RodriguezHernandezVanessa

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Universidad Veracruzana 
 
 
Región Xalapa 
 
 
Maestría en Ciencias de la Salud 
 
“Efecto de la curcumina en la respuesta inmune 
antitumoral contra el linfoma BCL1” 
 
 
Tesis para obtener el grado de Maestra en 
Ciencias de la Salud 
 
 
Presenta: 
Vanessa Rodríguez Hernández 
 
Director: 
Dr. en C. Juan Carlos Rodríguez Alba 
 
Codirectora: 
Dra. en C. Gabriela López Herrera 
 
 Julio de 2022 
 
“Lis de Veracruz: Arte, Ciencia, Luz” 
 
 
 
Universidad Veracruzana 
 
Universidad Veracruzana 
Región Xalapa 
 
Maestría en Ciencias de la Salud 
 
“Efecto de la Curcumina en la respuesta inmune 
antitumoral contra el linfoma BCL1” 
 
Tesis para obtener el grado de Maestra en 
Ciencias de la Salud 
 
Presenta: 
Vanessa Rodríguez Hernández 
 
Director: 
Dr. en C. Juan Carlos Rodríguez Alba 
 
Co director: 
Dra. en C. Gabriela López Herrera 
 
 
Asesores: 
Dr. en C. Fabio Alfredo García García 
Dra. en C. Claudia Haydée González de la 
Rosa 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
2 
 
Financiamiento 
 
 
El presente trabajo de tesis se desarrolló con el apoyo de la Maestría en Ciencias de la Salud 
y el financiamiento del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT) al proyecto 
# A1-S-26657 “Evaluación de la participación de LRBA (Lipopolysaccharide) (LPS)-
responsive and beige-like anchor protein) en el cambio de isotipo en linfocitos B humanos”, 
otorgado a la beneficiaria Dra.Gabriela López Herrera adscrita en el Instituto Nacional de 
Pediatría. Asimismo, a la beca proporcionada por CONACYT con el número de apoyo 
784840 y CVU 1079848 otorgado a Vanessa Rodríguez Hernández. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Dedicatoria 
 
 
 
A mis padres, Victor Rodríguez Navarro y María del Consuelo Hernández Villa, quienes me 
han demostrado el significado del amor incondicional y ser en conjunto el cohete que me ha 
impulsado para llegar hasta este punto de la vida, no dejándome caer jamás. Les debo todo 
lo que soy. Son los mejores padres que la vida me pudo dar. Gracias por criarme con mucho 
amor y enseñarme el valor de la dignidad. 
 
A mi hermana Michelle Stephany Rodríguez Hernández, gracias por todo el apoyo moral y 
tus palabras de aliento hacia mi persona, además de hacerme reír constantemente. Nunca 
dudes que podrás contar conmigo infinitamente. 
 
A Mario Edmundo Ballados González, mi musa, que me inspira a ser mejor todos los días. 
Eres lo más bello y el más auténtico y divertido. No me alcanzarían las palabras para expresar 
todo lo que siento por ti. Gracias por tu amor, tu apoyo, tu comprensión, tus abrazos, por 
creer en mí y sostener mi mano todos los días. Tu calidad humana es suprema y eso me ha 
convertido en la mujer que siempre quise ser. Ver tu rostro y hablar contigo era esa bocanada 
de aire fresco que necesitaba todos los días. Nadie es como tú. Me haces muy feliz y el amor 
que siento por ti regocija mucho mi corazón. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Agradecimientos 
 
A la Universidad Veracruzana, por ser mi alma máter y una institución de calidad. De igual 
manera, al Instituto de Ciencias de la Salud y a todo su personal e investigadores por mi 
formación académica en la maestría. 
A mi director de tesis, el Dr. Juan Carlos Rodríguez Alba, por abrirme las puertas de su 
laboratorio para la realización de la maestría. Asimismo, agradezco su tiempo, consejos, 
criticas, regaños y sugerencias que en conjunto fueron la guía en toda mi estancia de maestría. 
A mi codirectora de tesis, la Dra. Gabriela López Herrera, por su apoyo hacia la Unidad de 
Citometría de Flujo y a este proyecto en particular. Gracias por ayudarme y enriquecer mi 
formación académica con sus preguntas y observaciones. 
A mis asesores, la Dra. Claudia Haydée González de la Rosa y el Dr. Fabio Alfredo García 
García, por sus preguntas y aportaciones al proyecto que le dieron sentido y dirección, 
además de fomentar mi pensamiento crítico. 
A la Dra. Marilú Domínguez Pantoja y a la Dra. Amayrani Abrego Peredo, por compartirme 
sus conocimientos y experiencias, además de enseñarme y ayudarme en las técnicas 
necesarias para la realización del proyecto. 
Al Dr. Eloy Gasca Pérez, por su apoyo en la Unidad de Citometría de Flujo. Asimismo, por 
siempre orientarnos cuando mis compañeros y yo teníamos alguna duda y poner un buen 
ambiente musical en el laboratorio. 
A la Dra. Jocelyn Carolina Pérez Lara y el Dr. Carlos Arturo Gallardo Hernández, mis 
compañeros doctorantes cuando me encontraba en mi primer año de maestría. Ellos siempre 
resolvieron mis dudas con la mejor disposición de ayudar. Gracias por toda su orientación. 
A la M. en C. Wendolaine Santiago Cruz, por su apoyo y consejos durante todo este tiempo. 
Mil gracias por tu ayuda en la realización y lectura de los experimentos. Siempre resolvías 
mis dudas desde lo académico hasta lo administrativo y fuiste una guía para mí en el 
posgrado. Te admiro y estimo mucho. Nunca dejes de ser así. 
 
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A la QC. Wendy Kisai Mixtega Ruiz, por su amistad e interés genuino hacia mi persona. 
Gracias por tu apoyo, el cual fue imprescindible en la maestría, también por todas nuestras 
platicas, preguntas y discusión de temas científicos. Te quiero mucho Wen, eres alguien con 
muchas dudas y eso te llevará a ser alguien con muchas respuestas. Te deseo lo mejor hoy y 
siempre. 
A Rubi Ramírez Quintero y Erasmo Leonel Pérez Méndez, por toda su ayuda en el 
laboratorio y por siempre mostrar la mejor actitud y disposición. Gracias por todo su apoyo 
hacia mi persona, les deseo lo mejor en su camino. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
6 
 
Resumen 
 
La respuesta inmune antitumoral está conformada principalmente por los linfocitos T CD4+ 
y CD8+, los cuales monitorean y eliminan las potenciales células tumorales. Se ha 
demostrado que algunos tumores pueden inhibir la respuesta inmune mediante el 
reclutamiento y la activación de células inmunosupresoras, como los linfocitos T reguladores 
(Treg). El cáncer es un padecimiento en el cual existe una proliferación celular descontrolada 
inducida por alteraciones celulares y moleculares, así como la presencia de factores de riesgo. 
Los linfomas no Hodgkin representan un tipo de neoplasias de interés clínico. De acuerdo 
con su origen y características patológicas, los linfomas no Hodgkin se pueden agrupar en 
neoplasias de células B, células T o células NK. Para su estudio, se emplean modelos 
animales como el modelo del “B cell lymphoma-1” (BCL1), en el cual, los ratones BALB/c 
son inoculados intraperitonealmente con la línea tumoral singénica BCL1 que migra y 
prolifera en el bazo produciendo la enfermedad. Los tratamientos actuales presentan 
limitaciones y efectos adversos, por lo cual la investigación de terapias alternativas, como el 
uso de los metabolitos activos se ha incrementado. Entre estos destacan los polifenoles y los 
curcuminoides, siendo la curcumina uno de los más estudiados. En este proyecto se evaluó 
el efecto de la curcumina en la respuesta inmune antitumoral contra el linfoma BCL1. Para 
ello, el modelo murino BCL1 se administró durante 21 días con curcumina vía i.p, incluyendo 
los respectivos controles. Después, las diferentes subpoblaciones linfocitarias provenientes 
de los esplenocitos se analizaron mediante citometría de flujo. Los resultados indicaron que 
la administración de la curcumina aumentó los porcentajes de los linfocitos T CD4+ y CD8+ 
en el microambiente tumoral. Asimismo, incrementó la proliferación y la activación de los 
linfocitos T cooperadores y potenció los mecanismos efectores de los linfocitos T citotóxicos. 
Estos datos sugieren que la curcumina favorece la respuesta inmune antitumoral contra el 
linfoma BCL1. 
 
Palabras clave: curcumina, linfoma BCL1, CD8, CD4, Treg 
 
 
7 
 
 
Abreviaturas°C: grados Celsius 
AF488: Alexa fluor 488 
AhR: receptor de hidrocarburo de arilo 
ANOVA: análisis de varianzas 
APC: allophycocyanin, aloficocianina 
BCL1 + Cur: BCL1 administrado con curcumina 
BCL1: linfoma de células B 1 
Bregs: linfocitos B reguladores 
BV421: brilliant violet 421, violeta brillante 421 
BV605: brilliant violet 605, violeta brillante 605 
CCL1: ligando de quimiocina 1 
CCL17: ligando de quimiocina 17 
CCL22: ligando de quimiocina 22 
CCL28: ligando de quimiocina 28 
cm: centímetros 
COFEPRIS: Comisión Federal para la protección contra Riesgos Sanitarios 
CTLA-4: antígeno 4 asociado al linfocito T citotóxico 
Cur: curcumina 
DMSO: dimetilsulfóxido 
Fas-L: ligando de la proteína Fas (CD95) 
FDA: Administración de Medicamentos y Alimentos de los Estados Unidos, por sus siglas 
en inglés 
FoxP3: forkhead box P, caja de horquilla P3 
 
8 
 
HEPES: (ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanosulfónico) 
i.p: vía intraperitoneal 
IC50: concentración media inhibitoria máxima 
ICS: Instituto de Ciencias de la Salud 
IFN-γ: interferón gamma 
IgM: inmunoglobulina M 
IL-10: interleucina 10 
IL-2: interleucina 2 
IL-13: interleucina 13 
IL-17: interleucina 17 
IL-35: interleucina 35 
IMF: intensidad media de fluorescencia 
kg: kilogramo 
mABs: anticuerpos monoclonales 
mg: miligramo 
MHC I: complejo principal de histocompatibilidad I 
mM: milimolar 
NFкB: factor nuclear кB 
NK: natural killer 
NOM: Norma Oficial Mexicana 
PBS: buffer de fosfatos salino 
PD-1: proteína de muerte celular programada 1 
PD-L1: ligando de la proteína de muerte celular programada 1 
PE: phycoerythrin, ficoeritrina 
PE-Cy7: phycoerythrin-cyanine 7, ficoeritrina-cianina7 
 
