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1 Propuesta del aprovechamiento de la manzana del marañón para aplicación en producto cosmocéutico de alto valor agregado Proyecto de grado por: Diana Catherin Rocha Gámez Asesora: Rocío Sierra Ramírez. PhD. Co-asesora: Asistente de investigación Daniela Guaqueta. Ing. Química. Departamento de Ingeniería Química Universidad de los Andes Bogotá Junio 2020 2 Objetivo general • Proponer un producto cosmocéutico de alto valor agregado a partir del residuo de la manzana del marañón con propiedad astringente preservando la capacidad antioxidante. Objetivos específicos 1. Determinar el proceso viable de deshidratación para la preservación de las propiedades de la manzana del marañón, tal como la capacidad antioxidante y la vitamina C. 2. Analizar las diferentes condiciones de operación de las extracciones de biocompuestos de la manzana del marañón y otras matrices vegetales. 3. Proponer una formulación de una emulsión incluyendo los compuestos tentativos del bagazo de la manzana del marañón. 3 Resumen El marañón es un fruto proveniente del Brasil, el cual está compuesto por un fruto, la nuez, y un pseudofruto que se lo conoce como manzana del marañón. En Colombia el fruto se cultiva principalmente en los departamentos del Meta, Vichada, Huila, Tolima, Santander, y la región caribe. La industria solo se ha enfocado en el proceso de la nuez el cuál solo es el 10% del fruto. El otro 90% es el pseudofruto el cual tiene un alto contenido de vitamina C, polifenoles y otros compuestos. En este trabajo se realizaron dos partes, una práctica y una teórica. En la parte práctica se realizó un proceso de deshidratación de la manzana del marañón en la cual se quería preservar su contenido de vitamina C, polifenoles y su capacidad antioxidante. De acuerdo con los resultados obtenidos las muestras del proceso de liofilización y las muestras del horno a 30 °C con pretratamiento de ácido ascórbico fueron las que mejor valor de estos compuestos reportaron, pero se decide elegir la segunda para el proceso de extracción porque a nivel industrial la liofilización es un proceso que genera muchos costos. Luego se realizó la extracción de polifenoles de la muestra deshidratada con acetato de etilo y agua. De acuerdo a los resultados se obtuvo que la fase que contenía como solvente al agua fue la que mayor cantidad de polifenoles extrajo. La segunda parte fue una revisión de literatura de la extracción de biocompuestos, donde se encontró que la muestra a temperatura ambiente (20 ºC), tiempo de extracción de 30 minutos, 4 g de muestra y un volumen de 100 ml de solvente acetato de etilo agua v/v (30:70) se obtuvo un gran contenido de polifenoles el cual es similar al encontrado en la literatura como mejor valor. Estas condiciones no se pueden reportar como las mejores, ya que falta revaluar el diseño de experimentos para una mejor extracción de biocompuestos. Por otro lado, se observó que el etanol es el mejor solvente para extraer estos compuestos y que los solventes puros diluidos en agua logran una extracción más efectiva. Por último, con base a una revisión de formulaciones en cosméticos para pieles grasas, se propuso una formulación de un producto para este tipo de pieles con el fin de incorporar el extracto del marañón en el producto cosmético. Palabras claves: Deshidratación, extracción, polifenoles, biocompuestos, antioxidante, vitamina C, manzana del marañón, formulación, astringente. 4 Abstract Cashew is a fruit from Brazil, which is made up of one fruit, the walnut, and a pseudo fruit that is known as the cashew apple. In Colombia, the fruit is grown mainly in the departments of Meta, Vichada, Huila, Tolima, Santander, and the Caribbean region. The industry has only focused on the nut process which is only 10% of the fruit. The other 90% is the pseudo fruit which is high in vitamin C, polyphenols, and other compounds. In this work two parts were made, one practical and one theoretical. In the practical part, a dehydration process of the cashew apple was carried out in which he wanted to preserve its content of vitamin C, polyphenols, and its antioxidant capacity. According to the results, the samples from the lyophilization process and the samples from the oven at 30 °C with pre-treatment of ascorbic acid were the ones that reported the best value for these compounds, but it was decided to choose the second one for the extraction process because, in the industry, lyophilization is a process that generates many costs. Then, the polyphenols were extracted from the dehydrated sample with ethyl acetate and water. According to the results, it was obtained that the phase containing the highest number of polyphenols as a solvent to water was extracted. The second part was a literature review of the extraction of biocomposites, where it was found that the sample at room temperature (20 ºC), extraction time of 30 minutes, 4 g of sample and a volume of 100 ml of solvent ethyl acetate water v / v (30:70) a high content of polyphenols was obtained, which is similar to that found in the literature as the best value. These conditions cannot be reported as the best since the design of experiments needs to be re- evaluated for better extraction of biocomposites. On the other hand, it was observed that ethanol is the best solvent to extract these compounds and that pure solvents diluted in water achieve a more effective extraction. Finally, based on a review of cosmetic formulations for oily skin, a formulation of a product for this type of skin was proposed in order to incorporate cashew extract into the cosmetic product. Key words: Dehydration, extraction, polyphenols, biocomposites, antioxidant, vitamin C, cashew apple, formulation, astringent. 5 TABLA DE CONTENIDO 1. INTRODUCCIÓN ........................................................................................................ 9 2. ESTADO DEL ARTE ................................................................................................ 11 3. METODOLOGÍA ....................................................................................................... 15 3.1 PROCESO DE SECADO DEL FRUTO ........................................................................ 15 3.1.1 Liofilización ........................................................................................................ 15 3.1.2 Secado horno de convección forzada .............................................................. 16 3.2 MOLIENDA ............................................................................................................ 16 3.3 EXTRACCIÓN DE BIOCOMPUESTOS ...................................................................... 17 3.4 PRUEBA DE VITAMINA C ...................................................................................... 18 3.5 PRUEBA DE POLIFENOLES .................................................................................... 19 3.6 PRUEBA DE CAPACIDAD ANTIOXIDANTE .............................................................. 19 3.7 REVISIÓN DE LITERATURA DE EXTRACCIONES ................................................... 19 3.8 REVISIÓN DE LITERATURA DE FORMULACIONES DE CREMAS ............................. 20 4. ANÁLISIS DE RESULTADOS ................................................................................. 20 4.1 PRUEBA DE VITAMINA C EN MUESTRAS DESHIDRATADAS ........................................ 20 4.2 PRUEBA DE POLIFENOLES DE MUESTRAS DESHIDRATADAS ....................................... 23 4.3 PRUEBA DE CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE MUESTRAS DESHIDRATADAS ................ 25 4.4 EXTRACCIÓN DE POLIFENOLES ..................................................................................27 4.5 REVISIÓN DE LITERATURA DE LA MANZANA DEL MARAÑÓN .................................... 30 4.6 REVISIÓN DE LITERATURA DE MATRICES VEGETALES .............................................. 35 4.7 FORMULACIÓN EMULSIÓN PARA LA PIEL GRASA ...................................................... 41 5. CONCLUSIONES ...................................................................................................... 49 6. TRABAJO FUTURO ................................................................................................. 51 7 BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................................. 52 8. ANEXOS ...................................................................................................................... 61 ANEXOS 1. CURVAS DE CALIBRACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO ......................................... 61 ANEXOS 2. CURVAS DE CALIBRACIÓN FOLIN-CIOCALTEU ...................................... 61 6 ANEXOS 3. CURVAS DE CALIBRACIÓN PRUEBA TROLOX ............................................. 62 ANEXOS 4. IMÁGENES DE LAS MUESTRAS ........................................................................ 62 ANEXOS 5. ANÁLISIS ESTADÍSTICO PRUEBA VITAMINA C .............................................. 63 ANEXOS 6. ANÁLISIS ESTADÍSTICO PRUEBA DE POLIFENOLES ....................................... 64 ANEXOS 7. ANÁLISIS ESTADÍSTICO PRUEBA DE CAPACIDAD ANTIOXIDANTE ................. 65 ANEXOS 8. IMAGEN DE MUESTRA POSTERIOR A LA EXTRACCIÓN .................................. 66 7 TABLA DE CONTENIDO DE GRÁFICAS Gráfica 1. Concentración de vitamina C .............................................................................. 22 Gráfica 2. Prueba Tukey para vitamina C ........................................................................... 23 Gráfica 3. Concentración de polifenoles .............................................................................. 