Comparación de técnicas de colecta seminal colecta de semen de ep

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Universidad de La Salle Universidad de La Salle 
Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle 
Medicina Veterinaria Facultad de Ciencias Agropecuarias 
2015 
Comparación de técnicas de colecta seminal colecta de semen Comparación de técnicas de colecta seminal colecta de semen 
de epidídimo, colecta tradicional y criopreservación, en relación a de epidídimo, colecta tradicional y criopreservación, en relación a 
la calidad espermática, en caninos la calidad espermática, en caninos 
Yinet Liliana Sánchez Rodríguez 
Universidad de La Salle, Bogotá 
José Eduardo Sánchez Calvo 
Universidad de La Salle, Bogotá 
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colecta de semen de epidídimo, colecta tradicional y criopreservación, en relación a la calidad 
espermática, en caninos. Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/medicina_veterinaria/90 
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UNIVERSIDAD DE LA SALLE 
Facultad de Ciencias Agropecuarias 
Programa de Medicina Veterinaria 
 
 
 
COMPARACIÓN DE TÉCNICAS DE COLECTA SEMINAL: COLECTA DE 
SEMEN DE EPIDÍDIMO, COLECTA TRADICIONAL Y CRIOPRESERVACION, 
EN RELACIÓN A LA CALIDAD ESPERMÁTICA, EN CANINOS 
 
Trabajo De Grado 
 
Yinet Liliana Sánchez Rodríguez 
José Eduardo Sánchez Calvo 
 
 
Bogotá, Colombia 
2015 
 
 
 
 
UNIVERSIDAD DE LA SALLE 
Facultad de Ciencias Agropecuarias 
Programa de Medicina Veterinaria 
 
 
 
COMPARACIÓN DE TÉCNICAS DE COLECTA SEMINAL: COLECTA DE 
SEMEN DE EPIDÍDIMO, COLECTA TRADICIONAL Y CRIOPRESERVACION, 
EN RELACIÓN A LA CALIDAD ESPERMÁTICA, EN CANINOS 
Trabajo De Grado 
Yinet Liliana Sánchez Rodríguez 
Código: 14082039 
José Eduardo Sánchez Calvo 
Código: 14082036 
Director 
Cesar Augusto Gómez 
Bogotá, Colombia 
2015
 
 
i 
 
 
Aprobación 
 
 
Director _____________________________ 
 Dr. Cesar Augusto Gómez 
 
 
 
 
Jurado ___________________________ 
 Dr. José Carlos Coelho 
 
 
 
Jurado ____________________________ 
 Dr. Harvey Lozano 
 
 
 
 
ii 
 
Directivos 
 
Rector Hno. Carlos Gabriel Gómez Restrepo 
 
Vicerrector académico Hno. Fabio Humberto Coronado Padilla 
 
Vicerrector de promoción Hno. Carlos Alberto Pabón 
Y desarrollo humano 
 
Vicerrector administrativo Dr. Eduardo Ángel Reyes 
 
Vicerrector de investigación Luis Fernando Ramírez H. 
Y transferencia 
 
Decano de la facultad de Dra. Claudia Aixa Mutis. 
Ciencias agropecuarias 
 
Director de programa Dr. Fernando Nassar Montoya. 
Medicina veterinaria 
 
 
 
 
 
iii 
 
Compromiso 
 
Los trabajos de grado no deben contener ideas que sean contrarias a la doctrina católica 
en asuntos de dogma y moral. 
Ni la universidad, ni el director, ni el jurado calificador son responsables de las ideas 
expuestas por el graduando. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
iv 
 
Tabla de contenido 
Aprobación .....................................................................................................................................i 
Directivos ......................................................................................................................................ii 
Compromiso ................................................................................................................................ iii 
Lista de tablas .............................................................................................................................. vii 
Lista de figuras ........................................................................................................................... viii 
Resumen ....................................................................................................................................... ix 
Abstract ........................................................................................................................................ xi 
INTRODUCCIÓN ................................................................................................................................ 1 
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................................................. 2 
OBJETIVOS ......................................................................................................................................... 3 
Objetivo general ............................................................................................................................ 3 
Objetivos específicos ...................................................................................................................... 3 
HIPÓTESIS .......................................................................................................................................... 4 
IMPACTO E INDICADORES ............................................................................................................. 4 
1. MARCO TEÓRICO ......................................................................................................................... 5 
1.1 Evaluación andrológica ........................................................................................................... 5 
1.1.1 Examen físico. ....................................................................................................................... 5 
1.2 Examen seminal ....................................................................................................................... 6 
1.2.1 Examen macroscópico. .......................................................................................................... 6 
1.2.1.1. Volumen. ........................................................................................................................... 6 
1.2.1.2. Color. ................................................................................................................................ 7 
1.2.1.3. Ph ..................................................................................................................................... 8 
1.2.2. Examen microscópico. .......................................................................................................... 8 
1.2.2.1. Motilidad. ......................................................................................................................... 8 
1.2.2.2. Concentración. ..................................................................................................................8 
 
 
v 
 
1.2.2.3. Morfología ........................................................................................................................ 8 
1.2.2.4. Vigor. .............................................................................................................................. 10 
1.3. Métodos de extracción seminal .............................................................................................. 10 
1.3.1 Colecta seminal tradicional. ................................................................................................ 10 
1.3.2. Colecta directa del epidídimo. ............................................................................................ 11 
1.3.3 Composición del semen canino. ........................................................................................... 14 
1.4. Crio conservación del semen ................................................................................................. 14 
1.5 Factores que afectan al espermatozoide en la crio conservación ........................................... 15 
1.5.1 Estrés térmico...................................................................................................................... 16 
1.5.2. Estrés osmótico y formación de cristales de hielo ................................................................ 16 
1.5.3. Estrés oxidativo. ................................................................................................................. 17 
2. MATERIALES Y MÉTODOS ....................................................................................................... 19 
2.1 Localización ........................................................................................................................... 19 
2.2 Población y muestra ............................................................................................................... 19 
2.3 Variables ................................................................................................................................ 19 
2.4 Análisis estadístico ................................................................................................................. 19 
2.5. Toma de muestra directa de epidídimo ................................................................................... 20 
2.5.1. Recolección de espermatozoides epididimarios. .................................................................. 20 
2.5.2. Recolección de semen de forma tradicional . ....................................................................... 25 
3. RESULTADOS ............................................................................................................................... 26 
3.1 Viabilidad .............................................................................................................................. 26 
3.1.1. Viabilidad pre y post congelación para extracción directa.................................................. 26 
3.1.2. Viabilidad pre y post congelación para extracción tradicional ........................................... 27 
3.2. Motilidad .............................................................................................................................. 28 
3.2.1. Motilidad pre y post congelación para extracción directa. ................................................... 28 
3.2.2. Motilidad pre y post congelación para extracción tradicional ............................................. 29 
3.3 Vigor ...................................................................................................................................... 30 
3.3.1. Vigor pre y post congelación para extracción directa. ......................................................... 30 
 
 
vi 
 
3.3.2 Vigor pre y post congelación para extracción tradicional ..................................................... 31 
3.4 Morfología ............................................................................................................................ 32 
4. DISCUSIÓN ............................................................................................................................... 34 
5. CONCLUSIONES ...................................................................................................................... 37 
BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................................................ 38 
ANEXOS ......................................................................................................................................... 43 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
vii 
 
Lista de tablas 
 
Tabla 1: Parámetros a evaluar microscópicamente en una muestra seminal ............... 12 
Tabla 2: Diluyentes utilizados en crio conservación de semen canino.......................... 15 
Tabla 3: Viabilidad pre y post congelación para extracción directa ........................... 26 
Tabla 4: Viabilidad pre y post congelación para extracción tradicional ..................... 27 
Tabla 5: Motilidad pre y post congelación para extracción directa. ............................ 28 
Tabla 6: Motilidad pre y post congelación para extracción tradicional. ...................... 29 
Tabla 7: Vigor pre y post congelación para extracción directa .................................... 30 
Tabla 8: Vigor pre y post congelación para extracción tradicional.............................. 31 
Tabla 9: Morfología para toma directa y tradicional. .................................................. 32 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
viii 
 
Lista de figuras 
 
Figura 1: Materiales utilizados en recolección de Espermatozoides epididimarios ...... 20 
Figura 2: Disección del epidídimo ............................................................................... 21 
Figura 3: Llenado y lavado del conducto deferente y cola del epidídimo. .................... 22 
Figura 4: Envasado de pajillas .................................................................................... 23 
Figura 5: Sellado hermético de pajillas. ...................................................................... 23 
Figura 6: Curva de enfriamiento y congelación de pajillas .......................................... 24 
Figura 7: Mantenimiento de pajillas a temperatura ambiente ...................................... 25 
Figura 8: Comparación de viabilidad pre y post congelación para directo. ................. 27 
Figura 9: Comparación de viabilidad pre y post congelación para tradicional ......... 28 
Figura 10: Comparación de motilidad pre y post congelación para tradicional. ....... 30 
Figura 11: Comparación de vigor pre y post congelación para muestra directa ....... 31 
Figura 12: Comparación de vigor pre y post congelación para colecta tradicional.... 32 
Figura 13: Comparación de porcentaje de anormalidades encontradas entre 
tratamientos. ............................................................................................................... 33 
 
 
 
 
 
