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1 CATEGORIZACIÓN DE LAS RESPUESTAS AL ESTRÉS EN OSOS POLARES CAUTIVOS (Ursus maritimus) BASADA EN LA RELACIÓN ENTRE PÉRDIDA DE PELO, COMPORTAMIENTO ESTEREOTÍPICO Y NIVELES DE CORTISOL MARIA CAROLINA SUÁREZ TRIANA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS CARRERA DE BIOLOGÍA Bogota, Colombia Noviembre 2005 2 CATEGORIZACIÓN DE LAS RESPUESTAS AL ESTRÉS EN OSOS POLARES CAUTIVOS (Ursus maritimus) BASADA EN LA RELACIÓN ENTRE PÉRDIDA DE PELO, COMPORTAMIENTO ESTEREOTÍPICO Y NIVELES DE CORTISOL MARIA CAROLINA SUÁREZ TRIANA TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial para optar al título de BIÓLOGA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS CARRERA DE BIOLOGÍA Bogotá, Colombia Noviembre 2005 3 NOTA DE ADVERTENCIA Articulo 23 de la Resolución N 13 de Julio de 1946 “La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velará porque no se publique nada contrario al dogma y a la moral católica y porque las tesis no contengan ataques personales contra persona alguna, antes bien se vean en ellas el anhelo de buscar la Verdad y la Justicia”. 4 CATEGORIZACIÓN DE LAS RESPUESTAS AL ESTRÉS EN OSOS POLARES CAUTIVOS (Ursus maritimus) BASADA EN LA RELACIÓN ENTRE PÉRDIDA DE PELO, COMPORTAMIENTO ESTEREOTÍPICO Y NIVELES DE CORTISOL MARIA CAROLINA SUÁREZ TRIANA APROBADO _____________________ ______________________ Manuel Ruiz García PhD. Enrique Zerda Jurado Jurado 5 CATEGORIZACIÓN DE LAS RESPUESTAS AL ESTRÉS EN OSOS POLARES CAUTIVOS (Ursus maritimus) BASADA EN LA RELACIÓN ENTRE PÉRDIDA DE PELO, COMPORTAMIENTO ESTEREOTÍPICO Y NIVELES DE CORTISOL MARIA CAROLINA SUÁREZ TRIANA APROBADO ______________________ _______________________ Ángela Umaña. M. Phil Cecilia Espíndola Decana Académica Directora de Carrera 6 A mis padres Ma. Cristina y José Domingo A mi querido Chris Y a Dios. 7 AGRADECIMIENTOS Agradezco inmensamente al equipo de Conservación e Investigación del Zoológico de Oregon por haberme dado la oportunidad de realizar este trabajo, por cuidar tanto de mi cuando estuve tan lejos de casa y de paso hacer uno de mis grandes sueños realidad, gracias Dr. Blair Csuti, Dr. David Shepherdson por su apoyo incondicional, Karen Lewis quien inclusive abrió las puertas de su hogar para mi. A Jairo Pérez –Torres por guiar mi camino como investigadora desde el 2002 y porque más que un docente es un amigo de verdad. A Polar Bear International por la confianza que nos dieron al patrocinar este trabajo. A mi familia porque sin ellos hubiese sido imposible, a mis amiguillas Anghie, Cata, Pibe y Lorena por su interminable soporte y paciencia toda la carrera. A mi querido Chris quien ha creído en mí desde el principio y cuyo amor me sostuvo en todo tiempo. Y a Dios quien desde hacia mucho me lo tenia todo planeado. 8 TABLA DE CONTENIDOS AGRADECIMIENTOS LISTA DE TABLAS LISTA DE FIGURAS RESUMEN………………………………………………………………………………..….1 ABSTRACT…………………………………………………………………………………..3 1. INTRODUCCIÓN …………………………………………………………………...4 2. MARCO TEÓRICO Y REVISIÓN DE LITERATURA ………………………..…5 2.1 Características de la especie…………………………………………………..….5 2.2 El estrés……………………………………………………………………………...7 2.3 El cortisol…………………………………………………………………………….9 2.4 La pérdida de pelo………………………………………………………………...10 2.5 Comportamiento estereotípicos……………………………………………….…11 2.6 El enriquecimiento ambiental…………………………………………………….13 3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN……………………...15 3.1 Formulación del problema………………..…………………….………………..15 3.2 Pregunta de Investigación………………………………….……………………17 3.3 Justificación de la Investigación…………………………………………………17 3.4 Hipótesis y predicciones…………………………………………………………18 4. OBJETIVOS……………………………………………………………………...…20 4.1 Objetivo General…………………………………………………………………...20 4.2 Objetivos Específicos……………………………………………………………..20 5. MATERIALES Y MÉTODOS……………………………………………………...21 5.1 Diseño de la investigación…………………………………………………….…21 5.1.1 Población de estudio y muestra……………………………………………....21 5.1.2 Variables del estudio…………………………………………………………...23 5.2 Métodos…………………………………………………………………………....24 5.2.1 Población de Estudio…………..………………………………………………24 5.2.2 Recolección de datos…………………………………………………….……24 5.3 Análisis de la información……………………………………………………….33 9 6. ANÁLISIS DE RESULTADOS……………………………………………………..….40 6.1 Cortisol, Pérdida de pelo y Comportamiento estereotípico……………….