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266 | AFINIDAD LXXIX, 595 *Corresponding author: pam11@um,es Contenido en metilxantinas y estabilidad oxidativa de diferentes muestras comerciales de bebida de café Cristina Veracruz-Dólera 1; Pedro Andreo-Martínez 1, 2, *; Nuria García-Martínez 1, 2; Salvadora Martínez-López 1; Luis Almela 1 1Departamento de Química Agrícola, Geología y Edafología, Universidad de Murcia, Campus de Espinardo, Murcia 30100 España. 2Departamento de Ingeniería Química, Universidad de Murcia, Campus de Espinardo, Murcia 30100 España. Methylxanthine content and stability oxidation of different commercial samples coffee drink Contingut en metilxantines i estabilitat oxidativa de diferents mostres comercials de beguda de cafè RECEIVED: 5 FEBRUARY 2021; REVISED: 19 APRIL 2021; ACCEPTED: 19 APRIL 2021 ABSTRACT The present work studies the caffeine, theophylline and theobromine content, and the antioxidant ca- pacity of 7 samples of commercial coffee drinks and their decaffeinated analogues prepared in an espresso machine. Methylxanthines were determined by high performance liquid chromatography and oxidative stability was analyzed using the 2,2-diphenyl-1-pic- rylhydracil free radical method. The mean value of caffeine in decaffeinated coffee was 2.94 ± 0.40 mg/40 mL and 95.19 ± 0.40 mg/40 mL in non-decaffeinated coffee, showing a mean decaffeination yield of 96.99%. The mean value of theophylline in decaffeinated and caffeinated coffee was 1.31 ± 0.06 mg/40 mL and 1.40 ± 0.06 mg/40 mL, respectively, while the mean value of theobromine in decaffeinated coffee was 1.02 ± 0.07 mg/40 mL and 1.25 ± 0.07 mg/40 mL for non-decaffein- ated coffee. The mean value of the oxidative stability index in decaffeinated coffee was 41.77 ± 0.05 mg-1 and 36.90 ± 0.05 mg-1 for non-decaffeinated coffee. Although the decaffeination process can remove compounds with antioxidant capacity, caffeinated coffees showed lower antioxidant activity than decaffeinated coffees. Therefore, future studies should continue to study the antioxidant capacity of the coffee drink. Keywords: Coffee; Antioxidant capacity; HPLC; DPPH; Methylxanthines RESUMEN El presente trabajo estudia el contenido de cafeína, teofilina y teobromina, y la capacidad antioxidante de 7 muestras de bebidas comerciales de café y sus análogos descafeinados preparadas en una cafetera expreso. Las metilxantinas fueron determinadas mediante croma- tografía líquida de alta resolución y la estabilidad oxi- dativa se analizó utilizando el método del radical libre 2,2-difenil-1-picrilhidracilo. El valor medio de cafeína en el café descafeinado fue 2,94 ± 0,40 mg/40 mL y 95,19 ± 0,40 mg/40 mL en el café sin descafeinar, mostrando un rendimiento medio de descafeinización del 96,99 %. El valor medio de teofilina en el café descafeinado y con cafeína fue de 1,31 ± 0,06 mg/40 mL y de 1,40 ± 0,06 mg/40 mL, respectivamente, mientras que el valor medio de teobromina en el café descafeinado fue 1,02 ± 0,07 mg/40 mL y 1,25 ± 0,07 mg/40 mL para el café sin descafeinar. El valor medio del índice de estabili- dad oxidativa en el café descafeinado fue 41,77 ± 0,05 mg-1 y 36,90 ± 0,05 mg-1 para el café sin descafeinar. Aunque el proceso de descafeinización puede eliminar compuestos con capacidad antioxidante, los cafés con cafeína mostraron menor actividad antioxidante que los cafés descafeinados. Por lo tanto, futuros estudios deberían seguir estudiando la capacidad antioxidante de la bebida de café. Palabras clave: Café; Capacidad antioxidante; HPLC; DPPH; Metilxantinas mailto:pam11@um.es JANUARY - MARCH 2022 | 267 RESUM El present treball estudia el contingut de cafeïna, teofilina i teobromina, i la capacitat antioxidant de 7 mostres de begudes comercials de cafè i els seus anàlegs descafeïnats preparades en una cafetera exprés. Les metilxantines van ser determinades mitjançant croma- tografia líquida d’alta resolució i l’estabilitat oxidativa