 
 
 
ix 
 
Resumen 
La obtención de espermatozoides a nivel testicular (conducto deferente) para su 
crio preservación, es una potente herramienta para el rescate de células germinales de 
animales domésticos con alto valor genético, que murieron repentinamente por 
accidente o enfermedad. Este estudio compara dos técnicas de colecta seminal de las 
cuales es posible obtener material para llegar a lograr progenie de estas especies, o su 
valor zootécnico. El objetivo principal de este estudio es comparar la viabilidad del 
material seminal colectado directamente del epidídimo y por medio de colecta seminal 
manual que es la que se usa tradicionalmente, en caninos, en la clínica veterinaria de la 
Universidad de La Salle. Recolectando 5 muestras de cada tratamiento. 
Cada par de testículos se tomó de las prácticas realizadas en la cátedrade 
técnicas quirúrgicas en el año 2014 en la misma universidad. Después de tomados los 
testículos se lavaron con NaCl al 0.9 %, se disecaba el epidídimo y se procedía a canular 
el conducto deferente en el cual se inyectaba el medio para diluir los espermatozoides 
directo del epidídimo. Para la colecta tradicional utilizamos el método manual de la 
“mano enguantada” y recolectamos 5 muestras en total. 
Las variables que se analizaron en el estudio fueron: motilidad espermática (%), 
morfología espermática (%), vigor espermático (escala de 0 a 5) y viabilidad del 
espermatozoide. Encontrando resultados de promedio de 65% en viabilidad para semen 
epididimario pre congelación y 47% pos congelación obteniendo una diferencia 
significativa (p≤0.05), en cuanto a la motilidad: 73% pre congelación y 55% post 
congelación de Vigor pre congelación 3.4 y post congelación de 2.7. Además obtuvimos 
 
 
x 
 
el 33% de anormalidades en semen obtenido del epidídimo vs 25% de anormalidades en 
semen obtenido por eyaculación. 
La célula espermática es susceptible a los factores ambientales sin la protección 
del plasma seminal. Pero sigue siendo viable sin este. Es importante estandarizar un 
protocolo para obtención de espermatozoides del epidídimo lo cual ayudara a preservar 
células germinales de animales en vía de extinción o de alto valor genético. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
xi 
 
Abstract 
Obtaining level epididymal sperm for cryopreservation, is a powerful tool for 
germ cell rescue pets with high genetic merit, who died suddenly by accident or disease. 
This study compares two techniques seminal collection of which it is possible to 
achieve the material to reach progeny of these species or zoo technical value. The main 
objective of this study is to compare the viability of semen collected directly from the 
epididymis and through traditional collection, in dogs at the veterinary clinic of the 
University of La Salle. Collecting 5 samples of each treatment 
Each pair of testicles was taken from the practices carried out in the class of 
surgical techniques in 2014 at the same university. After holding the testicles were 
washed with 0.9% NaCl, the epididymis was cut and proceeded to catheterize the vas 
deferens in which the medium was injected to dilute the direct epididymal sperm. To 
use the traditional manual method collects the "gloved hand" and collect 5 samples in 
total. 
The variables analyzed in the study were: sperm motility (%), sperm 
morphology (%), vigor sperm (scale 0-5) and viability of sperm. Finding results in 
average viability of 65% for epididymal sperm post-thaw prefreezing obtaining 47% 
and a significant difference (p≤0.05), motility about 73% and 55% prefreezing Vigor 
post freezing and pre freeze and post-thaw 2.7 3.4 . In addition, we obtained 33% of 
abnormalities in epididymal sperm obtained vs 25% of abnormalities in sperm obtained 
by ejaculation. 
The sperm cell is susceptible to environmental factors without the protection of 
seminal plasma. But still viable without it. It is important to standardize a protocol for 
 
 
xii 
 
obtaining sperm from the epididymis which help preserve germ cells of animals in 
danger of extinction or high genetic value. 
 
 
 
 
 
 
 
 
1 
 
 
 
Introducción 
En los últimos años todas las técnicas en vía a mejoramiento genético han 
venido tomando fuerza ya que es indispensable para generar mayores ingresos 
económicos, mayor número de individuos por parto y mayor resistencia a 
enfermedades. La muerte inesperada de un animal con alto valor genético puede ser 
aprovechada para obtener su material genético. En algunos casos los machos de alto 
valor genético pueden tener enfermedades o problemas reproductivos o 
comportamentales que indiquen realizar una corrección quirúrgica como la 
orquiectomía o vasectomía, en este caso se puede garantizar la crio preservación de este 
semen obtenido de la cola del epidídimo y así obtener descendencia de este ejemplar. 
La obtención de espermatozoides a nivel epididimario para su crio preservación, 
es una potente herramienta para el rescate de células germinales de animales domésticos 
con alto valor genético, que murieron repentinamente por accidente o enfermedad. 
(Hernández, 2004) 
La perspectiva de cruzar razas en todo el mundo se ven facilitadas con la IA; con 
la disponibilidad de utilizar un reproductor para hembras en diferentes ubicaciones 
geográficas, sobrepasar el efecto de la edad del macho, o incluso su muerte, cuando sus 
gametos son preservados adecuadamente en un banco de semen. Particularmente las 
razas menos comunes en diversos países pueden acceder al semen de otros lugares, 
aumentando la variabilidad genética, aspecto crucial para evitar problemas debido a la 
endogamia. (Gobello, 2005) 
En este estudio vamos a enfrentar la calidad espermática de un semen obtenido 
por colecta tradicional y un semen obtenido de la cola de epidídimo de testículos 
2 
 
 
 
obtenidos por orquiectomía, evaluaremos la calidad del semen, y viabilidad de los 
espermatozoides mediante parámetros macroscópicos y microscópicos. 
Planteamiento del problema 
Existen razas de caninos de alto valor genético que deben ser castrados por 
razones comportamentales, que no pueden realizar monta por algún tipo de 
impedimento físico, que no se le puede realizar colecta de semen por los métodos 
convencionales por alguna causa traumática o por una enfermedad grave, realizando la 
colecta directamente del epidídimo podremos obtener el semen de estos caninos para 
crio preservar y confrontar con la forma tradicional de colecta para darle una valoración 
comparativa a la colecta directa de epidídimo, determinando si esta técnica es efectiva 
para llegar a una inseminación artificial exitosa, con esta técnica también se puede 
evitar contagio y diseminación de procesos infección transmitidos en la monta en el 
caso de los perros podemos hablar del tumor venéreo transmisible (TVT) el cual es un 
tumor que ocurre generalmente en la mucosa de los genitales, esta neoplasia no se 
origina por transformación de células del paciente, si no que se trata de un alotrasplante 
de células previamente transformadas. (Carlos Gonzalez, 2003) Es transmitido 
principalmente durante el coito y se encuentra ampliamente distribuido en el ámbito 
mundial, donde los perros callejeros tienen un papel importante en la diseminación. 
(Pacheco, 2003). 
 
 
 
3 
 
 
 
 
Objetivos 
 
Objetivo general 
Comparar la viabilidad del material seminal colectado directamente del 
epidídimo y por medio de colecta tradicional, en caninos en la clínica de la Universidad 
de La Salle. 
Objetivos específicos 
1. Evaluar la viabilidad de espermatozoides extraídos directamente de testículos de 
perros. 
2. Determinar la calidad de la muestra de esperma obtenida por estimulación 
manual 
3. Establecer la calidad del material biológico pos-congelación. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
4 
 
 
 
Hipótesis 
La calidad del material seminal obtenido por medio de la extracción directa del 
epidídimo es igual o mejor que la calidad extraída por medio de la técnica tradicional. 
 
Impacto e indicadores 
Generar un documento de los parámetros y de la técnica de manipulación de 
semen canino. 
Estandarizar una técnica para el almacenamiento de material genético 
procedente de epidídimos caninos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
5 
 
 
 
1. Marco teórico 
1.1 Evaluación andrológica 
El sistema reproductor del macho realiza tres funciones básicas que son: la 
producción y maduración de los espermatozoides en los testículos; la maduración, 
almacenamiento y transporte de los espermatozoides en el sistema tubular, y la 
deposición de los espermatozoides en el sistema reproductor femenino mediante el 
pene, los testículos se componen de dos tipos de tejido, los túbulos seminíferosy el 
tejido intersticial. La proporción entre los dos tipos de tejido varía considerablemente 
entre especies. Los túbulos seminíferos se abren en conductos colectores llamados vasos 
eferentes los cuales, a su vez, se abren en el epidídimo, que es una estructura en forma 
de espiral, El epidídimo se divide en cabeza, cuerpo y cola que emergen medialmente y 
se localizan en la superficie dorso lateral del testículo en el perro. El movimiento del 
espermatozoide a lo largo del epidídimo es el resultado del peristaltismo. La cola del 
epidídimo actúa como un almacén de espermatozoides esperando el momento de la 
eyaculación y desemboca en el conducto deferente que también actúa como un 
reservorio de espermatozoides. (Simpson, 2000). 
1.1.1 Examen físico. Para la realización del examen andrológico se debe comenzar 
por hacer una buena anamnesis y examen físico completo del animal para descartar 
enfermedades sistémicas o afecciones locales que alteren la reproducción; de igual 
manera la evaluación de los órganos del sistema reproductivo es importante. En la 
anamnesis el clínico debe obtener una historia completa que incluya la administración 
de cualquier tipo de medicamentos, indagación sobre pruebas de laboratorio como la de 
6 
 
