Ref_27_RevOutubro2013_Ref050214_Esp

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Finalidad .
Principio .
Caracteristicas del sistema .
Metodología .
Reactivos
1. -
2. -
3. -
4. -
Sistema enzimático colorimétrico para la determinación de
la Urea en muestras de sangre y orina por reacción de punto final.
La urea es hidrolizada por la ureasa a iones amoníaco y
CO . Los iones amoníaco reaccionan en pH alcalino con salicilato e
hipocloruro de sodio, bajo la acción catalizadora del nitroprusiato de
sodio para formar azul de indofenol.
La intensidad del color formado es proporcional a la cantidad de urea en la
muestra.
El sistema Urea CE Labtest
enzimático colorimétrico utiliza concentraciones optimas de reactivos y
principalmente la ureasa, permitiendo operar con cinética de orden cero
hasta una concentración de 300 mg/dL.
Se consigue obtener una banda dinámica bastante extensa, reduciéndose
acentuadamente la repetición de pruebas en valores elevados.
El método utiliza la técnica manual y es fácilmente aplicable en
analizadores semiautomáticos y automáticos capaces de pipetear dos
reactivos y medir con exactitud la absorbancia entre 580 y 620 nm.
Por todas estas razonesl, Urea CE Labtest es el método a ser escogido
cuando se desea utilizar una metodología enzimática colorimétrica para la
determinación de la urea.
Ureasa-Labtest.
Contiene tampón fosfato 10 mmol/L y ureasa 268 KU/L.
Contiene tampón fosfato 100 mmol/L pH 6,9, salicilato de sodio
312 mmol/L y nitroprusiato de sodio 16,8 mmol/L.
Contiene hidróxido de sodio 2,8 mol/L e hipoclorito de sodio 121 mmol/L.
Contiene azida sódica 7,7 mmol/L. Almacenar bien cerrado para evitar
evaporación.
Los reactivos no abiertos, cuando almacenados en las condiciones
indicadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo.
Durante su manipuleo están sujetos a contaminaciones de naturaleza
química y microbiana que pueden provocar reducción de la estabilidad.
2
Ureasa - Conservar entre 2 - 8 ºC.
Tampón - Estoque - Conservar entre 2 - 8 ºC.
Oxidante - Estoque - Conservar entre 2 - 8 ºC.
Estándar 70 mg/dL - Conservar entre 2 - 8 ºC.
≥
[Solamente para uso diagnóstico in vitro.]
No almacenar los reactivos en proximidad de soluciones de amoníaco.
Como el volumen de la muestra es pequeño, se debe pipetear
directamente en el fondo del tubo de ensayo realizando una medición
cuidadosa para minimizar problemas de imprecisión.
La contaminación del agua o de la vidriería y un ambiente con amoníaco
pueden producir resultados falsamente elevados. Evitar fumar próximo al
local de las dosificaciones.
Se deben aplicar cuidados habituales de seguridad en el manejo de los
reactivos.
El estándar de urea contiene azida sódica, que es tóxica. Se debe tomar
cuidado para evitar la ingestión y en caso de contacto con los ojos se
deben lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y procurar auxilio
médico. Utilizar grandes volúmenes de agua para deshacerse del
reactivo.
Los reactivos no abiertos, cuando almacenados en las condiciones
indicadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo.
Durante su manipuleo están sujetos a contaminaciones de naturaleza
química y microbiana que pueden provocar reducción de la estabilidad.
Baño maría mantenido a temperatura constante (37 ºC).
Fotómetro capaz de medir con exactitud la absorbancia entre 580 y
620 nm.
Pipetas para medir muestras y reactivos.
Medidor de tiempo en minutos.
Los niveles de urea en el suero o
plasma suben considerablemente después de ejercicios físicos y con la
edad.
En mujeres embarazadas, los niveles de urea en el suero y en la orina
bajan considerablemente.
La alimentación aumenta los niveles de urea en el suero o plasma,
principalmente en mujeres.
Para control terapéutico, es aconsejable recoger la muestra siempre en el
mismo horario debido a variaciones circadianas de la urea.
Material necesario y no suministrado
1.
2.
3.
4.
Influencias preanaliticas .
UREA CE
Instrucciones de Uso
Ref.: 27
01 Español - Ref.: 27
Precauciones y cuidados especiales
1
2
3
Se debe crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) que
establezca procedimientos adecuados para recogida, preparación y
almacenamiento de la muestra. Subrayamos que los errores debidos a la
muestra pueden ser bastante más grandes que los errores acaecidos
durante el procedimiento analítico.
