ACTIVIDAD PROBI TICA DE UNA MEZCLA DE EXCLUSI N COMPETITIVA EN INDICADORES MICROBIOL GICOS EN POLLOS DE CEBA PREBIOTIC AND PROBIOTIC ACTIVITY OF AN EN

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ACTIVIDAD PROBIÓTICA DE UNA MEZCLA DE
EXCLUSIÓN COMPETITIVA EN INDICADORES
MICROBIOLÓGICOS EN POLLOS DE CEBA
PREBIOTIC AND PROBIOTIC ACTIVITY OF AN
ENZYMATIC HYDROLYSED OF ALCOHOL DISTILLERY
CREAM IN BROILERS ACTIVIDADE PROBIÓTICA
DUNHA MISTURA DE EXCLUSIÓN COMPETITIVA
NOS INDICADORES MICROBIOLÓXICOS EN POLOS
DE CEBA
M. Laurencio, M. Pérez, R. Piad, G. Milián, A. J. Rondón & M. Díaz
To cite this article: M. Laurencio, M. Pérez, R. Piad, G. Milián, A. J. Rondón & M. Díaz
(2005) ACTIVIDAD PROBIÓTICA DE UNA MEZCLA DE EXCLUSIÓN COMPETITIVA EN
INDICADORES MICROBIOLÓGICOS EN POLLOS DE CEBA PREBIOTIC AND PROBIOTIC
ACTIVITY OF AN ENZYMATIC HYDROLYSED OF ALCOHOL DISTILLERY CREAM IN BROILERS
ACTIVIDADE PROBIÓTICA DUNHA MISTURA DE EXCLUSIÓN COMPETITIVA NOS INDICADORES
MICROBIOLÓXICOS EN POLOS DE CEBA, CYTA - Journal of Food, 5:1, 48-53, DOI:
10.1080/11358120509487671
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Cienc. Tecnol. Aliment. Vol. 5, No. 1, pp 48-53, 2005 www.altaga.org/cyta
Copyright 2005 Asociación de Licenciados en Ciencia y Tecnología de los Alimentos de Galicia (ALTAGA). ISSN 1135-8122
ACTIVIDAD PROBIÓTICA DE UNA MEZCLA DE EXCLUSIÓN COMPETITIVA EN
INDICADORES MICROBIOLÓGICOS EN POLLOS DE CEBA
Abstract
The pathogenic exclusion in broilers, of a new mixture of competitive exclusion (MCE) was evaluated. Four
treatments, a control group and three treaties with MCE were used. The dynamics of Staphylococcus, coliformes,
enterobacteriaceae, Enterococcus, Bacillus, Lactobacillus and total bacteria in cecum was determined. The samplings
were carried out to the 28, 35 and 45 days. There were high counts of Enterococcus, Lactobacillus, Bacillus and total
bacteria in the groups with MCE, while Staphylococcus, coliformes and enterobacterias had inferior counts, in these
groups. The results obtained in this work indicate that this new mixture manifested probiotic activity on microbiological
indicators in the broilers cecum. © 2005 Altaga. All rights reserved.
Keywords: Competitive exclusion, probiotic, microbiology in tract.
Resumen
Se evaluó la exclusión de patógenos en pollos de ceba, de una nueva mezcla de exclusión competitiva (MEC). Se
utilizaron cuatro tratamientos, un grupo control y tres tratados con MEC. Se determinó la dinámica de Staphylococcus,
coliformes, Enterobacteriaceae, Enterococcus, Bacillus, Lactobacillus y bacterias totales en el ciego. Los muestreos se
realizaron a los 28, 35 y 45 días. Hubo conteos superiores de Enterococcus, Lactobacillus, Bacillus y bacterias totales en
los grupos con MEC, mientras Staphylococcus, coliformes y enterobacterias tuvo conteos inferiores en estos grupos. Los
resultados obtenidos indican que esta nueva mezcla manifestó actividad probiótica sobre indicadores microbiológicos
evaluados en el ciego. © 2005 Altaga. Todos los derechos reservados.
Palabras clave: Exclusión competitiva, probiótico, microbiología del tracto digestivo.
Resumo
Avaliouse a exclusión de patóxenos en polos de ceba, dunha nova mezcla de exclusión competitiva (MEC).
