Informe 4 Cromatografía

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EXTRACCIÓN DE COMPONENTES DE ZANAHORIA POR MEDIO DE
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
Laura Sofía Herrera Guáqueta 1, Diego Alejandro Serrano Rincón 2
1 Departamento de Biología. Facultad de Ciencias. Universidad Nacional de Colombia, Bogotá,
D.C., Colombia.
Emails: lherreragu@unal.edu.co, daserranori@unal.edu.co
RESUMEN
La cromatografía es una técnica de separación de mezclas empleada en el laboratorio, según el
soporte empleado se divide en cromatografía en columna y cromatografía en de capa fina, la
cromatografía permite separar mezclas que no se logran separar por otros métodos, y separa aun
cuando las diferencias de los componentes son mínimas. Por esta razón en la presente práctica se
emplearon estas técnicas para aislar los componentes presentes en la zanahoria, como los
carotenoides (licopenos y carotenoides) responsables del color naranja. Para ello, se compararon
seis fases móviles, con diferentes polaridades y proporciones de solventes realizando
cromatografía en capa fina, el solvente seleccionado fue Hexano-Acetato de Etilo (9:1).
Posteriormente, se realizó la cromatografía en columna con el solvente seleccionado como fase
móvil, se obtuvieron 18 fracciones que se volvieron a correr en capa fina y por similitud de Rf se
agruparon en 3 fracciones finales, estas son el licopeno, caroteno y algún tipo de xantofilas.β
Palabras claves: Extractos vegetales, Zanahoria, licopeno, caroteno.β
ABSTRACT
Chromatography is a technique used for separating mixtures in the laboratory, depending on the
support used, it is divided into column chromatography and thin-layer chromatography,
chromatography allows separating mixtures that cannot be separated by other methods, and
separates even when the components differences are low. For this reason, in the present practice
these techniques were used to isolate the components present in carrots, such as the carotenoids
(lycopene and carotenoids) responsible for the orange color. For this, six mobile phases were
compared, with different polarities and proportions of the solvents performing thin layer
chromatography, the selected solvent was Hexane-Ethyl Acetate (9: 1). Subsequently, column
chromatography was performed with the selected solvent as the mobile phase, 18 fractions were
obtained that were run again in a thin layer and, due to Rf similarity, were grouped into 3 final
fractions they are lycopenes, carotenoid and xantofilas.β
Keywords: Vegetable extracts, Carrot, Lycopene, carotene.β
1. INTRODUCCIÓN
mailto:lherreragu@unal.edu.co
mailto:daserranori@unal.edu.co
La cromatografía se define como un método físico de separación en el que los componentes a
separar se distribuyen entre dos fases, la fase estacionaria inmóvil y la fase móvil [1]. Existen
varios sistemas cromatográficos dependiendo de en qué estados se encuentren las fases, por
ejemplo, cuando la fase móvil es un líquido y la fase estacionaria un sólido finamente cortado, es
una cromatografía líquido-sólido [1], lo anterior se realiza utilizando el sistema de cromatografía
en columna, con esta es posible recuperar los componentes separados de la mezcla. Por otro lado,
cuando se utiliza una placa para establecer la fase estacionaria siendo esta un sólido y la fase
móvil líquida, se denomina cromatografía en capa fina, esta última sólo sirve en fines análiticos
ya que no se recupera el producto que se siembra después de la separación. [1]
En cuanto al funcionamiento de sistemas cromatográficos, estos se basan en las diferentes
polaridades que contienen los componentes de una mezcla, la fase estacionaria es altamente polar
y la muestra se disuelve en la fase móvil que será significativamente menos polar que la fase
estacionaria, del mismo modo esta última se escoge dependiendo de la mezcla que se desee
separar, en este proceso los compuestos menos polares son aquello que saldrán primero de la fase
estacionaria ya que no interaccionan tan fuertemente con las moléculas de la misma como los
compuestos que sean más polares ya que estos se verán más adheridos a la fase estacionaria, por
lo cual tardaran más tiempo en salir [1]. Es por esto que dependiendo el compuesto a extraer se
deberá escoger una fase móvil adecuada, ya que no será exitosa si la mezcla a separar es
arrastrada demasiado rápido o no es arrastrada, debido a que en cualquiera de los dos casos no
tendrá éxito la separación. [1]
En esta separación se utilizará como extracto vegetal la zanahoria esta presenta un color naranja
bastante fuerte que está dado distintos pigmentos que lo componen, entre ellos los dos
carotenoides principales son el licopeno que suele dar coloraciones rojizas, y el Caroteno que daβ
coloraciones anaranjadas, ambas estructuras se pueden diferenciar en la figura 1. La polaridad
de los carotenoides está directamente relacionada con su estructura química: en los carotenos, la
polaridad aumenta con el número de dobles enlaces conjugados (Alquezar, 2007) y en el caso del
licopeno, éste posee 11 enlaces conjugados-doble enlaces carbono. [2] por otro lado el Carotenoβ
es un compuesto no polar.