………40 6.2 Categorización de las respuestas de las variables………………………..………47 6.3 Enriquecimiento ambiental………………………………………………………...…53 6.4 Eventos significativos……………………………………………………………..…..58 7. DISCUSIÓN……………………………………………………………………………..60 7.1 Categorización…………………………………………………………………………61 7.2 Enriquecimiento ambiental…………………………………………………………...67 7.3 Eventos significativos………………………………………………………...……….69 8. CONCLUSIONES……………………………………………………………..………..70 9. RECOMENDACIONES………………………………………………...………………71 10. REFERENCIAS………………………………………………………………………..72 11. ANEXOS………………………………………………………………………….……79 10 ÍNDICE DE TABLAS Tabla N. 1 Descripción de los osos polares participantes en el estudio…………….21 Tabla N. 2 Cuestionarios de registro quincenales para los cuidadores…….…..…..26 Tabla N. 3 Ejemplo de formato de tabulación de parches alopécicos para la cuantificación de la pérdida de pelo………………………………………………..……28 Tabla N. 4 Categorías para enriquecimiento ambiental…………………………..….30 Tabla N. 5 Categorías para eventos significativos……………………………………..33 Tabla N. 6 Atributos que conforman el índice para evaluar el enriquecimiento ambiental de Ursus Maritimus en cautiverio…………………………………………...35 Tabla N. 7 Factores de evaluación para el atributo de exhibición……………………37 Tabla N. 8 Categorías de clasificación cognitiva de objetos utilizados para enriquecimiento ambiental………………………………………………………………..38 Tabla N. 9 Resultados del test de normalidad………………………………………...41 Tabla N. 10 Osos polares con niveles de cortisol alto…………………..……………44 Tabla N. 11 Osos clasificados con niveles de cortisol medio y bajo………………..46 Tabla N. 12 Categorías finales de evaluación del enriquecimiento ambiental en los zoológicos del estudio…………….……………………………………………….54 Tabla N. 13 Resultados de los atributos evaluados para enriquecimiento ambiental en los zoológicos………………………………………………….……….….55 Tabla N. 14 Clasificación de los zoológicos con respecto a las respuestas de las variables…………………………………………………………………………….57 Tabla N. 15 Incidencia de eventos significativos sobre niveles altos para las variables del estudio……………………………………………………………………....5911 ÍNDICE DE FIGURAS Figura N. 1 Ubicación de los diferentes zoológicos participantes en el estudio……24 Figura N. 2. Histograma para pérdida de pelo………………………………………....41 Figura N. 3. Histograma para los comportamientos estereotípicos……………...…..42 Figura N.4. Histograma para el cortisol…………………………………………...…….42 Figura N 5. Tendencia de agrupación de los datos……………………………..……..47 Figura N.6 Dendrograma de clasificación de las respuestas altas a las variables....................................................................................................................48 Figura N. 7. Ejemplo de incidencia de eventos significativos sobre los niveles altos de las variables del estudio………………………………………………………...60 Figura N. 8. Niveles de cortisol para 4 osos que no exhiben estereotipos………….62 Figura N. 9. Niveles de cortisol para 4 osos que exhiben estereotipos……………..65 Figura N. 10. Valores máximos para osos con estereotipos y relación con los niveles de cortisol………………………………………………………………………….66 12 RESUMEN Asegurar el bienestar de los animales expuestos al cautiverio es un objetivo primordial de los zoológicos, sin embargo animales de gran tamaño en especial carnívoros como los osos polares ( Ursus maritimus), exhiben patrones que han sido usualmente ligados a un bienestar deficiente, entre estos: la pérdida de pelo, los comportamientos estereotípicos y niveles altos de cortisol, sin que la relación entre estas variables este claramente esclarecida y su valor como indicadores de estrés haya sido apropiadamente evaluada. En este estudio se categorizaron las respuestas al estrés de 57 osos polares de 22 zoológicos de Estados Unidos y Canadá para tres diferentes posibles indicadores: la pérdida de pelo, los comportamientos estereotípicos y las medidas estandarizadas de corticoides fecales. Se encontró una relación valida entre las tres variables. Se halló una correlación positiva del 11.4% entre la pérdida de pelo y el cortisol, y una relación entre los valores de cortisol y el comportamiento estereotípico que permitió describir 7 categorías de respuestas al estrés dependientes de la variación individual de los individuos con respecto a la relación de estas tres variables. Dichas categorías permitieron una evaluación de la eficacia del