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Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 1 Intoxicaciones en fauna silvestre de Cataluña (2021) Inés S. Sánchez-Barbudo, Rafael Mateo y Pablo R. Camarero Dirección de contacto: R. Mateo (rafael.mateo@uclm.es), IREC, Ronda de Toledo s/n, 13071 Ciudad Real mailto:rafael.mateo@uclm.es Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 2 INDICE 1. INTRODUCCIÓN….…………………………………………………. 3 2. MATERIAL Y MÉTODOS…………………….……………………... 4 2.1. Muestras recibidas …………………………………..…………………………. 4 2.2. Procedimientos analíticos…………………………………………………….... 4 3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN………….………………………..… 7 4. CONCLUSIONES….……………………………………………….. 10 5. BIBLIOGRAFÍA……………….…………………………………..… 10 ANEXO …………………………………………...……………………. 15 Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 3 1. INTRODUCCIÓN Las intoxicaciones intencionadas y accidentales de fauna silvestre y animales domésticos han sido estudiadas en España por diversos laboratorios de toxicología veterinaria en las últimas dos décadas (María-Mojica et al. 1998, Guitart et al. 1999, Motas-Guzmán et al. 2003, Soler et al. 2006, Martínez-Haro et al. 2006, Martínez-Haro et al. 2008, Hernández et al. 2008, Hernández y Margalida 2008, 2009, Margalida et al. 2008, Sánchez-Barbudo et al. 2012). Aunque algunos de estos trabajos han sido llevados a cabo con animales domésticos, éstos también han resultado ser buenos centinelas del uso del veneno en España (Mateo y Guitart 2000). El laboratorio de ecotoxicología del IREC, es uno de los que lleva a cabo esta tarea actualmente y colabora estrechamente con otros grupos especializados en toxicología de fauna silvestre y diagnóstico de intoxicaciones en España y el extranjero (Martínez- Haro et al. 2008). En esta memoria se resumen los casos sospechosos de envenenamiento remitidos en el año 2021 por la comunidad de Cataluña al laboratorio de ecotoxicología del IREC. Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 4 2. MATERIAL Y MÉTODOS 2.1. Muestras recibidas Durante el periodo año 2021 se han recibido en el IREC 31 casos, de los cuales uno contenía muestras de varias especies para el estudio de prevalencia de antiinflamatorios. En los 30 casos sospechosos de envenenamiento se enviaron 25 animales y 9 cebos. 2.2. Procedimientos analíticos En primer lugar, en el caso de los cebos y de los contenidos gástricos, se realizó un examen visual de la muestra para detectar la presencia de formulados granulados u otro signo de presencia de fitosanitarios o sustancia extraña. A continuación, dependiendo de la disponibilidad de muestra y teniendo en cuenta la historia clínica y los hallazgos de la necropsia, se realizó la determinación de la actividad de la enzima acetilcolinesterasa (AChE) cerebral mediante el método Ellman (Hill y Fleming 1982). Los valores obtenidos se compararon con los obtenidos mediante la reactivación in vitro del enzima mediante dilución de la muestra en tampón o con la adición de 2-PAM con el fin de detectar una inhibición reversible o irreversible del enzima (Stansley 1993). A partir de los cebos o contenidos gástricos sospechosos de tener organofosforados o carbamatos, se realizó una extracción con diclorometano que, dependiendo del tipo de muestra, se pudo analizar sin más purificación tras evaporar mediante rotavapor o flujo de nitrógeno y Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 5 resuspender en 0,5 ml de acetato de etilo (Brown et al. 1996). En los extractos que requerían una purificación previa, ésta se hizo mediante cromatografía de permeación en gel a través de una fase de Bio-Beads S-X3 (Bio-Rad) con acetato de etilo y ciclohexano (1:1) como fase móvil. Los extractos purificados de cada muestra se analizaron mediante cromatografía de gases acoplada a un espectrómetro de masas con ionización mediante impacto