Bacilos Gramnegativos

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Bacilos Gramnegativos (María Isabel Guardián) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Agar de MacConkey. Se trata de un agar selectivo 
para las bacterias gramnegativas y diferencial para 
distinguir las bacterias que fermentan la lactosa y 
las que no. Este medio incluye peptonas digeridas, 
sales biliares, lactosa, rojo neutro y cristal violeta. 
Las sales biliares y el cristal violeta inhiben las 
bacterias grampositivas. Las bacterias que 
fermentan la lactosa producen ácidos, que 
precipitan las sales biliares y provocan un color 
rojo del indicador rojo neutro. 
Murray 
MacConkey agar: It is a differential and low selective medium, commonly used for the isolation of enteric gram-negative 
bacteria. 
�. It differentiates organisms into LF or lactose fermenters (produce pink colored colonies, e.g. Escherichia coli) and 
NLF or non-lactose fermenters (produce colorless colonies, e.g. Shigella) 
�. Composition: It contains peptone, lactose, agar, neutral red (indicator) and taurocholate 
�. Most laboratories use combination of blood agar and MacConkey agar for routine bacterial culture. Sastry 
Los organismos no fermentadores de lactosa permanecen blancos 
o incoloros y el medio se vuelve amarillo. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Son responsables de 7 de cada 10 infecciones del tracto 
urinario (el principal agente etiologico causal de infecciones 
del tracto urinario es E. coli). 
Causas de infecciones gastrointestinales (Salmonella, 
shiguella, yersinia y E. coli). 
Los que se asocian enfermedad en humanos siempre que 
se aíslen esos microorganismos no pueden ser 
considerados parte de la flora normal y siempre deben 
recibir tratamiento (Salmonella typhi, Shiguella spp, 
Yersinia pestis.). 
Hay unos MO considerados oportunistas que hacen parte 
de la flora GI pero en ciertas condiciones pueden causar 
patología. 
Crecen relativamente fácil no son tan exigentes. 
 
 
 
E. coli es probablemente 
el más importante seguido 
por Klebsiella spp 
En general las infecciones pueden dividirse en adquiridas en la comunidad y nosocomiales. Una infección 
nosocomial es aquella que se adquiere en el hospital, el Px no la tenía cuando ingreso o no se encontraba en 
incubación cuando se hospitalizo el Px, usualmente toda infección que se desarrolla después del tercer día del 
Px estar hospitalizado se denomina infección nosocomial pero hay que tener en cuanta que no debe estar en 
incubación cuando el Px se hospitalizó. Ej: Un Px llega a urgencias por fiebre pero se le toma una Rx al 3er día 
y se ve que tiene un infiltrado alveolar y empieza con tos esa neumonía estába en incubación antes que el Px 
se hospitalizara. 
Oxidasa positivos y negativos. 
Se tiene un papel de filtro al cual se le 
va a adicionar la colonia. Se toma la 
colonia con un asa y se coloca en el 
papel de filtro. Si el papel de filtro se 
torna moradito es oxidasa positivo, y si 
el papel de filtro queda blanco es 
oxidasa negativo. 
El papel de filtro va a tener un sustrato 
que es el tetrametil-fenilenedinamina 
dihidrocloro, que es el que va a permitir 
la detección de la citocromo oxidasa. 
Es importante porque dentro de los 
oxidasa positivos importantes esta 
Pseudomona aeruginosa, y dentro de 
los oxidasa negativos usualmente el 
resto de enterobacterias. 
2 características importantes de las enterobacterias: son fermentadores 
en el MacConkey y son oxidasa negativos. 
Maria Isabel
Resaltado
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Muchos de los problemas de multiresistencia en los bacilos gramnegativos se ven en los que son 
oxidasa positivos, por eso cuando se tiene un bacilo gramnegativo no fermentador y oxidasa 
positiva se debe prestar especial atención porque puede ser un microorganismo multirresistente. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Para que los betalactámicos actúen deben llegar a la PBP que es la encargada de la transpeptidación. 
El betalactámico está en el MEC, debe atravesar la membrana externa del bacilo gramnegativo, atravesar 
el espacio periplásmico y unirse a la PBP, sin embargo, los bacilos gramnegativos tienen múltiples factores 
de resistencia dentro de los cuales esta: el cierre de porinas (compuertas que permiten el paso del 
antibiótico a través de la membrana externa) o las dejan de sintetizar. Tambien pueden llegar a sintetizar 
más bombas de flujo estas permiten que antibiótico que esta en el espacio periplásmico sea expulsado al 
medio extracelular. 
Otro mecanismo de resistencia que tienen los bacilos gramnegativos es que pueden llegar a sintetizar unas 
enzimas que son capaces de hidrolizar antibióticos, estas enzimas pueden hidrolizar casi cualquier 
betalactámico entre ellos los carbapenémicos (carbapenemasas o betalactamasas). 
Maria Isabel
Resaltado
Maria Isabel
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Lípido A desencadena respuesta 
inflamatoria. Aumento de la 
permeabilidad vascular. 
Las capsulas pueden ser pobres 
antigénicas y no permiten que se 
active la respuesta inmune 
adecuada. 
- Es responsable de 7 de cada 
10 infecciones de vías 
urinarias 
- Responsable de muchos de 
los episodios de 
gastroenteritis. 
- Es importante como causa de 
infecciones intraabdominales 
cuando hay apendicitis, 
perforación intestinal y 
cuando hay ruptura de colon. 
- La principal bacteria en 
cuanto a numero dentro del 
tracto GI del humano. Hace 
parte de la flora normal GI. 
 
