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PROYECTO DE GRADO Presentado a LA UNIVERSIDAD DE LOS ANDES FACULTAD DE INGENIERÍA DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA ELÉCTRICA Y ELECTRÓNICA Para obtener el t́ıtulo de INGENIERO ELECTRÓNICO por Gabriel Alejandro Sánchez Ávila IMPLEMENTACIÓN DE HARDWARE PARA ESTIMULACIÓN ELÉCTRICA TRANSCRANEAL, Y CARACTERIZACIÓN DE IMPEDANCIA DE SEÑALES APLICADAS POR EL EQUIPO EN ANIMALES PEQUEÑOS Sustentado el PRIMERO de JUNIO de 2016 frente al jurado: - Asesor: Fredy Enrique Segura-Quijano PhD, Profesor Asociado, Universidad de Los Andes Mario Valderrama PhD, Profesor Asociado, Universidad de Los Andes - Jurados : Johann Faccelo Osma PhD, Profesor Asistente , Universidad de Los Andes FES A mi madre y hermana, amigos y todos los que me apoyaron para llegar hasta aqúı Agradecimientos Quisiera agradecer a los profesores Fredy Segura y Mario Valderrama por todo su apoyo, a Olguer Morales por proveer las bases para el desarrollo de laboratorio, a Alejandro Monroy por su ayuda en el ensamble de la tarjeta y a Alfredo Sanchez y Alejandro Osorio por su ayuda en el proceso de caracterización. i Tabla de contenido 1 Introducción 1 1.1 Descripción de la problemática y justificación del trabajo . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1.2 Alcance y productos finales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1.3 Objetivos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1.3.1 Objetivos generales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1.3.2 Objetivos espećıficos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 Marco teórico, conceptual e histórico 3 2.1 Marco Teórico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 2.2 Marco Conceptual . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 2.3 Marco Histórico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 3 Definición y especificación del trabajo 5 3.1 Definición . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 3.2 Especificaciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 4 Metodoloǵıa del trabajo 6 4.1 Plan de trabajo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 4.2 Búsqueda de información . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 4.3 Alternativas de desarrollo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 5 Trabajo realizado 8 5.1 Caracterización de tejido . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 5.2 Modificación y ensamble de estimulador . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 5.3 Activación de dispositivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13 6 Validación del trabajo 14 6.1 Metodoloǵıa de prueba . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 6.2 Resultados de medida de impedancia sobre ratas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 6.3 Evaluación del plan de trabajo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16 7 Discusión 20 8 Conclusiones y trabajos futuros 21 8.1 Conclusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21 8.2 Trabajo Futuros . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21 Referencias 21 A Resumen Ejecutivo 23 A.1 Objetivos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23 A.1.1 Objetivos generales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23 A.1.2 Objetivos espećıficos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23 B Protocolo para medicion de impedancia en tejido 35 C Curvas de impedancia sobre craneo de ratas I 37 D Curvas de impedancia en craneo de ratas II 43 ii Índice de figuras 5.1 Diagrama de tornillos para medida de impedancia. 1. Frontal Izquierdo, 2. Frontal derecho, 3. Hipocampo (electrodo de profundidad), 4.Parietal Izquierdo, 5. Parietal Derecho, 6. Occipital (Referencia) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 5.2 Sujeto tras cirugia para fijar tornillos de medida, regleta y electrodo de profundidad. . . 9 5.3 Diagrama de bloques de dispositivo original. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 5.4 Diagrama de bloques con modificación para salida de voltage positiva y negativa. . . . . 10 5.5 Configuración de restador de voltaje con amplificadores operacionales.[12] . . . . . . . . 11 5.6 Diseño en Eagle de PCB (cara superior). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 5.7 Diseño en Eagle de PCB (cara inferior). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 5.8 Conexión de Launchpad a estimulador para programación de MSP430G2552 . . . . . . . 12 5.9 Conexión del dispositivo a modulo HC05 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 6.1 Conexión de estimulador comercial a rata Wistar y medida para comprobar inyección de corriente . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 6.2 Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA y curva de tendencia aproximada y ecuación. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a encefalo-dorso de cabeza de rata. . . . . . . . . . . . . . . . . . 15 6.3 Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz y curva de tendencia aproximada y ecuación. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a encefalo-dorso de cabeza de rata. . . . . . . . . . . . . . 15 6.4 Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz y curva de tendencia aproximada y ecuación. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a placa completa fronto-occipital de cabeza de rata. . . . 16 6.5 Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a placa completa fronto-occipital de cabeza de rata. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17 6.6 Diagrama de puntos de medida de impedancia. 1. Frontal Izquierdo, 2. Frontal derecho, 3. Hipocampo (electrodo de profundidad), 4.Parietal Izquierdo, 5. Parietal Derecho. los valores obtenidos se ilustran el la tabla 6.1. Se trata de los puntos en que se conectaron tornillos para medida ilustrados en la figura 5.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18 6.7 Modo Sinusoidal de salida del dispositivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18 6.8 Modo señal arbitraria (1) de salida del dispositivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19 6.9 Modo señal arbitraria (2) de salida del dispositivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19 C.1 Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a placa completa fronto-occipital de cabeza de rata. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37 C.2 Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente aplaca completa fronto-occipital de cabeza de rata. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37 C.3 Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente base de craneo dorsal. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38 iii ÍNDICE DE FIGURAS iv C.4 Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente encefalo dorso. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38 C.5 Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente encefalo dorso. . . 39 C.6 Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a corteza. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39 C.7 Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a corteza. . . . . . 40 C.8 Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a meninges. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40 C.9 Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a meninges. . . . 41 C.10 Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a hueso techo del craneo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41 C.11 Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a hueso techo del craneo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42 D.1 Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43 D.2 .Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43 D.3 Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44 D.4 .Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44 D.5 Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45 ÍNDICE DE FIGURAS v D.6 .Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45 D.7 Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46 D.8 .Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46 Índice de tablas 5.1 Comandos ASCII para control de dispositivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13 6.1 Valores de Resistencia y capacitancia calculados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16 vi 1. Introducción 1.1 Descripción de la problemática y justificación del trabajo La estimulación eléctrica transcraneal es una herramienta de investigación en humanos y ratones, con diversas aplicaciones desde formas de tratamiento tratamiento de parkinson hasta variaciones en apren- dizaje y memoria. Previamente se han reportado resutados [2] de la aplicación de corriente directa (tDCS) en la corteza frontal de ratas durante la etapa de sueño no REM y sus efectos sobre su memoria a largo plazo. En la Universidad de los Andes se busca ver los efectos que la aplicación de corriente alterna (tACS) pueda tener en la memoria a largo plazo en ratas Wistar, para lo que se requiere un dispositivo capaz de generar señales unipolares y bipolares, sinusoidales y cuadradas, pequeño y de bajo consumo. El proyecto se titula “Potenciación del sueño de ondas lentas por estimulación eléctrica transcraneal para mejorar el desempeño en tareas de memoria semántica después de la exposición a estrés agudo en dos modelos comportamentales”. Este se encuentra bajo los lineamientos del comité de ética y por tanto estaba autorizado para usar sujetos vivos a lo largo de su desarrollo. Previamente[10] se diseñó una tarjeta que cumple algunos de estos requerimientos pero no se comprobó si la densidad de corriente de la señal entregada se mantiene a traves del craneo de los animales de prueba y solo generaba señales de corrientes positivas. En este trabajo se presenta el diseño de una tarjeta de estimulacion electrica transcraneal asi como los resultados de caracterización de impedancia de la misma. Adicionalmente se presenta la carac- terizacion de impedancia de un segmento de craneo de raton y el modelo circuital equivalente. Esto se hizo para garantizar que la corriente entregada por el dispositivologre mantener una densidad de corriente significativa sobre el cerebro del animal y se este dando la estimulación deseada. Finalmente se presentan los resultados de mediciones de corriente entregadas por la tarjeta tras circular por un circuito que simule las condiciones de impedancia presentes en las pruebas sobre animales. Ya que el proyecto de investigación del que éste hace parte se encuentra aprobado por el comité de ética, se pudo hacer uso de sujetos animales. 1.2 Alcance y productos finales Inicialmente se planteó la presentación del dispositivo para que cumpliese los requerimientos de señal plantedos. Sin embargo, a lo largo del desarrollo del mismo se vió la necesidad de desarrollar elementos adicionales como las curvas de impedancia de las muestras de craneos a estimular. Adicionalmente, se presentan los resultados de salida de corriente de la tarjeta cuando se acopla un circuito equivalente al segmento de craneo para garantizar que la tarjeta entrega la corriente y tipo de señal deseada. 1.3 Objetivos 1.3.1 Objetivos generales Implementación de Hardware para estimulación eléctrica transcraneal, y caracterización de impedancia de señales aplicadas por el equipo en animales pequeños. 1.3.2 Objetivos espećıficos - Implementar un sistema para estimular con señales eléctricas de tipo pulsada, unipolar, bipolar, sinusoidal y señales arbitrarias definidas por el usuario 1 CAPÍTULO 1. INTRODUCCIÓN 2 - Definir protocolos de experimentación. - Caracterizar la impedancia de las diferentes señales aplicadas previo al desarrollo en pruebas en ani- males. - Generar curvas de impedancia de un segmento de craneo de ratón en diferentes frecuencias y con variación de corriente. - Caracterizar la impedancia de las diferentes señales aplicadas previo al desarrollo en pruebas en ani- males. - Validar el desempeño del sistema implementado con pruebas en animales mediante uso de dispositivo de recepción desarrollado en trabajos previos. 2.Marco teórico, conceptual e histórico 2.1 Marco Teórico La estimulación eléctrica transcraneal (TES por sus siglas en inglés) consiste en la modificación de actividad neuronal en el cerebro por medio de un campo eléctrico inducido por impulsos de corriente. Esta se considera una alternativa a la estimulación magnética (TMS) con la que se pueden manipular los campos eléctricos del cerebro de manera más directa, ya que la TES puede llevarse a cabo con equipos d2 menor costo y más seguros.[1] 2.2 Marco Conceptual Tradicionalmente, un dispositivo de estimulación eléctrica transcraneal se compone de un generador de onda que produce campo eléctrico en los electrodos colocados en la superficie del cráneo del sujeto [9].La estimulación por corriente directa (tDCs) es una subcategoŕıa de la TES, en la que se utilizan pulsos de corriente directa para generar campo eléctrico; este método ha sido explorado previamente en la Universidad de los Andes [7]. La estimulación transcraneal con corriente alterna (tACs) consiste en la interferencia directa de los ritmos corticales en el cerebro por medio de inyección de corrientes electricas oscilatorias. Se espera que se pueda sincronizar o desincronizar ritmos corticales dependiendo de si se aplican una o varias frecuencias e incluso ocasionar efectos neuroplásticos si la señal se aplicada por sesiones prolongadas [1]. Los parametros más importantes a controlar durante una sesión de tACs son la corriente de estimu- lación, la frecuencia de onda, la forma de onda que modificará el campo electrico, y finalmente la fase de la mis,a ya qye el mismo tipo de onda puede producir efectos tanto favorables como desfavorables a una condición dada como es el caso de la actuación cognitiva cuando se efectúa o no con una señal en fase en la corteza frontal izquierda y corteza parietal con una señal de 6H [1]. Cabe notar que los mecanismos de acción de la estimulación electrica transcraneal aun no son enten- didos completamente, y las teorias existentes al respecto son basadas en estudios en que se aplica el tratamiento a pacientes con desordenes caracterizados en detalle. Dependiendo en el rango de frecuen- cia de estimulación, se cree que afecta de manera directa la actividad oscilatoria del cerebro cuando se trata de rangos de frecuencia de EEG tradicionales, mientras que actúa sobre la excitabilidad de membranas de las neuronas cuando se trata en el rango de kHz. 2.3 Marco Histórico Se han realizado modelos de craneos de ratas Wistar por medio del metodo de elementos finitos [3] [5] por medio de los cuales previamente se ha estimado la corriente necesaria para lograr estimulación con corriente directa tDCS [2] haciendo uso de electrodos en la corteza frontal. Sin embargo, en estos trabajos no se ha comprobado que dicha corriente inyectada afuera del craneo logre producir la señal deseada a traves del mismo. Se encontró que sobre estos animales, una corriente de 9uA es suficiente para inducir campos electricos en la corteza frontal sin afectar las estructuras anchas subcorticales [2] por lo que se define como una corriente máxima de estimulación apropiada para estudios de efectos generados por TES sin afectar de manera permanente y nociva a los sujetos. Los diversos tipos de estimulación eléctrica transcraneal han sido explorados en el trabajo desarrol- lado por Morales [10], en que se utilizaba un generador de señales para obtener un amplio rango de 3 CAPÍTULO 2. MARCO TEÓRICO, CONCEPTUAL E HISTÓRICO 4 frecuencias posibles para estimulación. Adicionalmente, se han realizado estudios estudios en detalle acerca del impacto que tiene sobre for- mas de estimulación electrica transcraneal, la geometria de los electrodos utilizado, asi como el posi- cionamiento de los mismos y la región del electrodo en que se aplica la corriente.[13] Estudios como el de Saturnino reflejan los bajos estandares de reporte de parámetros de estimulacion (adicionales a intensidad de la corriente y frecuencia aplicada) que dificultan la replicación de experimentos y en consecuencia, de resultados obtenidos. Esto entorpece el avance el campo de manera organizada y confiable. 3.Definición y especificación del trabajo 3.1 Definición El dispositivo desarrollado esta destinado a aplicación en animales pequeños dado su tamaño; adi- cionalmente, se pueden generar señales sinusoidales y triangulares de hasta 1kHz. Se pueden producir señales de frecuencias significativamente mayores, pero dados los componentes utilizados en el diseño como lo son amplificadores operacionales, la funcionalidad y la calidad de las señales generadas en un rango de frecuencia superior no esta garantizada. 