TEMA 3

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Prof. Rafael Mejias
+584124363476
Capacidad biocontroladora de 
Trichoderma sp y su calidad
MODULO III
EVALUACIÓN in vitro
• Confrontaciones Trichoderma vs Fitopatógenos
• Porcentaje de Inhibición del Crecimiento
• Porcentaje de inhibición de la Esporulación 
MODULO IV
CONTROL DE CALIDAD
• Identificación
• Concentración de inóculo
• Viabilidad
• Pureza
• Patogenicidad
• Conservación - patogenicidad
Identificación de Trichoderma spp en el tiempo
https://www.trichokey.com/
https://www.trichokey.com/
Un comportamiento similar ocurre con T. asperellum , donde ya se ha descrito y validado una 
especie críptica llamada T. asperelloides utilizando la secuenciación de dos genes más (tef1 y rpb2). 
Crisis de identidad de Trichoderma
El hecho más emblemático es el cambio en la cepa de Trichoderma T-22, la más 
estudiada en el mundo, de T. harzianum a la nueva especie T. afroharzianum
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T. guizhouense
Trichoderma koningii
Trichoderma harzianum
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Polifásica para la identificación de Trichoderma spp
La correcta identificación, a través de la conjunción de 
diferentes técnicas
La descripción de especies de Trichoderma se hace uso de la 
combinación de métodos culturales, morfológicos, 
fisiológicos, perfiles isoenzimático, moleculares.
La muestra debe ser enviada para su análisis en paquete
sellado comercial que contenga la siguiente información
• Formulación
• Concentración del ingrediente activo
• Número de lote
• Fecha de fabricación
• Fecha de caducidad
• Nombre del producto
• Nombre de la empresa
• Responsable técnico
• Ingrediente activo inerte
• Forma de almacenamiento. 
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Capacidad de germinación de los conidios en los formulados
Germinación
Germinación
Capacidad de germinación de los conidios en los formulados
Germinación
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Este es un método cuantitativo en que el resultado es
expresado en número de conidios por masa o volumen de
producto biológico formulado. Tiene como base la
preparación de suspensión de conidios de Trichoderma y
conteo de número de conidios con ayuda de una Cámara
Neubauer (hemacitómetro) en microscopio óptico.
Concentración
QUE SE DEBE TOMAR EN CUENTA 
PARA NO TENER FALSOS 
RESULTADOS
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1. AÑADIR UN DISPERSANTE DE ESPORAS (TWWEN 80 AL 0,1%)
2.VÓRTEX (TOMAR EN LOS 10¨)
3. CAPILARIDAD
4. BURBUJA
5.10 µL
6.REPOSAR
7.MÍNIMO 3 REPETICIONES / 6 LECTURAS
Nuestra aliada Cámara de Neubauer
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Nuestra aliada Cámara de Neubauer
10-4
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Qué cuadrante se va 
a utilizar…?
Por cuál factor se 
debe multiplicar..?
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https://www.cnpma.embrapa.br/forms/calibra.php3 (Productos y servicios – softwares).
https://www.cnpma.embrapa.br/forms/calibra.php3
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UFC/g
Cálculos 
UFC/mL
CM= C * F.C * D GM= (CM * B)/ G
PUREZA
Incubación 
PUREZA
• Se evaluar el número de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) 
• Se identifican los microorganismos contaminantes
Hongo en estudio
Contaminantes
Hasta un 10% de contaminantes.
Hasta un 5% de contaminantes.
BAJO NINGUN CONCEPTO patógenos de plantas o de humanos
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Efectividad de Trichoderma en condiciones de
laboratorio
Método de confrontación dual
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CONFRONTACIÓN TESTIGO
PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO
Método de papel de celofán
Sustancias tóxicas que difunden al medio de cultivo
Método de papel de celofán
Método de placas super puesta
Método de placas super puesta
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Efectividad de Trichoderma en condiciones de
laboratorio
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QUE CRITERIO TOMAR EN EL PIC PARA DECIR QUE UNA CEPA DE
Trichoderma spp TIENE ALTOS POTENCIALES DE BIOCOTROL AL
PATÓGENO QUE SE ESTA EVALUANDO
> 70 % DE INHIBICIÓN
PIC= 7 cm – 2 cm 
7 cm
x 100 = 71,42%
53% 71,42%
INHIBICIÓN DE LA ESPORULACIÓN
Conservación
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Conservación
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Conservación
SUBCULTIVOS
OTRAS CONSIDERACIONES
• Tolerancia a sales
• pH
• Periodo de caducidad
• Compatibilidad 
PARADA