24 Gráfica 4. Prueba Tukey para polifenoles ........................................................................... 25 Gráfica 5. Capacidad antioxidante ..................................................................................... 26 Gráfica 6.Prueba Tukey para la capacidad antioxidante .................................................... 27 Gráfica 7. Polifenoles extraídos en fase pesada .................................................................. 29 Gráfica 8. Polifenoles extraídos en fase liviana ................................................................... 30 Gráfica 9. Curva de calibración de Vitamina C .................................................................. 61 Gráfica 10. Curva de calibración de Polifenoles ................................................................. 61 Gráfica 11. Curva de calibración de capacidad antioxidante ............................................. 62 Gráfica 12. Gráfica de residuos para concentración de vitamia C ..................................... 64 Gráfica 13. Gráfica de residuos para concentración de polifenoles ................................... 65 Gráfica 14. Gráfica de residuos para capacidad antioxidante ............................................ 66 8 TABLA CONTENIDO TABLAS Tabla 1. Pectina en la manzana del marañón ...................................................................... 11 Tabla 2. Tabla composicional de la manzana del marañón ................................................. 13 Tabla 3. Muestras del proceso de deshidratación ............................................................... 16 Tabla 4. Muestras del proceso de extracción ...................................................................... 17 Tabla 5. Peso de las muestras a extraer ............................................................................... 28 Tabla 6. Extracciones de la manzana del marañón ............................................................. 31 Tabla 7. Extracciones de matrices vegetales ........................................................................ 36 Tabla 8. Selectividad de extracción de biocompuestos según el solvente ............................ 40 Tabla 9. Formulaciones de cremas ...................................................................................... 42 Tabla 10. Propuesta de formulación de crema para la piel grasa ....................................... 48 9 1. INTRODUCCIÓN Colombia es un país con una producción de una extensa variedad de frutas gracias a sus condiciones climáticas y ubicación. Durante las últimas décadas, la siembra de frutas ha venido creciendo considerablemente, consiguiendo que se aumente su participación en el área agrícola. El desarrollo del sector frutícola en el país significa una fuente de crecimiento de la agricultura muy importante, de generación de empleo y desarrollo de las regiones (Lasprilla, 2011). Por otro lado, Colombia es el tercer país latinoamericano mayor número de hectáreas cultivadas en frutas (Colombia, el tercer país latinoamericano con mayores hectáreas cultivadas de fruta, 2017). El marañón, (Anacardium occidentale), es un fruto que proviene de Brasil, el cual se caracteriza por tener una alta resistencia a plagas y enfermedades, una gran acción de renovar suelos y muy poca necesidad de cuidado en el cultivo. Por lo anterior es que esta fruta es óptima para tener un cultivo ventajoso, ya que puede tener un bajo costo de producción que puede significar grandes fuentes de ingreso a los agricultores (obando, 1996). A nivel mundial, los principales productores de marañón son Vietnam, India, Nigeria, Costa de marfil, Brasil e indonesia, siendo Vietnam el país con mayores exportaciones a nivel mundial. En Colombia el fruto se cultiva principalmente en los departamentos del Meta, Vichada, Huila, Tolima, Santander, Norte de Santander y la región caribe (Cardona A. , 2017). Los cultivos de marañón en el país tienen un potencial de plantación (Cardona A. O., 2017) desde 5.000 hasta 10.000 hectáreas por año. En la actualidad la industria del marañón, en el país se ha orientado solo en el proceso de la nuez que representa tan solo el 10% del fruto. Lo anterior quiere decir que el otro 90%, el cual es el pseudofruto, está siendo desperdiciado. Este pseudofruto es llamado también manzana del marañón. Adicionalmente es altamente consumido como jugo para tomar y concentrarlo. Este pseudofruto, al igual que el bagazo, tiene un alto contenido de vitamina C, muy significativo en comparación al contenido en otras frutas, polifenoles y se considera que tiene una buena fuente de compuestos antioxidantes (Ana Lucia F. Pereira, 2010). 10 Los polifenoles vienen del metabolismo secundario de las plantas y están presentes de forma natural en muchos alimentos. Están enlazados con algunas características en los alimentos como su sabor, palatabilidad y valor nutricional (F. C. Padilla, 2008). Existen dos subtipos de polifenoles, los flavonoides y los no flavonoides. Entre los flavonoides se encuentran las flavonas, flavanoles, antocianidas, flavonoles, isoflavonas y flavanonas. En cuanto a los compuestos no flavonoides se lo abarcan los mono-fenólicos y ácidos fenólicos (Portal antioxidantes). Los taninos son compuestos de origen vegetal que tiene la capacidad de unirse a macromoléculas en el cuerpo. Además, tiene un gran poder antioxidante que hace que se reduzca el riesgo de padecer enfermedades de envejecimiento, aporta propiedades astringentes y antiinflamatorias. Adicionalmente, existen dos tipos de taninos, los hidrolizables y los condensados. Los primeros se caracterizan por hidrolizarse con facilidad como ácidos, álcalis o por vía patológica. En este grupo se encuentran polímeros de ácido gálico, ésteres, entre otros (Compuestos fenólicos: taninos, s.f.). Por otro lado, tenemos los taninos complejos o no hidrolizables,estos se caracterizan por no hidrolizarse con naturalidad. Se generan en el metabolismo de algunos vegetales y se forman a partir de catequinas o catecoles. La polifenol oxidasa es un grupo de enzimas que tiene la manzana del marañón y son las responsables de dar una coloración oscura al fruto. Estas enzimas catalizan la oxidación de los polifenoles a quinonas que reaccionan de forma no enzimática para formar los pigmentos. La activación de esta enzima se genera después del rompimiento de los compartimientos de los tejidos del fruto luego de una lesión del tejido (Christiane Queiroz, 2010). El rango óptimo de pH para operar es de (5.0 - 7.0) (Pardo & Méndez, 2017). El proceso de pigmentación, o también llamado pardeamiento, es un gran problema a nivel industrial, ya que una de las causas de este proceso es que el fruto pierde calidad y valor. Esto ya que produce cambios tanto en la apariencia del fruto como en sus propiedades, puede generar olores y efectos desfavorables en su valor nutricional (Morante, y otros, 2014). Por los valores agregados del fruto como lo son los antioxidantes, entre ellos los polifenoles y la vitamina C, este proyecto se centra en aprovechar sus propiedades para aplicación en un producto cosmocéutico. 11 2. ESTADO DEL ARTE Se realizó una búsqueda sobre el contenido de pectina en la manzana del marañón, ya que la pectina es una especie de fibra que se encuentra en los tejidos vegetales de algunos frutos, tiene un gran interés comercial por sus propiedades espesantes, por lo que se usa en la formulación de varios productos alimenticios y cosméticos (Molina, 2016). En la tabla 2 se pueden observar algunos datos que se encontraron del contenido de pectina en el fruto y de la cantidad extraída. Tabla 1. Pectina en la manzana del marañón Cantidad Métodología de cuantificación / extracción Referencia Porcentaje de pectato de calcio de la parte comestible de fruto (2.96 ± 0.33%). Para el método de cuantificación se utilizaron 15 g de muestra seca y 400 mL de ácido clorhidrico 0.05N; se calentó a 85°C por 2h. (Molina, 2016). Porcentaje de ácido galacturónico(GalA: 69.9% –84.5%) Las pectinas se extrajeron de alcohol- insoluble material mediante agua acidificada con HNO3 a (pH 1.0, 1.5 y 2.0), relación 1:25 (p / v), 75 ° C y 90 min, respectivamente. Se realizaron dos extracciones sucesivas (Yapo & Koffi, 2013) 8.39% de pectina La cantidad de pectina se determinó de acuerdo con el método de precipitación gravimétrica utilizando % de pectato de calcio. (Siumara, Francisco, & Flávilo, 2010) (27-190 mg/ml) Por medio del método de hidrólisis de la pectina, se utilizó un rango de concentración del contenido de pectina. (Silva, Lopes, Converti, & Souza, 2018) 12 10.67 ± 0.05 pectato de calcio Proceso de fermentación del bagazo del marañon. (Alcântara & Silva, 2017) El 0.95% de la pectina estaba presente en el jugo Se extrajeron sustancias pécticas con 400 ml de HCl durante 2 horas a 80–90 ° C. Se filtró, se neutralizó y luego se añadieron 10 ml de NaOH con agitación constante. Se añadieron 50 ml de ácido acético, se dejó reposar durante 5 minutos. Esto fue seguido por la adición de 25 ml de CaCl2 0.5 M. (Probada con 1% de nitrato de plata) (Cajethan, y otros, 2020) Con lo anterior se puede decir que todavía no hay mucha información sobre la pectina en la manzana del marañón y por ende, no se puedo encontrar información adicional para analizar los resultados encontrados. El ácido galacturónico es el que nos indica el valor de la pectina en el fruto, pero no en todas las referencias se encontró este indicador, sino que por el contrario se reporta en porcentaje de pectato de calcio. De lo registrado en la tabla anterior se puede decir que el porcentaje del contenido de pectina de la manzana del marañón se encuentra dentro del rango (10% - 80%) aproximadamente. Se puede evidenciar que el rango del contenido es muy amplio por lo que los resultados encontrados son muy distintos. Esto se debe a que no hay una metodología estándar para cuantificar la pectina, por lo que cada método arroja resultados distintos, pero se espera que el contenido de pectina en el pseudofruto sea alto, ya que según (Agro negocios sostenible, n.d) este se utiliza para la elaboración de jamones, gelatinas, mermeladas, entre otros. Por otra parte, en la Tabla 2 se puede observar el composicional de la manzana del marañón para analizar sus componentes y sus respectivas cantidades. Esto para conocer que componentes son interesantes para rescatar, según sus propiedades, y utilizar con un fin de alto valor agregado. 