Figura 1. Estructuras químicas del licopeno y Carotenoβ
En este laboratorio se tiene como objetivo aislar los diferentes componentes de una muestra
vegetal, que como se mencionó anteriormente será una zanahoria, mediante el uso de
cromatografía en capa fina para la selección de la fase móvil y así asegurar que sea adecuada en
la separación de la mezcla escogida y prever que la cromatografía en columna sea lo más exitosa
posible.
2. DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS
2.1. Preparación de la muestra
Lo primero que se realizó fue la preparación de la muestra que se utilizaría para la cromatografía,
para esto se cortó zanahoria en pedazos pequeños y se le aplicó etanol, se macero hasta sacar la
mayor parte de extracto posible, una vez se tuvo preparada la muestra se procedió a realizar la
cromatografía en capa fina.
2.2.Cromatografía en capa fina
En segundo lugar, se prepararon 6 diferentes fases móviles asincrónicamente, es decir, se realizó
la primera, a partir de los resultados que se mostraban en la siembra de la placa se modificaron
las mezclas y las proporciones teniendo en cuenta la serie eluotrópica para preparar la segunda
fase móvil y así sucesivamente hasta llegar a la sexta, esto con el fin de asegurar que a la
cromatografía en columna se le agregaría una fase móvil adecuada. Las mezclas realizadas
fueron:
1. Hexano-Acetato de Etilo (9:1)
2. Tolueno-Acetona (9:1)
3. Cloroformo-Metanol (95:5)
4. Éter de Petróleo-Tolueno (7:3)
5. Éter de Petróleo-Tolueno (9:1)
6. Hexano Tolueno (9:1)
Paralelamente las siembras de los extractos se realizaron en seis placas de sílice calentadas
previamente en un horno para su activación, en primer lugar se marcaron las placas a 1.2 mm en
la parte inferior y 3 mm en la parte superior con lápiz esto con el fin de facilitar después la
determinación del coeficiente de retención; después con un capilar de vidrio con la punta
modificada se procedió a hacer la siembra del extracto, luego se plantó cada una de las placas en
una cubeta cromatográfica que contenía 10 ml de las diferentes fases móviles, y se esperó hasta
que la fase móvil llegará a la marca superior realizada anteriormente, luego se dejó secar un la
placa y se ingresó a revelar con yodo para que permitiría ver el recorrido de los componentes del
extracto. En cuanto a la mejor separación de los compuestos, se pudo observar que la mejor
separación se realizó con la primera fase móvil, siendo Hexano-Acetato de Etilo 9:1.
