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Generalidades de microbiología (Resumen María Isabel Guardián V.) Reinos de la naturaleza Todos los seres vivos pueden ser eucariotas o procariotas, se diferencian en que las células eucariotas tienen núcleo y organelas definidas mientras que las procariotas no. Desde 2015 Ruggiero estableció 2 superreinos y 7 reinos: Prokaryota: - Bacteria - Achaea Eukaryotas: - Protozoa (ej: parásitos) - Chromista - Fungi - Plantae - Animalia Virus: Dependen de células del huésped para sobrevivir. No son considerados organismos celulares. No se consideran organismos vivos y no aparecen en esta clasificación de seres vivos, son material genético que necesita de una célula huésped para poder replicarse. Priones: Proteínas infecciosas, no son consideradas células vivas. Son estructuras más simples que los virus. Las células eucariotas tienen presencia de membranas que rodea organelos que tiene funciones celulares especificas: - Retículo endoplásmico: proteínas de proceso y transporte. - Cuerpo de Golgi: modificación de sustancias, transporte a través de la célula y exocitosis o secreción de otras moléculas. (Modificación postranscripcional de las proteínas). - Mitocondrias: generan energía (ATP). - Lisosomas: degradación enzimática de sustancias intracelulares. - Núcleo: Proporciona un recinto de membrana para los cromosomas - Citoesqueleto (proporciona forma y estructura a la célula). Todas estas características mencionadas anteriormente no las tienen las células procariotas. Las células procariotas se caracterizan por presentar pared celular (no la tienen las eucariotas). Esta pared celular está formada por peptidoglucano Los microorganimos del reino Archaea comparten características de procariotas y eucariotas. Son evolutivamente muy antiguos y usualmente están a temperaturas extremas donde otros seres vivos no podrían estar. Hacen parte del plantón en los mares y son muy importantes en el ciclo del carbono, el ciclo del oxígeno y nitrógeno. No producen patología en humanos. Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Las bacterias miden usualmente 1 micra. Hay bacterias muy pequeñas como el micoplasma, la clamidia, y las rickettsias que miden menos de 1 micha (0,5 micras). Las bacterias poseen plásmidos que es una cadena circular más pequeña de ADN que contienen cierta información genómica, usualmente generan factores de virulencia para las bacterias como por ejemplo la resistencia a algunos antibióticos que puede transmitirse de bacteria a bacteria. Los ribosomas de las bacterias son importantes por que muchos de los antibióticos utilizados para tratar enfermedades infecciosas tienen como sitio de acción el ribosoma, y la diferencia en el ribosoma que se observa en la tabla entre las células eucariotas y procariotas es lo que hace los antibióticos sean activos contra ese tipo de célula (bacteria procariota), pero que no afecten las células del cuerpo humano. Las bacterias se reproducen por fisión binaria que consiste en que una célula madre se parte en dos células hijas. Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Taxonomía Consiste en clasificar y agrupar. Es decir, clasificación, nomenclatura e identificación. - Características fenotípicas (ej: bacterias que utilicen ciertos nutrientes en su metabolismo, es decir, si utiliza la glucosa, si fermenta el manitol o fermenta ciertas proteínas, esto se evalúa por medio de paneles y dependiendo del color que se genere según la utilización de algún nutriente específico y los antibióticos utilizados para su identificación, se determina la presencia de una tipo de bacteria en específico). Sin embargo, actualmente la mayoría de clasificación de los microorganismos se basa en el estudio genómico. - Secuenciación de ARN ribosomal. - Secuenciación de genoma completo. - Factores epigenéticos. - Hibridación de ADN. - Análisis de secuencias conservadas de ADNr 16s. - Contenido de ADN G-C. (concentración de guanina y citocina). - Estudios de proteínas, análisis de ácidos grasos y composición de pared