es va analitzar utilitzant el mètode de l’radical lliure 2,2-difenil-1-picrilhidracilo. El valor mitjà de cafeïna en el cafè descafeïnat va ser 2,94 ± 0,40 mg/40ml i 95,19 ± 0,40 mg/40 ml en el cafè sense descafeïnar, mostrant un rendiment mitjà de descafeinització de l’96,99%. El valor mitjà de teofilina en el cafè descafeïnat i amb cafeïna va ser 1,31 ± 0,06 mg/40 ml i de 1,40 ± 0,06 mg/40 ml, respectivament, mentre que el valor mitjà de teobromina en el cafè descafeïnat va ser 1,02 ± 0,07 mg/40 mL i 1,25 ± 0,07 mg/40 ml per al cafè sense des- cafeïnar. El valor mitjà de l’índex d’estabilitat oxidativa en el cafè descafeïnat va ser 41,77 ± 0,05 mg-1 i 36,90 ± 0,05 mg-1 per al cafè sense descafeïnar. Tot i que el procés de descafeinització pot eliminar compostos amb capacitat antioxidant, els cafès amb cafeïna van mostrar menor activitat antioxidant que els cafès descafeïnats. Per tant, futurs estudis haurien de seguir estudiant la capacitat antioxidant de la beguda de cafè. Paraules clau: Cafè; Capacitat antioxidant; HPLC; DPPH; metilxantines 1. INTRODUCCIÓN El grano de café es el fruto de la planta perteneciente al género Coffea, de la familia Rubiaceae. Las dos especies más importantes son Coffea arabica y Coffea canephora, comúnmente conocida como robusta. El café arábica se encuentra en terrenos tropicales elevados (> 600 m), principalmente en América Latina, África Oriental e India, mientras que el café robusta se encuentra en áreas bajas, como África occidental, Indonesia, Vietnam y Brasil. El café arábica es menos amargo, con mejor aroma, más apreciado por los consumidores y dos veces más caro que el café robusta 1. El café es una de las bebidas más populares del mundo cuyo consumo estimado es de cuatrocientos millones de tazas anuales. El comercio de café creció rápidamente durante el siglo XX y las importaciones brutas se cuadriplicaron en el siglo XXI cuando pasaron de 33 millones de sacos en 1949 a 132 millones de sacos en 2010. En el año 2015-2016, se consumieron alrededor de 151,3 millones de sacos de café de 60 kg en todo el mundo 2. De esta manera, el consumo de café crece constantemente a un promedio anual del 2 % 3. La composición del grano de café verde está dominada por carbohidratos, incluyendo polisacáridos, lípidos como triglicéridos (75 %), esteroles, ácidos grasos, diterpenos pentacíclicos, alcoholes diterpénicos, ésteres diterpénicos y triterpénicos y ceramida. Los tocoferoles (α, β, γ) también están presentes junto con los tocotrienoles. El contenido de proteínas incluye aminoácidos libres, principalmente asparagina, ácido glutámico, alanina, ácido aspártico y lisina. El café contiene varias especies de xantinas como la cafeína [1,3,7-trimetil- 1H-purina- 2,6(3H,7H)-diona], teofilina [1,3-dimetil-7H-purina-2,6-diona] y teobromina [3,7-dihidro-3,7-dimetil-1H-purina-2,6-diona] 1. Estas metilxantinas son estructuralmente similares donde la teofilina y la teobromina son isómeros y su grupo NH está sustituido en la cafeína por un grupo N-CH3 (Figura 1). N N N N O O O N N NHN O NN O NH N O Cafeína Teofilina Teobromina Figura 1. Estructura química de las diferentes metilxantinas. Otros compuestos incluyen ácidos alifáticos volátiles y ácidos no volátiles, trigonelina (ácido N-metil nicotínico) y ácido nicotínico. Los granos de café también contienen una variedad de diferentes elementos, como K, Mg, Ca, P, S, Pb, Cr, Zn, Cu, Ni y Fe. Se han detectado también gran cantidad de compuestos fenólicos entre los que se incluyen los ácidos clorogénicos como el ácido cafeico, ferúlico y p-cumárico, el ácido cafeoilquínico, el ácido ferúlico y el di-cafeoilquínico conjugado con tirosina, triptófano o fenilalanina, siendo el ácido 5-O-cafeoilquínico el más abundante. Las proantocianidinas también están presentes en el café. El contenido de estos compuestos varía y puede estar influenciado por las distintas variedades de café, las condiciones geográficas de cultivo y las