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396 D I V E R S I D A D M I C R O B I A N A las bacterias varía de una especie a otra en cuanto a longitud de cadena y en la presencia o ausencia de dobles enlaces, anillos, cadenas ramificadas o grupos hidroxilo (Figura 12.30). Para los análisis, los ácidos grasos extraídos del hidrolizado de células de un cultivo en condiciones estándar se volatilizan y se anali- zan por cromatograf ía de gases. A continuación se compara el cromatograma que muestra los tipos y las cantidades de ácidos grasos de la bacteria en cuestión, con una base de datos de per- files de ácidos grasos de miles de bacterias de referencia culti- vadas en las mismas condiciones. El perfil de ácidos grasos de un organismo, así como otros muchos rasgos fenotípicos, puede variar en función de la tem- peratura, la fase de crecimiento (exponencial o estacionaria) y el medio de cultivo. Por tanto, para que los resultados sean váli- dos, es necesario cultivar el organismo problema en un medio específico y a una temperatura específica. Obviamente, para muchos organismos esto es imposible, lo cual limita la aplica- bilidad del análisis FAME. Además, el grado de variación de los perfiles FAME entre cepas de una especie, una consideración necesaria en estudios para discriminar entre especies, aún no está bien documentado. rep-PCR u otros métodos de obtención de huella, en los que el gran número de bandas produce un alto grado de discrimina- ción entre cepas de una misma especie. Análisis multigénicos y de genomas completos El uso de múltiples genes y de genomas completos para identifi- car y describir bacterias es cada vez más habitual, a medida que la capacidad para secuenciar DNA aumenta y los costos bajan ( Sección 6.2). Actualmente se puede realizar una vasta gama de análisis de secuencia en genomas microbianos enteros, que generan nuevos datos sobre fisiología y evolución microbiana. Estos análisis han proporcionado importantes datos sobre el gran papel que la transferencia horizontal de genes ha desem- peñado en la evolución microbiana y en la naturaleza notable- mente dinámica de los genomas microbianos (Sección 12.7). Los ortólogos compartidos, es decir, los genes que son homólogos y comparten la misma función (Sección 12.5) se pueden alinear y examinar usando métodos filogenéticos y se puede determinar la identidad nucleotídica media de estos genes. El análisis com- parativo del contenido génico (presencia o ausencia de genes) y la sintenia (el orden de los genes en el genoma), así como el contenido en GC del genoma aportan datos adicionales sobre las relaciones entre cepas. Las secuencias de genomas comple- tos también pueden utilizarse para la reconstrucción metabó- lica y la caracterización de rutas genéticas. Se han desarrollado diversos métodos de genómica comparativa y de genómica de poblaciones (Capítulo 6) para su uso en el análisis taxonómico. Análisis fenotípico Las características observables —el fenotipo— de una bacte- ria nos dan muchos datos que se pueden usar para diferenciar especies. Normalmente, bien para describir una nueva especie o para identificar una bacteria, se determinan varios de esos datos para el organismo de interés. Después, se comparan los resulta- dos con fenotipos de organismos conocidos, ya sea examinándo- los paralelamente a los organismos desconocidos, o a partir de información publicada. Las características específicas utilizadas dependen de la clase de organismo, y la elección de caracterís- ticas que se analizan puede ser consecuencia del propósito del investigador, o de que se tenga ya un conocimiento considerable del grupo bacteriano al que es probable que pertenezca el nuevo organismo. Por ejemplo, en casos aplicados, como la microbio- logía de diagnóstico clínico, donde la identificación puede ser un fin en sí misma y el tiempo es vital, se suele usar un sub- conjunto bien definido de características que discrimina rápi- damente entre varias posibilidades. En la Tabla 12.2 se enumeran las categorías generales y se dan ejemplos de algunas caracterís- ticas fenotípicas utilizadas en las identificaciones y las descrip- ciones de las especies; a continuación analizaremos estos rasgos. Los tipos y las proporciones de ácidos grasos presentes en los lípidos de la membrana citoplasmática y los lípidos de la mem- brana externa de las bacterias gramnegativas son características fenotípicas utilizadas con frecuencia en análisis taxonómicos. La técnica para identificar estos ácidos grasos se llama de manera informal FAME, a partir del nombre en inglés para éster metí- lico de ácidos grasos (fatty acid methy ester), y su uso está muy extendido en los laboratorios clínicos, de salud pública y de ins- pección alimentaria y de aguas, en los que rutinariamente hay que identificar patógenos. La composición de ácidos grasos de Tabla 12.2 Algunas características fenotípicas de valor taxonómico Categoría Características Morfología Morfología de las colonias; reacción de Gram; tamaño y forma de las células; tipo de flagelación; presencia de esporas, cuerpos de inclusión (PHBa, gránulos de o polifosfato o glicógeno, vesículas de gas, magnetosomas); cápsulas, capas S o capas de mucosa; tallos o pedúnculos; formación de cuerpos fructíferos Motilidad Sin motilidad; motilidad por deslizamiento; motilidad natatoria (flagelar); motilidad en enjambre; motilidad por vesículas de gas Metabolismo Mecanismo de conservación de energía (fototrofia, quimioorganotrofia, quimiolitotrofia), utilización de compuestos individuales de carbono, nitrógeno o azufre; fermentación de azúcares; fijación de nitrógeno; necesidad de factores de crecimiento Fisiología Márgenes de temperatura, pH y sales para el crecimiento; respuesta al oxígeno (aerobios, facultativos, anaerobios); presencia de catalasa o de oxidasa, producción de enzimas extracelulares Química de los lípidos celulares Ácidos grasosb; lípidos polares; quinonas respiratorias Química de la pared celular Presencia o ausencia de peptidoglicano; composición de aminoácidos de los entrecruzamientos; presencia o ausencia de puentes de entrecruzamiento Otras características Pigmentos; luminiscencia; sensibilidad a antibióticos; serotipo; producción de compuestos exclusivos, como antibióticos aPHB, ácido poli-b-hidroxibutírico ( Sección 2.14) bFigura 12.30 https://booksmedicos.org booksmedicos.org Botón1:
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