celular. - MALDI-TOF-MS (matrix-assisted laser desorption ionization of fight mass spectrometry). Es espectofotometria de masas (proteómica) con ionización laser, se buscan características específicas de proteínas que están presentes en los microorganismos. Clasificación: Método para organizar microrganismos en grupos o taxas basados en morfología, fisiología y factores genéticos. Domains (Bacteria, Archaea, and Eukarya) Kingdom (contains similar divisions or phyla; most inclusive taxa) Phylunm (contains similar classes, equivalent to the Division taxa in botany) Class (contains similar orders) Order (contains similar families) Family (contains similar genera) sufjo aceae (famila Streptococcaceae, familia Enterobacternaceae) Genus (contains similar species) Klebsiella spp Species (specific epithet; lowercase Latin adjective or noun; most exclusive taxa) Klebsiella pneurmoniae y Klebsiella oxytoca • Biotype, Serotype o Genotype. Tambien se pueden utilizar para clasificar las bacterias, pero no se utilizan en todas las bacterias, solo en algunas por ejemplo E. coli. Estos microorganismos se nombran utilizando el código internacional de bacteriología en que se utiliza un sistema binomial que emplea el genero y la especie del microorganismo, es decir, las bacterias deben llevar dos nombres y se escriben en cursiva y en minúscula excepto la primera letra del nombre del género que va siempre en mayúscula, y el nombre de la especie lleva la primera letra en minúscula siempre. Ej: Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus agalactiae, Streptococcus bovis, conforman el género Streptococcus spp. Cuando ya se ha mencionado una bacteria varias veces en un texto se puede escribir S. pyogenes. Identificación: Para la identificación del microorganismo se toman en cuenta o se describen ciertas características fenotípicas como la forma del microorganismo o la forma de la unión de los microorganismos. Cuando una bacteria crece forma colonias que son la unión de varias bacterias que se han ido replicando hasta que se hace macroscópicamente visible, es decir, las colonias son la representación macroscópica del crecimiento bacteriano. Se puede identificar una bacteria por la forma de la colonia, por ejemplo, si la colonia es naranja, roja, es chiclosa, seca o rugosa. Por ejemplo, la Pseudomona aeruginosa tiene un olor característico a jabón azul, el proteus tiene un olor muy desagradable. Estas son características morfológicas. Por otro lado, están las características microscópicas que ayudan a identificar microorganismos, si son bacterias redonditas se llaman cocos, si son alargadas se llaman bacilos, tambien esta una forma intermedia llamada cocobasilos, en forma de coma se llaman vibrios por ejemplo el Vibrio colerae, en forma de tirabuzón se llama espiroqueta. De esta manera se pueden clasificar de acuerdo con ciertas características como requerimientos nutricionales, requerimientos especiales para el crecimiento, hay bacterias que solo crecen en medios específicos. Pero la mejor clasificación se obtiene por medio de la secuenciación genética, en segundo lugar, el MALDI-TOF-MS. Maria Isabel Nota adhesiva Bacilos ojo Maria Isabel Resaltado Maria Isabel ResaltadoMaria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado Con la tinción de gram se obtiene la primera gran clasificación, de acuerdo con esta tinción las bacterias pueden ser azules (gran +) o rojas (gram-). Se utilizan unos medios para el crecimiento de las bacterias llamados Agar, estos agares pueden ser selectivos o no selectivos. - Existe un agar en el que puede crecer todo tipo de microorganismo que es el agar sangre (las colonias pueden tener ciertas características que las diferencien, pero en este crecen bacterias gram + y gram -). - En el agar Macconkey, rosado-violeta, en este solo crecen los bacilos gram -. - En el agar Ashdown solo crece Burkholderia, porque tiene ciertos antibióticos y componentes que detienen el crecimiento de otros microorganismos. Genética bacteriana Bases nitrogenadas: 4 tipos de RNA • Messenger RNA (mRNA) • Transfer RNA (tRNA) trae el codón al ribosoma para la Síntesis proteica. • Ribosomal RNA (rRNA) forma el ribosoma junto con las proteínas ribosomales. • Noncoding RNA (ncRNA) Cromosomas • Bacterias: Único cromosoma no pareado (haploide) • Humanos: 23 pares de cromosomas pareados (diploides) Elementos no cromosómicos •Plásmidos •Transposones • Integrones Replicación: • Fisión binaria: originan 2 células hijas de una célula madre. • Crecimiento en progresión geométrica, una célula genera 2 células, luego 4, luego 8. Una sola bacteria puede dar lugar a 1021 células hijas en 24 horas. Limitado por Agotamiento de nutrientes y acumulación de productos tóxicos y quedan en estado estacionario y mucho tiempo en este estado les provoca la muerte. • Tiempo de generación, es el tiempo que tarda una bacteria en generar dos células hijas en condiciones óptimas. • Escherichia coli y la mayoría de las bacterias de importancia clínica: 20 min • Mycobacterium tuberculosis: 10--15 horas (6-8 semanas para observar una colonia) • Mycobacterium leprae: 12-13 días. No se cultiva. Se siembra en la plantilla palmar de un ratón o armadillo. Replicación del ADN bacteriano: • DNA polimerasa • 20-40 minutos • Condiciones medioambientales como disponibilidad de nutrientes o presencia de sustancias toxicas (AB) • La síntesis de cada cadena hija ocurre en la dirección 5 a 3'. Expresión de la información genética •Transcripción - Paso de DNA a RNAm - RNA polimerasa - Ocurre en dirección 5´ a 3´ • Traducción (ocurre en el ribosoma). Síntesis de proteínas: paso de RNAm a aminoácidos - 60 codones para 20 aminoácidos - Iniciación, elongación y Terminación. Codón: triplete de bases nucleotídicas que codifican un aminoácido especifico. Ribosomas: Los ribosomas de las bacterias son 70s compuestos por dos subunidades, una subunidad 50s y una subunidad 30s. Ambas suman 70 porque la velocidad de sedimentación cuando se centrifugan, si se centrifugan separadas una sedimenta a 50 y la otra a 30, mientras que si están juntas sedimentan a 70. • Los ribosomas son los sitios para la síntesis de proteínas. Estos están compuestos por ARNr y proteínas ribosómicas. •En este sitio, los codones genéticos del ARNm se traducen en secuencias peptídicas. Tienen un tamaño de 10 a 20 nm, con una constante de sedimentación de 70 S (unidades Svedberg) • Cada unidad de 70 S consta de subunidades de 30 S y de 50 S. • El ARNt tiene el anticodón para el codón del ARNm, que codifica para un aminoácido, el ARNt deja el aminoácido en el sitio P del ribosoma, luego llega un nuevo ARNt y se une al sitio A (tiene un anticodón que se une al siguiente codón del ARNm) y este trae otro aminoácido que se une con el anterior, se corre y deja espacio para que se una otro ARNt en el sitio A y así sucesivamente se va sintetizando la cadena polipeptídica. Diversidad genética Las bacterias cuando replican su ADN no generan siempre copias idénticas de sí mismas si no que ese ADN polimerasa puede generar mutaciones cuando replica el ADN, estas mutaciones muchas veces son inviables y la bacteria muere, pero otras veces las mutaciones le proporcionan a la bacteria ciertas características que le ayudan a sobrevivir en un medio hostil, por ejemplo resistencia a antibióticos. Recombinación del material genético: sexo entre bacterias, les permite intercambiar características. - Transformación: Una bacteria se lisa por cualquier motivo, se libera material genético al medio ambiente y otra bacteria puede tomar ese material genético del ambiente e incorporarlo y ganar las características o habilidades que tenía la bacteria inicial. - Transducción: ocurre a través de fagos que son virus que infectan bacterias. El fago infecta una bacteria luego es liberado e infecta otra bacteria pasándole el material genético de la bacteria inicial, confiriéndole características que le ayuden a sobrevivir. Maria Isabel Resaltado - Conjugación: Paso de información de una bacteria a otra a través del pili de conjugación, que es una prolongación de membrana. Crecimiento y nutrición bacteriana • El