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Cátedra Microbiología Agrícola 
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE ENTRE RÍOS
FACULTAD DE
CIENCIAS AGROPECUARIAS
 
 
Unidad Temática 5 
Taxonomía bacteriana 
(Guía de estudio) 
 
BBeenniinntteennddee,, SS;; SSáánncchheezz,, CC..,, SStteerrrreenn,, MM.. YY MMuussaannttee,, CC 
Objetivo 
El objetivo de la Taxonomía bacteriana es dar un ordenamiento de las unidades taxonómicas 
básicas (especies). 
 
Especie bacteriana: Es un conjunto de poblaciones clonales que presentan un 
elevado grado de similitud fenotípica entre sí y que a su vez difieren de otros 
conjuntos de poblaciones clonales. 
 
 
Caracterización 
Ideal: caracterización completa del genotipo (es decir de su constitución genética). 
Real: caracterización parcial del fenotipo (apariencia). 
 
Pero además de utilizar propiedades estructurales, se debe recurrir a las propiedades 
bioquímicas y fisiológicas para la caracterización de especies; es decir que las bacterias se 
clasifican no solo por su apariencia sino también por lo que pueden hacer. 
 
 
Denominación: uso del sistema binomial de nomenclatura: formado por 2 palabras. 
Ejemplos: Bacillus subtilis 
Bradyrhizobium japonicum 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Manual Bergey de Bacteriología 
 
Volumen I Bacterias gram (-) de importancia médica e industrial 
Volumen II Bacterias gram (+) de importancia médica e industrial 
Volumen III Bacterias gram (-) restantes 
Volumen IV Actinomicetes y bacterias relacionadas 
 
 
 
Bacillus subtilis 
 
 
La primer palabra indica el rango 
taxonómico inmediato superior, el 
 Género 
 
La segunda palabra cita la 
 especie 
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Taxonomía clásica 
 
La taxonomía clásica está basada en la caracterización: morfológica, fisiológica y 
bioquímica. 
 
Entre los caracteres taxonómicos morfológicos: 
 
Coloración de gram 
Negativo: se observan bacilos aislados de 
color rosado (coloración dada por la 
safranina). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Positivo: se observan cocos agrupados en 
estafilos (estafilococos) de color violeta, 
típico de una coloración de Gram (+). 
 
 
Agrupamientos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Estructuras especiales 
Esporas 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Cápsulas 
 
 
 
 
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Entre los caracteres bioquímicos y fisiológicos 
Pruebas de: Rojo de metilo, Voges Proskauer, Catalasa. 
 
Rojo de Metilo 
 
Principio: fermentadores ácido-mixtos que 
producen una descenso de pH por debajo 
de 4,3. 
Se agrega el indicador Rojo de Metilo al 
medio de cultivo, luego de la incubación. Si 
ocurre un descenso de pH por debajo de 5, 
se produce un viraje al color rojo y la prueba 
se considera (+). Resultados (-) se observan 
por lo general de color amarillo. 
 
Se utiliza para diferenciar Escherichia sp. (+) 
de Enterobacter sp. o Klebsiella sp. (-) 
 
 
Voges-Proskauer 
 
Principio: producción de 22 –– 33 bbuuttaannooddiiooll 
((ffeerrmmeennttaaddoorreess bbuuttaannooddiióólliiccooss)).. 
Reactivo: α-naftol. 
Resultados: reacción color rojo (+) 
 reacción color amarillo (-) 
 
Se utiliza: para separar bacterias de los 
géneros Klebsiella y Enterobacter (+) de 
Escherichia (-). 
 
 
 
Catalasa 
 
Principio: propiedad de la enzima catalasa 
de descomponer el peróxido de hidrógeno 
(H2O2). 
 
 Se añade al cultivo unas gotas de H2O2 
para observar la formación de burbujas. La 
observación de burbujas (tubo +) indica la 
presencia de la catalasa. 
 
