Lineamientos_para_vigilancia_epidemiologica_de_brucelosis

Vista previa del material en texto

Dirección General de Epidemiología
Instituto de Diagnóstico y referencia Epidemiológicos
“Dr. Manuel Martínez Báez”
lineamientos para la vigilancia epidemiológica
de brucelosis por laboratorio
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 1 de 43 
Versión No.01 
 
 
 
 
LINEAMIENTOS PARA LA VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA 
DE BRUCELOSIS POR LABORATORIO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
DGE-InDRE–RNLSP 
2015 
 
 
Fotografía de la portada propiedad de HKS arquitectos 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 2 de 43 
Versión No.01 
PRIMERA EDICIÓN, 2015 
 
 
BRUCELOSIS-RNLSP 
 
 
ESTE DOCUMENTO FUE AVALADO POR LOS REPRESENTANTES DE LAS INSTITUCIONES QUE 
CONFORMAN EL GRUPO TÉCNICO INTERINSTITUCIONAL DEL COMITÉ NACIONAL DE 
VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA (CONAVE). 
 
 
TODOS LOS DERECHOS RESERVADOS CONFORME A LA LEY 
© INDRE-DGE-SECRETARÍA DE SALUD 
 
 
SE PERMITE LA REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL SI SE CITA LA FUENTE: “LINEAMIENTOS 
PARA LA VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA DE BRUCELOSIS POR LABORATORIO” VERSIÓN N°. 
01. INDRE, 2015. 
 
 
COLECCIÓN DE PUBLICACIONES TÉCNICAS DEL INDRE: 
ISBN: 
 
 
INSTITUTO DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLÓGICOS DR. MANUEL MARTÍNEZ 
BÁEZ. 
FRANCISCO P MIRANDA 177, COL. LOMAS DE PLATEROS DEL. ÁLVARO OBREGÓN, C. P. 
01480, MÉXICO, D. F. 
WWW.INDRE.SALUD.GOB.MX 
TEL. (55)53-42-75-50 
 
 
LA EDICIÓN ESTUVO A CARGO DE: DR. JOSÉ ALBERTO DÍAZ QUIÑONEZ 
 
 
EL DISEÑO ESTUVO A CARGO DE: LIC. BRENDA ESCOBEDO LÓPEZ 
 
 
IMPRESO EN MÉXICO. PRINTED IN MEXICO 
 
http://www.indre.salud.gob.mx/
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 3 de 43 
Versión No.01 
SECRETARÍA DE SALUD 
 
DRA. MERCEDES JUAN LÓPEZ 
SECRETARIA DE SALUD 
 
DR. EDUARDO GONZÁLEZ PIER 
SUBSECRETARIO DE INTEGRACIÓN Y DESARROLLO DEL SECTOR SALUD 
 
DR. PABLO ANTONIO KURI MORALES 
SUBSECRETARIO DE PREVENCIÓN Y PROMOCIÓN DE LA SALUD 
 
LIC. MARCELA GUILLERMINA VELASCO GONZÁLEZ 
SUBSECRETARIA DE ADMINISTRACIÓN Y FINANZAS 
 
DR. GABRIEL O´SHEA CUEVAS 
COMISIONADO NACIONAL DE PROTECCIÓN SOCIAL EN SALUD 
 
LIC. MIKEL ARRIOLA PEÑALOZA 
COMISIONADO FEDERAL DE PROTECCIÓN CONTRA RIESGOS SANITARIOS 
 
DR. JOSÉ MELJEM MOCTEZUMA 
COMISIONADO NACIONAL DE ARBITRAJE MÉDICO 
 
DR. GUILLERMO MIGUEL RUIZ-PALACIOS Y SANTOS 
TITULAR DE LA COMISIÓN COORDINADORA DE INSTITUTOS NACIONALES DE SALUD Y 
HOSPITALES DE ALTA ESPECIALIDAD 
 
LIC. RODRIGO REINA LICEAGA 
TITULAR DE LA UNIDAD COORDINADORA DE VINCULACIÓN Y PARTICIPACIÓN SOCIAL 
 
DR. NELLY AGUILERA ABURTO 
TITULAR DE LA UNIDAD DE ANÁLISIS ECONÓMICO 
 
LIC. CARLOS SANDOVAL LEYVA 
DIRECTOR GENERAL DE COMUNICACIÓN SOCIAL 
 
DR. JESÚS FELIPE GONZÁLEZ ROLDAN 
DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE PROGRAMAS PREVENTIVOS Y CONTROL 
DE ENFERMEDADES 
 
DR. EDUARDO JARAMILLO NAVARRETE 
DIRECTOR GENERAL DE PROMOCIÓN DE LA SALUD 
 
DR. CUITLÁHUAC RUIZ MATUS 
DIRECTOR GENERAL DE EPIDEMIOLOGÍA 
 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 4 de 43 
Versión No.01 
LIC. JUAN CARLOS REYES OROPEZA 
DIRECTOR GENERAL DE INFORMACIÓN EN SALUD 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 5 de 43 
Versión No.01 
INSTITUTO DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLÓGICOS 
DR. MANUEL MARTÍNEZ BÁEZ 
 
DR. JOSÉ ALBERTO DÍAZ QUIÑONEZ 
DIRECTOR GENERAL ADJUNTO 
 
BIOL. IRMA LÓPEZ MARTÍNEZ 
DIRECTORA DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA 
 
QFB. LUCÍA HERNÁNDEZ RIVAS 
DIRECTORA DE SERVICIOS Y APOYO TÉCNICO 
 
LIC. ADRIANA CASTRO CABRERA 
SUBDIRECTORA DE OPERACIÓN 
 
M. EN C. BELÉN TORRES LONGORIA 
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE VIROLOGÍA 
 
QFB. ROBERTO VÁZQUEZ CAMPUZANO 
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE ENFERMEDADES EMERGENTES Y URGENCIAS 
 
M. EN C. JUAN CARLOS CARPIO PEDROZA 
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGÍA 
 
DRA. CLARA GORODEZKY LAUFERMAN 
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE INMUNOLOGÍA 
 
M. EN C. JUDITH ESTEVEZ RAMÍREZ 
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE CONTROL DE MUESTRAS Y SERVICIOS 
 
DR. JOSÉ ERNESTO RAMÍREZ GONZÁLEZ 
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y VALIDACIÓN DE TÉCNICAS 
 
BIÓL. NORMA ANGÉLICA MONTES COLIMA 
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGÍA 
 
QBP. IRMA HERNÁNDEZ MONROY 
ASESORA TÉCNICA DE LA DIRECCIÓN 
 
QBP. NORMA CECILIA CÁRDENAS NAVA 
JEFA DEL LABORATORIO DE BRUCELOSIS 
COORDINADOR DE LA RED DE DIAGNÓSTICO DE BRUCELOSIS 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 6 de 43 
Versión No.01 
GRUPO DE TRABAJO 
 
QBP. NORMA CECILIA CÁRDENAS NAVA 
JEFA DEL LABORATORIO DE BRUCELOSIS 
COORDINADOR DE LA RED DE DIAGNÓSTICO DE BRUCELOSIS 
 
QBP. IRMA HERNÁNDEZ MONROY 
ASESORA TÉCNICA DE LA DGA INDRE 
 
BIOL. IRMA LÓPEZ MARTÍNEZ 
DIRECTORA DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA 
 
DR. HUGO MARTÍNEZ ROJANO 
ASESOR TÉCNICO DE LA DIRECCIÓN GENERAL ADJUNTA DEL INDRE 
COORDINADOR DE MEDICINA LABORAL 
 
DR. JOSÉ ALBERTO DÍAZ QUIÑONEZ 
DIRECTOR GENERAL ADJUNTO 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 7 de 43 
Versión No.01 
 
 
 
 
 