agua constituye 80% del total de células bacterianas. • Los requerimientos nutricionales mínimos necesarios para el crecimiento y la multiplicación de bacterias: Fuentes de carbono, nitrógeno, hidrógeno, oxígeno y algunas sales inorgánicas (como azufre, fósforo y elementos como sodio, potasio, magnesio, hierro y manganeso). • Bacterias fastidiosas no crecen en medio de cultivo de rutina a menos que ciertos compuestos se añadan al medio. Ejemplo el Haemofhilus influenzae requiere ciertas vitaminas y factores como el factor 10 para enriquecer el agar chocolate. El neumococo, principal agente causal de la neumonía necesita ciertas condiciones anaerobias en el medio para que pueda crecer. Maria Isabel Resaltado Metabolismo bacteriano Nutrición • Adquisición de nutrientes - Difusión simple a través de la membrana - Transporte activo • Producción de precursores metabólicos - Vía de la glicolisis (Embden-Meyerhof Parnas) degradación de glucosa hasta 2 moléculas de piruvato. - Ciclo del ácido tricarboxilico (ciclo de Krebs). - Vía de las pentosas fosfatos (síntesis de bases nitrogenadas para la síntesis de ADN). - Vía de Entner-Doudorof: degradación de gluconato y glucosa a etanol. Todas estas vías metabólicas pueden o no presentarse en una misma bacteria, de acuerdo con la vía metabólica que utilice la bacteria, es una característica que permite identificar el tipo de bacteria. • Algunas de estas vías permiten la producción de energía. • Reacciones de oxido-reducción con trasferencia de electrones Moléculas transportadoras: - NAD+ nicotinamide-adenine-dinucleotide nicotinamide - NADP+ adenine-dinucleotide-phosphate - FAD+ flavin adenine dinucleotide • Todas ellas terminan en la de ATP (unas con mayor producción de ATP que otras). • Fosforilación oxidativa (no todas las bacterias realizan esta vía) •Aeróbico: O2 como aceptor terminal de electrones en la fosforilación oxidativa. •Anaeróbico: moléculas diferentes al O2 Como aceptor terminal de electrones. OJO repasar bien Basados en requerimientos Nutricionales Oxigeno • Aerobios obligados: solo Crecer en presencia de oxígeno (Pseudomona spp, Mycobacterium tuberculosis, Bacillus, Brucella y Nocardia) • Anaerobios facultativos: Son aerobios que también pueden crecer anaeróbicamente (la mayoria de las bacterias patógenas, E. col, S. aureus, etc.) Aerobios facultativos: Son anaerobios que también pueden crecer aeróbicamente (Lactobacillus spp) • Bacterias microaerófilas: Pueden crecer en presencia de baja tensión de oxígeno, es decir, 5- -10% de oxígeno (Campylobacter spp y Helicobacter spp) • Anaerobios obligados: estas bacterias solo pueden crecer en ausencia de oxigeno, ya que el oxigeno es letalpara ellos (Clostridium tetani) • Anaerabios aerotolerantes: Pueden tolerar el oxígeno durante algún tiempo, pero no lo utilizan (Clostridlum histolyticum). Dióxido de carbono •Bacterias Capnpofilicas: Requieren una mayor concentración de dióxido de carbono 5-10% (Brucella abortus, Streptococcus pneumoniae, etc). El tipo de denominación depende de la cantidad de oxígeno que necesite o si no necesitan oxígeno. Ciertos microorganismos, cuando se van a cultivar, necesitan condiciones específicas de CO2 o de 02, por ejemplo, un ambiente bajo en oxígeno para que crezca el neumococo, ambientes sin oxígeno para que crezcan anaerobios como el clostridium. Morfología bacteriana: • Tamaño: Largo 0.25 a 1 um y ancho 1 a 3 Lum - Chlamydia y Rickettsia O,1-0,2 um diámetro. - Eritrocito 7 um diámetro Morfología. • Morfología: cocos, cocobacilos, bacilos, fusiformes, curvos o espirales • Variación en procesos metabólicos, tamaño, morfología, composición química y estructura de la pared celular. •Tinción de gram: - Gram positivos: Azul - Gram negativos: Rojo • La forma en que se agrupan tambien ayuda a clasificar. - Si se agrupa en forma de racimos usualmente son Staphylococcus. - Si se agrupa en forma de cadenas usualmente son Streptococcus. Maria Isabel Resaltado Los diplococos son usualmente meningococo, tambien están los diplococos descritos como ojos de gato que son