Usar suero o plasma (fluoruro, oxalato, heparina, EDTA) y orina. No usar
anticoagulantes que contengan amoníaco. La concentración de fluoruro
en la muestra no debe ser más alta que 3 mg/mL ya que el fluoruro en
altas concentraciones es inhibidor de la ureasa.
El uso de anticoagulante Glistab de Labtest (Ref.: 29) permite la recogida
de una sola muestra para las dosificaciones de urea, glucosa y creatinina.
La urea es estable en el suero o plasma por 12 horas entre 15 - 25 ºC y
varios días entre 2 - 8 ºC. No utilizar muestras con señales de
contaminación microbiana.
La orina de 24 horas debe ser recogida en frasco conteniendo 2,0 mL de
HCI 50% y centrifugada antes de usar. No utilizar formol como
preservativo para la orina.
Como ninguna prueba conocida puede asegurar que muestras de sangre
no transmiten infecciones, todas deben ser consideradas como
potencialmente infectantes. Por lo cual, al manejarlas se debe seguir las
normativas establecidas para bioseguridad.
Para deshacerse de los reactivos y del material biológico sugerimos
aplicar las normativas locales, regionales o nacionales de protección
ambiental.
Valores de Bilirrubina de hasta 32 mg/dL, Hemoglobina hasta 80 mg/dL y
Triglicéridos hasta 900 mg/dL no producen interferencias significativas.
Valores de Hemoglobina más altos que 80 mg/dL y Triglicéridos más altos
que 900 mg/dL producen interferencias positivas que no pueden ser
minimizadas con el uso del blanco de la muestra.
Para evaluar la concentración aproximada de la hemoglobina en una
muestra hemolisada se puede proceder del modo expuesto a
continuación: Diluir 0,05 mL de la muestra en 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L
(0,85%) y medir la absorbancia en 405 ó 415 nm, ajustando el cero con
agua desionizada o destilada.
Hemoglobina(mg/dL) Absorbancia x 601
Hemoglobina(mg/dL) Absorbancia x 467
Ver observaciones 1 y 2.
Añadir el contenido del frasco nº 2 (100 mL) a 400 mL
de agua destilada o desionizada y mezclar. Estable 12 meses en frasco
ambar entre 2 - 8 ºC.
Añadir el contenido del frasco nº 3 (25 mL) a 475 mL
de agua destilada o desionizada y mezclar. Estable 12 meses en frasco
plástico entre 2 - 8 ºC.
≅
≅
405
415
Preparo de reactivos .
Tampón de Uso .
Oxidante de Uso .
El agua debe tener una resistividad 1 megaohm o una conductividad 1
microsiemens y concentración de silicatos <0,1 mg/L.
Añadir 1,0 mL de Ureasa (nº 1) a 20 mL del Tampón
de Uso. Estable 21 días en frasco de cristal ámbar entre 2 - 8 ºC.
No almacenar los reactivos en proximidad de soluciones de amoníaco.
Ver Precauciones y Cuidados Especiales.
Para la dosificación de urea en la orina diluir la muestra 1:50 (0,1 mL de
orina + 4,9 mL de agua destilada o desionizada). Multiplicar el resultado
obtenido por 50.
Disponer 3 tubos de ensayo y proceder como expuesto a continuación:
Mezclar e incubar a 37 ºC durante 5 minutos.
Mezclar e incubar a 37 ºC durante 5 minutos. Determinar las
absorbancias de la prueba y estándar en 600 nm (580 a 620), ajustando
el cero con el blanco. El color es estable 2 horas.
El procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros
cuyo volumen mínimo de solución para lectura es igual o más bajo que
2,0 mL. Se debe hacer una verificación de la necesidad de ajuste del
volumen para el fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y
reactivos pueden ser modificados proporcionalmente sin perjuicio para el
desempeño de la prueba y el procedimiento de cálculo se mantiene
inalterado. En caso de reducción de los volúmenes es fundamental que se
observe el volumen mínimo necesario para la lectura fotométrica.
Ver Linealidad.
Absorbancia de la prueba
mg/dL = x 70
Absorbanciadel estándar
Absorbancia de la prueba = 0,269
Absorbancia del estándar = 0,610
0,269
Urea (mg/dL) = x 70 = 31
0,610
Debido a la gran reproducibilidad que se puede obtener con la
metodología, se puede utilizar el método del factor.
≥ ≤
Ureasa Tamponada .
Calculos .