3.2 Especificaciones El dispositivo es capaz de generar señales de voltaje al menos de 4 tipos: Sinusoidal, cuadrada, y 2 tipos de señales ”arbitrarias” (señales pulsadas). Se tiene una salida mı́nima de 5e-5 V pico a pico al tener salida de onda sinusoidal y salida máxima de 5V pico a pico. Se garantiza funcionamiento del dispositivo en frecuencias de hasta 1kHz, aunque este es capaz de producir frecuencias más elevadas gracias a su cristal de 50MHz. Para mayor detalle en especificasiones técnicas referirse a [10]. 5 4.Metodoloǵıa del trabajo 4.1 Plan de trabajo Inicialmente se definieron los requerimientos tecnicos del dispositivo, asi como las actividades necesarias para su eventual validación. Se requirió tiempo de planeación adicional para incluir los entregables no contemplados en la propuesta de proyecto. Se realizaron presentaciones parciales y reuniones semanales con el asesor del proyecto, aśı como re- uniones cada dos semanas con el coasesor para verificar el avance del mismo y cumplimiento con cronograma. Sin embargo, debido a imprevistos y entregables adicionales cuya necesidad surgio mien- tras se desarrolló el proyecto, se presentaron modificaciones al cronograma planteado inicilmente. De igual manera se hicieron reuniones regulares con estudiantesde maestria y profesores del departamento de sicoloǵıa para desarrollar los protocolos de caracterización y pruebas en animales. Una vez se desarrollaron los protocolos se solicitaron los permisos necesarios en el laboratorio Sala Limpia (ML-306) para el uso del analizador de impedancias Agilent 4294A; se obtuvieron las curvas de impedancia necesarias para las pruebas de salida de corriente de la tarjeta. Se completó el diseño del dispositivo y se realizó el pedido de componentes para realizar su ensamblado e iniciar las pruebas preliminares sobre circuito equivalente. Cuando se comprobó que las necesidades de corriente y forma de onda entegadas por el dispositivo se cumpliesen se procedió a realizar estimulación en animales. 4.2 Búsqueda de información Se realizó una busqueda de información en las bases de datos suscritas de la Universidad de los Andes, especialmente IEEE XPLORE y ScienceDirect, para consultar trabajos similares y conceptos como el funcionamiento y usos de la estimulación eléctrica transcraneal. Gracias a los conocimientos adquiridos en los cursos de Electrónica básica y Electrónica Análoga, se logró diseñar la etapa de potencia de la tarjeta necesaria para entregar la corriente de estimulación, aśı como loscircuitos de regulación para la alimentación necesaria para cada uno de los integrados utilizados. 4.3 Alternativas de desarrollo Debido a la complejidad teórica tras la estimulación electrica transcraneal, y el poco entendimiento que se tiene de los mecanismos que la goviernan en la literatura, se consideraron diversas y variadas alternativas acerca del enfoque que se le deb́ıa dar al proyecto. Ya fuese de investigación acerca de los efectos de este tipo de estimulación con dispositivos existentes, de diseño, o de continuación de un trabajo en curso.Teniendo en cuenta que el dispositivo aún tiene campo para mejorar para alinearse al funcionamiento requerido para ser efectivo en investigación en éste campo, se opto por continuar sobre esta ĺınea. Para eliminar el offset DC generado por el AD5932, se consideró utilizar una capacitancia en serie a la salida, pero debido a la baja frecuencia que puede aplicarse en algunos tipos de estimulación, esto supondria una degeneración en las propiedades de la onda inyectada como su forma y voltage pico a pico. Ya que se requiere un voltaje de alimentación de minimo 5V para el funcionamiento del potenciometro digital y de un valor equivalente de voltaje negativo, se necesitaŕıan 4 bateŕıas LiPO de 3.7V de una celda (mayor voltaje correspondeŕıa a un mayor numero de celdas por bateŕıa). Esta cantidad de 6 CAPÍTULO 4. METODOLOGÍA DEL TRABAJO 7 bateŕıas supone un peso significativo para el animal sobre el que se pondŕıa el dispositivo. Por esto se considero conveniente usar alimentación alambrica para el prototipo. Sin embargo, cabe notar que el ideal último de un proyecto de esta naturaleza es que el dispositivo sea completamente inalambrico, por lo que solamente se realiza la alimentación del estimulador de manera alambrica como medida temporal. En caso de que se pueda obtener un potenciometro digital que requiera un menor voltaje de operación que pueda ser implementado en futuras versiones de la tarjeta o se pueda implementar un doble elevador de voltaje, se deja la mayor cantidad de compionentes sobre la misma PCB. 5.Trabajo realizado 5.1 Caracterización de tejido Se realizaron dos tipos de medidas para la caracterización de impedancia sobre 2 sujetos animales: De tejido y de sujeto completo. En el primer tipo de prueba se tomó la cabeza del sujeto (previamente sacrificado y decapitado) y se realizaron medidas de impedancia (barridos de corriente y frecuencia) conforme se remov́ıa tejido blando hasta llegar a tener una muestra de solo hueso. La medida se realizó con electrodos de plata fijos al sujeto con adhesivo industrial Superbonder igual a como se tendria en el sujeto a la hora de estimular. En el segundo tipo de prueba se realizaron medidas entre tornillos de superficie fijos en el craneo del sujeto como se puede observar en la figura 5.1 para estimar el comportamiento de la corriente cuando se realice la conexión completa. Figura 5.1: Diagrama de tornillos para medida de impedancia. 1. Frontal Izquierdo, 2. Frontal derecho, 3. Hipocampo (electrodo de profundidad), 4.Parietal Izquierdo, 5. Parietal Derecho, 6. Occipital (Referencia) En el punto 3 de la figura 5.1 no se tiene tornillo ya que la conexión a la regleta de medida se hizo a traves de un electrodo de profundidad de oro para medir la impedancia entre el tornillo conectado al frontal y el hipocampo. Por esto, solo se señala el área en que se realiza el implante del electrodo. 8 CAPÍTULO 5. TRABAJO REALIZADO 9 La medida se realizó sobre regleta macho para facilitar el contacto entre los tornillos de medida y el accesorio del analizador de impedancias. El montaje completo de la regleta de medición se puede observar en la figura 5.2 Figura 5.2: Sujeto tras cirugia para fijar tornillos de medida, regleta y electrodo de profundidad. El area de ciruǵıa se selló con cemento a base de acrilico en polvo, dejando expuestos los pines para medidas dispuestos en la regleta. El proceso de caracterización en el sujeto entero se realizó para poder obtener un modelo circuital aproximado y poder realizar la estimación de comportamiento de la señal inducida sobre ratas sin re- querir sujetos adicionales debido a la dificultad relativa de su obtención y de la realización de medidas invasivas de las que se pudiese obtener resultados precisos. La medida de impedancia en el segmento de craneo se realizó para tener un contraste de los sujetos contra la literatura reportada. Con esto se podia soportar o descartar la necesidad de un modelo de mayor complejidad al cercanamente resistivo encontrado, calculado solamente con la conductividad de hueso como parámetro. 