Citopatologia ginecólogica

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Prólogo 
 
 El presente EBOOK titulado 
“Histotecnologia Tomo II” en su 
volumen 01 es un material 
educativo que tiene como 
propósito el poder reforzar los 
conocimientos de los estudiantes 
participantes del Programa 
“HISTOTECNOLOGIA” impartido 
bajo modalidad a distancia. Es 
creado por la Msc. Daiglys García 
CEO de CITORUSHTC 
|Citotecnólogo Venezolana el día 
13 de junio de 2023, con mi 
propio método de aprendizaje 
constructivista. Es importante destacar que el presente material didáctico 
se realizó utilizando como soporte la “Neurociencia Educativa” que sin 
lugar a dudas forma parte de todo el ecosistema instruccional creado para 
fomentar un aprendizaje idóneo en los estudiantes participantes del 
presente curso virtual. 
Msc. Daiglys Carolina García Carreño 
CEO|FUNDADORA CITORUSHTC 
Lima, Perú 2023. 
 
 
 
www.citorushtc.com 
 
Técnicas histológicas 
 Fijación. 
 Lavado. 
 Inclusión. 
 Confección de los bloques. 
 Coloración (deshidratación y aclaramiento). 
 Montaje de la preparación. 
 Almacenamiento. 
Fijación 
 Es fundamental para cualquier estudio histológico o histopatológico. 
Este proceso puede causar artefactos o alteraciones moleculares y 
estructurales en los tejidos. 
 La fijación tisular está muy relacionada con las técnicas de tinción. 
Por esto, se necesita preservar las estructuras antes de la tinción del 
tejido. La fijación, la deshidratación, el aclaramiento y la inclusión tienen 
sus consecuencias sobre el producto final. En el proceso de preparación 
del tejido el mayor impacto viene dado por las sustancias químicas que 
se usan en la fijación para la desnaturalización de las proteínas. 
 Los tejidos frescos presentan gran avidez por los colorantes. Los 
fijadores aumentan la avidez en mayor o menor grado por los colorantes. 
 El líquido fijador se utiliza de forma abundante, de 39 a 40 veces el 
volumen de la pieza; para ello se usan frascos de fondo ancho y con cierre 
hermético. La pieza se sumergirá en el fijador y no al revés. 
 El proceso de fijación se realiza a la temperatura del laboratorio. Al 
terminar la fijación, la pieza se somete a lavado. 
Lavado 
Algunos fijadores presentan un efecto nocivo impidiendo el 
desarrollo óptimo del proceso de inclusión o coloración. Estos 
inconvenientes se solucionan lavando las piezas una vez terminada la 
fijación. Después de la fijación en formalina es necesario un lavado en 
agua prolongado; para ello se colocan las piezas de pequeño tamaño en 
una gasa para que no se pierdan. 
Descalcificacion 
Es un proceso químico que elimina las sales del calcio presente en 
los tejidos para facilitar el estudio. Los tejidos calcificados presentan gran 
dureza y debido a esto se extraen las sales cálcicas para que se puedan 
realizar cortes finos para su observación microscópica. Sin embargo, 
mediante la descalcificación se pierden muchas de las características 
óseas. Para estudiarlas se procede a técnicas especiales de infiltración. 
 