enriquecimiento ambiental sobre las respuestas de los osos donde predominó la importancia de complejas exhibiciones de gran tamaño y con gran cantidad de elementos que proveen y favorecen el desarrollo cognitivo de los animales. Se observó además un alto valor de incidencia de eventos significativos sobre altos niveles de exhibición de comportamiento estereotípico. Por tanto se pudo inferir que la pérdida de pelo es un buen indicador de estrés frente a las medidas control del cortisol, aunque este debe ser acompañado de 13 medidas complementarias, que los estereotipos dependen de la variación individual de las respuestas y por ello no necesariamente deben ser catalogados como nocivos, y que realizar estudios que integren medidas comportamentales, físicas y fisiológicas permiten determinar que tan comprometido esta el bienestar de animales experimentando estrés en cautiverio. 14 ABSTRACT Modern zoos of today have many important objectives, one of which is the welfare of there animals. A common idea pertaining to large captive animals, especially carnivores like polar bears (Ursus maritimus), is the exhibition of patterns usually related with a reduced welfare, these patterns can include: hair loss, stereotypical behavior and high cortisol levels. These variables, even though reliable, have not been clarified, and there values as stress indicators have not been evaluated. In this study, the stress responses for 55 polar bears from 22 zoos in Canada and the United States were categorized by three possible indicators: hair loss, stereotypical behavior and fecal corticoids. It was found that there was a positive correlation of 0.114 between hair loss and cortisol. The stereotypical behavior helped to describe 7 response categories of stress according to the different kinds of individual variation and their response to and their relationship to the 3 stress indicators. Such categories allowed an evaluation of the efficiency of environmental enrichment based on the bears’ responses. Big, complex exhibits and large quantities of resources, which develop the cognitive level of the bears, played a main role in this evaluation. It was also observed that there was a high occurrence of significant events related to high stereotypical behavior levels. It was inferred then that hair loss is a good indicator of stress against the control measures of cortisol, although this needs to be supported by complementary measures. Stereotypes depend on the individual variation of the responses, therefore it can not be taken as novice, and performing studies that involved behavioral, physical and physiological measures allow for the determination of how compromised the welfare of animals experiencing stress in captivity would be. 15 1. INTRODUCCIÓN El bienestar físico y psicológico de los animales cautivos en exhibiciones zoológicas se ha vuelto una prioridad de estudio para estas. La creación de amplios e innovadores espacios recrean de forma precisa el ambiente natural del animal y protocolos que buscan su desarrollo cognitivo le enriquecen de forma integral. Sin embargo una gran cantidad de especies, sobre todo carnívoros de gran tamaño, están exhibiendo ciertos comportamientos y patrones, que hipotéticamente se han asociado a patrones de estrés. El oso polar (Ursus maritimus) no es una excepción en cuanto a la exhibición de estos patrones, continuamente ha mostrado evidencias físicas y comportamentales como la pérdida de pelo y los comportamientos estereotípicos. En la búsqueda por mejorar la calidad de vida en cautiverio para estos animales, se hace necesario clarificar la relación de estos patrones como respuesta al estrés, entender que factores ambientales están motivando dichas exhibiciones y la relación existente entre estos frente a la medida más común para niveles de estrés: el cortisol. Este estudio descriptivo propone el análisis de dichos patrones en 57 osos polares cautivos, encontrados a lo largo de 20 zoológicos de Estados Unidos y Canadá (Aproximadamente el 75% de los zoológicos que cuentan con osos polares dentro de sus exhibiciones). De esta manera, se pretende no solo evaluar si dichos patrones están asociados al estrés a través de su comparación con las medidas estándar del cortisol obtenido a través de corticoides fecales sino también, evaluar la relación entre estos indicadores y las condiciones