Empregáronse catro tratamentos, un grupo control e tres tratados con MEC. Determinouse a dinámica de Staphylococcus,
coliformes, Enterobacteriaceae, Enterococcus, Bacillus, Lactobacillus e bacterias totais no cego. Os mostreos realizáronse
ós 28, 35 e 45 días. Houbo conteos superiores de Enterococcus, Lactobacillus, Bacillus e bacterias totais nos grupos con
MEC, mentres Staphylococcus, coliformes e enterobacterias tivo conteos inferiores nestes grupos. Os resultados obtidos
indican que esta nova mezcla amosou actividade probiótica sobre indicadores microbiolóxicos avaliados no cego. © 2005
Altaga. Tódolos dereitos reservados.
Palabras chave: Exclusión competitiva, probiótico, microbioloxía do tracto dixestivo.
PREBIOTIC AND PROBIOTIC ACTIVITY OF AN ENZYMATIC HYDROLYSED OF ALCOHOL
DISTILLERY CREAM IN BROILERS
Laurencio, M.*; Pérez, M.; Piad, R.; Milián, G.; Rondón, A. J.; Díaz, M.
Universidad de Matanzas "Camilpo Cienfuegos". Autopista a Varadero. Km 3 ½. Matanzas. Cuba.
*Autor para la correspondencia. E-mail: marta.laurencio@umcc.cu
Recibido: 14 de Mayo de 2005; recibida versión revisada: 31 de Octubre de 2005; aceptado: 3 de Noviembre de 2005
Received: 14 May 2005; revised version received: 31 October 2005; accepted: 3 November 2005
ACTIVIDADE PROBIÓTICA DUNHA MISTURA DE EXCLUSIÓN COMPETITIVA NOS INDICADORES
MICROBIOLÓXICOS EN POLOS DE CEBA
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INTRODUCCIÓN
Dentro de los productos considerados con
actividad probiótica se encuentran las mezclas de
microorganismos autóctonos del tracto digestivo de los
animales y el hombre, destacándose por su efectividad,
en la mejora de los indicadores productivos, las mezclas
indefinidas de bacterias aisladas del tracto gastrointestinal
(TGI) de aves libres de patógenos específicos (SPF) o en
estado saludable y usadas como productos de exclusión
competitiva en este mismo propósito aviar. Estos
productos producen sus efectos probióticos,
principalmente, por exclusión de microorganismos
potencialmente patógenos, el estímulo a la respuesta
inmunológica y la prevención de enfermedades infecciosas
en animales y el hombre (Rodríguez et al., 1996; Lucchini
et al., 1998; Paul et al., 2002; Jiangrang et al., 2003;
Miroslava et al., 2004).
Los productos de exclusión competitiva
BROILACT, AVIGARD y AVIFREE, entre otros, se
destacan por su demostrada eficiencia probiótica en las
crianzas avícolas. Dichas mezclas están formadas,
fundamentalmente, por bacterias ácido lácticas y
Bifidobacterium (Christophe et al., 2003). Una mejora
en la composición de la microflora intestinal podría
lograse con el empleo de las microfloras indefinidas de
exclusión competitiva, las que impedirían la presencia de
patógenos específicos tales como Salmonellas y
coliformes, beneficiarían el desarrollo de una microflora
ácido láctica y provocarían una mayor eficiencia en el
uso de los alimentos, por estos animales.
El objetivo del presente trabajo fue evaluar el
efecto probiótico de una mezcla de exclusión competitiva,
obtenida de la microflora intestinal de aves adultas
saludables, sobre indicadores microbiológicos en el ciego
de pollos de ceba.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizaron 200 pollos de ceba del híbrido
comercial HE21 BE43 de un día de edad distribuidas en
cuatro grupos experimentales de 50 aves cada uno, según
diseño completamente aleatorizado. Los tratamientos
utilizados fueron: Grupo I (control); Grupo II (MEC al
día de edad); Grupo III (MEC al primero y al quinto día
de edad) y Grupo IV (MEC desde el primero hasta los 45
días).
El sistema de crianza fue en piso con camada de
paja de arroz. La alimentación fue a voluntad, con un
concentrado de inicio de 0 - 14, uno de crecimiento de 15
a 28 días, y otro de finalización de 29 a 45 días.