 
Es la principal causa de bacteriemias. 
Clasificación según los Ag (serotipos). Los tipos de Ag 
se les asignan números por Ej. E. coli O121K37H8 
 
 
De los factores de virulencia que tiene E. coli nos centraremos en las toxinas. De acuerdo con las 
toxinas existen varios tipos de E. coli, entre ellas E. coli enteropatogenica, E. coli enterotoxigénica, 
E. coli enteroagregante, E. coli productora de toxina Shiga y E. coli enteroinvasiva. De ellas la 
enterotoxigénica, la enteroagregante y la productora de toxina siga (enterohemorrágica) son las 
que producen toxinas dentro de esta clasificación de E. coli. 
Tener en cuenta el sitio de acción y el tipo de enfermedad que produce. 
El síndrome hemolítico urémico causado por la E. coli enterohemorrágica hace parte de la 
purpura trombótica trombocitopénica, y se caracteriza por baja en las plaquetas asociado a 
alteración de la función renal y hemolisis intravascular, los eritrocitos se destruyen, hay un conteo 
plaquetario bajo y se altera la función de los riñones por el depósito de todos los componentes 
eritrocitos y plaquetas que producen trombos a nivel renal y tambien producen trombos en el SNC, 
entonces se caracteriza por alteración del estado de alerta, deterioro progresivo de la función 
renal, anemia progresiva y como esta anemia es producida por hemolisis va aumentar la bilirrubina 
indirecta, es decir, hiperbilirrubinemia indirecta con elevación de LDH al haber ruptura de eritrocitos 
y conteo plaquetario bajo. Ej: Px que empezó con diarrea con sangre, no mejora y a los 5 días se le 
hace un hemograma y tiene Hemoglobina de 5 y plaquetas en 60.000, la creatinina en suero es de 2, 
es un síndrome hemolítico urémico producto de una enteritis de una E. coli productora de toxina Shiga. 
Las que producen diarrea invasiva (con sangre) son las que afectan usualmente el intestino grueso, 
mientras que las que afectan el intestino delgado usualmente produce diarrea acuosa. 
Diarrea invasiva: tiene sangre y hay lesión del enterocito. 
Diarrea acuosa: alteración de la bomba Na+/K+ ATPasa, el enterocito libera más agua por lo tanto 
se deshidrata el paciente y se producen alteraciones hidroelectrolíticas. 
 
El paciente se infecta con salmonella su sistema inmune controla la enfermedad, pero la salmonella 
llega a la vesícula biliar y se queda ahí (colonización asintomática), cada vez que paciente haga la 
defecación estará expulsando Salmonella por las heces y esto puedeser una fuente de infección para 
muchas personas, sobre todo si la persona es cocinera. 
Esta bacteria es responsable de la famosa fiebre tifoidea o fiebre entérica. 
Infección oral, transmisión oro-fecal. La bacteria llega al intestino delgado y en las placas de Peyer 
se replica, invade el tejido y produce infección del torrente sanguíneo (bacteriemia) y se puede sembrar 
en otros órganos. Puede haber meningitis por salmonella, neumonía, endocarditis y en los pacientes 
con anemia de células falciformes es muy común la osteomielitis por Salmonella (se siembra en 
hueso). 
 
Zoonosis: son enfermedades infecciosas de animales que pueden transmitir al humano. Ej: Rabia. 
No hace parte de la flora normal y si se aísla hay que tratar 
el paciente. 
103, 106 bacilos, es decir, una persona 
se puede infectar con una dosis baja. 
Si hay Salmonella, shiguella o Yersinia las 
colonias crecen de color negro. 
Puede causar otras 
enfermedades entre esa 
diarrea. Este si se puede 
encontrar en animales 
entonces puede ser una 
zoonosis. 
Solo se encuentra en humanos 
 
 
 
 
 
 
Siempre es patológica y hay que administrar 
tratamiento. 
A diferencia de Salmonella que causa enfermedad en 
intestino delgado y se allí se disemina. Shigella produce 
enfermedad en colon. 
No necesita pasar al 
espacio EC para 
invadir otras células. 
Como también produce toxina Shiga tambien puede causar 
el síndrome urémico hemolítico. 
 