condiciones de tostado 1.El proceso de tostado del café se lleva a cabo a una temperatura de aproximadamente 200 °C durante menos de 20 min con una variabilidad constante en el tiempo y la temperatura según el sistema de elaboración adoptado que se caracteriza por tres pasos. El primero se refiere a la deshidratación del producto, seguido del proceso de tostado que, principalmente a través de las reacciones de Maillard y Strecker, produce el aroma del café, así como el color y composición típica de los granos. Durante este proceso, los precursores se transforman y se desarrolla el sabor del café y se potencian sus cualidades organolépticas. Por último, se realiza un enfriamiento rápido para detener el tostado utilizando aire o agua como agente de enfriamiento. La trigonelina, el segundo alcaloide principal del café, es un alcaloide piridínico que se deriva de la metilación del átomo de nitrógeno del ácido nicotínico. El proceso de tostado provoca la degradación térmica de este compuesto y la formación de una serie de compuestos volátiles como piridina y derivados del pirrol, ácido nicotínico, éster metílico del ácido nicotínico y muchos compuestos diferentes. Estos compuestos son responsables de la formación del sabor y la producción de aroma del café 3. Desafortunadamente, durante este paso también se pueden desarrollar algunos compuestos tóxicos 268 | AFINIDAD LXXIX, 595 como los hidrocarburos aromáticos policíclicos o la acrilamida 4. El proceso de descafeinado del café se realiza antes del tostado, donde la extracción de la cafeína con disolventes orgánicos es el método de descafeinado más común y barato. Los disolventes más utilizados son diclorometano o acetato de etilo, asociado con el uso de agua o vapor de agua antes y después de la extracción. El proceso de descafeinización, especialmente cuando se utiliza agua como disolvente, provoca la pérdida no solo de los componentes del sabor del café, sino que también puede perder los ácidos clorogénicos y sus compuestos relacionados, entre otros 5. Por otro lado, el café es una de las bebidas más populares y apreciadas en todo el mundo por su agradable sabor y sus propiedades estimulantes 6. Existen varios tipos de bebidas de café, siendo el café expreso uno de los tipos más conocidos y consumidos, ya sea elaborado en casa o en bares 7. Además, el café es un alimento funcional con propiedades antioxidantes ya que ha sido demostrado que reduce la incidencia de cáncer, diabetes y enfermedades hepáticas, protege contra la enfermedad de Parkinson y reduce el riesgo de mortalidad. El extracto de grano de café verde muestra un efecto hipotensor en ratas y reduce la grasa visceral y el peso corporal. Estas propiedades están relacionadas con compuestos bioactivos, no solo ácidos clorogénicos y sus derivados, sino también cafeína, teofilina y teobromina, cafestol, kahweol, tocoferoles y trigonelina. Se ha demostrado que el consumo de una cantidad moderada de cafeína (110-345 mg/día) parece estar asociada con un efecto beneficioso para la salud humana 3. En este sentido, la actividad antioxidante de los granos de café depende de las características de los compuestos fenólicos, especialmente los ácidos clorogénicos que poseen capacidad antioxidante in vitro e in vivo, y estos fenoles son altamente biodisponibles in vitro 5. Una de las metodologías más utilizadas para determinar la actividad antioxidante de los preparados de café es el método del radical libre 2,2-difenil-1- picrilhidracilo (DPPH) 1,8,9,10. Por lo tanto, el objetivo del presente trabajo es determinar el contenido de las metilxantinas, cafeína, teofilina y teobromina y la capacidad antioxidante de bebidas de café espeso preparadas con siete muestras comerciales de café junto a sus análogos descafeinados. 