 
 
brucelosis, en particular, así como descartar procesos patológicos de transmisión directa 
o sexual en los animales que realizar monta directa (Nunes, 2008). 
1.2 Examen seminal 
La determinación de las características seminales es un factor clave para predecir el 
potencial fertilizante del macho. (A.I.Peña, 2004) 
En el epidídimo ocurre la maduración funcional y morfológica de los 
espermatozoides de virtualmente todas las especies de mamíferos y se almacenan por 
algunos días o semanas en una condición viable y fértil antes de la eyaculación. Hay que 
recordar que el número de espermatozoides disponibles para la eyaculación, depende de 
las reservas en la cola del epidídimo, conducto deferente y ámpula, y que los 
espermatozoides de la cabeza y del cuerpo del epidídimo no participan en la 
eyaculación. (Hernández, 2004) 
Los espermatozoides recién producidos deben experimentar un proceso de 
maduración que les permita fecundar. Para que maduren deben migrar por el epidídimo 
(cabeza-cuello-cola) y adquirir las características fecundantes. (Hafez, 2005) 
Para la calificación de la fertilidad potencial hay que registrar color, volumen, olor y 
características microscópicas como porcentaje de motilidad progresiva, concentración 
espermática y porcentajes de espermatozoides vivos. (Wanke, 2006) 
1.2.1 Examen macroscópico. Es la que se evalúa a simple vista, sin necesidad de 
equipos especiales como un microscopio. Incluye volumen, color y pH. 
1.2.1.1. Volumen. Varía según la raza, edad, tamaño, clima, etc. También se ve una 
variación con la cantidad recolectada de la tercera fracción. El volumen debe registrarse 
7 
 
 
 
antes de eliminar ninguna muestra; este valor se necesita para calcular el número total 
de espermatozoides en el eyaculado. Se debe medir el volumen del eyaculado el cual 
varía según la raza, edad, tamaño y no tiene relación con la fertilidad del animal. Puede 
variar desde 1 hasta 40 ml por eyaculado (Feldman, 2000). 
El perro eyacula normalmente en tres fracciones: 
 Primera fracción: Denominada pre espermático y su volumen varía desde gotas 
hasta 1 ml aproximadamente, de consistencia acuosa y transparente, el tiempo de 
emisión varía entre 30 y 50 segundos. 
 Segunda fracción: Fracción espermática, más rica en espermatozoides y 
proviene del epidídimo, de color gris a blanco lechoso, la duración promedio del 
segundo proceso de eyaculación varía entre 50 y 80 segundos. y varía entre 0.5 y 
2 ml. 
 Tercera fracción: Fracción post-espermática o prostática, es la más voluminosa, 
compuesta en su totalidad por líquido prostático, de color transparente y acuosa, 
su emisión tiene una duración promedio de 3 a 30 minutos y es de 
aproximadamente 4 ml (1 - 17 ml). No es necesaria la recolección de líquido 
prostático para valorar la movilidad y morfología de los espermatozoides, ni 
para la inseminación artificial. (Feldman, 2000). 
1.2.1.2. Color. El semen normal es de color blanco lechoso. El color y la opacidad 
de la muestra de semen debe observarse inmediatamente después de la recolección. El 
color rojo indica la presencia de sangre, ya sea de la superficie del pene o de la próstata. 
El color amarillo indica la presencia de orina y partículas blancas pueden ser indicativas 
de la presencia de leucocitos (Keuerk, 2013) 
8 
 
 
 
1.2.1.3. pH. El pH normal del semen canino oscila entre 6,3-7 y depende de la 
cantidad de líquido prostático recolectado. Una disminución en el pH podría indicar una 
eyaculación incompleta o una inflamación de testículos o epidídimos. (Sorribas C. , 
2000) 
1.2.2. Examen microscópico. 
1.2.2.1. Motilidad. El semen canino contiene cantidades apreciables de 
electrolitos como los cloruros. La motilidad del espermatozoide es incrementada por el 
potasio, magnesio y calcio. Las vitaminas presentes en el plasma seminal son ácido 
ascórbico, Inositol que ayuda en la regulación de la presión osmótica y trazas de 
vitaminas del complejo B. Para evaluar la motilidad se debe observar inmediatamente 
después de la recolección, esto para observar los espermatozoides aun cuando la 
temperatura de su medio es aceptable para su sobrevivencia. (Bonilla, 2007) 
1.2.2.2. Concentración. Se debe calcular la concentración del eyaculado para 
conocer el número total de espermatozoides presentes, en cámara de Neubauer y se 
cuenta el cuadrado central de 1mm El número de espermatozoides contados en el 
cuadrado central grande equivale al número en millones de los mismos por ml; Este 
valor es multiplicado por el volumen total del eyaculado para calcular el número total de 
células en el mismo. Para el perro se considera normal de 200 a 500 millones de 
espermatozoides normales/eyaculado. (Bonilla, 2007) 
1.2.2.3. Morfología. La evaluación de la morfología consiste en la coloración de 
la muestra de la segunda fracción y se calcula el porcentaje de las células normales 
dentro del eyaculado. Sin el examen morfológico del semen cualquier valoración de la 
fertilidad es incompleta; se puede usar coloración de Wright, eosina-nigrosina, los 
9 
 
 
 
espermatozoides aparecen silueteados sobre un fondo negro (nigrosina); fijación del 
semen con formol (1- o 2 gotas de formol amortiguado en 1 ml de semen) y luego se 
observa con microscopio de luz. (Bonilla, 2007). 
Las anormalidades de los espermatozoides se clasifican en primarias y 
secundarias: 
 Anormalidades primarias: este tipo de anormalidades ocurren durante 
espermatogénesis (dentro de los túbulos seminíferos), suelen ubicarse en la 
cabeza y porción media del espermatozoide. 
 Anormalidades secundarias: estas son problemas en la maduración del mismo 
espermatozoide ocurre durante el tránsito a través del sistema de ductos del 
testículo y epidídimo. Como un ejemplo de esta anormalidad es la gota 
citoplasmática. Deben ser menores al 20% del esperma defectuoso en el perro 
normal. 
Las anormalidades no deben ser mayores al 30% de los defectos totales, es decir un 
semen normal debe tener un mínimo de 80% de espermatozoides morfológicamente 
normales. 
En la especie canina, los defectos espermáticos primarios que se sabe que están 
asociados a infertilidad son gotas citoplásmicas proximales, defectos del cuello y 
defectos de la pieza intermedia. Aunque los defectos secundarios, por ejemplo piezas 
intermedias plegadas o colas dobladas o enrolladas, se consideran menos graves que los 
primarios, ya que normalmente representan una respuesta transitoria frente a un estrés 
puntual, es obvio que si afectan a una gran proporción de los espermatozoides del 
eyaculado van a comprometer la motilidad y la fertilidad. (Keuerk, 2013) 
101.2.2.4. Vigor. Se evalúa el vigor, al mismo tiempo que la motilidad, teniendo 
en cuenta la velocidad con la que estos espermatozoides atraviesan el campo. La escala 
que se utiliza es de 0 a 4, evaluando como 0 los espermatozoides inmóviles y como 4 
los que avanzan rápidamente por el campo y son difíciles de seguir visualmente. Dentro 
de estos parámetros se consideran los puntos intermedios. Se considera como valor 
mínimo aceptable un vigor de 3. (Gomez V, n.d.) 
1.3. Métodos de extracción seminal 
1.3.1 Colecta seminal tradicional. Existen varios métodos para la extracción, 
el que se describe a continuación, el método de la “mano enguantada”, es el más usado. 
Otros son la electro eyaculación, la recolección con vagina artificial o con cono de látex. 
Por lo general se requiere la presencia de una hembra, si se encuentra en celo mejor, 
para la provocación del macho y favorecer la producción de una elevada cantidad de 
espermatozoides. Si la hembra no está en celo se le puede frotar en su cuarto posterior 
secreciones de hembras en estro o feromonas artificiales, para así excitar al macho.El 
método de la “mano enguantada” requiere estimulación manual, el glande parcialmente 
en erección como consecuencia de la estimulación sexual de la hembra en celo, se 
extrae con la mano izquierda del prepucio que lo envuelve y, haciéndolo alrededor por 
abajo, se le aplica masaje hasta que se perciba una clara separación entre en glande y el 
bulbo del glande. Cuando la reacción es buena, el perro comienza además a realizar 
fuertes empujes con la región pélvica, como ocurre en el apareamiento natural. Luego, 
corriendo hacia atrás el prepucio, se extiende hacia delante el glande, que ha aumentado 
mucho su perímetro con gran rapidez. Por lo general la eyaculación de la fracción rica 
en espermatozoides (lechosa, blanquecina) coincide con la completa erección del pene y 
11 
 
 
 
se recoge con un vaso graduado. En la mayoría de los casos el perro se eleva durante la 
eyaculación de la fracción rica en espermatozoides, levantando una extremidad 
posterior. Después, manteniendo la sujeción a nivel del cuerpo del pene, el glande se 
desvía mediante ligera tracción, primero lateralmente entre las dos extremidades 
posteriores del macho en dirección caudal, tal como sucede en el apareamiento natural. 
Cuando la relajación súbita del miembro anuncia la conclusión del “apareamiento” 
puesto en marcha para obtener el semen, se anula inmediatamente la fijación del pene 
(Keuerk, 2013) 
1.3.2. Colecta directa del epidídimo. La obtención de espermatozoides a nivel 
testicular (conducto deferente) para su crio preservación, es una potente herramienta 
para el rescate de células germinales de animales domésticos con alto valor genético, 
que murieron repentinamente por accidente o enfermedad entre las especies 
domésticas en que se ha aplicado esta técnica se encuentran: bovinos, caprinos, 
porcinos, equinos, gatos y caninos (Hernández, 2004). 
Las técnicas para la crio-conservación de espermatozoides inicialmente han 
tenido un progreso lento; los efectos de la crio-conservación sobre la función 
espermática y la fertilidad han sido ampliamente estudiados y descritos, particularmente 
en bovinos (Novoa, 2013). 
 