Inclusión 
Para obtener cortes finos y uniformes es necesario que las piezas 
adquieran una dureza determinada y homogeneidad. El material 
congelado no reúne en su totalidad estas características y por esto se 
impregnan a los tejidos con un medio de inclusión líquido que cuando se 
estabiliza se vuelve consistente y homogéneo. En su transcurso se 
deposita el medio de inclusión en todos los lugares donde exista agua o 
donde el agua pueda ser extraída. Los medios de inclusión solubles en 
agua difunden esta agua tisular y luego se solidifican. Si el medio es 
insoluble en agua será necesario extraer esta y luego sustituirla por el 
solvente adecuado al medio de inclusión que se utilice. 
La inclusión puede realizarse de: 
Forma manual:en des uso.Sin embargo, aún se utilizan en muestras 
de piezas quirúrgicas completas o muestras muy delicadas. 
Forma automática: estos procesadores contienen múltiples vasos 
para realizar los baños y un sistema mecánico de transporte a través de 
ellos regulados por un programador horario. Estos procesadores permiten 
procesar simultáneamente un número elevado de muestras, 
economizando el gasto delos líquidos y realizando un rápido 
procesamiento a lo largo de la tarde- noche del día de recepción y 
muestreo de las piezas que están dispuestas para ser encastradas y 
seccionadas en la siguiente jornada de trabajo. 
Sistema depresión negativa:en este métodose aplicalos baños de 
parafina, a través de un sistema de extracción de gases por una bomba 
de vacío regulada a presión entre 400 a 500 mm de Hg para eliminar las 
vacuolas de los tejidos y extraer rápidamente los restos del agente 
aclarante, facilitando su vaporización. 
Confección de los bloques 
Consiste en la obtención de un bloque sólido de tejido, más medio 
de inclusión mediante el enfriamiento lento a 10-15oC. El objetivo es 
obtener un bloque fácil de manejar, de dureza homogénea y elasticidad 
adecuada que permitan realizar cortes de calidad sin fragmentación de 
las estructuras. 
Para realizar estos bloques se utilizan las estaciones de inclusión, 
que constan de un dispensador de parafina líquida, placa caliente para la 
orientación de las piezas y placa fría para la solidificación del bloque. 
Orientación de la pieza: el material infiltrado se coloca en la posición 
adecuada al tipo de corte que se desea realizar, teniendo en cuenta que 
en la cara inferior del bloque será la superficie de corte. Esta posición será 
determinada antes del procesamiento de la muestra, para ello la cara 
opuesta a la del corte deberá ser marcada con tinta china durante la 
prosección. 
Moldes: son moldes de base metálica. En el fondo de los moldes 
será de tamaño variable, debiéndose ajustar a las piezas que se van a 
incluir en ellos: dentro encajan perfectamente los cassettes que llevan la 
muestra histológica y su identificación, facilitando la confección de un 
bloque único que no precisa ningún tipo especial de montaje sobre el 
portabloques del micrótomo. 
Tratamiento de los cortes previos a la coloración 
Para una correcta penetración de los colorantes hay que extraer 
previamente el medio de inclusión sobre los cortes de tejidos incluidos en 
parafina. Este procedimiento no es necesario en los cortes infiltrados en 
celoidina, ni en los cortes criostáticos. 
La desparafinación se consigue sometiendo a los cortes a tres baños 
consecutivos de xileno de 10 minutos de duración cada uno. El xileno no 
es miscible con el agua y por ello debe ser eliminado en dos baños 
sucesivos de etanol absoluto, seguidos por una rehidratación en baños 
sucesivos de alcohol etílico a concentraciones decrecientes (96o, 80o, 70 
y 40%) de 1-2 minutos cada uno. 
Para extraer celoidina se utiliza con alcohol-éter al 50% para 
realizar luego la rehidratación. 
Tratamiento de los cortes después de la coloración 
Una vez finalizada la coloración, han de ser de nuevo deshidratados 
y aclarados para conseguir la conservación definitiva de las preparaciones 
histológicas y facilitar la observación microscópica. 
La deshidratación se realizará a través de baños sucesivos de 
alcohol etílico de creciente graduación (70, 80, 96 y 100%). 
El aclaramiento de las preparaciones les confiere una refringencia 
homogénea al realizar la sustitución del agente deshidratante por un 
líquido anhidro de elevada refringencia. Puede realizarse con cualquier 
agente aclarante de los empleados para la inclusión. Cuando las 
preparaciones han sido teñidas con colorantes de anilina, el aclaramiento 
en xileno está contraindicado, pues solubiliza el colorante. 
Para el manejo y transporte de las secciones de un baño a otro se 
utilizan contenedores especiales para múltiples preparaciones: cubetas 
verticales provistas de hendiduras laterales para alojar cada preparación 
(jarra de Coplin) o cestillas de vidrio que se introducen en cubetas de 
igual tamaño (cristalizador de Schiefferdecker)y que se disponen 
contiguamente para las baterías de tinción. 
La batería más utilizada es la de Hematoxilina-Eosina donde en 
primer lugar se disponen las cubetas para la desparafinación, seguida de 
las de hidratación de alcoholes decreciente, la de tinción con el colorante 
básico de hematoxilina, las de lavado de diferenciación, las de coloración 
con el colorante citoplasmático (eosina) y las de los baños de 
deshidratación y aclaramiento. 
Realizado el aclaramiento de las preparaciones se procede al 
montaje definitivo. Para ello se interpone, entre el porta y el cubre de 
tamaño equivalente a la sección un medio de montaje que evite el 
contacto de la preparación con el aire ambiental. Dependiendo de si ha 
sido posible o no realizar la deshidratación y aclaramiento estándar, debe 
optarse por el medio de montaje cuyo índice de refracción esté más 
próximo al del líquido que impregne al corte. 
Para el montaje de preparaciones deshidratadas se emplean 
pegamentos sintéticos. 
4. Fijación; preparación de diluciones y mezclas 
Fundamentos del proceso de fijación tisular. Principios generales de 
la fijación tisular 
La fijación tisular consiste en interrumpir los procesos degradativos 
que aparecen tras la muerte celular, tratando de conservar la arquitectura 
y composición de los tejidos lo más próxima a la normalidad. La fijación 
debe ser inmediata. 
 