2. MATERIAL Y MÉTODOS 2.1 Material vegetal Catorce muestras comerciales de café molido, elegidas de forma aleatoria, fueron utilizadas para estudiar su contenido de metilxantinas y su capacidad antioxidante. Dos de ellas estaban declaradas como 100 % arábica, una de tueste natural (CN1) y otra de tueste natural descafeinado (CD1). Los restantes tipos de café natural (CN2 a CN5), o natural descafeinado (CD2 a CD5) no tenían declaración de composición. Se analizaron también dos muestras de café mezcla natural con torrefacto (CM1 y CM2) y sus homólogas descafeinadas (CMD1 y CMD2). La bebida de café fue preparada utilizando una cafetera doméstica tipo expreso de la marca Solac profesional, cuya temperatura de salida del extracto fue 90 ºC a una presión de 15 bares. El proceso de preparación fue realizado a partir de 7,50 ± 0,01 g de café molido y 40,00 ± 0,50 mL de agua comercial de mineralización débil. 2.2 Análisis cromatográfico de metilxantinas por HPLC (cromatografía líquida de alta resolución) El análisis cromatográfico se realizó utilizando un cromatógrafo líquido de alta resolución Jasco (Tokio, Japón) acoplado a un Detector UV/Vis Water (California, USA), calibrado a 278 nm, que es la absorbancia máxima de las metilxantinas. Para la adquisición y procesado de datos se utilizó un ordenador y el software cromatográfico ChromNav (Workstation Jasco ChromNav 1,18,03). La columna cromatográfica utilizada fue la Kinetex® C18 100 Å (100 x 4,6 mm, 2,6 μm) de Phenomenex (Torrance, USA). La cantidad de muestra inyectada fueron 20 µL y la fase móvil fue agua/acetonitrilo (95/5 v/v) con un flujo de 1 mL/min en modo isocrático. Teobromina Teofilina Cafeína Teobromina Teofilina Cafeína Teobromina Teofilina Cafeína Teobromina Teofilina Cafeína 0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0 Retention Time [min] 0 200000 400000 In te ns ity Mult c34Tf41Tb46.6 - CH2 Mult c17Tf20.5Tb23 - CH2 Mult c8.5Tf10.25Tb11.5 - CH2 Mult c4.25Tf5.12Tb5.7 - CH2 Figura 2. Cromatograma del patrón múltiple de las metilxantinas. Las metilxantinas se identificaron y cuantificaron mediante estándar externo. Para ello se prepararon varios patrones de metilxantinas con el mismo disolvente utilizado en la fase móvil en el rango 2-300 ppm. Los reactivos estándar utilizados fueron cafeína anhidra Sigma (Barcelona, España), teobromina anhidra Fluka (Barcelona, España), teofilina anhidra Fluka (Barcelona, España), acetonitrilo grado HPLC Scharlau (Barcelona, España) y agua miliQ. Para construir la curva de calibración se utilizaron patrones de las tres metilxantinas a diferentes concentraciones y una mezcla de los tres patrones para obtener un patrón múltiple (Figura 2). Para la preparación de las muestras se tomaron 10 mL de bebida de café que fueron microfiltrados con un filtro de 20 μm de tamaño de poro y se diluyeron 10 veces con agua MilliQ. El vial cromatográfico se llenó con 1 mL de muestra microfiltrada y diluida para ser analizado en el cromatógrafo líquido de alta resolución. Los resultados de la cantidad de las diferentes metilxantinas fueron expresados como mg/40 mL, cantidad correspondiente a una taza de café. JANUARY - MARCH 2022 | 269 2.3 Análisis de la capacidad antioxidante Para estudiar la capacidad antioxidante se utilizó el método descrito por Almela, Sánchez-Muñoz 8. Este ensayo evalúa la capacidad antioxidante de una sustancia para neutralizar el radical libre DPPH que es estable en disolución metanólica y presenta una coloración violeta intensa, con un máximo de absorbancia a 517 nm, de manera que su concentración puede ser determinada por métodos espectrofotométricos. La actividad antioxidante se evalúa midiendo la disminución de absorbancia de la disolución de DPPH tras la adición del compuesto antioxidante capaz de ceder un radical de hidrógeno para convertirlo en la forma no radical DPPH-H. Para ello, se preparó una solución metanólica de DPPH con una concentración de 0,1 nM. Las muestras de bebida de café fueron disueltas en metanol (1/5 v/v), se centrifugaron durante 5 minutos a una velocidadde 150 rpm, se recogió el sobrenadante y se microfiltró con un filtro