En la tabla 1 se indican los parámetros a evaluar en el examen microscópico del 
semen canino, la indicación de cada parámetro y el método de evaluación de cada uno. 
 
 
12 
 
 
 
Tabla 1: Parámetros a evaluar microscópicamente en una muestra seminal 
PARÁMETRO INDICACIÓN MÉTODO DE 
EVALUACIÓN 
Motilidad El mayor indicador de 
funcionalidad espermática, ya 
que es requerida cuando el 
espermatozoide se encuentra en 
fase de transporte en el 
oviducto; es una manifestación 
de la competencia funcional y 
estructural del espermatozoide. 
Se correlaciona positivamente 
con la integridad de membrana 
y morfología normal. Se 
expresa en porcentaje, y el 
valor normal en el perro es de 
70% y 90%. 
Evaluada por microscopía 
de contraste con objetivos 
10X o 20X. 
Motilidad individual o 
Motilidad Progresiva: 
igualmente en microscopio 
a mayores aumentos (100X 
a 200X) 
Se observa una gota de 
semen entre porta y 
cubreobjetos atemperados 
a 37°C, se debe observar el 
número de 
espermatozoides con 
movimiento progresivo, 
nunca curvo, rotatorio ni 
oscilante, también se 
expresa en porcentaje 
13 
 
 
 
Concentración Tiene poco valor como 
indicador de la calidad del 
semen; la concentración se 
multiplica por el volumen y se 
da en total de espermatozoides 
por eyaculado. 
Cámaras de recuentos 
celulares(Neubauer) 
 
Morfología Es un indicativo del potencial 
fecundante del eyaculado, ya 
que las alteraciones interfieren 
en la capacidad de movimiento 
y fecundante del 
espermatozoide. 
Tinciones: Negrosina-
eosina en microscopia de 
campo claro, fijación de 
muestras en solución 
formol 10% por 
microscopia de contraste 
Integridad de 
membrana 
Para ello debe emplearse la 
prueba hiposmótica, ésta mide 
la capacidad que presenta 
membrana espermática para 
permitir el flujo de iones y agua 
al interior de la célula 
Basada en el conteo de 100 
células en la cámara de 
Neubauer con microscopía 
óptica a 200X, en fase de 
contraste, para identificar 
espermatozoides con cola 
doblada o enrollada. 
Tinciones: simples y 
triples; tinción fluorescente 
Adaptado de: (Torres, 2011). 
14 
 
 
 
1.3.3 Composición del semen canino. El semen eyaculado se compone de los 
espermatozoides suspendidos en el plasma seminal. La porción líquida del eyaculado se 
denomina plasma seminal. Está constituido por la secreción de las glándulas accesorias 
(ampolla del conducto deferente y próstata, solo en el perro). Así como una minúscula 
porción porcentual de productos de secreción del epidídimo. Los diferentes productos 
del plasma seminal no se limitan a un mismo origen o glándula. Tiene una gran 
variación entre especies, entre individuos dentro de una misma especie, y además se 
presentan variaciones estacionales que son más evidentes en las especies de 
reproducción estacional. Los iones más frecuentes en el plasma seminal son el sodio y 
el potasio, Otros componentes son las prostaglandinas (E y F), enzimas (fosfolipasas, 
fosfatasas, etc.), otras proteínas asociadas a la fertilidad como osteopontina, péptidos y 
aminoácidos, fosfolípidos por ejemplo colina, lípidos (colesterol, testosterona, etc.), 
carnitina, ácido láctico, ascórbico, etc. Otros componentes con actividad antimicrobiana 
como inmunoglobulinas A, y con actividad hormonal como andrógenos, estrógenos, 
LH, relaxina, etc. (Keuerk, 2013) 
1.4. Crio conservación del semen 
En cuanto a la crio conservación del semen según (Simpson, 2000) se han 
publicado una gran variedad de diluyentes y de protocolos para la congelación y 
descongelación de semen. En la tabla 2 observamos una variedad de Diluyentes para 
semen congelado que se utilizan actualmente. El autor ha trabajado sobre todo con el 
diluyente TRIS, que durante muchos años le ha dado buenos resultados con el semen de 
perro y de zorro. En ambas especies, el autor ha obtenido una tasa de concepción del 67-
15 
 
 
 
80% después de la deposición intrauterina de 50-150 x 10
6
 espermatozoides por 
inseminación, con dos inseminaciones separadas 24 horas. 
Tabla 2: Diluyentes utilizados en crio conservación de semen canino. 
DILUYENTES PARA SEMEN CONGELADO 
Diluyente de Seager(1969): (periodo 
medio de conservación del semen 30-35 
meses) 
Diluyente de Andersen (1975): ( 
periodo medio e conservación del 
semen 18 meses) 
Lactosa 11% p/v Tris ( hidroximetil- 
metilamina) 
2.9 g 
Glicerol 4 % v/v Fructosa 1.25 g 
Yema de huevo 20% v/v Ácido cítrico 1.32 g 
Agua bidestilada 100 ml Agua destilada 100 ml 
Dihidroestreptomcina 100 mg/100 ml Glicerol 8% v/v 
Penicilina 1000 UI/ml Yema de huevo 20% v/v 
Tomado de:(Sorribas C. , 2005) 
 
1.5 Factores que afectan al espermatozoide en la crio conservación 
La crio conservación es una técnica mediante la cual el material biológico se 
mantiene viable por tiempo indefinido. Gracias a las diferencias de tasas de congelación 
y descongelación entre especies, se han planteado diversidad de protocolos de 
congelación; lo anterior indica que se hace importante realizar estudios con el semen de 
cada especie que sea de interés para el investigador y mediante esto validar una técnica 
16 
 
 
 
que logre una conservación de las muestras seminales a largo plazo sin que se vea 
afectada significativamente la capacidad fecundante del espermatozoide. Las tasas de 
enfriamiento y descongelación, están sujetas a transiciones; pues estas dependen de 
factores tales como el diluyente, el crio protector, el sistema de empaque y por supuesto 
la calidad seminal que es un parámetro altamente variable entre especies (Medina-
Robles, 2007) 
1.5.1 Estrés térmico. El enfriamiento del semen disminuye la actividad 
metabólica de los espermatozoides y reduce el crecimiento bacteriano gracias a esto se 
prolonga la viabilidad de los espermatozoides (Palma, 2001). 
El hecho de que los protocolos se basen en establecer tasas de congelación está 
en que las células se vuelven menos sensibles en unas próximas horas luego del 
eyaculado. Se ha determinado que una muestra seminal puede mantenerse hasta por 16 
horas incubado a temperatura ambiente en su propio plasma seminal, lo que lleva a 
sugerir que debe haber un rango de por lo menos unas 6 horas antes de congelar que es 
cuando se ha alcanzado la máxima resistencia. Aun así, con una curva de congelación 
lenta estos cambios de temperatura inducen estrés de membrana, por los cambios en 
lípidos que se generan; y del mismo modo los elementos del citoesqueleto presentan 
sensibilidad a dichas variaciones de la temperatura, resultando con una 
despolimerización prematura de los filamentos de actina; éste es un paso necesario para 
permitir la aproximación de la membrana plasmática y el subyacente exterior de la 
membrana acrosomal promoviendo así la exocitosis acrosomal. (Watson, 2000). 
1.5.2. Estrés osmótico y formación de cristales de hielo. En el proceso de la 
crio preservación las células son sometidas a un medio hipertónico, por lo que la célula 
17 
 
 
 
en un inicio se encoge, pero retoma su volumen normal cuando el crio protector entra a 
la célula (N Songsasena, 2002) 
Otras alteraciones o fenómenos que ocurren en el proceso son el choque térmico 
y la formación de grandes cristales d hielo intracelular. Estos procesos ocurren si la 
curva de congelación es muy rápida, lo que genera la deshidratación progresiva de la 
célula. (Pickett, 1987) 
La tasa de congelación está directamente relacionada con la permeabilidad de la 
membrana celular y las células que tienen una mayor permeabilidad al agua requieren 
de una mayor tasa de congelación para sobrevivir idealmente el hielo formado durante 
la congelación se conducirá a un aumento de la presión osmótica en el medio sin 
congelar, que a su vez sacara más agua de la célula; la concentración de sales aumentará 
tanto intra como extracelular mientras el agua se congela y la temperatura tiene que 
disminuir para proteger a las proteínas de la concentración de sales por lo tanto las tasas 
de congelación demasiado rápidas causa daños estructurales por la formación de hielo 
intracelular y las tasas de congelación demasiado lentas causaran daño a las proteínas 
debido a las sales; el daño de la mayoría de las células se produce durante la 
congelación y el deshielo, por esta razón la descongelación del semen en general debe 
hacerse muy rápido para disminuir la posibilidad de daños por el crecimiento 
extracelular de cristales de hielo. (Crabo., 2001). 
1.5.3. Estrés oxidativo. El estrés oxidativo en los espermatozoides consiste en 
el daño de los componentes estructurales y fisiológicos que surgen en ellos cuyo efecto 
está directamente relacionado con la disminución de la sobrevivencia y capacidad 
fecundante. (Villa, 2009). 
18 
 