La fijación proporciona una imagen estática: 
Imagen real: es la imagen que tenía el tejido cuando estaba vivo. 
Imagen equivalente: es la que se obtiene después de la 
manipulación y que comprende la fijación, inclusión, corte y coloración. 
La finalidad de la técnica histológica es conseguir la mayor similitud 
entre la imagen real y la equivalente. La imagen equivalente debe cumplir 
dos requisitos: 
Constancia:la imagen equivalente ha de observarse en todos los 
tejidos idénticos obtenidos de distintos individuos de una misma especie 
animal. 
Reproductibilidad:en todas las preparaciones histológicas obtenidas 
a partir de dichos tejidos, independientemente del proceso de fijación 
empleado. 
Principios generales de la fijación: 
No existe método universal de fijación. Un fijador adecuado para un 
tejido puede no serlo para otro. 
No todos los fijadores conservan indefinidamente el tejido. 
Un defecto de fijación jamás puede ser corregido. 
Es inútil realizar un estudio histológico sobre material con graves 
defectos de fijación. 
Se distinguen dos tipos de fijadores: 
Fijación inicial o primaria:la realizada de formai nmediata sobre el 
tejido fresco. 
Refijación o fijación secundaria:se realiza con un segundo fijador 
para algunas estructuras especiales o simplemente para intensificar la 
fijación inicial. 
Características de un fijador ideal 
Que tenga capacidad de bloquear la autólisis inmediatamente. Esto 
va a depender de su poder para producir la desnaturalización o floculación 
proteica, de manera que la actividad enzimática de tejido se paralice. 
Que posea efecto microbicida, impidiendo la acción bacteriana, la 
provoca degradación del tejido. 
Que no provoque retracciones o distorsiones que determinan 
alteraciones en su arquitectura. 
Inducción en la textura y composición tisular que favorezcan la 
inclusión, el corte y la coloración del material histológico. 
Se denomina velocidad de penetración a la rapidez con la que un 
fijador se difunde en el interior de un tejido. La velocidad de penetración 
depende de las cualidades del fijador, y condiciona el proceso de fijación. 
El tamaño de la pieza que se ha de fijar deberá ser directamente 
proporcional a la velocidad de penetración del fijador. 
La velocidad de fijación de un agente químico no siempre está en 
concordancia con su velocidad de penetración. Esto es debido a que el 
proceso de fijación es un proceso químico determinado por el tiempo que 
cada fijador tarda en precipitar y estabilizar los componentes químicos del 
tejido. 
Los agentes fijadores más utilizados son: 
 Alcohol. 
 Acetona. 
 Formalina. 
Tienen una velocidad de penetración de 0.9 mm/h 
 Ácido pícrico, con una velocidad de penetración de 0.3mm/h 
 
