Microbiologia Medica (571)

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CAPÍTULO 39 Ortomixovirus (virus de la infl uenza) 573
A. Reacción en cadena de la polimerasa
Para el diagnóstico de la gripe se prefi eren las pruebas rápi-
das basadas en la detección de RNA de la gripe en muestras 
clínicas utilizando la reacción en cadena de la polimerasa con 
transcriptasa inversa (RT-PCR, reverse transcription polyme-
rase chain reaction). La RT-PCR es rápida (<1 día), sensible y 
específi ca. Se han creado tecnologías moleculares múltiples 
que permiten la detección rápida de diversos patógenos en una 
sola prueba.
B. Aislamiento e identifi cación del virus
La muestra que se analizará para el aislamiento del virus se 
debe mantener a una temperatura de 4 °C hasta la inoculación 
en el cultivo celular, ya que el congelamiento y el deshielo redu-
cen la capacidad para aislar el virus. Sin embargo, si el tiempo 
de almacenamiento supera los cinco días, la muestra debe con-
gelarse a una temperatura de −70 °C.
Los procedimientos de cultivo viral tardan tres a 10 días. 
Por lo regular, los huevos embrionados y las células renales de 
simio primario han sido los métodos de aislamiento de elección 
para los virus de la gripe, aunque se pueden utilizar algunos 
linajes celulares continuos. Los cultivos de células inoculadas 
se incuban en ausencia de suero, que puede contener factores 
inhibidores virales inespecífi cos, y en presencia de tripsina, 
que desdobla y activa la HA de manera que el virus en replica-
ción se diseminará por todo el cultivo.
Los cultivos de células pueden valorarse para determi-
nar la presencia del virus mediante hemadsorción tres a cinco 
días después de la inoculación, o el líquido del cultivo puede 
analizarse para detectar el virus después de cinco a siete días 
mediante hemaglutinación o inmunofl uorescencia. Si los resul-
tados son negativos, se hace un pase hacia los cultivos en fresco. 
Este pase puede ser necesario porque las cepas virales primarias 
a menudo son difíciles de cultivar y proliferan con lentitud.
Las cepas virales pueden identifi carse mediante inhibición 
de la hemaglutinación (HI, hemagglutination inhibition), un 
procedimiento que permite la determinación rápida del tipo 
y el subtipo de virus de la gripe. Para realizar esto, se deben 
utilizar sueros de referencia a las cepas que predominan en la 
actualidad. La hemaglutinación por la nueva cepa será inhi-
bida por el antisuero al subtipo homólogo.
Para un diagnóstico rápido, los cultivos de células obte-
nidos mediante el método de centrifugación y cultivo se pue-
den inocular y teñir uno a cuatro días después con anticuerpos 
monoclonales contra los microorganismos respiratorios. Los 
cultivos virales rápidos también se pueden valorar mediante 
RT-PCR para identifi car un microorganismo cultivado.
Es posible identifi car el antígeno viral directamente en 
células exfoliadas en aspirados nasales utilizando anticuerpos 
fl uorescentes. Esta prueba es rápida (tarda sólo algunas horas) 
pero no es tan sensible como PCR o el aislamiento del virus, no 
proporciona detalles completos sobre la cepa viral y no genera 
una cepa que se pueda caracterizar. Se comercializan pruebas 
rápidas para la detección de antígeno de la gripe que tardan 
menos de 15 min. Sin embargo, la sensibilidad y la especifi ci-
dad de dichas pruebas son variables; el hecho de obtener un 
resultado negativo no descarta la existencia de infección por 
infl uenza.
C. Análisis serológico
Los anticuerpos contra varias proteínas virales (HA, NA, NP 
y matriz) se producen durante la infección por el virus de la 
gripe. La respuesta inmunitaria contra la glucoproteína de HA 
se relaciona con la resistencia a la infección.
Las pruebas serodiagnósticas sistemáticas utilizadas 
están basadas en la HI y enzimoinmunoanálisis de adsorción 
(ELISA). Se necesitan sueros pares de fase aguda y de conva-
lecencia, pues las personas sanas por lo general tienen anti-
cuerpos contra la gripe. Debe detectarse un incremento de 
cuatro veces o más en las concentraciones para diagnosticar 
una infección por gripe. Los sueros humanos a menudo con-
tienen inhibidores de mucoproteína inespecífi cos que deben 
destruirse antes del análisis mediante HI.
La prueba de HI revela la cepa del virus que produce la 
infección sólo si se dispone del antígeno correcto. Las prue-
bas de neutralización son las más específi cas y las que mejor 
pronostican la susceptibilidad a la infección pero tienen menor 
rendimiento y se tardan más tiempo que las demás pruebas. La 
prueba ELISA es más sensible que los otros análisis.
Pueden presentarse complicaciones al tratar de identifi car 
la cepa del virus de la gripe infectante mediante la respuesta 
de anticuerpo del paciente pues a menudo ocurren respuestas 
anamnésicas.
Epidemiología
Los virus de la gripe se encuentran en todo el mundo y causan 
brotes epidémicos anuales de intensidad variable. Se calcu -
la que las epidemias anuales de gripe estacional producen tres 
a cinco millones de casos de enfermedad grave y 250 000 a 
500 000 fallecimientos en todo el mundo. La repercusión eco-
nómica de los brotes de gripe A es importante a causa de la 
morbilidad inherente a las infecciones. Se han calculado costos 
económicos de 10 a 60 millones por millón de población en 
los países desarrollados, lo que depende de la magnitud de la 
epidemia.
La confi guración epidemiológica entre los tres tipos de 
gripe varía mucho. La gripe C es menos signifi cativa; causa 
enfermedad respiratoria leve y esporádica pero no gripe epi-
démica. La gripe B a veces produce epidemia, pero la gripe de 
tipo A puede propagarse por continentes y en todo el mundo 
en epidemias masivas llamadas pandemias.
La incidencia de la gripe alcanza su máximo durante el 
invierno. En Estados Unidos, las epidemias de gripe por lo 
general se presentan desde enero hasta abril (y de mayo a agosto 
en el hemisferio del sur). Debe existir una cadena interpersonal 
continua de transmisión para que se mantenga el microorga-
nismo entre las epidemias. Se puede detectar alguna actividad 
viral en grandes centros de población durante cada año, lo que 
indica que el virus se mantiene endémico en la población y 
produce algunas infecciones asintomáticas o leves.
A. Cambio antigénico
Los brotes periódicos aparecen a causa de los cambios antigé-
nicos en una o dos glucoproteínas de la superfi cie del virus. 
Cuando el número de personas susceptibles en una pobla-
ción alcanza una magnitud sufi ciente, la nueva cepa del virus 
produce una epidemia. El cambio puede ser gradual (de ahí 
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