 
LINEAMIENTOS PARA LA VIGILANCIA 
EPIDEMIOLÓGICA DE BRUCELOSIS 
POR LABORATORIO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
DGE-InDRE–RNLSP 
2015 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 8 de 43 
Versión No.01 
ÍNDICE 
INTRODUCCIÓN 9 
Antecedentes de la RNLSP para el diagnóstico de brucelosis 11 
MARCO LEGAL 12 
DEFINICIONES OPERATIVAS 12 
OBJETIVO GENERAL 13 
Objetivos específicos 13 
RED NACIONAL DE LABORATORIOS PARA LA VIGILANCIA DE LA 
ENFERMEDAD DE BRUCELOSIS 14 
Organización de la red nacional de laboratorios de brucelosis 15 
Funciones de los integrantes de la red nacional de laboratorios de brucelosis 15 
Recepción, manejo y envío de muestras 17 
Suero o LCR 17 
Hemocultivo 18 
Cepas 19 
ALGORITMO DIAGNÓSTICO 20 
ESTÁNDARES DE CALIDAD 25 
CAPTURA DE DATOS Y RESULTADOS DE LAS MUESTRAS 28 
PROGRAMA DE EVALUACIÓN EXTERNA DEL DESEMPEÑO (PEED) 28 
Diagnóstico de brucelosis en 28 
BANCO DE MATERIAL BIOLÓGICO 30 
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES 31 
BIBLIOGRAFÍA 32 
I.- TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS 34 
II.- PREPARACIÓN DE REACTIVOS 39 
III.- AISLAMIENTO DE CEPAS 41 
 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 9 de 43 
Versión No.01 
INTRODUCCIÓN 
El descubrimiento de la Brucella fue realizado a finales del siglo XIX, por el Dr. 
David Bruce, en la Isla de Malta. La enfermedad se conoce también como fiebre 
ondulante, fiebre del mediterráneo, fiebre recurrente, brucelosis o fiebre del Río 
Grande. Se ha mantenido como una de las zoonosis de mayor distribución e 
importancia en el mundo. Desde 1905 se acepta su aparición en México, aun 
cuando el primer aislamiento de una cepa de Brucella melitensis lo realizó en 
Puebla el Dr. Pláceres en 1920. 
La brucelosis es una enfermedad zoonótica que se transmite de un animal a otro de 
manera directa. En el caso del humano la infección ocurre de manera accidental, 
debido al consumo de productos lácteos no pasteurizados o bien, de dudosa 
procedencia. 
La brucelosis ha sido y sigue siendo, la causa de grandes pérdidas económicas a la 
ganadería del país y constituye un importante problema de salud pública. Existe 
una marcada preferencia del microorganismo por el huésped animal, por lo que la 
cepa B. abortus infecta normalmente al ganado bovino, la cepa B. melitensis se ha 
relacionado más con la infección de cabras y borregos; la cepa, B. suis está asociada 
con la infección de cerdos, B. canis infecta a perros, B. ovis causa infección 
específicamente en borregos y B. neotomae en roedores. El hombre es susceptible a 
cualquiera de las cuatro primeras especies, y se considera que B. ovis y B. 
neotomae poseen una baja virulencia que las restringe solo a ciertos huéspedes. En 
años recientes el amplio espectro de huéspedes de Brucella se ha ampliado al 
incluir a los mamíferos marinos. Se ha realizado el aislamiento de Brucella a partir 
de una amplia variedad de focas, leones marinos, delfines y ballenas en las costas 
de diferentes continentes. Estas cepas, B. ovis y B. neotomae, claramente forman 
dos grupos separados a los que, de forma no oficial, se les ha denominado B. 
cetaceae y B. pinnipediae. De igual manera, otra especie recientemente aislada en 
ratón es B. microti. 
El género Brucella,está formado por bacterias intracelulares facultativas, que 
producen el aborto epizoótico en muchas especies domésticas de animales y 
enfermedad febril septicémica o infecciones focalizadas, en el hombre. 
En los animales las manifestaciones clínicas de la infección son aparentemente 
poco detectables en estadios tempranos y debido a que la bacteria se aloja en el 
tracto reproductor en las hembras, el aborto, los partos prematuros y la retención 
de placenta son los únicos signos visibles del padecimiento. Por otro lado, la 
enfermedad en el humano se manifiesta con un cuadro febril de curso prolongado, 
incapacitante, con severas complicaciones y que puede progresar hacia una 
enfermedad crónica sin embargo, se pueden presentar mialgias, artralgias, 
sudoraciones nocturnas, debilidad, pérdida de apetito, cefalea, pérdida de peso, etc. 
Las vías más comunes por las cuales el ser humano puede adquirir brucelosis son 
por vía indirecta como la ingestión, debido a que la Brucella es eliminada en forma 
intermitente en la leche, convirtiéndose ésta en una fuente de infección para la 
población que la consume sin ningún tratamiento térmico preliminar (la leche se 
ingiere sin hervirse); por vía directa como la inoculación accidental es decir, 
cuando de forma casual el personal del laboratorio o de las campañas de 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 10 de 43 
Versión No.01 
vacunación de animales, por ejemplo, se pincha con agujas que estuvieron en 
contacto con la bacteria; o bien, por inhalación. 
En los países con un adecuado nivel sanitario, la enfermedad se considera de 
carácter casi exclusivamente profesional, lo que significa que el contagio se reduce 
al personal que trabaja en laboratorios o clínicas veterinarias o personas que están 
en contacto con productos cárnicos; mientras que en los países con una sanidad 
deficiente, un número importante de los casos de brucelosis corresponde a la 
población general, que adquiere la infección a través de la ingesta de productos 
lácteos no controlados, principalmente leche y queso fresco. En relación a la 
infección por el consumo de productos lácteos como queso, mantequilla, crema o 
helados preparados con leche contaminada es importante hacer notar que las 
bacterias pueden sobrevivir en los productos, algunos meses. Por otro lado, el 
consumo de carne de ganado vacuno cruda o mal cocida, proveniente de animales 
infectados, representa un riesgo menor, ya que el músculo contiene baja cantidad 
de Brucella, pero órganos como las vísceras, la ubre y los testículos contienen 
cantidades importantes de bacterias. La sangre fresca del ganado es 
potencialmente peligrosa para aquellos individuos que acostumbra consumirla ya 
sea en forma natural o mezclada. Otra forma en la que los seres humanos pueden 
adquirir Brucelosis son: al inhalar polvo o pelo contaminado, por salpicaduras en la 
conjuntiva, por ingestión accidental, a través de abrasiones o cortaduras en la piel, 
por auto inoculación accidental de sangre del animal infectado o de vacunas vivas. 
La Brucella spp puede sobrevivir por períodos prolongados en el polvo, estiércol, 
agua, fetos, suelo, carne y productos lácteos. 
La transmisión de persona a persona es muy rara, de mayor relevancia es la 
infección como resultado de una transfusión de sangre, o de un trasplante de 
tejido, siendo el de médula ósea el que mayor riesgo representa. Otra forma de 
transmisión es la de madre con brucelosis aguda, al hijo, a través de la leche 
materna en el recién nacido. 
En México, desde hace varios años, la brucelosis ha estado presente en la población 
tanto rural como urbana, económicamente activa (20 a 45 años de edad) y de 
ambos sexos, con prevalencia en las mujeres. 
El presente documento establece los lineamientos de operación para la vigilancia 
basada en el laboratorio de la brucelosis incluyendo las funciones de la RNLSP de 
Brucelosis por niveles; la toma, manejo y envío de muestras; la metodología para el 
análisis de muestras; la evaluación del desempeño así como, los estándares de 
calidad. 
 
Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública 
La Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública (RNLSP) es el conjunto de 
laboratorios para la vigilancia epidemiológica con objetivos específicos que le han 
permitido unificar métodos de diagnóstico, criterios de interpretación de 
resultados, transferencia tecnológica, generación de conocimiento y formación de 
recursos humanos. Es el soporte técnico-científico útil para la vigilancia 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 11 de 43 
Versión No.01 
epidemiológica y que genera información de calidad para la toma oportuna de 
decisiones a través de la confirmación de diagnósticos mediante estudios de 
laboratorio en muestras biológicas. 
La RNLSP depende de la Secretaría de Salud y es el Instituto de Diagnóstico y 
Referencia Epidemiológicos (InDRE) su órgano rector en el área de vigilancia 
epidemiológica. Tiene fundamento legal en la Norma Oficial Mexicana NOM-017-
SSA2-2012, Para la vigilancia epidemiológica y está conformada por 31 
Laboratorios Estatales de Salud Pública (LESP) de las 32 entidades federativas del 
país. 
El Marco Analítico Básico de la RNLSP consta de 27 diagnósticos, distribuidos en 
16 redes de vigilancia específica. 
 
Antecedentes de la RNLSP para el diagnóstico de brucelosis 
El Laboratorio de Brucelosis, en colaboración con la Dirección General de 
Epidemiología (DGE), es responsable de la vigilancia epidemiológica de esta 
enfermedad en México. El estudio de la brucelosis en el Instituto de Diagnóstico y 
Referencia Epidemiológica (InDRE) inició en el año de 1939 en el Laboratorio de 
Bacteriología, aun cuando la creación de un laboratorio específicamente dedicado 
al estudio de este padecimiento se llevó a cabo hasta 1985. Después de analizar los 
resultados de la encuesta seroepidemiológica en que participó el Laboratorio de 
Brucelosis en 1989, se consideró la necesidad de crear la Red de Brucelosis para lo 
cual, como primer paso, se visitaron algunos laboratorios interesados en participar. 
En el periodo de 1992 a 1997 el Laboratorio de Brucelosis formó parte del 
Departamento de Microbiología. Después del primer año de este periodo se 
escribió una monografía acerca de los avances y perspectivas del estudio de la 
Brucelosis; además se publicó un artículo en relación a la Organización de la Red 
de Laboratorios de Diagnóstico de la Brucelosis en la Revista de Higiene y también 
se elaboró el Manual de Procedimientos de Laboratorio INDRE/SAGAR 
“Brucelosis” en colaboración con la Secretaría de Agricultura, Ganadería y 
Desarrollo Rural (SAGAR) y con el patrocinio de la Organización Panamericana de 
la Salud (OPS). 
En 1997 el Laboratorio de Brucelosis es incorporado al Departamento de Zoonosis 
y en el 2000 se re-incorpora al Laboratorio de Bacteriología. De esta manera, la 
Red de Brucelosis se fortalece y se integran a ella 30 laboratorios. En el 2002 se da 
continuidad al trabajo establecido con la Red, agregándose en 2010, el último 
laboratorio que faltaba para cubrir el 100% de los LESP dentro de la misma. A 
partir de 2004 el Laboratorio de Brucelosis imparte anualmente un curso de 
actualización dirigido principalmente a personal de los LESP que realizan el 
diagnóstico de brucelosis, así como a particulares que lo soliciten y lleva a cabo la 
evaluación del desempeño a la Red de LESP a través de Paneles de Eficiencia de 
acuerdo al calendario establecido y de la misma forma, se evalúa la calidad a través 
del programa Caminando a la Excelencia. 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 12 de 43 
Versión No.01 
MARCO LEGAL 
1. Constitución Política de los Estados Unidos Mexicanos. Artículo 4. DOF 
05/02/1917, Última Reforma D.O.F. 15/02/2012. 
2. Ley General de Salud. Artículo 3, XV; 59; 64, III; 133; 134, I; 136, 138, 139 y 
141. DOF 7/02/1984, Última Reforma DOF 07/06/2012. 
3. Norma Oficial Mexicana NOM-017-SSA2-2012. Para la Vigilancia 
Epidemiológica. (DOF: 19/02/2013). 
4. Norma OficialMexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002. Protección 
ambiental -Salud ambiental- Residuos peligrosos biológico-infecciosos -
Clasificación y especificaciones de manejo (DOF: 17/02/2003). 
5. Norma Oficial Mexicana NOM-052-SEMARNAT-2005. Que establece las 
características, el procedimiento de identificación, clasificación y los listados 
de los residuos peligrosos. DOF: 23/06/2006. 
6. Norma Oficial Mexicana NOM-022-SSA2-2012. Para la prevención y control 
de la brucelosis en el ser humano (DOF: 11/07/2012). 
7. Norma Oficial Mexicana NOM-007-SSA3-2011. Para la organización y 
funcionamiento de los laboratorios clínicos (DOF: 27/03/2012). 
8. Lineamientos para los programas de evaluación externa del desempeño de la 
Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública, InDRE-Secretaría de Salud, 
2013 
9. Criterios de Operación para la Red nacional de Laboratorios de Salud 
Pública, InDRE-Secretaría de Salud, 2013. 
10. Secretaría de Salud. Programa Sectorial de Salud 2013-2018. Diario Oficial 
de la Federación DOF: 12/12/2013. 
11. Presidencia de la República. Plan Nacional de Desarrollo 2013-2018. Diario 
Oficial de la Federación, DOF: 20/05/2013, www.dof.gob.mx 
12. Secretaría de Salud. Programa de Acción Específico 2013-2018. Sistema 
Nacional de Vigilancia Epidemiológica, primera edición 2014. 
 
