GUIA N 11 Conservacion del Semen

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Cátedra de 
Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia
Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guia Nº 11
GUIA Nº 11
CATEDRA DE FISIOPATOLOGIA DE LA REPRODUCCION Y OBSTETRICIA
CONSERVACION DE SEMEN 
 La concentración de espermatozoides en eyaculado es normalmente alta, 4-5.000 millones o
más y si consideramos que en el bovino la dosis mínima fecundante es de 10 millones se
deduce que un simple eyaculado puede servir para inseminar un numero importante de
vientres.-también la mezcla del semen con un diluyente permite que este nutrientes y
protectores de manera que aseguren la viabilidad y fertilidad hasta el momento en que se
depositen en la hembra.
Por lo tanto de lo antedicho se desprende que las funciones de los diluyentes son
principalmente dos 
1-Conservar la fertilidad
2-Aumentar el volumen para ser utilizado en un numero mayor de hembras 
Si bien se ha utilizado la motilidad como indicadora
de vialidad esto no indica fertilidad, ya que la integridad del material genético es
indispensable para que estos puedan fertilizar, y no existe ninguna prueba de laboratorio (por
lo menos de rutina)que pueda evaluar la fertilidad de un semen.-
Se han desarrollado numerosas formulas de diluyentes para la conservación de semen pero
todas ellas basadas en dos formas básicas: 1-semen mantenido sobre 0º C.-
 2-semen mantenido por debajo de 0º C La primera de ellas bajo dos formas:
sémen enfriado y a Tº ambiente.- 
CARACTERISTICA DE LOS DILUYENTES 
 Los diluyentes cumplen funciones de protección de los espermatozoides
por lo tanto sus característica físicas y químicas deben estar acordes con el medio natural que
es el plasma seminal.- 
dentro de estas características de los diluyentes hay que tener en cuenta ciertos factores que
son indispensables para la sobrevida de los espermatozoides.-
1-TEMPERATURA:
 El uso del semen después de extraídos varia desde algunas horas a varias semanas
(semen mantenido sobre 0c.-
La tasa metabólica tiende a ser proporcional a la temperatura por lo que la disminución de la
misma ha sido el medio utilizado para prolongar la vida disminuyendo las reacciones
químicas.-
A temperatura corporal las necesidades de nutrientes se hacen altas y los productos tóxicos se
acumulan rápidamente.-
A temperatura bajas cambia la solubilidad del oxígeno y disminuye la tasa metabólica,
también disminuye la solubilidad de ciertos solutos y esto hace que cambie la viscosidad de
la solución causando una resistencia física a la motilidad.-
También según disminuye la temperatura se modifican las estructuras produciéndose
contracciones del protoplasma,
todos estos factores están relacionados con la conserva-
ción de los espermatozoides por la disminución de la temperatura.-
2-Energía:
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 Los espermatozoides tienen requerimientos energéticos fundamentalmente para la
motilidad aunque se cree también necesite energía adicional para la motilidad aunque se cree
que también necesite energía adicional para el mantenimiento.-
La energía que se proporcione debe ser a partir de azúcares simples como glucosa o fructosa
para proteger las reservas intracelulares, la yema de huevo contiene cierta cantidad de
glucosa utilizable por los espermatozoides de toro.-
3-PRESION OSMOTICA: 
 Si bien los espermatozoides parecen tolerar ciertos cambios en la presión
osmótica de la solución lo ideal es que esta sea isotónica con respecto a las células
espermáticas.-
Existen interacciones entre el pH de la solución y su concentración de electrolitos y no
electrolitos que pueden provocar cambios muy marcados en la presión osmótica y trae como
consecuencia intercambios de sustancias particulares con el medio que hace que los
espermatozoides curven sus colas, naden en círculo y finalmente mueran.