9 
 
PerCP Cy 5.5: peridinin-chlorophyll-protein- cyanine 5.5, peridinina.-proteína clorofila- 
cianina 5.5 
Rpm: revoluciones por minuto 
ROS: especies reactivas de oxígeno 
TCR: receptor de células T 
TGF-β: factor de crecimiento transformante beta 
TNF-α: factor de necrosis tumoral α 
Treg: linfocitos T reguladores 
Tx: tratamiento 
Veh: vehículo 
μM: micromolar 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
10 
 
Índice 
 
 
 
Introducción ........................................................................................................................ 13 
1 Antecedentes..................................................................................................................... 14 
1.1 Sistema inmune ........................................................................................................... 14 
1.1.1 Linfocitos citotóxicos CD8+ ................................................................................ 14 
1.1.2 Linfocitos cooperadores CD4+ ............................................................................ 16 
1.1.3 Linfocitos T reguladores ...................................................................................... 16 
1.1.4 Respuesta inmunológica a tumores ...................................................................... 16 
1.2 Cáncer ......................................................................................................................... 17 
1.3 Linfomas no Hodgkin ................................................................................................. 18 
1.4 Tratamientos ............................................................................................................... 19 
1.5 Curcumina ................................................................................................................... 20 
1.5.1 Farmacocinética de la curcumina ......................................................................... 21 
1.5.2 Usos terapéuticos de la curcumina ....................................................................... 23 
2 Planteamiento del problema ........................................................................................... 26 
3 Justificación ...................................................................................................................... 27 
4 Hipótesis ........................................................................................................................... 28 
5 Objetivos ........................................................................................................................... 28 
5.1 Objetivo general .......................................................................................................... 28 
5.2 Objetivos particulares ................................................................................................. 28 
6 Metodología ...................................................................................................................... 29 
6.1. Lugar y tiempo de estudio.......................................................................................... 29 
6.2 Diseño de estudio ........................................................................................................ 29 
6.3 Población de estudio ................................................................................................... 29 
6.4 Muestreo ..................................................................................................................... 30 
6.5 Criterios de selección .................................................................................................. 31 
6.5.1 Ratones ................................................................................................................. 31 
6.6 Variables ..................................................................................................................... 31 
6.7 Procedimiento de recopilación de datos ..................................................................... 33 
6.7.1 Tratamiento en ratones ......................................................................................... 33 
6.7.2 Suspensiones celulares ......................................................................................... 33 
 
11 
 
6.7.3 Cultivo celular ...................................................................................................... 34 
6.7.4 Tinción de Citometría de Flujo ............................................................................ 34 
6.8 Instrumentos de medición ........................................................................................... 34 
6.9 Análisis estadístico...................................................................................................... 35 
7 Resultados......................................................................................................................... 36 
7.1 La administración con curcumina reduce la esplenomegalia y los números absolutos 
de células tumorales. ......................................................................................................... 36 
7.2 El linfoma BCL1 produce una disminución en los porcentajes y los números 
absolutos de linfocitos T totales esplénicos. ..................................................................... 38 
7.3 El tratamiento con curcumina aumenta los porcentajes de los linfocitos T CD4+ y 
CD8+ provenientes de los ratones portadores del tumor BCL1. ...................................... 39 
7.4 El tratamiento con curcumina potencia los mecanismos efectores de los linfocitos T
........................................................................................................................................... 41 
7.5 La administración de curcumina aumenta los porcentajes de los linfocitos Tregs de 
los ratones inoculados con la línea tumoral BCL1. .......................................................... 43 
7.6 El tratamiento con curcumina aumenta la proliferación de los linfocitos T CD4+ 
provenientes de ratones portadores del tumor BCL1. ....................................................... 45 
7.7 La administración de curcumina aumenta laactivación celular de linfocitos T CD4+ y 
CD8+ ................................................................................................................................. 47 
8 Discusión ........................................................................................................................... 49 
9 Conclusión ........................................................................................................................ 56 
10 Perspectivas .................................................................................................................... 56 
11 Consideraciones éticas ................................................................................................... 57 
12 Referencias bibliográficas ............................................................................................. 58 
13 Anexos ............................................................................................................................. 62 
13.1 Acta de dictamen del Comité de Investigación del Instituto de Ciencias de la Salud.
........................................................................................................................................... 62 
13.2 Acta de dictamen del Comité Interno para el Cuidado y Uso de Animales de 
Laboratorio del Instituto de Ciencias de la Salud. ............................................................ 63 
 
 
 
 
 
 
 
12 
 
 
Índice de figuras 
 
Figura 1. Mecanismos efectores de los linfocitos T citotóxicos……………………….…..15 
Figura 2. Fases de la respuesta inmunológica contra tumores…………………………..….17 
Figura 3. Curcuminoides encontrados en Curcuma longa L………………………….…....21 
Figura 4. Esquema de tratamiento………………………………………………………......30 
Figura 5. Los bazos de los ratones inoculados con el tumor BCL1 tratados con curcumina 
tienen una menor longitud y menor número absoluto de esplenocitos…………………......37 
Figura 6. El tumor produce una disminución en los porcentajes y los números absolutos de 
los linfocitos T totales esplénicos…………………………………………………………..38 
Figura 7. La administración de curcumina aumenta los porcentajes de los linfocitos T 
cooperadores y citotóxicos provenientes de los ratones portadores del tumor BCL1………40 
Figura 8. El tratamiento con curcumina potencia los mecanismos efectores de linfocitos T de 
los ratones portadores del tumor BCL1………………………………………………….....42 
Figura 9. La administración de curcumina aumenta los porcentajes de los linfocitos Tregs de 
los ratones inoculados con la línea tumoral BCL1………………………………………….44 
Figura 10. El tratamiento con curcumina aumenta la proliferación de los linfocitos T CD4+ 
provenientes de los ratones portadores del tumor BCL1..………………………………….46 
Figura 11. La administración de curcumina incrementa la activación celular en los linfocitos 
T CD4+ y CD8+ en los ratones inoculados con la línea tumoral BCL1………………….....48
 
 
13 
 
 
Introducción 
El cáncer es un padecimiento desencadenado por la presencia de alteraciones celulares y 
moleculares, así como factores de riesgo que inducen la aparición de tumores debido a una 
proliferación celular descontrolada, que puede progresar a metástasis y culminar en la muerte 
del paciente. Los linfomas de tipo no Hodgkin son neoplasias de interés clínico, los cuales 
puede tener su origen en las células B, las células T o las células NK. Los linfomas más 
comunes son aquellos que se derivan de las células B. En este sentido, para el estudio del 
desarrollo y tratamiento de estos tumores in vivo, los modelos animales representan una 
herramienta poderosa. Entre estos modelos se encuentra el “B cell lymphoma-1” (BCL1), en 
el cual, se inoculan células de la línea tumoral singénica BCL1 a ratones BALB/c. En este 
modelo, las células tumorales BCL1 migran y proliferan en el bazo generando un tumor a las 
tres o cuatro semanas posteriores a la inoculación produciendo así el padecimiento. 
Cabe destacar que el organismo es capaz de defenderse contra el desarrollo de tumores a 
través de la acción de las células del sistema inmunológico innato y adaptativo. Las células 
principalmente involucradas en la respuesta inmune antitumoral son los linfocitos T CD4+ o 
cooperadores y CD8+ o citotóxicos mediante diferentes mecanismos efectores como la 
secreción de la citocina IFN-γ, la expresión del ligando de muerte de la proteína Fas o bien, 
la acción de perforinas y granzimas. 
Las terapias que actualmente existen para el tratamiento de los diversos tipos de cáncer, 
incluido el linfoma No Hodgkin, comprenden la quimioterapia, la radioterapia y el uso de 
anticuerpos monoclonales, los cuales han tenido un impacto positivo en la expectativa de 
vida de los pacientes. Sin embargo, existen algunas limitantes y efectos secundarios, por lo 
que la búsqueda de tratamientos o terapias alternativas se ha incrementado. En este sentido, 
se destaca la investigación de las sustancias antioxidantes como la curcumina. Por ello, la 
presente investigación tuvo la finalidad de evaluar el efecto de la curcumina en la respuesta 
inmune antitumoral contra el linfoma BCL1, mediante el análisis por citometría de flujo de 
los porcentajes, los números absolutos, la secreción de citocinas y eventos celulares como la 
proliferación y la activación de subpoblaciones linfocitarias en el bazo de ratones inoculados 
con la línea tumoral BCL1 y administrados con curcumina. 
 
14 
 
 
1 Antecedentes 
1.1 Sistema inmune 
El sistema inmune se conforma de tejidos, células y moléculas que efectúan una respuesta 
ante agentes extraños, daño celular e incluso contra células potencialmente cancerosas. Para 
su estudio, el sistema inmune se divide en innato y adaptativo. El primero es importante en 
la detección temprana de tumores, sin embargo, el sistema inmune adaptativo posee un papel 
crucial en el reconocimiento específico de antígenos y la eliminación de las células 
transformadas. Por lo tanto, las células principalmente implicadas en la respuesta antitumoral 
son los linfocitos T citotóxicos CD8+, los linfocitos T cooperadores CD4+ y los linfocitos T 
reguladores (Tregs). 
En este sentido, estas células son capaces de establecer una respuesta antitumoral mediante 
3 funciones principales (1): 
a) Combatir infecciones virales y eliminar tumores inducidos por etiología viral. 
b) Prevenir la inflamación mediante la eliminación de patógenos, la cual podría facilitar 
o promover la generación de tumores. 
c) Eliminar las células tumorales en tejidos, debido al reconocimiento de ligandos y 
antígenos tumorales, los cuales activan receptores expresados por las células innatas 
y los linfocitos T (1). 
1.1.1 Linfocitos citotóxicos CD8+ 
Los linfocitos T citotóxicos o CD8+, denominados así por la expresión del heterodímero CD8 
en su superficie, tienen la capacidad de identificar a las células malignas a través de la 
presentación de péptidos antigénicos específicos. Este proceso es mediado por el complejo 
principal de histocompatibilidad clase I (MHC) expresado en las células presentadoras de 
antígeno y su reconocimiento mediante los receptores de célula T (TCR, por sus siglas en 
inglés) (2). 
 