 
DEFINICIONES OPERATIVAS 
Se conoce como Brucelosis a la enfermedad bacteriana, infecto-contagiosa, que 
afecta a diversas especies de mamíferos domésticos y silvestres, la cual 
accidentalmente puede transmitirse al hombre, por lo que se considera una 
zoonosis. 
 Caso confirmado de brucelosis: es toda persona cuyo diagnóstico es 
conocido por medio de las pruebas confirmatorias de laboratorio, 
aglutinación estándar y aglutinación en presencia de 2-mercaptoetanol y/o 
aquellos que, presenten resultado positivo a hemocultivo. 
http://www.dof.gob.mx/
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 13 de 43 
Versión No.01 
 Caso sospechoso de brucelosis: es toda persona en riesgo, que por 
razones epidemiológicas, es susceptible y presenta sintomatología sugestiva 
de brucelosis, y que epidemiológicamente está relacionada con factores de 
riesgo. 
 
 
OBJETIVO GENERAL 
Establecer las directrices para realizar el diagnóstico por laboratorio de la 
Brucelosis a través de la RNLSP de forma estandarizada, estableciendo los flujos de 
información adecuados de los datos generados por el laboratorio en apoyo a la 
vigilancia epidemiológica. 
Objetivos específicos 
 Establecida la metodología de la NOM-022-SSA2-2012. Para la prevención y 
control de la brucelosis en el ser humano, y determinar la presencia de 
anticuerpos específicos en el humano, que se han producido al estado 
infectado de Brucella spp. 
 Determinar el envío al Laboratorio de Brucelosis del InDRE del 100% de las 
muestras serológicas que sean positivas a Brucella spp. provenientes de los 
diferentes niveles de salud y de todas las instituciones que forman parte del 
Sistema Nacional de Salud. 
 Determinar el envío al Laboratorio de Brucelosis del InDRE del 10% de las 
muestras serológicas que sean negativas a Brucella spp. originadas en los 
diferentes niveles de salud y de todas las instituciones que forman parte del 
Sistema Nacional de Salud. 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 14 de 43 
Versión No.01 
RED NACIONAL DE LABORATORIOS PARA LA VIGILANCIA DE LA 
ENFERMEDAD DE BRUCELOSIS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura. 1. Conformación de la red para el diagnóstico de Brucelosis en 
México 
 
La Red para el diagnóstico de brucelosis está formada por 31 laboratorios (sin 
color): Aguascalientes, Baja California, Baja California Sur, Campeche, Chiapas, 
Chihuahua, Coahuila, Colima, Durango, Estado de México, Guanajuato, Guerrero, 
Hidalgo, Jalisco, Michoacán, Morelos, Nayarit, Nuevo León, Oaxaca, Puebla, 
Querétaro, Quintana Roo, San Luis Potosí, Sinaloa, Sonora, Tabasco, Tamaulipas, 
Tlaxcala, Veracruz, Yucatán y Zacatecas, los cuales declaran en su marco analítico 
que realizan la prueba presuntiva Rosa de Bengala y las pruebas confirmatorias, 
Aglutinación estándar (SAT) y Aglutinación en 2-Mercaptoetanol (2-Me). 
El Distrito Federal no cuenta con laboratorio estatal y está identificado en el mapa 
en color rojo. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
N 
 
INTEGRANTES DE LA RED DE BRUCELOSIS 
NO FORMA PARTE DE LA RED 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 15 de 43 
Versión No.01 
Organización de la red nacional de laboratorios de brucelosis 
La red nacional de laboratorios de diagnóstico de Brucelosis está encabezada por el 
Laboratorio de Brucelosis, adscrito al Departamento de Bacteriología del InDRE. 
Esta Red está constituida por los Laboratorios Estatales de Salud Pública (LESP) a 
través del componente Brucelosis y por los laboratorios de diagnóstico locales, 
además de todos los laboratorios públicos y privados que realicen el diagnóstico 
serológico del padecimiento considerados como red de apoyo estatal. 
 
 
LABORATORIO DE BRUCELOSIS InDRE 
 
[(Laboratorio Nacional de Referencia (LNR)] 
 
Muestras resultados 
 
Laboratorios de Diagnóstico de Brucelosis (LESP) 
(Redes Estatales de Diagnóstico) 
 
Laboratorios Locales de Diagnóstico de Brucelosis 
(Redes Locales de Diagnóstico) 
 
 
Redes de Apoyo Jurisdiccionales 
 
 
Laboratorios Locales de Diagnóstico públicos y privados que realicen el 
diagnóstico de Brucelosis 
 
 
Figura 2. Flujo de trabajo de la Red Nacional de Laboratorios para el 
diagnóstico serológico de la brucelosis humana. 
 
Funciones de los integrantes de la red nacional de laboratorios de 
brucelosis 
 
Funciones del laboratorio nacional de referencia 
El Laboratorio de Brucelosis del InDRE es el laboratorio nacional de referencia y es 
el rector normativo para el diagnóstico de brucelosis en México. Las funciones que 
le competen son: 
 Procesar las muestras de suero que llegan al InDRE para diagnóstico, así 
como aquellas que envían los Laboratorios Estatales de Salud Pública 
(LESP) para confirmación de diagnóstico. 
 Aislar y tipificar las probables cepas de Brucella enviadas por los LESP y 
otras dependencias que así lo soliciten. 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 16 de 43 
Versión No.01 
 Producir los antígenos Rosa de Bengala y Blanco, y los reactivos para llevar a 
cabo el diagnóstico de brucelosis tanto presuntivo como confirmativo. 
 Apoyar a la Red de Laboratorios de Brucelosis, enviando el antígeno Rosa de 
Bengala para referencia y el antígeno Blanco para el diagnóstico y también 
los sueros testigo positivo y negativo y los reactivos para el diagnóstico. 
 Impartir cursos para la capacitación en el diagnóstico de brucelosis al 
personal de los LESP y otras dependencias que así lo soliciten. 
 Realizar el control de calidad mediante el Programa de Evaluación Externa 
del Desempeño (PEED) a los LESP. 
 Supervisar de manera directa a los laboratorios estatales. 
 Dar apoyo técnico a los laboratorios y analistas que lo requieran y soliciten. 
 Generar información de orden nacional en materia de diagnóstico, control 
de calidad, formación de recursos humanos e investigación operativa en la 
vigilancia epidemiológica de la brucelosis, que coadyuven para la toma de 
decisiones en el control y prevención de la enfermedad al programa nacional 
de salud. 
 Identificar las cepas de Brucella spp hasta su biovariedad. 
 
Funciones de los laboratorios estatales de salud pública 
 
Para el diagnóstico 
 Realizar los procesos analíticos para corroborar la presencia o no de 
anticuerpos específicos, en suero de pacientes. 
 Asegurar la calidad del diagnóstico de Brucelosis. 
 Emitir en tiempo y forma los resultados de los exámenes de laboratorio, de 
acuerdo a la prioridad del diagnóstico. 
 Referir muestras al InDRE para control de calidad, para la conformación del 
banco de muestras o en caso de duda diagnóstica. 
 Generar evidencia y notificar al órgano normativo estatal correspondiente 
los casosconfirmados. 
 Participar como mecanismo de apoyo técnico y proporcionar la información 
relacionada y requerida por el programa sustantivo del área de su 
competencia. 
 
Para capacitación 
 Organizar el curso anual de capacitación estatal a los laboratorios locales de 
acuerdo a las necesidades detectadas a través del Programa de Evaluación 
Externa del Desempeño (PEED) o del programa de control de calidad. 
 Mantener en niveles óptimos la capacidad diagnóstica de los integrantes de 
la red. 
 Dar apoyo técnico a los integrantes de la red con capacitación en servicio. 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 17 de 43 
Versión No.01 
 
Apoyo técnico 
 Participar en las urgencias epidemiológicas en el área de su competencia. 
 Colaborar y/o elaborar trabajos de investigación operativa que proporcione 
información prioritaria estatal, una vez que los protocolos sean aceptados 
por los comités de investigación. 
 Preparación y/o evaluación los reactivos que utilizan los integrantes de la 
red. 
 Apoyar en la selección para la adquisición y en el suministro de materiales y 
reactivos requeridos por los laboratorios de la red estatal de acuerdo a la 
evaluación proporcionada por el InDRE. 
 
Funciones de los laboratorios a nivel local 
 Recibir e identificar las muestras recibidas. 
 Procesar las muestras de acuerdo a la metodología pre-establecida en las 
capacitaciones. 
 Capacitar a la red de apoyo jurisdiccional en caso que lo requieran. 
 Aplicar las recomendaciones del nivel estatal. 
 Cumplir con el programa de control de calidad que establece el nivel estatal. 
 