5.2 Modificación y ensamble de estimulador El dispositivo de estimulación a modificar fue el diseño presentado en [10] el cual no permit́ıa estimular con valores de voltaje negativo, lo cual es necesario para hiperpolarizar y despolarizar el tejido, ya que al actuar como un capacitor, este solo almacenará carga, y al no descargarla puede llegar a causar CAPÍTULO 5. TRABAJO REALIZADO 10 daños sobre el sujeto. Cabe notar que la estimulación eléctrica transcraneal siempre se lleva a cabo inyectando cierta corri- ente definida por el usuario, de modo que la impedancia del sujeto teóricamente no afecte la señal. A lo largo del desarrollo del proyecto se encontró que el estimulador se comportaba como uan fuente de voltaje y no de corriente, pero debido a las tareas adicionales planeadas no se pudo llevar a cabo un rediseño del dispositivo. Fue por esto que se decidió optar por caracterizar la impedancia tipica de los sujetos a estimular, y mantener el dispositivo como una fuente de voltaje. Una de las ventajas de esta forma de operación es que el dispositivo no se ve limitado por un voltaje minimo de operación como ocurre con muchas fuentes de corriente como el LT3092. El diagrama de bloques del dispositivo original se puede ver en la figura 5.3. Figura 5.3: Diagrama de bloques de dispositivo original. Se analizó el funcionamiento del dispositivo, resumido en el diagrama de bloques mostrado en la figura 5.4. El dispositivo funciona como fuente de voltaje, por lo que la eliminación de offset en el dispositivo consiste en una resta simple por medio de amplificadores operacionales, antes de que la señal fuese atenuada para limitar el valor de corriente de estimulación. Figura 5.4: Diagrama de bloques con modificación para salida de voltage positiva y negativa. CAPÍTULO 5. TRABAJO REALIZADO 11 Ya que la señal tiene un rango fijo en AC, solo se requiere una resta de otro valor y alimentar el circuito de amplificadores opercionales (LM324) con V+ y V- para tener el rango de voltaje negativo deseado.Esta alimentaciónnegativa solo era necesaria en la etapa de restado, buffering (etapa de salida push-pull compuesta por 2 transistores) y como limite menor VL del potenciometro digital, por lo que la alimentación de la mayoŕıa de componentes de la tarjeta base se mantuvo igual. Figura 5.5: Configuración de restador de voltaje con amplificadores operacionales.[12] Gracias a que en el diseño base se contaba con un circuito de 4 amplificadores operacionales en el que solo se ocuparon 2, se pudo disponer de uno de los opamps libres en el integrado para realizar el restador de voltaje sin necesidad de agregar componentes adicionales. El diseño de la PCB terminada se puede ver en las figuras 5.6 y 5.7. Figura 5.6: Diseño en Eagle de PCB (cara superior). Figura 5.7: Diseño en Eagle de PCB (cara inferior). El microcontrolador del dispositivo ensamblado deb́ıa ser programado con el código desarrollado pre- viamente en el software IAR Workbench. Debido a que se trataba de un integrado superficial, no se pod́ıa programar de las maneras tradicionales para los microcontroladores de la familia MSP430. Se CAPÍTULO 5. TRABAJO REALIZADO 12 utilizó el Launchpad de Texas instruments MSP430G2, conectando los pines usados normalmente para programar el microcontrolador de la tarjeta (VCC, TEST, RST y GND) a los pines dispuestos en el estimulador para este fin como se pueden observar en la figura 5.8. Figura 5.8: Conexión de Launchpad a estimulador para programación de MSP430G2552 Esto permite que la programación del dispositivo sea trivial por medio del IAR Workbench o si se desea por medio de otra suite como Code Composer Studio, siempre que soporte el launchpad y mi- crocontrolador utilizados, y el codigo implementado sea compatible. A causa de problemas causados por el modulo BL600, se desconectó y se hizo uso de un dispositivo bluetooth HC05 conectado en los pines de RX y TX dispuestos para este fin, como se muestra en la figura 5.9. Figura 5.9: Conexión del dispositivo a modulo HC05 CAPÍTULO 5. TRABAJO REALIZADO 13 5.3 Activación de dispositivo Debido a dificultades con lal aplicación de android dispuesta para control del dispositivo, digase falta de reconocimiento del modulo bluetooth dentro de la misma, se hizo uso de una aplicación de comunicación serial para enviar comandos al microcontrolador y lograr las señales deseadas de acuerdo a la tabla 5.1. Tabla 5.1: Comandos ASCII para control de dispositivo Comando ASCII 1 Caracter 1 Acción 0x30 0 ON 0x41 A Selección de señal cuadrada 0x42 B Selección de señal sinusoidal 0x46 F Selección de señal arbitraria 1 0x47 G Selección de señal arbitraria 2 0x44 D Reduc. Freq 0x45 E Aument. Freq 0x34 4 Reduc. Voltaje 0x35 5 Aument. Voltaje 6.Validación del trabajo 6.1 Metodoloǵıa de prueba El protocolo de pruebas aplicado en los dos tipos de prueba para caracterización de impedancia y uso del analizador de impedancias puede ser consultado en el apendice E. Para comprobar que se pod́ıa lograr inyección de corriente en las ratas Wistar, se conectó el sujeto a un estimulador comercial disponible en el laboratorio de Neurociencias y comportamiento de la univer- sidad (Gb-105). Este dispositivo es un estimulador S88X GRASS de Astro-Med;Inc, el cual tiene una frecuencia mı́nima de salida de 0.8Hz, permite seleccionar el tipo de señal y tiempo de estimulación y, por medio de un accesorio externo, permite generar señales de 10uA de corriente mı́nima. Por estas caracteŕısticas, este dispositivo resultó idoneo para verificar que si hubiese transmisión de corriente y conservación de la forma de onda en el anodo de estimulación. Se conectó un multimetro Fluke en serie al anodo de estimulación sobre la rata como se puede ver en la figura 6.1, y a pesar de que el medidor registró los 10 uA de salida del estimulador al conectarlo solo a éste, se registró una corriente de 0.198uA al realizar la conexión al animal. Figura 6.1: Conexión de estimulador comercial a rata Wistar y medida para comprobar inyección de corriente 6.2 Resultados de medida de impedancia sobre ratas Se realizaron 2 tipos de barrido: barrido de frecuencia a una corriente constante y barrido de corriente a una frecuencia constante. En la figura C.5 se puede observar un barrido de frecuencia desde 40 Hz hasta 10kHz. Se eligió este rango debido a que se busca que estas curvas ofrescan información a proyectos además del presente, teniendo en cuenta las complicaciones causadas por trasladar el equipo analizador de impedancias o, de ser necesario, el problema que supone ingresar tejido biológico al laboratorio Sala Limpia. Por otro lado, en la figura C.4 se puede observar un barrido de corriente desde 200uA hasta 2mA a una frecuencia fija de 40Hz. Se escogió este rango de valores ya que pueden ofrecer una idea de cómo se comporta la impedancia del tejido ante aumento de corriente de una señal AC aunque se piense que teóricamente debe conservarse como un valor constante. A pesar que en el caso de la figura C.4 tanto el modulo como la fase tienden a un valor constante, casos como el que se puede apreciar en la figura 14 CAPÍTULO 6. VALIDACIÓN DEL TRABAJO 15 Figura 6.2: Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA y curva de tendencia aproximada y ecuación. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a encefalo-dorso de cabeza de rata. C.3 muestran un efecto de variación de impedancia no esperado inicialmente, por lo que se llevaron a cabo barridos adicionales con rangos de barrido de mayor amplitud. Para mayor detalle ver Anexo F. Figura 6.3: Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz y curva de tendencia aproximada y ecuación. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a encefalo-dorso de cabeza de rata. Las curvas C.8 y C.10 (ver anexo E) se realizaron en un rango de corriente mayor (200uA hasta 20mA) para ver la confiabilidad de la linea de tendencia obtenida en barridos anteriores y ver su posible análisis, pero al ver el comportamiento erratico de impedancia a mayor corriente, esta linea de tendencia no fue concluyente. Basado en los resultados obtenidos de las curvas de caracterización del sujeto completo (Anexo G), se determinaron impedancias para la construcción de un modelo circuital que no abarcase unicamente un segmento de tejido, y en el cual se tuviese un punto de análisis que se asemeje a lo que se obtendŕıa en el hipocampo del sujeto de prueba durante estimulación. CAPÍTULO 6. VALIDACIÓN DEL TRABAJO 16 Figura 6.4: Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz y curva de tendencia aproximada y ecuación. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a placa completa fronto-occipital de cabeza de rata. El modelo obtenido aproximado se trata de una resistencia en paralelo con una capacitancia, cada uno de cierto valordependiendo de entre que puntos se realizó la medida, como se ve en la figura 6.6 Tabla 6.1: Valores de Resistencia y capacitancia calculados Puntos de medida R aprox. (kΩ) C aprox.