13 Tabla 2. Tabla composicional de la manzana del marañón Componentes Cantidad Unidad Referencia Humedad 84.5-90.4 % (Sargent & Berry, 2011) Calorías 45 Kcal (Palomino, 2019) Proteínas 0.101-0.162 g (Bojorge, Hernández, & Pérexz, 2007) Grasas 0.05-0.5 g (Rodríguez A. O., 2011) Carbohidratos 9.08-9.75 g (Rodríguez J. F., 2018) Canizas 0.19-0.34 g (Rodríguez A. O., 2011) Calcio 0.9-5.4 mg (Bojorge, Hernández, & Pérexz, 2007) Hierro 0.91-0.71 mg (Bojorge, Hernández, & Pérexz, 2007) Fosforo 6.1-21.4 mg (Rodríguez A. O., 2011) Flavonoides 63.8 mg/100g (Palomino, 2019) Polifenoles 215.1-412.8 mg/100ml (Runjala & Kella, 2017) Vitamina C 126-372 mg/100ml (Runjala & Kella, 2017) Taninos 0.22-0.58 mg/100g (Runjala & Kella, 2017) Caroteno 0.4 mg/100g (Palomino, 2019) pH 3.5-4.6 (Prommajak, Leksawasdi, & Rattanapanone) Total azucares 30.60 % (Correira da costa, Milô de Freitas, Arraes, Ferreyra, & Montenegro, 2008) 14 Agua 84.4-88.7 g (Rodríguez J. F., 2018) De las composiciones de la manzana del marañón encontradas en la tabla anterior, se puede observar que el fruto tiene alto contenido en ácido ascórbico (vitamina C). Además de este compuesto, que son interesantes, existen otros componentes del fruto que también tienen grandes propiedades en la industria cosmética como en la alimenticia, estos son los caroteoides y los flavonoides. Los flavonoides tienen un papel importante en disminuir la híper pigmentación de la piel, y posee una actividad desodorante (Cartaya & Reynaldo, Flavonoides: caracteristicas químicas y aplicaciones, 2001). Los carotenoides son más usados en la industria alimenticia como colorante, el rol nutricional más importante de los carotenoides es el de precursor de la vitamina A, particularmente el ß-caroteno (Piedra, 2017). La astaxantina, un tipo de carotenoide, también es un poderoso antiinflamatorio y además de prevenir el envejecimiento (Quintana, Miguel, Hernández, & Helena, 2018). Su aplicación tópica protege de los efectos dañinos de la radiación UV-A. El ácido ascórbico (vitamina C) es un ácido orgánico esencial que actúa como un agente reductor y es un potente antioxidante. Este agente es necesario para la formación y mantenimiento del material intercelular. La deficiencia de esta vitamina en el cuerpo puede provocar anemia, hemorragias y un proceso lento de circulación de las heridas (Bastías, 2016). Se encuentra en la mayor parte de los mamíferos y de las plantas, estos tienen la capacidad de sintetizar la vitamina, menos los humanos (Valdés, 2006). Existen dos tipos de vitamina C, la natural que se obtiene a partir de extracciones de frutas y vegetales, y la sintética que se fabrica a partir de glucosa (La Perla Del Sur, 2011). Se ha propuesto la acción protectora de la vitamina C en el fotoenvejecimiento (Castellano & Hernández, 2018), pues el número de células quemadas por la radiación UV es menor después de aplicar conjuntamente ácido ascórbico y vitamina E sobre la piel. Los antioxidantes son compuestos químicos que neutralizan los radicales libres que generan estrés oxidativo de las células que se encuentran dentro del organismo, lo cual generan enfermedades crónicasy degenerativas. Existen antioxidantes no enzemáticos que 15 corresponden a las vitaminas y otros compuestos como los polifenoles, y los enzemáticos que corresponden a los producidos por el cuerpo (Ramírez, y otros, 2012). Los compuestos fenólicos (taninos) son considerados potentes antioxidantes pues captan radicales libres, estos radicales son átomos que tienen un electrón desapareado en su estructura, lo que les confiere una elevada reactividad e inestabilidad. Una nueva molécula reaccionará con otras para completar su par electrónico y poder estabilizarse (Lluva Lord, 2019). Los taninos son el principal representante en el marañón. Estos presentan propiedades anti-inflamatorias, atisépticas y es un astringente, lo cual ayuda a las pieles grasas (Sergio, 2015). En adición los taninos ejercen un efecto reparador de los surcos y arrugas marcados por el depósito irregular de fibras elásticas (Castellano & Hernández, 2018). En uso tópico están indicados en diversos problemas de la piel, empleándose en ciertas dermatosis, así como en cosmética como tónicos astringentes (Compuestos fenólicos: taninos, s.f.). Por estos valores agregados de los antioxidantes y vitamina C que tiene el bagazo del fruto, este proyecto se centra en aprovechar sus aplicaciones en la industria cosmocéutica. 3. METODOLOGÍA 3.1 Proceso de secado del fruto Para esta primera parte, la fruta del marañón, la cual proviene de plantaciones del marañón del departamento del Vichada, fue secada por 3 diferentes procesos de secado para obtener el mejor procedimiento. Para hacer la elección del mejor fruto secado se tuvieron en cuenta 2 parámetros, la vitamina C y los antioxidantes presentes. Previo a esto, el fruto seco, se molió y el polvo resultante fue disuelto con agua destilada. 3.1.1 Liofilización La fruta del marañón fue cortada en rodajas y puestas en una bandeja donde se dejaron 2 horas aproximadamente en un ultracongelador. Pasadas estas horas, la fruta fue colocada en el liofilizador por 2 días. Al pasar este tiempo, se recogieron y se guardaron. En la Ilustración 2 de Anexos 4 se puede observar la muestra liofilizada. 16 3.1.2 Secado horno de convección forzada Para este caso, se quiso obtener el efecto que tiene la temperatura en el secado del fruto afectando la concentración de la vitamina C del fruto, ya que a altas temperaturas se empieza a degradar esta vitamina. Se decidió realizar el secado a temperatura ambiente (32 ºC) como referencia a la temperatura de los llanos, y a 42 ºC. El flujo del horno en este caso se mantuvo constante en el más alto, con un valor de 2.5 m/s. Para realizar cada uno de los secados, la fruta fue cortada en rodajas. La muestra 2, la cual corresponde a la temperatura de 42 ºC, se dejó aproximadamente 44 horas en el horno y la muestra 3, que corresponde a la temperatura de 32 ºC, se dejó en el horno 64 horas. En la Ilustración 3 y la Ilustración 4 de Anexos 4 se puede observar la fruta seca de las dos muestras mencionadas anteriormente. Posterior al secado de las dos muestras, se notó un color negro a medida que pasaban las horas. Esto se debe a la polifenol oxidasa, la cual forma la pigmentación. Para quitar este problema, se decide realizar otra muestra, a la temperatura más baja, con solución de ácido ascórbico. El ácido lo que hace es bajar los niveles de pH de la enzima y así inactivarla. La fruta fue picada, y posteriormente se bañó con ácido ascórbico (10%) por aproximadamente una hora, finalmente se ingresaron al horno a 32 ºC por 68 horas aproximadamente. En la Ilustración 6 en anexos se puede observar la muestra 4, que corresponde a la mencionada anteriormente. Tabla 3. Muestras del proceso de deshidratación Muestra 1 Liofilizada 48 (horas) Muestra 2 42 °C 44 (horas) Muestra 3 32 °C 64 (horas) Muestra 4 32 °C (ácido ascórbico) 68 (horas) 3.2 Molienda Después del secado de todas las muestras se prosiguió al proceso de molienda del fruto secado, se hizo uso del molino de cuchillas de 0.25 mm. Cada una de las muestras molidas fue recogida en una bolsa plástica. Finalmente, cada una de las muestras fue marcada y guardada. 17 3.3 Extracción de biocompuestos Se inició eligiendo el mejor método de deshidratación con las pruebas nombradas anteriormente, luego se siguió a obtener el bagazo de la fruta del marañón, el cual se obtuvo como residuo después de la realización del jugo con la fruta. Posterior al secado del bagazo, se realizó la extracción de los biocompuestos. Para la extracción se realizó un diseño experimental en el cual se mantuvo constante el tiempo (30 min), se varió la relación de acetato de etilo y agua v/v (30:70, 70:30), y se analizaron 2 temperaturas (20 ºC, 40 ºC). Cada una de las muestras tiene una condición distinta, estas se pueden observar en la Tabla 4. Tabla 4. Muestras del proceso de extracción Muestra Acetato de etilo-agua (v/v) Temperatura (ºC) 1 30:70 20 2 70:30 20 3 30:70 40 4 70:30 40 La extracción se realizó con 2 etapas, al finalizar cada etapa las muestras se centrifugaron por 20 min. Posteriormente se midió el volumen de cada una de las fases formadas y se calculó el peso del extracto. Siguiente a esto se midió el contenido de polifenoles de cada fase, la acuosa y la de acetato de etilo. Para ello, a la fase acuosa se tuvo que adicionar agua, ya que esta estaba muy concentrada, el factor de dilución de 10. Se analizaron los resultados del contenido de polifenoles y por último se calcula la concentración polifenoles (mg/g) que hay en cada muestra. Para ello el peso de ácido gálico en las muestras de cada fase se multiplicó por el peso inicial del bagazo en cada muestra previo a la extracción. Después de la extracción, los datos de la absorbancia tomados de cada una las fases de las muestras 1, 2, 3 y 4 se usaron para calcular la cantidad de ácido gálico que había en cada una de esas muestras. Para calcular esto, se utilizó la ecuación de la curva de calibración de polifenoles, la cual se encuentra en anexos. Luego de obtener el factor de dilución, la concentración de ácido gálico de las muestras en la fase acuosa se multiplicó por este. Siguiente a esto se calcularon los miligramos de extracto que hay en cada fase multiplicando 18 la concentración por el volumen de cada fase al final de la extracción. El volumen final de cada fase se midió en una probeta. Esto se utilizó para calcular los gramos de ácido gálico que fueron extraídos por cada una de las fases. Los miligramos de ácido gálico se dividieron por los gramos de muestra seca para reportar los resultados. 