Procedimiento
Se evaluó la actividad probiótica de la MEC sobre
el balance microbiano, en ciego de pollos de ceba. Los
pollos recibieron tres tipos de concentrados basado en
una dieta de maiz-soya, según los requerimientos del NRC
(1994). LaMEC se preparó en condiciones de laboratorio
en zaranda termostatada, en erlenmeyer de 1000 ml,
conteniendo 200 mL de medio de cultivo a base de melazas
de caña de azúcar y sales minerales. Se obtuvieron, por
separados, los cultivos de Lactobacillus y de Bacillus
según metodología establecida en trabajos previos
(Laurencio et al., 2002).
Para obtener el inóculo inicial de la MEC se
tomaron 2 g de muestras del contenido cecal de cinco
animales, las que fueron mezcladas y maceradas en
solución salina estéril. Seguidamente, se hicieron
diluciones hasta 10-2, de la que se inocularon 10 mL, en
90 mL en medio de crecimiento. La incubación se realizó
a 40 y 37 oC para BAL y Bacillus, respectivamente. El
tiempo de incubación fue de 48 hr para BAL y de 24 hr
para Bacillus.
Los inóculos iniciales de BAL y Bacillus fueron
transferidos a 2 erlenmeyers de 3000 mL que contenían
900 mL del mismo medio de crecimiento, con una
composición definida a base melazas de la industria
azucarera, autolizado de levadura torula, peptona
comercial y sales inorgánicas, a un pH de 6,0. Las
condiciones de incubación para ambos medios fueron
iguales a las usadas para la obtención del inóculo inicial.
La MEC se mezcló de forma homogénea en el
concentrado y se aplicó según tratamientos antes descritos.
Los muestreos, a los animales, se hicieron a los 28, 35 y
45 días, donde se sacrificaron 7 aves por tratamientos.
Para los indicadores microbiológicos se extrajeron
muestras de ciegos y se determinó el número de
microorganismos en diferentes medios específicos para
el crecimiento de Staphylococcus (Agar-Vogel-Johson);
coliformes (Agar-Triptona-Bilis), enterobacteriaceae
(Agar-Glucosa-Bilis-Rojo-Violeta), Enterococcus (Agar-
Mc Conkey No. 2), Bacillus (Agar-Nutriente),
Lactobacillus (MRS) y totales (Agar-Nutriente). Los
conteos microbianos se realizaron según la técnica de las
diluciones seriadas y siembra en placas.
Los datos fueron procesados mediante un análisis
de varianza de clasificación simple y las diferencias entre
medias se determinaron utilizando la Prueba de Rangos
Múltiple de Duncan (1955).
RESULTADOS
En las Figuras 1, 2 y 3 se muestran los resultados
de la dinámica a los 28, 35 y 45 días de edad del conteo
de los principales grupos microbianos, relacionados con
la actividad probiótica (Enterococcus, Bacillus y
Lactobacillus) en el ciego de pollos de ceba ante la
aplicación de cuatro dosis de una mezcla de microflora
de exclusión competitiva a los 28 días de edad.
Enterococcus presenta conteos superiores en todos
los tratamientos de la MEC en los tres momentos de
muestreos. A los 28 días los Grupos III y IV tienen los
mayores conteos, por su parte a los 35 días estos, en el
Grupo II, son superiores. A los 45 días el número de
bacterias es superior en el grupo III.
Lactobacillus muestra un mayor número de
bacterias, para todos los Grupos tratados con MEC, pero
el Grupo III posee mayores conteos para todos los
momentos de muestreo (P<0,001).
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Figura 1. Contenidos de Enterococcus en el contenido cecal de pollos de ceba a los 28, 35 y 45 días de edad, ante diferentes tratamientos con
microflora de exclusión competitiva. a,b,c Letras diferentes entre grupos difieren (P<0,05) según Duncan (1955). Leyenda: Grupo I: Control sin
MEC; Grupo II: MEC al día de edad; Grupo III: MEC al primero y al quinto día de edad y Grupo IV: MEC desde el primero hasta los 45 días.
Figura 2. Contenidos de Bacillus en el contenido cecal de pollos, de ceba a los 28, 35 y 45 días de edad, ante diferentes tratamientos con microflora
de exclusión competitiva. a,b,c Letras diferentes entre grupos difieren (P<0,05) según Duncan (1955). Leyenda: Grupo I: Control sin MEC; Grupo II:
MEC al día de edad; Grupo III: MEC al primero y al quinto día de edad y Grupo IV: MEC desde el primero hasta los 45 días.