La presentación común de la peste que consistía en grandes bubones, que eran el agrandamiento 
de los ganglios linfáticos, se forma pus, pueden producir necrosis de las extremidades y lesiones 
ulcerosas en piel. 
 
 
 
Produce colonias chiclosas, a veces difíciles 
de despegar. La de E. coli es más seca. 
ITS 
Enfermedad respiratoria. 
El rinoescleroma produce 
deformidad en fosas 
nasales. 
 
 
Tiene un olor desagradable en el laboratorio. El más común es P. mirabilis, Hay un fenómeno que 
ayuda a su identificación y es el fenómeno de swarming que es lo que se observa en la imagen 
porque Proteus tiene movilidad. Si se siembra Proteus al día siguiente se observa una colonia con 
ondas y no es más que la bacteria que se desplazó en el medio del cultivo como unas ondas que se 
observan alrededor de las colonias. Este fenómeno es característico de Proteus. 
Cuando el Proteus causa infecciones urinarias se asocia a cálculos renales. 
 
 
 
 
 
 
Se caracterizan por tener una enzima que es la Amp C, 
son una clasificación dentro las B-lactamasas que 
hidrolizan antibióticos, los miembros de SPICE son 
resistentes a muchos de los AB usados en la práctica 
clínica por tener esa enzima. 
Proteus indol positivo o Proteus Vulgaris. 
Maria Isabel
Resaltado
Maria Isabel
Resaltado
 
 
 
 
 
 
 
 
Es probablemente el principal 
microorganismo causante de infecciones 
nosocomiales en la ciudad. 
Es el segundo microorganismo en 
frecuencia después de E. coli tanto en UCI 
como en el resto de las hospitalizaciones 
o salas generales. 
 
 
 
 
Esa tasa de mutación tan alta le va a permitir que genere resistencia intratratamiento muy fácil. Ej. 
Px hospitalizado que se le aísla una Pseudomona, el antibiograma dice que es sensible a una 
piperacilina, se le administra el tratamiento y mejora los primeros días pero después del 4to día 
empieza nuevamente hacer fiebre, se le hace cultivo nuevamente y se aísla Pseudomona nuevamente 
pero ya no es sensible al antibiótico, es decir, se volvió resistente al antibiótico mientras recibía el 
tratamiento por la capacidad que tiene de mutar gracias a la ADN polimerasa que no crea copias tan 
fieles del ADN. 
 
 
 
 
Era muy importante como agente 
causal de infecciones nosocomiales 
en la ciudad de Valledupar. 
Es un MO que tiene intrinsecamente 
capacidad de ser resistente a casi 
todos los AB que se disponen en la 
actualidad, por eso es bastante difícil 
de tratar. 
Con una serie de medidas en la 
ciudad se logro bajar la incidencia de 
infecciones nosocomiales por 
Acinetobacter. Ahora es bastante 
raro. 
 
 
 
B. pseudomalei que es el agente etiológico de la melioidosis se creía que no existía en América, es 
propia del sureste asiático y allá era muy importante porque en algunos sitios es la principal causa de 
neumonía. 
 
Es frecuente entre los campesinos por el contacto con tierra y aguas contaminadas. 
Es responsable de infecciones 
nosocomiales, es frecuente en 
pacientes con fibrosis quística y 
enfermedad pulmonar estructural 
severa. 
Maria Isabel
Resaltado
Maria Isabel
Resaltado
Maria Isabel
Resaltado
 
Se dice que llego América traída por los esclavos. 
Se describió una corte muy grande meloidosis en el Cesar y el Magdalena, ha crecido en el 
tiempo, 30 casos de meloidosis descritos en el Cesar, Magdalena y Bolívar. Fue muy interesante 
ya que probablemente sea de las cortes más grandes de meloidosis descritas en América. 
 
 
Cuando se tiene una secreción, un esputo, una materia fecal o una herida con un absceso que drena 
y tiene pus, se toma la muestra clínica y se siembra en agar, usualmente se tienen 3 agares, agar 
sangre, chocolate y MacConkey, se siembra la muestra en los tres agares, se coloca en la incubadora 
para manejar cierta temperatura y se espera 24 h para ver que creció en esos agares. 
 
 Hay microorganismo como los agentes causales de meningitis y de neumonía que necesitan ciertas 
condiciones atmosféricas (ciertos requerimientos de CO2 o disminución de la concentración de 02 
etc.). H. influenzae, neumococo, neisserias. Sin embargo, no son tan comunes. 
En gramnegativos se hacen muchos más test que en grampositivos. Aunque se podría hacer 
identificación manual es muy complejo porque tocaría montar muchos test al mismo tiempo entonces 
para eso se usan tarjetas de identificación de bacilos gramnegativos que utilizan test de químicos que 
están dentro de sistemas automatizados de identificación. 
 