4-TAMPON : 
 Se necesita que las células espermáticas estén protegidas frente a la
autointoxicación y a la acumulación de sustancias ácidas producto del metabolismo
sobre todo cuando el semen se mantiene sin oxigenarlo.-
La motilidad y fertilidad se mantienen bien en diluyentes comunes ( yema ,leche )cuando el
pH se mantiene en 6,5a 7,0 incluso cuando es ligeramente ácida como los medios con CO2
que descienden el pH hasta 6,3 hace que haya una disminución del metabolismo
disminuyendo la concentración de sustancias tóxicas.-
Por lo tanto el diluyente que se use debe tener algún componente que esté como tampon 
5-PROTECCION CONTRA EL FRíO:
 Cuando las células espermáticas se enfrian a 5º C se
someten a un choque térmico que causa la pérdida de sustancias como potasio lipoproteinas,
enzimas celulares, además disminuye la motilidad y el flagelo puede llegar a curvarse .-
Existen sustancias que disminuyen este efecto ,protegiendo a los espermatozoides de un
choque por frío , sobre todo si el descenso de la T° es lento lo que quiere decir que las células
estermáticas son susceptibles de cambios adaptivos a la temperatura .- Los medios mas
eficaces que se han descripto para proteger a las células del choque por frío son las lecitinas y
lipoproteinas, que se encuentran en la leche y en la yema de huevo En el caso de semen
congelado existen otros protectores como veremos mas adelante Existen trabajos muy
antiguos (Foote,1949) que indican el beneficio de la adición de yema de huevo antes del
enfriamiento, sobre la motilidad yfertilidad posteriores.- 
6-EFECTO DILUCION:
El semen debe mezclarse con suficiente diluyente de manera que en cada dosis contenga el
número suficiente de espermatozoides para la I.A.- Sin embargo una dilución muy
amplia de eyaculados concentrados parece disminuir la motilidad si el diluyente es simple .-
La adición de yema de huevo a razón de 20-25% disminuye este "efecto dilución" 
7-INHIBICION DE MICROORGANISMOS:
Si bién se trata que la extracción de semen sea la mas limpia posible siempre existen
contaminaciones con microorganismos comunes existentes en el prepucio , orificio
prepucial , glande, etc., ademas de los existentes en el ambiente de extracción , los que
además de poder provocar infecciones en la hembra e impedir la concepción también pueden
por los nutrientes con las células espermáticas , sobre todo considerando que los diluyentes
en general por su composición son excelentes caldos de cultivos para muchos
microorganismos .- Para esto generalmente se agregan antibioticos a los
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diluyentes utilizandose mayormente combinaciones de penicilina y estreptomicina aunque
hay fórmulas de diluyentes que llevan otros antibióticos e incluso antifúngicos.-
DILUYENTES PARA CONSERVACION SOBRE 0º C:
Los primeros medios utilizados para diluir semen fueron las soluciones salinas o azucaradas
para utilizarlas en forma inmediata o sea que su efecto principal era dilutor y no conservador.
Con el descubrimiento de los beneficios de la yema de huevo y la leche se presentó un
diluyente que tenía funciones de conservador al permitir disminuir el metabolismo por efecto
del frío ya que se utilizaba a 5º C.-
para establecer un orden didáctico desarrollaremos primeramente los diluyentes para
utilizarlos a Tº ambiente y luego los enfriados .-
A)DILUYENTES A Tº AMBIENTE :Partiendo de la base que los espermatozoides son
capaces de sobrevivir un tiempo prolongado en el tracto genital de la hembra se han
desarrollado medios de disolución para ser mantenidos a temperaturas ambientes
relativamente altas .-
Para esto lo mas importante según algunos autores (Foote y Bratton)es lograr una buena
combinación antibiótica que impida el desarrollo bacteriano .-
Si bién estos medios ya han sido practicamente dejados de lado (por el desarrollo de técnicas
de congelado y de termos de I.A.con larga autonomia,etc )es importante que desarrollemos
algunas de las técnicas .-
Se han desarrollado numerosas fórmulas para diluyentes a temperatura ambiente.
A.- CHARLES NORMAN O LECHE DE COCO :(C.M.E.) 