de neumococo. Clasificación de acuerdo a la temperatura de crecimiento, la tolerancia a la sal (el colera es halofilico y crece en agua salada por eso los brotes ocurren en costas y se asocia con el consumo de mariscos). Tambien se observa la clasificación de acuerdo con los requerimientos de oxigeno y de acuerdo a la utilización de material inorgánico (autótrofo) u orgánico (heterótrofo). Estructura de las bacterias La envoltura celular que separa el citoplasma bacteriano del medio externo, esta envoltura esta compuesta por 2 estructuras: la membrana celular y la pared celular. Después sigue el citoplasma que solo posee algunas inclusiones citoplasmáticas, porque las procariotas no tienen sistema de endomembrana, pero si poseen lo básico, que son los ribosomas, invaginaciones de la membrana donde se produce energía (mesosomas), gránulos y vacuolas donde almacenan ciertos productos y un nucleoide donde esta el cromosoma circular bacteriano. Pueden tener algunos apéndices, dentro de estos esta la capsula que es una estructura que se encuentra por fuera de la pared celular o algunas prolongaciones como los pilis y los flagelos. Envoltura Membrana Plasmática: - Es el clásico mosaico de fluidos, una bicapa fosfolipidica (30% del peso de la membran) con proteínas (70% del peso), el grosor son 10 nanometros y se diferencia de la membrana de las células eucariotas en que no tiene colesterol excepto el mycoplasma que en vez de colesterol tiene pentaciclinas llamadas opanoides. - La membrana sirve como una barrera osmótica semipermeable que permite el paso de fluidos además tiene un sistema de transporte que permite el paso de solutos de adentro hacia afuera y de afuera hacia adentro. - Como no hay mitocondrias en las bacterias, la generación de energía (producción de ATP) y la respiración celular ocurre en la membrana a través de las invaginaciones llamadas mesosomas. - Permite la motilidad, segregación del cromosoma cuando ocurre la replicación. - Posee sensores que permite que la bacteria evalúe como está el ambiente y si el ambiente es rico en ciertas condiciones, le permite replicarse o de lo contrario entrar en una fase quiescente que le permite sobrevivir más tiempo. Pared celular: - Es una estructura rígida y funciona como un exoesqueleto para las bacterias, le da forma y permite que la bacteria no se rompa por presiones osmóticas y que siga manteniendo su forma. - Su ancho es mucho mayor que el de la membran (hasta 25 nm). - Es el 25% del peso en seco de la célula y está compuesta por péptidoglicano. Este ultimo es la unión de N-acetilglucosamina con N-acetilmuramico y es lo que le permite a la bacteria resistir los cambios medioambientales y de presión osmótica a la bacteria. Se dispone en capas, cada capa esta conformada por N-acetilglucosamina y N-acetilmuramico, entre estas capas se encuentran los péptidos de unión específicamente entre los murámicos, estos no dejan que las capas se separen. Los péptidos de unión son unos pentapéptidos. Tambien, hay tetrapeptidos unidos a cada molécula de N-acetil murámico, el cuarto aminoácido de uno de ellos se une a través de una pentaglicina (pentapeptidos) con el tercer aminoácido de otra cadena de tetrapeptido unida a otro N- acetilmuramico. Este proceso se conoce como transpeptidación y es un paso muy importante en la formación de la pared porque es el sitio de acción de un grupo de antibióticos muy importantes llamados betalactámicos (penicilina, cefalosporinas, carbapenémicos), ellos inhiben la transpeptidación y si no se forma la pared, la bacteria pierde su forma y presenta un cambio en la estructura que la lleva a la lisis celular. Es decir, hay entrecruzamientos entre los N-acetilmuramicos por tetrapeptidos unidos por pentaglicinas. - El exoesqueleto de peptidoglicano es importante en la replicación y permite que la bacteria sobreviva. - Como se había mencionado proporciona protección a la célula contra la lisis osmótica. - Confiere rigidez a las bacterias - Proteger una célula de sustancias tóxicas - Es el sitio de acción de varios antibióticos (B-lactamicos) - Factores de virulencia: La pared celular bacteriana contiene ciertos factores de virulencia (p. ej., endotoxina), que contribuyen a su patogenicidad - Inmunidad: El sistema inmune reconoce la pared de petidoglicano y crea anticuerpos específicos. Tambien crea anticuerpos contra antígenos específicos de la pared celular especifica (por ejemplo, anticuerpos contra LPS) pueden proporcionar inmunidad contra alguna infección bacteriana. - Micoplasma: NO tiene pared celular: pleomórficos (los B-lactamicos no sirven como tratamiento para infecciones producidas por Mycoplasma). Desde el interior de la célula van las estructuras prefabricadas, pasan la membrana y llegan a la parte del peptidoglicano donde se va sintetizando y ocurre la transpeptidación. Existen importantes diferencias en la pared y la membrana de los gram+ y de los Gram- - El grosor de la pared es la primera gran diferencia; los gram + tienen una pared más gruesa. - Los gram - poseen una membrana más compleja porque tienen una membrana interna, un espacio periplásmico que es donde esta la pared y otra membrana externa. - El péptidoglicano de la pared, más grueso en los gram + (de 50 a 100 capas), mientras que en los gram- solo tiene una o dos capas. - La pared del gram + tiene unos componentes importantes que son el acido teicoico y el ácido lipoteicoico, que no están presentes en los gram -. - El entrecruzamiento o la transpeptidación es diferente en el gram + que en el gram -. Los aminoácidos en el gram + son el 1ro alanina, 2do glutamina, 3ro lisina y 4to alanina, el entrecruzamiento ocurre entre la cuarta alanina y la tercera lisina por medio de una pentaglisina. Por otro lado, en los gram – esta la alanina 1ro, glutamina 2do, mesodiaminopimelico 3ro y alanina 4to, entonces el entrecruzamiento ocurre entre la alanina y el tercero que es el mesodiaminopimelico. Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado - En cuanto a la envoltura de los gram -, la membrana externa no es una bicapa lipídica, sino que esta formada por una monocapa de lípidos o capa de fosfolípidos interna y en la parte externa está el lipopolisacárido bacteriano. La membrana externa esta unida a la pared celular de peptidoglicano por medio de la lipoproteína de Braun que evita que la membrana externa se despegue. - El lipopolisacárido tiene 3 partes,el lípido A, el core (núcleo polisacarídico) en la mitad y el antígeno O en la parte más externa. 1. El lípido A se conoce como endotoxina bacteriana y es lo que produce fiebre, escalofríos, malestar general, alteración de la permeabilidad vascular con salida del contenido intravascular al segundo espacio y es lo que hace que el paciente cuando tiene una infección por bacilos gram – se hinche y se edematice, es decir, el lípido A es una endotoxina pirogénica, produce necrosis tisular, actividad anti-complemento, actividad miogénica de células B y actividad antitumoral. 2. El core, que es el cuerpo y esta formado por 9 a 12 azucares, le da la rigidez al lipopolisacárido. 3. Por último, el antígeno o que es la parte más externa va a permitir clasificar ciertas bacterias según el serotipo. - Como se había mencionado anteriormente los b-lactamicos actúan inhibiendo la síntesis de la pared, la pared se sintetiza en el citoplasma y luego debe llegar al espacio periplásmico para terminarse de ensamblar, y la transpeptidación que es la unión de los péptidos por la cadena de pentaciclina la producen unas proteínas que se encuentran en la membrana que se llaman PBP (proteínas de unión a penicilina). De esta manera para que un b-lactamico actúe debe estar en el espacio extracelular, atravesar la membrana externa, atravesar el espacio periplásmico y unirse a la PBP, pero para atravesar la membrana externa debe pasar por unos túneles llamados porinas, entonces cuando la bacteria detecta la presencia de un antibiótico cierra las porinas (si tiene 100 solo deja abierta 10 para que entre menos antibiótico) y este es un mecanismo de resistencia a los antibióticos. Tambien, el poco antibiótico que alcanza