 
DIAGNÓSTICO DE BRUCELOSIS POR LABORATORIO 
 
Recepción, manejo y envío de muestras 
Suero o LCR 
Toma de la muestra: La obtención de muestras serológicas para el diagnóstico 
de la Brucelosis humana en personas que por sintomatología se sospeche tengan la 
enfermedad o para descartar la presencia de anticuerpos, requiere que la muestra 
debe estar sin hemolisis, no ictérica, no lipémica, no contaminada, no debe estar 
derramada, debe estar refrigerada y, tener un volumen mínimo de 2.0 mL. 
Envío de muestra: Debe enviarse en viales de polipropileno tipo Eppendorf o en 
tubos de plástico, no se aceptarán muestras serológicas en envases de vidrio y 
deberá venir acompañada de la historia clínica del paciente, el formato único del 
InDRE llenado completamente y también de la solicitud del estudio de brucelosis, 
la muestra debe estar debidamente identificada con el nombre del paciente o clave 
correspondiente y ser la misma que la indicada en la historia clínica. (Sistema 
Básico de Triple Embalaje, para envío de muestras1). 
 
1 El Sistema Básico de Triple Embalaje consiste en la utilización de un recipiente primario, 
en el cual está contenida la muestra biológica (exudado faríngeo, exudado nasofaríngeo, lavado 
bronquio alveolar, biopsia, suero, etc.), el recipiente primario (p. ej. criotubos, tubos o frascos con 
tapa de rosca) debe ser hermético para evitar que la muestra se derrame y tiene que estar 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 18 de 43 
Versión No.01 
Recepción de muestra: Cuando una muestra no cumple con las características 
mencionadas se debe llenar el formato de rechazo de muestra (REMU-F-11/0) 
[entregar al área de recepción de muestras] y la muestra se elimina de acuerdo al 
procedimiento GABI-P-05/2. Si la muestra no se va a procesar inmediatamente, se 
resguarda en refrigeración y se procesa al día hábil siguiente de acuerdo al método 
LBRU-M-01/1 y LBRU-M-02 /1. Para que la muestra sea considerada como control 
de calidad, deberá venir acompañada de los resultados obtenidos en el LESP en 
Rosa de Bengala, aglutinación estándar y 2-mercaptoetanol, de lo contrario se 
considerará como muestra de diagnóstico aunque en su oficio diga control de 
calidad. 
Una vez procesadas las muestras y emitido el resultado final, las muestras son 
mantenidas en refrigeración. Las muestras de control de calidad que sean 
discordantes se registran en el formato LBRU-F-17/0 y se conservan durante 45 
días naturales a partir de que el laboratorio emite el resultado. Transcurrido este 
tiempo se eliminan como Residuos Peligrosos Biológicos Infecciosos (RPBI) de 
acuerdo al procedimiento GABI-P-05/2. Todas las muestras que no se guardan, los 
envases originales así como los tubos rotos de muestras, se esterilizan y se 
desechan como RPBI de acuerdo al procedimiento GABI-P-05/2. 
 
Hemocultivo 
Toma de muestra: La tomar de sangre para cultivo se debe realizar antes del 
pico febril. Deberá desinfectar con solución de yodo el área donde se realizará la 
punción venosa de forma circular del centro hacia fuera, limpiar el exceso de 
solución de yodo con una torunda de algodón impregnada de alcohol de la misma 
manera. Realizar la punción y obtener una muestra sanguínea de por lo menos 10 a 
15 mL, retirar y cambiar la aguja para depositarla en un frasco de medio bifásico 
(limpiar el tapón previamente con solución de yodo). 
Recepción de muestra: Al recibir la muestra, verificar que ésta cumpla con las 
siguientes características: estar a temperatura ambiente (no refrigerada ni 
congelada), traer consigo la historia clínica del paciente, el formato único del 
InDRE correcta y completamente lleno, además de la solicitud de aislamiento de 
 
perfectamente etiquetado con el nombre o número de muestra del paciente. El recipiente primario 
deberá rodearse de material absorbente como gasa o papel absorbente y colocarse en un recipiente 
secundario hermético a prueba de derrames y golpes. Si se colocan varios recipientes primarios 
dentro de un recipiente secundario se deberá usar una gradilla y material absorbente para evitar 
algún derrame. Es importante mencionar que dentro del recipiente secundario (hielera) tiene que 
haber suficientes refrigerantes para mantener una temperatura de 4 a 8 °C, si el tipo de muestra y 
ensayo lo requiere . Los recipientes secundarios deberán llevar las etiquetas de riesgo biológico y 
señal de orientación del recipiente, a su vez el recipiente secundario deberá ir contenido en un 
paquete externo de envío (caja de cartón o hielera) que proteja el contenido de elementos externos 
del ambiente y debe estar etiquetado con los datos del remitente, destinatario y señal de 
orientación. La documentación que se integre al triple embalaje deberá colocarse en la parte interior 
del paquete. 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 19 de 43 
Versión No.01 
Brucella spp. La muestra debe estar identificada con el nombre o clave del paciente 
y corresponder los datos de la historia clínica. 
Registrar la muestra en el formato LBRU-F-16/0 y asignarle un número de red 
correspondiente al laboratorio de Brucelosis del InDRE, este mismo número se 
asigna como diagnóstico en la historia clínica y se rotula en la muestra. 
Cuando la muestra no cumple con las características mencionadas se llena el 
formato de rechazo de muestra (REMU-F-11/0) y se entrega al área de recepción de 
muestras. La muestra rechazada se elimina como RPBI de acuerdo al 
procedimiento GABI-P-05/2. 
Incubar las muestras a 37 °C, una vez que éstas han sido procesadas y se ha emitido 
el resultado final, las muestras que resulten positivas al aislamiento de Brucella 
spp se esterilizan y desechan como RPBI. El cultivo puro obtenido de cada muestra 
se rotula y se guarda en refrigeración, las muestras que resultaron negativas al 
aislamiento de Brucella spp después de seis semanas de incubación, se esterilizan y 
se eliminan como RPBI de acuerdo al procedimiento GABI-P-05/2. 
 
Cepas 
Al recibir las muestras en el InDRE, el personal del laboratorio verifica que la 
muestra cumpla con las siguientes características: 
 La muestra debe estar a temperatura ambiente, no debe estar contaminada, 
debe traer por escrito las referencias del aislamiento y la solicitud de 
aislamiento de Brucella spp. La muestra debe estar debidamente identificada con el nombre o clave 
correspondiente y ser la misma a la de la historia clínica. 
El personal del laboratorio registra la muestra en el formato LBRU-F-16/0 y a esta 
se le asigna el número de red correspondiente al laboratorio, con dicho número se 
consignará el diagnóstico en la historia clínica. El número de red también se rotula 
en la muestra. 
Cuando una muestra no cumple con las características mencionadas 
anteriormente, se llena el formato de rechazo de muestra (REMU-F-11/0) y éste 
último se entrega en el área de recepción de muestras. La muestra rechazada se 
elimina como RPBI de acuerdo al procedimiento GABI-P-05/2. 
Procesar la muestra y si no se va a trabajar inmediatamente mantenerla en 
refrigeración y procesarla al siguiente día hábil. Una vez procesada la muestra y 
emitido el resultado final, el cultivo puro obtenido de la muestra se rotula y se 
guarda bajo llave en refrigeración. Las muestras que resultaron negativas al 
aislamiento de Brucella spp se desechan como RPBI de acuerdo al procedimiento 
GABI-P-05/2. 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 20 de 43 
Versión No.01 
ALGORITMO DIAGNÓSTICO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura. 3. Algoritmo para el diagnóstico serológico de Brucelosis 
 
Positivo 
Negativo 
ESTÁNDAR DEL SERVICIO 3días 
Negativo 
Indeterminado 
POSITIVO 
SAT: Título mayor o igual a 1; 80 
2-ME: Cualquier título 
INDETERMINADO 
SAT: Título menor a 1:80 
NEGATIVO 
Ausencia de anticuerpos 
Positivo 
Conservación de sueros 
positivos en congelación 
Suero o LCR 
Prueba 
Presuntiva (Rosa 
de bengala) 
Pruebas 
Confirmatorias (SAT 
y 2-mercaptoetanol) 
Revisión e 
impresión de 
resultado 
LBRU Perfil serológico de la brucelosis 
CLAVE - 1B5563007 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 21 de 43 
Versión No.01 
 
Figura. 4. Prueba presuntiva (Rosa de Bengala) 
 
 
 
Figura 5. Pruebas confirmatorias: (aglutinación estándar y 2-
mercaptoetanol) 
POSITIVO NEGATIVO 
 1 2 3 4 5 6 7 
 
 
 
 
 
 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 22 de 43 
Versión No.01 
Cuadro 1. Interpretación de resultados 
Rosa de Bengala SAT M.E. Resultado 
NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO 
POSITIVO NEGATIVO NEGATIVO INDETERMINADO 
POSITIVO <1:80 NEGATIVO INDETERMINADO 
POSITIVO >1:80 NEGATIVO POSITIVO 
POSITIVO >1:80 1:20 POSITIVO 
POSITIVO 1:20 1:20 POSITIVO 
 
Interpretación clínica: 
 En el primer caso se considera como un caso negativo 
 En el segundo caso nos indica que el paciente en algún momento de su vida 
estuvo en contacto con Brucella, hay que solicitar una segunda muestra para 
confirmar 
 En el tercer caso se solicita una segunda muestra para determinar si el 
paciente se encuentra en una fase inicial o de recuperación de la infección 
por Brucella. 
 En el cuarto, quinto y sexto caso se consideran como positivos. 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 23 de 43 
Versión No.01 
ALGORITMO DIAGNÓSTICO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura. 6. Algoritmo para el diagnóstico y referencia bacteriológica de 
Brucelosis 
 