Ejemplo
Interferencias
02 Español - Ref.: 27
Procedimiento
Muestra
Oxidante de Uso
Blanco Prueba Estándar
1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
Muestra
Estándar (nº 4)
Urease Tamponada
Blanco
0,01 mL
Prueba Estándar
0,01 mL
1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
Intervalo de referencia .
Caracteristicas del desempeño
Exactitud .
Especificidad .
Sensibilidad metodológica .
Estos valores deben ser utilizados
únicamente a modo de orientación. Se recomienda que cada laboratório
establezca, en la población atendida, su propia banda de valores de
referencia.
(Todas las edades): 26 a 43 g/24 horas
Conversión: Unidades Convencionales (mg/dL) x 0,166 = Unidades SI
(mmol/L)
En dos muestras con concentraciones de Urea iguales a
20 y 50 mg/dL se añadieron cantidades distintas del analito obteniéndose
recuperaciones de entre 97 y 100%. El error sistemático proporcional
medio obtenido en un valor de 60 mg/dL fue igual a 0,9 mg/dL ó 1,5%.
El método propuesto fue comparado con un método
similar utilizando 40 muestras con valores situados entre 17 y 116 mg/dL.
La comparación resultó en la ecuación de la regresión: y = 1,147 +
0,973x y un coeficiente de correlación (r) igual a 0,998. El error
sistemático total (constante y proporcional) verificado en el nivel de
decisión (60 mg/dL) fue igual a 0,47 mg/dL ó 0,78%. Como las muestras
fueron seleccionadas aleatoriamente en pacientes de ambulatorio y
pacientes hospitalizados, se puede concluir que el método tiene una
especificidad metodológica adecuada.
Una muestra proteica que no
contenía urea fue utilizada para calcular el límite de detección del ensayo
habiendo sido encontrado un valor igual a 2,03 mg/dL, equivalente a la
media de 20 ensayos más dos desviaciones estándar. Utilizándose la
absorbancia del estándar como parámetro, se verificó que el límite de
detección fotométrica es de 0,11 mg/dL, correspondiendo a una
absorbancia igual a 0,001.
Orina .
8
70
Factor de calibración =
Absorbancia del estándar
mg/dL = Absorbancia de la prueba x Factor
70
Factor = = 114,8
0,610
Urea (mg/dL) = 0,269 x 114,8 = 31
mg/dL x volumen de 24 horas (mL)
Orina (mg/24 horas) =
100
Conversión de la urea en el orina para g/24h:
Urea (mg/24 horas)
Urea (g/24 horas) =
1000
El Estándar es trazable al Standard Reference Material
(SRM) 912a del National Institute of Standards and Technology (NIST).
Obtener semanalmente el factor de calibración.
Blanco de reactivos: agua o solución del NaCl 150 mmol/L (0,85%);
Estándar: usar calibradores proteicos. Las concentraciones de la Urea en
los calibradores de la línea Calibra de Labtest son trazables al SRM 912a
del NIST.
Se debe recalibrar el sistema en las siguientes situaciones:
Calibración de 2 o 3 puntos al cambiar el lote;
Calibración de 2 o 3 puntos cuando el control interno de la calidad indicar.
El resultado de la medición es lineal hasta 300 mg/dL. Cuando la
absorbancia de la prueba sea más alta que 1,0, diluir el producto teñido y
el blanco 1:5 con agua destilada o desionizada, hacer nueva lectura y
multiplicar el resultado obtenido por 5. Si después de la dilución se
obtiene un valor igual o más alto que 300 mg/dL, diluir la muestra con
NaCl 150 mmol/L (0,85 %), realizar nueva medición y multiplicar el
resultado obtenido por el factor de dilución. Diluir la muestra de tal modo
que el valor encontrado se sitúe entre 50 y 100 mg/dL.
El laboratorio debe mantener un
programa de control interno de calidad que defina con claridad los
reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para
especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones
correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados
para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. Se sugiere que
las especificaciones para el coeficiente de variación máximo y el error
total sean basados en los componentes de la variación biológica (VB) .
Ejemplo
Calibración .
Control interno de la calidad .
Calibraciones Manuales
Sistemas Automáticos
Intervalo de las calibraciones
5,7
03 Español - Ref.: 27
Linealidad
Suero o Plasma
Niños y Adolescentes6
Edad
1 día a 12 meses
1 a 13 años
mg/dL
2 a 34
8 a 36
Suero o Plasma
Adultos
Edad mg/dL
15 a 45
Media
24
60
DE
0,12
0,48
CV (%)
0,5
0,8
N
20
20Muestra 2
Muestra 1
Repetitividad - imprecisión intra-ensayo
Media
24
60
DE
0,30
0,57
CV (%)
1,3
0,9
N
20
20Muestra 2
Muestra 1
Reproducibilidad - imprecisión total
Efectos de la dilución de la matriz .