Figura 3. Contenidos de Lactobacillus en el contenido cecal de pollos, de ceba a los 28, 35 y 45 días de edad, ante diferentes tratamientos con
microflora de exclusión competitiva. a,b,c Letras diferentes entre grupos difieren (P<0,05) según Duncan (1955). Leyenda: Grupo I: Control sin MEC;
Grupo II: MEC al día de edad; Grupo III: MEC al primero y al quinto día de edad y Grupo IV: MEC desde el primero hasta los 45 días.
Cienc. Tecnol. Aliment. Vol. 5, No 1, pp 48-53, 2005 ISSN 1135-8122 ©2005 ALTAGA
 
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Bacillus presenta conteos superiores en todos los
tratamientos de la MEC en a los 28 y 45 días en el Grupo
III. A los 35 días el Grupo fue superior (P<0,01).
En las Figuras 4, 5 y 6 se presentan los resultados
de la dinámica a los 28, 35 y 45 días de edad del conteo
de los principales grupos microbianos, relacionados con
las principales bacterias enteropetógenas (Staphylococcus,
coliformes y enterobacterias) en el ciego de pollos de ceba
ante la aplicación de cuatro dosis de una mezcla de
microflora de exclusión competitiva a los 28 días de edad.
Los conteos de Staphylococcus fueron inferiores
a los 28, 35 y 45 días en todos los tratamientos con la
MEC (P<0,05). El conteo de coliformes y enterobacterias,
disminuyó en todos los Grupos tratados con la MEC y en
todos los momentos de muestreo (P<0,05), pero
enterobacterias a los 45 días muestra menor diferencia
entre los grupos tratados y el grupo control.
En el conteo de bacterias totales (Figura 7) se
observa que los Grupos tratados con la MEC presentan
conteos mayores. Se destaca, a los 45 días, el mayor conteo
en todos los Grupos menos en el IV (P<0,01).
DISCUSIÓN
En el presente trabajo se obtuvo una mejora en los
conteos de Enterococcus, Lactobacillus, Bacillus y
bacterias totales en los grupos con Mezcla de Exclusión
Competitiva (MEC) y una disminución en los conteos de
Staphylococcus, coliformes y enterobacterias en estos
animales. Estos resultados coinciden con Nurmi (1973)
quien logró una mejora en el balance microbiano del tracto
digestivo, en pollos de ceba, en un experimento donde
suministró, a pollitos recién eclosionados, flora intestinal
de aves adultas saludables. Como resultado los pollitos
tuvieron un rápido establecimiento de su flora, una mejora
en la viabilidad, un incremento en el peso corporal y la
exclusión de Salmonella. Aunque en este trabajo no se
determinó Salmonella, se encontraron conteos inferiores,
en los animales tratados con esta MEC, de otros
microorganismos potencialmente patógenos, tales como
Staphylococcus, coliformes y enterobacterias.
En este trabajo los pollitos eclosionaron en un
medio casi estéril, el que pudo producir un retraso en el
desarrollo de la microflora beneficiosa y el
establecimiento de bacterias patógenas como Salmonella,
Staphylococcus y coliformes. La aplicación de la MEC
permitió el establecimiento de un balance microbiano
beneficioso en el ciego, coincidente con los resultados de
Fowler y Mead (1990) quienes encontraron mejoras en el
balance microbiano, con microfloras de exclusión
competitiva, en el tracto digestivo de las aves.
Los mecanismos de la colonización, o la
protección, no están todavía totalmente respondidos. Sin
embargo, la utilización de las microfloras de exclusión
competitivaprueba un considerable decrecimiento del
rango de contaminación en la vida del ave, tal como ocurre
en el presente trabajo (Kralik et al., 2004; Lee et al., 2004).
Impey y Mead (1989) comprobaron la eficacia de
un producto de exclusión competitiva al tratar pollos con
un cultivo de microorganismos procedentes de los ciegos
y posteriormente desafiarlos con una cepa de Salmonella
typhimurium. A las 48 horas post-inoculación no se
observó multiplicación de esta bacteria en los ciegos de
los animales tratados, mientras que en las aves testigos
los ciegos fueron colonizados con más de 106 Salmonellas
/ g. El uso de la MEC demostró una disminución en los
conteos de bacterias entoropatógenas y un incremento de
bacterias beneficiosas en los ciegos de los animales
tratados, aunque no se realizó desafío con patógenos
específicos.