 La leche o agua de coco luego de
hervida durante 10` fué utilizada para la dilución de semen y mantención a Tº ambiente .-
según Norman la fórmula era la siguiente :
 Leche de coco 15ml
 Citrat Na deshidratado 2.2g
 Sulfanilamida 0.3g
 yema de huevo 5ml
 Agua destilada C.s.p 100ml
Por cada 100 ml CME hay además 135mg de sulfato de entrepomicina ,10mg de sulfato de
polimixina B,1000 UI de nistatina y 1500 unidades de catalasa esteril .-
El pH aconsejado para esta solución es de 7.4.-
Hay pruebas que indican que cuando se mantiene a Tº ambiente la proporción de yema de
huevo debe disminuir al 0.5 a 1%.-
El tiempo de conservación de esta solución varía de 4 a 6 días auque algunos autores indican
mas tiempo mantenido a temperaturas de entre 15 y 25 a 27º C.-
Mantenido durante ese tiempo y a la temperatura indicada los porcentajes de preñez oscilan
según las experiencias entre 55a 67% deNR a 90 dias .-
A. 2 ILLINIOIS VARIABLE TEMPERATURE ( IVT ): 
 El del metabolismo de las células
espermáticas es indispensable para que un diluyente funcione correctamente a temperarura
ambiente .En ILLINOIS se han descubierto que la adicionlódec CO2 disminuye el
metabolismo , entonces se desarrolló un medio para Tº ambiente llamados
IVT.- 
Dichas investigaciones constataron pocas diferencias cuando se usa este diluyente asta 7 días
a temperatura ambiente .-
Su fórmula es la siguiente :
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Bicarbonato de Na 0.21g
Citrato de Na deshidratado 2g
Cloruro de K 0.04g
Sulfanilamida 0.30g
Agua 100ml
Se calienta , se enfria y se satura con CO2
Yema de huevo 10% con respecto al total
Penicilina 1000UI/ml
Estreptomicina 1000g/ml
Otros medios similares han dado exelentes resultados sin necesidad de la adición de CO2
como el CUE.-
A.3-CORNELL UNIVERSITY EXTENDER (C.U.E.):
 El C.U.E.es un diluyente similar al anterior con la diferencia que no
se satura con CO2 y es adicionado de glicina .-
Como consecuencia del metabolismo de los espermatozoides la glicina puede proporcionar
la cantidad de CO2 necesaria.-
Según algunos autores la temperatura ideal del CUE es de 20ºC .-
Su fórmula es la siguiente :
Citrato de Na 1.45g 
Bicarbonato sódico 0.21g
Cloruro potásico 0.04g
Glucosa 0.30g 80% 
Glicina 0.94g 
Sulfanilamida 0.30g 
Acido cítrico 0.09g 
Agua c.s.p. 100ml 
Yema de huevo 20%
Penicilina 1000 UI-ml
Estreptomicina 1000 g-ml 
A.- CAPROGEN : Este es quizás para temperatura ambiente que mas inseminaciones
controladas ha tenido ya que se tornó de uso casi masivo en NUEVA ZELANDIA .-
Este diluyente a base de ácido caproico y catalasa que tiene la función de descomponer el
H20 que se forma como producto del metabolismo de los espermatozoides .-
Si bién este diluyente se inició como medio para semen refrigerado para el uso a temperatura
ambiete debió sufrir modificaciones como ser disminución del porcentaje de yema de huevo
que para 5º C es de 20% y para Tº ambiente con solo 1 ó 2%es suficiente aunque
inicialmente la primer dilución debe llevar 20% .-
B.-DILUYENTE PARA SEMEN REFRIGERADO :
 Los primeros medios para diluir semen fueron soluciones salinas y
luego cuando se descubrieron los valores de la yema de huevo se presentó el diluyente
verdaderamente conservador que reunía las ventajas de disminuir la tasa metabólica al
mantenerse a 5º C.-
Se han desarrollado diversos para semen refrigerado pero el primero de ellos quizas ha sido el
desarrollado por Phillips y posteriormente suiguieron otros que se han utilizado hasta hace
poco aún siguen utilisadose .-
B-PHILLIPS O FOSFATO -YEMA (1939):
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 Este autor fue el primero en descubrir el beneficio de la adición de yema
de huevo al tampon fosfato y que en las pruebas de campo dieron buena fertilidad Su
fórmula era la siguiente :
 ...................... 0.2g
 Fosfato de K 0.2g
 Agua c.s.p. 100ml
 Yema de huevo 100ml
El pH final de esta solución era de 6.75.-
CITRATO -YEMA :(1941):
 En1941 Salisbury y otros informan de los efectos conservadores
del citrato de sodio cuando es adicionado de yema de huevo y mantenida a 5º C.-
El citrato de Na parece ser hipertónico con respecto al semen pero adicionado de la yema de
huevo parece disminuir este efecto .-
.........................utilizó el citrato sodio al 3.6%y luego se redujo al 2.92%que es lo que se usó
y se usa habitualmente .-
El citrato tiene la ventaja sobre el fosfato que el primero dispersa los glóbulos grasos de la
yema permitiendo una visivilidad al microscopio y también permite una mayor motilidad de
los espermatozoides...................................................................................................