Observaciones
1.
2.
3.
Referencias
Dos muestras con valores
iguales a 74 y 264 mg/dL fueron utilizadas para evaluar la respuesta del
sistema en las diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/L (0,85%).
Usando factores de dilución que variaron de 2 a 16 se hallaron
recuperaciones de entre 99 y 108%.
La limpieza y el secado adecuados del material utilizado son factores
fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de
resultados correctos.
El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos
y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa
potencial de errores analíticos. El agua deionizada o destilada utilizada en
el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así,
para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en
enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad 1 megaohm.cm o
conductividad 1 microsiemens/cm y concentración de silicatos
<0,1 mg/L. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad
saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones,
silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que
deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los
resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer
un programa de control de la calidad del agua.
Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas
de interferencia en los resultados y en la metodología, se sugiere
consultar Young DS, ,Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 3a
edición, Washington: AACC Press, 1990.
1. Bergmeyer HU. Methods of Enzymatic Analisis, Tomo 9, pág. 449-453,
VCH Publishers, Florida, 1985.
2. Bollet WT, Bushman CJ, Tidwell PT. Anal Chem 1961;33:592-594.
3. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories. Diagnostic Reagents
Division, Ontario, 1970.
4. Weatherburn MW. Anal Chem 1967;39:971-974.
5. http://www.westgard.com/biodatabase1.htm (acesso em 25/10/07)
6. Soldin SJ, Brugnara C, Wong EC: Pediatric Reference Ranges, 5a.
edição, Washington: AACC Press, 2005:195-196.
7. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular,
Base de Da tos de Var i ac ión B io lóg ica . D ispon íve l
em:<http://www.seqc.es/ar t ic le/ar t ic leview/330/1/170>
(acesso em 04/2006).
8. Labtest: Datos de Archivo.
≥
≤
*El número de pruebas en aplicaciones automáticas
Están disponibles aplicaciones
garantiza el desempeño de este producto dentro de
sus especificaciones hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos,
siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en
los rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente.
depende de los
parámetros de programación.
para sistemas automáticos.
[Términos y Condiciones de Garantía]
Labtest Diagnóstica
Informaciones al consumidor
04 Español - Ref.: 27
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
Labtest Diagnóstica S.A.
Servicio de Apoyo al Consumidor e-mail: sac@labtest.com.br
Revisión: Octubre, 2013
Ref.: 050214
Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
Reproducción bajo previa autorización
PresentaciónProducto Referencia Contenido
27-500Ureia CE
1 x 100 mL
1 x 25 mL
1 x 25 mL1
1 x 3 mL
2
3
05 Español - Ref.: 27
06 Español - Ref.: 27
Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro
Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro
Symbols used with ivd devices
Representante Autorizado na Comunidade Europeia
Representante autorizado en la Comunidad Europea
Authorized Representative in the European Community
Conteúdo suficiente para < n > testes
C
C
ontenido suficiente para < n > tests
ontains sufficient for < n > tests
Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa)
Estable hasta
Use by
(aaaa-mm-dd o mm/aaaa)
(yyyy-mm-dd or mm/yyyy)
Limite de temperatura (conservar a)
Temperatura limite
Temperature limitation
(conservar a)
(store at)
Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material
Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material
Consultar instruções de uso
Consultar instrucciones de uso
Consult instructions for use
Adições ou alterações significativas
Cambios o suplementos significativos
Significant additions or changes
Liofilizado
Liofilizado
Lyophilized
Produto diagnóstico in vitro
Dispositivo de diagnóstico in vitro
In vitro diagnostic device
Número do catálogo
Número de catálogo
Catalog Number
Ref.: 201112
Corrosivo
Corrosivo
Corrosive
Controle negativo
Control negativo
Negative control
Controle positivo
Control positivo
Positive control
Controle
Control
Control
Controle
Control
Control
Marca CE
Marcado CE
CE Mark
Tóxico
Tóxico
Poison
Reagente
Reactivo
Reagent
Número do lote
Denominación de lote
Batch code
Risco biológico
Riesgo biológico
Biological risk
Fabricado por
Elaborado por
Manufactured by
Período após abertura
Período post-abertura
Period after-opening