 
 
15 
 
La función citotóxica, es decir, la eliminación de patógenos y células tumorales es 
mediada por tres mecanismos, los cuales se describen a continuación: 
1. La liberación de gránulos que contienen en su interior perforinas y granzimas. Las 
primeras forman poros en la célula blanco haciéndola susceptible a las granzimas, las 
cuales son serinproteasas que bloquean la producción de proteínas celulares 
provocando la apoptosis mediante la activación de caspasas (3). 
2. La secreción de citocinas proinflamatorias, como el interferón gamma (IFN-γ) que 
induce la expresión de moléculas del complejo principal de histocompatibilidad clase 
I, suceso que amplifica la posibilidad de reconocer las células blanco, activa a los 
macrófagosy posteriormente los recluta en los sitios de infección o daño tisular. Otra 
citocina proinflamatoria secretada por los linfocitos T CD8+ es el factor de necrosis 
tumoral (TNF-α), el cual establece sinergia con el interferón gamma (IFN-γ) para la 
activación de macrófagos y la eliminación de células blanco. 
3. El tercer mecanismo descrito, consiste en la unión de la proteína Fas (CD95), 
expresada en algunas células blanco, a su receptor: el ligando de Fas expresado en la 
membrana de las células T CD8+, dicha interacción promueve la activación de las 
caspasas que finalmente conduce a la muerte celular (4). 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 1. Mecanismos efectores de los linfocitos T citotóxicos. Los linfocitos T ocasionan la apoptosis 
de células tumorales mediante la unión de CD95 (proteína Fas) y su ligando CD178 (ligando de Fas); la 
secreción de citocinas proinflamatorias como interferón-gamma (IFN-γ) y la liberación de gránulos citotóxicos 
que contienen perforinas y granzimas. Fuente: adaptado de Murphy K. et al. 2009 (4). 
 
Apoptosis de 
células tumorales 
IFN-γ 
Linfocito T 
CD8+ 
Célula 
tumoral 
CD178 CD95 
 
16 
 
1.1.2 Linfocitos cooperadores CD4+ 
Los linfocitos T cooperadores o CD4+, a diferencia de los linfocitos T citotóxicos, reconocen 
a los antígenos mediante su presentación por el complejo principal de histocompatibilidad 
clase II. Estas células también son importantes en la respuesta inmune antitumoral, ya que 
poseen la capacidad de promover y optimizar la eliminación de las células tumorales debido 
a la cooperación con los linfocitos T CD8+, los cuales como se mencionó anteriormente, 
poseen actividad citotóxica (5). En esta denominada “cooperación”, tanto los linfocitos T 
CD4+ como los CD8+ reconocen sus respectivos antígenos en una misma célula presentadora 
de antígeno, por ejemplo, una célula dendrítica. De esta forma, las células CD4+ secretan 
interleucina 2 (IL-2), lo que por cercanía y afinidad a la citocina, promueve la proliferación 
y la diferenciación de los linfocitos T citotóxicos a sus fenotipos efector o de memoria (6,7). 
1.1.3 Linfocitos T reguladores 
A la población linfocitaria CD4+ caracterizada por la expresión de la cadena alfa del receptor 
de IL-2 (CD25) y el factor de transcripción FoxP3 se le denomina linfocitos T reguladores 
(Tregs) (8). Su función es inhibir la respuesta efectora de otros linfocitos T mediante 
múltiples mecanismos como la secreción de interleucina 10 (IL-10), el factor de crecimiento 
transformante beta-1 (TGF-β1), la interleucina 35 (IL-35); el bloqueo de señales 
coestimuladoras y la supresión de la maduración de células presentadoras de antígenos a 
través de la expresión del antígeno 4 asociado al linfocito T citotóxico (CTLA-4), así como 
inhibir la diferenciación a células efectoras por el consumo de IL-2. En conjunto, estos 
mecanismos permiten mantener la homeostasis e impedir reacciones inmunitarias 
exacerbadas que podrían promover el desarrollo de autoinmunidad (9). Por ello, las células 
T reguladoras han sido importantes en el estudio del lupus eritematoso sistémico, artritis 
reumatoide y alergias. En contraste, los linfocitos T reguladores han sido asociados con la 
progresión tumoral debido a la supresión de la respuesta inmune antitumoral. En este 
respecto, se ha reportado un incremento en el número de esta población linfocitaria en varios 
tipos de cáncer, lo que correlaciona con un pronóstico poco favorable (10). 
1.1.4 Respuesta inmunológica a tumores 
Como se mencionó anteriormente, el sistema inmune es capaz de establecer una respuesta 
antitumoral, la cual se divide en tres fases. En la primera, denominada fase de eliminación, 
las respuestas inmunológicas innata y adaptativa se encargan de la detección y la eliminación 
 
17 
 
del tumor, siendo imprescindible la expansión de células T CD4+ y CD8+ antitumorales. En 
la segunda etapa o de equilibrio, la respuesta inmunológica principalmente adaptativa, 
previene el crecimiento tumoral manteniendo en estado de latencia a las células tumorales 
que sobrevivieron a la fase previa (1,5). Por último en la fase de escape, las células tumorales 
que evaden el reconocimiento inmunológico proliferan, en esta etapa se desarrollan tumores 
clínicamente visibles debido al establecimiento de un microambiente tumoral 
inmunosupresor generado por el reclutamiento de células inmunosupresoras, como las Treg 
y la expresión de moléculas como CTLA-4, la proteína de muerte celular programa 1 (PD-1) 
y su respectivo ligando PD-L1 (11) 
 
Figura 2. Fases de la respuesta inmunológica contra tumores. La respuesta antitumoral consta de 
tres fases denominadas eliminación, equilibrio y escape, en las cuales participan las células tanto de la inmunidad 
innata como adaptativa, principalmente las células dendríticas, los linfocitos NK, los linfocitos T CD4+, CD8+ 
y Tregs. Fuente: adaptado de Schreiber et al. 2011 (5). 
1.2 Cáncer 
La carcinogénesis es un proceso que involucra alteraciones celulares y moleculares, en el 
cual células normales se transforman en células cancerosas. Dicho proceso, se divide en tres 
etapas denominadas iniciación, promoción y progresión (12). Existen más de 100 tipos de 
cáncer que afectan distintos tejidos, y de forma general, se ha descrito que pueden adquirir 
diferentes características durante el proceso carcinogénico, entre las que destacan la 
insensibilidad a las señales de inhibición del crecimiento, la evasión de la muerte celular 
programada (apoptosis), potencial de replicación ilimitado, la angiogénesis y la invasión a 
otros tejidos o metástasis (13). 
 
18 
 
Hasta el año 2020, a nivel mundial se reportaron alrededor de 19 millones de casos de cáncer, 
de los cuales, cerca de 10 millones culminaron en la muerte de los pacientes (14). Dentro de 
los tipos de cáncer reportados, están los denominados linfomas, los cuales se dividen en 
linfomas Hodgkin y no Hodgkin. Con respecto a este último, en el 2020 se reportaron a nivel 
mundial 544,352 casos y 259,793 muertes. En México en ese mismo año, el número de casos 
fueron 6,840 y 3,071 muertes a causa de ello (15). 
1.3 Linfomas no Hodgkin 
Los linfomas no Hodgkin son considerados tumores malignos de tejidos linfoides resultado 
del crecimiento clonal de células B, células T o células asesinas naturales (NK, por sus siglas 
en inglés) en diferentes estados de maduración. Los linfomas de células B constituyen el 90% 
del total de los linfomas no Hodgkin, los cuales de acuerdo con la Organización Mundial de 
la Salud (OMS) son categorizados basándose en la morfología, inmunofenotipo, además de 
los factores clínicos y genéticos (16). 
Para el estudio de este tipo de cáncer, se emplean diversos modelos murinos, los cuales 
permiten el análisis de los mecanismos moleculares y genéticos del tumor, además, generan 
el conocimiento relacionado con el microambiente tumoral y sus posibles tratamientos (17). 
Uno de estos modelos, es el denominado B cell lymphoma-1 (BCL1), en el cual la línea 
tumoral singénica BCL1 es inoculada intraperitonealmente en ratones de la cepa BALB/c 
estableciéndose el tumor días después. En este sentido, se ha descrito que después de 19-45 
días, las células migran, proliferan y establecen el tumor maligno en el bazo (18,19). Las 
células tumorales BCL1 logran desarrollar metástasis, por lo tanto, pueden ser encontradas 
posteriormente en sangre y ganglios linfáticos (18). 
El origen de la línea BCL1 proviene de los linfocitos B que se encuentran principalmente en 
cavidad pleural y peritoneal, los cuales se conocen como células B1 o “no convencionales”. 
Tanto las células B1 como las BCL1 se caracterizan por la secreción espontánea de la 
inmunoglobulina M (IgM) así como de la expresión de las proteínas CD19 y CD5 sobre su 
superficie, por lo que pueden ser identificadas fenotípicamente con anticuerpos que 
reconozcan a estas proteínas (20,21).Adicionalmente, se ha descrito que las células BCL1 
expresan la proteína CD1d y producen la interleucina antiinflamatoria 10 (IL-10), tal como 
 