 
ESTÁNDAR DEL SERVICIO 
2 semanas 
Cepas 
Siembra semanal en cajas de 
Petri con medios de cultivo 
enriquecidos 
Con desarrollo presuntivo 
Identificación mediante 
pruebas bioquímicas, 
colorantes, fagos y serología 
Sin desarrollo bacteriano 
Conservación de cepas de Brucella 
spp en ultra-congelación 
Extracción de la 
muestra 
PCR 
Revisión e 
impresión de 
resultado 
LBRU Cultivo y tipificación de cepas 
CLAVE-1B5563001 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 24 de 43 
Versión No.01 
ALGORITMO DIAGNÓSTICO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura. 7. Algoritmo para el diagnóstico bacteriológico de Brucelosis 
 
Estándar del servicio 
6 semanas 
Siembra semanal en cajas de Petri 
con medios de cultivo enriquecidos 
Con desarrollo bacteriano 
Identificación mediante 
pruebas bioquímicas, 
colorantes, fagos y 
serología 
Sin desarrollo bacteriano 
Conservación de cepas de Brucella 
spp en ultra congelación 
Extracción de la 
muestra 
PCR 
Revisión e 
impresión de 
resultado 
Hemocultivo, Mielocultivo, 
Líquido cefalorraquídeo 
LBRU Aislamiento e Identificación de Brucella spp a partir de muestras 
clínicas. CLAVE-1B5563001 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 25 de 43 
Versión No.01 
ESTÁNDARES DE CALIDAD 
Marco analítico 
Las pruebas para el diagnóstico de la Brucelosis humana que conforman el marco 
analítico para la Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública (RNLSP), están 
conformados por: 
● Rosa de Bengala 
● Pruebas confirmatorias (SAT y 2-Me) 
● Aislamientos de cepas de Brucella spp 
Con la finalidad de verificar la concordancia de los resultados emitidos por la 
RNLSP para el diagnóstico de la brucelosis, se estableció un Programa de Control 
de Calidad en el que se solicita a sus integrantes que envíen el 100 % de sus 
muestras positivas y el 10% de las muestras negativas. Hasta el 2005 ésta fue la 
herramienta con la que se pretendía garantizar la calidad de los diagnósticos 
emitidos, sin embargo, la aparición en el mercado de diversas marcas de reactivos 
comerciales con diferencias en sensibilidad y especificidad generó la falta de 
concordancia entre los resultados obtenidos por algunos LESP y el laboratorio de 
Brucelosis del InDRE, fundamentalmente con el antígeno de Rosa de Bengala. 
Ante la dificultad de controlar esta situación y debido a que no hay una 
normatividad nacional para la producción de éstos antígenos, se planteó la 
necesidad de contar con una herramienta confiable que permita evaluar la 
capacidad técnica de los miembros de la red y es por esto que a partir de 2006 se 
prepararon y enviaron a toda la red paneles de eficiencia; consistentes en un envío 
de 10 sueros tanto positivos como negativos (panel), previamente caracterizados y 
codificados en el laboratorio de Brucelosis del InDRE. 
Para la evaluación de los resultados obtenidos en los paneles se consideraron los 
tres métodos utilizados para este diagnóstico; aglutinación con antígeno Rosa de 
Bengala, Aglutinación Estándar (SAT) y Aglutinación en presencia de 2-
Mercaptoetanol ponderados al 40%, 30% y 30% respectivamente. Con la suma de 
porcentajes obtenida en cada rubro se obtiene la calificación final. 
Se asignó un código confidencial a cada LESP, de tal manera que al enviar el 
informe final de los resultados obtenidos en cada panel, todos los miembros 
pueden conocer la situación de toda la red nacional para el diagnóstico de 
brucelosis, y también puedan ubicar la posición de su laboratorio identificándolo 
con el código de confidencialidad de cada uno de ellos. 
Con base en el análisis de los indicadores del Boletín Caminando a la Excelencia, 
cumplimiento y concordancia, y la evaluación del desempeño obtenido por los 
LESP en los paneles de eficiencia de 2010 y 2011, se estratificaron los LESP en tres 
categorías: sobresaliente, satisfactorio y mínimo. Quedando clasificados 15 como 
sobresalientes, 11 como satisfactorios y 5 como mínimo. 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 26 de 43 
Versión No.01 
Los criterios utilizados para la clasificación fueron los siguientes: 
a) Los LESP que hayan obtenido de manera constante en los dos años de 
evaluación entre 8.6 y 10.0 tanto en el Boletín como en el PEED, se 
clasificaron como sobresalientes. 
b) Los LESP que hayan obtenido de manera constante en los dos años de 
evaluación entre 7.0 y 8.5 tanto en el Boletín como en el PEED, se 
clasificaron como satisfactorios. 
c) Los LESP que hayan obtenido de manera constante en los dos años de 
evaluación menos de 6.9 tanto en el Boletín como en el PEED, se clasificaron 
como mínimos. 
 
A partir de 2008 se programó el envío de dos paneles de evaluación por año con la 
intención de privilegiar el envío de paneles de eficiencia comouna mejor 
herramienta para la evaluación del desempeño sin embargo, se planteó que esta 
transición se haría de manera gradual y se propuso modificar el porcentaje de 
sueros que en ese momento se enviaban para control de calidad de la manera 
siguiente: 
 
 
Cuadro 2. Porcentajes de desempeño y envío de muestras 
Clasificación del 
laboratorio 
Porcentaje para control de calidad 
Sobresaliente 
No enviarán sueros para control de calidad y se 
evaluarán solamente con dos paneles de eficiencia al año 
Satisfactorio 
Enviarán el 50% de positivas y el 10% de negativas, 
además se les enviarán dos paneles de eficiencia al año 
Mínimo 
Enviaran el 100% de positivas y el 10% de negativas, 
además se les enviarán dos paneles de eficiencia al año 
 
Considerando los resultados de este análisis y los criterios de clasificación los LESP 
quedaron organizados como se muestra en el siguiente cuadro: 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 27 de 43 
Versión No.01 
Cuadro 3. Características para envío de muestras 
Estándar de calidad 
Prueba 
Muestras 
clínicas 
Criterios de 
aceptación 
Criterios de rechazo 
Estándar de 
servicio 
Rosa de Bengala Suero 
Volumen mínimo de 
2.0 mL 
NO hemolizada 
NO ictérica 
NO contaminada 
NO lipémica. 
Envase de 
polipropileno, 
identificación legible, 
formato único del 
InDRE llenado, 
historia clínica, 
solicitud de estudio. 
Muestra refrigerada 
Volumen menor de 2.0 
mL, previamente 
congelada, derramada, 
vial vacío o roto, 
hemolizada, ictérica, 
contaminada, lipémica. 
NO envase de 
polipropileno, 
SIN identificación 
legible, SIN formato 
único del InDRE lleno, 
SIN historia clínica, 
SIN solicitud de estudio 
Diagnóstico 3 
días, control 
de calidad 4 
días 
Aglutinación 
estándar y 2-
mercaptoetanol 
Suero 
Volumen mínimo de 
2.0 mL 
NO hemolizada 
NO ictérica 
NO contaminada 
NO lipémica. Envase 
de polipropileno, 
identificación legible, 
formato único del 
InDRE llenado, 
historia clínica, 
solicitud de estudio, 
muestra refrigerada. 
Volumen menor de 2.0 
mL, previamente 
congelada, derramada, 
vial vacío o roto, 
hemolizada, ictérica, 
contaminada, lipémica. 
NO envase de 
polipropileno, SIN 
identificación legible, 
SIN formato único del 
InDRE lleno, SIN 
historia clínica, SIN 
solicitud de estudio 
Diagnóstico 3 
días, control 
de calidad 4 
días 
Aislamiento Hemocultivo 
Frasco con medio 
bifásico, 
identificación legible, 
formato único del 
InDRE lleno, historia 
clínica, solicitud de 
estudio 
SIN identificación 
legible, SIN formato 
único del InDRE lleno, 
SIN historia clínica, 
SIN solicitud de estudio 
Hasta 6 
semanas 
Aislamiento Cepa 
Tubo o placa Petri, 
identificación legible, 
formato único del 
InDRE lleno, historia 
clínica, solicitud de 
estudio 
Contaminada, SIN 
identificación legible, 
SIN formato único del 
InDRE lleno, SIN 
historia clínica, SIN 
solicitud de estudio 
Hasta 15 días 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 28 de 43 
Versión No.01 
CAPTURA DE DATOS Y RESULTADOS DE LAS MUESTRAS 
La captura de datos de las muestras es realizada por personal del área de recepción 
de muestras del InDRE, donde la información del oficio e historia clínica y/o 
formato único del InDRE, es capturada en la base de datos INFOLAB. Una vez que 
las muestras son analizadas los resultados se capturan en esta misma base de 
datos, se imprimen los resultados y se entregara al encargado de firmarlos, junto 
con dos formatos REMU-F-05 debidamente completados y el oficio de solicitud del 
estudio. Después firmar la hoja impresa de resultados y los formatos, deberán ser 
entregados en el área de recepción de muestras. Uno de los formatos REMU-F-05 
firmado en recepción de muestras es el acuse de recibido y deberá ser archivado 
inmediatamente, en la carpeta correspondiente en el laboratorio. El área de 
recepción de muestras es la responsable de entregar a los usuarios los resultados 
correspondientes. 
 