 
 
El daño de membrana en los espermatozoides causado por los ROS, está dado 
por la alteración de su permeabilidad ya que se afectan las bombas de Na+ y Ca2+, 
teniendo como consecuencia el ingreso de estos cationes al interior del espermatozoide, 
alterando la osmolaridad, permitiendo la formación de fosfatos de calcio pocos solubles, 
agotamiento del ATP y activación por medio del Ca de enzimas proteolíticas y 
fosfoglucolipídicas, provocando así el daño proteico y lipídico, al igual que alteraciones 
en el ADN y finalmente la muerte celular. (Villa, 2009) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
19 
 
 
 
2. Materiales y métodos 
2.1 Localización 
El proyecto se realizó en las instalaciones de la universidad de la Salle; el 
laboratorio de reproducción animal y la clínica de pequeños animales de la Universidad. 
2.2 Población y muestra 
Se utilizaron cinco pares de testículos de caninos, estos fueron obtenidos desde 
las prácticas de orquiectomías realizadas en la clínica de la universidad de la Salle por 
los estudiantes de técnicas quirúrgicas. 
Para el método de colecta tradicional se utilizaron cinco perros aparentemente sanos de 
la clínica veterinaria de la universidad la Salle con previa autorización de propietario. 
2.3 Variables 
Las variables que se analizaron en el estudio fueron: motilidad espermática (%), 
morfología espermática (%), vigor espermático (escala de 0 a 5) y viabilidad del 
espermatozoide. 
2.4 Análisis estadístico 
Para el análisis de los resultados obtenidos en las pruebas de laboratorio el 
estudio se apoyó básicamente de la herramienta estadística descriptiva del programa 
Excel® , además se empleó un análisis de varianza y anova simple para estimar las 
diferencias entre las medias de los valores obtenidos en cada grupo evaluado; utilizando 
el paquete estadístico Statgraphics Centurion XVI®. 
 
20 
 
 
 
2.5. Toma de muestra directa de epidídimo 
La recolección de los testículos se realizó conforme se realizaban las prácticas 
de orquiectomías en la clínica de la universidad de la Salle, las cuales se realizaban cada 
quince días. Inmediatamente se realizaba la orquiectomía se colocaban los testículos en 
una caja de Petri y eran trasladados lo más rápido posible al laboratorio de reproducción 
de la universidad de la Salle. 
A cada testículo se le realizó un lavado externo con solución salina fisiológica 
(NaCl al 0.9%) para remoción de sangre y contaminantes externos. (Figura 1) 
 
 
Figura 1: Materiales utilizados en recolección de Espermatozoides epididimarios. 
Fuente: Autores, 2014 
 
2.5.1. Recolección de espermatozoides epididimarios. Para realizar la 
recolección de los espermatozoides epididimarios se procedió a realizar la disección de 
los testículos retirando todas las túnicas para poder así canular el conducto deferente. 
21 
 
 
 
Se localizó en el epidídimo la porción correspondiente a la cola del mismo en el 
cual se realizaron cortes horizontales y verticales con chuchillas minora (Figura 2) 
 
 
Figura 2: Disección del epidídimo. Fuente: Autores, 2014 
 
 Se utilizó un catéter G24 0,7 mm. X 19 mm el cual se acoplo al conducto 
deferente, este catéter se acopló a un venoclisis el cual estaba adaptado con una jeringa 
que contenía 5 ml de medio diluyente TRIS. La porción seccionada del epidídimo se 
coloca cerca de la caja de Petri y se toma el testículo con cuidado. 
Al acoplarse el catéter al conducto deferente se procede a realizar el lavado de 
este. Se observa que la cola del epidídimo se va llenando y va apareciendo en el 
extremo seccionado anteriormente el contenido epididimario como vemos en la figura 3. 
 
 
22 
 
 
 
 
 
Figura 3: Llenado y lavado del conducto deferente y cola del epidídimo. Fuente:Autores, 2014 
Fueron evaluados parámetros espermáticos. Posteriormente tras de confirmar 
viabilidad espermática se procedió a envasar el semen en pajillas de 0.5 ml (figura 4 y 
5). 
Estas se colocaron en gradillas dentro de una canastilla previamente enfriada 5 
ºC, y esta se colocó en vapores de nitrógeno durante 20 minutos hasta alcanzar -25 ºC; 
luego se sumergió directamente en el nitrógeno líquido. (Figura 6). 
23 
 
 
 
 
Figura 4: Envasado de pajillas. Fuente: Autores, 2014 
 
 
Figura 5: Sellado hermético de pajillas. Fuente: Autores, 2014 
 
24 
 
 
 
 
Figura 6: Curva de enfriamiento y congelación de pajillas. Fuente: Autores, 2014 
 
 
La descongelación de pajillas se realizó en baño de María a una curva de 
descongelación de 37°C, por 40 segundos e inmediatamente se evaluaron las variables 
descritas. Igualmente se mantenían las próximas pajillas a evaluar a temperatura 
ambiente, como lo muestra la figura 7. 
 
 
25 
 
 
 
 
Figura 7: Mantenimiento de pajillas a temperatura 35ºC. Fuente: Autores, 2014 
 
2.5.2. Recolección de semen de forma tradicional . Para realizar el estudio de 
este parámetro se utilizaron 5 perros aparentemente sanos entre los 2 y 8 años de edad, 
provenientes de la clínica veterinaria de la universidad de la Salle con previa 
autorización del propietario. Argumentando el objetivo de nuestro estudio los 
propietarios de los caninos accedían. Cada perro se llevó a un ambiente tranquilo 
cercano a la clínica. Y utilizando la técnica descrita por (Root, 2005): sujetando el pene 
del perro y el prepucio prolapsando el pene haciendo presión en la zona proximal al 
glande y masajeando hacia la apertura prepucial. El eyaculado se recolectaba mediante 
un embudo acoplado a un tubo de recolección y con la mano cerrada se protegía de 
cambio bruscos de temperatura a la muestra seminal, mientras se llevaba al laboratorio 
de la Universidad de La Salle para realizar la evaluación y crio preservación. 
 
 
 
26 
 
 
 
3. Resultados 
Se realizó una comparación de las variables utilizadas pre y post congelación por 
cada método y entre ellos, arrojando los resultados que presentamos en las siguientes 
gráficas. Demás salidas estadísticas y análisis de varianza ver anexo 1. 
3.1 Viabilidad 
3.1.1. Viabilidad pre y post congelación para extracción directa. Se realizó 
el estudio de resultado de la viabilidad entre los tratamientos, primero de las muestras 
tomadas directamente del epidídimo, comparando la viabilidad espermática pre y post 
congelación. Ver tabla 3 
 
Tabla 3: Viabilidad pre y post congelación para extracción directa 
Directo N Promedio Desviación 
estándar 
Min Max 
Pre 5 0,65 A 0.05 0,6 0,7 
Post 4 0,47 B 0.05 0,4 0,5 
 *Letras diferentes indican diferencia significativa. (p ≤0,05) 
 
 
 
27 
 
 
 
 
Figura 8: Comparación de viabilidad pre y post congelación para directo. 
 
3.1.2. Viabilidad pre y post congelación para extracción tradicional. 
Posteriormente se procedió a comparar la viabilidad presente en el semen extraído por 
colecta manual (tradicional) pre y post congelación. Ver tabla 4 
 
Tabla 4: Viabilidad pre y post congelación para extracción tradicional 
Tradicional N Promedio Desviación 
estándar 
Min Max 
Pre 5 0,81 0.05 0,75 0,9 
Post 5 0,73 0.13 0,5 0,84 
 
28 
 
 
 
 
Figura 9: Comparación de viabilidad pre y post congelación para tradicional 
 
3.2. Motilidad 
3.2.1. Motilidad pre y post congelación para extracción directa. Se realizó el 
estudio de resultado de la motilidad entre los tratamientos, primero de las muestras 
tomadas directamente del epidídimo, comparando la motilidad espermática pre y post 
congelación. Ver tabla 5 
 
Tabla 5: Motilidad pre y post congelación para extracción directa. 
Directo N Promedio Desviación 
estándar 
Min Max 
Pre 5 0.73 0.19 0.4 0.9 
Post 4 0.55 0.17 0.4 0.8 
 
29 
 
 
 
 
Figura 9: Comparación de motilidad pre y post congelación para tradicional 
 
3.2.2. Motilidad pre y post congelación para extracción tradicional. 
Posteriormente se procedió a comparar la motilidad que poseía el semen extraído por 
colecta manual (tradicional) pre y post congelación. Ver tabla 6 
 
Tabla 6: Motilidad pre y post congelación para extracción tradicional. 
Tradicional N Promedio Desviación 
estándar 
Min Max 
Pre 5 0.83 0.05 0.75 0.85 
Post 5 0.73 0.15 0.5 0.9 
 
 
30 
 
 
 
 
Figura 10: Comparación de motilidad pre y post congelación para tradicional. 
3.3 Vigor 
3.3.1. Vigor pre y post congelación para extracción directa. En el parámetro 
vigor se evaluó igualmente las muestras por toma directa del epidídimo comparando los 
resultados obtenidos pre y post congelación. Ver tabla 7 
 
Tabla 7: Vigor pre y post congelación para extracción directa 
Directo N Promedio Desviación 
estándar 
Min Max 
Pre 5 3,4 0.54 3,0 4,0 
Post 4 2,75 0.5 2,0 3,0 
 
31 
 
 
 
 
Figura 11: Comparación de vigor pre y post congelación para muestra directa 
 
3.3.2 Vigor pre y post congelación para extracción tradicional. Se realizó la 
comparación también para muestras obtenidas por método tradicional pre y post 
congelación. Véase tabla 8 
 
Tabla 8: Vigor pre y post congelación para extracción tradicional 
Tradicional N Promedio Desviación 
estándar 
Min Max 
Pre 5 3,6 0.54 3,0 4,0 
Post 5 3,6 0.54 3,0 4,0 
 
32 
 
 
 
 
Figura 12: Comparación de vigor pre y post congelación para colecta tradicional. 
 