19 
 
lo hacen los linfocitos B reguladores (Bregs), por lo cual, a estas células tumorales se les ha 
atribuido tener propiedades inmunosupresoras (18). 
En un estudio realizado por el grupo de Kovar M. y colaboradores en el 2008, después 
de inocular la línea BCL1 en ratones BALB/c, evaluaron la respuesta inmune en diferentes 
etapas del desarrollo del tumor, hallando un incremento en el porcentaje de los linfocitos 
Tregs y en la producción de IL-10 durante la progresión del tumor. En este mismo estudio, 
se bloqueó a esta población de Tregs antes de la inoculación de la línea BCL1, lo que indujo 
una mayor sobrevivencia de los animales, sugiriendo que las células Tregs favorecen el 
desarrollo de la línea tumoral BCL1 (22). Por otro lado, en un estudio elaborado por 
BitMansour y colaboradores en el 2016, empleando el modelo murino BCL1, tras 60 días de 
inocular el tumor, se observó una disminución de los porcentajes y los números absolutos de 
los linfocitos T CD8+ y CD4+. Sin embargo, en este trabajo, se encontró una disminución en 
el porcentaje de los linfocitos Tregs, contrario a lo reportado por Kovar M. y su grupo (18). 
Esta discrepancia en los porcentajes de los linfocitos Tregs podría deberse a la cantidad de 
células tumorales inoculadas en el modelo animal y los tiempos de evaluación. De tal forma, 
es necesario continuar con el análisis del desarrollo de estos tumores y de la respuesta inmune 
que se activa para el control de la enfermedad. 
1.4 Tratamientos 
Actualmente, el tratamiento convencional de los linfomas no Hodgkin incluye la 
quimioterapia y la radioterapia. Al esquema de tratamiento se le denomina R-CHOP debido 
a las iniciales de los medicamentos que lo conforman: rituximab, ciclofosfamida, 
doxorrubicina, vincristina y prednisona. A partir del esquema de medicamentos anterior, han 
emergido algunas variantes entre las que figuran la adición de otro fármaco llamado 
etopósido (23). 
Además, han surgido nuevas estrategias terapéuticas como los anticuerpos monoclonales 
(mABs), por ejemplo, anti-CD20 (rituximab) y anti-CD52 (alemtuzumab), o inhibidores de 
puntos de control inmunológicos como anti-CTLA-4 (ipilimumab) y anti-PD-1 (nivolumab, 
pembrolizumab y pidilizumab) (24). A pesar de que la administración de tales tratamientos 
ha mostrado un mejor pronóstico, estos producen efectos secundarios en la mayoría de los 
pacientes (25), y aunado a su costo elevado, dificulta su accesibilidad a la población. 
 
20 
 
En los últimos años, la búsqueda de tratamientos alternativos se ha incrementado 
considerablemente. Ejemplo de ello, es el estudio de metabolitos activos con propiedades 
antioxidantes como los polifenoles y los curcuminoides. Es importante enfatizar que algunos 
compuestos han mostrado poseer actividad anticancerígena, por ejemplo, el resveratrol, la 
genisteína, la quercetina, y la curcumina (26). 
1.5 Curcumina 
La Curcuma longa L. es un rizoma, es decir, un tallo que se prolonga horizontalmente de 
forma subterránea que se caracteriza por tener raíces a través de sus nudos. Esta especie de 
raíz pertenece a la familia del jengibre denominada Zingiberaceae (27). Su composición 
consiste en aceites volátiles, fibra, material mineral, proteína, agua, carbohidratos y 
compuestos químicos denominados curcuminoides (Tabla 1): curcumina (1,7-bis(4-hidroxi-
3-metoxifenil)-1,6-heptadieno-3,5-diona en un 60-70% de extracto crudo, 
demetoxicurcumina (20-27%) y bisdemetoxicurcumina (10-15%) (figura 2) (28,29). 
 
Tabla 1. Constituyentes de la Curcuma longa L. 
Compuesto Composición (peso/peso) 
Curcuminoides 1-6% 
Aceites esenciales volátiles 3-7% 
Fibra 2-7% 
Minerales 3-7% 
Proteínas 6-8% 
Agua 6-13% 
Carbohidratos 60-70% 
 
Fuente: Adaptado de Nelson et al., 2017 (29). 
 
21 
 
 
 
 
 
 
Figura 3. Curcuminoides encontrados en Curcuma longa L. Existen tres moléculas similares 
estructuralmente contenidas en el rizoma Curcuma Longa L. La sustancia más abundante es la curcumina (60-
70%), seguido de la demetoxicurcumina (20-27%) y la bisdemetoxicurcumina (10-15%) de extracto crudo. 
Fuente: Adaptado de Niranjan et al., 2013 (28). 
1.5.1 Farmacocinética de la curcumina 
Para comprender los efectos de los compuestos activos, es necesario conocer la 
farmacocinética de dichas sustancias, es decir, los procesos que ejerce el organismo como la 
absorción, la distribución, el metabolismo y la excreción. En relación con el primer punto a 
abordar, la principal vía de administración reportada es la vía oral, sin embargo, ha mostrado 
baja biodisponibilidad, ya que se han cuantificado bajas concentraciones séricas de la 
curcumina. Esto ha generado la necesidad de buscar otras estrategias como el uso de 
nanopartículas o bien, el empleo de la vía de administración intraperitoneal (i.p) para mejorar 
su biodisponibilidad (30,31). Por este motivo en este proyecto, se consideró a la vía i.p como 
la mejor vía de administración. 
En cuanto a la distribución, se ha reportado que esta molécula no se distribuye de forma 
específica en algún órgano, puesto que de 30 minutos a 24 horas posteriores a la 
administración oral de curcumina (400 mg) a ratas macho Wistar (150-200 g), solo fue 
posible cuantificar trazas de curcumina (<5 µg/ml) en sangre del corazón, en hígado y en 
riñón. Posterior a una hora, aproximadamente, el 90% de la curcumina se encontró en el 
estómago e intestino delgado, y después de 24 horas de la administración se determinó que 
la absorción fue del 60% (32). En otro estudio, después de administrar 1 g/kg de curcumina 
en ratas por vía oral, no se detectaron concentraciones plasmáticas del compuesto en un 
Curcumina Demetoxicurcumina 
Bisdemetoxicurcumina 
 
22 
 
intervalo de tiempo de 2 a 12 horas posterior a la administración. Este suceso puede ser 
explicado por una deficiente absorción en el intestino o la formación de conjugados con 
constituyentes circulantes del plasma como la albúmina (33). Por lo tanto, la distribución 
varía dependiendo del origen o la extracción de la curcumina, la dosis empleada, la 
preparación de la dosis, la muestra y la sensibilidad de los métodos de detección (29). 
La curcumina se metaboliza en los microsomas del hígado mediante las fases I y II. En la 
fase I del metabolismo, existe una reacción química de reducción catalizada por la enzima 
alcohol deshidrogenasa en los dobles enlaces en la molécula. Mientras que, en la fase II 
suceden reacciones de conjugación, primordialmente, la glucuronidación y la sulfatación en 
los grupos hidroxilos de la curcumina, con la finalidad de aumentar la solubilidad para su 
posterior excreción (29). Asimismo, la curcumina es un compuesto fotosensible, por lo que 
su degradación puede ocurrir de esta forma o por solvólisis, es decir, reacciones de 
sustitución o eliminación nucleofílica que son provocadas por disolventes generando 
productos de degradación. Entre estos compuestos previamente mencionados, se han 
identificado la biciclopentadiona, la vainillina, el ácido ferúlico y el feruloilmetano (33). 
Con respecto a la eliminación, se ha reportado que la principal ruta de excreción de la 
curcumina es a través de las heces. Esto se ha demostrado mediante la administración oral de 
una dosis única de 400 mg de curcumina a ratas macho Wistar con un peso entre 150-200g, 
en donde aproximadamente el 40% de la curcumina se encontró en las heces durante un lapso 
de 5 días posteriores a la administración. Por otro lado, en la orina, se detectaron únicamente 
los conjugados de curcumina con glucurónidos y sulfatos (32,34). 
En humanos, se ha reportado una baja biodisponibilidad de este compuesto. En un estudio 
clínico se realizó la administración de una dosis única de 500 mg, 1, 2, 4, 6 u 8 gramos de un 
productofarmacéutico que contenía 95% de los tres curcuminoides (curcumina, 
demetoxicurcumina, bisdemetoxicurcumina) a diferentes individuos sanos. Sin embargo, no 
se detectaron concentraciones séricas de curcumina en estos pacientes. Por el contrario, la 
presencia de curcumina fue detectada en los sueros de los individuos administrados con 10 o 
12 g del producto. Las concentraciones reportadas fueron 30.4 y 29.7 ng/mL una hora 
después de la administración, 39.5 y 57 ng/mL a las dos horas y 50.5 y 51.2 ng/mL a las 
cuatro horas, respectivamente (35). Otro grupo reportó que la concentración sérica máxima 
de curcumina se alcanza dentro de las primeras dos horas después de la ingesta del compuesto 
 
23 
 
natural y disminuye gradualmente dentro de las siguientes 12 horas. Tras la administración 
de 400 mg/día de curcumina, se cuantificó una concentración sérica de 0.51±0.11 µM, 
mientras que con una dosis de 6,000 mg/día se encontró una concentración de 0.64±0.06 µM 
después de dos horas de la ingestión del compuesto. Mientras que la concentración mayor 
(1.77±1.87 µM) fue determinada después de la administración de 8,000 mg/día (36). En los 
estudios previamente mencionados, los individuos sanos que recibieron las cantidades más 
altas de curcumina (8 y 12 gramos), no presentaron síntomas relacionados con toxicidad. 
Cabe señalar que no fue posible administrar una dosis más alta de curcumina debido a la 
molestia de ingerir tantas cápsulas, ya que la forma farmacéutica en ambos casos contenía 
500 mg (35,36). En concordancia con lo anterior, la Administración de Medicamentos y 
Alimentos de los Estados Unidos (FDA, por sus siglas en inglés) declaró a este compuesto 
curcuminoide como un “producto seguro”, debido a que después de la ingesta de 12 gramos 
de la sustancia, no se reportaron síntomas de intoxicación (37). 
1.5.2 Usos terapéuticos de la curcumina 
Se ha reportado que la curcumina posee propiedades antioxidantes, antiinflamatorias, 
analgésicas y antisépticas, por lo que ha sido empleado como tratamiento alternativo en 
enfermedades reumáticas, acné, fiebre, colitis y hepatitis (37,38). A su vez, se ha propuesto 
su actividad anticancerígena en modelos in vitro e in vivo de cáncer de mama, de pulmón, 
gástrico, colorrectal, pancreático y en algunas leucemias (37,39,40). Estos estudios sugieren 
que el compuesto es capaz de modular las vías de señalización implicadas en la regulación 
del ciclo celular, la apoptosis, la proliferación celular y la supervivencia celular, afectando 
así la sobrevivencia del tumor (39,40). A pesar de ello, este compuesto aún no es utilizado ni 
recomendado en la práctica clínica, ya que aún quedan mecanismos por elucidar. 
Con respecto a la actividad sobre la respuesta inmune antitumoral, el estudio de Liao y 
colaboradores en el año 2018, muestra que la administración de 50 mg/kg de curcumina por 
vía i.p., a ratones con carcinoma de lengua durante cuatro semanas, disminuye el porcentaje 
de los linfocitos Tregs en sangre periférica y nódulos linfáticos. Además, observaron una 
disminución significativa en la expresión de PD-L1, proponiendo que la curcumina posee 
también la capacidad de potenciar la respuesta inmune antitumoral (41). 
En el 2010, se publicó un estudio en el cual ratones albinos con carcinoma mamario (inducido 
por la inoculación de células de Ehrlich) fueron tratados oralmente con una dosis de 50 
 