 
 
 
Se coge la colonia y se diluye en agua, se hace una suspensión de las bacterias y con una multipipeta 
y se toma una muestra y se coloca enzima de la plataforma de identificación para inocularlas en cada 
recipiente pequeño que queda con un contenido de agua con la bacteria, se mete a incubación y se 
lee al día siguiente. En la imagen de la derecha los pozos de arriba sirven para identificación (tienen 
pruebas bioquímicas), y estos pozos de abajo tienen antibióticos, con esa misma placa se sabe el 
nombre de la bacteria y el perfil de susceptibilidad de ese microorganismo. Después se coloca en una 
maquina que puede ser un micro scan que la lee en forma automática y dice que microorganismos es 
y dice los patrones de resistencia, Ej. Penicilina si es sensible, Meropenen si es sensible o resistente, 
etc. Estos son los resultados que les muestran a los médicos. 
 
24h se tarda en crecer la bacteria y otras 24h en identificarla con los métodos mencionados. Esta el 
biter, micro scan y el Fenix para los sistemas automatizados de pruebas bioquímicas. 
 
Esta un paso más adelante en la identificación. Toma cada una de las proteínas de la bacteria y las 
degrada y de acuerdo a los picos que generen las proteínas va a identificar la bacteria. Ej. Si la bacteria 
tiene 5 picos hacia arriba y dos hacia abajo y tres en el centro es una E. coli. Este método es mucho 
más sensible y especifico para la identificación de microorganismos que los métodos fenotípicos 
usuales. El gold estándar en identificación siempre es la genómica pero la proteómica (MALDI-TOF) 
es un paso entre las pruebas fenotípicas y la parte genómica pero se acerca más a la genómica (en 
Valledupar hay sistema de identificación proteómica solo en la clínica de alta complejidad, las demás 
instituciones trabajan con sistemas de identificación fenotípicas). 
La proteómica da la respuesta en minutos y en las pruebas fenotípicas se debe esperar 16-24 horas.Método de difusión en disco: Se diluye la colonia en agua y se siembra en el agar, se colocan discos 
con el antibiótico, de acuerdo con el halo de inhibición se determina si es sensible o no al antibiótico. 
Este método tambien se llama Kirby bauer. 
E-test: Se tiene una tirilla que tiene concentraciones crecientes del antibiótico. Se siembra la bacteria 
y se coloca la tirilla del antibiótico, el punto en el que se intercepta la elipse es el punto que determina 
la concentración de antibiótico que inhibe el crecimiento de la bacteria (MIC, concentración 
inhibitoria mínima). 
 
El gold estándar es la microdilusión en caldo: Se toman tubos de ensayo y se colocan 
concentraciones crecientes de un antibiótico y luego se siembra la bacteria, se pone a incubar y luego 
se observa. El sitio en el que no se vea crecimiento de la bacteria se llama MIC (es la concentración 
mínima del antibiótico que inhibe el crecimiento visible de una bacteria). Por otro lado, la 
concentración bactericida mínima o CBM (la mínima concentración de antibiótico que inhibe el 99,9 
% del crecimiento de la bacteria) donde se debe tomar muestra del tubo donde no creció y sembrarlo 
para ver si crece algún macroorganismo. En clínica se usa el MIC. 
Solo dice si es sensible o resistente. 
Esta prueba indica cual es el MIC 
 
 
Breakpoint: o punto de corte es la máxima concentración del antibiótico que se alcanza en sangre. 
Se toma un grupo de ratones de laboratorio y se les inyecta una cantidad de antibiótico y les miden las 
concentraciones de ATB en sangre y miran que tanta concentración de ATB alcanza en sangre. Es 
importante porque permite saber a partir de que punto una bacteria es resistente o no al ATB. En el 
caso de cefepime es de 8 ug/dl. Ya esta escrito en los libros, si se tiene un MIC menor o igual a 8 
quiere decir que esa bacteria se puede tratar con ese ATB porque la máxima concentración que 
alcanza es de 8 o menos, y la bacteria sería sensible a ese ATB. Pero en el caso del Meropenem el 
MIC es 4 pero el breakpoint es menor o igual a 2 por lo tanto la bacteria es resistente. 
El antibiograma dice los MIC pero uno debe saber el breakpoint de los ATB. 
 
 
Tarjeta donde se 
mide la 
susceptibilidad a 
muchos 
antibióticos. 
CBM es 
usualmente es dos 
o tres veces más 
allá. Nunca es igual 
que el MIC.