de 0,45 µm. El protocolo consistió en preparar 2 cubetas espectrofotométricas de 10 mm de camino óptico con 3 mL de metanol y otras 2 cubetas con 3 mL de la disolución de DPPH. La Abs a 517 nm de la primera cubeta con metanol se utilizó como blanco. A la segunda cubeta con metanol se le añadieron 20 µL del extracto de café diluido y se midió su Abs a t = 0 y t = 30 min para comprobar la posible degradación del extracto. A una de las cubetas con la solución de DPPH se le añadieron 20 µL de metanol, midiendo a continuación su Abs a t = 0 y t = 30 min. Esta medida se utilizó para comprobar la posible degradación espontánea del radical DPPH a lo largo del tiempo. A la cuarta cubeta que contiene solución metanólica de DPPH se le añadieron 20 μL del extracto de café diluido y se midió la disminución de Abs después de los 30 minutos de tiempo de reacción, que es el tiempo estimado para que ocurra la inactivación de la reacción. Siguiendo la forma descrita, la capacidad antioxidante del extracto de café fue expresada como el Índice de Estabilidad (IE), que se refiere a 1 mg de café molido por cada extracto de café, definido mediante la Ecuación 1: (1) Siendo: (2) (3) (4) (5) ʄ es el factor que ajusta el IE referido al peso del café extraído (1 mg) y se calcula mediante la Ecuación 6: (6) Donde 40 mL es el volumen de bebida de café preparado, 7500 son los mg de café molido usados para preparar la bebida de café, 0,02 mL es el volumen de bebida de café utilizado en el análisis y 5 es la dilución del extracto de café. 2.4 Análisis estadístico Todos los análisis fueron realizados por triplicado y los valores obtenidos, excepto el rendimiento de desca- feinización, se expresaron como la media ± desviación estándar. Para conocer la influencia del tipo de muestra y tipo de café (descafeinado y no descafeinado) sobre la concentración de metilxantinas y el índice de esta- bilidad se realizó un análisis de varianza ANOVA de dos factores para cada parámetro analizado. Además, para valorar las diferencias entre muestras se realizó la prueba post-Hoc de Tukey. Las diferencias estadísticas fueron consideradas para p<0,05. El programa estadís- tico utilizado para llevar a cabo todos los análisis fue SYSTAT versión 12,0. 3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Tabla 1. Concentraciones de cafeína, teofilina y teobromina e índice de estabilidad de las diferentes muestras de café. Muestra Cafeína (mg/40mL) Teofilina (mg/40mL) Teobromina (mg/40mL) Rendimiento de descafeinización (%) IE (mg-1) CM1 85,89 ± 0,88 1,62 ± 0,20 1,67 ± 0,16 97,43 43,2 ± 0,2 CMD1 2,21 ± 0,05 1,60 ± 0,26 1,65 ± 0,22 46,7 ± 0,2 CN4 83,00 ± 2,73 1,01 ± 0,10 1,22 ± 0,19 97,43 35,6 ± 0,3 CD4 2,13 ± 0,04 1,09 ± 0,17 0,82 ± 0,17 40,0 ± 0,3 CN5 101,3 ± 2,3 1,10 ± 0,10 1,15 ± 0,55 95,94 32,2 ± 0,2 CD5 4,11 ± 0,48 1,38 ± 0,28 1,66 ± 0,32 38,3 ± 0,3 CN1 110,92 ± 3,03 1,63 ± 0,21 1,12 ± 0,15 98,62 31,9 ± 0,3 CD1 1,53 ± 0,08 1,00 ± 0,18 0,77 ± 0,11 39,5 ± 0,2 CN2 93,62 ±1,50 1,36 ± 0,36 1,11 ± 0,38 96,99 34,5 ± 0,2 CD2 2,82 ± 0,16 1,01 ± 0,23 0,99 ± 0,46 39,5 ± 0,2 CM2 93,53 ± 2,66 1,19 ± 0,26 1,50 ± 0,19 96,41 42,5 ± 0,3 CMD2 3,36 ± 0,19 1,61 ± 0,19 0,55 ± 0,56 44,7 ± 0,4 CN3 98,10 ± 3,84 1,67 ± 0,22 0,99 ± 0,39 95,46 38,4 ± 0,2 CD3 4,45 ± 0,35 1,51 ± 0,48 0,70 ± 0,33 43,7 ± 0,2 La Tabla 1 muestra las concentraciones de cafeína, teofilina y teobromina, expresadas en mg/40mL, junto con el porcentaje de descafeinización y el índice de es- tabilidad (mg-1) encontrados en las muestras de bebida de café seleccionadas en este estudio. En la Tabla 2 se 270 | AFINIDAD LXXIX, 595 recogen los resultados del análisis estadístico ANOVA sobre el efecto de las 7 muestras de bebida de café, tipo de café y su interacción sobre la concentración de las diferentes metilxantinas y el índice de estabilidad. 