24 
 
mg/kg/día curcumina durante 14 días. Los autores reportaron que, ante el tratamiento con 
curcumina, el número de células tumorales disminuyó y a su vez, la administración de 
curcumina incrementó la sobrevivencia de los ratones con el tumor. Asimismo, aquellos 
ratones que solo fueron inoculados con la línea tumoral, mostraron una disminución en el 
porcentaje de los linfocitos efectores encargados de la respuesta inmune antitumoral, es decir, 
linfocitos T CD8+ y CD4+ periféricos, de nódulos linfáticos y del sitio del tumor. En 
contraste, los porcentajes de estas células inmunes aumentaron en aquellos ratones con el 
tumor tratados con curcumina. Esta evidencia sugiere que la curcumina podría restablecer la 
depleción de estas subpoblaciones linfocitarias a causa del tumor. Estos resultados 
correlacionaron con los porcentajes de los linfocitos T productores de IFN-γ, citocina 
implicada en los mecanismos efectores contra los tumores. Por último, al cuantificar los 
porcentajes de los linfocitos Tregs, se observó un aumento de esta población linfocitaria en 
los ratones inoculados con el tumor, en contraparte, el grupo de la administración de la 
curcumina en un microambiente tumoral, presentó un menor porcentaje de Tregs. Cabe 
mencionar que, no se observaron diferencias estadísticas significativas entre los ratones 
control y los ratones tratados con curcumina sin tumor en todos los parámetros antes 
mencionados (42). Estos datos sugieren que la administración de curcumina podría mejorar 
la respuesta antitumoral de las células T en individuos portadores de tumores. 
Por otra parte, Ghosh y colaboradores en el 2009, mostraron que el tratamiento con 
curcumina induce apoptosis de manera dosis dependiente en células provenientes de 
pacientes con leucemia linfocítica crónica. La IC50, es decir, la concentración necesaria que 
se requirió para inducir apoptosis en el 50% de las células tumorales fue de 10-12.5 µM, 
mientras que en las células B provenientes de pacientes control, es decir, sin cáncer, dicha 
concentración fue de 17.5-20 µM. Además, una concentración de 15 µM de curcumina 
mostró más del 80% de células tumorales apoptóticas y con la misma concentración, en 
células control es del 20% (43). Este antecedente es indicativo de que las células tumorales 
podrían ser más sensibles al efecto apoptótico de la curcumina, por lo que, al ser utilizado 
como terapia, si bien no es específico, el efecto sobre las células sanas no es equiparable al 
generado en las células tumorales. 
Como se ha descrito, existe evidencia científica que propone la actividad antitumoral de la 
curcumina; sin embargo, se requieren de más estudios que permitan elucidar por completo 
 
25 
 
su actividad en la respuesta inmune antitumoral y los mecanismos por los cuales ejerce su 
efecto. En este sentido, este trabajo evaluó el efecto de la curcumina en la respuesta inmune 
contra tumores, empleando la línea del linfoma BCL1, por lo que se planteó la siguiente 
pregunta de investigación: 
¿Es capaz la Curcumina de incrementar la respuesta inmune antitumoral contra el 
linfoma BCL1? 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
26 
 
2 Planteamiento del problema 
 
El cáncer es una enfermedad que representa una de las principales causas de muerte a nivel 
mundial. Uno de los tipos de cáncer de relevancia clínica es el linfoma No Hodgkin, para el 
cual hasta el 2021, se reportaron a nivel mundial 544,352 casos y 259,793 muertes. En 
México en ese mismo año, el número de casos fueron 6,840 y 3,071 muertes. Este tipo de 
cáncer afecta a ambos sexos, aunque existe una mayor incidencia y mortalidad en hombres. 
Si bien ocupa el 11 lugar de incidencia de cáncer, al ser un cáncer linfático es agresivo, por 
lo cual la letalidad oscila alrededor del 50% de los casos (15). 
Actualmente, los tratamientos que existen para los diversos tipos de cáncer incluido el 
linfoma No Hodgkin son la quimioterapia, la radioterapia y más recientemente el uso de 
anticuerpos monoclonales, mismos que han aumentado la expectativa de vida. Estos 
tratamientos implican altos costos en su desarrollo y, por lo tanto, en su venta a los pacientes. 
Por lo tanto, la búsqueda de alternativas terapéuticas contra el cáncer representa un reto en la 
biotecnología, tanto en la disminución de los costos de producción, como en la eficacia y 
especificidad de las terapias. 
Es importante estudiar la función de la curcumina en el sistema inmune, debido a que 
éste último es capazde establecer una respuesta altamente específica, evitando así las 
reacciones adversas provocadas por las terapias actuales. Cabe mencionar que, existen 
diversas líneas celulares para el estudio del linfoma como la BCL1, la cual no ha sido 
extensamente estudiada a pesar de que se trata de un cáncer linfático, por lo que sigue siendo 
una interrogante el uso como terapéutico de un metabolito activo como la curcumina y su 
efecto en la respuesta inmune antitumoral. 
 
 
 
 
 
27 
 
3 Justificación 
 
Actualmente existen terapias ampliamente utilizadas contra diversos tipos de cáncer, mismas 
que han favorecido la expectativa y calidad de vida de los pacientes. Aún continúa la 
búsqueda de farmacoterapias y los mecanismos de acción involucrados. En este sentido, los 
estudios in vitro y los modelos animales, son un preámbulo para el diseño de estudios 
clínicos, ya que cualquier compuesto con propósitos terapéuticos primero debe ser probado 
en estos modelos para conocer mejor sus efectos, mecanismos de acción y efectos adversos 
antes de ser aplicados a los seres humanos. Por ello, este estudio se enfocó en la evaluación 
del efecto que ejerce la curcumina en la respuesta inmune adaptativa contra células 
tumorales. 
 
Este proyecto identificó el papel de la curcumina como un modulador positivo en la 
respuesta inmunológica contra el tumor denominado BCL1, mediante la citometría de flujo, 
la cual es una técnica que posee la capacidad de identificar fenotípicamente a la línea tumoral 
y las poblaciones linfocitarias que llevan a cabo la respuesta inmune tumoral. Asimismo, se 
evaluó la respuesta proliferativa y la activación celular de los linfocitos T CD4+ y CD8+. 
Los resultados de este estudio tuvieron la finalidad de determinar el efecto que posee uno 
compuestos bioactivos como la curcumina en las poblaciones linfocitarias involucradas en la 
respuesta inmune antitumoral. Asimismo, los resultados emanados de este proyecto se 
pretenden difundir a través de la participación en congresos nacionales e internacionales, 
además de la publicación de un artículo científico. 
 
 
 
 
 
 
 
28 
 
4 Hipótesis 
La curcumina incrementa la respuesta inmune antitumoral contra el linfoma BCL1. 
 
5 Objetivos 
5.1 Objetivo general 
Evaluar el efecto de la curcumina sobre la respuesta inmune antitumoral (Linfocitos T CD8+, 
CD4+ y Treg) contra células tumorales de linfoma BCL1. 
5.2 Objetivos particulares 
1. Administrar intraperitonealmente curcumina (50 mg/kg/día) durante 3 semanas a 
ratones BALB/c con y sin el linfoma BCL1 y medir la longitud, el peso y el número 
de células del bazo. 
2. Cuantificar los porcentajes, los números absolutos de los linfocitos T CD4+, CD8+, 
la expresión de CD178 y la producción de IFN-γ en esplenocitos provenientes de 
ratones con y sin el linfoma BCL1 tratados con curcumina. 
3. Determinar los porcentajes y los números absolutos de los linfocitos T reguladores y 
su producción de IL-10 de ratones con y sin el linfoma BCL1 tratados con curcumina. 
4. Identificar la capacidad proliferativa de los linfocitos T CD4+ y CD8+ esplénicos 
provenientes de los ratones ya mencionados, a las 72 horas mediante la expresión de 
Ki-67. 
5. Analizar la activación de los linfocitos T CD4+ y CD8+ esplénicos mediante la 
expresión de CD69 de ratones con y sin el linfoma BCL1 tratados con curcumina. 
 
 
 
 
 
29 
 
6 Metodología 
6.1. Lugar y tiempo de estudio 
El proyecto se llevó a cabo en la Unidad de Citometría de Flujo, la cual pertenece al Instituto 
de Ciencias de la Salud de la Universidad Veracruzana. El laboratorio se encuentra ubicado 
en la Facultad de Bioanálisis de la misma Universidad en la ciudad de Xalapa, Veracruz y 
cuenta con un citómetro de flujo, purificador de agua grado molecular, refrigerador, 
materiales, reactivos suficientes y financiamiento para la realización del proyecto. Por otro 
lado, el presente proyecto se elaboró en el periodo de septiembre 2020- julio 2022. 
6.2 Diseño de estudio 
El presente trabajo fue un estudio experimental. 
6.3 Población de estudio 
Para el experimento in vivo, se emplearon ratones macho de la cepa BALB/c de 8-12 semanas 
de edad. Se establecieron cuatro grupos experimentales (n=6 por cada grupo): vehículo 
(Veh), curcumina (Cur), BCL1, BCL1 más curcumina (BCL1+Cur). A los grupos BCL1 y 
BCL1+Cur se les inoculó por vía i.p 5x105 células de la línea tumoral BCL1 (22), 
considerado como el día cero. Los grupos Cur y BCL1+Cur fueron administrados por vía i.p. 
con 50 mg/kg/día de curcumina (C1386 1,7-bis(4-hidroxi-3-metoxifenil)-1,6-heptadieno-
3,5-diona Sigma Aldrich™) diluida en dimetilsulfóxido (DMSO) (D2650 Sigma Aldrich™). 
Los grupos experimentales denominados Veh y BCL1 se administraron con un volumen 
equivalente de DMSO. Los tratamientos se realizaron a partir del día 1 al 21 y al día posterior 
se realizó la eutanasia de los animales (figura 4). 
 