3.4 Prueba de vitamina C Para esta prueba se utilizó una solución de yodato de potasio (0.002 M), una solución de yoduro de potasio (0.6 M), una solución indicadora de almidón soluble (0.5%), solución de HCL (1 M) y la solución estándar. La solución estándar corresponde a la muestra de la fruta molida, se preparó pesando aproximadamente 3 g de cada una de las muestras y se diluyó en 50ml de agua destilada, luego de varias horas la muestra se filtró. La segunda solución es la de yodato de potasio. Para la preparación de esta se pesó 1 g de yodato de potasio y se secó en un horno de vacío por 2 horas. En el horno la bomba de vacío succiona todo el aire dentro del horno, este llega a -0.06 Mpa. La presión de Bogotá es 74,660 Pa menos 60.000 Pa del horno es la presión a la cual trabaja el equipo (14.660 Pa). Luego del secado, se pesan 0.43g aproximadamente y se diluyen en 1L de agua destilada. La tercera solución es la indicadora, se pesaron 0.25 g aproximadamente de almidón soluble y se diluye en 50 ml de agua destilada caliente. La última solución es la de yoduro de potasio. Para esta solución se pesaron 10 g aproximadamente de yoduro de potasio sólido y se disolvió en 50 ml de agua destilada en un balón aforado de 100 ml, luego se diluyó hasta100 ml. Para la titulación se realizó una muestra con lo siguiente. 20 ml de la muestra de fruta, 150 ml de agua destilada, 5 ml de solución de yoduro de potasio, 5 ml de ácido clorhídrico, 1 ml de solución indicadora. La muestra se valoró con el volumen de la solución de yodato de potasio y se obtuvo el punto en un azul oscuro para cada una de las muestras. Se realizó una réplica por muestra. Cabe adicionar que la muestra 4, la cual corresponde a la pretratada con ácido ascórbico, no se evaluó para este caso. La curva de calibración de la vitamina C se realizó con ácido ascórbico (ver anexos) con rango (0 ppm - 200 ppm) Para realizar la curva se utilizó el procedimiento nombrado anteriormente, con la diferencia de que en vez de agregar 20 ml de la muestra de fruta, se 19 agregaron 20 ml de la solución de ácido ascórbico. Para la solución se agregaron 20 mg de ácido ascórbico y se agregaron 100 ml de agua destilada. 3.5 Prueba de polifenoles Para esta prueba primero se realizó la curva de calibración (ver anexos) con un rango (0 ppm - 300 ppm). Con la ecuación de la curva se encontraron los valores de concentración de ácido gálico, que corresponden a los polifenoles hidrolizados que se encuentran en la muestra de fruta. Inicialmente se pesó 7.5 g de Na2CO3 (7.5%) para preparar la muestra en 100 ml de agua. Posteriormente se pesaron 0.03 g de ácido gálico (>95%) para preparar la solución estandár en 100 ml de agua destilada, se prepararon los puntos. A la muestra se le extrajo 50 µl de fruta, se agregaron 450 µl del reactivo Folin-Ciocalteu (2N) y 500 µl de Na2CO3. Se agitó y se dejó a temperatura ambiente y protegida de la luz por una hora aproximadamente. Posterior a esto se midió la absorbancia en un espectrofotómetro UV-VIS de una celda a 765 nm. Para la curva de calibración se usó el ácido gálico como estándar referencia. La muestra en blanco fue etanol analítico (96%). El contenido de polifenoles fue expresado en (µg de ácido gálico equivalente (AGE) / g fruto). 3.6 Prueba de capacidad antioxidante Para la prueba se tomaron 50 µl de la muestra de la fruta y se agregaron 950 µl de solución DPPH (36 ppm). Se agitó y se dejó a temperatura ambiente por una hora aproximadamente protegida de luz. Posterior a esto se midió la absorbancia en un espectrofotómetro UV-VIS de una celda a 517 nm. Para la curva de calibración se usó Trolox como estándar de referencia con rango (0 ppm - 250 ppm). La solución de trolox se preparó con 0.1 g de trolox en 100 ml de etanol absoluto. La muestra en blanco también fue etanol analítico. El contenido de antioxidantes se expresó en (µg Trolox equivalentes /g fruto). 3.7 Revisión de literatura de extracciones Para las extracciones se realizaron dos búsquedas, la primera haciendo referencia solo a las extracciones de biocompuestos, tales como flavonoides, carotenoides, polifenoles y vitamina C, de la manzana del marañón sin importar el método. Para esto se utilizaron las siguientes 20 palabras clave “extraction´2 AND "(cashew apple)" AND "polyphenols" y también "extraction" AND "(cashew apple)" AND "polyphenols" AND “Solid-Liquid”, se revisaron 74 informes de los cuales se utilizaron 14. La segunda búsqueda se hizo para investigar a cerca de las extracciones sólido-líquido con los solventes que se utilizaron en la extracción de polifenoles del punto 2.3. En esta búsqueda se tuvieron en cuenta el agua, el acetato de etilo y la comparación de estos con otros solventes, además de los biocompuestos extraíbles que se quieren analizar. Para la segunda búsqueda se tuvieron en cuenta las palabras clave “extraction” AND "antioxidants" AND "ethyl acetate" AND "solid-liquid" y además con “Extraction” AND “ethyl acetate" AND "water" AND “Solid-Liquid” y extraction AND "polyphenols" AND "ethyl acetate" AND "solid-liquid", se revisaron 103 informes de los cuales se utilizaron 16 para este proyecto. Luego de recopilar la información, el paso siguiente fue analizar. 3.8 Revisión de literatura de formulaciones de cremas Por último, se realizó una revisión de literatura la cual consiste en búsqueda de formulaciones de una emulsión para la piel grasa, o anti acné. Para elegir la información, se tuvo en cuenta que la formulación encontrada cumpliera una función para el tipo de piel ya especificado. Los componentes usados en cada formulación se anexaron a unas tablas y se agregó la función que cumple cada componente en la crema. Con esta información se continuó a realizar la propuesta de la formulación. Esta consiste en los componentes que más se repitieron en las formulaciones encontradas y su cantidad también depende de lo revisado en la literatura. 4. ANÁLISIS DE RESULTADOS 4.1 Prueba de Vitamina C en muestras deshidratadas Para los cálculos de la concentración y de la cantidad de miligramos de vitamina C que tienen cada una de las muestras, se utilizó la curva de calibración y los cálculos de estequiometría. 21 Para los datos se utilizó el volumen gastado del yodato de potasio, este se obtuvo al alcanzar un color azul oscuro en la muestra. De la curva de calibración se utilizó la ecuación de la recta para calcular el valor de X, el cual corresponde a la concentración de ácido ascórbico y Y corresponde al volumen gastado de yodato de potasio. Los valores de concentración de ácido correspondientes a cada una de las muestras, utilizando la ecuación 1, se muestran en la siguiente gráfica. Por otro lado, se realizaron los cálculos de la cantidad de miligramos de ácido ascórbico en 100 ml. Para esto se utilizaron los cálculos de estequiometría que se muestran a continuación. Primero se tomaron los mililitros de yodato de potasio gastados en la titulación y se encontraron los moles de yodato presentes con la ecuación 2. Posteriormente, teniendo en cuenta la relación de yodato de potasio y ácido ascórbico dadas por las ecuaciones que ocurren (ecuación 3 y 4), se calculan los moles de vitamina C presentes en toda la muestra (ecuación 5). 𝑛 𝐾𝐼 = 0.002𝑀!" ∗ 𝐿!" (𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖ó𝑛 2) IO3− + 5 I− + 6 H+ → 3 I2 + 3 H2O (ecuación 3) Ácido ascórbico + I2 → 2 I− + ácido dehydroascorbic (ecuación 4) 𝑛 𝑉𝑖𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑎 𝐶 = 𝑛 𝐾𝐼 ∗ 3 1 (𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖ó𝑛 5) Posterior a esto, se calculan los moles de ácido ascórbico presentes en la muestra de 20 ml, la cuál es la cantidad de muestra de fruta que se usó para el análisis y con esto se calculan los gramos de ácido presentes en los 20 ml de muestra (ecuación 6 y 7). 𝑛 𝑉𝐶#$%& = 𝑛 𝑉𝑖𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑎 𝐶 ∗ 𝑉'(')* 20𝑚𝑙 (𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖ó𝑛 6) 𝑚𝑔+, = 𝑛 𝑉𝐶#$%& ∗ 176,12 ! "#$ ∗ 1000 (ecuación 7) 22 Finalmente se calculan los mg/100ml de ácido ascórbico de la muestra como en la ecuación 8. 