(nF) 1-2 1.5 0.349 1-3 7 5.33 1-4 2.34 69.3 1-5 6.51 228.57 Una vez lograda la comunicación con el dispositivo, se realizaron mediciones de señales generadas por el mismo como se puede ver en las figuras 6.7, 6.8 y 6.9. Durante la adquisición de datos se generó un problema con el dispostivo por lo que no se pudo guardar la señal cuadrada generada. Sin embargo, se conoce la causa del problema (quema del microcontro- lador por un accidente en la alimentación) y ya que se adquirieron componentes en duplicado, en el momento de entrega de este documentoel dispositivo se encuentra en reparación. La ausencia de un análisis estad́ıstico de las pruebas realizadas se debe a la limitada cantidad de sujetos de prueba, asi como de sujetos de caracterización. Las repeticiones de cada medición sobre el mismo sujeto no se consideraron estadisticamente significativas ya que los resultados generados eran muy similares y en una poblacion de un solo sujeto no se obtiene informacion adicional relevante. 6.3 Evaluación del plan de trabajo Teniendo en cuenta que se requirió modificar los objetivos presentados en la propuesta de tesis a medida que se daba un mayor entendimiento de las actividades a desarrollar en el proyecto, se pudo ver que la CAPÍTULO 6. VALIDACIÓN DEL TRABAJO 17 Figura 6.5: Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a placa completa fronto-occipital de cabeza de rata. planeación de tiempos no fue la adecuada. No se tuvo en cuenta que los tiempos de desarrollo de otros proyectos que pueden ocupar los mismos equipos que éste, hacen que su disponibilidad sea limitada; se debió realizar una investigación a profundidad de los procesos de reserva y disponibilidad de todos los equipos cuando se plantea el cronograma de desarrollo del proyecto lo cual no se hizo en esta ocasión. Se esperaba que la cantidad de ratas para caracterización fuese mayor, por lo que los resultados obtenidos en el proyecto pueden no ser tan generales como se deseaba, y hacen que la impedancia del mismo sigan siendo una variable a la hora de estimular con voltaje, por lo que no se conocerá con exactitud la corriente inyectada en el sujeto. Cuando se planteó el cronograma de proyecto, se asumı́a que todos los recursos disponibles del dispos- itivo base como archivos de diseño, de programación y de software de control fuesen provistos desde el inicio, por lo que la replicación del mismo no debeŕıa suponer un problema. Sin embargo, dificultades como conflictos de referencias entre los archivos de diseño y documentación, y la no disponibilidad de algunos de estos recursos supusieron demoras adicionales por lo que el plan de trabajo no se pudo seguir de manera tan fluida como se esperaba al presentar la propuesta. Se requiere una documentación más rigurosa en cuanto a entregables de proyectos que se espere sean continuados a futuro para que inconvenientes como este no ocurran. CAPÍTULO 6. VALIDACIÓN DEL TRABAJO 18 Figura 6.6: Diagrama de puntos de medida de impedancia. 1. Frontal Izquierdo, 2. Frontal derecho, 3. Hipocampo (electrodo de profundidad), 4.Parietal Izquierdo, 5. Parietal Derecho. los valores obtenidos se ilustran el la tabla 6.1. Se trata de los puntos en que se conectaron tornillos para medida ilustrados en la figura 5.1 Figura 6.7: Modo Sinusoidal de salida del dispositivo CAPÍTULO 6. VALIDACIÓN DEL TRABAJO 19 Figura 6.8: Modo señal arbitraria (1) de salida del dispositivo Figura 6.9: Modo señal arbitraria (2) de salida del dispositivo 7.Discusión Tras realizar la revisión bibliográfica y de conceptos del funcionamiento de la estimulación eléctrica transcraneal, se vió que existen algunos problemas con el funcionamiento del dispositivo implementado a lo largo de éste proyecto. En primer lugar, asi se este usando una frecuencia de estimulación baja y se tenga una idea del componente resistivo de impedancia de los sujetos a estimular, ésta no se comporta como una constante, por lo que la corriente inyectada por una fuente de voltage fija tampoco lo será. Este cambio volatil de impedancia de los sujetos se pudo observar en las pruebas de placa completa . Debido a conflictos en la documentación de la tarjeta base, y a falta de archivos fuente como el proyecto de la aplicación de android y demoras con el codigo fuente del microcontrolador, se requirió de un tiempo significativamente mayor al proyectado inicialmente para lograr el funcionamiento de- seado del dispositivo. Debido a esto, no se tuvo tiempo para llevar a cabo pruebas del estimulador en ratas. Se considera que este es un factor relevante ya que, al inicio del proyecto, se asumı́a que la herramienta de control del dispositivo y el firmware del microcontrolador ya estaŕıan desarrollados, y las dificultades presentadas en este sentido requirieron trabajo adicional no considerado inicialmente. Mientras funcionaba el dispositivo, se presentó un problema importante en el tipo de señales generadas en que, como se discutió en la sección de marco teórico, el manejo de la fase de la señal generada es fundamental para ejecutar experimentos y reportar resultados de estimulación eéctrica transcraneal. En el dispositivo, la única forma de pseudocontrolar la fase de la onda de salida era usar los comandos de OFF y ON y esperar que el módulo bluetooth reaccionase a tiempo para reiniciar la onda generada. A pesar de las dificultadas presentadas, se considera que se cumplieron los objetivos del proyecto, a excepción de las pruebas del estimulador sobre un sujeto animal y el uso del mimso en un estudio comportamental. 20 8.Conclusiones y trabajos futuros 8.1 Conclusiones Se implementó un dispositivo de estimulación electrica transcraneal, que pudiese generar señales bipo- lares de voltage y frecuencia variable, de distintas formas. Adicionalmente se realizó una caracterización de impedancia sobre cráneos de ratas Wistar para estimar la corriente inyectada por el dispositivo. Se calculó un sistema de resistencias y capacitancias que puede ayudar a estimar el comportamiento de estimuladores al actuar sobre distintas regiones del cráneo aunque hizo falta una comparación a fondo entre el modelo y el sujeto real ante diferentes tipos de estimulos. Se considera que los resultados obtenidos en este proyecto pueden llevar a la terminación de una herramienta hardware completa y que pueda ejercer estimulación eléctrica transcraneal tanto en DC como AC con un amplio rango de prestaciones y del cual se puede realizar una caracterización aún más detallada para garantizar que el equipo si este ejerciendo estimulación sobre sujetos animales. 8.2 Trabajo Futuros Se sugiere la implementación de un segundo potenciometro digital que controle un voltaje DC que, en configuración de sumador con la salida actual, permita la adición de un nivel de offset controlable por el usuario. Adicionalmente, dada la naturaleza del campo de estimulación eléctrica transcraneal, y a la necesidad de controlar y reportar con exactitud la corriente inyectada en cada prueba, se cree conveniente que el dispositivo actual funcione para regular una fuente de corriente de salida variable, y permita manejar el rango de valores que se requiere para este tipo de investigaciones. Finalmente, se cree que el modulo no usada del multiplexor de la tarjeta se puede elegir entre señales sinusoidales o de corriente directa como salida final, lo que ampliaria las presstaciones del equipo y le permmitiŕıa funcionar en una gama más amplia de estudios de estimulación. 21 Referencias [1] Antal. Transcranial alternating current stimulation (tacs). Frontiers in Human Neuroscience, 7:317, 2013. [2] S. Binder. Transcranial slow oscillation stimulation during sleep enhances memory consolidation in rats. Brain Stimulation Journal, 7:508–515, 2014. [3] A. Datta. Gyri-precise head model of transcranial direct current stimulation: Improved spatial focality using a ring electrode versus conventional rectangular pad. Brain Stimulation Journal, 2:201–207, 2009. [4] E. J. F Bolzoni, M Baczyk. Subcortical effects of transcranial direct current stimulation in the rat. Journal of Phisiology, 2013. [5] F. Gasca. Finite element simulation of transcranial current stimulation in realistic rat head model. IEEE EMBS Conference on Neural Engineering, 2011. [6] F. Gonzales. Desarrollo de un prototipoportatil para la adquisicion y almacenamiento de senales eeg. 2013. [7] D. Henao. Diseno y fabricacion de un dispositivo de estimulacion cerebral transcranial de corriente directa (tdcs) para la modulacion y control de ritmos cerebrales. Trabajo en desarrollo. [8] J. Lopez. Wireless electroencephalogram acquisition system for recordings in small animal models. 