifuga a 105 000 G durante 20 minutos. En
el sedimento quedan los ribosomas y en el sobrenadan-
te, las membranas de retículo endoplasmático.
El sedimento de la segunda centrifugación puede re-
suspenderse en gradiente de sacarosa (distintas capas en
concentraciones crecientes) y centrifugarse a 100 000 G
el reconocimiento célula a célula, al unirse a los hidratos
de carbono de la superficie celular e inducir la proximidad
entre las células adyacentes a cuya superficie se han uni-
do. Debido a este reconocimiento específico de monosa-
cáridos, las lectinas se han utilizado para el reconocimien-
to de la composición de hidratos de carbono localizados
tanto en las superficies celulares como en el citoplasma.
Las lectinas más empleadas se muestran en la Tabla 1.1.
Las técnicas de marcaje con lectinas son similares a las
usadas en inmunohistoquímica: en microscopía óptica las
lectinas pueden marcarse con peroxidasa y ponerse de
manifiesto mediante diaminobencidina (Fig. 1.10.D); en
microscopía electrónica pueden observarse marcando el
anticuerpo secundario con oro coloidal (Fig. 1.11.B).
TÉCNICAS MOLECULARES APLICADAS 
A LA BIOLOGÍA CELULAR
FRACCIONAMIENTO CELULAR
Es una técnica utilizada para separar los distintos orgá-
nulos y componentes celulares con miras a su estudio
bioquímico y con el microscopio electrónico (Fig. 1.12).
La técnica se inicia con la homogeneización. El tejido
se tritura en un homogeneizador (émbolo que gira me-
diante un motor, y que se ajusta a la pared de un vaso),
de manera que las células son comprimidas entre el ém-
Figura 1.11. A: Marcaje antiactina con oro coloidal en microscopía electrónica en testículo del teleósteo Gambusia affinis. Las par-
tículas de oro (flechas) se detectan por todo el citoplasma basal de la célula folicular (F), mientras que en el citoplasma apical de es-
ta célula sólo se detecta donde hay contacto con espermátidas (E). X30 000. B: Marcaje de L-fucosa con la lectina AAA en una es-
permátida humana observada con microscopía electrónica. Las partículas de oro aparecen en el complejo de Golgi (G) y en la
vesícula acrosómica (VA). X45 000. (Cortesía de M.I. Arenas. Departamento de Biología Celular y Genética. Universidad de Alcalá.) 
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