30 
 
 
Figura 4. Esquema de tratamiento. Los ratones macho BALB/c de 8-12 semanas se seleccionaron 
aleatoriamente para establecer cuatro grupos experimentales. A dos grupos se les inoculó la línea tumoral 
BCL1. Los ratones se administraron con curcumina o vehículo (dimetilsulfóxido) por vía intraperitoneal 
durante 21 días como se indica en el esquema. 
6.4 Muestreo 
El muestreo fue no probabilístico a conveniencia, debido a la disponibilidad de ratones y las 
células en el intervalo de tiempo del estudio. Para los experimentos in vivo, se consideraron 
los cuatro grupos anteriormente descritos en el apartado “Población de estudio” con una 
muestra de 6 ratones por grupo, cuyas células esplénicas fueron necesarias para desarrollar 
los experimentos in vitro. En dichos experimentos, se empleó en cada pozo de la placa de 
cultivo, un millón de células esplénicas provenientes de los ratones estipulados en cada 
grupo. Cada experimento se realizó por triplicado. 
 
 
 
31 
 
6.5 Criterios de selección 
6.5.1 Ratones 
Criterios de inclusión: ratones macho de la cepa BALB/c de 8-12 semanas de edad. 
Criterios de exclusión: ratones hembra o bien, diferentes de la cepa previamente descrita, 
además, ratones macho que salgan del rango de edad requerida en el punto anterior o que 
presentaran alguna malformación congénita. 
Criterios de eliminación: muerte del sujeto de experimentación antes de la conclusión del 
tratamiento. 
6.6 Variables 
Nombre de la 
variable 
Definición 
conceptual 
Definición 
operacional 
Instrumento 
de medición 
Tipo de 
variable 
Escala de 
medición 
Proliferación Proceso por el 
cual una célula 
puede dar origen 
a dos células 
hijas, lo que 
conduce a un 
incremento del 
número de 
células en 
órganos 
Cuantificación 
mediante 
porcentaje, 
obtenido de la 
tinción celular 
con el 
marcador Ki-
67 y lectura en 
citómetro de 
flujo 
Base de datos 
en Excel y 
software 
Prism 
GraphPad 8.0 
Cuantitativa 
continua 
De razón 
 
 
 
 
Porcentaje 
(%) 
Linfocitos 
CD4+ 
Células del 
sistema inmune 
adaptativo con 
actividad 
cooperadora, 
formadas a 
partir de células 
madre en 
médula ósea y 
que llevan a 
cabo su 
maduración en 
timo 
Cantidad de 
células que 
expresan a las 
proteínas CD3 
y CD4 en 
bazo, mediante 
tinción con 
anticuerpos e 
identificación 
de las mismas 
en citómetro 
de flujo 
 
 
 
Base de datos 
en Excel y 
software 
Prism 
GraphPad 8.0 
Cuantitativa 
continua 
De razón 
 
 
 
Porcentaje 
(%) y 
millones de 
células 
Linfocitos 
CD8+ 
Células del 
sistema inmune 
adaptativo, las 
Cantidad de 
células que 
expresan a las 
Base de datos 
en Excel y 
software 
Cuantitativa 
continua 
De razón 
 
 
 
32 
 
cuales poseen 
actividad 
citotóxica. Estas 
se forman a 
partir de células 
madre en 
médula ósea y 
que llevan a 
cabo su 
maduración en 
timo 
proteínas CD3 
y CD8 en 
bazo, mediantetinción con 
anticuerpos e 
identificación 
de las mismas 
en citómetro 
de flujo 
Prism 
GraphPad 8.0 
 
Porcentaje 
(%) y 
millones de 
células 
Mecanismos 
efectores de 
linfocitos T 
citotóxicos 
CD8+ 
Procesos 
mediante los 
cuales los 
linfocitos CD8+ 
eliminan células 
infectadas o 
malignas 
Cuantificación 
de Fas-L 
(ligando de 
Fas) y la 
citocina 
intracelular 
INF-γ en 
linfocitos T 
CD8+ 
mediante 
tinción con 
anticuerpos e 
identificación 
de las mismas 
en citómetro 
de flujo 
Base de datos 
en Excel y 
software 
Prism 
GraphPad 8.0 
Cuantitativa 
continua 
De razón 
 
 
Porcentaje de 
células 
productoras 
(%) e 
intensidad 
media de 
fluorescencia 
(IMF) 
Linfocitos 
Tregs 
Células del 
sistema inmune 
encargadas de 
regular o 
suprimir la 
actividad de 
otras células del 
sistema 
inmunitario. 
Dichas células 
surgen de la 
diferenciación 
de linfocitos T 
CD4 
Cantidad de 
células que 
expresan a las 
proteínas CD3, 
CD4, CD25 y 
FoxP3 en bazo, 
mediante 
tinción con 
anticuerpos e 
identificación 
de las mismas 
en citómetro 
de flujo 
Base de datos 
en Excel y 
software 
Prism 
GraphPad 8.0 
Cuantitativa 
continua 
De razón 
 
 
 
 
Porcentaje 
(%) y 
millones de 
células 
 
Activación 
celular 
Evento celular 
en el que 
intervienen 
complejos de 
señalización o 
transducción de 
señales que 
Cantidad de 
linfocitos T 
CD4 o CD8 
que expresan a 
la proteína 
CD69 en bazo, 
mediante 
Base de datos 
en Excel y 
software 
Prism 
GraphPad 8.0 
Cuantitativa 
continua 
De razón 
 
 
 
 
Porcentaje 
(%) 
 
33 
 
implican 
receptores de 
superficie y 
proteínas 
intracelulares. 
tinción con 
anticuerpos e 
identificación 
de las mismas 
en citómetro 
de flujo 
 
 
6.7 Procedimiento de recopilación de datos 
6.7.1 Tratamiento en ratones 
A dos grupos experimentales (Cur y BCL1+Cur), se administraron durante 21 días con 
curcumina (C1386 1,7-bis(4-hidroxi-3-metoxifenil)-1,6-heptadieno-3,5-diona Sigma 
Aldrich™) a la dosis previamente reportada de 50 mg/kg/día diluida en dimetilsulfóxido por 
vía i.p (30,42). En los grupos experimentales restantes (Veh y BCL1), se administró un 
volumen equivalente de vehículo dimetilsulfóxido (D2650 Sigma Aldrich™) durante el 
mismo periodo de tiempo. Una vez culminadas las tres semanas de tratamiento, los animales 
se sacrificaron por dislocación cervical y se removió el bazo. 
6.7.2 Suspensiones celulares 
Una vez sacrificado el ratón, se colocó en posición supino sobre una superficie plana, se 
realizó un pequeño corte en la piel con una tijera a la altura del abdomen y se retiró la piel. 
Posteriormente se hizo un corte para abrir el peritoneo y se localizó el bazo en el flanco 
izquierdo. El órgano se aisló mediante cortes en el tejido conjuntivo y se disgregó con un 
émbolo de jeringa y una malla de acero inoxidable depositando los esplenocitos en cajas Petri 
con 5 mL de buffer de Fosfatos Salino (PBS) 1X. Posteriormente las células se recolectaron 
en tubos cónicos de 15 mL. Se centrifugaron a 1,500 rpm durante cinco minutos y se decantó 
el sobrenadante. Al botón celular se le añadieron 3 mL de cloruro de amonio al 0.85% durante 
3 minutos para realizar la lisis de los eritrocitos. Después de ese tiempo, se lavaron con buffer 
PBS, se centrifugaron y suspendieron en 1mL de PBS 1X. Finalmente, los esplenocitos se 
contaron por la técnica de exclusión de colorante azul de tripano y se determinó la viabilidad 
celular. 
 
 
 
34 
 
6.7.3 Cultivo celular 
Los esplenocitos de los ratones (1x106 células) se colocaron en placas de cultivo de 48 pozos 
con medio RPMI-1640 suplementado con glutamina [2 mM], HEPES [10 mM], piruvato de 
sodio [1 mM], suero fetal bovino [10%], aminoácidos no esenciales [1%], 
penicilina/estreptomicina [1%], y β-mercaptoetanol [5 μM]. La cantidad de DMSO empleado 
fue menor al 1% en cada pozo. El tiempo de incubación a 37°C en una atmósfera al 5% de 
CO2 fue de 72 horas dependiendo del experimento. 
6.7.4 Tinción de Citometría de Flujo 
Para la identificación de los linfocitos T mediante citometría de flujo, se incubó un volumen 
de 100 µL que contuvieran 1x106 de células aforado con buffer PBS 1X, con una mezcla de 
anticuerpos (anti-CD3-BV605, anti-CD4-PE, anti-CD8-PerCP Cy5.5, anti-CD25-BV421, 
anti-CD178-BV421, anti-CD69-PECy7) a temperatura ambiente durante 15 minutos en 
oscuridad. Posteriormente, se adicionó 1 mL de buffer PBS 1X, se agitó en vórtex y se 
centrifugó a 1500 rpm durante 5 minutos. El sobrenadante se decantó y las células se fijaron 
con solución FixFacs (formaldehído al 1% diluido en PBS 1X). Luego, para identificar la 
expresión intracelular de FoxP3 e IL-10 en las células Tregs e IFN-γ y Ki-67 en los linfocitos 
T, las células se permeabilizaron con el kit Cytofix/Cytoperm TM (Fixation/Permeabilization 
Solution, BD Biosciences) y subsecuentemente, se incubaron con los anticuerpos anti-
FoxP3-AF488, anti-IL-10-APC y anti-IFN-γ-APC, anti-Ki-67-AF488 durante toda la noche 
a 4°C. Una vez terminada la incubación, se adicionó 1 mL de buffer PBS 1X, se agitó en 
vórtex y se centrifugó a 1500 rpm durante 5 minutos. El sobrenadante se decantó y las células 
se fijaron con solución FixFacs. 
Los datos fueron adquiridos en el citómetro de flujo BD LRSFortessa (Becton, 
Dickinson) y posteriormente se analizaron con el software FlowJo X (Tree Star Inc., 
Ashland,OR). 
6.8 Instrumentos de medición 
Los datos obtenidos de los experimentos fueron anotados en la bitácora de trabajo respectiva 
al proyecto. Posteriormente, se elaboró una base de datos en Excel y se empleó el software 
Prism GraphPad 8.0 para el análisis estadístico. 
 