3.4 Morfología 
En este parámetro presentamos los resultamos como (%) de espermatozoides 
con anormalidades, no discriminamos por tipo de anormalidades como se puede ver en 
la tabla 9. Estas anormalidades varían entre defectos de cabeza, cola etc. 
Tabla 9: Morfología para toma directa y tradicional. 
Tratamientos N Promedio Desviación 
estándar 
Min Max 
Directo 5 0.33 0.10 0.2 0.5 
Tradicional 5 0.25 0.08 0.2 0.4 
Total 10 0.29 0.10 0.2 0.5 
 
33 
 
 
 
 
Figura 13: Comparación de porcentaje de anormalidades encontradas entre 
tratamientos. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
34 
 
 
 
4. Discusión 
Utilizando la técnica de flujo retrogrado fueron recolectados espermatozoides de la 
cola del epidídimo, para así comparar los parámetros seminales comunes y establecer si 
es posible criopreservarlo. En el proceso se estableció que la viabilidad espermática es 
menor en el tratamiento pos congelación de la toma directa del epidídimo, esto según 
(E. Korochkina, 2014) se debe a que el espermatozoide canino proveniente del 
epidídimo tiene una baja tolerancia a la congelación comparada con el proveniente del 
eyaculado, lo que podría derivarse de la falta de líquido prostático. 
En cuanto a la viabilidad espermática vemos la tendencia a bajar en la colecta 
directa del epidídimo con un promedio de 65% de viabilidad pre congelación vs 47% 
de viabilidad pos congelación. Con una diferencia de 18%. (Hori T, 2004) Obtuvo 
resultados similares en cuanto a la baja de viabilidad pos congelación de los 
espermatozoides, pero con un resultado más amplio en su estudio con espermatozoides 
obtenidos del epidídimo de perros Beagle, en cuanto a la viabilidad de estos encontró un 
promedio pre congelación de 89.1% de viabilidad vs 53.1% viabilidad pos congelación. 
Con una diferencia de 36%. 
La motilidad total pos congelación disminuye. El promedio de motilidad para las 
muestras tomadas directas del epidídimo pre congelación fue de 73% y post 
congelación fue de 55%, contrario a lo encontrado por (Hori T, 2004) quien obtuvo 
promedios pre congelación de 89.4% en motilidad y 19.5% pos congelación en 
muestras tomadas del epidídimo de caninos raza Beagle. Se debe tener en cuenta que los 
promedios post congelación pueden bajar con la manipulación y descongelación de la 
muestra. En cuanto al estudio realizado por (J.M. Tebet, 2006) quien realizotrabajos de 
35 
 
 
 
crio preservación de espermatozoides epididimarios de gatos domésticos, tuvo 
resultados similares a los obtenidos en este trabajo, teniendo como resultados un 
promedio de motilidad de 77% pre congelación y de 59% pos congelación. 
En cuanto al tratamiento de colecta tradicional tenemos resultados de promedio de 
motilidad pre congelación de 83% vs una motilidad pos congelación de 73%, 
disminuyendo 10% la motilidad, lo cual difiere del estudio realizado por (Hori T, 
2004), quien encontró un promedio de motilidad pre congelación en colecta tradicional 
de 94.2% y pos congelación de 25.8%, disminuyendo un 68% la motilidad. 
Si realizamos la comparación de la resistencia a la congelación entre tratamientos 
(directo vs tradicional) vemos que la colecta tradicional tiene mayor motilidad pos 
congelación, esto se puede atribuir a la falta del líquido prostático de la muestra directa 
del epidídimo. Según (Bonilla, 2007), la motilidad del espermatozoide es incrementada 
por el potasio, magnesio y calcio El cual incluye el plasma seminal. Las vitaminas 
presentes en el plasma seminal son ácido ascórbico, inositol que ayuda en la regulación 
de la presión osmótica y trazas de vitaminas del complejo B. 
El vigor de los espermatozoides para la extracción directa del epidídimo pos 
congelación disminuyó. Esto está directamente relacionado con los resultados 
obtenidos en el parámetro motilidad. Contrario al resultado obtenido en el estudio de 
(Novoa, 2013) en el que se obtuvo constante viabilidad y vigor con los espermatozoides 
obtenidos del epidídimo de toros post congelación. 
En el parámetro morfología según los estudios realizados, no existen 
prácticamente diferencias en la calidad de los espermatozoides procedentes de 
epidídimo en comparación con los obtenidos de eyaculados. Según (J.M. Tebet, 2006) 
36 
 
 
 
no hay diferencia significativa comparando la morfología de espermatozoides obtenidos 
del epidídimo y del eyaculado de gatos. Este resultado difiere de (An TZ, 1999) y 
(Villaverde AI, 2006) quienes describen que los espermatozoides epididimarios 
presentan un alto porcentaje de gotas citoplasmáticas proximales, (34.5% y 20.9%, 
respectivamente), al igual que ocurre con las distales, según indican 44.5%. 
La gota protoplásmica o citoplásmica, se considera anormal, esta suele 
desprenderse de los espermatozoides tras la eyaculación, y está compuesta de 
citoplasma residual. Puede localizarse en la región del cuello, donde se conoce como 
gota proximal, o cerca del anillo citoplásmico, donde se le denomina gota distal. 
(Donald's, 1981). 
Según Amirat citado por (A Ribeiro-Peresa, 2014) la utilización de 
espermatozoides congelados, provenientes del eyaculado o del epidídimo, es 
indispensable para un buen programa de inseminación artificial, ya que la manipulación 
de espermatozoides frescos o congelados otorga una viabilidad corta del material. El 
objetivo de congelar células espermáticas es la producción de un banco de las mismas, 
teniendo a disposición un material sin plazo de vencimiento, potencializando la 
eficiencia de la reproducción animal. Sin embargo, el proceso de crio preservación 
resulta en la disminución de la fertilidad cuando se compara con semen fresco. 
 
 
 
 
37 
 
 
 
 
5. Conclusiones 
Es posible preservar material genético de un animal, en este caso canino después de 
su muerte o su castración profiláctica por medio de la crio preservación de los 
espermatozoides obtenidos del epidídimo. 
El material seminal extraído por colecta directa del epidídimo demuestra un 
promedio un poco mayor de células con daño estructural y menor resistencia a la crio 
preservación que en el método tradicional pero existe una gran posibilidad de obtener 
una fecundación con este método. 
Se recomienda realizar método de crio preservación automatizado para disminuir el 
impacto negativo que se genera viéndose más afectadas las células espermáticas 
obtenidas por colecta directa, aunque se debe tener en cuenta el costo de los equipos y 
el mayor gasto de nitrógeno líquido. 
Los espermatozoides recuperados de la cola del epidídimo de los caninos son 
viables según los estándares establecidos y los autores citados anteriormente. 
La célula espermática se mantiene post congelación ofreciendo resultados en 
parámetros espermáticos como motilidad y viabilidad cercanas a los promedios 
obtenidos con muestras de eyaculación completa de caninos, es recomendable a futuro 
realizar estudios sobre la capacidad fecundante de este semen obtenido directamente del 
epidídimo. 
 
 
38 
 
 
 
 
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43 
 
 
 
ANEXOS 
 
SALIDAS VIGOR POST X TTOS 
 
Resumen Estadístico para Vigor.post 
Ttos Recuent
o 
Promedi
o 
Desviación 
Estándar 
Coeficiente de 
Variación 
Mínimo Máximo 
Directo 4 2,75 0,5 18,1818% 2,0 3,0 
Tradicion
al 
5 3,6 0,547723 15,2145% 3,0 4,0 
Total 9 3,22222 0,666667 20,6897% 2,0 4,0 
 
Ttos Rango Sesgo 
Estandarizado 
Curtosis 
Estandarizada 
Directo 1,0 -1,63299 1,63299 
Tradicion
al 
1,0 -0,555556 -1,52145 
Total 2,0 -0,311654 -0,0246042 
 
Tabla ANOVA para Vigor.post por Ttos 
Fuente Suma de 
Cuadrados 
Gl Cuadrado 
Medio 
Razón-F Valor-P 
44 
 
 
 
Entre 
grupos 
1,60556 1 1,60556 5,76 0,0474 
Intra 
grupos 
1,95 7 0,278571 
Total 
(Corr.) 
3,55556 8 
 
Tabla de Medias para Vigor.post por Ttos con intervalos de confianza del 95,0% 
 Error Est. 
Ttos Casos Media (s 
agrupada) 
Límite 
Inferior 
Límite 
Superior 
Directo 4 2,75 0,263899 2,30875 3,19125 
Tradicion
al 
5 3,6 0,236039 3,20533 3,99467 
Total 9 3,22222 
 
Pruebas de Múltiple Rangos para Vigor.post por Ttos 
 
Método: 95,0 porcentaje LSD 
Ttos Casos Media Grupos 
Homogéneos 
Directo 4 2,75 X 
45 
 
 
 
Tradicion
al 
5 3,6 X 
 
Contraste Sig. Diferenci
a 
+/- 
Límites 
Directo - 
Tradicional 
 * -0,85 0,837216 
* indica una diferencia significativa. 
 