PROGRAMA DE EVALUACIÓN EXTERNA DEL DESEMPEÑO (PEED) 
Diagnóstico de brucelosis en humanos 
El Instituto de Diagnóstico y Referencia Epidemiológicos (InDRE) genera 
información de orden nacional, integrando y siendo rector de la Red Nacional de 
Laboratorios de Salud Pública (RNLSP), en materia de diagnóstico, investigación y 
desarrollo tecnológico para la vigilancia epidemiológica, para la toma de decisiones 
en el control de enfermedades y la formulación y orientación de los programas 
nacionales de salud. 
En este sentido, uno de los compromisos del InDRE y la RNLSP es generar 
información confiable y oportuna para la toma de decisiones en apoyo de la 
vigilancia epidemiológica y los Programas Nacionales de Salud, en apego a la 
normativa vigente. 
En julio de 2007, se inició el Programa de Evaluación Externa del Desempeño 
(PEED) del Diagnóstico Serológico de la Brucelosis Humana para los laboratorios 
de apoyo a la salud pública en México, con la participación de los Laboratorios 
Estatales de Salud Pública (LESP) que incluyeron las pruebas en el marco analítico 
estatal registrado en el InDRE. Con esta base, el PEED para serología de Brucelosis 
se ha sumado al esfuerzo institucional de evaluar el desempeño de los laboratorios 
de la RNLSP y contribuir de esta manera al perfeccionamiento del serodiagnóstico 
de este padecimiento. 
 
Envío de paneles de eficiencia 
El laboratorio de Brucelosis del InDRE coordina el Programa de Evaluación 
Externa del Desempeño (PEED) en el diagnóstico de la Brucelosis humana y se 
encarga de: 
 Elaborar el panel de sueros, con respaldo documentado de las características 
de reactividad de cada muestra. 
 Embalar el panel en condiciones óptimas para el envío a los laboratorios 
participantes, incluyendo instrucciones detalladas para el manejo del mismo 
(Sistema Básico de Triple Embalaje). 
 Elaborar los reportes de resultados y enviarlos a los participantes. 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 29 de 43 
Versión No.01 
 Mantener la confidencialidad de los laboratorios participantes mediante una 
clave única. 
Enviar dos veces al año a los Laboratorios de la Red Nacional de Brucelosis, un 
panel de evaluación integrado por diez muestras de suero que deben procesarse 
con la metodología establecida para los laboratorios de la red (aglutinación con 
antígeno Rosa de Bengala, aglutinación estándar y aglutinación en presencia 2-
mercaptoetanol). Solicitar que los resultados obtenidos se envíen a más tardar en 
10 días hábiles, vía fax, oficio o correo electrónico. 
 
El primer panel se envía en el mes de marzo y el segundo en el mes de octubre del 
mismo año. 
Además de los resultados de las muestras que conforman el panel se le solicita a los 
laboratorios de la Red que envíen los datos de las marcas de reactivos con los que 
están trabajando, con la finalidad de poder establecer si hay alguna relación entre 
la marca de reactivo utilizado y la no concordancia de resultados, si fuera el caso, 
obtenidos en el laboratorio de referencia (InDRE), así como para comparar la 
sensibilidad y especificidad de las marcas de reactivos que han sido evaluadas en el 
InDRE. 
 
Ponderación 
Se evalúan 3 métodos: 
 
1. Aglutinación con antígeno Rosa de Bengala 
2. Aglutinación estándar (SAT) y 
3. Aglutinación en presencia de 2-Mercaptoetanol 
 
La evaluación se lleva a cabo de manera independiente para cada método, 
asignando una ponderación a alcanzar expresada en porcentaje y distribuida de la 
siguiente manera: 
 
1) Aglutinación con antígeno Rosa de Bengala 
Se le asigna una ponderación de 40% 
 
2) Aglutinación estándar (SAT) 
Se considera como concordante el valor obtenido dentro del intervalo de + 1 
título con respecto al referido por el InDRE, con una ponderación de 30%. 
 
3) Aglutinación en presencia de 2-Mercaptoetanol (2ME) 
Se considera como concordante el valor obtenido dentro del intervalo de +1 
título con respecto al referido por el InDRE, con una ponderación de 30%. 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 30 de 43 
Versión No.01 
Informe de resultados peed brucelosisa la RNLSP 
Los resultados serán expresados como resultados concordantes. La suma de las 
ponderaciones parciales para cada método da como resultado la ponderación final 
(calificación final) obtenida para cada LESP. 
 
El laboratorio que no cumpla con el envío de sus resultados en la fecha establecida, 
será penalizado con 20 puntos, en su calificación final obtenida. El informe final se 
deberá enviar cuatro semanas después de la fecha límite de la recepción de 
resultados por los LESP al InDRE. 
 
Criterios para la liberación del diagnóstico 
Los Laboratorios de la Red Nacional de Brucelosis recibirán semestralmente dos 
panel de eficiencia y con base a los resultados obtenidos en los últimos 2 años se 
evaluará su desempeño. Se definirá si se continúa con el diagnóstico liberado si 
cumple con lo siguiente: 
 por lo menos deberá tener 86% en la calificación en cada uno de los 4 
paneles de los últimos 2 años. 
 si en alguno de los paneles no obtiene la calificación mínima, será motivo 
para no alcanzar la liberación. 
Paralelamente se evaluará la concordancia obtenida por cada uno de los LESP en 
los últimos 2 años. 
 al sumar la concordancia de las muestras positivas y negativas por año, 
deberá ser mínimo del 86%. 
 Si en alguno de los dos años no obtuviera la calificación mínima, no podrá 
obtener la liberación. 
Para que un LESP pueda obtener la liberación en el diagnóstico de Brucelosis 
humana, debe mantener una calificación de 86% tanto en los 4 paneles así como, 
una concordancia de 86% en los 2 últimos años. 
 Aquellos LESP que no obtuvieron la liberación se les disminuirá el 
porcentaje de muestras que envíen al InDRE para control de calidad (50% 
de positivas y 10% de negativas). 
 Aquellos LESP cuya concordancia no sea aceptable (0-75.9%) en cada uno 
de los paneles, así como en la concordancia en control de calidad, deberán 
recibir capacitación. 
 
BANCO DE MATERIAL BIOLÓGICO 
Colección de cepas 
Una vez que las cepas aisladas han sido caracterizadas y enviadas al InDRE, 
después de la emisión del informe correspondiente estas cepas se conservarán a 
largo plazo (indefinidamente, mientras se mantengan viables). Todas las cepas son 
integradas a la colección de cepas del InDRE y de éstas, el 100% de las cepas de 
Brucella spp. El objetivo de conservar los aislamientos realizados es: 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 31 de 43 
Versión No.01 
 Monitorear cambios fenotípicos o genotípicos de cepas circulantes a nivel 
nacional, en apoyo a la vigilancia epidemiológica de este padecimiento. 
Y así desarrollar proyectos de investigación en colaboración con instituciones, que 
permitan un fortalecimiento de los participantes de la RNLSP. 
 
 
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES 
ACTIVIDAD ENE FEB MAR ABR MAY JUN JUL AGO SEP OCT NOV DIC 
Curso teórico-practico XX 
Envío del primer panel 
a los Laboratorios 
Estatales de la Red de 
EFES 
 XX 
Recepción de 
resultados del Panel en 
el InDRE 
 XX 
Envío de resultados a 
la RNLSP 
 XX 
Envío del segundo 
panel a los 
Laboratorios Estatales 
de la Red de EFES 
 XX 
Recepción de 
resultados del Panel en 
el InDRE 
 XX 
Envío de resultados a 
la RNLSP 
 XX 
Nota: Si alguna de las fechas corresponde a un día no laborable, la actividad 
deberá realizarse el siguiente día hábil. 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 32 de 43 
Versión No.01 
BIBLIOGRAFÍA 
1. Alton GG, Jones LM, Pietz DE. Las técnicas de laboratorios en la brucelosis, 
2ª ed. OMS, Ginebra, Suiza, 1976. 
2. Hernández MI, Peña FG y Betancourt MX. Brucelosis 19. en Manual de 
procedimientos de laboratorio, Alejandro Escobar Gutiérrez, editor. 
INDRE/SAGAR. INDRE-SSA, México, 1996. 
3. López MA, Contreras RA. Brucella, cap. III. en Agentes Patógenos 
Transmitidos por Alimentos, Ma. Refugio Torres Vitela y Alejandro Castillo 
Ayala. Editores. Vol. II. 2ªed. México, Universidad de Guadalajara; 2009. p. 
89-124. ISBN: 978-970-764-859-3. 
4. Hernández MI, López MA. La red nacional de diagnóstico de Brucelosis 
humana. Higiene (México). 1994; Abril-Junio. 
5. López SR, Antonio OD, Hernández MI, González DF. Brucelosis: avances y 
perspectivas. Secretaría de Salud, Publicación Técnica del InDRE, 6 
(México). 1991. 
6. Miller MJ, et al. Guidelines for safe work practices in human and animal 
medical diagnostic laboratories. MMWR Surveill Summ. 6; 61:1-102; 2012. 
7. Delany JR, Pentella MA, Rodríguez JA, Shah KJ, Baaxley KP, Holmes DE; 
Centers for Disease Control and Prevention. Guidelines for biosafety 
laboratory competency: CDC and the association of Public Health 
Laboratories, MMWR. Supplement / Vol. 60; 2011. 
8. World Health Organization. Guidance on regulations for the Transport of 
Infectious Substances 2013-2014; Geneva: WHO Press; 2012. 
9. Chosewood C & Wilson DE. Biosafety in Microbiological and Biomedical 
Laboratories–5th ed. CDC-NIH; 2009. 
10. European Committee for Standardization. CWA 15793:2011 Laboratory 
biorisk management standard. Brussels: CEN; 2011. 
11. World Health Organization. Laboratory Biosafety Manual–3rd ed. Geneva: 
WHO; 2004. 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 33 de 43 
Versión No.01 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ANEXOS 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 34 de 43 
Versión No.01 
I.- TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS 
 