La MEC disminuyó los conteos de E. coli. Este
resultado coiuncide con Stavric et al. (1992) y Hariharan
et al. (2004) quienes estudiaron la eficiencia del empleo
de una flora bacteriana fecal sobre el control del serotipo
0157:H7 de E. coli asociado con numerosos brotes de
colitis hemorrágica en humanos y coloniza, también, a
pollitos jóvenes. Estos autores trataron pollitos de un día
Figura 4. Contenidos de Staphylococcus en el contenido cecal de pollos, de ceba a los 28, 35 y 45 días de edad, ante diferentes tratamientos con
microflora de exclusión competitiva. a,b,c Letras diferentes entre grupos difieren (P<0,05) según Duncan (1955). Leyenda: Grupo I: Control sin
MEC; Grupo II: MEC al día de edad; Grupo III: MEC al primero y al quinto día de edad y Grupo IV: MEC desde el primero hasta los 45 días.
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Figura 5. Contenidos de coliformis en el contenido cecal de pollos, de ceba a los 28, 35 y 45 días de edad, ante diferentes tratamientos con microflora
de exclusión competitiva. a,b,c Letras diferentes entre grupos difieren (P<0,05) según Duncan (1955). Leyenda: Grupo I: Control sin MEC; Grupo II:
MEC al día de edad; Grupo III: MEC al primero y al quinto día de edad y Grupo IV: MEC desde el primero hasta los 45 días.
Figura 6. Contenidos de enterobacterias en el contenido cecal de pollos, de ceba a los 28, 35 y 45 días de edad, ante diferentes tratamientos con
microflora de exclusión competitiva. a,b,c Letras diferentes entre grupos difieren (P<0,05) según Duncan (1955). Leyenda: Grupo I: Control sin MEC;
Grupo II: MEC al día de edad; Grupo III: MEC al primero y al quinto día de edad y Grupo IV: MEC desde el primero hasta los 45 días.
 
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Figura 7. Contenidos de totales en el contenido cecal de pollos, de ceba a los 28, 35 y 45 días de edad, ante diferentes tratamientos con microflora de
exclusión competitiva. a,b,c Letras diferentes entre grupos difieren (P<0,05), según Duncan (1955). Leyenda: Grupo I: Control sin MEC; Grupo II: MEC
al día de edad; Grupo III: MEC al primero y al quinto día de edad y Grupo IV: MEC desde el primero hasta los 45 días.
Cienc. Tecnol. Aliment. Vol. 5, No 1, pp 48-53, 2005 ISSN 1135-8122 ©2005 ALTAGA
de nacidos con 0,5 ml de cepas fecales (CF) e inoculados
oralmente dos días después con 0,5 ml de 103-109 ufc / ml
de E. coli / pollito. Estos fueron sacrificados 6 días después
del desafío y los contenidos cecales extraídos para el
conteó de E. coli. El efecto protector del CF fue evidente
desde el principio hasta el fin, pero fue más pronunciado
10 h después del desafío.
La MEC demostró un efecto beneficioso sobre el
contenido de Lactobacillus, principalmente en el Grupo
III, lo que coincide con Pascual et al. (1999) quienes
desarrollaron ensayos de campo con Lactobacillus
salivarius, con el fin de disminuir la colonización de
Salmonella enteritidis C-114 en pollos de ceba y
encontraron que más de una dosis es necesaria para
asegurar su presencia y efectos.
La MEC permitió una rápida colonización de los
microorganismos beneficiosos en el TGI de pollitos recién
eclosionados. Según Chen y Stern (2001) y Paul et al.
(2002) a pesar del aumento de la bioseguridad en la
avicultura moderna, todavía resulta difícil el control de
padecimientos tan problemáticos como la salmonelosis y
la colibacilosis. Estos son, en gran parte, debido al nulo
contacto entre madres y progenies, dificultando así la
colonización de TGI, proceso que en la actualidad les lleva
a las aves, recién nacidas, hasta 3 semanas, período en el
cual están en alto riesgo de ser invadidas y colonizadas
por bacterias patógenas localizadas en el medio ambiente
que les rodean.
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ALTAGA ©2005 Laurencio et al.: Actividad probiótica de una mezcla de exclusión competitiva...