VIGOR PRE X TTO 
Resumen Estadístico para Vigor.pre 
Ttos Recuent
o 
Promedi
o 
Desviación 
Estándar 
Coeficiente de 
Variación 
Mínimo Máximo 
Directo 5 3,4 0,547723 16,1095% 3,0 4,0 
Tradicion
al 
5 3,6 0,547723 15,2145% 3,0 4,0 
46 
 
 
 
Total 10 3,5 0,527046 15,0585% 3,0 4,0 
 
Ttos Rango Sesgo 
Estandarizado 
Curtosis 
Estandarizada 
Directo 1,0 0,555556 -1,52145 
Tradicion
al 
1,0 -0,555556 -1,52145 
Total 1,0 0 -1,65985 
 
Tabla ANOVA para Vigor.pre por Ttos 
Fuente Suma de 
Cuadrados 
Gl Cuadrado 
Medio 
Razón-F Valor-P 
Entre 
grupos 
0,1 1 0,1 0,33 0,5796 
Intra 
grupos 
2,4 8 0,3 
Total 
(Corr.) 
2,5 9 
 
Tabla de Medias para Vigor.pre por Ttos con intervalos de confianza del 95,0% 
 Error Est. 
Ttos Casos Media (s 
agrupada) 
Límite 
Inferior 
Límite 
Superior 
47 
 
 
 
Directo 5 3,4 0,244949 3,00059 3,79941 
Tradicion
al 
5 3,6 0,244949 3,20059 3,99941 
Total 10 3,5 
 
Pruebas de Múltiple Rangos para Vigor.pre por Ttos 
 
Método: 95,0 porcentaje LSD 
Ttos Casos Media Grupos 
Homogéneos 
Directo 5 3,4 X 
Tradicion
al 
5 3,6 X 
 
Contraste Sig. Diferenci
a 
+/- 
Límites 
Directo - 
Tradicional 
 -0,2 0,798825 
* indica una diferencia significativa. 
 
48 
 
 
 
 
 
 
VIA.POST X TTOS 
Resumen Estadístico para Via.post 
Ttos Recuent
o 
Promedi
o 
Desviación 
Estándar 
Coeficiente de 
Variación 
Mínimo Máximo 
Directo 4 0,475 0,05 10,5263% 0,4 0,5 
Tradicion
al 
5 0,738 0,136821 18,5394% 0,5 0,84 
Total 9 0,62111
1 
0,171788 27,6582% 0,4 0,84 
 
Ttos Rango Sesgo 
Estandarizado 
Curtosis 
Estandarizada 
Directo 0,1 -1,63299 1,63299 
49 
 
 
 
Tradicion
al 
0,34 -1,77339 1,79668 
Total 0,44 0,239246 -1,31706 
 
Tabla ANOVA para Via.post por Ttos 
Fuente Suma de 
Cuadrados 
Gl Cuadrado 
Medio 
Razón-F Valor-P 
Entre 
grupos 
0,153709 1 0,153709 13,06 0,0086 
Intra 
grupos 
0,08238 7 0,0117686 
Total 
(Corr.) 
0,236089 8 
 
Tabla de Medias para Via.post por Ttos con intervalos de confianza del 95,0% 
 Error Est. 
Ttos Casos Media (s 
agrupada) 
Límite 
Inferior 
Límite 
Superior 
Directo 4 0,475 0,0542415 0,384306 0,565694 
Tradicion
al 
5 0,738 0,0485151 0,656881 0,819119 
Total 9 0,62111
1 
 
 
50 
 
 
 
Pruebas de Múltiple Rangos para Via.post por Ttos 
 
Método: 95,0 porcentaje LSD 
Ttos Casos Media Grupos 
Homogéneos 
Directo 4 0,475 X 
Tradicion
al 
5 0,738 X 
 
Contraste Sig. Diferenci
a 
+/- 
Límites 
Directo - 
Tradicional 
 * -0,263 0,17208 
* indica una diferencia significativa. 
 
VIA.PRE POR TTOS 
Resumen Estadístico para Via.pre 
51 
 
 
 
Ttos Recuent
o 
Promedi
o 
Desviación 
Estándar 
Coeficiente de 
Variación 
Mínimo Máximo 
Directo 5 0,65 0,05 7,69231% 0,6 0,7 
Tradicion
al 
5 0,818 0,055857 6,82848% 0,75 0,9 
Total 10 0,734 0,101675 13,8522% 0,6 0,9 
 
Ttos Rango Sesgo 
Estandarizado 
Curtosis 
Estandarizada 
Directo 0,1 0 -1,36931 
Tradicion
al 
0,15 0,51491 0,277676 
Total 0,3 0,146857 -0,664235 
 
Tabla ANOVA para Via.pre por Ttos 
Fuente Suma de 
Cuadrados 
Gl Cuadrado 
Medio 
Razón-F Valor-P 
Entre 
grupos 
0,07056 1 0,07056 25,11 0,0010 
Intra 
grupos 
0,02248 8 0,00281 
Total 
(Corr.) 
0,09304 9 
 
52 
 
 
 
Tabla de Medias para Via.pre por Ttos con intervalos de confianza del 95,0% 
 Error Est. 
Ttos Casos Media (s 
agrupada) 
Límite 
Inferior 
Límite 
Superior 
Directo 5 0,65 0,0237065 0,611344 0,688656 
Tradicion
al 
5 0,818 0,0237065 0,779344 0,856656 
Total 10 0,734 
 
Pruebas de Múltiple Rangos para Via.pre por Ttos 
 
Método: 95,0 porcentaje LSD 
Ttos Casos Media Grupos 
Homogéneos 
Directo 5 0,65 X 
Tradicion
al 
5 0,818 X 
 
Contraste Sig. Diferenci
a 
+/- 
Límites 
Directo - 
Tradicional 
 * -0,168 0,077311
5 
* indica una diferencia significativa. 
 
53 
 
 
 
 
 
M.POST X TRATAMIENTO 
Resumen Estadístico para M.post 
Ttos Recuent
o 
Promedi
o 
Desviación 
Estándar 
Coeficiente de 
Variación 
Mínimo Máximo 
Directo 4 0,55 0,173205 31,4918% 0,4 0,8 
Tradicion
al 
5 0,73 0,15248 20,8876% 0,5 0,85 
Total 9 0,65 0,178536 27,467% 0,4 0,85 
 
Ttos Rango Sesgo 
Estandarizado 
Curtosis 
Estandarizada 
Directo 0,4 1,25708 1,17938 
Tradicion 0,35 -0,952745 -0,191567 
54 
 
 
 
al 
Total 0,45 -0,103764 -1,24351 
 
Tabla ANOVA para M.post por Ttos 
Fuente Suma de 
Cuadrados 
Gl Cuadrado 
Medio 
Razón-F Valor-P 
Entre 
grupos 
0,072 1 0,072 2,75 0,1410 
Intra 
grupos 
0,183 7 0,0261429 
Total 
(Corr.)0,255 8 
 
Tabla de Medias para M.post por Ttos con intervalos de confianza del 95,0% 
 Error Est. 
Ttos Casos Media (s 
agrupada) 
Límite 
Inferior 
Límite 
Superior 
Directo 4 0,55 0,0808438 0,414826 0,685174 
Tradicion
al 
5 0,73 0,0723089 0,609096 0,850904 
Total 9 0,65 
 
Pruebas de Múltiple Rangos para M.post por Ttos 
 
55 
 
 
 
Método: 95,0 porcentaje LSD 
Ttos Casos Media Grupos 
Homogéneos 
Directo 4 0,55 X 
Tradicion
al 
5 0,73 X 
 
Contraste Sig. Diferenci
a 
+/- 
Límites 
Directo - 
Tradicional 
 -0,18 0,256476 
* indica una diferencia significativa. 
 
 
 
M.PRE. POR TTOS 
Resumen Estadístico para M.Pre. 
56 
 
 
 
Ttos Recuent
o 
Promedi
o 
Desviación 
Estándar 
Coeficiente de 
Variación 
Mínimo Máximo 
Directo 5 0,73 0,198746 27,2255% 0,4 0,9 
Tradicion
al 
5 0,83 0,0570088 6,86853% 0,75 0,9 
Total 10 0,78 0,147573 18,9196% 0,4 0,9 
 
Ttos Rango Sesgo 
Estandarizado 
Curtosis 
Estandarizada 
Directo 0,5 -1,40411 1,07545 
Tradicion
al 
0,15 -0,369527 -0,081024 
Total 0,5 -2,84037 3,54999 
 
Tabla ANOVA para M.Pre. Por Ttos 
Fuente Suma de 
Cuadrados 
Gl Cuadrado 
Medio 
Razón-F Valor-P 
Entre 
grupos 
0,025 1 0,025 1,17 0,3110 
Intra 
grupos 
0,171 8 0,021375 
Total 
(Corr.) 
0,196 9 
 
57 
 
 
 
Tabla de Medias para M.Pre. Por Ttos con intervalos de confianza del 95,0% 
 Error Est. 
Ttos Casos Media (s 
agrupada) 
Límite 
Inferior 
Límite 
Superior 
Directo 5 0,73 0,0653835 0,623386 0,836614 
Tradicion
al 
5 0,83 0,0653835 0,723386 0,936614 
Total 10 0,78 
 
Pruebas de Múltiple Rangos para M.Pre. Por Ttos 
 
Método: 95,0 porcentaje LSD 
Ttos Casos Media Grupos 
Homogéneos 
Directo 5 0,73 X 
Tradicion
al 
5 0,83 X 
 
Contraste Sig. Diferenci
a 
+/- 
Límites 
Directo - 
Tradicional 
 -0,1 0,213228 
* indica una diferencia significativa. 
 