1.- Diagnóstico serológico presuntivo con el antígeno Rosa de 
Bengala 
(Tanto el antígeno como los sueros problema y control deberán estar de 18 a 25 °C). 
1. Verificar que los sueros problema no estén hemolizados, lipémicos o 
contaminados, ya que estas condiciones pueden dar resultados, falsos 
positivos. 
2. Tomar una placa de vidrio, con separaciones circulares o cuadriculadas y 
limpiarla perfectamente de toda impureza con una de gasa pequeña. 
3. Colocar en una de las separaciones de la placa 30 L del suero problema, en 
otra separación 30 L de suero testigo positivo y por último 30 L del suero 
testigo negativo en otra separación, posteriormente agregar 30 L o una 
gota del antígeno Rosa de Bengala a cada suero y con la ayuda de un 
aplicador de madera mezclar perfectamente. 
4. Continuar mezclando con movimientos giratorios, durante 4 minutos y con 
la ayuda de una lámpara con luz blanca observar la formación o no de 
aglutinación (aparición de grumos teñidos y clarificación del medio). 
5. Observar inicialmente que la reacción esperada en los sueros testigos sea la 
que corresponde. Para el control positivo la formación de grumos de 
aglutinación y para el control negativo la ausencia de grumos, si esto no 
sucede, desechar la placa y cambiar el frasco del antígeno. Realizar la prueba 
una segunda vez y si no se observa lo esperado (grumos de aglutinación en el 
control positivo y ausencia de grumos en el control negativo), se cambia de 
sueros testigos. 
6. La interpretación de los resultados se realiza de la siguiente manera: 
a. Cualquier tipo de aglutinación se informa como positivo. 
b. Ausencia de aglutinación se informa como negativo. 
7. La prueba tiene validez si se lee antes de 4 minutos, después de este tiempo 
la prueba se invalida, particularmente si se llega a secar la muestra. 
 
2.- Diagnóstico serológico confirmatorio con el antígeno blanco de 
Brucella abortus y Brucella melitensis (SAT y 2-Me) 
(Tanto el antígeno, como los sueros problema y control deberán estar de 18 a 25 
°C). 
1. Recibir la muestra y colocarla en refrigeración si no se va a analizar 
inmediatamente, por no más de 24 horas. 
2. Utilizar dos placas de 96 pozos de fondo en “U” una para el SAT y otra 
para el 2-mercaptoetanol. 
3. Colocar el número de identificación de la muestra en ambas placas, teniendo 
en total, dos columnas para la placa de Aglutinación estándar (SAT) y dos 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 35 de 43 
Versión No.01 
columnas para la placa de 2-mercaptoetanol, considerando que se tendrá 
que titular con antígeno de Brucella abortus y antígeno de Brucella 
melitensis en la Aglutinaciónestándar (SAT) y con los mismos antígenos en 
presencia de 2-mercaptoetanol. Colocar en los pozos número 1 de las 
columnas A y B 180 L de Solución Salina Fenolada (SSF) al 0.5% y del pozo 
2 al 10 de ambas columnas colocar 100 L de la misma solución en una 
placa; en la otra placa, realizar el mismo proceso pero con la solución de 2-
mercaptoetanol al 0.85%. 
4. Añadir en los pozos número 1 de las columnas A y B de ambas placas 20 L 
del suero problema, mezclar 6 veces con la micropipeta (aspirar y expulsar 
con ayuda de la micropipeta) y transferir 100 L de éste pozo (número 1) al 
pozo número 2, realizar el mismo procedimiento y pasar al siguiente pozo 
(pozo número 3), continuar así sucesivamente hasta llegar al último pozo 
(pozo 10) desechando de este 100 L. 
5. Repetir todos los pasos del proceso anterior en la placa de 2-
mercaptoetanol. 
6. Realizar nuevamente el mismo proceso para el suero testigo positivo y para 
el suero testigo negativo, los cuales deberán ser colocados en ambas placas. 
7. Adicionar a todos los pozos (1 al 10), 100 L de antígeno Blanco de Brucella 
abortus previamente diluido 1:10 en la columna A de ambas placas. 
8. Añadir a todos los pozos (1 al 10), 100 L de antígeno Blanco de Brucella 
melitensis previamente diluido 1:10 en la columna B de ambas placas. 
9. Tapar las placas e incubarlas a 37 °C durante 24 horas. Revisar todos los 
pozos con la ayuda de una fuente luminosa (lámpara con luz blanca) y un 
espejo. 
10. Verificar que la reacción sea la esperada en los pozos de los controles 
positivo y negativo, una vez transcurrido el tiempo especificado. Buscar en el 
fondo del pozo la presencia de una malla de aglutinación o la ausencia de 
esta. 
11. El título corresponderá a la dilución del último pozo donde existe la 
formación de la malla y clarificación del medio. La muestra se considera 
positiva cuando el título es mayor o igual a 1:80 para la placa de SAT y 
cualquier título para la 2-mercaptoetanol. 
12. El mismo criterio de la prueba se considera tanto para el antígeno de 
Brucella abortus como para el de Brucella melitensis. 
 
Identificación bacteriológica 
1. Resembrar la cepa recibida por duplicado en placas de Agar Brucela (AB), 
Base de Agar Sangre o Agar Soya Tripticasa (TSA) con asa bacteriológica. 
Utilizar las medidas de bioseguridad indicadas (guantes, goggles, bata y 
respirador N95) para el manejo de cepas. 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 36 de 43 
Versión No.01 
2. Incubar las placas a 37 °C de 48 a 72 horas. Una en aerobiosis y la otra en 
atmósfera que contenga del 5 al 10% de CO2 a 37 °C. 
3. Todas las pruebas que se describen a continuación deben efectuarse con 
crecimiento de 48-72 horas. 
 
Prueba de identidad 
1. En una placa de vidrio limpia y sin grasa, colocar una gota de Solución 
Salina Fenolada (SSF) estéril al 1% y un poco de crecimiento bacteriano 
usando el asa bacteriológica para este fin. Mezclar perfectamente hasta tener 
una suspensión. 
2. Agregar una gota o 15 µL de suero polivalente. 
3. Mezclar con un aplicador y mover la placa con movimientos rotatorios 
durante 4 minutos como máximo. Transcurrido este tiempo, buscar la 
presencia de aglutinación en la placa, que indicaría que se trata de una cepa 
de Brucella spp. 
4. Preparar otras dos suspensiones, como se indica en el inciso (1). 
5. Agregar una gota o 15 µL de suero mono-específico (Monovalente A y M, 
respectivamente). 
6. Mezclar con un aplicador y mover la placa con movimientos rotatorios 
durante 4 minutos máximo. 
7. Determinar si se observa aglutinación en alguno de los sueros. 
 
Pruebas de tipificación 
Prueba de la Oxidasa y Catalasa 
1. Oxidasa 
 Tomar una asada de cultivo puro y colocar un poco del crecimiento (lo 
tomado por el asa de siembra) en la superficie de la tira reactiva para 
determinar oxidasa. 
 Dejar que se desarrolle la reacción. Cualquier coloración con tonos violeta 
en la tira reactiva es indicativo de resultado positivo. 
 
2. Catalasa 
 Colocar una gota de solución salina sobre un portaobjetos, tomar con un 
asa bacteriológica crecimiento bacteriano y depositarlo sobre la gota que 
está en el portaobjetos, homogenizar bien con la misma asa y colocar una 
gota de Peróxido de hidrógeno al 3%. La aparición/producción de 
burbujas indicará una reacción catalasa positiva. 
Siempre se hará primero la oxidasa y después la catalasa. 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 37 de 43 
Versión No.01 
 
Pruebas fisiológicas 
1. Preparar una suspensión del cultivo a identificar: colocar una asada del 
crecimiento en un tubo de ensaye estéril que contenga 1.0 mL de Caldo Soya 
Tripticasa o Solución Salina Estéril. 
2. Ajustar esta suspensión al tubo número 4 del nefelómetro de Mc. Farland. 
3. Sembrar superficialmente con una asada bacteriológica la suspensión, en un 
tubo de Citrato de Simmons. 
4. Sembrar por picadura una asada de la suspensión en un tubo con medio 
Movilidad Indol Ornitina (MIO) (determinación de Indol, movilidad y 
ornitina). 
5. Estriar una asada de la suspensión en un tubo de Urea de Christensen en la 
superficie del agar. 
6. Inocular una asada de la suspensión por estría superficial un tubo con Agar 
Soya Tripticasa. 
7. Colocar, en forma aséptica una tira de papel filtro impregnado con acetato 
de plomo en el tubo de Agar Soya Tripticasa, para la determinación de ácido 
sulfhídrico. 
8. Sembrar por estría superficial y picadura un tubo de medio Kligler o Agar de 
Hierro y Triple azúcar (TSI). 
9. Incubar los cinco tubos (puntos 4 a 8) a 37 °C en aerobiosis durante 24 
horas. 
10. Hacer una lectura preliminar a las 24 horas y otra a las 48 horas. Si se deja 
transcurrir más tiempo, las lecturas obtenidas pueden ser erróneas. 
11. Las pruebas fisiológicas siempre deben inocularse siguiendo el orden 
indicado. 
 
Prueba de crecimiento en colorantes 
1. Usar placas con medio conteniendo Safranina, Fucsina y Tionina con las 
siguientes concentraciones: 1:500 para Safranina, 1:25000 y 1:50000 para 
Fucsina y Tionina respectivamente). 
2. Tomar de la suspensión que se utilizó para las pruebas fisiológicas (1) 
inocular una asada de esta suspensión formando cinco líneas sobre la 
superficie de cada una de las placas de colorante. 
3. Es importante no volver a cargar el asa después de haber formado cada una 
de las líneas, incubar en aerobiosis, durante 4-5 días a 37 °C. 
4. Buscar en la placa, crecimiento o ausencia del mismo, si el crecimiento 
aparece solo en la primera estría, se deberá a que en ella el inoculo fue más 
denso y la prueba se considera como negativa, la prueba es positiva cuando 
aparece crecimiento en tres o más estrías. 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 38 de 43 
Versión No.01 
5. Sin crecimiento en colorantes o con crecimiento en una o dos líneas, es 
preferible repetir la prueba. 
 
