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UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRÉS FACULTAD DE TECNOLOGÍA CARRERA DE QUÍMICA INDUSTRIAL POLIMEROS DE BASE TANINICA PROVENIENTES DE MATERIAL VEGETAL PARA PURIFICAR AGUAS SUPERFICIALES (TURBIEDAD Y COLOR) Proyecto de grado presentado para la obtención del Título de Licenciatura POR: TANIA DEMSI VARGAS HUMEREZ TUTOR: Dr. ROMULO RENÉ GEMIO SIÑANI LA PAZ – BOLIVIA 2018 AGRADECIMIENTOS Agradezco en primer lugar a DIOS, que siempre ha estado en mi corazón, dándome la fuerza necesaria para poder cumplir todas mis metas trazadas. A mi madre Marina Humerez por su constante apoyo, fuerza y consejos, ya que ella es parte fundamental para impulsarme a concluir este proyecto. Y a mi padre Hernán Vargas por su apoyo a lo largo de mi carrera. Un agradecimiento especial a mi tutor Doctor Rómulo Gemio Siñani por su constante apoyo, dedicación y sus valiosos conocimientos que permitieron terminar este proyecto de manera satisfactoria. INDICE CAPITULO I INTRODUCCIÓN 1.1.Introducción ..................................................................................................................... 1 1.2.Antecedentes del Estudio................................................................................................. 2 1.3. Planteamiento del Problema ........................................................................................... 4 1.3.1. Árbol de problema............................................................................................ 4 1.4. Objetivos ......................................................................................................................... 5 1.4.1. Objetivo General .............................................................................................. 5 1.4.2. Objetivos Específicos ....................................................................................... 5 1.5. Justificación del Estudio ................................................................................................. 5 CAPITULO II MARCO TEÓRICO 2.1. Tanino ............................................................................................................................. 6 2.2. Características de los taninos .......................................................................................... 7 2.3. Clasificación ................................................................................................................... 7 2.3.1. Taninos hidrolizables ...................................................................................... 8 2.3.2. Taninos condensados ............................................................................................. 9 2.4. Aplicación de los taninos .............................................................................................. 11 2.5.Extracción Solido- Liquido ........................................................................................... 13 2.6.Aspectos importantes de la planta ................................................................................. 13 2.6.1. Genero acacia ................................................................................................ 13 2.6.2. Generalidades de la planta ............................................................................. 14 2.6.3. Descripción de la planta ................................................................................. 14 2.6.4. Fonología........................................................................................................ 15 2.6.5. Distribución geográfica .................................................................................. 15 2.6.6. Ecología.......................................................................................................... 16 2.6.7. Composición química proximal de la planta .................................................. 16 2.7. Características Organolépticas del agua ....................................................................... 17 2.7.1. Olor y Sabor .................................................................................................. 17 2.7.2. Color .............................................................................................................. 18 2.7.3. Turbiedad ....................................................................................................... 18 2.8. Coagulación .................................................................................................................. 18 2.9. Floculación .................................................................................................................. 19 CAPITULO III MARCO EXPERIMENTAL Y RESULTADOS 3.1. Localización y recolección de materia prima ........................................................ 20 3.2. Pruebas Cualitativas .............................................................................................. 21 a) Prueba del cloruro férrico 1% .............................................................................. 21 b) Prueba con dicromato de potasio ......................................................................... 21 c) Prueba con acetato de plomo................................................................................ 22 d) Prueba de la gelatina salada al 1% ....................................................................... 22 e) Prueba con cianuro de potasio al 5% ................................................................... 22 f) Prueba de yoduro de potasio al 5% ...................................................................... 22 g) Prueba de formaldehido ....................................................................................... 22 3.2.1. Ensayo fitoquimico con el extracto obtenido ................................................. 24 3.3. Obtención de taninos ............................................................................................. 26 3.4.Cuantificación de taninos en hojas de la planta de Prosopis laevigata (Humb & Bonpl.ex Willd.) M.C. Johnst var. andicola Burkart, por el método FOLIN – DENIS ................................................................................................................................ 29 3.4.1. Preparación el reactivo Folin – Denis ............................................................ 29 3.4.2. Preparación de la curva de calibración........................................................... 30 3.4.3. Preparación de la muestra de hojas ................................................................ 32 3.5. Rendimiento de la Extracción de taninos .............................................................. 37 3.6. Caracterización espectrofotométrica FT-IR .......................................................... 39 3.7. Aplicación del tanino en aguas preparadas en laboratorio .................................... 40 3.7.1. Arcilla recolectada del rio JILUSAYA ......................................................... 40 3.7.1.1.Estudio del tanino a diferentes masas en aguas turbias ............................. 41 3.8. Aplicación en aguas superficiales recolectadas ..................................................... 47 3.8.1. Pruebas con tanino obtenido .......................................................................... 50 3.8.2. Prueba con tanino puro comercial .................................................................. 52 3.8.3. Prueba con tanigel .......................................................................................... 53 3.9. Disminución del color en aguas coloreadas .......................................................... 55 3.9.1. Aplicación de tanino en soluciones coloreadas obtenidas de prendas que se decoloran .........................................................................55 3.9.1.1.Espectro de absorción de la solución de azul ........................................... 56 3.9.1.2.Espectro de absorción de la solución roja ................................................. 56 3.9.1.3.Barrido de la solución coloreada azul ..................................................... 57 a) Barrido de la solución azul con tanino obtenido ................................. 58 b) Barrido de la solución azul con tanigel ............................................... 59 c) Barrido de la solución roja con tanino comercial ............................... 60 3.9.1.4.Barrido de la solución roja con una absorbancia de 520nm ...................... 61 d) Barrido de la solución roja con tanino obtenido .................................. 61 e) Barrido de la solución roja con tanigel obtenido ................................. 62 f) Barrido de la solución roja con tanino comercial ................................ 63 3.10 Pruebas en Equipos de Jarras....................................................................................... 64 3.10.1 Prueba con sulfato de Aluminio ....................................................................... 65 3.10.2 Prueba con tanino obtenido .............................................................................. 69 3.10.3 Prueba con sulfato de aluminio y tanino .......................................................... 72 CAPITULO V CONCLUSIONES Y SUGERENCIAS 4.1.Conclusiones ............................................................................................................ 