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MEDIOS DE CULTIVO A partir del conocimiento del hábitat natural de un microorganismo , éste puede ser aislado y puede ser reproducido en el laboratorio, si se le aportan las necesidades para su crecimiento. Es necesario conocer de cada MO: Tipo trófico Temperatura de crecimiento Tipo respiratorio pH óptimo de crecimiento Un buen medio de cultivo es aquel que: ▪ Provee los elementos nutritivos indispensables en concentración adecuada. Para ello es indispensable conocer el hábitat del MO y su tipo trófico. ▪ Provee la cantidad de agua y sales necesarias. Se debe lograr una presión osmótica determinada que permita la entrada de nutrientes al interior de la célula. El medio de cultivo asegura una concentración de agua libre para el consumo de los MO (aw). ▪ Se encuentra exento de sustancias inhibidoras: una sustancia puede ser inhibidora para una especie bacteriana pero no para otra. ▪ Posee la consistencia deseada: los medios de cultivo se pueden dividir en: líquidos y sólidos. Un medio líquido puede transformarse en sólido por el agregado de agar, gelatina, albúmina de huevo, suero. Un medio solidificado con agar o gelatina puede revertirse a la forma líquida por calentamiento. La solidificación con otros agentes gelificantes es irreversible. ▪ Posee el pH adecuado: todos los medios de cultivo poseen un regulador de pH o tampón o buffer, que mantiene el pH dentro de ciertos límites dados por el rango de pH de desarrollo de los MO. Para esta finalidad pueden contener fosfatos o peptonas. ▪ Es estéril. COMPONENTES COMUNES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Los elementos requeridos por los MO en su ambiente natural son suplidos por el medio de cultivo por compuestos sencillos o complejos. AGUA: destilada o desionizada. Hidratante necesario para brindar la aw adecuada. En algunos casos se utiliza agua corriente. EXTRACTO DE CARNES MAGRAS: provee al medio C, N, minerales y vitaminas. Se comercializa en forma de polvo o pasta. PEPTONAS: son sustancias sin identidad química definida. Se obtienen por digestión parcial de las proteínas. Las peptonas utilizadas en bacteriología generalmente contienen proteasas, polipéptidos y aminoácidos. Sus nombres derivan del producto que les dio origen y de la metodología de obtención. Ej: casetona ( de caseína ), sojatona (de soja). Son fuente de N, C, regulan el pH y son fuente de energía. EXTRACTO DE LEVADURA: hidrolizado de células en cultivo de levadura. Es fuente de C, N y factores de crecimiento. AGENTES GELIFICANTES: solidifican al medio. AGAR: se extrae por hidrólisis ácida de algas rojas del género Gelidium. Es de naturaleza hidrocarbonada. Se expende en polvo y se solubiliza en agua a ebullición. Al enfriarse a 45-50 grados solidifica formando un gel inodoro e insípido. Químicamente es un heteropolímero de galactosa y ácido galacturónico. Ventajas: es sólido a la temperatura de incubación de los MO, revierte al estado líquido por calentamiento y no es atacado por la mayoría de los MO con los que se trabaja de rutina ( no lo utilizan como fuente de C). GELATINA: proteína obtenida por hidrólisis del colágeno. Funde a muy baja temperatura, por lo tanto no se puede utilizar para la incubación de MO mesófilos. Es atacada por muchos MO que la licúan (la utilizan como fuente de C) . Esto limita su uso como agente gelificante. Si se utiliza para evidenciar la capacidad proteolítica de un MO . Según su composición química los medios de cultivo se clasifican en: QUÍMICAMENTE DEFINIDOS O SINTÉTICOS: cada nutriente es aportado por una sustancia químicamente pura, de constitución definida. Se utilizan para estudios específicos de laboratorio. QUÍMICAMENTE INDEFINIDOS O COMPLEJOS: algunos de sus componentes son extractos vegetales, animales o microbianos, en una mezcla de ingredientes cuya concentración no se conoce con exactitud pero que suministra todos los nutrientes necesarios. Admiten el crecimiento en simultáneo de diferentes especies, aunque las mismas sean nutricionalmente exigentes. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO 1) COMUNES: permiten el crecimiento de un gran número de MO, con los que comúnmente se trabaja en el laboratorio. 2) ESPECIALES: se preparan con cierta finalidad. a) ENRIQUECIDOS O MEJORADOS: se obtienen a partir de un medio común al que se le agregan en exceso elementos nutritivos elegidos, de acuerdo a la necesidad. Permiten el crecimiento de MO exigentes en cuanto a sus requerimientos nutricionales, para los que un medio de cultivo común resulta deficiente. Ej: agregado de extracto de levadura, de sangre estéril, etc. b) SELECTIVOS: permiten el desarrollo de determinadas especies, a la vez que frenan la proliferación de la flora acompañante. Ésto se logra dando un determinado pH al medio, mediante la carencia de un determinado nutriente o con el agregado de una sustancia inhibidora al medio (colorantes, antibióticos, sales biliares, azida de sodio, alcohol feniletílico, etc.). bi) SELECTIVOS PARA ENRIQUECIMIENTO: son medios de cultivo líquidos, en donde los MO desarrollan en libre competencia, viéndose favorecidos aquellos MO que encuentran condiciones de desarrollo adecuadas. Se utilizan cuando el MO que se pretende identificar está es desventaja numérica con respecto a la flora acompañante. bii) SELECTIVOS PARA AISLAMIENTO: son medios sólidos. Se siembran directamente con la muestra incógnita o a partir de un medio selectivo para enriquecimiento. c) DIFERENCIALES: permiten el desarrollo de todos los componentes de la mezcla de MO. Su finalidad es establecer diferencias entre los distintos MO en función de alguna propiedad bioquímica que algunos MO poseen y otros no. Profesora García Carolina. Microbiología y Parasitología. Año 2020.
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