29th Southern Biomedical Engineering Conference, 2013. [9] D. F. S. M. J. AMINOFF, F. BOLLER. Handbook of clinical neurology. 2013. [10] O. Morales. Design, implementation and validation of a wireless brain stimulator for studying animal model of parkinson (wbs). Trabajo en Desarrollo. [11] P. W. Nitsche. Transcranial direct current stimulation. Restorative Neurology and Neuroscience, 29:463–492, 2011. [12] A. Salazar. Amplificador operacional. Universidad de los Andes-Contenido de curso de Funda- mentos de circuitos, pages 79–97. [13] Saturnino. On the importance of electrode parameters for shaping electric field patterns generated by tdcs. NeuroImage, 120:25–35, 2015. 22 A.Resumen Ejecutivo IMPLEMENTACIÓN DE HARDWARE PARA ESTIMULACIÓN ELÉCTRICA TRANSCRANEAL, Y CARACTERIZACIÓN DE IMPEDANCIA DE SEÑALES APLICADAS POR EL EQUIPO EN ANIMALES PEQUEÑOS Estudiante: Gabriel Alejandro Sánchez Ávila Asesor: Fredy Enrique Segura-Quijano PhD Coasesor: Mario Valderrama PhD A.1 Objetivos A.1.1 Objetivos generales Implementación de Hardware para estimulación eléctrica transcraneal, y caracterización de impedancia de señales aplicadas por el equipo en animales pequeños. A.1.2 Objetivos espećıficos - Implementar un sistema para estimular con señales eléctricas de tipo pulsada, unipolar, bipolar, sinusoidal y señales arbitrarias definidas por el usuario - Definir protocolos de experimentación. - Caracterizar la impedancia de las diferentes señales aplicadas previo al desarrollo en pruebas en animales. - Generar curvas de impedancia de un segmento de craneo de ratón en diferentes frecuencias y con variación de corriente. - Caracterizar la impedancia de las diferentes señales aplicadas previo al desarrollo en pruebas en animales. - Validar el desempeño del sistema implementado con pruebas en animales mediante uso de dispositivo de recepción desarrollado en trabajos previos. - Generar curvas de impedancia de un segmento de craneo de raton en diferentes frecuencias y con variación de corriente. 23 UNIVERSIDAD DE LOS ANDES DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA ELÉCTRICA Y ELECTRÓNICA PRESENTACIÓN DE PROPUESTA DE PROYECTO DE GRADO SEMESTRE: 2016-01 FECHA: 2015-11-20 PROYECTO DE GRADO PARA OPTAR AL TITULO DE: Ingeniero Electrónico ESTUDIANTE: Gabriel Alejandro Sánchez Ávila CODIGO: 201013958 TITULO DEL PROYECTO: IMPLEMENTACIÓN DE HARDWARE PARA ESTIMULACIÓN ELÉCTRICA TRANSCRANEAL, Y CARACTERIZACIÓN DE IMPEDANCIA DE SEÑALES APLI- CADAS POR EL EQUIPO EN ANIMALES PEQUEÑOS DECLARACION: 1 - Soy consciente que cualquier tipo de fraude en esta Tesis es considerado como una falta grave en la Universidad. Al firmar, entregar y presentar esta propuesta de Tesis o Proyecto de Grado, doy expreso testimonio de que esta propuesta fue desarrollada de acuerdo con las normas establecidas por la Universidad. Del mismo modo, aseguro que no participé en ningún tipo de fraude y que en el trabajo se expresan debidamente los conceptos o ideas que son tomadas de otras fuentes. 2- Soy consciente de que el trabajo que realizaré incluirá ideas y conceptos del autor y el Asesor y podrá incluir material de cursos o trabajos anteriores realizados en la Universidad y por lo tanto, daré el crédito correspondiente y utilizaré este material de acuerdo con las normas de derechos de autor. Aśı mismo, no haré publicaciones, informes, art́ıculos o presentaciones en congresos, seminarios o conferencias sin la revisión o autorización expresa del Asesor, quien representará en este caso a la Universidad. Firma (Estudiante) Código: 201013958 CC: 1022375917 Vo.Bo. ASESOR (Firma) Vo.Bo. COASESOR (Firma) Nombre: Fredy Enrique Segura-Quijano Nombre: Mario Valderrama Vo.Bo. COASESOR (Firma) Nombre: Olguer Morales Tabla de contenido 1 Caracterización del problema (Justificación) 1 2 Marco teórico 2 3 Caracterización del proyecto 3 3.1 Objetivos generales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 3.2 Objetivos espećıficos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 3.3 Alcance (compromisos) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 4 Contexto del proyecto y tratamientos 4 4.1 Suposiciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 4.2 Restricciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 4.3 Factores de riesgo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 5 Cronograma 5 5.1 Identificación y descripción de hitos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 5.1.1 Comienzo del proyecto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 5.1.2 Diseño y montaje de dispositivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 5.1.3 Validación . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 5.1.4 Trabajo final . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 5.1.5 Entrega final . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 5.2 Cronograma . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 5.3 Cronograma planteado por el asesor para entregas parciales y finales. . . . . . . . . . . . 6 6 Recursos 7 Referencias 7 ii 1.Caracterización del problema (Justificación) La estimulación con patrones cerebrales se ha estudiado como una alternativa viable a tratamientos como medicamentos o ciruǵıas, para mejorar la calidad de vida de pacientes que padecen de enfer- medades neurodegenerativas. Para lograr un monitoreo continuo de los efectos inmediatos y a medio plazo de la estimulación cerebral con diferentes tipos de señales, se requiere una herramienta integrada, capaz de realizar las funciones de estimulador, sensor de señales EEG de respuesta y transmisor de dichas señales obtenidas para su posterior análisis. Este tipo de dispositivo requeriŕıa un microcontro- lador capaz de controlar las tareas de estimulación, adquisición y env́ıo de señales de EEG. Actualmente existen dispositivos capaces de estimular el cerebro de roedores [6] [3], aśı como dispos- itivos de adquisición y almacenamiento interno de señales EEG [4]. Sin embargo, con un dispositivo de propósito espećıfico que cumpla éstas tareas de manera integrada, y que pueda trasmitir los datos adquiridos inalámbricamente se puede acelerar la investigación de enfermedades neurodegenerativas y otras condiciones cerebrales en modelos animales como ratas. Con este proyecto se plantea realizar la implementación de un dispositivo de estimulación eléctrica transcraneal para animales pequeños, con una tecnoloǵıa que soporte una posterior adecuación para adquisición de EEG, como lo es la tecnoloǵıa Freescale. 1 2.Marco teórico La estimulación eléctrica transcraneal (TES por sus siglas en inglés) consiste en la modificación de actividad neuronal en el cerebro por medio de un campo eléctrico inducido o por medio de impulsos de corriente. Tradicionalmente, un dispositivo de estimulación eléctrica transcraneal se compone de un generador de onda que produce campo eléctrico en los electrodos colocados en la superficie del cráneo del sujeto [5].La estimulación por corriente directa (tDCs) es una subcategoŕıa de la TES, en la que se utilizan pulsos de corriente directa para generar campo eléctrico; este método ha sido explorado previamente en la Universidad de los Andes [3]. Por otro lado, señales de 0.75 Hz y en los rangos de 10 a 12 Hz sobre lacorteza frontal (tACs) han evidenciado cambios en los patrones de memoria [6]. Un tercer subtipo de TES (tRNs) trata con un espectro de frecuencia más alto (entre 100 a 640Hz) que aumenta la sensibilidad de la frecuencia motora, pero no existe una frecuencia espećıfica asociada a esta. Todos estos han sido explorados por el trabajo desarrollado por Morales [6], en que se utilizaba un generador de señales para obtener un amplio rango de frecuencias posibles para estimulación. Por otro lado, las señales de Electroencefalograma (EEG) son una herramienta ampliamente utilizada para el diagnóstico de patoloǵıas neurodegenerativas y motoras, por medio de la comparación de patrones del paciente con estándares de literatura para comportamientos regulares. En la Universidad de los Andes se han realizados dispositivos para la adquisición y transmisión de éste tipo de señales de manera no invasiva [2], en los cuales se buscaba que el dispositivo fuese portátil y de fácil manejo. 