2.3.Cromatografía en Columna
En tercer lugar una vez obtenida la fase móvil adecuada se procedió a realizar el montaje para la
cromatografía en columna, lo primero fue agregar la fase móvil, esta se revolvió junto a la fase
estacionaria en un beaker para luego ser introducida a la columna, en este proceso se tenía que ir
golpeando la columna para que el gel sílice ingresara sin burbujas y evitar que su ingreso que no
fuera uniforme, este proceso de combinar la fase móvil con la estacionaria e ingresarla a la
columnase realizó hasta que toda la sílica se encontró dentro de la columna, una vez realizado
esto, se ingresó la muestra vegetal, para recoger los componentes que iban saliendo se utilizaron
diferentes tubos de ensayo que se iban cambiando cada poco tiempo con el fin de mantener
separados los componentes de la mezcla, al final de la separación se obtuvieron 17 tubos de
ensayo con muestras, las cuales fueron analizadas por medio de una cromatografía en capa fina,
en donde se tomó cada uno de los compuestos y se sembró en la placa, aquellos con un Rf
similar se tomaron como la misma sustancia y por ende se juntaron para poderlos guardar en el
análisis preliminar.
2.4.Análisis Preliminar
Por último después de reunir los componentes de las mezclas que tuvieron Rf similares, salieron
un total de 6 sustancias, que se dejaron secar por 8 días, para realizarles las pruebas se les aplicó
a las primeras tres, alcohol etílico y a las últimas tres cloroformo, se analizaron por medio de tres
pruebas preliminares, estos se escogieron con base en los principales componentes del extracto de
zanahoria que se investigaron con anticipación, estos son el β-caroteno y el licopeno así que,
teniendo en cuenta la estructura de los mismos se utilizaron 3 pruebas, dos de esas para confirmar
la presencia de insaturaciones activas en los compuestos, y una para la presencia de aromáticos,
estas fueron: el ensayo con bromo ( ) en tetracloruro ( ), el Ensayo con permanganato de𝐵𝑟
2
𝐶𝐶𝑙
4
potasio ( ) para insaturaciones y la prueba de la chispita para aromaticidad. La prueba de𝐾𝑀𝑛𝑂
4
bromo se logró hacerle a todos los compuestos, mientras que la prueba de Permanganato solo se
le realizó a dos componentes el 11 y el 13 la prueba de la chispita solo al compuesto 11, esto ya
que había muy poco compuesto de los otros por lo que no alcanzó para las otras pruebas.
Los resultados de este procedimiento se encuentran en la Tabla 1 consignada en el apartado de
resultados.
3. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
3.1.Cromatografía en Capa Fina
En la parte de la cromatografía se determinó con la ecuación 1 los coeficientes de retención de
cada uno de las combinaciones que se utilizaron para las fases, a continuación se muestran las
seis placas que fueron desarrolladas.
(Ec.1)𝑅𝑓 = 𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑥 𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑑𝑒𝑠𝑝𝑙𝑎𝑧𝑎𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
1. Hexano-Acetato de Etilo 9:1
Con esta primera fase móvil se pudieron diferenciar con claridad 3 compuestos dentro de la
placa, el primero, tuvo un coeficiente de retención 0.81 siendo el compuesto menos polar de la
mezcla, el siguiente tuvo un Rf de 0.4 y el último de 0.2, todos estos se sacaron como se muestra
en las ecuaciones 2, esta fase móvil fue la más efectiva en la separación como se puede apreciar
en la Figura 2 ya que se diferencian muy bien los compuestos dentro de la placa por lo que fue la
fase móvil elegida para utilizar el la cromatografía en columna. Sin embargo se realizaron otras
fases móviles para asegurarse que no hubiera otra opción que tuviera un desarrollo más exitoso.
𝑅𝑓
1
= 4.9 6 = 0. 81
0.4𝑅𝑓
2
= 2.4 6 =
(Ec. 2)𝑅𝑓
3
= 1.2 6 = 0. 2 
En este caso, se conoce que al ser en su mayoría esta fase móvil hexano, el β-caroteno es aquel
que saldrá primero ya que es no polar, por lo que se arrastra más fácil por medio de una placa
polar, además su Rf teórico medido con una fase móvil éter de petróleo-Acetona 7:3 y fase
estacionaria sílica gel 60 F254 es de 0.94 (cabe resaltar que los dos componentes de esta fase
móvil son cercanos en la serie eluotrópica al Hexano-Acetato de Etilo 9:1 ) [3], y el que práctico
dió 0.81 el margen de error absoluto y el relativo serían de 0.13 cm y 13.8% respectivamente,
aunque estos valores son relativamente elevados, aunque teniendo en cuenta el cambio de sistema
cromatográfico se puede deducir el porqué, en las ecuaciones 3 y 4 se puede observar los
procesos utilizados para sacar estos errores.