75 4.2. Recomendaciones ................................................................................................... 76 5. BIBLIOGRAFIA ........................................................................................................... 77 6. ANEXOS ....................................................................................................................... 80 6.1.ANEXO 1: Anexo de ficha de resultados de la caracterización de la planta .......... 81 6.2. ANEXO 2:Anexo fotográfico del proceso ............................................................ 82 6.3. ANEXO 3:Fotográfico del Proceso de Toma de Muestra de Agua ...................... 85 INDICE DE FOTOGRAFIAS FOTO Nº 1 Lugar donde se recolecto la planta ................................................................... 20 FOTO Nº 2 Proceso de secado ............................................................................................ 21 FOTO Nº 3 Reactivo a utilizar para determinar si es condesando o hidrolizado ................ 25 FOTO Nº 4 Se llevó a ebullición por 30min observando el precipitado que se forma enfriar y filtrar. ................................................................................................................................... 25 FOTO Nº 5 Se filtró y observo el precipitado en el papel filtro .......................................... 25 FOTO Nº 6 Se realizó pruebas cualitativas para determinar si es tanino hidrolizable o condensado ...................................................................................................................... 26 FOTO Nº 7 Muestra seca para la obtención de tanino ........................................................ 28 FOTO Nº 8 Proceso de ebullición de la muestra ................................................................. 28 FOTO Nº 9 Proceso de separación de muestra sólida y líquida .......................................... 28 FOTO Nº 10Precipitación de tanino con alcohol Guabirá .................................................. 29 FOTO Nº 11 Muestra en el desecador, para su posterior secado ........................................ 29 FOTO Nº 12 Patrones para la curva de calibración, reposando 30min ............................... 33 FOTO Nº 13 Muestras con contenido de tanino en reposo por 30 min ............................... 33 FOTO Nº 14 Equipo BIOCHROM .................................................................................... 33 FOTO Nº 15 Barrido del matraz #3 de las muestras patrón, donde su máxima longitud de onda es de 666,0 nm ..................................................................................................................... 34 FOTO Nº 16 Lecturas hechas para la curva de calibración. ................................................ 34 FOTO Nº 17 Tanino en polvo, muestra completamente pulverizada .................................. 38 FOTO Nº 18 Rio JILUSAYA donde fue recolectada la muestra de Arcilla ....................... 40 FOTO Nº 19 Muestra de greda recolectada (seca) .............................................................. 41 FOTO Nº 20 Medición de pH con el papel tornasol ........................................................... 48 FOTO Nº21 Equipo de pHmetro utilizado para medir el pH .............................................. 49 FOTO Nº 22 Equipo de Turbidimetro ................................................................................. 49 FOTO Nº 23 Rio de Botijlaca, donde se recolecto la muestra ............................................ 49 FOTO Nº 24 Recipiente utilizado para recolectar la muestra de agua del rio de Botijlaca y la muestra de agua ................................................................................................................... 49 FOTO Nº 25 Frascos de vidrio que se utilizaran, con capacidad de 20mL ......................... 50 FOTO Nº 26 Tanino puro comercial. .................................................................................. 52 FOTO Nº 27 Tanigel sintitizado a partir del tanino obtenido. ............................................ 54 FOTO Nº 28 Muestra de agua coloreada de color rojo y azul ............................................ 55 FOTO Nº 29 Barrido de la muestra coloreada de azul ....................................................... 56 FOTO Nº 30 Barrido de la muestra coloreada rojo ............................................................. 57 FOTO Nº 31 Muestras pesadas para el tanino obtenido, tanigel y tanino puro................... 57 FOTO Nº 32 barrido de muestras de tanino con la solución coloreada azul ...................... 58 FOTO Nº 33 barrido de muestras de tanigel con la solución coloreada azul ..................... 59 FOTO Nº 34 Barrido de la muestra coloreada azul con tanino puro comercial .................. 60 FOTO Nº 35 Muestras pesadas para el tanino obtenido, tanigel y tanino puro................... 61 FOTO Nº 36 Barrido de la muestra coloreada roja con tanino extraído a diferentes masas.62 FOTO Nº 37 Barrido de la muestra coloreada rojo con muestra de tanigel obtenido ......... 63 FOTO Nº 38 Barrido de la muestra coloreada rojo con muestra de tanino puro comercial 64 FOTO Nº 39 Equipo de Jarras ............................................................................................ 65 FOTO Nº 40 Etapa de floculación con el sulfato de aluminio ............................................ 67 FOTO Nº 41 Etapa de decantación de 20 min ..................................................................... 68 FOTO Nº 42 Etapa de dosificación para el tanino .............................................................. 69 FOTO Nº 43 Etapa de decantación de tanino a 1000ppm ................................................... 70 FOTO Nº 44 Etapa de dosificación de tanino a 10000ppm ................................................ 72 FOTO Nº 45 Etapa de remoción de turbiedad de mezcla de sulfato de aluminio y tanino . 74 INDICE DE TABLAS Tabla Nº1 Composición química proximal de la planta ..................................................... 17 Tabla Nº2 Pruebas Cualitativas Al Extracto De Hojas ........................................................ 22 Tabla Nº 3 Datos obtenidos en la curva de calibración ....................................................... 35 TablaNº 4 Resultado de la cuantificación por el método Folin – Denis ............................. 36 Tabla Nº 5 Rendimiento obtenido de tanino........................................................................ 38 Tabla Nº 6 Turbiedad de 124 NTU...................................................................................... 42 Tabla Nº 7Turbiedad de 96,4NTU....................................................................................... 42 Tabla Nº 8 Turbiedad de 97,1 NTU..................................................................................... 43 Tabla Nº 9 Turbiedad 107 NTU .......................................................................................... 43 Tabla Nº 10 turbiedad de 68,8 NTU .................................................................................. 44 Tabla Nº 11 Turbiedad de 77,0 NTU................................................................................... 45 Tabla Nº 12 Turbiedad de 68,7 NTU................................................................................... 45 Tabla Nº 13 Turbiedad de 24,5NTU ................................................................................... 46 Tabla Nº 14 Turbiedad De 23,5 NTU .................................................................................. 47 Tabla Nº 15 Pruebas que se tomaron al inicio de la recolección de la muestra .................. 48 Tabla Nº 16 Pruebas que se tomaron cuando se llegó al laboratorio de Química Industrial48 Tabla Nº 17 Turbiedad de 30,3 NTU................................................................................... 50 Tabla Nº 18 Turbiedad de 21,3 NTU................................................................................... 51 Tabla Nº 19 Turbiedad de 24,97 NTU................................................................................. 53 Tabla Nº 20 Turbiedad de 20,4 NTU................................................................................... 54 Tabla Nº 21 Espectro de absorción de la solución azul ....................................................... 56 Tabla Nº 22 Espectro de absorción de la solución roja ....................................................... 56 Tabla Nº 23 Resultado de la dosificación a diferentes concentraciones para el sulfato de Aluminio ............................................................................................................................. 67 Tabla Nº 24 Resultado de la dosificación a diferentes concentraciones para el tanino ....... 69 Tabla Nº 25 Resultado de la dosificación a diferentes concentraciones para el tanino de 10000ppm ............................................................................................................................ 71 Tabla Nº 26 Resultado de la dosificación a diferentes concentraciones para el sulfato de aluminio y tanino ................................................................................................................. 73 INDICE DE FIGURAS Fig. 1. Estructura de ácido tánico (trímero n=3).................................................................... 