𝑚𝑔 100𝑚𝑙+, = 𝑚𝑔+, ∗ 100𝑚𝑙 20𝑚𝑙 (𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖ó𝑛 8) Los resultados de ácido ascórbico obtenidos para cada una de las muestras evaluadas se pueden observar en la gráfica de a continuación. Gráfica 1. Concentración de vitamina C De los datos observados en la gráfica 1, se puede notar que la muestra que contiene más ácido ascórbico es la muestra 1, la secada por el método de liofilización, esto se puede deber a que las muestras se secan a partir de la sublimación del hielo del producto que se congeló previamente. En este proceso no se está trabajando a altas temperaturas, por lo tanto, se preserva mejor el fruto. La muestra 3, la cual fue secada en el horno a 30 ºC, es la segunda muestra con mayor cantidad de vitamina C al finalizar el proceso. Adicionalmente, la muestra 2, la cual fue secada en horno a 40 °C es la que contiene la menos cantidad de vitamina C. Con lo anterior se puede decir que el aumento de la temperatura afecta negativamente a la concentración de vitamina C en el fruto. Por último, se puede decir que los valores reportados 152.33 56.07 138.37 0.00 20.00 40.0060.00 80.00 100.00 120.00 140.00 160.00 180.00 1 2 3 Liofilizada 42°C 32°C Ác id o as có rb ic o [p pm ] Muestras 23 en las muestras anteriores son más bajos que los reportados en la tabla composicional. Por lo que el proceso de deshidratación afecta el contenido de esta vitamina. Gráfica 2. Prueba Tukey para vitamina C Según el análisis de varianza realizado en Minitab, con un p-value de 0.004, menor a la significancia, se puede decir que el proceso de deshidratación afecta el contenido de vitamina C en el fruto. Además, la Gráfica 2, indica la diferencia entre las medias de cada muestra evaluada. De esta gráfica podemos decir que los valores de vitamina c de las muestras 3 y 1 no son significativamente diferentes, por lo que cualquiera de los dos procesos usados nos dará un valor alto de la vitamina C en la manzana del marañón. 4.2 Prueba de polifenoles de muestras deshidratadas En la gráfica de a continuación se puede observar el contenido de polifenoles de cada una de las muestras de los diferentes procesos de deshidratación del fruto. En este caso se pudo medir también para la muestra 4. 24 Gráfica 3. Concentración de polifenoles AA: Ácido ascórbico De la gráfica podemos observar que, una vez más la muestra liofilizada es la que más contiene polifenoles. Por otro lado, la muestra 3 y la 4, que fueron secadas a la misma temperatura, tienen concentraciones parecidas, lo que pudo afectar que la muestra pretratada tuviera un poco menos de concentración es que estuvo más tiempo dentro del horno, ya que no se logró secar en el mismo tiempo que la otra. Se puede decir que nuevamente la temperatura, es el factor que afecta la concentración de polifenoles en el fruto. Esto ya que el proceso de liofilización trabaja a bajas temperaturas para que se cumpla la sublimación del agua que se encuentra en el bagazo y la muestra 2, la cual fue secada a mayor temperatura, es la que menos concentración tiene. En relación con lo reportado por la literatura, los datos obtenidos después del proceso de deshidratación muestran una disminución en la concentración de polifenoles en el fruto. En este caso el valor más alto fue de 74.156 mg/100 ml para la muestra liofilizada y el rango en la literatura está por encima de los 215 mg/100 ml. 741.56 571.18 686.08 679.60 0.00 100.00 200.00 300.00 400.00 500.00 600.00 700.00 800.00 900.00 1 2 3 4 Liofilizada 42°C 32°C 32°C (AA) Co nc en tr ac ió n de á ci do g ál ic o [p pm ] Muestras 25 Gráfica 4. Prueba Tukey para polifenoles Según el análisis de varianza realizado en Minitab, con un p-value de 0.000, el cual es menor a la significancia, el proceso de deshidratación afecta el contenido de polifenoles del fruto evaluado. En adición, se puede decir que las muestras 4 y 3 no son significativamente diferentes entre ellas al igual que las muestras 4 y 1, y 3 y 1. Esto significa que los valores del contenido de polifenoles entre estos pares de muestras no difieren entre sí. Profundizando lo anterior, vemos que la muestra 3 aunque no tiene un valor similar del contenido de polifenoles al de la muestra 1, es la que más se acerca al contenido de esta. La muestra 3 y la muestra 4 son procedimientos similares y muestran una concentración de polifenoles semejante. Entonces la muestra 4 y la muestra 1 también van a tener una diferencia de concentración que no es relevante en comparación a las otras relaciones. Por ende, con lo analizado anteriormente se puede decir que la muestra 2 es la más afectada por el proceso de deshidratación, en este caso por el incremento de temperatura. Los procesos de deshidratación que se recomiendan usar para la conservación del contenido de polifenoles en el fruto es la liofilización y el secado en horno a temperatura ambiente. 4.3 Prueba de capacidad antioxidante de muestras deshidratadas Con la curva de calibración (ver anexos) se calcularon los valores de la capacidad antioxidante de cada muestra. En la gráfica siguiente se pueden observar los valores para cada una de las muestras evaluadas. 26 Gráfica 5. Capacidad antioxidante AA: Ácido ascórbico De los resultados obtenidos se puede observar que la muestra 4 la cual equivale a la muestra tratada con ácido ascórbico a 32 ºC, es la que posee el mayor número de concentración de trolox, esto quiere decir que contiene mayor cantidad de antioxidantes que las otras muestras evaluadas. Siguiente a esto, tenemos la muestra liofilizada y por último las muestras secadas en el horno sin tratamiento. Con lo anterior se puede decir que el pretratamiento con ácido ascórbico influyó en el aumento de la capacidad antioxidante de la muestra, ya que la muestra 3, que fue deshidratada a las mismas condiciones, tiene una concentración menor. La razón por la que la muestra 4 tiene mayor capacidad antioxidante y menos contenido de polifenoles que la muestra 1 es porque entre los antioxidantes se encuentran el ácido ascórbico (vitamina C) y los polifenoles, por lo que esta muestra tiene más contenido de ácido ascórbico que de polifenoles. Esto se puede concluir, ya que la muestra fue tratada previamente con ácido ascórbico lo que elevó su contenido dentro del fruto, y si bien vemos en la gráfica de vitamina C, la muestra a 32 °C muestra un alto contenido de esta vitamina. 144.21 78.70 128.75 160.89 0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 120.00 140.00 160.00 180.00 1 2 3 4 Liofilizada 42°C 32°C 32°C (AA) Co nc en tr ac ió n de T ro lo x [p m ] Muestras 27 Gráfica 6.Prueba Tukey para la capacidad antioxidante Por otro lado, según el análisis de varianza realizado en Minitab, se puede decir que con un p-value de menor a la significancia (0.000), el proceso de deshidratación afecta el contenido de polifenoles del fruto evaluado. Adicionalmente de la Gráfica 6, se puede decir que las medias correspondientes son significativamente diferentes entre sí. Lo anterior quiere decir que los valores de la capacidad antioxidante de cada una de las muestras son diferentes entre sí. De acuerdo con este análisis, se observa que la temperatura de deshidratación del fruto afecta la capacidad antioxidante. De acuerdo con (Acevedo, Montiel, & Avanza, 2004) en su estudio de la degradación de la capacidad antioxidante se puede observar que la capacidad antioxidante es inversamente proporcional a la temperatura. Por último, se escoge la muestra 4 para realizar la extracción de biocompuestos, ya que esta muestra nos muestra valores altos de capacidad antioxidante y polifenoles. El proceso de liofilización y el sacado en el horno de convección forzada a 30 °C con pretratamiento de ácido ascórbico mostraron mejores resultados en el contenido de vitamina C, polifenoles y capacidad antioxidante. Se escoge la muestra 4 para la realización de las extracciones, la del pretratamiento, ya que a nivel industrial el proceso de liofilización es muy costoso. 4.4 Extracción de polifenoles Al finalizar la extracción se pudo observar que en cada una de las muestras los solventes se separaron, ya que el acetato de etilo no es soluble en agua, por ende se obtuvieron dos fases, 28 la liviana y la pesada como se observa en la Ilustración 1. En la fase liviana se notó una coloración amarilla, a diferencia de la fase pesada la cual no tuvo coloración. Por esta razón se decidió analizar cada fase de las 4 muestras por separado. De la coloración que tuvo la fase de arriba se puede decir que según (Palomino, 2019) los flavonoides del pseudofruto del marañón, son de coloración amarilla, específicamente las flavonas, con un contenido promedio de 60 mg/100 g. Con lo anterior se podría decir que en la fase liviana, la cual tuvo una coloración al final de la extracción, tiene un alto contenido de flavonas a comparación con la otra fase. Enla Tabla 4 se muestra el peso de cada muestra del pseudofruto del marañón molida de previo a la extracción, la cuál se utilizó para realizar los cálculos del contenido de polifenoles de las gráficas que vienen posteriormente. Tabla 5. Peso de las muestras a extraer Muestra Peso [g] 1 3.99 2 4.12 3 4.08 4 4.00 En la gráfica 7 se encuentra la concentración de polifenoles que fueron extraídos por cada solvente de cada muestra evaluada. Por otro lado, segunda gráfica muestra la cantidad de polifenoles que están presentes en cada fase de cada muestra. Fase liviana: Acetato de etilo Fase pesada: Agua Ilustración 1. fases formadas 29 Gráfica 7. Polifenoles extraídos en fase pesada La gráfica anterior indica la cantidad de polifenoles que fueron extraídos por la fase pesada, el agua. Podemos observar que las muestras que contienen más cantidad de agua fueron las que extrajeron mayor cantidad de este compuesto. Esto se debe a en las muestras que tienen menor volumen de solvente, el sistema va a llegar a un punto de saturación del compuesto y no se va a seguir extrayendo. También se puede observar que la temperatura es un factor que afecta la extracción de los polifenoles. En este caso, a menor temperatura, se va a lograr una mejor extracción, ya que las altas temperaturas van degradando estos compuestos. Cabe aclarar que los resultados de la muestra 2 no son los esperados por lo que durante el proceso de experimentación ocurrieron errores durante el procedimiento. 