electrónico. Para el análisis de estricnina se realizó una extracción del contenido gástrico o cebo con diclorometano y posterior purificación mediante extracción liquido-líquido (Brown et al. 1996). Los extractos obtenidos de cada muestra se analizaron mediante cromatografía de gases acoplada a un espectrómetro de masas con ionización mediante impacto electrónico. En los casos sospechosos de intoxicación por insecticidas neonicotinoides u otros plaguicidas no volátiles se ha llevado a cabo un análisis del extracto mediante cromatografía de líquidos acoplada a espectrometría de masas (López-Antia et al. 2012) y cromatografía de líquidos acoplada a detector masas-masas. En las muestras sospechosas de contener rodenticidas, se homogeneizó la muestra de hígado con sulfato sódico anhidro, se extrajo con diclorometano y, tras purificación mediante columnas de extracción en fase sólida de alúmina neutra, se analizaron por cromatografía líquida de alta resolución acoplada a espectrómetro de masas (Sánchez-Barbudo et al. 2012). En los casos sospechosos de intoxicación por metales pesados, se realizó una digestión de la muestra liofilizada de cebo o hígado con 4 ml de agua desionizada, 3 ml de ácido nítrico y 1 ml de peróxido de hidrógeno en microondas (Millestone Ethos E) y se analizó por espectroscopía de absorción atómica en cámara de grafito (Reglero et al. 2008, Martínez-Haro et al. 2011) o plasma de acoplamiento inductivo (ICP). Para la Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 6 determinación de etilenglicol se realiza una extracción con acetonitrilo de la muestra de hígado, seguida de una purificación con columnas HLB, posterior derivatización con anhídrido heptafluorobutírico y finalmente se analiza por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (Wurita, et al 2013). Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 7 3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Se ha realizado el análisis completo de los 30 casos enviados en 2021, resultando 20 de ellos positivos (66,7%) correspondientes a 15 animales y 8 cebos o sustancias sospechosas. Se ha ha observado un aumento del porcentaje de casos positivos con respecto del año anterior (Tabla 1, ver Anexo). Tabla 1. Evolución del número de casos sospechosos de intoxicación (N) analizados en la Comunidad de Cataluña entre 2006 y 2021 y resultado de los análisis (N+ y +%: número y % confirmados). Año N N+ %+ 2006 18 8 44,4 2007 20 5 25 2008 22 9 40,9 2009 11 7 63,6 2010 10 2 20 2011 6 3 50 2012 30 20 66,7 2013 1 1 100 2018 15 4 26,7 2019 14 8 57 2020 22 10 44,5 2021 30 20 66,7 Total 199 97 48,7 En el año 2021 han sido detectados 20 casos positivos correspondientes a los tóxicos: aldicarb + carbofurano (N=5), rodenticidas anticoagulantes (N=9), monocrotofós (N=1), metomilo (N=2) y un caso en el que no ha sido posible identificar el tóxico pero que debido a la inhibición de la colinesterasa hace sospechar que se trata de un carbamato (Figura 1). Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 8 Figura 1. Tóxico mayoritario detectado en los casos diagnosticados como positivos desde 2006 hasta 2021. En el año 2021 se observa la presencia de cumarinas en seis casos que puede considerarse intoxicación secundaria al tratarse de un perro, un cárabo, tres milanos y un búho reales, posiblemente al consumir roedores que se han alimentado de rodenticidas anticoagulantes. Debido a la concentración de bromadiolona, brodifacoum y difenacoum que presentaban en el hígado podría tratarse de exposiciones letales. Llama la atención el importante aumento de los casos de cumarinas y carbamatos con respecto al año anterior. Por otro lado, este año se observa un repunte de los casos de organofosforados (Figura 2). Teniendo en cuenta la familia del tóxico mayoritario encontrado en los casos positivos ,se han detectadocon más frecuencia compuestos carbamatos (45%) y cumarinas (45%), seguido de organofosforados (10%). Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 9 Figura 2. Evolución de los casos positivos detectados por familia de tóxicos entre 2006 y 2021. 4. CONCLUSIONES 1. El 66,7% de los 30 casos de 2021, analizados hasta la fecha, han sido positivos en los análisis toxicológicos realizados. 2. Los tóxicos detectados pertenecen a la familia de los carbamatos (45%), cumarinas (45%) y organofosforados (10%). 3. Se ha vuelto a detectar monocrotofós, que no se detectaba desde 2009. Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 10 5. BIBLIOGRAFÍA Brown, P., Charlton, A., Cuthbert, M., Barnett, L., Ross, L., Green, M., Gillies, L., Shaw, K., Fletcher, M., 1996. Identification of pesticide poisoning in wildlife. Journal of Chromatography A, 754: 463-478. Franson, J.C., Pain D.J. 2011. Lead in birds. pp 563-593. En Environmental Contaminants in Biota. Beyer, W.N, Meador, J.P. CRC Press, Boca Raton, FL, EE.EUU. Guitart, R., Torra, M., Cerradelo, S., Puig-Casado, P., Mateo, R., To-Figueras, J., 1994. Pb, Cd, As, and Se concentrations in livers of dead wild birds from the Ebro Delta, Spain. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology 52: 523-529. Guitart, R., Mañosa, S., Guerrero, X., Mateo, R., 1999. Animal poisonings: the 10-year experience of a veterinary analytical toxicology laboratory. Veterinary and Human Toxicology 41: 331–335. Hernández, M., Margalida, M. 2008. Pesticide abuse in Europe: effects on the Cinereous vulture (Aegypius monachus) population in Spain. Ecotoxicology. 17: 264-272. Hernández, M., Margalida, A. 2009. Poison-related mortality effects in the endangered Egyptian vulture (Neophron percnopterus) population in Spain. European Journal of Wildlife Research 55: 415-423. Hill, E.F., Fleming, W.J., 1982. Anticholinesterase poisoning of bird: field monitoring and diagnosis of acute poisoning. Environmental Toxicology and Chemistry 1: 27-38. Lopez-Antia, A., Ortiz-Santaliestra, M. E., Mougeot, F., Mateo, R. (2012) Experimental exposure of red-legged partridges (Alectoris rufa) to seeds coated with imidacloprid, thiram and difenoconazole. Ecotoxicology, DOI 10.1007/s10646-012-1009-x Marek, L.J., Koskinen, W.C. 2007. Multiresidue analysis of seven anticoagulant rodenticides by high-performance liquid chromatography/electrospray mass spectrometry. Journal of Agricultural and Food Chemistry 55: 571-576. Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 11 Margalida, A., Bertrán, J., 1997. Diet and food selection of a pair of Bearded Vultures (Gypaetus barbatus) in the Pyrenees during the breeding season. Ardeola 44: 191-197. Margalida, A., Heredia, R., Razin, M., Hernández, M. 2008. Sources of variation in mortality of the Bearded Vulture. Bird Conservation International 18: 1-10. Margalida, A., Sánchez-Zapata, J.A., Eguía, S., Arroyo, A.B.M., Hernández, F.J., Bautista, J. 2009. Assessing the diet of breeding bearded vultures (Gypaetus barbatus) in mid-20th century in Spain: A comparison to recent data and implications for conservation. European Journal of Wildlife Research 55: 443-447. Maria-Mojica, P., Romero, D., Motas-Guzman, M., Navas, I., Garcia-Fernandez, A.J., 1998. Estudio retrospectivo de casos de envenenamientos de animales de compañía y aves en el sudeste de España. Revista de Toxicología 15: 105- 109. Martínez-Haro, M., Mateo, M., Cardiel, I., Reglero, M. M., Guitart, R., 2006. Intoxicaciones por plaguicidas anticolinesterásicos en fauna cinegética y sus depredadores silvestres. Revista de Toxicología 23: 39-43. Martínez-Haro, M., Mateo, R., Guitart, R., Soler-Rodríguez, F., Pérez-López, M., María-Mojica, P., García-Fernández, A.J., 2008. Relationship of the toxicity of pesticide formulations and their commercial restrictions with the frequency of animal poisonings. Ecotoxicology and Environmental