6 Fig. 2 Estructura del ácido gálico .......................................................................................... 8 Fig. 3 Estructura química de los elagitaninos ........................................................................ 8 Fig.4 Mecanismo de obtención de elagitaninos..................................................................... 9 Fig. 5 Estructura básica de los taninos condensados ........................................................... 10 Fig. 6 Taninos condensados................................................................................................. 10 Fig. 7 Proceso de extracción Solido - Líquido .................................................................... 13 Fig 8. Prosopis laevigata var andicola Burkart .................................................................... 15 Fig. 9 Distribución virtual de Prosopis laevigata var. Andicola Burkart ........................... 16 Fig. 10 Proceso de coagulación ......................................................................................... 19 Fig. 11 Procedimiento para la obtención de tanino ............................................................. 27 Fig. 12 Procedimiento para la preparación de la curva de calibración ................................ 31 Fig. 13 Procedimiento para la preparación de la muestra.................................................... 32 Fig. 14 Tanino de muestra comercial de industria brasileña TANFLOC ............................ 39 Fig. 15 Tanino extraido a partir de hojas de la planta Prosopis laevigata (Humb & Bonpl. ex Willd.) M.C. Johnst var. andicola Burkart .......................................................................... 40 Fig. 16 Procedimiento para las lecturas de turbiedad de 70 a 130 NTU ............................. 41 Fig. 17 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0123g ....................................... 42 Fig. 18 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0230g ....................................... 42 Fig. 19 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0370g ....................................... 43 Fig. 20 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0465g ....................................... 43 Fig. 21 Procedimiento para las lecturas de turbiedad de 60 a 70 NTU ............................... 44 Fig. 22 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0105g ....................................... 44 Fig. 23 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0324g ....................................... 45 Fig. 24 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0434g ....................................... 45 Fig. 25 Procedimiento para las lecturas de turbiedad de 20 a 30 NTU ............................... 46 Fig. 26 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0113g ....................................... 46 Fig. 27 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0320g ....................................... 47 Fig. 28 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una muestra turbia de 30,3 NTU ..................... 51 Fig. 29 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una muestra turbia de 21,3 NTU ..................... 52 Fig. 30 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una muestra turbia de 24,97 NTU ................... 53 Fig. 31 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una muestra turbia de 20,4 NTU ..................... 54 Fig. 32 Proceso de pesado de muestras de tanino obtenido en laboratorio ......................... 58 Fig. 33 Proceso de pesado de muestras de tanigel. .............................................................. 59 Fig. 34 Proceso de pesado de muestras de tanino puro comercial ...................................... 60 Fig. 35 Proceso de pesado de muestras de tanino obtenido en laboratorio ......................... 61 Fig. 36 Proceso de pesado de muestras de tanigel obtenido ................................................ 62 Fig. 37 Proceso de pesado de muestras de tanino comercial. ............................................. 63 Fig. 38 Gráfica turbiedad final vs. Dosis de sulfato de aluminio ........................................ 68 Fig. 39 Grafica turbiedad final vs. Dosis de Tanino a 1000ppm ......................................... 70 Fig. 40 Grafica turbiedad final vs. Dosis de Tanino a 10000ppm ....................................... 71 Fig. 41 Grafica turbiedad final vs. Dosis mezcla Sulfato de Aluminio y Tanino ............... 73 1 CAPITULO I 1. INTRODUCCIÓN 1.1.Introducción El agua “potable", para ser aceptable desde el punto de vista estético, debe estar exenta de turbidez, de color y de sabor perceptibles. Las aguas naturales raramente son de calidad satisfactoria para el consumo humano o el uso industrial y casi siempre deben ser tratadas (Kiely, 1999). Elagua cruda debe ser sometida a un tratamiento de sedimentación para luego proceder con la coagulación y floculación. La coagulación, es la adición de sustancias químicas y la mezcla mecánica, para que las partículas se aglutinen en partículas más grandes y puedan ser retirados (Dempsey, 2006). Su aplicación incluye la remoción de especies químicas y la turbiedad del agua por adición de coagulantes químicos convencionales; además, la coagulación/floculación es un paso fundamental en el proceso de tratamiento del agua, esencialmente por que remueve las partículas responsables de la turbiedad producida por las partículas suspendidas y por el material coloidal, también remueve microorganismos que, a menudo se adhieren a las partículas (McCarthy &Zachara 1989; Antov et al. 2010); sin embargo, existen desventajas asociadas al uso de coagulantes, como altos costos de adquisición, producción de grandes volúmenes de residuos sólidos y el hecho que afectan significativamente el pH del agua tratada (Yin, 2010; Haaroff&Cleasby 1988). También existe evidencia que relaciona a los coagulantes, a base de aluminio, con el desarrollo de la enfermedad de Alzheimer en los seres humanos, debido a la presencia de aluminio residual en el agua tratada (Flaten, 2001; Miller et al. 1984). El uso de coagulantes extraídos de plantas en el tratamiento de aguas turbias data de varios milenios (Sanghi et al. 2002) y hasta ahora se han podido identificar varios tipos de plantas, para este propósito. El empleo de materiales naturales puede minimizar o evitar la importación de los coagulantes químicos (Yin, 2010). El objeto de esta investigación es la de dar a conocer aspectos relevantes del tanino que es obtenido a partir del género acacia (Legumionosa mimosoideae) Prosopis laevigata M.C. Johnst. var. andicola Burkart, su extracción, su identificación, eficiencia y sus aplicaciones en 2 cuanto a remoción de la turbiedad y la disminución del color. Además, presentar recomendaciones y conclusiones de los principales aportes. La metodología a ser aplicada será del tipo cualitativo exploratorio, en donde se realizará una investigación experimental y aplicativa. 1.2.Antecedentes del Estudio Los taninos: Tradicionalmente, se han usado para el curtido de pieles, varios de ellos también se han empleado como floculantes. Las principales ventajas de la utilización de coagulantes naturales a base de plantas como material para el tratamiento de agua son evidentes: remueven turbiedad orgánica e inorgánica, remueven color verdadero y aparente, producen lodo de fácil remoción, eliminan patógenos, destruyen algas y plancton, eliminan sustancias que producen sabor y olor; son rentables por los bajos costos de producción. Estas ventajas son especialmente aumentadas si la planta de la que se extrae el coagulante es autóctona de una comunidad rural. Los taninos aparecen como substitutos de las sales de aluminio en el tratamiento de aguas. El género acacia (Legumionosa mimosoideae) surge como una alternativa de obtención de taninos, este género está ampliamente distribuido en la región de Rio Abajo de la Cuidad de La Paz. Este trabajo quiere contribuir en la obtención y cuantificación de tanino para la aplicación en la remoción de turbiedad y color de aguas preparadas en laboratorio y superficiales. Las referencias bibliográficas en la Universidad Mayor de San Andrés se puede verificar que no existen trabajos ni teóricos ni prácticos acerca del género acacia (Legumionosa mimosoideae) Prosopis laevigata M.C. Johnst. var. andicola Burkart. Las únicas referencias dirigidas específicamente a los taninos es la tesis de grado para optar al título de Licenciatura en Ingeniería Química del señor Carlos Dellien Bause “Extracción de tanino a partir del Curupaú” en 1986 y el proyecto de grado para optar al título de Licenciatura en Química Industrial del señor Fanor Gomez Portillo “Extracción de taninos a partir de hojas y tallos de la Palta (Persea americana)” 2014. 