 .............................................................luego como testigo para ensayos de nuevas fórmulas.-
Composición : 
 Citrato de Na (2molec) 2.92
 Agua destilada c.s.p 100ml 75a80%
 Yema de huevo 20a25%
 Penicilina G sódica 1000UI-ml
 Dehidroestreptomicina 500a1000g-ml
Preparación:
 Se prepara la solución de citrato de sodio hasta una perfecta disolución y
manteniendola a 18 ó 20º C para el agrado de la ....................................coloca la yema sobre
un papel de filtro y se la tiene alli ...............................................movimientos hasta que no
tenga restos de clara, esto se nota porque la yema pierde el brillo,en este momento se perfora
con una aguja y se obtiene yema pura .- 
Antes de romper la cáscara es conveniente que se limpie perfectamente y se desinfecte con
alcohol.-
Una vez agregada la yema al diluyente se agita con el fin de mezclar perfectamente y de
romper los glóbulos grasos , para esto se utiliza una varillade vidrio , un agitador mecánico o
un mezclador de "bolita" , lo importante es que quede lo mejor homogeneizado posible y con
los glóbulos grasos lo mas pequeños posible .-
La agitación del diluyente se hace con cierto cuidado para evitar el ingreso de en la
solución ,de lo contrario se prepara unas horas antes de ocupar .
PROCESAMIENTO DEL SEMEN : 
 Una vez obtenido el eyaculado se realiza una evaluación
de la calidad seminal como se describieron en guias anteriores, teniendo en cuenta que por
razones de tiempo no se realiza un espermograma completo si no que se hace una
evaluación microoscópica y luego se evalúa la concentración y el % de vivos aptos y su grado
de motilidad ,.......................... esto se puede calcular la tasa de dilución se realiza de acuerdo
a la cantidad de espermatozoides totales que se desea en cada dosis de semen diluido .-
Totalmente se calcula una cantidad de 15 millones de esp.vivos aptos...............
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En base a esto y teniendo en cuenta que una dosis de semen diluido para I.A. tiene un
volumen de 1ml generalmente .-
La dilución que se aconseja con este diluyente va de 1:5 a 1:30 .-
.......................................hecho la evaluación del semen se ha establecido la tasa de dilución a
realizar se procede a efctuar la primera dilución a Tº de 33 a 34º C,en esta dilución se utiliza
la mitad del diluyente total calculado, derramando el diluyente sobre el tubo del semen, si no
se mezclan inmediatamente conviene hacer algunos movimientos del tubo para lograr un
perfecto mezclado .-
.........................................comienza el descenso de Tº para lo cual se calcula ..............
1ó2 minutos de manera que el descenso ................5º C lleva aproximadamente 90`
Esto se realiza colocando el tubo con semen diluido en recipiente pequeño con agua a la
temperatura de extracción (33-34º C) y este recipiente se coloca en otro mayor que contenga
agua a 5º C en la parte de abajo de una heladera y aprox. en el tiempo indicado llega a 5ºC.-
Una vez que llegó a 5ºC se procede a realizar la segunda dilución con la otra mitad de
diluyente, teniendo en cuenta que ambos deben estar a la misma temperatura , para esto
conviene colocar el semen prediluido sobre el diluyente final teniendo en cuenta que a esta
temperatura (5ºC) practicamente no hay movimiento espermático y no se mezcla bién la
solución por tanto hay que hacer algunos movimientos del tubo (en forma) para lograr un
correcto mezclado .