La fijación es la tapa esencial de la técnica histológica y se basa en 
dos principios fundamentales: 
 La rapidez. 
 La velocidad de penetración del fijador. 
Principios teóricos 
Fijar un tejido consiste en conservarlo lo más parecido posible a sus 
condiciones normales; para ello debemos: 
 Proteger lo del ataque bacteriano. 
 Evitar su autólisis. 
 Insolubilizar los constituyentes celulares. 
 Evitar distorsiones y retracciones. 
 Preparar las estructuras para posteriores tratamientos. Velocidad 
de penetración y velocidad de fijación 
La velocidad de penetración disminuye progresivamente a partir del 
momento en que se sumerge la pieza en el fijador. 
Para determinar la profundidad de penetración del fijador, 
expresada en mm, basta multiplicar un coeficiente de penetración llamado 
K por el tiempo de activación del fijador expresado en horas que se llama 
T. 
 𝑬𝒎𝒎= profundidad en mm. T=tiempo. 
 K=coeficientedepenetración. El coeficiente K: 
 Solución acuosa de formol al 4%;K=1. 
 Solución de alcohol de 96o;K=1. 
El volumen de fijador tiene que ser de 10-20 veces el de la pieza a 
fijar. 
Preparación de la pieza para la fijación 
Los tejidos de los cadáveres pueden destruirse, por lo que hay que 
meterlos en una bolsa para cogerlos y luego fijarlos. Debemos tomar 
precauciones a fin de evitar: 
 Autólisis. 
 Presión, hay que tener cuidado con las pinzas para que no se 
deforme la pieza. 
 Deshidratación, hay que meter los tejidos en el frigorífico en una 
bolsa y las sustancias con moco hay que lavarlas con agua antes de 
sumergirla en fijador. 
Reglas generales a considerar en el empleo de líquidos fijadores 
 Rapidez a colocar el líquido fijador. 
 El tejido debe estar seccionado en láminas de 0.5mm. 
 La relación del fijadores de 1/20, es decir 1:20 en volumen. 
 La presión osmótica del fijador y de la pieza deben ser lo más 
parecidas. Si es necesario se compensará la presión osmótica del fijador 
utilizado soluciones salinas. 
 El pH debe ser igual al suero fisiológico. 
 Tiempo específico de cada fijador. Cuando queremos parar el 
tiempo de fijación o vamos a seguir con los otros procesos, se realiza un 
lavado posfijación para que: 
 El límite de tiempo para que el fijador esté en contacto con la 
piezas. 
 El líquido fijador no entre en contacto con los líquidos de 
inclusión. 
 Asegurarnos de la detección de la fijación. 
Para utilizar los fijadores que contienen ácido crómico, dicromáticos 
o ácidos ósmico debemos realizar el lavado de los tejidos con abundante 
agua corriente y con mucho cuidado. Este lavado debe durar un tiempo 
máximo de 48 horas. 
El lavado posfijación se realiza con inmovilización de las piezas con 
una muñequilla de gasa en el fondo de un embudo y dejar caer 1 litro de 
agua. 
Cuando los fijadores contienen ácido pícrico, ácido tricloroacético o 
alcohol no se puede realizar el lavado posfijación con agua, porque hincha 
las fibras de colágeno y produce deformaciones. En este caso el lavado se 
hace con alcohol de 50o, con 3 baños sucesivos de una duración de 30 
minutos a 1 hora y a partir de aquí se confunde ya con la deshidratación. 
Clases de agentes fijadores según su mecanismo de acción 
Se clasifican en: 
Fijadores por métodos físicos: congelación, detiene la autólisis y la 
putrefacción. 
Fijadores por métodos químicos: actúan desnaturalizando las 
proteínas e insolubilizándolas. Bloquean la autólisis por inactivación 
enzimática y tienen un efecto bactericida. 
Fijadores por métodos físicos 
Se utilizan para estudios morfológicos y funcionales, en los que se 
quiera mantener intacta la estructura antigénica del tejido. Debe ser 
rápida. La congelación también tiene que serlo, porque si no podrían 
formarse criocristales dentro del tejido y romperlo.El procedimiento idóneo para fijar tejidos por congelación consiste 
en utilizar isopentano -50oC como agente de congelación y realizar una 
fragmentación suficiente de la muestra que se vaya a congelar. El 
inconveniente que presentan es que estos bloques no deben tener más 
de 3 𝒄𝒎𝟑 de superficie por 3 mm de grosor. De esta forma el proceso de 
congelación no llega a durar más de 10 segundos, así se evita la formación 
de cristales de hielo en el interior del tejido y es posible conservar la 
muestra indefinidamente. 
Inconvenientes 
Se debe mantener en un congelador programado a -70oC para 
compensar la subida de temperatura que se produce al extraerse del 
congelador. 
Criodesecación o liofilización 
Método en consiste en la extracción de agua por frio, se realiza 
sometiendo el tejido a dos manipulaciones: 
Fijación instantánea por congelación con nitrógeno líquido. 
Desecación por sublimación directa del agua congelada a vapor en 
una bomba de vacío. 
Este sistema se utiliza para la conservación y fijación de sustancias 
difusibles intratisulares. 
Criosustitución 
Se fundamenta en el cambio lento y progresivo del agua de un tejido 
por un líquido fijador, que en ocasiones puede actuar simultáneamente 
como medio de inclusión; para ello, tras la congelación instantánea de 
tejido con nitrógeno líquido o isopentano a -50oC se coloca este en un 
medio de sustitución formado por OH etílico, acetona y propilenglicol 
enfriado a -40oC. 
El intercambio del agua tisular por el líquido de sustitución debe 
realizarse dentro de un congelador para mantener esta temperatura. 
Líquidos fijadores simples por métodos químicos 
Líquidos fijadores por deshidratación tisular 
El proceso de desnaturalización de la proteínas es eliminar el agua 
libre y el agua ligado a proteínas, provocando alteraciones en la 
organización y en la estructura celular y tisular. Es por ello que estos 
fijadores provocan grandes cambios en la morfología orgánica, sobre todo 
si se emplean aislados. Otros sin embargo alteran muy poco la estructura 
antigénica celular. 
Actúan sobre los hidratos de carbono obteniéndose una 
conservación completa; sobre las grasas se obtiene una disolución parcial. 
Alcohol etílico 
Líquido transparente, volátil, infamable y de olor agradable. 
 