3 En cuanto a otras bibliografía consultada se tiene a; Siban et al. (2009) utilizaron extractos de diferentes semillas: "Horsechestnut" (Aesculushyppocastanum), roble común (Q. robur), roble turco (Q. cerris), roble rojo norteño (Q. ruber) y castañea europea (C. sativa). A cada uno de los extractos les determinaron contenido de proteínas y su actividad coagulante, encontrando que la castaña europea y el roble común son las más eficientes. Sánchez et al. (2010a) ensayaron cuatro tipos de agua (agua superficial, agua residual municipal, aguas residuales de industria textil y aguas residuales de lavandería) y como agente coagulante TANFLOC (extracto de mimosa modificado). El resultado obtenido fue la remoción de turbidez del agua superficial entre 50-60%, con una dosis de 2mg/L. Sánchez et al. (2010b) analizaron el coagulante SILVAFLOC, un producto a base de taninos, el cual, se modificó mediante proceso fisicoquímico. Ellos reportan una remoción de turbidez del 90%, con una dosis de 20mg/L. Beltrán et al. (2011) reportaron un nuevo agente coagulante, a partir del extracto del tanino crudo de la A. mearnsii, el cual fue obtenido con NH4Cl y formaldehido. Como resultados, apreciaron diferencias evidentes en la eficiencia de la remoción. Respecto de la remoción de turbidez, encontraron que a bajas dosis de coagulante (12,5-25mg/L) es posible remover la casi totalidad de la turbidez inicial de las muestras. Entre los coagulantes vegetales no maderables usados por la sabiduría tradicional de muchas culturas de Sud América se destacan las semillas, tallos, hojas y flores de muchas que actúan como floculantes para la clarificación de agua. Sciban et al, (2009) evaluaron la capacidad de los extractos de semilla de las especies de castaña y bellota como coagulantes naturales en el tratamiento de agua para potabilización. Los componentes activos fueron extraídos de semillas del castaño y bellota de algunas especies de la familia de las Fagaceae tales como: roble común, de Turquía, rojo del Norte y castaña Europea. Los extractos estudiados presentaron capacidad de coagulación y sus cantidades dependieron de los valores de pH y turbidez inicial. El empleo de los agentes naturales para el tratamiento del agua cruda, es una técnica muy antigua, sin embargo, en las últimas décadas su estudio se ha profundizado generando nuevas alternativas mediante el uso de agentes origen vegetal o animal. Todos los extractos, de origen natural, ensayados y reportados en esta revisión son eficientes en la remoción de turbidez del 4 agua, comparados en algunos casos con el sulfato férrico o aluminio. La adición de coagulantes naturales, reduce significativamente la dosis de productos químicos. Los coagulantes naturales funcionan mediante un mecanismo de adsorción seguido por la neutralización de carga. El empleo de materiales naturales puede minimizar el impacto de los coagulantes químicos, reduciendo de manera significativa los costos de tratamiento si se dispone de ellos a nivel local. Las fuentes para la producción de agentes naturales dependen, en gran medida, de la disponibilidad de los recursos. 1.3.Planteamiento del Problema El interés de esta investigación radica en evaluar el extracto de taninos, observando su capacidad de remoción y decoloración en aguas preparadas con arcillas recolectadas del rio Jilusaya y aplicadas a sistemas reales con taninos extraídos del género acacia (Legumionosa mimosoideae) Prosopis laevigata (Humb. &Bonpl. exWilld) M.C. Johnst. var. andicola Burkart colectada en la localidad de Huajchilla, Provincia Murillo del Departamento de La Paz. 1.3.1. Árbol De Problema Utilizado en forrajes para animales. Planta utilizada como carbón y leña para venta y uso propio de los comunarios. Material vegetal desaprovechado, sin ningúnuso específico. EL género acacia (Legumionosa mimosoideae) Prosopis laevigata (Humb. &Bonpl. ex Willd) M.C. Johnst. var. andicola Burkart., ha sido poco estudiado. Una alternativa para mejorar su uso. Perdida de materia prima. Mejor aprovechamiento de la materia prima, ejemplo en la remoción de turbiedad en aguas superficiales. 5 1.4.Objetivos 1.4.1. Objetivos General Obtención de polímeros de base taninica, del genero acacia (Legumionosa mimosoideae) Prosopis laevigata (Humb. & Bonpl. ex Willd) M.C. Johnst. var. andicola Burkart a recolectarse en la región de Huajchilla y su aplicación en remoción de la turbiedad y decoloración de aguas superficiales. 1.4.2. Objetivos Específicos Identificar la especie y género de la planta. Determinar el porcentaje de taninos en la planta. Proponer un método de extracción de taninos Caracterización química de los taninos mediante técnicas espectrofotométricas (UV-VIS e IR). Encontrar parámetros óptimos de cambios en la turbiedad predeterminada con arcillas del rio Jilusaya observando su posible capacidad de remoción de la turbiedad. Encontrar parámetros óptimos del cambio de coloración en soluciones de color azul y rojo, extraídas de prendas de vestir. Aplicar los parámetros óptimos a sistemas de aguas superficiales del río de Botijlaca. 1.5. Justificación del Estudio La búsqueda de nuevos productos amigables en la remoción de turbiedad y color de aguas superficiales, encuentra en los productos naturales una fuente importante de este tipo de sustancia con estas características, el presente trabajo pretende aportar con un estudio en la extracción y utilización de los taninos obtenidos de las hojas del genero acacia (Legumionosa mimosoideae) Prosopis laevigata (Humb. & Bonpl. ex Willd) M.C. Johnst. var. andicola Burkart , que puede ser explotada por los comunarios para su posterior transformación como materia prima de obtención de taninos. La obtención del tanino no con lleva procedimientos largos y caros, no se necesitan productos químicos de alto presupuesto al contrario este procedimiento a realizarse será accesible y de mucha eficacia. 6 CAPITULO II 2. MARCO TEÓRICO 2.1.Tanino Se denominan así a un grupo de sustancias orgánicas (metabolitos secundarios) que están ampliamente distribuidas en el reino vegetal, en casi todas las familias. Cuando se presentan en cantidades considerables, suelen localizarse en determinadas partes, como las hojas, frutos, corteza o tallos. Es común que en las plantas herbáceas se presenten localizados en una cantidad considerable en las raíces, disminuyendo mucho la concentración cuando se trata de plantas anuales. En las plantas leñosas, tanto la localización como la abundancia son variadas. Fig. 1. Estructura de ácido tánico (trímero n=3) Fuente: Álvaro Peña 2006 En la Fig. 1 es posible apreciar un compuesto formado por 3 esqueletos de flavonol, es decir un tanino con grado de polimerización de 3. En cuanto al tamaño de polimerización del tanino, se ha podido establecer que taninos con tamaños de polimerización cercanos a diez unidades de flavonol (decámeros), son los más astringentes y en los casos de los cercanos a cuatro unidades (tetrámeros) son los más amargos. 7 2.2.Características de los taninos Son polifenoles naturales, que son metabolitos secundarios ampliamente distribuidos en varios sectores del reino de las plantas superiores. Se distinguen por las siguientes características generales: Solubilidad en agua Masa molecular entre 500 y 3000 – 5000 Estructura y carácter polifenólico (12-16 grupos fenólicos y 5 -7 anillos aromáticos por cada 1000 unidades de masa molecular relativa) Con las sales férricas dan coloraciones negro azuladas o verdosas. Produce un color rojo intenso con ferricianuro de potasio y amoníaco, e indica la presencia de tanino condensado. Produce un precipitado naranja con dicromato de potasio. Se presenta un precipitado blanco con Acetato de plomo. Pruebas con gelatina salada y ácido sulfúrico, se presenta un precipitado blanco. Produce un color amarrillo con el cianuro de potasio al 5%. Produce un precipitado naranja con yoduro de potasio al 5%, además nos indica que es tanino gálico. Un precipitado beige con Formaldehido, indica la presencia de tanino condensado. Precipitan a las proteínas en solución y se combinan con ellas, haciéndolas resistentes a la enzimas proteolíticas. Esta propiedad, denominada astringencia. 2.3.Clasificación Dado que estos compuestos se han investigado durante más de 100 años, se diseñaron diferentes clasificaciones de acuerdo con el nivel del conocimiento que de éstos se tenía en los diferentes períodos de tiempo. La clasificación de Freudenberg, que actualmente es empleada, tiene su fundamento en el tipo de estructura base del tanino. Es así que los agrupa en dos grandes clases: taninos hidrolizables y taninos condensados, con las siguientes características: 8 2.3.1. Taninos hidrolizables Los llamados taninos hidrolizables son esteres que pueden hidrolizarse hirviéndoles con ácido clorhídrico diluido, el componente alcohólico del ester generalmente es un azúcar. El ácido gálico probablemente es uno de los más comunes, el ácido elagico es un producto secundario que se forma por hidrolisis de algunos taninos que son esteres del ácido hexaoxidifenico. Estos taninos se encuentran en la nuez en la corteza del roble o encino y en la corteza del granado. Las estructuras de componentes ácidos de taninos hidrolizables son: Fig. 2 Estructura del ácido gálico Fuente: Gross 1992 Fig. 3 Estructura química de los elagitaninos Fuente: Gross 1992 9 Ácido hexahidroxidifenoico Ácido elágico Fig.4 Mecanismo de obtención de elagitaninos. Fuente: Gross 1992 Los estudios más relevantes sobre estos taninos han sido los realizados por Haslam (1981), dirigidos fundamentalmente a la determinación de las estructuras de los galotaninos simples. Más recientemente, Okuda et al. (1990) han caracterizado y clasificado los taninos hidrolizables más complejos. La extracción de los taninos hidrolizables se puede realizar con diversos disolventes como hexano, diclorometano, metanol y agua (Okuda et al. 1990). A diferencia de los taninos condensados, los hidrolizables pueden presentar reacciones diversas en función del disolvente empleado. Así por ejemplo, una disolución acuosa de tanino a 60 ºC es suficiente para liberar ácido gálico (Tedder et al. 1972) y a 100 ºC los elagitaninos se pueden descomponer dando lugar al ácido elágico (Nishimura et al.1 986). 