6512.09 1033.02 5604.01 3794.72 0.00 1000.00 2000.00 3000.00 4000.00 5000.00 6000.00 7000.00 8000.00 Temperatura [ºC] 20°C 20°C 40°C Acetato de etilo agua [ml] 30 [ml] 70 [ml] 30 [ml] Ác id o gá lic o (m g/ 10 0g ) Muestras 30 Gráfica 8. Polifenoles extraídos en fase liviana En la Gráfica 8 se puede observar el contenido de polifenoles extraídos por la fase liviana. En ella se puede observar que las muestras que contienen mayor contenido de polifenoles son las que tienen mayor volumen del solvente en la muestra, lo mismo que se evidencia en la gráfica anterior. Por otro lado se puede observar que el contenido de polifenoles que se extrajeron con este solvente es mucho menor al contenido extraído por el agua. Esto se debe a que el acetato de etilo no es tan polar como el agua y por lo tanto va a atraer otros compuestos menos polares que los polifenoles, es decir que esta fase no es rica en contenido de polifenoles. Por último, se evidencia en los datos reportados, que el volumen de la muestra 1 es menor que el de la muestra 4, cuando debería ser al contrario por el efecto de la temperatura en las otras muestras. Esto puede ser consecuencia de un error en el montaje de la extracción. 4.5 Revisión de literatura de la manzana del marañón Para analizar con más profundidad sobre la extracción de biocompuestos de la manzana del marañón, se realizó la búsqueda de extracciones de la manzana del marañón, los resultados de la búsqueda se pueden ver en la siguiente tabla. 190.23 610.03 254.03 564.55 0.00 100.00 200.00 300.00 400.00 500.00 600.00 700.00 Temperatura [ºC] 20°C 20°C 40°C Acetato de etilo agua [ml] 30 [ml] 70 [ml] 30 [ml] Ác id o gá lic o (m g/ 10 0g ) Muestras 31 Tabla 6. Extracciones de la manzana del marañón Solventes Resultados Referencia Hidrometanólico 50% (30ºC) 30minPT: 498.93 (µg/ml) 90minPT: 513.470(µg/ml) (Milanez, Sucupira, Pinheiro, & Melo, 2015) Hidroacetona 50% (30min) 30ºC PT: 1304.60 (µg/ml) 45ºC PT: 1,286.72 (µg/ml) Metanol-agua (60:40) FT: 0.2847 (mg/g) (Sousa de Brito, Pessanha de Arajúo, Lin, & Harnly, 2007) Metanol-agua (50:50) (2ºC) PT: 14.46 (mg AGE/100g) CA: 143.3 (mg AA/100g) (Queiroz, Lopes, Fialho, & Valente, 2011) (27ºC) PT: 17 (mg AGE/100g) CA: 100.5 (mg AA/100g) (40ºC) PT: 10.52 (mg AGE/100g) CA: 10.52 (mg AA/100g) Acetato de etilo, redisuelto con metanol PT(2ºC): 2.81 % (Queiroz, Ribeiro, Mendes, Fialho, & Valente, 2010) PT(27ºC): 2.79 % PT(40ºC): 2.78 % Etanol- agua (50:50) y luego acetona agua (70:30) PT (pulpa):5,286.49 (mg AGE/100g) (Ribeiro da Silva, y otros, 2013) PT (cáscara): 6,588.41 (mg AGE/100g) Metanol-agua (60:40) PT: 830 (mg AGE/100g) CA: 79.4 (µg trolox/100g) (Rufino, y otros, 2010) Metanol: agua (50:50 v / v) y 40 ml de acetona: agua (70:30 v / v) Vitamina C: 190 (mg AA/100g) PT:118 (mg AGE/100g) (Rufino, Fernandes, Alves, & Brito, 2008) Agua Vitamina C: 1.41 (mg AA/g seco) PT: 27.1 (mgAGE/g seco) CT: 23 (µg caroteno/g seco) CA: 41.14 (mg trolox/g seco) (Eca, Machado, Hubinger, & Menegalli, 2015) Etanol-agua (95:5) Vitamina C: 0.56 (mg AA/g seco) PT: 12,30 (mgAGE/g seco) CT: NO CA: 17.00(mg trolox/g seco) 32 Metanol agua (1:1) (Marañón rojo) PT: 295 (mg AGE/100g) CT: 1,686 (mg/100g) (Morales, Sánches, & Merlin, 2018) (Marañón amarillo) PT: 267 (mg AGE/100g) CT: 699 (mg/100g) Etanol- agua (70:30) (Marañón rojo) PT: 867 (mg AGE/100g) FT: 594 (mgQE/100g) (Marañón amarillo) PT: 745.56 (mg AGE/100g) FT: 586.67 (mg QE/100g) (Palomino, 2019) (Madurez fisiológica) PT: 1,234.00 (mg AGE/100g) (Madurez commercial) PT: 756.67 (mg AGE/100g) (Sobremadurez) PT: 428.50 (mg AGE/100g) Metanol al 50% y luego Acetona al 70% (5días) PT: 131.39 (mg AGE/100g) (Souza, Melo, Oliveira, Herbster, & Alcântara, 2016) (10días) PT: 121.49 (mg AGE/100g) (15días) PT: 103.84 (mg AGE/100g) (20días) PT: 67.13 (mg AGE/100g) Tratamientos de plasma frío con nitrógeno (5min) Vitamina C: 100-125 (%) (Rodríguez, Gomes, Rodrigues, & Fernandes, 2017) (10min) Vitamina C: 100-125 (%) (15min) Vitamina C: 80-100(%) Metanol-agua (50:50, v / v) y luego acetona-agua (70:30, v / v) (1:2) Vitamina C: 109.11(mg/100g) PT: 768.51(mg/100g) (Vidal, Ferreira, Araújo, Narciso, & Rodrigues, 2017) (1:3) Vitamina C: 118.25(mg/100g) PT: 792.68(mg/100g) (1:4) Vitamina C: 135.78(mg/100g) PT: 817.21(mg/100g) PT : polifenoles totales. FT : flavonoides totales. CT : carotenoides totales. CA : capacidad antioxidante. AA: ácido ascórbico. AGE: ácido gálico equivalente. QE: quercentina equivalente. De acuerdo a los resultados obtenidos en la extracción con acetato de etilo y agua se puede decir que comparando los resultados en la fase de agua con la literatura, especialmente en el 33 estudio de (Eca, Machado, Hubinger, & Menegalli, 2015), los valores obtenidos de cantidad de polifenoles en el extracto es mayor al reportado en el estudio. Esto se puede deber a las diferencias en las condiciones de extracción de cada uno de los estudios. En otro orden de cosas, se puede decir que se encontraron componentes de interés en la revisión de la manzana del marañón, tales como polifenoles, flavonoides, carotenoides y vitamina C. Por otro lado, de los datos podemos observar que en (Rodríguez, Gomes, Rodrigues, & Fernandes, 2017) se muestra una medición de compuestos fenólicos realizando un tratamiento de plasma con nitrógeno, el cual es utilizado para la preservación de las características cualitativas de los frutos recién cortadas y para la inactivación de microorganismos, este tratamiento es una forma de obtener los extractos del fruto y así realizar análisis de vitamina C y otros compuestos. Con respecto a las muestras analizadas al principio de este informe, en el proceso de liofilización estas se ultra congelaron por varias horas antes de la deshidratación y el valor obtenido de la vitamina C fue el mayor a comparación de los otros métodos. Pero al no realizar el proceso de ultracongelación de las muestras antes de la extracción se pudo degradar el contenido de la vitamina, por lo que sería recomendable utilizar este proceso, o el de plasma con nitrógeno, para la preservación de los componentes que se quieren extraer. En cuanto a la parte de lamatriz vegetal, dependiendo de que parte se elija para realizar la extracción el contenido de biocompuestos va a varias. En este caso analizan la cáscara y la pulpa del fruto, como conclusión se llega a que de la cáscara del fruto se logra extraer más polifenoles. Analizando el tipo de marañón, entre el rojo y el amarillo, el marañón rojo se extraen más flavonoides, carotenoides y polifenoles. Para el estado de maduración se puede observar que la madurez fisiológica, es el estado donde más se extrajeron polifenoles, este estado es el no comestible. Por ende, se puede decir que entre más maduro esté el fruto, menos cantidad de biocompuestos se logra encontrar. Adicionalmente, se tienen otros factores que afectan la extracción de biocompuestos como la temperatura y el tiempo. Para la temperatura, primero se puede decir que la mayoría de los procesos de extracción que se muestran en la literatura utiliza una temperatura ambiente para 34 llevar a cabo el procedimiento. Según (Milanez, Sucupira, Pinheiro, & Melo, 2015) se logra extraer más polifenoles a una menor temperatura. Además, de los datos puestos en la Tabla 6 se puede observar el efecto de la temperatura de almacenamiento por 24 horas de las muestras previo a la extracción. Entre estas se encuentran (Sousa de Brito, Pessanha de Arajúo, Lin, & Harnly, 2007) y (Queiroz, Lopes, Fialho, & Valente, 2011) en donde se evalúan temperatura fría (2 ºC), ambiente (27 ºC) y caliente (40 ºC). De lo anterior se puede decir que, el contenido de polifanoles se ve afectado de forma negativa por el incremento de temperatura. Para el tiempo, en la primera referencia podemos observar que, al aumentar el tiempo de extracción, se incrementa la extracción de polifenoles. No sucede lo mismo al elevarse el tiempo a días de almacenamiento del fruto previo a la extracción, ya que se puede observar que estos compuestos se van degradando, en especial la vitamina C. Además según (Paulino, Kesseler, Ochoa, & De Michels, 2013), se ha observado que las temperaturas altas de extracción afectan la estabilidad de los compuestos fenólicos, a causa de la degradación enzimática y química. Para finalizar propone que el tiempo de operación óptimo para la extracción de polifenoles es de 50 a 60 minutos. Por otro lado, según (Vidal, Ferreira, Araújo, Narciso, & Rodrigues, 2017) cuando mayor es la relación (g/g) entre el bagazo y el agua en el proceso de sonicación, mayor es la extracción, en este caso de vitamina C. Luego de analizar las condiciones de extracción por separado, se revisaron los resultados reportados del contenido de biocompuestos de los extractos de la manzana del marañón y se escogieron los valores con mayor cantidad especialmente de polifenoles que es el de mayor interés. Lo anterior para observar las condiciones de extracción conjuntas que conllevan a obtener unos resultados de extracción superiores con respecto a otros. Para el caso del contenido de polifenoles (Ribeiro da Silva, y otros, 2013) reportaron el mayor contenido de estos con respecto a las otras referencias reportadas en la tabla anterior. Las condiciones de extracción para este caso fueron las siguientes. En la primera etapa se tiene una temperatura ambiente, tiempo de 1 hora de extracción, 40 ml de solvente etanol agua v/v (50:50) y 10 g de muestra. Para la segunda etapa se tienen las mismas condiciones excepto que el solvente es 40 ml de acetona-agua v/v (70:30). Estas condicones semejantes las utilizaron por (Rufino, 35 y otros, 2010) para la extracción de polifenoles. Con respecto a las condiciones de las extracciones de la sección 4.4, se puede decir que las condiciones