Luego de esta segunda dilución el semen queda listo para usar pudiendose envasar en
recipientes de color caramelo para evitar la acción de la luz solar.
Hay que tener en cuenta que cuando se mantiene la Temperatura, mediante el agregado de
trozos de hielo que estos no tomen contacto directo con los frascos de semen ya que puede
provocar el congelamiento del semen con deterioro y muerte de las células espemáticas.
La velocidad de calentamiento cuando se va a utilizar el semen no tiene mayor importancia
ya que hacerse rápidamente sin lesionar las células .
El semen así preparado tiene una duración de 3 a 4 días sin disminución de la fertilidad y
puede disminuir pasado este tiempo.
DILUYENTES PARA CONSERVACIÓN DEBAJO DE 0ºC.
Desde el descubrimiento del beneficio de ciertas sustancias como el glicerol para proteger a
los espermatozoides de muy bajas temperaturas se ha difundido el uso de semen congelado
que tiene la ventaja de consevar la fertilidad por mucho tiempo, aunque ésta disminuya algo
con el envejecimiento.
Se han desarrollado numerosas técnicas para la congelación de semen (fundamentalmente de
bovino ) y numerosas formas de presentación aunque todas responden a los mismo principios
de cambios fisicas y quimicos durante el proceso de congelado.
La fertilidad posterior del semen congelado depende de varios factores,como cuidados en la
dilución antes de la congelación,método de adición de la glicerina,tiempo de equilibración de
la glicerina,rapidez de congelación,formas y cuidados en la descongelación,etc,aunque los
métodos para la congelación de los espermatozoides son relativamente sencillos,se debe
proceder con cuidado para poder lograr la máxima fertilidad posible.
Cambios que ocurren durante la congelación y descongelación;Una gran cantidad de células
espermáticas mueren durante el proceso de congelación y descongelación.
La lesión está causada por 1-Formación de cristales de hielo en el interior de la célula. 2-
Concentración de soluto cuando sale el agua del medio. 3-Interación de estos dos factores.
Estas causas de deterioro celular están influenciados por la velocidad de
congelamiento,presión osmótica, pH, y nivel y tipo del crioprotector.
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En general se acepta que durante la congelación hay una formación de cristales pequeños de
hielo que al congelarse antes que el resto de la solución van desplazando al soluto y lo van
concentrando de manera que hay un cambio en la presión osmótica de partes de la solución y
esto hace que pueda provocar la salida de agua de la célula y aumento de la concentración de
solutos en el interior de la misma.
En contraste la congelación rápida no le da tiempo a la célula para la salida del agua
intracelular y se forman cristales en el interior de la misma que aparentemente produce
lesiones en las mebranas.
Hay evidencias que las membranas se encuentran comprometidas en la congelación de
espermatozoides sin glicerol, provocando lesiones a nivel de cuello, perdida o alteración de
membranas , perdida de lípidos y de enzimas celulares.
Crioprotectores; (Glicerol)
El glicerol es el patrón de las sustancias crioprotectores y la mayor parte de los
estudios realizados sobre crioprotección han sido con glicerol.
Se sostiene varias teorías sobre la función del glicerol pero aparentemente se une
con el agua disminuyendo su punto de congelación de manera que impide la
formación de cristales y con esto la concentración de solutos en algunos puntos de la
solución .
También se conoce que el glicerol penetra en las células y con esto impide la
formación de hielo intracelular.
Componentes de los diluyentes; Los componentes básicos de los diluyentes la
congelación de semen bovino son;
1-Agua
2-Sustancias disueltas para mantener presión osmótica y pH.
3-Azúcares simples como fuentes de energía .
4-Sustancias para impedir el choque por frío (yem - leche)
5-Agentes crioprotectores como glicerol o DMSO.
6-Antibioticos.
7-En algunos casos aditivos que pueden mejorar la fertilidad.
Métodos para la congelación de semen bovino; Existen varios métodos para la
congelación de semen bovino, que en general se diferencian según la forma de
presentación de semen congelado.
Hay tres formas básicas de presentación de semen congelado;
1-Pellets ó Pastillas.