2.3.2. Taninos condensados Los taninos condensados conocidos genéricamente como poliflavonoides oproantocianidinas están constituidos por flavonoides con diferentes grados de condensación (flavan-3-ol y flavan-3,4-diol) así como otros flavonoides análogos, carbohidratos y trazas de amino e imino ácidos. La estructura básica de los taninos se presenta en: 10 Fig. 5 Estructura básica de los taninos condensados Fuente:Hon y Shiraishi 2001 Cuando se hidrolizan dan fenoles polihidricos simples como el ácido gálico del que se obtiene pirogalol o bien, ácido protocatequico que su vez produce el catecol para dar lugar a los taninos condesandos o catequinas. En este caso, los núcleos están unidos por átomos de carbono y no se separan por la acción de las enzimas hidrolizantes ni de los ácidos diluidos. Fig. 6 Taninos condensados Fuente: GomezFanor 2001 11 Los taninos condensados, son no hidrolizables; y son característicos de los taninos de mayor importancia comercial como mimosa, quebracho, mangrove, hemlock. Estos taninos son másastringentes (curten más rápido) que los taninos hidrolizables, tienen también moléculas más grandes. Los taninos condensados dejan menor sedimento, o por lo menos pierden menos durante el curtido, pero el cuero frecuentemente tiende a colorearse de rojo cuando se expone a la luz; producen flabofenos o rojos. 2.4.Aplicación de los taninos Los taninos tienen un sin número de aplicaciones a nivel industrial, ya que son polímeros orgánicos naturales que han llegado a convertirse en gran interés, debido a que son compuestos que no generan efectos altamente nocivos al medio ambiente y la salud humana, dada su naturaleza orgánica además de obtenerlos a un bajo costo. En este contexto, los taninos catiónicos pueden ser el recurso de nuevos agentes de coagulación. A escala experimental, se ha demostrado que es posible sintetizar coagulantes derivados de los taninos a partir de varias materias primas: Acacia meamsii, Sch. Balansae, P. pinaster, C. sativa, a travez de un procedimiento simple, que involucra la reacción de Mannish. Yin (2010) y Ozacar & Sengil (2003) estudiaron la aplicación del tanino como coagulante autónomo o como ayuda de coagulación, para el tratamiento de agua. El tanino usado en su estudio, se extrajo de la Valonia. Donde el tanino combinado con el sulfato de aluminio es un excelente sustituto de los coagulantes químicos. Los taninos han sido utilizados durante siglos como elementos curtientes de un sin número de pieles de animales, las que luego se destinan a la elaboración de múltiples artículos: maletas de viaje, bolsos, zapatos, chaquetas, monturas para caballería, etc. La utilización de estos principios de curtido, se debe a la particularidad de convertir una piel en cuero. Este proceso se logra gracias a que los taninos reaccionan con las proteínas, como la gelatina, distribuyéndose en forma uniforme por todas las uniones peptídicas, con lo cual se logra un cuero de características muy especiales, de acuerdo con la calidad y procesos utilizados en características muy especiales. Un cuero debidamente curtido tiene la ventaja de ser flexible y durable. Según el elemento curtiente utilizado, los cueros además de tomar un color 12 característico, se torna inmunes al ataque de agentes externos (virus, bacterias, hongos), y no se hidrolizan al contacto con el agua. Por la propiedad que tienen los taninos de reaccionar en forma fácil con sales férricas, proporcionando productos de tonos muy variados, los que han sido utilizados universalmente en la tintorería y por ende en la elaboración de tintas. Los taninos en ciertas condiciones pueden obrar como medios clarificantes y al mismo tiempo como preservantes; por esto se utilizan en gran escala en la industria de enlatadas y embotellados de productos como jamones, sardinas, embutidos, jugos, vinos, etc. Es muy importante el empleo del tanino en terapéutica, como astringente. La supresión de la secreción mucosa del conducto intestinal se funda, aparentemente en su acción astringente. El tanino, lo mismo que sus derivados, se elimina del organismo en forma de ácido gálico, así queda excluida la acción astringente. Sin embargo, debe notarse que en solución concentrada actúa como cáustico sobre la piel y mucosas. Se emplea al exterior contra las hemorragias y en los procesos con separación (extracción de pus), en las enfermedades de las encías, difteria, caída del cabello y como contraveneno de los compuestos metálicos y alcaloides. Es extraordinariamente grande el número de preparados medicinales en los cuales se ha combinado con otros compuestos, en parte para disminuir sus propiedades cáusticas, insolubilizarlo, a fin de hacer menos perceptible su gusto desagradable o para que actúe más lejos, por ejemplo, en el conducto intestinal, para hacer insolubles a otros medicamentos (los alcaloides pierden así el sabor amargo), y finalmente para coadyuvar con su acción medicamentosa. Actualmente, en algunos países, son utilizados para lo conservación de aparejos de pesca, debido a sus propiedades bactericidas y fungicidas, en la fabricación de plástico y adhesivos, por su facilidad de reaccionar con el aldehído fórmico; fabricación de moldes cerámicos y en perforación de pozos petroleros, gracias a su acción dispersante y el control de viscosidad de lodos; como desincrustante de calderas de vapor y como clarificador del vino, principalmente como ácido tánico. 13 2.5. Extracción Sólido – Líquido La extracción sólido-líquido es una operación unitaria cuya finalidad es la separación de uno o más componentes de una fase sólida, mediante la utilización de uno o más componentes contenidos en una fase sólida, mediante la utilización de una fase líquida o disolvente. El componente o componentes que se transfieren de la fase sólida a la líquida reciben el nombre de soluto, mientras que el sólido insoluble se denomina inerte. Entre más grande sea la superficie de contacto entre la parte sólida y el líquido que le atraviesa aumenta la eficiencia de la extracción y para que se dé esto es necesario que la parte sólida se le someta a un pre tratamiento que normalmente es el secado y la molienda de la muestra. Esquema de la extracción; antes de la extracción (Izquierda) y después de la extracción (derecha). 1 Disolvente, 2 material de extracción (base portadora solido con soluto), 3 soluto, 4 fase portadora solida lixiviada, 5 disolvente con el soluto de transición en el disuelto. Fig 7. Proceso de extracción Sólido – Líquido Fuente: Brenan 1988 2.6. Aspectos importantes de la planta 2.6.1. Genero acacia El género Acacia, el segundo más grande en la familia (después de Astragalus), cuenta con aproximadamente 1200 especies ampliamente distribuidas en los trópicos del mundo. Se trata del único género dentro de la tribu Acacieaey posee unas 890 especies en Australia, y en América, aproximadamente 200 especies. Las especies de Acacia poseen una variabilidad morfológica en algunos caracteres taxonómicos que pueden dificultar su identificación. Este hecho además ha contribuido en parte a que se hayan acumulado numerosos sinónimos para algunas de las especies. Por 14 ejemplo, la presencia de espinas es una de las características que ayudan a identificar los materiales herborizados. Cuando se toma la muestra de las partes maduras de la planta, dichas estructuras están presentes y son muy evidentes. Por contra, en las porciones más jóvenes y generalmente en las asociadas a las inflorescencias o frutos, las espinas y aguijones no se han desarrollado en el momento de la herborización. 2.6.2. Generalidades de la planta Nombre científico: Prosopislaevigata (H. B. ex Willd.) Johnst. M.C Nombre común: “Mezquite” (México), “Algarrobo”, “Thaco” (Bolivia) Familia: Mimosaceae (Leguminoseae: Mimosoideae) Género: Acacia 2.6.3. Descripción de la planta Arbusto de 1-3 metros o arboles de 5 – 8 metros de alto, glabros, ramas vigorosas, muy flexibles, espinas germinadas, axilares de 4 – 9 centímetros de largo por 5-6 milímetros de ancho en la base. Hojas uniyugas, pinnas de 5-9 centímetros, de largo con 16 – 24 pares de folilos, estos subcoriaceos, linear – oblongo, obtusos a subagudos, nerviación reticulada de 5 – 12 milímetros de largo por 1.5 – 1.2 milímetros de ancho, los márgenes de los foliolos se tocan o si están distanciados, esta distancia es menor al ancho del mismo. Legumbre subfalcada, 7 – 20 centímetros de largo por 1.1 – 1.4 centímetros de ancho comprimidas con los márgenes ondulados o cercanamente paralelos como se muestra en la siguiente figura: 15 Fig 8. Prosopis laevigata var andicola Burkart Fuente: M.Atahuachi et al. 514 Bolivia 2.6.4. Fonología Flor de septiembre a marzo. Desarrolla los frutos de septiembre a mayo. 2.6.5. Distribución geográficaChuquisaca NorCinti, 16 km al norte de Camargo, J.C. Solomon 11331 (LPB) Yamparnez a 12 km de Sucre a Tarabuco, M. Atahuachi 7 (BOLV) Cochabamba, Arani, Cerro de arani, Cardenas 3647(SI), Arque, Rio Sayari, frente a Changollatacopaya rio Comuna, P. Ibisch 642 (LPB): cerca atacopaya , rio comuna, P. Ibich 603 (LPB). Campero, camino hacia omeregue, km 181 borde de camino, C. Antezana 396 (BOLV), Rumirancho a 17 km de aquile, R. Yucra 1, 2,3 ,4, 6, 7, 9, 11, (LPB); Cercado, a 12 km de A quile, R. Yucra 12, 13, 14,16, 18. Capinota, F Pedrotti s/n (LPB). Mizque, cantón Molinero Raqay pampa, M. sigle 102 (LPB). En La Paz se encuentra en la florida 17 km rio Abajo, Beck &Liberman 12485 (LPB); de La Paz hacia rio abajo, Beck 11210 (LPB); 2 km de Mecapaca J. C. Solomon 5098 (LPB). Potosí, sud Chichas, bajando a Cazonn, 64 km Tupiza, G. Torrico& C. Peca 442 (LPB); Rio juan del oro, M. Atahuahi, G. Navarro &Arrazola 514 (BOLV). Saavedra, a 40 km sobre la carretera Potosí – Sucre, M. Atahuachi 2 (BOLV). Santa Cruz, Cordillera a 4 km de Boyoibe hacia Charagua; E. Fernandez& C. Antezana 77 (BOLV). Tarija Cercado, T. Meyer 17965 (SI); Pinos bee, K, Fiebrig2492 (SI). 