= 0.13 cm (Ec. 3)𝐸
𝑎𝑏𝑠
= 0. 94 − 0. 81| |
= 13.8% (Ec. 4)𝐸
𝑅
= 0.94−0.810.94 * 100
|| ||
Paralelamente se observa la tercera marca que tuvo un Rf3 de , este se considera el licopeno ya
que De acuerdo con la movilidad de Rf del licopeno teóricamente es de 0.15, según Minguez
1997 mencionado en Fernández, Pitre, Llobregat, & Rondon (2007). [2] el margen de error
absoluto y el relativo serían de 0.05 cm y 33.3% respectivamente, el valor del error absoluto es
bastante pequeño pero cuando se realiza el relativo aumenta considerablemente sin embargo el
licopeno también es un compuesto bastante polar por lo que es lógico que sea de los compuestos
con un Rf pequeño, en las ecuaciones 5 y 6 se puede observar los procesos utilizados para sacar
estos errores.
= 0.05 cm (Ec. 5)𝐸
𝑎𝑏𝑠
= 0. 15 − 0. 2| |
= 33.3% (Ec. 6)𝐸
𝑅
= 0.15−0.20.15 * 100
|| ||
Sin embargo se conoce que hay un tercer compuesto que aparece en la placa cromatográfica con
un Rf intermedio de 0.4, como bien se sabe el licopeno y el Caroteno no son los únicosβ
carotenoides presentes en la zanahoria pero si los principales, por lo tanto el compuesto
intermedio podría ser alguna xantofila, las más comunes suelen ser violaxantina y la luteína, estás
suelen tener un factor de retención menor al del β-caroteno y mayor al del licopeno, por lo que es
bastante probable que ese compuesto intermedio sea una xantofila.
Figura 2. Placa de cromatografía con fase móvil Hexano-Acetato de Etilo 9:1
2. Tolueno-Acetona 9:1
Con esta segunda fase móvil se eligió el Tolueno y la Acetona en estos el Tolueno es mucho más
polar que el hexano (usado en la anterior fase) mientras que la acetona es un poco menos polar
que el acetato de etilo, sin embargo se puede notar que la polaridad es muy alta ya que arrastra al
compuesto al mismo tiempo que el disolvente sin darse una separación clara dentro de la placa
como se observa en la Figura 3, por lo que se puede deducir que tuvo muy poca interacción la
mezcla y sus compuestos con la fase estacionaria, el Rf del, aparentemente, único compuesto que
quedó en la placa fue de 1 para hallarlo se utilizó la ecuación 3, al no separarse probablemente
todos los compuestos de la mezcla estén en ese punto.
Esta fase móvil se descartó por los resultados que presentó.
Figura 3. Placa de cromatografía con fase móvil Tolueno-Acetona 9:1
(Ec.7)𝑅𝑓 = 5.7 5.7 = 1
3. Cloroformo-Metanol 95:5
Con esta tercera fase móvil se eligió el cloroformo siendo este mucho más polar que el tolueno y
el etanol, el cual también es mucho más polar que la acetona por lo cual, se puede ver que
sucedió algo similar a la fase móvil anterior, la polaridad es muy alta y el compuesto se arrastra al
tiempo que el disolvente por lo que no es posible separarlo como se observa dentro de la placa en
la Figura 4, por lo que se puede deducir que tuvo muy poca interacción la mezcla y sus
compuestos con la fase estacionaria, el Rf del, aparentemente, único compuesto que quedó en la
placa fue de 1.