2-Pajuelas (0, 5 ó 0, 25)
3-Ampollas.
1-Pellets; El medio de dilución utilizado generalmente para la congelación de semen
en forma de pastillas es el denominado NAGASE y NIWA y que tiene variantes
según las fuentes de energía que se utilicen o según el centro que las prepare.
La fórmula general es la siguientes;
-Azúcares que pueden ser
Rafinosa al 18,5 %
Lactosa al 11% 
de esta solución..........................73 a 75 ml.
-Yema de huevo......................... 20 ml.
-Glicerol......................................... 5 a7 ml.
-Penicilina G Na......................... 1000 UI / ml.
-Estreptomicina......................... 500 a 1000 mg / ml.
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 Preparación: 
Lo primero que se realiza es la preparación del azucar, que generalmente se usa lactosa osea
11 gm y cantidad s. p 100 ml de agua destilada esteril, esto se mezcla perfectamente hasta
que no queden restos de azúcar en suspención. - 
 Para esto se usa agitador mecanico, varilla de vidrio o mezclador a bolita.
Para un correcto y rapido mezclado se puede introducir el tubo con la solución en un
recipiente con agua a 75 – 80º C, y agitar alli la solución y una vez que esta perfectamente
disuelta se introduce el tubo en recipiente con agua a 5º C. Este cambio brusco de
temperatura es para terminar de disolver perfectamente el azucar. - 
 Esta solución se pude preparar uno o dos dias antes y se la puede
mantener en la heladera.-
 Luego se agrega la yema de huevo, procediendo como se vio
anteriomente es decir desinfectando la cascara y separando correctamente la yema, se agrega
a la solución de azúcar a una temperatura de 37- 38º C. y se mezcla perfectamente hata la
disolución de los globulos grasos, tratando de que no ingrese aire a la solución, para evitar
este efecto se puede hacer descansar la solución incluso de 12-14 hr. antes de ocuparla
teniendo la precaución de guardar en heladera.-
 Se agregan los antivioticos aunque ya puede hacerse en la solución de
azúcar. 
 La adición de glicerol puede hacerse de dos formas: 
-Variante 1-Se deja la mitad de diluyente a utilizar sin glicerol y a la mitad el doble
del porcentaje.P/ ejem: si utilizamos glicerol al 5 %, una mitad no tiene glicerol y la
otra mitad tiene 10%.
-Variante 2-Se coloca el total de glicerol que se pretende utilizar.
Procedimiento: 
 Una vez extraido el semen se coloca en un recipiente a 33-34º C y se
hase la evaluación correspondiente y se establese la tasa de dilución .
Hay que considerar que como por el proceso de congelado y descongelado hay una muerte
espermática del 50%, mas ó menos,se calcula le doble de lo necesario en cada dosis. 
Habitualmente se recomienda 25 a 30 millones de espermat. aptos en el momento del
congelado, de manera que en la redilución (descongelado) queden aprox. 12.5 a millones.-
Si bien la concreción por pastilla es de 25 a 30 millones de vivos en el momento del
comienso del procesamiento,en nuestro pais es habitual que se utilicen dosis mayores que
dependiedo del centro de I. A. de que se trate oscila los 40 a 50 millones o aun mas. 
Para calcular la dilución a realizar hay que tener en cuenta el volumen final de una pastilla es
de 0.1 ml, o sea que por cada ml de semen diluido se obtienen 10 pastillas. 
Teniedo en cuenta esto último, y si queremos trabajar con una dosis de 40 millones por
pastillas quiere decir que en cada ml de semen ya diluido debe haber 400 millones.