a atravesar las porinas y que se encuentra en el espacio periplásmico se enfrenta con las bombas de flujo tambien localizadas en la membrana externa, estas bombas agarran el antibiótico que esta en el espacio periplásmico y lo sacan al exterior. Es conclusión, las baterías para hacer resistencia a los antibióticos, cierran las porinas y sintetizan más bombas de flujo, disminuyendo la posibilidad de que el antibiótico llegue a su sitio de acción. A parte de esto, tambien esta la Antígeno O Core (Núcleo polisacaridico) Lípido A Maria Isabel Nota adhesiva mitogenicidad ojo Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Nota adhesiva por ej. el V. colerae se clasifica en serotipos gracias al Ag O, existen más de 200 serotipos sin embargo, 2 de ellos son los responsables de las grandes pandemias por colera (dos serotipos especificos que son capaces de sintetizar las toxinas que causan las diarreas acuosas abundantes) posibilidad de que la bacteria sintetice unas proteínas llamadas b-lactamasas que tienen la capacidad de degradar el antibiótico, las cuales pasan al espacio periplásmico. - Otro grupo de antibióticos que se llaman lipopéptidos, entre esos la daptomicina, que actúa a nivel de la membrana, gracias a la unión de canales de calcio se une a la membrana y altera la función de la membrana y como en la membran se sintetiza la energía (mesosomas), al alterar la función de la membrana se alteran todos los procesos metabólicos de la bacteria lo que finalmente la lleva a la lisis celular. - Los antibióticos que actúan en la síntesis proteica, entonces estos van a actuar en el ribosoma. Algunos actúan en la subunidad 50s y otros actúan en la subunidad 30s. En la subunidad 50s actúan los macrólidos (claritromicina, eritromicina), glicosaminas (clindamicinas) y quetolidos. Y en la subunidad 30s actúan las tetraciclinas (doxiciclina) y los aminoglucósidos (Amicasina, gentamicina). - En cuanto a la síntesis de ADN, esta el trimetropil sulfa que actúa inhibiendo la síntesis de ácido fólico en dos días, las quinolonas que actúan uniéndose a las topoisomerasas (son las que permiten que la hebra de ADN se desenrolle y se suelte) y la rifampicina que actúa en la síntesis de ARN mensajero. Apéndices Capsula: Es un material viscoso de polisacáridos que se encuentra después de la pared de algunas bacterias, le proporciona cierto grado de protección a la bacteria y evita que los anticuerpos y las células del cuerpo humano reconozcan las bacterias, por lo tanto, es un mecanismo de virulencia de las bacterias porque pueden sobrevivir a ciertos mecanismos del sistema inmune. Biofilm: Las bacterias se pegan a la superficie de un material y van a formar una glucocálix alrededor del material, junto con plaquetas, células bacterianas, detritos celulares, etc. Puede ocurrir con las prótesis y el antibiótico no es capaz de atravesar este biofilm, además la bacteria se queda allí en un estado de inercia donde se replica pocas veces o no se replica y no consume casi energía ni materiales del medio ambiente por lo tanto es difícil eliminar este tipo de bacterias, la única forma es retirando la prótesis o dispositivo. Si no la infección reincide luego de que el paciente deje de tomar antibióticos. - La capsula evita la desecación. - Es una barrera contra la penetración de biocidas. - Protege de la fagocitosis - Previene la lisis bacteriana mediada por complemento. - Previene la acción de lisozimas - Tiene actividades antigénicas y gracias a la capsula existen ciertas vacunas. Ejemplo: el neumococo tiene varios serotipos de acuerdo a su capsula, por lo tanto, existen dos tipos de vacuna contra el neumococo, una vacuna que confiere protección contra 13 serotipos que es prevenar 13 y otra vacuna que confiere protección contra 23 serotipos que es la pneumovax 23. Según los diferentes tipos de capsulas contra los que se van a generar los anticuerpos. Flagelos: son los apéndices que le permiten la locomoción a las bacterias. De acuerdo a la ubicación pueden ser monotricos, peritricos, amfitricos y lofotricos. Pilis o