Esta fase móvil se descartó por los resultados que presentó.
Figura 4. Placa de cromatografía con fase móvil Cloroformo-Metanol 95:5
(Ec.8)𝑅𝑓 = 5.7 5.7 = 0. 2
4. Éter de Petróleo-Tolueno 7:3
En esta cuarta fase móvil se eligieron el éter de petróleo y el tolueno, ambos compuestos con
polaridades significativamente menores a las de la anterior fase por lo que se esperaba mayor
retención, dentro de los cambios representados por esta fase sobresale la separación de un
componente con un desplazamiento bastante alto, como refleja el Rf de 0.87, el cual se calculó
con la ecuación 5. También se puede notar en la figura 5 que no es visible ningún otro
compuesto separado, por lo tanto se puede concluir que aunque esta fase móvil fue un poco
menos polar que las anteriores (exceptuando la primera), sigue siendo demasiado polar para
permitir que los componentes de esta mezcla se separen satisfactoriamente, por este motivo se
descartó como fase móvil.
Figura 5. Placa de cromatografía con fase móvil Éter de Petróleo-Tolueno 7:3
(Ec.9)𝑅𝑓 = 5.15.8 = 0. 87
5. Éter de Petróleo-Tolueno 9:1
Para esta fase móvil se utilizaron los mismos componentes que la anterior, pero se cambiaron las
proporciones utilizadas, pasando de 7:3 a 9:1 reduciendo la cantidad de tolueno, el compuesto
más polar de esta fase y, en cambio, aumentado el éter de petróleo que tiene una polaridad muy
baja, por lo que se pretende que podría retener más el compuesto y así que tuviera más
interacciones con la capa de sílice. En este caso como se puede ver en la figura 9, donde se ve
que efectivamente el factor de retención de la mancha ha disminuido considerablemente, esto se
comprueba con el cálculo realizado en la ecuación 6 siendo el resultado de 0.53. En esta puede
que esa marca que se presenta sea el β-caroteno ya que es menos polar de todos los componentes
de la zanahoria y suele tener Rf altos, y puede que la marca que quedó en la línea de inicio de la
cromatografía sean el resto de compuestos presentes, o sea el licopeno y posiblemente xantofilas.
Figura 6. Placa de cromatografía con fase móvil Éter de Petróleo-Tolueno 9:1
(Ec.10)𝑅𝑓 = 3.26 = 0. 53
6. Hexano Tolueno 9:1
Para la última fase se decidió mantener el Tolueno y se realizó únicamente el cambio de ëter de
petróleo a hexano, un compuesto un poco más polar, como era de esperarse el coeficiente de
retención aumentó en comparación con la última fase móvil con éter, este valor fue calculado
como se muestra en la ecuación 7, el resultado fue 0.7. Al igual que la anterior vez solo se pudo
observar en la figura 10 un componente dentro de la placa cromatográfica, por lo cual se descartó
para la siguiente cromatografía.
Figura 7. Placa de cromatografía con fase móvil Éter de Petróleo-Tolueno 7:3
(Ec.11)𝑅𝑓 = 4.2 6 = 0. 7
Después de escoger la fase móvil y con base en las diferentes placas que se realizaron, se puede
concluir que la mezcla y los compuestos que posee tienen una polaridad bastante baja como se
puede corroborar con el β-Caroteno ya que son fácilmente arrastrados por los disolventes con alta
polaridad y no realizan fuertes interacciones con la fase estacionaria, sin embargo se conoce que
los otros dos compuestos tienen una polaridad algo más alta por lo cual la fase móvil que más
retuvo los compuestos no fue la que tenía una menor polaridad, sino el que tenía un balance más
claro, ya que el hexano tiene una polaridad bastante baja y se usó en mayor proporción, de hecho
de todos los disolventes que se utilizaron tan sólo el éter de petróleo tenía una polaridad más baja;
por otro lado el segundo compuesto fue el acetato de etilo que dentro de los compuestos con
polaridades altas está en el intermedio.