Se utiliza para diferenciar los géneros 
Bacillus (+) de Clostridium (-), 
Stresptococcus (-) de Staphylococcus (+) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Existen sistemas comerciales que permiten la rápida identificación de una bacteria en base 
a la capacidad de utilización de determinados sustratos, presencia de determinadas 
enzimas, etc. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Técnicas 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Técnicas serológicas 
 
Utilización in vitro de las reacciones antígeno-anticuerpo para la identificación de un 
microorganismo (virus, bacterias, hongos). 
 
 
 
 
 
 
 
Placas de 
inmunodifusión 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Test de ELISA 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Antisuero 
TTeessttiiggoo 
TTeessttiiggoo 
AAnnttííggeennoo 
(cepas de rizobio) 
AAnnttííggeennoo 
( cepas de rizobio) 
Agar 
Enzima 
 
 
 
Anticuerpo 
 
 
 
 
Microorganismo 
 
 
 
Sustrato 
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Anticuerpos 
fluorescentes 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Aplicaciones de la biología molecular a la identificación bacteriana 
 
1.- Composición de bases del ADN: Determinado por la cantidad de G+C respecto del total 
de bases. 
 
2.- Técnicas basadas 
- en la hibridación del ADN-ADN y ADN-ARN: Permite evaluar el grado de homología 
genética entre bacterias 
 
- en la amplificación de sectores del ADN (por ejemplo PCR): Permite ver si existe o 
no homología entre sectores del genéforo bacteriano aumentando del número de copias de 
un determinado sector de ADN. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Antígeno 
 
Célula bacteriana 
Anticuerpo antibacteriano 
marcado 
fluorescentemente 
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Amplificación de sector de ADN (PCR) (Ver movie pcwin en material complementario) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Complemento Teórico Práctico 
Identificación de Bacterias 
 
El trabajo en microbiología se basa en el estudio de poblaciones microbianas debido a la 
dificultad en la manipulación y la limitada información que se puede obtener a partir de los 
individuos microbianos. 
Los pasos que se siguen para determinar la identidad de un microorganismo es la 
IDENTIFICACIÓN. Un microorganismo se identifica adecuadamente cuando se encuentra 
que la descripción de una especie es idéntica a las características observadas en dicho 
microorganismo. 
La unidad taxonómica de clasificación que comúnmente se utiliza es la especie. Esta 
categoría sistemática se define como el conjunto de poblaciones clonales1 de elevada 
similitud fenotípica2 que a su vez difieren de otras poblaciones clonales. 
Una característica de los microorganismos es que en un corto período de tiempo ocurren 
considerables aumentos de las poblaciones, lo que determina que se puedan establecer 
cambios genéticos que adquieren continuidad. Ello hace problemático diferenciar especies 
sobre la base de un pequeño número de caracteres. 
La esencia de la identificación la integran dos clases de operaciones: 
� Aislamiento, que es el tipo de siembra que permite la separación de microorganismos a 
partir de una población mixta (constituida por más de una clasede microorganismos) 
� Cultivo, que es el crecimiento de la población microbiana en ambientes artificiales 
(medios de cultivo), bajo condiciones de laboratorio. 
Estas operaciones son las mismas independientemente de los microorganismos con los que 
se trabaje. 
Para comenzar la identificación se parte de un cultivo puro3, lo que previamente ha implicado 
el aislamiento del microorganismo a partir de una población microbiana natural mixta (leche, 
suelo, etc.). Para obtener un cultivo puro se utilizan técnicas como el enriquecimiento 
selectivo y la siembra en placas. 
El aislamiento para la obtención de un cultivo puro por métodos de siembra en placa implica 
la separación e inmovilización de las células individuales sobre un medio nutritivo solidificado 
con agar. Cada viable da origen, al crecer, a una colonia cuya transferencia puede hacerse 
fácilmente con ansa. La siembra en estría para la purificación de cultivos es el método 
empleado. 
El inóculo4 tomado con el ansa se va agotando progresivamente con cada sucesiva estría. 
Así las estrías iniciales proporcionan un crecimiento confluente y a lo largo de las últimas 
estrías se van desarrollando colonias aisladas. 
Pero, si toma material de una de estas colonias y se transfiere a un medio apropiado a esto 
no se le puede denominar un cultivo puro, ya que por cada colonia visible en la primera 
placa puede haber células de otros microorganismos que quedaron depositadas en el agar y 
no lograron dar un crecimiento macroscópico a pesar que son viables. Por lo tanto nunca se 
debe tomar la colonia de la primera placa para preparar un cultivo puro, sino que a partir de 
esta se hace una segunda siembra denominada purificación. Si todas las colonias de esta 
 