35 
 
 6.9 Análisis estadístico 
Para la determinación de la prueba estadística adecuada, se realizó la prueba de normalidad 
de Shapiro-Wilk, si la p ≥ 0.05 se asumió que los datos poseían una distribución normal. La 
prueba estadística empleada fue ANOVA o análisis de varianza de una vía, el valor 
estadístico de F se presentó de la siguiente manera: F(grados de libertad, residuales)= valor de F 
calculado. Para las comparaciones múltiples, se utilizó la prueba post-hoc de Tukey, donde 
una p <0.05 se consideró estadísticamente significativa. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
36 
 
7 Resultados 
7.1 La administración con curcumina reduce la esplenomegalia y los 
números absolutos de células tumorales. 
Para el estudio de la respuesta inmune antitumoral se empleó a la línea celular BCL1, la cual 
fue inoculada a ratones BALB/c. Estos ratones y sus respectivos controles fueron 
administrados con curcumina (50 mg/kg/día) o vehículo dimetilsulfóxido durante 21 días. Al 
culminar el tratamiento, se extrajeron los bazos. Se determinó la longitud en centímetros, el 
peso en gramos y la cantidad de esplenocitos totales mediante el conteo con azul de tripano. 
El tumor generado por la línea BCL1 se establece en el bazo, lo que se refleja en el desarrollo 
de esplenomegalia en el grupo BCL1, misma que fue significativamente menor en los ratones 
que recbieron el tratamiento con curcumina (BCL1+Cur) (figura 5 A). La longitud del bazo 
en el grupo con el tumor administrado con curcumina (BCL1 + Cur) (2.81±0.09 cm) es menor 
en comparación con el grupo BCL1 (3.06±0.18 cm) (F (3,20) = 246.3; p<0.0001) (figura 5 B). 
Estas diferencias en el grupo BCL1+Cur (253.5 x106± 61.6 x106 células) en comparación al 
BCL1(362 x106± 113x106 células) se reflejan en el número de esplenocitos totales, que 
presumiblemente en su mayoría eran células tumorales (F (3,20) = 27.34; p<0.0001) (figura 5 
D). Sin embargo, no se encontraron diferencias estadísticamente significativas en los pesos 
del bazo en los grupos inoculados con el tumor (1.00±0.14 vs 0.94±0.16 g) (F (3,20) = 114.9; 
p<0.0001) (figura 5 C).37 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 5. Los bazos de los ratones inoculados con el tumor BCL1 tratados con curcumina tienen 
una menor longitud y menor número absoluto de esplenocitos. Se determinó la longitud, el peso y 
el número absoluto de las células del bazo. A) Fotografías representativas de los bazos de cada grupo 
experimental. De izquierda a derecha los controles vehículo (Veh), curcumina (Cur), BCL1 administrado con 
vehículo y BCL1 administrado con curcumina (BCL1+Cur). B) Longitud de los bazos en centímetros. C) Peso 
de los bazos expresados en gramos. D) Conteo de esplenocitos totales. Los valores representan las medias 
aritméticas ± DE, n=6 ratones. Las diferencias entre grupos fueron analizadas mediante ANOVA de una vía y 
la prueba post hoc Tukey; ***p<0.001, ****p<0.0001 comparado con el vehículo (Veh); +++p<0.001, 
++++p<0.0001 comparado con curcumina (Cur), #p<0.05 comparado con BCL1. 
 
 
A) B) 
C) D) 
 
38 
 
7.2 El linfoma BCL1 produce una disminución en los porcentajes y los 
números absolutos de linfocitos T totales esplénicos. 
Con el fin de cuantificar las poblaciones linfocitarias involucradas en la respuesta inmune 
antitumoral, se empleó la citometría de flujo. En una primera instancia, se identificaron los 
linfocitos T totales mediante la expresión de CD3. No existió diferencia estadística entre los 
grupos controles Veh y Cur en el porcentaje (48.62±1.66 vs 49.95±0.28 respectivamente) 
(figura 6 A) y los números absolutos (35.76x106±1.33x106 vs 37.76x106±0.76x106 
respectivamente) de los linfocitos T totales (figura 6 B), mientras que en los grupos BCL1 
(7.58±0.34) y BCL1+Cur (7.99±0.48), los porcentajes de los linfocitos T disminuyeron 
drásticamente (F(3,20) = 4281; p<0.0001) (Figura 6 A). Asimismo, estos grupos 
experimentales BCL1 (23.32x106±7.51x106) y BCL1+Cur (17.27x106±3.44x106) mostraron 
una disminución en los números absolutos de esa población celular (F(3,20) = 32.96; 
p<0.0001) (figura 5 B). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 6. El tumor produce una disminución en los porcentajes y los números absolutos de los 
linfocitos T totales esplénicos. Se identificó la población de los linfocitos T totales por la expresión de la 
proteína CD3 mediante citometría de flujo. A) Porcentaje de los linfocitos T totales esplénicos. B) Números 
absolutos de los linfocitos T totales en el bazo. Los valores representan las medias aritméticas ± DE, n=6 
ratones. Las diferencias entre grupos fueron analizadas mediante ANOVA de una vía y la prueba post hoc 
Tukey; ***p<0.001, ****p<0.0001 comparado con el vehículo (Veh); +++p<0.001, ++++p<0.0001 comparado 
con curcumina (Cur). 
A) B) 
 
39 
 
7.3 El tratamiento con curcumina aumenta los porcentajes de los linfocitos 
T CD4+ y CD8+ provenientes de los ratones portadores del tumor BCL1. 
Las subpoblaciones celulares principalmente involucradas en la respuesta inmune 
antitumoral son los linfocitos T CD4+ o cooperadores y los linfocitos CD8+, también 
denominados citotóxicos. Debido a ello, se identificaron estas poblaciones celulares 
mediante citometría de flujo (figura 7 A). En cuanto a los porcentajes, la administración de 
la curcumina en un ratón silvestre BALB/c no muestra una diferencia con respecto al 
vehículo en los linfocitos CD4+ (Veh: 59.22±2.18; Cur: 59.18±0.31) y CD8+ (Veh: 
28.73±1.05; Cur: 29.7±0.08). Al inocular el tumor, estos porcentajes disminuyen tanto en los 
linfocitos cooperadores (22.37±0.30) como citotóxicos (25.37±2.65), mientras que la 
administración de curcumina (BCL1+Cur) parcialmente previene la caída de estos 
porcentajes en la población CD4+ (31.33±2.61). Por otro lado, en los linfocitos T CD8+ 
(30.62±0.84) el porcentaje se normaliza en comparación con los controles. CD4+: (F(3,20) = 
737.0; p<0.0001) y CD8+: (F(3,20) = 14.22; p<0.0001) (figura 7 B-C). 
Con respecto a los números absolutos, los grupos inoculados con el tumor mostraron una 
menor cantidad de linfocitos T CD4 (BCL1: 5.21x106±1.67x106; BCL1+Cur: 
5.37x106±0.97x106) y CD8 (BCL1: 5.83x106±1.72x106; BCL1+Cur: 5.29x106±1.09x106) en 
comparación con los controles. Además, no se observó diferencia estadística en los números 
absolutos de estas poblaciones linfocitarias entre estos grupos BCL1 y BCL1+Cur. CD4+: 
(F(3,20) = 378.6; p<0.0001) y CD8+: (F(3,20) = 49.98; p<0.0001) (figura 7 D-E). 
 
 
 
 
 
 
 
40 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 7. La administración de curcumina aumenta los porcentajes de los linfocitos T 
cooperadores y citotóxicos provenientes de los ratones portadores del tumor BCL1. Se identificó 
a las subpoblaciones de los linfocitos T cooperadores y citotóxicos por la expresión de las proteínas CD4 y 
CD8 respectivamente mediante citometría de flujo. A) Separación representativa de las subpoblaciones 
mediante citometría de flujo. B) Porcentaje de los linfocitos T CD4+. C) Porcentaje de linfocitos T CD8+. D) 
Números absolutos de los linfocitos T CD4+. E) Números absolutos de los linfocitos T CD8+. Los valores 
representan las medias aritméticas ± DE, n=6 ratones. Las diferencias entre grupos fueron analizadas mediante 
ANOVA de una vía y la prueba post hoc Tukey; **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001 comparado con el 
vehículo (Veh); +++p<0.001, ++++p<0.0001 comparado con curcumina (Cur), ####p<0.0001 comparado 
con BCL1. 
A) 
B) C) 
D) E) 
 
41 
 
7.4 El tratamiento con curcumina potencia los mecanismos efectores de los 
linfocitos T 
Entre los mecanismos efectores antitumorales de los linfocitos T citotóxicos, destacan la 
secreción de citocinas como IFN-γ y la liberación de gránulos que contienen perforinas y 
granzimas. Asimismo, los linfocitos T CD8+ expresan ligandos de muerte conocidos como 
CD178 o ligando de Fas que se une a su receptor CD95, en las células tumorales, evento que 
culmina en la apoptosis. En este sentido, se identificaron estas proteínas por citometría de 
flujo. Se determinó la intensidad media de fluorescencia (IMF) del IFN-γ en los linfocitos T 
CD4+ y CD8+. 
En los linfocitos T CD4+, se observó una disminución significativa de la IMF del IFN-γ en 
los ratones tratados con curcumina (19.77±0.37) con respecto al control vehículo 
(28.82±0.41). Este valor aumentó en el grupo inoculado con las células BCL1 (32.53±2.62) 
y la expresión de esta citocina fue mayor en el grupo BCL1+Cur (41.25±1.37) (F(3,20) = 
208.6; p<0.0001) (figura 8 A-B). En cuanto a los linfocitos T CD8+, se observó una 
disminución de la IMF del IFN-γ en el grupo administrado con curcumina (16.65±0.52) con 
respecto al control (26.07±2.89). En contraste, la expresión de IFN-γ aumentó en el grupo 
BCL1 (32.15±1.63) y este incremento fue aún más evidente ante la administración de la 
curcumina (BCL1+Cur 38.50±1.49) (F(3,20) = 152.8; p<0.0001) (figura 8 C-D). 
Por otra parte, se determinó la IMF de CD178 en los linfocitos T CD8+ y no se observó 
diferencia en el grupo administrado con curcumina (8.58±0.28) comparado con el vehículo 
(10.17±0.88). Mientras que, se observó un incremento en el grupo BCL1 (15.82±2.34). En 
este parámetro, el aumento fue mayor en el grupo BCL+Cur (23.20±1.72) (F(3,20) = 112.2; 
p<0.0001) (figura 8 E-F). 
 