3.2.Cromatografía en Columna
Una vez se tuvo la fase móvil lista se procedió a realizar la cromatografía en donde se vieron tres
separaciones importantes dentro de la columna coincidiendo con las de la cromatografía en capa
fina, paralelamente se tenian los tubos de ensayo preparados y se iban rotando cuando había un
cambio de color fuerte o cuando un tubo se llenaba mas o menos hasta 5 cm, en total salieron en
total 18 tubos de ensayo que contenían algunos sustancias incoloros y la mayor parte de ellos
eran de color amarillo pálido, este color pudo ser por el β-caroteno, ya que normalmente el
licopeno posee colores más rojizos sin embargo también se toma en cuenta que el producto estaba
bastante diluido.
Para asegurarse de la cantidad de componentes que había en la muestra y cuáles de los tubos
corresponden a la misma sustancia, se tomó cada tubo y se realizó un sembrado en una placa
cromatográfica, manteniendo la fase móvil utilizada en la cromatografía en columna, a partir de
los resultados de estas placas, se juntaron los tubos que tuvieron un recorrido similar y estaban
cerca en el orden de salida de la columna, se desecharon los que, por sus resultados se noto que
eran disolventes, a continuación se va a mostrar la figura 11 donde se muestran las placas, en la
primera de izquierda a derecha se sembraron los compuestos del 1 al 8 y se diferenciaron 3
grupos; en el primero contenía las sustancias del 1 al 3 que se juntaron, segundo el 4 y 5 y tercero
7 y 8 (este último se descartó como disolvente ya que no se presentó alguna marca específica en
la placa lo que se tomo como que era parte del disolvente); en la segunda placa se sembraron los
compuestos del 11 al 17 donde los únicos dos con un recorrido sobre la placa claro fueron el 11 y
el 12 el resto se descartaron y se tomaron como parte del disolvente; por último en la tercera
placa se sembraron tan solo dos sustancias la 18 y 19 que de por sí cuando se vieron en los tubos
eran incoloras, y en la placa tampoco se vió un recorrido claro de las sustancias por lo que se
tomaron como disolventes también, los grupos finales se pueden en la tabla 1 que también
contiene los resultados de las pruebas preliminares realizadas.
Figura 8. Placas de cromatografía en capa fina de los compuestos separados en la cromatografía
en columna. De izquierda a derecha, primera placa tubos de ensayo 1-8, segunda placa tubos
9-17, tercera placa tubos 18 y 1.
Como se muestra en la figura 8 el 1,2,3 tuvo el Rf más grande por lo cual se piensa es el
correspondiente al -caroteno; la siguiente que obtuvo un Rf medio, por último el Rf más bajo 11β
y 12 se clasificaron como licopeno. Y el 18 y 19 no se movieron en la placa y son incoloras por
lo cual se piensa que es parte del disolvente.
3.3.Análisis Preliminar
Dentro de los procesos realizados solo se vio color nanranja en el momento de la maceración de
la muestra, en la separación los compuestos que salieron eran color amarillo pálidos, este es un
color normal en las xantófilas y el β-caroteno; el licopeno posee coloraciones rojas pero estasno
se vieron en ningún momento.
Los resultados de las pruebas preliminares se pueden ver en la tabla 1 todos los compuestos
dieron positivo para la prueba de bromo, mostrando tal vez no coloraciones por completo
transparentes pero sí mucho más claras, en el caso de las 4, 5, la 11y la 12 que como se puede ver
el la figura 13 en la primera imagen de izquierda a derecha adquirieron un color amarillento, lo
cual indica una mayor presencia de insaturaciones en comparación a los otros compuestos
extraídos, vale la pena explicar que estas sustancias también presentaron una coloración amarilla
al momentos de ser extraídas, por lo que se concluye que gran parte de las xantofilas el carotenoβ
o el licopeno.