utilizadas en la primera muestra, las cuales reportan valores similares a los de la literatura de contenido de polifenoles en la fase acuosa, fueron 30 minutos, temperatura de ambiente (20 ºC), 4 g de muestra y un volumen de 100 ml de solvente acetato de etilo agua v/v (30:70). De lo anterior se puede decir que las dos condiciones de extracción, de la parte experimental y las propuestas por la literatura, son adecuadas para lograr una alta extracción de polifenoles de la manzana del marañón. Por otra parte, se observa que estas condiciones no son similares, ya que el tiempo de extracción utilizado, los solventes y la relación muestra-solvente varían entre los dos procesos, pero que en conjunto con las otras condiciones que se utilizan se logra obtener un gran contenido del biocompuesto. En un caso se tiene mayor tiempo de extracción que, como dicho anteriormente, es el más utilizado en la literatura, y en el otro caso se tiene un mayor volumen de solvente en comparación al peso de la muestra a extraer. Esto último es bueno para que el sistema no llegue a la saturación tan rápido y así lograr extraer la mayor cantidad del compuesto deseado. En resumen, se puede decir que, aunque las condiciones utilizadas en la sección 4.4 arrojan un gran contenido de polifenoles en el extracto, no se pueden considerar como las mejores condiciones de extracción, ya que no se realizó el diseño de experimentos completo. Para ello toca reevaluar el diseño de experimentos con condiciones que faltan analizar tal como a temperatura (30 ºC) con tiempo de 45 min y una relación v/v (50:50), y las mismas condiciones utilizadas en la sección anterior, pero con un tiempo de una hora. Se espera que al estudiar todas las condiciones en un futuro obteniendo resultados favorables sobre la extracción de biocompuestos de la manzana del marañón. 4.6 Revisión de literatura de matrices vegetales Dado que no hay mucha información en las extracciones del marañón, especialmente en el análisis de solventes, y que se tuviera en cuenta el agua y el acetato de etilo, se realizó una búsqueda más abierta sobre las extracciones de biocompuestos de otras matrices vegetales. En la tabla de a continuación se puede evidenciar la información encontrada. 36 Tabla 7. Extracciones de matrices vegetales Nombre fruto Solvente Resultados Referencia Anisophyllea laurina Metanol TP: 4,329.66 (mg GAE/100) (Onivogui, Letsididi, Diaby, Wang, & Song, 2015) Etanol TP: 3,820.12 (mg GAE/100) Acetato de etilo TP: 1,858.53 (mg GAE/100) Agua TP: 2,018.85 (mg GAE/100) Semillas de uva Etanol TPartícula> 0.63 mm PT 25ºC: 14.7193 (mg AGE/g) TPartícula = (0.63-0.4)mm PT 25ºC: 22.0303 (mg AGE/g) TPartícula =( 0.4-0.16)mm PT 25ºC: 52.6011 (mg AGE/g) (Bucić-Kojić, Planinić, Tomas, Bilić, & Velić, 2006) Alternanthera sesillis (hoja) Etanol PT: 77.29 (mg AGE/g extracto) FT: 131.59 (mg RE/g extracto) CT: 365.79 (mg BE/g extracto) (Mohd, Abdul-Aziz, Mat-Junit, Chee, & Kong, 2018) Hexano PT: 21.85 (mg AGE/g extracto) FT: 73.76 (mg RE/g extracto) CT: 311.18 (mg BE/g extracto) Acetato de etilo PT: 57.54 (mg AGE/g extracto) FT: 157.44 (mgRE/g extracto) CT: 782.99 (mgBE/g extracto) Agua PT: 58.99 (mgGAE/g extracto) FT: 21.80 (mgRE/g extracto) CT: 97.86 (mgBE/g extracto) Dillenia indica Agua AT: 1.41 %(w/w) CA: 594.6 (µmoles/g of extract) (Abdille, Singh, Jayaprakasha, & Jena, 2004) Acetato de etilo AT: 9.37 %(w/w) CA: 1,067.0 (µmoles/g de extracto) 37 Metanol AT: 34.14 %(w/w) CA: 1,904.8 (µmoles/g de extracto) Piña Agua FT: 39.4 (mg QE/g) CA: 612.1 (%AA) (Hossain & Rahman, 2010) Metanol FT: 55.2 (mg QE/g) CA: 1,933 (%AA) Acetato de etilo FT: 37.9 (mg QE/g) CA: 1,051.8 (%AA) Acacia auriculiformis Agua PT: 700 mg (g AGE/g extracto) (Singh, Singh, Kumar, & Arora, 2007) Acetato de etilo PT: 600(g AGE/g extracto) Grosella negra Agua (1h) PT: 3,219.2 (mg/L) (Lapornik, Prošek, & Golc, 2004) Etanol-Agua PT: 61,35.7 (mg/L) Metanol-Agua PT: 7,455.2 (mg/L) Moringa oleifera Metanol FT: 2.4 (mg/g equivalents) AF: 10.60 (mg/g equivalents) (Rocchett, y otros, 2019) Metanol-agua FT: 4.93 (mg/gequivalents) AF: 6.23 (mg/g equivalents) Acetato de etilo FT: 0.53 (mg/g equivalents) AF: 5.77 (mg/g equivalents) Rumex abyssinicus Extracto de etanol PT: 185 (mgAGE/g extract) FT: 154 (mg catechin/g extracto) (Mohammed, Panda, Madhan, & Demessie, 2017) Extracto acuoso PT: 134 (mgAGE/g extract) FT: 118 (mg catechin/g extracto) Coconut (Cocos nucifera L.) Agua TP: 34.9 (mgAGE) FT: 48.9 (mgQE) CA: 149(µmol trolox/g seco) (Arivalagan, y otros, 2018) Metanol TP: 55.6 (mgAGE) FT: 78.1 (mgQE) CA: 173 (µmol trolox/g seco) Metanol-agua PT: 89.7 (mgAGE) FT: 115 (mgQE) CA: 215 (µmol trolox/g seco) 38 Etanol PT: 22.7 (mgAGE) FT: 30.1 (mgQE) CA: 72.6 (µmol trolox/g seco) Etanol-agua PT: 72.7 (mgAGE) FT: 48.6 (mgQE) CA: 183 (µmol trolox/g seco) Acetona PT: 4.89 (mgAGE) FT: 8.84 (mgQE) CA: 20.3 (µmol trolox/g seco) Acetona-agua PT: 98.5 (mgAGE) FT: 74.2 (mgQE) CA: 396 (µmol trolox/g seco) Granos de café verde Acetona PT: 1,737.81 (mg AGE/100 g) (Oliveira, Silva, Santos, & Queiroz, 2019) Etanol PT: 4,048.34 (mg AGE/100 g) Acetato de etilo PT: 313.84 (mg AGE/100 g) Hexano PT:785.42 (mg AGE/100 g) Isopropano PT:1,477.21 (mg AGE/100 g) Éter de petróleo PT: 246.92 (mg AGE/100 g) C. spiralois (hoja) Metanol AT: 17.6 (mg AT/G) FT: 8.5 (mg RE/g) (Chavan, Gaikwad, Kshirsagar, & Dixit, 2013) Etanol AT: 12.2 (mg AT/g) FT: 11.4 (mg RE/g) Acetona AT: 4.6 (mg ATE/g) FT: 2.7 (mg RE/g) Agua AT: 6.3 (mg ATE/g) FT: 2.2 (mg RE/g) Citrus reticulate L. Metanol PT: 22-24 (mg AGE/g) (Safdar, y otros, 2016) Etanol PT: 19-20 (mg AGE/g) Acetona PT: 12-14 (mg AGE/g) Acetato de etilo PT: 9-11 (mg AGE/g) Seed legumes (CES) Agua PT: 29-31 (mgAGE/g) (Diniyah, Alam, & Lee, 2020) Etanol-agua PT: 35- 40 (mgAGE/g) Etanol PT: 20-25 (mgAGE/g) Cáscaras de granada Agua doblemente destilada PT: 15-17 (%) (Selvakumar & Sivashanmugam, 2019) Metanol PT: 13-15 (%) 39 Agua doblemente destilada y Dimetilsulfóxido PT: 20-23 (%) Dimetilsulfóxido y metanol PT: 16-18 (%) PT : polifenoles totales. FT : flavonoides totales. CT : carotenoides totales. CA : capacidad antioxidante. AA: ácido ascórbico. AGE: ácido gálico equivalente. QE: quercentina equivalente. AT: ácido tánico. CF: contenido fenólico. AF: ácido fenólico. RE: rutina equivalente. A partir de los resultados con respecto al tamaño de partícula del polvo, se observa que, a menor tamaño de partícula, se va a obtener una mayor cantidad polifenoles. Esto ya que cuando menor es este parámetro, mayor es el área de contacto entre el sólido y el líquido, y esto hace que se incremente la velocidad de transferencia del material que se quiere extraer (J.M & J.F, 2009). Adicionalmente, menor va a ser la distancia que recorre el solvente por el interior del sólido. Sin embargo, según (Rivas, 2016) la existencia de partículas muy finas impide el proceso de extracción, ya que algunas veces al ser muy pequeñas se compactan y se forma una especie de pasta que hace que se filtre el extracto en la última etapa. Por otro lado, se observó que en algunas referencias realizan una extracción acidificada. La mayoría de estos corresponden a las extracciones de la manzana del marañón como en (Sousa de Brito, Pessanha de Arajúo, Lin, & Harnly, 2007) y (Ribeiro da Silva, y otros, 2013). Algo en común que tienen es que la acidificación se realiza para la extracción o el análisis de flavonoides. La extracción con ácido establece que esta condición proporciona estabilidad sobre las moléculas de los compuestos que se quieren extraer (Calderón, y otros, 2016). Continuando con lo anterior, según (Arivalagan, y otros, 2018) la extracción acificada de Cocos nucifera L. aumentó significativamente la cantidad de extracción total de compuestos fenólicos en comparación con los solventes sin acidificación. La acidificación con HCl y ácido acético no solo mejoró la capacidad de extracción del disolvente, sino que también estabilizó las antocianinas (flavonoides) y aumentó su actividad antioxidante. A cerca de los solventes se observó que la fracción de agua tiene un mayor contenido fenólico en comparación con el acetato de etilo. Esto coincide con la información obtenida en la extracción del bagazo de la manzana del marañón, en donde se obtuvo más concentración de polifenoles en agua que en el acetato de etilo. Lo anterior se debe a que este biocompuesto se 40 extrae mejor en solventes polares, tales como el agua. Con respecto a los componentes en la fase de acetato de etilo es espera encontrar mayor cantidad de flavonoides y carotenoides en el extracto. Lo anterior porque los flavonoides tales como la flavona no son tan polares, por ende son más solubles en solventes como ésteres (Cartaya & Reynaldo, 2014), y porque los carotenoides no son solubles en agua (García B. , 2015), pero lo son en solventes orgánicos como el etanol y la acetona. Otro punto que se puede observar es que los solventes cuando están disueltos en agua van a extraer más biocompuestos, que el solvente por sí solo. Esto sucede porque al adicionar el agua, aumenta la polaridad del solvente, y se incrementa la solubilidad de las matrices de muestra (Arivalagan, y otros, 2018), esto hace que aumente significativamente la capacidad de extracción. Por último, se puede observar que para cada componente que se quiere extraer, hay unos solventes que actúan mejor para ciertos biocompuesto. Por ejemplo, para la capacidad antioxidante el metanol es el solvente con el que se obtiene mayor cantidad, luego le sigue el etanol, el acetato de etilo, el agua y por último la acetona. Para los carotenoides, el acetato de etilo es el solvente mejor actúa para su extracción, le sigue el metanol, el