2 3.Caracterización del proyecto 3.1 Objetivos generales Implementación de Hardware para estimulación eléctrica transcraneal, y caracterización de impedancia de señales aplicadas por el equipo en animales pequeños. 3.2 Objetivos espećıficos - Implementar un sistema para estimular con señales eléctricas de tipo pulsada, unipolar, bipolar, sinusoidal y señales arbitrarias definidas por el usuario - Definir protocolos de experimentación. - Caracterizar la impedancia de las diferentes señales aplicadas previo al desarrollo en pruebas en animales. - Validar el desempeño del sistema implementado con pruebas en animales mediante uso de dispositivo de recepción desarrollado en trabajos previos. 3.3 Alcance (compromisos) Se presentará el dispositivo de estimulación con tecnoloǵıa Freescale implementada, asi como una caracterización de impedancia de los tipos de señales de salida del mismo. Adicionalmente, se espera realizar una toma de datos de al menos 2 semanas para validar el funcionamiento del dispositivo. 3 4.Contexto del proyecto y tratamientos 4.1 Suposiciones Se espera que se cuente con el diseño del dispositivo desarrollado en [6] como base para este trabajo. Para su validación, se espera contar con un dispositivo de adquisición de EEG [4] 4.2 Restricciones Se asume que la herramienta hardware y software para la lectura de señales EEG ya está desarrollada o se realiza de manera paralela, aśı como la interfaz de usuario para definir el tipo de señal para estimulación. 4.3 Factores de riesgo Se espera que algunas dificultades puedan presentarse con el dispositivo desarrollado. En primer lugar, la alimentación supone un reto importante debido a los diferentes voltajes de alimentación de los dispositivos requeridos como el microcontrolador, módulo de transmisión inalámbrica y sistema de adquisición. Adicionalmente, el env́ıo de componentes provenientes del exterior puede suponer retrasos en el cronograma planteado. 4 5.Cronograma 5.1 Identificación y descripción de hitos 5.1.1 Comienzo del proyecto En esta fase del proyecto se determinaran las especificaciones del sistema. Se determinaran los com- ponentes finales a usar en el dispositivo y se realizará el protocolo de pruebas del funcionamiento del mismo. 5.1.2 Diseño y montaje de dispositivo Se realizará el diseño circuital del dispositivo, montaje y pruebas iniciales. 5.1.3 Validación Se realizara la validación de cada parte del sistema sobre los animales de prueba tras definir un protocolo de validación, asi como la caracterizacion de impedancia. 5.1.4 Trabajo final Se realizaran las pruebas finales del dispositivo, el análisis de datos recogidos y se hará la preparación del documento y presentación final. 5.1.5 Entrega final Entrega final de documento. 5.2 Cronograma Figura 5.1: Cronograma propuesto 5 SECCIÓN 5. CRONOGRAMA 6 5.3 Cronograma planteado por el asesor para entregas par- ciales y finales. Se propone un sistema de presentaciones durante la sesión de seminario de la ĺınea de investigación, en las cuales se evalúa el cumplimiento de los alcances del proyecto a la fecha. Cada presentación debe tener un soporte digital tipo presentación. Todos los archivos del proyecto serán compartidos en una carpeta de Dropbox/One Drive con el asesor. La siguiente tabla muestra los compromisos, cada entrega tiene una presentación y parte del documento final. Semana Entrega correspondiente Semana 1 Planeación Semana 2 Contexto, marco teórico, antecedentes, metodoloǵıa y cronograma. Semana 3 Diseño básico de ingenieŕıa. Lluvia de ideas, Diagrama de caja negra. Semana 4 Diseño detallado de ingenieŕıa. Diagrama de caja blanca. Actualización de herramientas necesarias. Matriz de valor para selección tecnológica Semana 8 Entrega parcial de documento Semana 17 Entrega de prototipo final y documento final * Cada entrega o reunión de trabajo en el seminario tendrá una valoración de A (Aprobado) o R (Reprobado) según criterio del profesor. ** En caso de tener algún R, automáticamente el profesor está recomendando retirar la materia (caso mitad de semestre) o no realizar la presentación ante el jurado seleccionado por el departamento (caso final de semestre) *** El estudiante se compromete a hacer presentaciones en el seminario de la ĺınea de investigación, a cumplir los requisitos del departamento y a elaborar un poster, art́ıculo o tutorial tipo wiki en caso de solicitarlo el asesor de tesis. 6.Recursos Se espera que el costo de desarrollo del dispositivo incluyendo componentes, elaboración de PCB y soldado superficial de la misma no supere $1000 USD; no se tiene en cuenta de momento potenciales costos de env́ıo o casillero virtual de ser necesario. Para La elaboracion de PCB se utilizará el software KiCad o Eagle de acuerdo a lo que la tarjeta requiera. Adicionalmente, se requiere asistencia para el implante de electrodos en los animales de prueba para validación del dispositivo, de no contarse con ellos al iniciar la fase de pruebas. Adicionalmente se requiere la solicitud de espacios para el desarrollo de las pruebas en las semanas propuestas, pero éstas están dispuestas a cambios según disponibilidad dada por la Universidad. 7 Referencias [1] E. J. F Bolzoni, M Baczyk. Subcortical effects of transcranial direct current stimulation in the rat. Journal of Phisiology, 2013. [2] F. Gonzales. Desarrollo de un prototipo portatil para la adquisicion y almacenamiento de senales eeg. 2013. [3] D. Henao. Diseno y fabricacion de un dispositivo de estimulacion cerebral transcranial de corriente directa (tdcs) para la modulacion y control de ritmos cerebrales. Trabajo en desarrollo. [4] J. Lopez. Wireless electroencephalogram acquisition system for recordings in small animal models. 29th Southern Biomedical Engineering Conference, 2013. [5] D. F. S. M. J. AMINOFF, F. BOLLER. Handbook of clinical neurology. 2013. [6] O. Morales. Design, implementation and validation of a wireless brain stimulator for studying animal model of parkinson (wbs). Trabajo en Desarrollo. [7] P. W. Nitsche. Transcranial direct current stimulation. Restorative Neurology and Neuroscience, 29:463–492, 2011. 8 Yo Cé tra ha au de us dis do so red EL vio so cu res co __ EL (F No C. o édula de Ciud abajo de tesi aré entrega d utorizo a LA U e 1993, Decis e en todas s stribución (a ocumento. PA bre la obra e d, internet, e L AUTOR - ES olar o usurpa bre la misma anto a los de sponsabilida mo un terce ___________ L AUTOR - E Firma) ....... ombre .C. N° dadanía N° is, monograf del ejemplar UNIVERSIDA sión Andina 3 sus formas, l lquiler, prést ARÁGRAFO: en formato o extranet, int STUDIANTES ar derechos d a. PARÁGRA erechos de a d, y saldrá e ro de buena __________ ESTUDIANT ................. de de fía o trabajo respectivo y AD DE LOS A 351 de 1993 os derechos tamo público La presente o soporte ma ranet,etc., y S, manifiesta de autor de FO: En caso autor sobre l en defensa d fe. ___________ TE. ................. e de grado de y de sus anex ANDES, para 3, Decreto 46 patrimoniale o e importac autorización aterial, sino t y en general que la obra terceros, po de presenta a obra en cu e los derech ___ ................. AUTORI U , mayor , actuan enominado: xos del ser e que en los t 60 de 1995 y es de reprod ión) que me n se hace ext también para l para cualqu objeto de la r lo tanto la arse cualquie uestión, EL E os aquí auto ........ TRABA ZACIÓN D UNIVERSID r de edad, ve ndo en nomb el caso, en fo érminos esta y demás nor ducción, com corresponde tensiva no só a formato vir uier formato a presente au obra es de s er reclamació STUDIANTE orizados; par AJO DE GR DE SU USO DAD DE LO ecino de Bog bre propio, en ormato digita ablecidos en mas general municación pú en como cre ólo a las facu rtual, electró conocido o p utorización e su exclusiva ón o acción p - AUTOR, as ra todos los e RADO O A FAVOR OS ANDES gotá D.C., id n mi calidad al o electrón la Ley 23 de les sobre la m ública, transf ador de la o ultades y der ónico, digital por conocer. es original y autoría y tie por parte de sumirá toda efectos la Un 1 R DE LA S entificado co de autor de ico (CD-ROM e 1982, Ley materia, util formación y bra objeto d rechos de us , óptico, uso la realizará s ene la titulari un tercero e la niversidad ac on la l M) y 44 ice y el so os en sin idad en ctúa B.Protocolo para medicion de impedancia en tejido El procedimiento de análisis de impedancia de muestras de cráneo de rata Wistar se realizará en el Anal- izador de impedancia de precisión Agilent 4294A disponible en el laboratorio Sala limpia (ML-306). Se tendrán 4 muestras de cráneo, en combinación con otros tejidos (corteza). Estas estarán almacenadas en contenedores de acŕılico, con cables dispuestos para la conexión al analizador de impedancias si se hace adentro del laboratorio, pero este contenimiento no es necesario si el equipo puede instalarse en otro lugar. 