Safety 69: 396-402. Martinez-Haro, M., Green, A.J., Mateo, R. 2011. Effects of Pb exposure on oxidative stress biomarkers and plasma biochemistry in waterbirds in the field. Environmental Research 111: 530-538. Mateo. R., Guitart. R. 2000. Domestic animals and indicators of the use of poison in Spain-International Congress on the Illegal Use of Poison in the Natural Enviroment 107. Motas-Guzmán, M., María-Mojica, P., Romero, D., Martínez-López, E., García- Fernández, A.J. 2003. Intentional poisoning of animals in Southeastern Spain: A review of the veterinary toxicology service from Murcia, Spain. Veterinary and Human Toxicology 45: 47-50. Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 12 Reglero, M.M., Monsalve-González, L., Taggart, M.A., Mateo, R., 2008. Transfer of metals to plants and red deer in an old lead mining area in Spain. Science of the Total Environment 406: 287-297. Sánchez-Barbudo, I.S., Camarero, P.R., Mateo, R. 2012. Primary and secondary poisoning by anticoagulant rodenticides of non-target animals in Spain. Science of the Total Environment 420: 280-288. Sánchez-Barbudo, I.S., Camarero, P.R., Mateo, R. Intoxicaciones intencionadas y accidentales de fauna silvestre y doméstica en España: diferencias entre Comunidades Autónomas. Revista de Toxicología (en prensa). Sarabia. J., Sánchez-Barbudo. I., Siqueira. W., Mateo. R., Rollán. E., Pizarro. M., 2008. 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Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 13 Agradecimientos: Queremos agradecer al Área de Conservación de Flora y Fauna de la Dirección General de Políticas Ambientales y Medio Natural y al personal de los Centros de Recuperación de Fauna salvaje de Vallcalent y Torreferrussa de la Comunidad de Cataluña toda su colaboración para llevar a cabo estos estudios. Intoxicaciones en fauna silvestre de Aragón en el año 2011 14 ANEXO Tabla 1. Casos con sospecha de intoxicación en fauna silvestre de Cataluña en 2021 analizados en el IREC. Caso IREC Ref Origen Especie Diagnostico Resultado T002-21 TF/2020/6297 Cebo Positivo Fosmet y metaldehído T003-21 TF/2020/12393 Perro Positivo Brodifacoum y bromadiolona T004-21 Varios Varios Investigación Investigación T005-21 VL20/3574 Buitre negro Positivo Carbamato T010-21 VL/21/115 Buitre negro Positivo Monocrotofós T011-21 TF/2021/763 Cárabo Positivo Bromadiolona T012-21 TF/2021/93 y TF/2021/158 Azor y cebo Positivo Metomilo T014-21 VL21/161 Quebrantahuesos Negativo Plomo (nivel basal) T042-21 TF/2020/12191 Paloma Positivo Metomilo T043-21 TF/2020/11310 (Molló 1) Búho real Negativo Negativo T052-21 Polvo azul Negativo Negativo T066-21 VL/21/325 Milano real Positivo Brodifacoum y bromadiolona T067-21 VL/21/294 Milano real Positivo Brodifacoum y bromadiolona T068-21 VL/21/295 Milano real Positivo Brodifacoum y bromadiolona T069-21 VL/21/334 Conejo Positivo Brodifacoum T070-21 14162 Pastilla azul ovaladaPositivo Brodifacoum T071-21 11717 Pastilla azul ovalada Positivo Brodifacoum T091-21 TF/2021/1174 Búho real Negativo Brodifacoum T092-21 TF/2021/2147 (Molló 2) Búho real Positivo Brodifacoum y difenacoum T093-21 TF/2021/1213 Paloma Positivo Metomilo T134-21 TF/2021/4504 Perro Negativo Negativo T155-21 TF/2021/8968 Ratonero Positivo Aldicarb y carbofurano T156-21 TF/2021/8969 Azor Positivo Aldicarb y carbofurano T157-21 TF/2021/8995 Aguilucho lagunero Positivo Aldicarb y carbofurano T158-21 TF/2021/8972 Aguilucho lagunero Positivo Aldicarb y carbofurano T159-21 A01-1098-21 Cebo Positivo Aldicarb y carbofurano T160-21 IA21/666 Quebrantahuesos Negativo Plomo (nivel basal) T196-21 VL21/4260 Buitre negro Negativo Negativo T197-21 VL21/4118 Quebrantahuesos Negativo Plomo (nivel basal) T198-21 VL21/4261 Buitre leonado Negativo Plomo (nivel basal) T215-21 TF/21/12642 Gorrión Negativo Negativo
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