hexano y por último el agua. En cuanto a los polifenoles, especialmente los taninos el metanol es el mejor solvente, le sigue el etanol, el agua y el isopropil, por último tenemos el hexano, acetato de etilo, acetona y éter de petróleo. Con respecto a los flavonoides los mejores solventes son el acetato de etilo, el etanol y el hexano. En la tabla 7, se puede apreciar los materiales extraíbles que mejor extrae cada solvente de acuerdo a la información reportada anteriormente. Tabla 8. Selectividad de extracción de biocompuestos según el solvente Solvente Biocompuestos Agua Taninos Metanol Taninos- carotenoides – Flavonoides Etanol Taninos- flavonoides Acetona Polifenoles Acetato de etilo Carotenoides - Flavonoides Hexano Flavonoides Po la ri da d 41 Teniendo la posibilidad de extraer biocompuestos antioxidantes en un sistema bifásico como el que se usó experimentalmente, acetato de etilo y agua, se podría obtener dos fases ricas en compuestos antioxidantes que pueden tener aplicación en la industria cosmocéutica. Para este caso se tendría la fase de agua rica en taninos y la fase con acetato de etilo rica otros componentes como los carotenoides. Este tipo de solventes podrían ser muy útiles para utilizar los extractos en diferentes productos. De acuerdo a la Tabla 8, el metanol es el solvente que mayor cantidad de biocompuestos extrae, pero no es viable para usar en el caso de extracción de polifenoles para un fin cosmocéutico porque es considerado altamente tóxico para las personas. No obstante, se observa que el etanol también es un buen solvente para extraer tanto taninos como flavonides y como dicho anteriormente, al diluirlo con agua mejora el rendimiento de la extracción. Por añadidura, (Rivas, 2016) observó que el etanol y el agua, desde el punto de toxicidad, son más seguros para trabajar en la industria alimenticia que otros solventes orgánicos, esto quiere decir que igualmente estos solventes van a ser amigables para utilizarlos en un producto de la industria cosmoséutica. Por ende, se puede decir que el etanol disuelto en agua es el mejorsolvente para obtener un extracto de biocompuestos antioxidantes de la manzana del marañón con aplicación en producto cosmocéutico. Luego de la obtención del extracto, es mejor realizar la eliminación del solvente para obtener un extracto más concentrado. Un método que se podría utilizar para obtener el extracto es la concentración al vacío. Este es un procedimiento con el que se puede simultanear el proceso de separación y de concentración. Por un lado permite la evaporación del solvente, y por el otro la concentración del principio activo (Condorchem Ibérica). Además, todo el proceso se lleva a cabo a temperaturas entre los 25 ºC y 30 ºC para no alterar los extractos. 4.7 Formulación emulsión para la piel grasa Las cremas son una mezcla de agua y sustancias aceitosas que se mezclan, esto sucede gracias a los emulsionantes. Hay dos tipos de cremas, las lipófilas y las hidrófilas. Las primeras son emulsiones de agua en aceite, donde el agua se evapora y el aceite es absorbido por la piel. Las segundas son emulsiones de aceite en agua, en ellas el agua se pierde. Su poca cantidad de grasa es perfecta para que la piel esté protegida de cualquier suciedad (García, Roig, & 42 Rebollar, 2015). La piel grasa se caracteriza por tener un exceso de sebo, lo que es un aspecto brillante, con los poros de la piel dilatados y la presencia de espinillas y puntos negros. Esta piel es muy sensible y uno de los problemas más frecuentes de la piel grasa es la presencia de acné (Pharmablog , 2013). Para este tipo de pieles es mejor elegir una buena crema hidratante que sea libre de aceites, en otras palabras, que tenga mayor proporción de agua que de aceite (nuevatribuna.es, 2018). Por otro lado, existen las emulgeles que son una emulsión gelificada en la cual se encuentra una fase de agua y otra de aceite, pero en pequeña proporción, con un agente gelificante (Corredor, 2013). Los gelificantes son sustancias que son capaces de formar estructuras tridimensionales en un medio líquido, y esto hace que se forme una especie de gel en el producto (Juvé, Viscasillas, & Del Pozo, 2007). Algunos gelificantes que se utilizan en la formulación cosmética son Carbómeros, Poliacrilatos de glicerina, Alquil acrilatos reticulados, Poliacrilamidas, Polímeros acrílicos, Silice, Metil celulosa y Goma guar. La propuesta de realizar un producto cosmocéutico, en este caso una emulgel, para la piel grasa viene de las propiedades de los componentes de interés extraíbles de la manzana del marañón. El más importante, son los taninos, que como dicho anteriormente, tiene propiedad astringente la cual ayuda a controlar los niveles de grasa en la piel. La búsqueda de las formulaciones de crema fue hecha solo para pieles grasas, o acné. En ella se anotaron los componentes que se usan, su cantidad y la función que cumplen en la crema. Esto se puede ver en la tabla siguiente. Tabla 9. Formulaciones de cremas #Formulación Componentes %w/w Función Referencia 1 Parafina 16 Emoliente (Zaman & Akhtar, 2013) ABIL® EM 90: 3 Emulsionante Extracto 5 Propiedades Agua destilada 76 Solvente 2 Natrosol HHR 250 1 Espesante (McCook & Stephens, 2005) Etanol SD 40 50 Aditivo Alcanfor 0,4 Lipolítico hipertérmico 43 Diphenhydramine HCl 2 Agente espesante Phenonip 1 Agente antimicrobiano Agua destilada 40.6 disolvente Extracto 5 Cashew apple 3 Diphenhydramine HCl 2 Agente astringente (McCook & Stephens, 2005) SYSTEM (glicoles y etanol) 20 Agente antimicrobiano/emulsifican te Natrosol HHR 250 (1% solucion) 45 Espesante Metilsulfonilmetan o 5 Controldor de viscosidad Dry Flo Starch 10 Modificador de estética Hidrolita-5 (pentilenglicol) 5 Conservante Etanol SD 40 10 Emoliente Phenonip 0.3 Aditivo Fragancia 0.07 Conservante antimirobiano Agua destilada 2.63 Disolvente 4 Extracto 0.5 Propiedad astringente (flavonoides) (Camos, Cruz, & Fatima, 2020) Alcohol cetílico 17,32 Emoliente Ácido esteárico 6,66 Emulsificante Cutina 10 Emoliente Propil parabeno 0.2 Estabilizante Lauril Sulfato de Sodio 6.66 Surfractante Propilenglicol 6.66 Emulsificante 44 5 Alcohol cetílico 2.1 Emoliente (Flynn & Pitkin, 1985) Propilenglicol 1 Emilsificante citrato de sodio 1 Buffer propilparabeno 0.25 Estabilizante Lauril Sulfato de Sodio 0.5 Surfractante Sílice pirógena 2 regulador de viscosidad Agua destilada 83.15 disolvente Peróxido de benzoilo 10 Bactericida 6 Divinyldimethicon e 6.8 Matificante (Stork, Arif, & Mutti, 2006) Polisorbato 20 0.5 Emulsionante Lactato de sodio 10 Emoliente Agua 36.0674 Solvente Glicerina 41.499 Emoliente-Humectante Ácido cítrico 0.1666 Esfoliante Metilparabeno 0.2 Estabilizante Perfume 0.017 Sustancia aromatizante Cloruro de sodio 0.75 Conservante antimicroviano Porpilenglicol 4 Emulsificante 7 Fracción de taninos 1 Extracto (A.Vijayalakshm i, Tripura, & Ravichandiran, 2010) Aceite parafina 16 Emoliente ABIL- M 90 3.5 Surfractante Agua 79.5 Disolvente 8 ácido esteárico 10 Emulsificante 45 alcohol cetílico 4 Emoliente (Sekar & Abdul, 2017) parafina líquida 4 Emoliente glicerina 5 Humectante metil parabeno 0.05 Conservante antimicrobiano thiethanolami 0.05 Espesante Agua destilada 71.9 Solvente Extracto 5 Propiedades 9 Nicotinato de metilo 1 Tonico (Scivoletto, 2001) Niacina 1 Vitamina B3 Aloe vera gel 45 Antiséptico Ácido glicólico 20 alfahidroxiácido Glicerina 1.8 disolvente DMDM hidantoína 0.25 Emoliente EDTA tetrasódico 0.15 Estabiliza viscosidad Vitamina E 0.1 "Antiarrugas" Polisorbato-20 1 emulsionante Aminoácidos de seda 0.1 Proteína Colágeno hidrolizado 0.1 Proteína Agua destilada 29.5 disolvente 10 Ácido esteárico 10 Emulsificante (Mohiuddin, 2019) Aceite mineral 5 Emoliente Vaselita 2 Emoliente Alcohol cetoestearílico 1.5 Estabilizador Miristato de isopropilo 3 Emulsificante Monolaureato de sorbitano 2 Lubricante 46 Glicerina 6,5 Emoliente Na-Lauryl SO4 5 Surfractante Trietanolamina 1.5 Espesante Polioxietileno 2 Estabilizador Agua 61.5 Solvente 11 Ácido esteárico 24.2 Emulsificante (Abbasi, y otros, 2010) Alcohol cetílico 1.2 Emulsificante Amina de trietnol 1.32 Espesante Propilenglicol 0.95 Emulsificante Isopropil miristato 1.2 Emulsificante Glicerina 2 Emoliente Sulfur 1.9 Exfoliante Bórax 1.9 Fungicida Vitamina E 0.56 Antioxidante Miel 3.5 Emoliente Mentol 0.76 Proporciona frescura Agua destilada 49.95 Solvente Extractos 8.8 Emoliente Aloe vera 1.76 Antiséptico Fragancia qs - De las formulaciones anteriores, hay componentes que tienen propiedades que ayudan a controlar la grasa en la piel o que se utilizan para este tipo de piel. En la primera formulación se destaca la parafina líquida que es un aceite mineral refinado a partir del petróleo, es una especie de cera plástica que tapona los poros evitando la transpiración, también retiene la pérdida de la hidratación y deja una piel suave, tersa y uniforme. De la formulación #2 tenemos al Ancafor, que tiene una función de regular el exceso de secreción sebácea, es un antiséptico lo que hace que sea ideal para aquellas personas que tengan piel grasa, también actúa como antiinflamatorio natural, por lo que ayudará a reducir la inflamación del acné y el enrojecimiento (Muñoz, 2020). En esta formulación, también se tiene el componente Diphenhydramine HCL que cumple una función en este caso de tener actividad supresora de sebo, el cual es producido por las glándulas sebáceas y producen la grasa en la piel y en el cuero cabelludo. El octenilsuccinato de almidón de aluminio, este reduce la grasa percibida de las formulaciones. En la formulación #3 tenemos al 47 Diphenhydramine HCL de la misma referencia
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