 
 
 
 
42 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 8. El tratamiento con curcumina potencia los mecanismos efectores de los linfocitos T 
de los ratones portadores del tumor BCL1. Se determinó la intensidad media de fluorescencia (IMF) de 
IFN-γ y CD178 mediante citometría de flujo. A) Histograma representativo de la expresión de IFN-γ en los 
linfocitos T CD4+. B) IMF de IFN-γ en los linfocitos T CD4+. C) Histograma representativo de la expresión 
de IFN-γ en los linfocitos T CD8+. D) IMF de IFN-γ en los linfocitos T CD8+. E) Histograma representativo 
de la expresión de CD178 en linfocitos los T CD8+. F) IMF de CD178 en linfocitos T CD8+. Los valores 
representan las medias aritméticas ± DE, n=6 ratones.Las diferencias entre grupos fueron analizadas mediante 
ANOVA de una vía y la prueba post hoc Tukey; ****p<0.0001 comparado con el vehículo (Veh); 
++++p<0.0001 comparado con curcumina (Cur); ####p<0.0001 comparado con BCL1. 
A) B) 
C) D) 
E) F) 
 
43 
 
7.5 La administración de curcumina aumenta los porcentajes de los 
linfocitos Tregs de los ratones inoculados con la línea tumoral BCL1. 
Otra población de importancia en la progresión tumoral son los linfocitos Tregs, por lo que 
se identificó a estos linfocitos mediante la expresión de CD3, CD4, CD25 y el factor de 
transcripción FoxP3 por citometría de flujo. 
Los porcentajes de los linfocitos Tregs, no mostraron una diferencia estadística entre los 
controles vehículo (9.86±0.51) y curcumina (8.60±0.23). Por otro lado, en el grupo BCL1, el 
porcentaje de Tregs aumentó el doble (19.01±0.68) y esta proporción fue aún mayor en el 
grupo con el tumor administrado con curcumina (23.7±3.96) (F(3,20) = 76.74; p<0.0001) 
(figura 9 A-B). En cuanto a los números absolutos, no se observó diferencia entre los grupos 
portadores del tumor (BCL1: 1.27x106±0.44x106; BCL1+Cur: 1.30x106±0.42x106) 
(F(3,20)=10.15; p=0.0003) (figura 9 C), es decir, el tratamiento con curcumina solo aumentó 
la proporción de las células T pero no el número absoluto en comparación con el grupo BCL1. 
Por otro lado, uno de los mecanismos por el cual los linfocitos Tregs suprimen la respuesta 
efectora, es a través de la secreción de la IL-10. En este sentido, se determinó la IMF de dicha 
interleucina. Los resultados muestran una disminución de IL-10 en el grupo administrado 
con curcumina (32.4±1.20) en comparación al control vehículo (39.07±0.49). En los grupos 
BCL1 (46.32±3.24) y BCL1+ Cur (46.78±1.92) no existió diferencia estadística, dichos 
valores fueron mayores respecto a los controles F(3,20)=69.85; p<0.0001) (figura 9 D-E). 
 
 
 
44 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 9. La administración de curcumina aumenta los porcentajes de los linfocitos Tregs de los 
ratones inoculados con la línea tumoral BCL1. Se identificó la subpoblación de los linfocitos Treg a 
través de la expresión de CD3, CD4, CD25 y el factor de transcripción FOXP3 mediante citometría de flujo. 
A) Separación representativa de la subpoblación de Tregs mediante citometría de flujo. B) Porcentaje de los 
linfocitos Treg. C) Números absolutos de los linfocitos Treg. D)Histograma representativo de la expresión 
de IL-10 en los linfocitos Treg. F) IMF de IL-10 en los linfocitos Treg. Los valores representan las medias 
aritméticas ± DE, n=6 ratones. Las diferencias entre grupos fueron analizadas mediante ANOVA de una vía y 
la prueba post hoc Tukey; **p<0.01, ****p<0.0001 comparado con el vehículo (Veh); ++p<0.01, 
++++p<0.0001 comparado con curcumina (Cur); ##p<0.01 comparado con BCL1. 
A) 
B) C) 
D) E) 
 
45 
 
7.6 El tratamiento con curcumina aumenta la proliferación de los linfocitos 
T CD4+ provenientes de ratones portadores del tumor BCL1. 
Una vez observada la respuesta in vivo, se procedió a determinar qué sucedía con la 
proliferación celular ex vivo. Para ello, se identificó a la proteína denominada Ki-67, la cual 
se encuentra expresada durante las diferentes fases del ciclo celular. Esta proteína se 
identificó en las subpoblaciones linfocitarias provenientes de los ratones del modelo 
experimental colocadas en medio suplementado sin adicionar algún estímulo durante 72 
horas. Posteriormente, se cuantificaron los porcentajes de los linfocitos T CD4+ o CD8+ que 
expresarán Ki-67 mediante citometría de flujo. 
Por un lado, en los linfocitos T CD4+ no existió diferencia estadística entre los controles 
vehículo (1.90±0.14) y curcumina (1.87±0.11). En cambio, en el grupo BCL1 (26.80±0.78) 
el porcentaje de linfocitos T CD4+ que expresaba Ki-67 fue mayor. El grupo de ratones 
portadores de tumor y tratados con curcumina también mostró un incrementó en la 
proliferación celular (41.48±1.94) F(3,20)=2067; p<0.0001), incluso por encima de valor 
observado en el grupo BCL1 (figura 10 A,C). 
En tanto que, en los linfocitos T CD8+ provenientes del grupo administrado únicamente con 
curcumina (1.72±0.26) se observó una disminución significativa del porcentaje de células 
que expresaba Ki-67 con respecto al control vehículo (2.64±0.26). En el grupo al que solo se 
le inoculó el tumor, el porcentaje de linfocitos CD8+Ki-67+ incrementó (13.10±0.36) 
considerablemente. De manera interesante, en el grupo portador de tumor administrado con 
la curcumina mostró un incremento en el porcentaje de linfocitos T CD8+Ki-67+ (7.60±0.42) 
con respecto a los controles (F(3,20)=1459; p<0.0001), aunque este incremento estuvo por 
debajo de lo observado en el grupo BCL1 (figura 10 B,D). 
 
 
 
 
46 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 10. El tratamiento con curcumina aumenta la proliferación de los linfocitos T CD4+ 
provenientes de los ratones portadores del tumor BCL1. Se identificó la expresión de la proteína 
intracelular Ki-67 después de 72 horas en subpoblaciones de linfocitos T CD4+ y CD8+ mediante citometría 
de flujo. A) Separación representativa de la expresión de Ki-67 en los linfocitos T CD4+. B) Separación 
representativa de la expresión de Ki-67 en los linfocitos T CD8+. C) Porcentaje de los linfocitos T CD4+Ki-
67+. D) Porcentaje de los linfocitos T CD8+ Ki-67+. Los valores representan las medias aritméticas ± DE, 
n=6 ratones. Las diferencias entre grupos fueron analizadas mediante ANOVA de una vía y la prueba post hoc 
Tukey; ***p<0.001, ****p<0.0001 comparado con el vehículo (Veh); ++++p<0.0001 comparado con 
curcumina (Cur), ####p<0.0001 comparado con BCL1. 
A) 
B) 
C) D) 
 
47 
 
7.7 La administración de curcumina aumenta la activación celular de 
linfocitos T CD4+ y CD8+ 
Además de la proliferación en subpoblaciones linfocitarias, se evaluó la activación celular 
mediante el marcador de superficie CD69. Para ello, se identificó la expresión de esta 
proteína en las células T provenientes de cada uno de los grupos experimentales cultivadas 
durante 72 horas sin algún estímulo. 
En los linfocitos T CD4+, no se encontró diferencia entre los controles vehículo (2.10±0.15) 
y curcumina (1.71±0.14), a diferencia del grupo BCL1 (32.78±1.57) en el cual existió un 
incremento en el porcentaje de linfocitos T CD4+CD69+. Por último, en el grupo BCL1+Cur 
el aumento fue significativamente mayor (37.83±2.31) F(3,20)=1144; p<0.0001) (figura 11 
A,C). 
Con respecto a los linfocitos T CD8+, el grupo BCL1 (30.28±1.40) presentó un incremento 
en el porcentaje de las células CD69+ y el valor fue mayor ante la administración de la 
curcumina (BCL1+ Cur: 33.95±4.15) en comparación con los grupos vehículo (2.04±0.11) y 
curcumina (1.78±0.17) F(3,20)=381.3; p<0.0001) (figura 11 B,D). Al comparar los grupos 
BCL1 y BCL1+Cur, el aumento fue ligeramente más alto en el grupo BCL1+Cur y dicha 
diferencia fue significativa. 
 
 
 
 
 
 
 
48 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 11. La administración de curcumina incrementa la activación celular en los linfocitos T 
CD4+ y CD8+ en los ratones inoculados con la línea tumoral BCL1. Se identificó la expresión de la 
proteína CD69 en subpoblaciones de linfocitos T CD4+ y CD8+ después de 72 horas mediante citometría de 
flujo. A) Separación representativa de la expresión de CD69 en los linfocitos T CD4+. B) Separación 
representativa de la expresión de CD69 en linfocitos T CD8+. C) Porcentaje de linfocitos T CD4+ CD69+. 
D) Porcentaje de los linfocitos T CD8+ CD69+. Los valores representan las medias aritméticas ± DE, n=6 
ratones. Las diferencias entre grupos fueron analizadas mediante ANOVA de una vía y la prueba post hoc 
Tukey; ****p<0.0001 comparado con el vehículo (Veh); ++++p<0.0001 comparado con curcumina (Cur), 
#p<0.05, ####p<0.0001 comparado con BCL1. 
. 
A) 
B) 
C) D) 
 
49 
 
8 Discusión 
 
En este trabajo