3.1 Contenido de cafeína El mayor contenido en cafeína fue encontrado en la muestra CN1 (110,92 ± 3,03 mg/40 mL), seguido de CN5 (101,30 ± 2,30 mg/40 mL) y CN3 (98,10 ± 3,84 mg/40 mL). El valor medio de cafeína, considerando todas las muestras, en el café descafeinado fue de 2,94 ± 0,40 mg/40 mL y de 95,19 ± 0,40 mg/40mL para el café sin descafeinar, mostrando un rendimiento medio de descafeinización del 96,99 %. La tabla 2 muestra que todas las diferencias encontradas fueron significativas, como puede ser observado en su p-valor. Las cantidades de cafeína encontradas en los cafés con cafeína de este estudio fueron similares a las publicadas en otros trabajos científicos. Por ejemplo, Ludwig, Sanchez 11 encontró que la cantidad de cafeína del café tipo expreso se encontraba entre 0,39 y 5,75 mg/mL, Santini, Ferracane 12 encontró un contenido medio de cafeína de 3,33 mg/mL y Gonzalez de Mejia and Ramirez-Mares 13 reportó que la cantidad de cafeína del café tipo expreso varía de 50 a 150 mg/30 mL. Las cantidades de cafeína encontradas en los cafés descafeinados también fueron similares a las encontradas en otras publicaciones científicas ya que indicaron que las bebidas de café descafeinado presentan un contenido de cafeína de 2 a 5 mg/30 mL 13. Tabla 2. Resultados ANOVA del efecto de 7 muestras de café, tipo café y su interacción sobre la concentración de metilxantinas (cafeína, teofilina y teobromina) y el índice de estabilidad. Variables Cafeína p-valor Muestras CM1a CM2b CN1c CN2b CN3bd CN4a CN5d 0,000 Tipos Sin descafeinara Descafeinadob 0,000 Muestras x Tipos 0,000 Variables Teofilina p-valor Muestras CM1a CM2ab CN1ab CN2ab CN3a CN4bc CN5ab 0,015 Tipos Sin descafeinara Descafeinadoa 0,357 Muestras x Tipos 0,161 Variables Teobromina p-valor Muestras CM1a CM2b CN1b CN2ab CN3b CN4b CN5ab 0,002 Tipos Sin descafeinara Descafeinadob 0,031 Muestras x Tipos 0,038 Variables Índice de estabilidad p-valor Muestras CM1a CM2b CN1c CN2d CN3e CN4f CN5c 0,000 Tipos Sin descafeinara Descafeinadob 0,000 Muestras x Tipos 0,000 *Un p-valor igual o menor a 0,05 indica que existen diferencias significativas (IC=95%). *Letras diferentes como exponente muestran diferencias significativas según la prueba comparativa de Tukey. El contenido de cafeína y otras metilxantinas en el café depende de numeroso de factores, entre los que se incluyen las variaciones en las materias primas (especies, origen y rasgos genéticos), prácticas agrícolas (tradicionales o ecológicas), técnicas de postcosecha, duración y condiciones de almacenamiento, grado de tostado (ligero, medio o alto), tipo de proceso de tostado (estándar o torrefacto), tipo de café comercial (tostado molido, mezcla con torrefacto o instantáneo) y/o método de molienda y preparación (hervido, filtrado o expreso) 1,3. Por otro lado, la muestra CN1 mostró el mayor rendimiento de descafeinzación (98,62 %), seguida de CM1 y CN4 (97,43 %) y CN2 (96,99 %). Como puede ser observado, existen pequeñas diferencias en el rendimiento de descafeinización que depende ampliamente del proceso utilizado para ello. Al tratarse de muestras comerciales, se desconoce el proceso concreto de descafeinado de las mismas y/o la variedad de café, lo que impide conocer la razón exacta de las pequeñas diferencias encontradas. 3.2 Contenido en teofilina La muestra CN3 mostró el mayor contenido de teofilina (1,67 ± 0,22 mg/40 mL), seguido de CN5 (1,63 ± 0,21 mg/40 mL) y CM1 (1,62 ± 0,20 mg/40 mL). El valor medio del contenido de teofilina en las muestras de café descafeinado fue de 1,31 ± 0,06 mg/40mL y de 1,40 ± 0,06 mg/40mL en las muestras de café sin descafeinar. Como puede ser observado en su p-valor de la Tabla 2, las diferencias no fueron significativas. La cantidad de teofilinaencontrada en los cafés con cafeína en otros trabajos científicos se encuentra comprendida entre 8,90 mg/100 g 14 y 6,70 ± 2,80 mg/100 g 15 de extracto seco de bebida de café. Por lo tanto, los resultados de este estudio fueron del mismo orden que los publicados en la literatura científica. Lo mismo ocurre con los cafés descafeinados ya que su contenido