De acuerdo a esto último y de acuerdo a la concentración del semen en cuestión procedemos
a establecer la dilución, que generalmente va desde 1 parte de semen +1/2 parte de diluyente
hasta 1 parte de semen + 4 partes de diluyentes, aunque en casos de semen muy diluido ( con
baja conc. de espermatosoides por mm3 ) se prefiere desecharlo.-
Una ves obtenido el semen y mientras se evalúa y se calcula la dilución se coloca en un
recipiente con agua a 33-34 C y se comiensa a hacer descender la temperatura hasta llegar
a 26 - 28 C en aprox. 10.-
En este momento y si se trabaja con prediluyente (diluyente sin glicerol) se agrega de el
(prediluyente) la mitad del volumen, calculado, derramando el diluyente sobre el semen, a
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esta temperatura todavia hay movimientos espermático por lo que se mezcla solo, aunque si
es necesario se debe hacer algunos movientos suaves del tubo.-
Despues de haber agregado el prediluyente hay que enfriar al semen T  de 5º C, para esto se
coloca todo el recipiente que contiene el tubo con el semen en una fuente con agua a 4 - 6 en
la parte de abajo de una heladera, y debe llegar a 5º C, en aprox. 60’ a 90’ .-
Una vez que llegó a esa T  se procede a hacer la segunda dilución o dilución final
(diluyente con glicerol), en este momento a esta T  practicamente no hay movimientos
espermaticos, por lo que hay que hacer mivimientos suaves del tubo para que se mezcle
correctamente, esta segunda dilución conviene hacerla a la inversa, es decir derramando el
semen pre-diluido sobre el diluyente final.
En todas las mezclas que se hagan hay que tener en cuenta que semen y diluyente debe estar a
la misma temperatura para evitar choques frios.-
En caso de que se un solo tipo de diluyente (con glicerol), una vez extraido el semen se hace
una dilución con una pequeña parte de diluyente y luego se baja la T a 25 º C y ahi se
agrega el resto del diluyente y luego va a la heladera.-
Una vez que el semen llegó a 5º C se deja alli por un espacio de 3 a 4 horas, que es lo que se
llama periodo de EQUILIBRACIÓN,donde las celulas espermaticas toman contacto y se
adaptan al glicerol, de manera que el tiempo total es de alrededor de 5 a 6 horas .-
4- No necesita rediluyente. 5 - Evita manipuleo de semen desnudo. 6 - Al mas de 100 mm de
longitud permite controlar perfectamente el lugar de deposición por los inseminadores.-
Evidentemente tiene muchas ventajas pero entre las deventajas esta el costo de elavoración y
la poca practicidad para congelar ya que se necesita máquinas especificas para esta tarea.-
Diluyentes:
 Los diluyentes que se utilizan habitualmente son a base de leche que se puede
utilizar leche comun desnatada o diluyentes que vienen comercialmente en polbo como el
Laiciphos 478 que aparte de leche estan enriquecidas con azucares. Ademas lleba 10 a 15%
de yema de huebo y 7% de glicerol. 
Las pajuelas bienen obturadas de un extremo con el alcohol polivinilo que tiene la
particularidad que al humedecerse se forma un cierre hermetico.
Procedimiento:
 Una vez llegado el semen y evaluado cuando se calculo la tasa de
dilución, que para el caso de las pajuelas oscila en los 25 a 30 millones, se agrega el
prediluyente (3% de glicerol) y se comienza a hacer el descenso de la T , que en
aproximadamente 60' llega a 5º C, esto puede hacerse en heladera o en bitrina refrigerada
especifica para esta tarea.
A esta temperatura se agrega el diluyente final (11% de glicerol) y se deja estabilizar por
periodo de dos a cinco horas .
Una vez estabilizado se procede al llenado de las cajuelas, que pueden hacerse en foma
natural, colocando lotes de pajuelas, que puede hacerse en forma natural, colocando lotes de
pajuelas (20) en los peines de sujección y luego se hace la absorción con bomba de vacio, y
luego se le coloca en un extremo el polvo sellador, luego pasa por la maquina de sellado que
adiere firmemente el extremo de la pajuela, quedado una burbuja de aire para la expancion
del semen en el momento congelado.
Una vez hecho esto se coloca en la cajuelas en baqndejas especiales y se procede al
congelado sobre nitrogeno liquido.
En el caso de dilución final se aconseja hacerlo en dos partes con 15' de intervalo entre
ambas,prefiriendose las glicerolización lenta, es decir agregar el diluyente final por
goteo siempre manteniendo a 5º C.
Para hacer el control del semen congelado hay querediluir la pajuela, pasando
directamente del termo a un recipiente con agua caliente a 35 – 37º C, manteniendo alli
durante 1 minuto las pajuelas finas .