16 Fig. 9 Distribución virtual de Prosopis laevigata var. Andicola Burkart Fuente: M. Atahuachi et al. 514 Bolivia 2.6.6. Ecología Especie xerófila, forma parte fundamental de las etapas seriales de los bosques Xerofíticos de Schinopsishaenkeana en chaparrales degradados. Freatofito (son plantas que se abastecen con aguas subterráneas) solo en climas cálidos. 2.6.7. Composición química proximal de la planta El fruto de mezquite es una legumbre con altos contenidos de proteínas y carbohidratos que varían de tamaño, color y características químicas según la especie véase (tabla Nº1). 17 Tabla Nº 1 Composición quimica proximal de la vaina de diferentes especies de prosopis, de acuerdo a diversos autores. Especie y Autor Humedad (%) Cenizas (%) Proteina (%) Grasas (%) Fibra(%) Carbohidratos (%) P. laevigata Ramirez et al., (2000) 3 3 12 5 25 52 P. laevigata Ruiz (2011) 9.22 4.2 10.28 3.9 16.88 48.1 P. glandulosa var, Torreyana Solorio (2001) 7.41 4.98 13.27 1.99 25.27 47.08 P. glandulosa var. glandulosa Carrillo (2006) no determinado 3.15 20.15 1.95 23.9 50.86 Fuente: Karina Lisbet Resendez, 2014 Según Ramírez et al 2000, las vainas de las especie Prosopis son ricas en carbohidratos (ver tabla Nº1). Este hecho hace que los extractos acuosos de este órgano tiendan a caramelizarse, lo que dificulta la extracción de taninos, los tallos presentan pectinas y gomas que ocasionan el mismo efecto anterior. Por estas razones no son objetos de estudio estos órganos, siendo las hojas un sistema de estudio y aplicación en el presente trabajo. 2.7. Características Organolépticas del agua 2.7.1. Olor y Sabor Fisiológicamente, los sentidos del gusto y el olfato están íntimamente relacionados ya que las papilas linguales y las olfativas detectan estímulos simultáneos y complementarios. En la situación habitual, las sustancias con capacidad de producir olor/sabor en un agua pueden interactuar en tres formas: Aditividad: suma simple de olores/sabores. Sinergismos: incremento del olor/ sabor resultante con relación a lo esperado por adición simple. Antagonismo: reducción del olor/ sabor resultante con relación a lo esperado por adición simple. 18 2.7.2. Color El color de un agua se debe, fundamentalmente, a diferentes sustancias coloreadas existentes en suspensión o disueltas en ella. En aguas naturales el color proviene de las numerosas materias orgánicas procedentes de la descomposición de vegetales, así como de diversos productos y metabolitos orgánicos que habitualmente se encuentran en ellas (colocaciones amarillentas). Además, la presencia de sales solubles de Fe y Mn (aguas subterráneas y superficiales poco oxigenadas) también produce un cierto color en el agua. 2.7.3. Turbiedad Es una forma indirecta de medir la concentración de las partículas suspendidas en un líquido; mide el efecto de la dispersión que estas partículas presentan al paso de la luz; y es función del número, tamaño y forma de partículas. 2.8. Coagulación Es un proceso de desestabilización química de las partículas coloidales (son suspensiones estables, por lo que es imposible sus sedimentación natural, son sustancias responsables de la turbiedad y del color del agua), que se producen al neutralizar las fuerzas que los mantienen separados, por medio de la adición de los coagulantes químicos, naturales o sintéticos y la aplicación de la energía mezclado. En la figura 10 se muestra como las sustancias químicas anulan las cargas eléctricas de la superficie del coloide permitiendo que las partículas coloidales se aglomeren formando floculos. 19 Fig. 10 Proceso de coagulación Fuente: Yolanda Cárdenas, 2000 En la coagulación se agrega al agua una sustancia denominada coagulante para poder cambiar el comportamiento de las partículas en suspensión. Esta hace que las partículas, que anteriormente tendían a repelerse unas a otras, sean atraídas las unas a las otras o hacia el material agregado. 2.9. Floculación La floculación es el proceso que sigue a la coagulación, que consiste en la agitación de la masa coagulada que sirve para permitir el crecimiento y aglomeración de los flóculos recién formados con la finalidad de aumentar el tamaño y peso necesarios para sedimentar con facilidad. Estos flóculos inicialmente pequeños, crean al juntarse aglomerados mayores que son capaces de sedimentar. 20 CAPITULO III 3. MARCO EXPERIMENTAL Y RESULTADOS 3.1. Localización y recolección de materia prima La planta de la familia Leg. Mimosoideae Prosopis laevigata (Humb & Bonpl. ex Willd.) M.C. Johnst var. andicola Burkart fue recolectada en la región de Huajchilla ubicada a 22,2 km desde la plaza Murillo, del departamento de La Paz, provincia Murillo. La planta fue recolectada a finales del mes de mayo, al ser una planta silvestre se lo encuentra alrededor de los caminos y cerros en gran mayoría. Para su recolección se utilizó guantes, el cual proporciona comodidad, ya que al tener espinas este tipo de planta dificulta su manipulación. FOTO Nº 1 Lugar donde se recolecto la planta. Fuente: Elaboración propia Una vez recolectada la planta de Prosopis laevigata (Humb & Bonpl. ex Willd.) M.C. Johnst var. andicola Burkart, se tomó una pequeña muestra para que se lo analice en el HERBARIO NACIONAL DE BOLIVIA (LPB), y de esta forma nos proporcionen veracidad en su nombre, género al que pertenece en cuanto a la planta recolectada. La muestra fue examinada por ROSSY DE MICHEL (LPB), corroborando su pertenencia a la familia de Leg. Mimosoideae Prosopis laevigata (Humb & Bonpl. ex Willd.) M.C. Johnst var. andicola Burkart. (Ver anexo 1). 21 Paralelamente a la caracterización de la planta, se procedió al secado en un lugar exenta de luz solar y en un ambiente ventilado, durante 18 días. FOTO Nº 2 Proceso de secado. Fuente: Elaboración propia 3.2. Pruebas Cualitativas Se realizaron las siguientes pruebas cualitativas para establecer la presencia de tanino y el tipo de tanino al que pertenece, ya sea tanino gálico o condensado. Para esto se realizó lo siguiente: a) Prueba del cloruro férrico 1%: Se introduce en un tubo de ensayo 1 mL del extracto, se adiciona 2 mL de agua destilada y 2 mL de cloruro férrico al 1%, la presencia de un precipitado verde oscuro es prueba positiva para tanino condensado b) Prueba con dicromato de potasio: A una mezcla de 1 mL del extracto y 2mL de agua destilada, se agregó 2mLde dicromato de potasio al 5%, la presencia de un precipitado naranja es prueba positiva de tanino. 5 gramos de muestra+ 70 mL de agua destilada Calentar a ebullición durante 20 minutos Enfriar y filtrar y en el filtrado realizar las pruebas 22 c) Prueba con acetato de plomo: A 1mL de extracto y se adiciono 2mL de agua destilada, para luego añadir 2 mL de acetato de plomo al 5%, un precipitado blanco indica la presencia de taninos. d) Prueba de la gelatina salada al 1%: a 5mL del extracto se añade 3 gotas de solución de gelatina al 1% (NaCl al 10%), y 2mL de ácido sulfúrico concentrado, observándose un precipitado blanco que indica la presencia de taninos. e) Prueba con cianuro de potasio al 5%: a 1mL del extracto se adiciona 2mL de agua destilada y 2mL de cianuro de potasio al 5%, un precipitado de color amarrillo indica la existencia de taninos. f) Prueba de yoduro de potasio al 5%: a 1mL del extracto acuoso de la muestra se añade 2mL de agua destilada y 1 mL de yoduro de potasio al 5%, no se observa un precipitado color naranja, indica la presencia de tanino gálico. g) Prueba de formaldehido: se mezclan 2 mL de extracto y 1mL de formaldehido, la presencia de un precipitado beige indica la presencia de taninos condensados. Tabla Nº2 Pruebas Cualitativas al Extracto de Hojas MUESTRA # REACTIVO TIPO DE TANINO PRECIPITADO FOTO E X T R A C T O A C U O S O D E H O J A S D E 2 0 m L D E M U E S T R A 1 K2Cr2O7 5% prueba positiva para tanino ++ Precipitado naranja 23 2 Pb(CH3COO)2 5% prueba positiva para tanino +++ Precipitado blanco 3 Gelatina salada al 1% prueba positiva para tanino ++ Precipitado blanco 4 KCN 5% prueba positiva para tanino +++ Precipitado amarrillo 5 FeCl3 1% prueba positiva para tanino condensado ++ Precipitado verde oscuro 24 6 KI 5% prueba positiva para tanino gálico - no hay precipitado naranja 7 Formaldehido prueba positiva para tanino condensado ++ precipitado beige (-) ausencia; (+) poca presencia; (++) moderado; (+++) abundancia FUENTE: elaboración propia Con la pruebas realizadas que se muestran en la TABLA Nº1, se observa que en las pruebas 1, 2, 3 y 4 confirman que la muestra es tanino. Mientras la pruebas 5 y 7, se determina que el extracto es tanino condesando y la prueba 6 muestra que el extracto no es tanino gálico. 