en teofilina suele ser de 9,20 ± 6,00 mg/100g de extracto seco de bebida de café 15. El proceso de descafeinización puede disminuir el contenido de otras metilxantinas como la teofilina e incrementar el contenido de otros compuestos como el ácido nicotínico en algunas variedades de café 3. Sin embargo, la disminución en la concentración de teofilina no fue observada en este trabajo. Al igual que en el caso de la cafeína, se desconoce el proceso concreto de descafeinado y las variedades concretas de los diferentes cafés estudiados, lo que impide conocer la razón por la cual el proceso de descafeinización no afectó al contenido de teofilina. 3.3 Contenido en teobromina Los mayores contenidos de teobromina fueron encontrados en las muestras CM1 (1,67 ± 0,16 mg/40 mL), CD5 (1,66 ± 0,32 mg/40 mL) y CMD1 (1,65 ± 0,22 mg/40 mL). El valor medio de teobromina en el café descafeinado, considerando todas las muestras, fue de 1,02 ± 0,07 mg/40mL y de 1,25 ± 0,07 mg/40mL para el café sin descafeinar. Como puede ser observado en su JANUARY - MARCH 2022 | 271 p-valor de la Tabla 2, las diferencias fueron significativas, aunque no demasiado acusadas. Los resultados para la concentración de teobromina encontrados en este estudio fueron del mismo orden que los encontrados en la literatura científica ya que ha sido publicado que el contenido de teobromina en las bebidas de café con cafeína se encuentran entre 9-17 mg/100 g 16 y 12,50 ± 1,20 mg/100 g 15 de extracto seco de bebida de café, mientras que el extracto seco de bebida de café descafeinado contiene alrededor de 9,40 ± 0,50 mg/100g de teobromina en el extracto seco de bebida de café 15. Todas las muestras de café descafeinado estudiadas, excepto CD5, mostraron un menor contenido de teobromina que su análogo con cafeína. Los factores que afectan al contenido de metilxantinas en el café han sido comentados en la sección de la cafeína junto con el hecho de que el proceso de descafeinado puede disminuir la cantidad de metilxantinas, tal y como ocurre en todas las muestras analizadas excepto para el caso de CD5 3. El caso del aumento del contenido de teobromina de la muestra CD5 podría ser explicado por el proceso de descafeinado y las variedades utilizadas para la preparación de los diferentes cafés estudiados. Sin embargo, al tratarse de muestras comerciales no se dispone de esta información lo que dificulta dilucidar un mecanismo concreto. 3.4 Capacidad antioxidante La muestra CMD1 mostró el mayor IE (46,70 ± 0,20 mg-1), seguida de CMD2 (44,70 ± 0,40 mg-1), mientras que las muestras que menor IE mostraron fueron CN2 (34,50 ± 0,20 mg-1) y CN5 (32,20 ± 0,20 mg-1). Considerando todas las muestras, el valor medio del IE en el café descafeinado fue de 41,77 ± 0,05 mg-1 y de 36,90 ± 0,05 mg-1 para el café sin descafeinar. De acuerdo con los p-valores de la Tabla 2, todas las diferencias fueron significativas. Como puede ser observado, las muestras de café descafeinado mostraron mayor IE que las muestras de café con cafeína en las 7 muestras de bebida de café estudiadas y la estabilidad oxidativa del café mezcla torrefacto fue significativamente mayor comparada con la del café natural. Estos resultados difieren a los publicados en otros trabajos encontrados en la literatura científica, donde las muestras de café con cafeína mostraron una capacidad antioxidante significativamente mayor que la del café descafeinado, utilizando el método DPPH 17,18. También ha sido publicado que no existen diferencias en la capacidad antioxidante entre el café con cafeína y el café descafeinado, utilizando también el método DPPH 1,19,20. Sin embargo, al igual que ocurre en el presente estudio, también existen investigaciones que encuentran una mayor capacidad antioxidante en los cafés descafeinados comparados con sus análogos con cafeína 21,22. Algunos estudios apuntan a que la eliminación de cafeína del café afecta negativamente su capacidad antioxidante, pudiendo provocar