fimbrias: Cumplen con la función de adherencia (son los pelitos más pequeños). Permiten que la bacteria se adhiera al epitelio. Ejemplo: la E. coli es la principal causa de infecciones urinarias en mujeres y la capsula de arándano rojo tiene un componente que se llama proantocianidina que son estructuras que se unen a los pilis de la E. coli evitando que esta se adhiera al epitelio y por tanto sea eliminada por la orina, evitando que ascienda por el uréter e infecte los riñones. Tambien existe un pili sexual para el intercambio de material genético (plásmidos). Esporas: Hay bacterias que desarrollan esporas (etapa bacteriana de reposo o latencia) y esta es una estructura útil cuando las condiciones del medio ambiente no son las mejores y se agotan los nutrientes exógenos (es un estado vegetativo), la bacteria censa las condiciones medioambientales y forma esporas para sobrevivir mucho tiempo sin replicarse bajo condiciones adversas (altas temperaturas, radiación y desinfectantes), la bacteria se vuelve altamente resistente como consecuencia del depósito de calcio y ácido dipicolínico en la corteza, sin embargo, no todas las bacterias forman esporas. Por ejemplo, el Clostridium tetani cuando las condiciones se tornan adversas se transforma en espora y cambia toda su estructura, pierde mucha cantidad de agua y el material genético se condensa dentro de esa nueva estructura. La vacuna contra el tétanos debe colocarse cada 10 años, a las mujeres se la colocan cuando están embarazadas, pero a los hombres generalmente no les hacen más refuerzos por lo tanto están más susceptibles y es más común ver casos de tétanos en hombres. Resumen Tinción de Gram Hans Christian Gram (1884). Paso 1 Fijar el material con metanol o calor Paso 2 (tinción primaria): el frotis se tiñe con colorantes de pararrosanilina (cristal violeta, violeta de genciana o violeta de metilo) durante un minuto. Luego se enjuaga el portaobjetos con agua. El cristal violeta tiñe todas las bacterias de violeta (independientemente de que sean grampositivos o gramnegativo). Paso 3 (Mordiente):se vierte solución de Yodo sobre el portaobjetos durante un minuto. Después el portaobjetos se enjuaga con agua. El yodo actúa como mordiente, se une al tinte para formar complejos yodo-tinte más grande en el citoplasma. Paso 4 (Decoloración): Aplicar decolorante en el frotis, acetona (1-2 seg) o alcohol etílico (20-30 seg) o alcohol de acetona (10 segundos). El portaobjetos se enjuaga con agua. Decolorante elimina el tinte primario de las bacterias gramnegativas mientras que las bacterias Grampositivas retienen el tinte. Paso 5 (Contratinción): Se añade safranina, carbolfucsina o rojo neutro como tinción secundaria durante 30 segundos. Este imparte color rosa o rojo a las bacterias, gramnegativas. El portaobjetos se enjuaga con agua del grifo, se deja secar y luego examinado bajo el objetivo de inmersión en aceite. •Las bacterias Gram (+) resisten la decoloración y retienen el colorante primario, es decir, el cristal violeta • Las bacterias Gram – (se decoloran y por lo tanto, toman la contratinción (safranina) y se tiñen de rosado. Principios de la tinción de Gram. - Teoría del pH: el citoplasma de las bacterias Gram (+) es más ácido, por lo tanto, puede retener el tinte básico (cristal violeta) por más tiempo. El yodo sirve como mordiente, es decir, combina con la tinción primaria para formar un complejo colorante-yodo que queda retenido dentro de la célula. - Teoría de la pared celular: La pared de Gram(+) tiene una capa de peptidoglicano gruesa con enlaces cruzados estrechos, actuando como una barrera que evita la pérdida de cristal violeta. La pared de Gram (-) es más permeable, por lo que permite la salida de cristal violeta fácilmente. 1. La delgada capa de peptidoglicano. 2. Presencia de lipopolisacáridos que se rompe fácilmente por el decolorante; formando más grande poros, que permiten que los complejos colorante yodo escapen del citoplasma. Maria Isabel Resaltado Maria Isabel Resaltado
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