3.2.1. Ensayo fitoquímico con el extracto obtenido El ensayo fotoquímico se realizó con una extracción acuosa en caliente de 5g de muestra de hojas con 100mL de agua filtrada llevar a ebullición por 25 min, luego filtrar y comprobar la presencia de taninos con FeCl3. A 15mL de extracto acuoso se adiciona igual volumen de reactivo Stiasny (mezcla de HCl y formol 1:1), se lleva a ebullición por 30 min en baño María. Se Filtra y en el papel filtro se detecta la presencia de taninos catequicos, añadiendo sobre el papel filtro unas gotas de FeCl3 y amoniaco. Si es positivo aparecerá color azul- verdoso. En el filtrado detectar la presencia de 25 taninos gálicos añadiendo una pequeña fracción (tubo de ensayo) FeCl3 y acetato de sodio. Si es positivo apareceré color azul. FOTO Nº 3 Reactivo a utilizar para determinar si es condesando o hidrolizado. Fuente: Elaboración propia FOTO Nº 4 Se llevó a ebullición por 30min observando el precipitado que se forma enfriar y filtrar. Fuente: Elaboración propia FOTO Nº 5 Se filtró y observo el precipitado en el papel filtro. Fuente: Elaboración propia 26 FOTO Nº 6 Se realizó pruebas cualitativas para determinar si es tanino hidrolizable o condensado. Fuente: Elaboración propia Una vez filtrada la muestra de extracto de hojas se observa un precipitado en el papel filtro el cual cambia de color añadiendo cloruro férrico al 1% y amoniaco una gotas para darle el medio adecuado, al reaccionar se torna un color verde oscuro como se muestra en la FOTO Nº6 del papel filtro. A su vez a la parte filtrada se le añadió unas gotas de cloruro férrico al 1% y de esta forma observar el cambio de color azul, lo cual no cambio, esto indica que las hojas de la planta no tiene tanino gálico. 3.3. Obtención de taninos Para la obtención de tanino se siguió el siguiente procedimiento: Al precipitado se añade FeCl3 1% y amoniaco. Se observa un cambio de color verde el cual es positivo para tanino condensado. Al filtrado se le añade FeCl3 1% y acetato de sodio, y no se observa ningún cambio de color azul. 27 Fig. 11 Procedimiento para la obtención de tanino Fuente: elaboración propia 290,9 g de hojas secas Añadir 6 L de agua, llevar a ebullición durante 6 horas, remover cada cierto tiempo Enfriar a temperatura ambiente y filtrar Fase acuosa, realizar prueba específica para taninos Hojas húmedas humedas Concentrar por evaporación a un medio de su volumen hasta Filtrar al vacío Concentrar nuevamente hasta un cuarto de su volumen original en baño maría Precipitar los taninos añadiendo etanol al 96 %, dejando reposar durante una noche Separar el precipitado, secar en un desecador hasta completa sequedad Pesar y calcular el rendimiento de extracción 28 FOTO Nº 7 Muestra seca para la obtención de tanino Fuente: Elaboración propia FOTO Nº 8 Proceso de ebullición de la muestra. Fuente: Elaboración propia FOTO Nº 9 Proceso de separación de Muestra sólida y líquida Fuente: Elaboración propia 29 FOTO Nº 10 Precipitación de tanino con alcohol Guabirá. Fuente: Elaboración propia FOTO Nº 11 Muestra en el desecador, para su posterior secado. Fuente: Elaboración propia 3.4.Cuantificación de taninos en hojas de la planta de Prosopis laevigata (Humb & Bonpl. ex Willd.) M.C. Johnst var. andicola Burkart, por el método FOLIN – DENIS 3.4.1. Preparación el reactivo Folin – Denis: 5 g de wolframato de sodio dihidratado (WO4 Na2 .2H2O) 1 g de ácido fosfomolíbdico. 2,5 ml de ácido fosfórico (PO4 H3) Hervir a reflujo durante dos horas, enfriar y trasvasar a un matraz aforado de 50mL, enrasar con agua destilada. Además preparar la solución de carbonato de sodio al 35% y dejarlo reposar toda una noche para utilizarlo. 30 3.4.2. Preparación de la curva de calibración Para la preparación la preparación de patrones. Se utiliza el método de Folin – Denis, donde se pesa 10mg de ácido tanino, diluyendo a 100mL, presentando una concentración de 0,10mg/mL. A partir de esta solución se preparó las soluciones patrón. Para una concentración de 0,1mg/100mL el volumen requerido se la solución madre se calcula de la siguiente manera: 𝐶1 𝑥 𝑉1 = 𝐶2 𝑥 𝑉2 Despejando V2: 𝑉2 = 𝐶1 𝑥 𝑉1 𝐶2 Donde: C1= Concentración con la que se trabajara de 0,1: 0,15; 0,20: 0,25: 0,3 mg/100mL V1= Volumen de 100mL, al cual se afora C2= Solución madre de concentración 0,10 mg/mL 𝑉2 = 0,1𝑚𝑔 100𝑚𝐿 𝑥 100𝑚𝐿 0,1 𝑚𝑔 𝑚𝐿 = 1,0 𝑚𝐿 Para 0,15mg/100ml : 𝑉2 = 0,15𝑚𝑔 100𝑚𝐿 𝑥 100𝑚𝐿 0,1 𝑚𝑔 𝑚𝐿 = 1,5 𝑚𝐿 Para 0,20mg/100ml : 𝑉2 = 0,20𝑚𝑔 100𝑚𝐿 𝑥 100𝑚𝐿 0,1 𝑚𝑔 𝑚𝐿 = 2,0𝑚𝐿 Para 0,25mg/100ml : 𝑉2 = 0,25𝑚𝑔 100𝑚𝐿 𝑥 100𝑚𝐿 0,1 𝑚𝑔 𝑚𝐿 = 2,5𝑚𝐿 31 Para 0,30mg/100ml : 𝑉2 = 0,30𝑚𝑔 100𝑚𝐿 𝑥 100𝑚𝐿 0,1 𝑚𝑔 𝑚𝐿= 3,0𝑚𝐿 Luego de hacer cálculos se sigue con la siguiente preparación: Fig. 12 Procedimiento para la preparación de la curva de calibración. Fuente: elaboración propia Preparación de soluciones patrón en matraces aforados de 100mL Matraz 1 Matraz 2 Matraz 3 Matraz 4 Matraz 5 Agua destilada Agua destilada Agua destilada Agua destilada Agua destilada 3ml sol. Patrón 2,5ml sol patrón 2ml sol. Patrón 1,5 ml sol. Patrón 1ml sol. Patrón 2ml Folin - Denis 2ml Folin - Denis 2ml Folin - Denis 2ml Folin - Denis 2ml Folin - Denis 5 ml sol. NaCO3 35% 5 ml sol. NaCO3 35% 5 ml sol. NaCO3 35% 5 ml sol. NaCO3 35% 5 ml sol. NaCO3 35% Enrasar con agua destilada a 100mL Enrasar con agua destilada a 100mL Enrasar con agua destilada a 100mL Enrasar con agua destilada a 100mL Enrasar con agua destilada a 100mL Agitar y esperar 30min y leer la absorbancia Agitar y esperar 30min y leer la absorbancia Agitar y esperar 30min y leer la absorbancia Agitar y esperar 30min y leer la absorbancia Agitar y esperar 30min y leer la absorbancia 32 3.4.3. Preparación de la muestra de hojas Para determinar el contenido de tanino en las hojas secas se toma 2 g de muestra se hierve 15min en 100mL de agua destilada, filtrar y aforar en un matraz aforado de 250mL, para luego proseguir con el siguiente procedimiento: Fig. 13 Procedimiento para la preparación de la muestra Fuente: elaboración propia Preparación de la muestra por triplicado en matraces aforados de 100mL Muestra Agua destilada 5 ml de muestra 2ml Folin - Denis 5 ml sol. NaCO3 35% Enrasar con agua destilada a 100mL Agitar y esperar 30min y leer las absorbancias 33 FOTO Nº 12 Patrones para la curva de calibración, reposando 30min. Fuente: Elaboración propia FOTO Nº 13 Muestras con contenido de tanino en reposo por 30 min. Fuente: Elaboración propia Preparados los estándares y las muestras, luego de 30 minutos, re realizo un barrido para obtener un espectro UV-VIS, el cual se muestra en la siguiente figura: FOTO Nº 14 Equipo BIOCHROM Fuente: Elaboración propia 34 FOTO Nº 15 Barrido del matraz #3 de las muestras patrón, donde su máxima longitud de onda es de 666,0 nm. Fuente: Elaboración propia Con el dato experimental de la longitud de onda de máxima absorción, 666 nm, se traza la curva de calibración, que permite el cálculo de taninos presentes en la muestra. FOTO Nº 16 Lecturas hechas para la curva de calibración. Fuente: Elaboración propia 35 Tabla Nº 3 Datos obtenidos en la curva de calibración. # matraz Concentración (C) (mg/100mL) A 1 0,00 0,00 2 0,10 0,085 3 0,15 0,120 4 0,20 0,148 5 0,25 0,173 6 0,30 0,194 M1 - 0,138 M2 - 0,142 M3 - 0,142 Fuente: Elaboración propia Donde r2=0.9930, el coeficiente de correlación tiende a ser 1 lo cual es ideal. Para hallar la concentración de taninos se utilizara la ecuación que representa la recta de calibración. [𝑌] = 0,7002[𝑋] (1) Y = es las absorbancias de la muestras. X = concentración a hallar. Primeramente se despejara [x] de la ecuación (1): [𝑌] = 0,7002[𝑋] Despejando [X]: [𝑋] = 𝑌 0,7002 Remplazando datos: [𝑋1] = 0,138 0,7002 = 0,197 𝑚𝑔 100 𝑚𝐿 = 0,00197 𝑚𝑔 𝑚𝐿 [𝑋2] = 0,142 0,7002 = 0,203 𝑚𝑔 100 𝑚𝐿 = 0,00203 𝑚𝑔 𝑚𝐿 [𝑋3] = 0,142 0,7002 = 0,203 𝑚𝑔 100 𝑚𝐿 = 0,00203 𝑚𝑔 𝑚𝐿 36 TABLA Nº 4 Resultado de la cuantificación por el método Folin - Denis Número de muestra # 1 Concentración tanino de las hojas secas. 1 X1=0,00197 𝑚𝑔 𝑚𝐿 2 X2=0,00203 𝑚𝑔 𝑚𝐿 3 X3=0,00203 𝑚𝑔 𝑚𝐿 total X =(0,00201 mg/ mL ± 0,00003mg/mL) Fuente: Elaboración propia La cantidad de 0,00201mg/mL hay de 5ml que se tomó de muestra para diluir en 100mL. Para determinar la cantidad de tanino que hay en 250ml, primeramente se halla el factor de dilución el cual es: Entonces el factor de dilución es 250𝑚𝐿 5𝑚𝐿 = 50 Posteriormente hallamos la concentración de las muestras en 250mL. 𝑀1: 0,00197 𝑚𝑔 𝑚𝐿 𝑥 50 = 0,0985 𝑚𝑔 𝑚𝐿 𝑀2: 0,00203 𝑚𝑔 𝑚𝐿 𝑥 50 = 0,1015 𝑚𝑔 𝑚𝐿 𝑀3: 0,00203 𝑚𝑔 𝑚𝐿 𝑥 50 = 0,1015 𝑚𝑔 𝑚𝐿 37 Una vez halladas las concentraciones a 250mL se realizan cálculos para determinar la cantidad de tanino en gramos: M1: 250𝑚𝐿 𝑥 0,0985 𝑚𝑔 1𝑚𝑙 𝑥 1 𝑔 1000𝑚𝑔 = 0,0246 𝑔 𝑀2: 250𝑚𝐿 𝑥 0,1015𝑚𝑔 1𝑚𝑙 𝑥 1 𝑔 1000𝑚𝑔 = 0,0254 𝑔 𝑀3: 250𝑚𝐿 𝑥 0,1015𝑚𝑔 1𝑚𝑙 𝑥 1 𝑔 1000𝑚𝑔 = 0,0254 𝑔 Hallando el promedio en total es: 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 = (0,0246 + 0,0254 + 0,0254) 3 = 0,0251 𝑔 𝑑𝑒 𝑡𝑎𝑛𝑖𝑛𝑜 El porcentaje de tanino es: % 𝑡𝑎𝑛𝑖𝑛𝑜 = 𝑚 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 𝑚 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 ∗ 100% % 𝑡𝑎𝑛𝑖𝑛𝑜 = 0,0251 𝑔 2𝑔 𝑥 100% = 1,255% 𝑑𝑒 𝑡𝑎𝑛𝑖𝑛𝑜 Donde 0,0251g de tanino se tiene en 250ml de solución. Lo cual en porcentaje es de 1, 255% de tanino en 2 gramos de hojas, realizado por el método Folin – Dennis. 