una disminución total del 25-30 % 22. Otros estudios concluyen que la cafeína no debe ser un componente esencial que contribuya a la actividad antioxidante ya que presenta propiedades antioxidantes como sustancia pura en diferentes ensayos, pero su actividad antioxidante aún no está clara en la matriz del café, donde pueden interferir muchos otros compuestos 17. Como dato, la correlación entre la actividad oxidante y el contenido de cafeína es de R2 = 0,16, siendo ésta muy baja 23. Además, en comparación con la cafeína, los bajos niveles de teobromina y teofilina que presentan los cafés no deben contribuir de forma significativa a la capacidad antioxidante 17. También ha sido publicado que la variación de la actividad antioxidante del café puede ser debida a la pérdida de ácido clorogénico durante el proceso de obtención de la bebida de café 19,24 y al grado de tostado ya que este proceso disminuye la actividad antioxidante 25. Sin embargo, el contenido en ácido clorogénico de las diferentes muestras de café no ha sido evaluado en este estudio y el grado de tostado es desconocido ya que se trata de muestras comerciales de café. Por lo tanto, futuros estudios son necesarios para esclarecer estos hechos. Por otro lado, la mayor capacidad antioxidante presentada por los cafés tipo mezcla con torrefacto encontrados en el presente trabajo también ha sido encontrada estudios similares. Este hecho puede ser debido a que la adición de azúcar al final del proceso de tostado con torrefacto podría intensificar el desarrollo de productos de la reacción de Maillard, como las melanoidinas, que son los principales contribuyentes al mantenimiento de la actividad antioxidante de las bebidas de café 21,26. 4. CONCLUSIÓN Este estudio evaluó el contenido de las metilxantinas cafeína, teofilina y teobromina y la capacidad antioxidante de siete bebidas comerciales de café tipo expreso junto a sus análogos descafeinados. El valor medio de cafeína en el café con cafeína fue de 95,19 ± 0,40 mg/40 mL, mientras que el café descafeinado mostró una concentración media de cafeína de 2,94 ± 0,40 mg/40 mL, con un rendimiento medio de descafeinización del 96,99 %. El valor medio de teofilina en el café con cafeína fue de 1,40 ± 0,06 mg/40 mL y el de los cafés descafeinados fue de 1,31 ± 0,06 mg/40 mL, mientras que el valor medio de teobromina en el café descafeinado fue de 1,02 ± 0,07 mg/40 mL y de 1,25 ± 0,07 mg/40 mL para el café sin descafeinar. Las concentraciones de las diferentes metilxantinas de las muestras estudiadas fueron del mismo orden que las encontradas en la literatura científica. El valor medio del índice de estabilidad oxidativa en el café descafeinado fue de 41,77 ± 0,05 mg-1 y de 36,90 ± 0,05 mg-1 para el café sin descafeinar. Las bebidas de café mezcla con torrefacto mostraron una mayor actividad antioxidante que las bebidas de café natural mientras que las bebidas de café con cafeína mostraron una menor actividad antioxidante que las bebidas de café descafeinadas. La mayor capacidad antioxidante presentada por los cafés descafeinados difiere a la publicada por la mayoría de los estudios. Por lo tanto, futuros estudios deberían seguir estudiando los mecanismos responsables de la capacidad antioxidante de la bebida de café junto a 272 | AFINIDAD LXXIX, 595 los posibles efectos de matriz que pueden enmascarar dicha capacidad antioxidante. 5. CONFLICTO DE INTERESES Los autores declaran que no hay conflicto de intereses. 6. REFERENCIAS 1. Parras, P.; Martínez-Tomé, M.; Jiménez, A. M.; Murcia, M. A. Antioxidantcapacity of coffees of several origins brewed following three different procedures Food Chem. 2007, 102, 582-592. 2. Spence, C.; Carvalho, F. M. The coffee drinking experience: Product extrinsic (atmospheric) in- fluences on taste and choice Food Qual. Prefer. 2020, 80, 103802. 3. Jeszka-Skowron, M.; Frankowski, R.; Zgoła-Grześkowiak, A. 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