Luego de rediluida se seca perfectamente con un papel secante (papel higienico) y luego
sehace el corte.
Ampollas: (METODOLOGIA DE HANNOVER)
Diluyentes:
 A) Citrato de Na 2,88 g 
 Agua destilada 100 ml 75%
 Yema de huevo 25% 
 B)Citrato de Na 2,88 g
 Fructosa 3,50 g 60%
 Agua destilada 100 ml 
 Yema de huevo 25%
 Glicerol 15%
Procedimiento : 
 Una vez extraido y evaluado el semen se pone a 27º C durante 5'.-
Se coloca luego en otro BoMa de 23º C por 5', y se reaaliza la predilución con diluyente
A (50 % del diluyente total calculado) .-
Luego de unos minutos se agrega la fracción B.
Se fracciona en las ampollas de 1 ml con sellado inmediato de las mismas .
Luego se enfrian hasta 5º C a razón de a 1º C por minuto, una vez a 5º C se deja
equilibrar durante 6 a 25 horas .-
El congelado es lento sobre vapores de nitrogeno líquido .-
La redilución se hace a 5º C durante 5 minutos.-
Dosis: volumen de 1 ml con + de 30 millo0nes de espermatosoides por dosis.-
 B I B L I O G R A F I A 
1- salisbury,Van DE Mark;"fISIOLOGIA DE LA REPRODUCCIÓN E I.A. EN LOS
BOVINOS"EDICIÓN, ED.ACRIBIA, 1978, PAG:463- 504 - 518 Y 556
2- ROBERTS, S.J."OBSTETRICIA VETERINARIA Y PATOLOGÍA DE LA
REPRODUCCIÓN. TEROGENOLOGIA"1979.Ed.Hemisferio Sur. Pag:962- 972
3- DERIVAUX,J;"REPRODUCCIÓN DE ANIMALES DOMESTICOS"1976.
2EDICIÓN Edit. Acribia. Pag:202- 211
4- HOLY, LUBOS; "BASE BIOLOGICAS DE LA REPRODUCCIÓN
BOVINA"1983,EDIT.Diana. Pag:395-433.-
5- THE FRENCH PAILLETTE (TECNIQUE) Moderna Tecnica de I.A. con pajuelas
francesas. (revista del IMV-FRANCIA) (EN CÁTEDRA)
6- LEFEVRE,Edu8ardo; 1982; procedimientos y tecnicas para el manejo del semen
bovino congelado en el campo. Técnicas de descongelado de pastillas, pajuelas ,
ampollas, minitub y combipellets.- C.A.D.I.A. 1 JORNADAS NAC. DE STA FE.-
7- ESPER, Cesar; 1982, "viabilidad de semen de bovino, descongelado e rediluido,
mantido a 4º C e seu confronto com fertilidade belo horizonte (en catedra)
8- SAAKE, R ;1982;"WHAT HAPPENS WHEN FROZEN SEMEN 8 CONF.
NATIONAL ASOS. ANIMAL BREEDERS. 1982 (EN CATEDRA). 
	GUIA Nº 11
	CONSERVACION DE SEMEN
	1-Conservar la fertilidad
	Si bien se ha utilizado la motilidad como indicadora
	CARACTERISTICA DE LOS DILUYENTES
	4-TAMPON :
	A.- CHARLES NORMAN O LECHE DE COCO :(C.M.E.)
	IVT.-
	A.3-CORNELL UNIVERSITY EXTENDER (C.U.E.):
	Según algunos autores la temperatura ideal del CUE es de 20ºC .-
	B.-DILUYENTE PARA SEMEN REFRIGERADO :
	B-PHILLIPS O FOSFATO -YEMA (1939):
	CITRATO -YEMA :(1941):
	PROCESAMIENTO DEL SEMEN :
	La dilución que se aconseja con este diluyente va de 1:5 a 1:30 .-
	1ó2 minutos de manera que el descenso ................5º C lleva aproximadamente 90`
	DILUYENTES PARA CONSERVACIÓN DEBAJO DE 0ºC.
	Preparación:
	Procedimiento:
	Diluyentes:
	Procedimiento :