1. El analizador de impedancias debe encenderse al menos 30 minutos antes de que se realicen las medidas pertinentes. Al inicio de cada sesión de medición se debe resetear los ajustes del equipo para evitar parámetros definidos irregularmente; esto se hace presionando el botón Preset del equipo. En- cender el computador conectado a la muestra para realizar la adquisición de datos. 2. Se utilizará el accesorio 16089A conectado a cables fijos a las superficies de la muestra. Para este accesorio se debe seleccionar la configuración de adaptador del Agilent como NONE en el menú de calibración por medio del botón [Cal]. Para la conexión se utiliza un adaptador de conexión directa de 4 terminales. Fijar esta conexión entre el adaptador y el frente del equipo por medio de los seguros en los extremos del adaptador. 3. Para definir el tipo de medida, se usará el menú “Measurement Parameter” que se accede por medio del botón [Meas]. En este caso seleccionaremos el valor absoluto Z y fase de impedancia en las curvas A y B respectivamente. 4. Los clips Kelvin del 16089A se conectaran a cables de acero inoxidable soldados a láminas de plata fijas en la muestra. Como se mencionó anteriormente, estos cables son lo único que puede salir de los contenedores de acŕılico. Realizar la conexión de los clips Kelvin a los cables de la muestra correspon- diente. 5. Se realizará en principio un barrido de frecuencias desde 40Hz (frecuencia permitida más baja) hasta 10kHz definiendo el parámetro por medio del botón [Sweep] y [Parameter] seleccionando la opción FREQ. El rango se define con los botones de [Start] y [Stop] e ingresando los valores de inicio y parada. En este tipo de prueba se tiene una corriente fija, definida por medio de la opción OSC UNIT seleccionando el valor CURR e ingresando el valor de corriente deseado. 6. Crear una copia del archivo de Excel disponible para la adquisición de datos, de preferencia con el nombre de la curva obtenida. Dentro de la copia del archivo seleccionar la opción “Get Data” disponible en la pestaña principal. 7. Posteriormente se realizará un barrido de corriente para observar los cambios de los parámetros de impedancia para diferentes valores hasta 20mA. Para elegir oscilación de corriente nuevamente se usa el botón [Sweep] y [Parameter] seleccionando en esta ocasión la opción OSC LEVEL y seleccionando CURR con la opción OSC UNIT. Para este tipo de barrido se requiere una frecuencia de prueba fija que se define con el botón [Source] y con el botón FREQUENCY; finalmente se ingresa el valor de deseado. Procurar definir esta frecuencia antes de guardar la curva de barrido de corriente. 8. Crear una copia del archivo de Excel disponible para la adquisición de datos, de preferencia con el nombre de la curva obtenida. Dentro de la copia del archivo seleccionar la opción “Get Data” disponible en la pestaña principal. Nótese que este es un archivo diferente al creado en el paso 6 ya que se trata de una nueva curva. 35 APÉNDICE B. PROTOCOLO PARA MEDICION DE IMPEDANCIA EN TEJIDO 36 9. Repetir los pasos 4 a 8 para cada una de las muestras requeridas. 10. Guardar todas las curvas obtenidas en una memoria USB para posterior análisis. 11. Para obtener los parámetros de modelo circuital utilizar el menú [Display] e ir a la segunda página de opciones. Seleccionar EQUIV CKT, y entrar al modo de circuito equivalente en la opción CKT on OFF. En este momento se muestran en pantalla las opciones de topoloǵıas circuitales, presionar SELECT CIRCUIT y elegir A, B C D o E para obtener los parámetros del modelo deseado (R, C y L) por medio de la opción CALC PARMS. Registrar estos valores numéricos donde se desee. 12. Desconectar el accesorio removiendo los seguros y apagar el equipo analizador de impedancias una vez se obtengan todas las curvas deseadas. Adicionalmente, apagar el computador conectado al equipo una vez se guarden los datos. C.Curvas de impedancia sobre craneo de ratas I Todas las curvas de medición de impedancia aqúı reportadas corresponen a medición entre un electrodo en la corteza frontal contra un electrodo de retorno en la región especificada en la descripción de cada grafica, a medida que se remov́ıa tejido blando. Figura C.1: Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a placa completa fronto-occipital de cabeza de rata. Figura C.2: Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a placa completa fronto-occipital de cabeza de rata. 37 APÉNDICE C. CURVAS DE IMPEDANCIA SOBRE CRANEO DE RATAS I 38 Figura C.3: Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente base de craneo dorsal. Figura C.4: Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente encefalo dorso. APÉNDICE C. CURVAS DE IMPEDANCIA SOBRE CRANEO DE RATAS I 39 Figura C.5: Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente encefalo dorso. FiguraC.6: Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a corteza. APÉNDICE C. CURVAS DE IMPEDANCIA SOBRE CRANEO DE RATAS I 40 Figura C.7: Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a corteza. Figura C.8: Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a meninges. APÉNDICE C. CURVAS DE IMPEDANCIA SOBRE CRANEO DE RATAS I 41 Figura C.9: Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a meninges. Figura C.10: Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a hueso techo del craneo. APÉNDICE C. CURVAS DE IMPEDANCIA SOBRE CRANEO DE RATAS I 42 Figura C.11: Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a hueso techo del craneo. D.Curvas de impedancia en craneo de ratas II Para ver los puntos entre los cuales se midió impedancia referirse a figuras 5.1 y 6.6. Figura D.1: Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 2 Figura D.2: .Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 2 43 APÉNDICE D. CURVAS DE IMPEDANCIA EN CRANEO DE RATAS II 44 Figura D.3: Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 3 Figura D.4: .Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 3 APÉNDICE D. CURVAS DE IMPEDANCIA EN CRANEO DE RATAS II 45 Figura D.5: Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 4 Figura D.6: .Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 4 APÉNDICE D. CURVAS DE IMPEDANCIA EN CRANEO DE RATAS II 46 Figura D.7: Curva de barrido de frecuencia a corriente fija de 200uA. El eje X se encuentra en Hz, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 5 Figura D.8: .Curva de barrido de corriente a frecuencia fija de 40Hz. El eje X se encuentra en Amperios, la columna izquierda corresponde a los valores de modulo de impedancia (curva roja) y la columnda derecha es el valor de fase (curva azul). Correspondiente a impedancia entre puntos 1 y 5 Introducción Descripción de la problemática y justificación del trabajo Alcance y productos finales Objetivos Objetivos generales Objetivos específicos Marco teórico, conceptual e histórico Marco Teórico Marco Conceptual Marco Histórico Definición y especificación del trabajo Definición Especificaciones Metodología del trabajo Plan de trabajo Búsqueda de información Alternativas de desarrollo Trabajo realizado Caracterización de tejido Modificación y ensamble de estimulador Activación de dispositivo Validación del trabajo Metodología de prueba Resultados de medida de impedancia sobre ratas Evaluación del plan de trabajo Discusión Conclusiones y trabajos futuros Conclusiones Trabajo Futuros Referencias Resumen Ejecutivo Objetivos Objetivos generales Objetivos específicos Protocolo para medicion de impedancia en tejido Curvas de impedancia sobre craneo de ratas I Curvas de impedancia en craneo de ratas II
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