 
Acetona 
Líquido transparente, inflamable, volátil y de olor dulzón. Líquidos 
fijadores por cambios en el estado coloidal de las proteínas. 
Las proteínas son sustancias anfóteras, que no pueden reaccionar 
como ácido o como base. Su punto isoeléctrico es de alrededor de un pH 
DE 5,8. En este punto la estabilidad de las moléculas es mínima y su 
disociación máxima. Esta escasa estabilidad se debe a que las proteínas 
en este punto se desprenden del agua ligada. Es por ello que las 
soluciones coloidales precipitan en presencia de determinados ácidos que 
disminuyen el pH de la disolución hasta alcanzar el punto isoeléctrico de 
las moléculas en disolución coloidal. 
Los fijadores contemplados en este grupo son de carácter ácido y 
se emplean formando parte de mezclas fijadoras y presentan gran 
velocidad de penetración de los tejidos y algún poder descalcificante. 
Ácido acético 
Líquido transparente y de olor avinagrado. Por debajo de los 10oC, 
se solidifica en forma de agujas cristalizadas muy cáusticas. Ácido 
tricloroacético 
 
Se presenta en forma de cristales incoloros solubles muy cáusticos. 
Ácido tricloroacético 
Se presenta en forma de cristales incoloros solubles muy cáusticos. 
Ácido crómico 
Fijadores que actúan por formación de sales con los tejidos 
El fijador es un catión metálico y forma con el tejido proteinatos 
metálicos o picuatos. Tienen gran velocidad de fijación, ya que la 
formación de sal se produce instantáneamente. Al formarse los 
proteinatos son un obstáculo mecánico, que dificulta la penetración del 
fijador. La precipitación metálica sobre el tejido produce endurecimiento 
de los tejidos, lo que obliga a emplearlo en mezclas fijadoras que 
disminuyan este efecto. 
 
Cloruro mercúrico o sublimado 
Se comercializa como un polvo blanco muy tóxico. El efecto de 
fijación se consigue por combinación de iones de mercurio con los grupos 
ácidos de las proteínas; el carboxilo (-COOH), hidróxido (-OH) y residuos 
fosfóricos de las nucleoproteínas. 
Se utiliza en solución saturada acuosa. 
Dicromato potásico 
Polvo rojo amarillento con gran poder oxidante, que reacciona con 
las proteínas para formar cromatos. Se utiliza en disolución acuosa al 1-
2% de concentración y formando parte de mezclas fijadoras en las que el 
ion cromo forma complejos con el agua. Tiene un pH de actuación por 
debajo 4,4. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Continuara… 
 
 
 
 
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