3.5. Rendimiento de la Extracción de taninos Las muestras de tanino en un inicio se pesaron 290,6 g de hojas secas, luego de realizar una extracción solido – líquido, donde el tanino seco tiene una masa total de 32,6 gramos, el cual fue secado en el desecador. Posteriormente se halló el rendimiento de: %𝑅 = 𝑚 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 𝑚 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 ∗ 100% %𝑅 = 32,6 𝑔 290,6𝑔 ∗ 100% = 11,218% 38 FOTO Nº 17 Tanino en polvo Fuente: Elaboración propia Posteriormente se realizó una comparación con otros rendimientos obtenidos para verificar si se tiene un rendimiento adecuado. TABLA Nº 5 Rendimiento obtenido de tanino Rendimiento de tanino obtenido de la planta Prosopis laevigata Rendimiento obtenido extractos tánicos de corteza de Pinus Caribaea por el método de extracción en etapas sucesivas con agua y solución Acuosa de sulfito de sodio al 2%. Rendimiento obtenido extractos tánicos de corteza de Rhizophora mangle (mangle colorado)por el método de extracción en etapas sucesivas con agua y solución Acuosa de sulfito de sodio al 2%. Rendimiento de Taninos a partir de hojas y tallos de la palta (parsea americana)- 11,218% 15.71% * 33,04%** Hojas 2,684% Tallos 4,553% *** Fuente: Elaboración propia *Método de extracción con maceración mecánica con sulfito de sodio al 2%, Suchini L. J.M., 2002. **Método de extracción con maceración mecánica con sulfito de sodio al 1%, para las alturas de toma de muestras de 1.30 m. Akú Ramirez, I.L. 2000. *** Extracción de taninos a partir de hojas y tallos de la palta (parsea americana)- de Gomez Portillo 2001. Realizando una comparación del rendimiento obtenido con otros rendimientos de taninos obtenidos de diferentes plantas se observa que se tiene un rendimiento óptimo en cuanto a la obtención de tanino de la planta Prosopis laevigata. 39 3.6. Caracterización espectrofotométrica FT-IR El análisis de los espectros infrarrojo (FT-IR) de una muestra comercial de taninos de industria Brasileña TANFLOC, presenta una banda ancha entre 2800 a 3450 cm-1, características de los grupos hidroxilo (–OH) presentes comúnmente en compuestos fenólicos. Otras señales a 1620 cm-1 y 1615 cm-1 son producto del alargamiento de los dobles enlaces carbono-carbono de las estructuras aromáticas presentes en este tipo de metabolitos.Fig. 14 Tanino de muestra comercial de industria brasileña TANFLOC. Fuente: elaboración propia En el IR del tanino obtenido a partir de hojas de la planta Prosopis laevigata (Humb & Bonpl. ex Willd.) M.C. Johnst var. andicola Burkart, se observa una banda ancha en 3333 cm-1, típica de grupos OH presentes comúnmente en compuestos fenólicos; una banda estrecha de intensidad media en 1630 cm-1son producto del alargamiento de los dobles enlaces carbono- carbono de las estructuras aromáticas presentes en este tipo de metabolitos. 4000.0 3000 2000 1500 1000 700.0 68.2 80 90 100 110 122.7 cm-1 %T Tanino 40 Fig. 15 Tanino extraido a partir de hojas de la planta Prosopis laevigata (Humb & Bonpl. ex Willd.) M.C. Johnst var. andicola Burkart, Fuente: Elaboración propia Por el análisis del espectro FT-IR del tanino comercial y la de la muestra se puede concluir que el producto se trata de tanino condensable. Porque en la banda estrecha de intensidad media en 1630 cm-1 ha un alargamiento de dobles enlaces carbono - carbono por ende este nos da la característica de ser un tanino condensable. 3.7. Aplicación del tanino en aguas preparadas en laboratorio 3.7.1. Arcilla recolectada del rio JILUSAYA La arcilla es recolectada en el rio Jilusaya ubicada en el campus de Cota Cota, el cual se encontraba húmeda por entonces se lo seco 1 semana, una vez seca fue utilizado para preparar soluciones de diferente turbiedad para ser sometidas a una remoción de turbiedad con tanino. FOTO Nº 18 Rio JILUSAYA donde fue recolectada la muestra de Arcilla. Fuente: Elaboración propia 4000.0 3000 2000 1500 1000 700.0 91.1 100 110 120 130 140 147.7 cm-1 %T Tanino 1 41 FOTO Nº 19 Muestra de Arcilla recolectada (seca) Fuente: Elaboración propia Una vez seca y triturada la muestra, se llevó a molerla para luego pesar diferentes cantidades de masa de 0,2g, 0,5g, 0,8g, 2g y 3g los cuales se disolvieron en 500mL de agua, se midió su turbiedad y observar la remoción de turbiedad a diferentes masas de tanino 3.7.1.1.Estudio del tanino a diferentes masas en aguas turbias Para poder estudiar al tanino se trabajó a diferentes masas y distintas turbiedades de agua preparadas con la arcilla recolectada en el rio Jilusaya, donde a diferentes tiempos se midió la turbiedad para así apreciar la remoción de turbiedad que existiera. Una vez preparada las aguas turbias se pesaron diferentes masas de tanino como se especifican a continuación: Fig. 16 Procedimiento para las lecturas de turbiedad de 70 a 130 NTU Fuente: elaboración propia A su vez se calculó el % de remoción en cada una de las pruebas con la siguiente formula: %𝑅𝑒𝑚𝑜𝑐𝑖ó𝑛 = (𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜) − (𝐵 + 𝑇𝑎𝑛𝑖𝑛𝑜) 𝑇𝑢𝑟𝑏𝑖𝑒𝑑𝑎𝑑 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑥 100% Para 70 a 130 NTU de turbiedad Se pesó las siguientes masas de tanino 0,01 gramos de tanino 0,02 gramos de tanino 0,03 gramos de tanino 0,04 gramos de tanino 42 50 60 70 80 90 100 110 120 130 0 20 40 60 80 100 120 140 Tu rb ie d ad N TU Tiempo min B + Tanino Blanco 54 59 64 69 74 79 84 89 94 99 -1 9 19 29 39 49 59 69 Tu rb ie d ad N TU Tiempo (min) B + Tanino Blanco Tabla Nº 6 Turbiedad de 124 NTU Fig. 17 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0123g Fuente: Elaboración propia El efecto de la adición de tanino a una muestra de agua turbia de 124 NTU, permite observar una mínima disminución de turbiedad a los 120 minutos donde se observa que la turbiedad se reduce a 55,6 NTU. Lo cual indica que él % de remoción de turbiedad es el 9,4% para una masa de 0,0123 g. Tabla Nº7 Turbiedad de 96,4NTU Fig. 18 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0230g Fuente: Elaboración propia Para una masa de 0,0123g de tanino y una turbidez de 124 NTU Blanco B + Tanino Tiempo minutos 124 124 0 110 104 10 89,3 78,4 20 75,0 59,9 40 73,6 61,8 60 67,2 55,6 120 Para una masa de 0,0230g de tanino y una turbidez de 96,4NTU Blanco B + Tanino Tiempo minutos 96,4 96,4 0 84,8 83,2 10 81,2 72,7 20 76,0 66,0 40 62,0 55,6 60 43 43 53 63 73 83 93 103 -2 18 38 58 78 98 Tu rb ie d ad N TU Tiempo (min) B + Tanino Blanco 50 70 90 110 130 150 170 190 -2 18 38 58 78 98 Tu rb ie d ad N TU Tiempo (min) B + Tanino Blanco El añadido de 0,0230 g de tanino a una solución con 96,4 NTU de turbiedad, ocasiona una disminución de la misma hasta niveles de 55,6 NTU en 60 minutos, lo cual nos indica 6,6%, con respecto a una solución de la turbiedad inicial. Tabla Nº8 Turbiedad de 97,1 NTU Fig. 19 Grafica Turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0370g Fuente: Elaboración propia La presencia de 0,0370 g de tanino a una solución con 97,1 NTU de turbiedad, no ocasiona una disminución de la turbiedad ya que el blanco tiene menor turbiedad en 90 minutos, por lo cual el porcentaje de remoción es de – 3,5% Tabla Nº 9 Turbiedad 107 NTU Fig. 20 Grafica Turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0465g Fuente: Elaboración propia Para una masa de 0,0370g de tanino y una turbidez de 97,1NTU Blanco B + Tanino tiempo 97,1 97,1 0 81,5 75,9 10 59,4 66,2 20 57,8 63,2 40 54,5 56,2 60 44,5 47,9 90 Para una masa de 0,0465g de tanino y una turbidez de 107NTU Blanco B + Tanino tiempo 107 107 0 62,9 183 10 60,3 125 20 59,3 98,4 40 56,0 87,3 60 52,1 85,2 90 44 10 20 30 40 50 60 70 80 -2 8 18 28 38 48 58 68 Tu rb ie d ad N TU Tiempo (min) B + Tanino Blanco El añadido de 0,0465 g de tanino a una solución con 107 NTU de turbiedad, no ocasiona una disminución de turbiedad, por lo cual el porcentaje de remoción es de un -30,93%. Posteriormente se realizó pruebas con tanino para turbiedades que se encontraban de 60 a 70 NTU. De la siguiente forma: Fig. 21 Procedimiento para las lecturas de turbiedad de 60 a 70 NTU Fuente: elaboración propia Tabla Nº 10 turbiedad de 68,8 NTU Fig. 22 Grafica Turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0105g Fuente: Elaboración propia El añadido de 0,0105 g de tanino a una solución con 68,8 NTU de turbiedad, ocasiona una disminución de 56,7 unidades de NTU, es decir un 4,2% en 60 minutos, con respecto a una solución con la misma turbiedad inicial. Para una masa de 0,0105g de tanino y una turbidez de 68,7NTU Blanco B + Tanino tiempo 68,8 68,8 0 23,4 27,4 10 18,9 19,7 20 16,3 15,1 40 15,9 12,1 60 Se pesó las siguientes masas de tanino 0,01 gramos de tanino 0,03 gramos de tanino 0,04 gramos de tanino Turbiedad de 60 a 70 NTU 45 45 50 55 60 65 70 75 80 -2 18 38 58 78 98 Tu rb ie d ad N TU Tiempo (min) B + Tanino Blanco Tabla Nº 11 Turbiedad de 77,0 NTU Fig. 23 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0324g de tanino Fuente: Elaboración propia El añadido de 0,0324 g de tanino a una solución con 77,0 NTU de turbiedad, no ocasiona una disminución de turbiedad pasado los 90 min con respecto a una solución con la misma turbiedad inicial, por lo cual solo se tiene un % de remoción de -2,5%. Tabla Nº 12 Turbiedad de 68,7 NTU Fig.24 Grafica turbiedad vs. Tiempo para una masa de 0,0434g Fuente: Elaboración propia El añadido de 0,0434 g de tanino a una solución con 68,7 NTU de turbiedad, no ocasiona una disminución de turbiedad por lo cual el porcentaje de remoción de turbiedad es del -7.7%. Para una masa de 0,0324g de tanino y una turbidez de 77,0NTU Blanco B
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