58 
 
 
 
 
 
 
MORFO. POR TTOS 
Resumen Estadístico para Morfo. 
Ttos Recuent
o 
Promedi
o 
Desviación 
Estándar 
Coeficiente de 
Variación 
Mínimo Máximo 
Directo 5 0,33 0,109545 33,1953% 0,2 0,5 
Tradicion
al 
5 0,254 0,0841427 33,1271% 0,2 0,4 
Total 10 0,292 0,100421 34,3909% 0,2 0,5 
 
Ttos Rango Sesgo 
Estandarizado 
Curtosis 
Estandarizada 
Directo 0,3 0,772569 0,796385 
Tradicion 0,2 1,76083 1,72901 
59 
 
 
 
al 
Total 0,3 1,35827 0,335456 
 
Tabla ANOVA para Morfo. Por Ttos 
Fuente Suma de 
Cuadrados 
Gl Cuadrado 
Medio 
Razón-F Valor-P 
Entre 
grupos 
0,01444 1 0,01444 1,51 0,2535 
Intra 
grupos 
0,07632 8 0,00954 
Total 
(Corr.) 
0,09076 9 
 
Tabla de Medias para Morfo. Por Ttos con intervalos de confianza del 95,0% 
 Error Est. 
Ttos Casos Media (s 
agrupada) 
Límite 
Inferior 
Límite 
Superior 
Directo 5 0,33 0,0436807 0,258775 0,401225 
Tradicion
al 
5 0,254 0,0436807 0,182775 0,325225 
Total 10 0,292 
 
Pruebas de Múltiple Rangos para Morfo. Por Ttos 
60 
 
 
 
 
Método: 95,0 porcentaje LSD 
Ttos Casos Media Grupos 
Homogéneos 
Tradicion
al 
5 0,254 X 
Directo 5 0,33 X 
 
Contraste Sig. Diferenci
a 
+/- 
Límites 
Directo - 
Tradicional 
 0,076 0,142451 
* indica una diferencia significativa. 
 
 
MOTILIDAD POR DIRECTO 
Resumen Estadístico para motilidad 
61 
 
 
 
directo Recuent
o 
Promedi
o 
Desviación 
Estándar 
Coeficiente de 
Variación 
Mínimo Máximo Rango 
post 4 0,55 0,173205 31,4918% 0,4 0,8 0,4 
pre 5 0,73 0,198746 27,2255% 0,4 0,9 0,5 
Total 9 0,65 0,2 30,7692% 0,4 0,9 0,5 
 
directo Sesgo 
Estandarizado 
Curtosis 
Estandarizada 
post 1,25708 1,17938 
pre -1,40411 1,07545 
Total -0,184532 -1,22577 
 
Tabla ANOVA para motilidad por directo 
Fuente Suma de 
Cuadrados 
Gl Cuadrado 
Medio 
Razón-F Valor-P 
Entre 
grupos 
0,072 1 0,072 2,03 0,1970 
Intra 
grupos 
0,248 7 0,0354286 
Total 
(Corr.) 
0,32 8 
 
Tabla de Medias para motilidad por directo con intervalos de confianza del 95,0% 
62 
 
 
 
 Error Est. 
directo Casos Media (s 
agrupada) 
Límite 
Inferior 
Límite Superior 
post 4 0,55 0,0941124 0,39264 0,70736 
pre 5 0,73 0,0841767 0,589253 0,870747 
Total 9 0,65 
 
Pruebas de Múltiple Rangos para motilidad por directo 
 
Método: 95,0 porcentaje LSD 
directo Casos Media Grupos 
Homogéneos 
post 4 0,55 X 
pre 5 0,73 X 
 
Contrast
e 
Sig. Diferenci
a 
+/- 
Límites 
post - pre -0,18 0,29857 
* indica una diferencia significativa. 
 
63 
 
 
 
 
VIABILIDAD POR DIRECTO 
Resumen Estadístico para viabilidad 
directo Recuent
o 
Promedi
o 
Desviación 
Estándar 
Coeficiente de 
Variación 
Mínimo Máximo Rango 
post 4 0,475 0,05 10,5263% 0,4 0,5 0,1 
pre 5 0,65 0,05 7,69231% 0,6 0,7 0,1 
Total 9 0,57222
2 
0,103414 18,0723% 0,4 0,7 0,3 
 
directo Sesgo 
Estandarizado 
Curtosis 
Estandarizada 
post -1,63299 1,63299 
pre 0 -1,36931 
Total -0,276303 -0,601823 
 
Tabla ANOVA para viabilidad por directo 
64 
 
 
 
Fuente Suma de 
Cuadrados 
Gl Cuadrado 
Medio 
Razón-F Valor-P 
Entre 
grupos 
0,0680556 1 0,0680556 27,22 0,0012 
Intra 
grupos 
0,0175 7 0,0025 
Total 
(Corr.) 
0,0855556 8 
 
Tabla de Medias para viabilidad por directo con intervalos de confianza del 95,0% 
 Error Est. 
directo Casos Media (s 
agrupada) 
Límite 
Inferior 
Límite 
Superior 
post 4 0,475 0,025 0,433199 0,516801 
pre 5 0,65 0,0223607 0,612612 0,687388 
Total 9 0,57222
2 
 
 
Pruebas de Múltiple Rangos para viabilidad por directo 
 
Método: 95,0 porcentaje LSD 
directo Casos Media Grupos 
Homogéneos 
65 
 
 
 
post 4 0,475 X 
pre 5 0,65 X 
 
Contrast
e 
Sig. Diferenci
a 
+/- 
Límites 
post - pre * -0,175 0,079312
1 
* indica una diferencia significativa. 
 
VIGOR POR DIRECTO 
Resumen Estadístico para vigor 
directo Recuent
o 
Promedi
o 
Desviación 
Estándar 
Coeficiente de 
Variación 
Mínimo Máximo Rango 
post 4 2,75 0,5 18,1818% 2,0 3,0 1,0 
pre 5 3,4 0,547723 16,1095% 3,0 4,0 1,0 
Total 9 3,11111 0,600925 19,3155% 2,0 4,0 2,0 
 
66 
 
 
 
directo Sesgo 
Estandarizado 
Curtosis 
Estandarizada 
post -1,63299 1,63299 
pre 0,555556 -1,52145 
Total 0,0223967 0,689501 
Tabla ANOVA para vigor por directo 
Fuente Suma de 
Cuadrados 
Gl Cuadrado 
Medio 
Razón-F Valor-P 
Entre 
grupos 
0,938889 1 0,938889 3,37 0,1090 
Intra 
grupos 
1,95 7 0,278571 
Total 
(Corr.) 
2,88889 8 
 
Tabla de Medias para vigor por directo con intervalos de confianza del 95,0% 
 Error Est. 
directo Casos Media (s 
agrupada) 
Límite 
Inferior 
Límite 
Superior 
post 4 2,75 0,263899 2,30875 3,19125 
pre 5 3,4 0,236039 3,00533 3,79467 
Total 9 3,11111 
 
67 
 
 
 
Pruebas de Múltiple Rangos para vigor por directo 
Método: 95,0 porcentaje LSD 
directo Casos Media Grupos 
Homogéneos 
post 4 2,75 X 
pre 5 3,4 X 
 
Contrast
e 
Sig. Diferenci
a 
+/- 
Límites 
post - pre -0,65 0,837216 
* indica una diferencia significativa 
 
MOTILIDAD POR TRADICIONAL 
Resumen Estadístico para motilidad 
tradicion
al 
Recuent
o 
Promedi
o 
Desviación 
Estándar 
Coeficiente de 
Variación 
Mínimo Máximo Rango 
post 5 0,73 0,15248 20,8876% 0,5 0,85 0,35 
pre 5 0,83 0,0570088 6,86853% 0,75 0,9 0,15 
68 
 
 
 
Total 10 0,78 0,120646 15,4675% 0,5 0,9 0,4 
 
tradicion
al 
Sesgo 
Estandarizado 
Curtosis 
Estandarizada 
post -0,952745 -0,191567 
pre -0,369527 -0,081024 
Total -2,15034 1,67867 
 
Tabla ANOVA para motilidad por tradicional 
Fuente Suma de 
Cuadrados 
Gl Cuadrado 
Medio 
Razón-F Valor-P 
Entre 
grupos 
0,025 1 0,025 1,89 0,2068 
Intra 
grupos 
0,106 8 0,01325 
Total 
(Corr.) 
0,131 9 
 
Tabla de Medias para motilidad por tradicional con intervalos de confianza del 
95,0% 
 Error Est. 
tradicion Casos Media (s Límite Límite 
69 
 
 
 
al agrupada) Inferior Superior 
post 5 0,73 0,0514782 0,64606 0,81394