Prueba de fagotipia 
1. Utilizar la suspensión que se utilizó para las pruebas fisiológicas (1). 
Solamente se aplicará a cepas que hayan dado positivo a aglutinación en 
suero polivalente. 
2. Hacer resiembra masiva en una placa de Agar Brucella, Agar Tripticasa Soya 
o Base de Agar Sangre mediante estría gruesa con hisopo estéril en dos 
sentidos. 
3. Dejar absorber el inóculo y colocar en puntos equidistantes 1.0 µL de los 
siguientes fagos Tb, Bk, Iz, Fi, y Wb. Identificar sobre la placa el lugar en que 
se colocó cada fago. 
4. Dejar que se absorba la muestra e incubar en aerobiosis a 37 ºC durante 48 
horas. 
5. Leer en términos de la lisis observada en el cultivo, identificando como: 
a. LT: Lisis total. No se observa crecimiento en el área que ocupa la gota de 
fago. 
b. LP: Lisis parcial: Hay desarrollo escaso en el área ocupada por la gota de 
fago. 
c. NL: No lisis: Hay crecimiento sobre el área en que se colocó la gota. 
6. Anotar los resultados obtenidos en la libreta de resultados y con base en ello 
se realiza la identificación de la cepa. 
7. Reportar también a la red de cómputo, para imprimir el resultado y 
entregarlo con la hojade solicitud, en el área de recepción de muestras. 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 39 de 43 
Versión No.01 
II.- PREPARACIÓN DE REACTIVOS 
 
1) Solución desinfectante de hipoclorito de sodio 
Para descontaminar material de laboratorio, desinfectar mesas y superficies de 
trabajo, que se alterna mensualmente con la solución de fenol al 3.0% de 
acuerdo con el calendario establecido en el laboratorio. 
Solución de hipoclorito de sodio al 5.0% 
Hipoclorito de sodio concentrado al 13% 385 mL 
Agua destilada 615 mL 
 
2) Solución de fenol 
Para descontaminar material de laboratorio, desinfectar mesas y superficies de 
trabajo, que se alterna mensualmente con la solución de hipoclorito de sodio al 
5.0% de acuerdo con el calendario establecido en el laboratorio. 
Solución de fenol al 3% 
Fenol concentrado 3.0 g 
Agua destilada 100 mL 
 
3) Solución salina fisiológica (SS) 
NaCl 0.85 g 
Agua destilada 100 mL 
 
4) Solución salina fenolada (SSF) 
Fenol 0.5 g 
Solución Salina 100 mL 
Por cada 100 mL de SS adicionar 0.5 g de fenol 
 
5) Solución 2-mercaptoetanol 
2-mercaptoetanol 0.71 mL 
Solución Salina 100 mL 
Por cada 100 mL de SS adicionar 0.71 mL de 2-
mercaptoetanol 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 40 de 43 
Versión No.01 
6) Solución de acetato de plomo 
Para identificar la producción de ácido sulfhídrico 
a. Pesar 10 g de acetato de plomo y disolver en agua destilada. 
b. Cortar tiras de papel filtro de aproximadamente 5.0 cm de largo y 0.5 cm 
de ancho e impregnarlas con la solución anterior. 
c. Colocar las tiras impregnadas a 37 °C hasta que sequen. 
d. Guardar en tubos estériles hasta su uso. 
 
7) Solución de acriflavina para determinar fase celular 
a. Pesar 0.1 g de acriflavina neutra. 
b. Añadir 100 mL de agua destilada y disolver. 
c. Colocar en frasco ámbar y utilizar el mismo día. 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 41 de 43 
Versión No.01 
III.- AISLAMIENTO DE CEPAS 
Medio de cultivo base 
Las bacterias del género Brucella se cultivan en medios muy enriquecidos, para el 
aislamiento se emplean el Agar Soya Tripticasa, Agar Brucela, Agar Triptosa y Agar 
Infusión de Papa. Se puede añadir suero inactivado de caballo, bovino o conejo al 
5.0%, sin anticuerpos contra Brucella. En cada lote de suero nuevo se verifica la 
ausencia de anticuerpos y se inactiva a 56 °C durante 30 minutos, añadir el suero 
estéril al medio de cultivo base, que deberá estar a 45 °C, mezclar y vaciar en cajas 
de Petri o tubos. 
 
Medio de cultivo de Farell 
Es un medio de cultivo base al cual se le adicionan diferentes tipos de antibióticos y 
suero negativo al 5.0% para anticuerpos contra Brucella. Se utiliza cuando se trata 
de muestras muy contaminadas como el queso y la leche. 
1) Los antibióticos que se emplean y sus concentraciones son: Bacitracina a 25 
U/mL; Polimixina B a 5.0 U/mL; Cicloeximida a 100 µg/mL; Vancomicina a 
20 U/mL; Ácido Nalidíxico a 5.0 U/mL; Nistatina a 100 U/mL. Existe una 
mezcla comercial con estos antibióticos (suplemento selectivo para Brucella, 
marca OXOID). 
2) El medio base puede ser Agar Brucela o Agar Soya Tripticaseína; pesar la 
cantidad necesaria para preparar 500 mL del medio de acuerdo al 
instructivo del fabricante y esterilizar. Los antibióticos se diluyen de acuerdo 
a su instructivo. Si no se dispone de la presentación comercial, hacer los 
cálculos correspondientes a partir de las sales puras. 
3) Sacar el medio de la autoclave y permitir que baje su temperatura hasta 50 
°C. Agregar los antibióticos y el suero esterilizados por filtración, 
homogeneizar y vaciar el medio en placas de Petri. Almacenar las placas en 
refrigeración dentro de una bolsa de plástico hasta su uso. 
4) Otro medio sugerido por el Departamento de Agricultura de los EEUU, se 
prepara agregando al medio base 750 U/L de Bacitracina; Actidiona 
(Cicloheximida) a 30 mg/L; Polimixina a 1800 U/L; 50 mL/L suero negativo 
de caballo o conejo y 1.25 mL/L de violeta de etilo (solución acuosa al 0.1%). 
Se prepara como en el punto anterior. 
 
Medio de cultivo modificado de Ruíz Castañeda 
1) Utilizar como medio base Agar Soya Tripticaseína o Base de Agar Sangre. 
Preparar la cantidad de medio acorde al tamaño del frasco que se va a 
utilizar para ello, pesar la cantidad del medio siguiendo las instrucciones del 
fabricante de acuerdo al número de frascos que se van a preparar y, agregar 
el agar necesario para que la concentración final sea de 2.5% y lograr que la 
fase sólida permanezca adherida a las paredes del frasco. 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 42 de 43 
Versión No.01 
2) Hervir el agar para homogenizar y vaciar en los frascos la cantidad necesaria 
para formar una capa gruesa de agar. Esterilizar e inclinar los frascos para 
que solidifique el agar, dejar a prueba de esterilidad durante 24-48 horas. 
3) Preparar por separado la fase líquida, que contiene el caldo base (Caldo de 
Brucella o Caldo Soya Tripticaseína) y agregar Polianetol Sulfonato de Sodio 
al 0.05%, Cisteína al 0.025% y Sacarosa al 10%. Esterilizar y dejar para 
prueba de esterilidad de 24 a 48 horas. Una vez que pasa la prueba anterior, 
añadir a la fase sólida. en forma estéril. 
4) Los frascos con las dos fases, se mantienen durante 48 horas a 37 °C para 
comprobar la esterilidad, aquellos que presenten cualquier tipo de 
crecimiento o turbidez de la fase líquida, después de transcurrido este 
tiempo, se desechan. Tapar los frascos estériles con tapón de hule estéril y 
fijarlo con una gárgola de aluminio. Conservar a temperatura ambiente 
durante 2 a 3 días. Si en este tiempo se observa cualquier tipo de 
crecimiento, la botella se descarta. Si no se observa crecimiento los frascos 
se guardan en refrigeración hasta su uso. 
 
Medios de cultivo con colorantes 
Para la elaboración de estos medios se requiere preparar la solución madre de cada 
colorante y almacenarla en un frasco ámbar (de preferencia Pyrex™). 
 Deberá realizar el cálculo y pesar la cantidad necesaria de colorante para 
obtener una solución al 0.2 % p/v. 
 Someter la solución de colorante al 0.2% a flujo de vapor durante 40 
minutos en autoclave cerrado sin presión o en un baño de agua hirviendo 
durante una hora. 
 Guardar en refrigeración hasta su uso. 
Se puede emplear como medio base, Agar Brucella o Agar Soya Tripticaseína, 
adicionado con extracto de levadura al 1.0%, esterilizar y permitir que la 
temperatura disminuya hasta 40 °C. 
Los colorantes se añaden de acuerdo a la siguiente tabla, aunque algunos autores 
utilizan concentraciones diferentes 1:25,000, 1:50,000 y 1:100,000. 
Cada lote de colorantes se prueba con las cepas de referencia: 
Biovariedad ATCC. 544 (B. abortus 1) 23448, M16 (B. melitensis 1) 23456 y 1330 
(B. suis 1) 23444. 
 
Brucelosis-RNLSP/InDRE Página 43 de 43 
Versión No.01 
Cuadro 4. Preparación de medios con colorante 
Colorante Solución madre (% 
p/v) 
Volumen 
añadido por 
litro de medio 
(mL) 
Dilución final 
Fucsina básica* 0.2 20 1:50,000 
Fucsina básica* 0.2 40 1:25,000 
Tionina* 0.2 20 1:50,000 
Tionina* 0.2 40 1:25,000 
Safranina O 0.5 20 1:10,000 
 
	5
	LINEAMIENTOS PARA LA VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA DE BRUCELOSIS POR LABORATORIO