Figura 9. Prueba de Bromo positiva para los componentes 1,2,3; 4,5 y 11 en la primera imagen
de izquierda a derecha y para los componentes 12; 16,17 y 18,19 positiva en la segunda imagen,
en las dos imágenes el tubo con una equis azul es el blanco.
En cuanto a la prueba de KMnO4 se le realizó únicamente a dos compuestos el 11 y el 12, una de
ellas salió positiva, la del 11 y la otra negativa la del 12 como se muestra en la imagen, se cree
que esto ocurrió por la manera en que fueron manipuladas, ya que cuando se le iba a hacer la
prueba al compuesto 11 se había evaporado todo el disolvente, por lo que se le aplicó alcohol
etílico para realizarlo mientras que al 12 se le aplicó cloroformo, por lo cual no se combinó bien
todo el compuesto con el cual se le hizo la prueba por lo que probablemente la prueba puede
haberse errado, ya que estos dos tubos al tener un Rf tan similar anteriormente podrían llegar a
ser el mismo compuesto, sin embargo después de esta pruebas se generaron dudas.
Figura 10. Prueba de Bromo positiva para el componente 11 en la primera imagen de izquierda a
derecha y negativa para el componente 12 en la segunda imagen, en las dos imágenes el tubo con
una equis azul es el blanco.
Por último la prueba de la chispita se realizó la prueba 11, este salió negativo dando a conocer
que el compuesto 11 no tiene aromáticos presentes en su estructura, de las tres sustancias que
salieron de la columna, la única que no posee aromáticos, es la del compuesto licopeno, esto
empalma con el hecho que fueron los últimos tubos en recibir de la columna una parte con color
amarillo.Tabla 1. Resultados de las pruebas Preliminares de los compuestos resultantes de la
cromatografía en columna
Componente Prueba
de 𝐵𝑟
2
Prueba de
𝐾𝑀𝑛𝑂
4
Prueba de
la Chispita
1,2,3 + N/A N/A
4,5 + N/A N/A
11 + + -
12 + - N/A
16, 17 + N/A N/A
18 y 19 + N/A N/A
4. CONCLUSIONES
● La fase móvil Hexano-Acetato de etilo (9:1) usada en la cromatografía en capa fina fue la
presentó mejor separación de los compuestos, ya que se diferencian muy bien dentro de
la placa donde se pudieron diferenciar con claridad 3 compuestos, el primero, tuvo un
coeficiente de retención 0.81 y es el β-caroteno siendo el compuesto menos polar de la
mezcla, el segundo tuvo un Rf de 0.4 y se piensa es un tipo de xantofila y el último de 0.2
siendo Licopeno.
● Se utilizó con éxito la cromatografía en columna para el aislamiento y purificación de
carotenoides presentes en una muestra vegetal de zanahoria, logrando separar sustancias
por su pigmentación durante la elución.
● Los ensayos preliminares realizados para cada fracción permitieron la identificación de
uno de los compuestos separados, el que se determinó por la prueba de la chispa que al
dar negativa indicó que no poseía aromáticos en su estructura por lo que solo puede ser
licopeno.
5. BIBLIOGRAFÍA
1. Mohrig R.J.; Hammond C.N.; Schatz P.F. (2010) Techniques in Organic Chemistry. New
York, W. H. Freeman and Company.
2. BASTIDAS, J. E. (2016). EXTRACCIÓN DEL LICOPENO EN EL TOMATE Y SU
ENSEÑANZA EN ESTUDIANTES DE EDUCACIÓN MEDIA MEDIANTE EL MODELO
DE PEDAGOGÍA CONCEPTUAL. Bogotá: UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA
NACIONAL. page 42.
3. everino Gutierrez, M. (1997). Determinación cuantitativa de carotenoides en hojas de cinco
especies del género Leucaena. México: Universidad Autónoma de Nuevo León. Page 35
4. Torossi Baudino, F. D. (2017). Una experiencia sencilla con fundamentos complejos: la
separación de pigmentos fotosintéticos mediante la cromatografía sobre papel. Madrid:
Real Sociedad Española de química.Page 47