1
 Un clon es una población de células bacterianas derivadas del crecimiento de una sola célula parental convenientemente 
aislada. 
 
2
 Fenotipo es el conjunto de caracteres hereditarios que se expresan, mientras que se conoce como genotipo a toda la 
información contenida en el genoma de los individuos de una determinada especie, y que no necesariamente siempre se 
expresa. 
 
3
 Cultivo que contiene una sola clase de microorganismos 
 
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 Material microbiano utilizado para sembrar 
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segunda placa resultan idénticas, una colonia bien aislada puede utilizarse para establecer 
un cultivo puro. 
 Es necesario que una vez que se logró el aislamiento se mantenga al microorganismo y a 
su descendencia en un ambiente artificial que impida el acceso de otros microorganismos. 
Este ambiente se puede crear en la caja de petri o en el tubo de ensayo. 
Obtenido el cultivo puro es posible hacer la identificación del microorganismo utilizando los 
caracteres morfológicos y bioquímicos y fisiológicos. 
Lo ideal sería una descripción completa de su fenotipo (expresión de los caracteres), o mejor 
aún por su genotipo (información genética). 
Como metodología habitual se utilizan criterios de fácil determinación como los morfológicos, 
por su practicidad. Algunos de ellos son forma, tamaño, movilidad, reproducción, tinción a 
colorantes especiales como la de Gram, presencia o ausencia de estructuras como esporas, 
cápsulas y flagelos, crecimiento en medios geleficados en los que se puede observar forma, 
tamaño, color y aspecto de las colonias producidas. Sin embargo este criterio ofrece 
elementos de juicio insuficientes para la caracterización definitiva y por lo tanto se tienen en 
cuenta otros criterios como son los mecanismos fisiológicos y bioquímicos, entre los cuales 
se incluyen información sobre crecimiento, muerte y supervivencia en diferentes condiciones 
de cultivo (temperatura de crecimiento, pH, concentración de sales, etc.), ausencia o 
presencia de enzimas (catalasa, amilasa, etc.), como toman, utilizan y /o almacenan la 
energía. 
 
Prueba 
diagnóstica 
PPrriinncciippiioo 
Crecimiento a 
diferentes 
temperaturas 
Detectar la habilidad para crecer a distintas temperaturas determinando la 
óptima para el crecimiento. También permite verificar la plasticidad para 
crecer a diferentes temperaturas 
Crecimiento 
anaeróbico 
Intenta comprobar los requerimientos de oxígeno de los microorganismos 
Producción de 
ácidos a 
partir de 
carbohidratos 
Se fundamenta en la producción de ácido durante el crecimiento por la 
fermentación de azúcares o alcoholes azucarados del medio de cultivo 
Reducción de 
nitrato a nitrito 
Se fundamente en que algunas bacterias utilizan el NO3
- como aceptor 
alterno de electrones, reduciéndolo a NO2
- o N2 
Hidrólisis de 
almidón 
Detecta la presencia de la enzima amilasa, por la formación de un 
complejo azul en el medio de cultivo al combinarse el yodo con el almidón 
 
Utilización de 
citrato 
Se basa en la capacidad de las bacterias para utilizar el citrato como única 
fuente de carbono, pudiendo además utilizar el N de la sal de amonio del 
medio, con la producción de amoníaco. Este último compuesto se 
convierte OHNH4 que alcaliniza el medio por arriba de pH 6.7 virando el 
indicador de medio de verde a azul