ambientales a las cuales están expuestos los animales. Dichas condiciones ambientales incluyen el estudio de los eventos significativos que potencialmente podrían ser causales de estrés y el enriquecimiento ambiental aplicado. Esto permitirá no solo proponer posibles causas a dichos patrones, si no también 16 plantear soluciones para minimizarles. De la misma manera encontrar dichas relaciones puede no ser posible a nivel grupal, pero a nivel individual se podrán categorizar las diferentes respuestas al estrés en referencia a estas relaciones. Animales cautivos en exhibiciones zoológicas tienen gran potencial educativo en las comunidades, hacer de su ambiente un estimulo benéfico es un objetivo primordial. 2. MARCO TEÓRICO Y REVISIÓN DE LITERATURA 2.1 CARACTERÍSTICAS DE LA ESPECIE Descripción: Phipps (1774:p. 185) A Voyage Towards North Pole, London: J. Nourse Reino: Animal Phylum: Chordata Clase: Mammalia Orden: Carnívora Familia: UrsidaeSubfamilia: Ursinae Genero: Ursus Especie: U. maritimus (Shields & Kocher 1991, Wilson & Reeder 1992) Los científicos han calculado que Ursus maritimus, “el oso marino” evolucionó hace 200.000 años desde su ancestro el oso grizzly. Los osos polares son carnívoros extremadamente adaptados para vivir en las regiones más nórdicas del mundo, se consideran los predadores terrestres más grandes del mundo y constituyen el final de la cadena alimenticia en el ártico, donde se alimentan de focas principalmente (Ovsyanikov 1996). 17 Las cinco naciones que cuentan con poblaciones silvestres de oso polar incluyen a los Estados Unidos (Alaska), Canadá, Rusia, Groenlandia y Noruega (Stirling 1993). Los machos pesan desde 350 a más de 680 kilogramos. Las hembras son considerablemente más pequeñas, normalmente pesan entre 150 y 250 kilogramos (Matthews 1993, Stirling 1993). No existe un censo adecuado y certero en cuanto al estimado para la población total de osos polares, pero el último modelo aplicado propone una cifra que va desde los 22.000 a los 25.000 osos, de los cuales aproximadamente el 60% viven en Canadá (Ovsyanikov 1996). El primer oso polar cautivo pertenecía a Ptolemy II, rey del antiguo Egipto (285-246 A.C), quien lo mantenía en su zoológico privado en Alejandría. En 1874, abre el primer zoológico de América en Philadelphia, cuya atracción más popular era por primera vez ver osos en vivo. Hoy en día, una gran cantidad de zoológicos alrededor del mundo mantienen osos polares dentro de sus exhibiciones principales. Los osos polares son uno de los animales más populares de los zoológicos aún a pesar de ser bien conocidos por la exhibición de estereotipos (Stirling 1988). Como grupo, los osos son los más frecuentemente asociados con comportamientos estereotípicos y dentro de este grupo, los osos polares han sido documentados como los más susceptibles a ellos (Richardson 1987 y Ames 1993). De hecho un estudio realizado en 1997 por la Asociación Americana de Zoológicos y Acuarios (AZA) revelo que el 43% de los osos polares exhiben al menos cantidades moderadas de estereotipos. Sin embargo un número reducido de estudios con pocas muestras han analizado los patrones de estrés en osos polares cautivos (Keulen-Kromhout 1976, Wechsler 1991, Forthman et al. 1992 y Ames 1993). 18 2.2 EL ESTRÉS Investigar patrones de estrés nos lleva inicialmente a entender el concepto mismo de estrés. No existe una definición clara de estrés, sin embargo hay dos importantes acercamientos al término provistos por Moberg (2000): "la respuesta biológica encontrada cuando un individuo percibe una amenaza en su homeostasis siendo esta amenaza tanto física como psicológica” y Cohen (1998): “Cuando las demandas ambientales exceden la capacidad adaptativa de un organismo, se dan como resultado cambios fisiológicos y biológicos que pueden poner a una persona o animal en riesgo de enfermedad”. Los factores que causan el estrés pueden ser de dos tipos: exógenos y endógenos. Los exógenos involucran aspectos ambientales, psicológicos y sociales, y los endógenos incluyen la fisiología del animal. Estos inducen una respuesta general o local para proteger o adaptar al organismo frente a dichos factores; y estas respuestas pueden ser físicas y comportamentales (Kimyai-Asadi 2001). El estrés causa cambios fisiológicos que preparan al organismo para enfrentar al agente estresante. Trabajan en conjunto el hipotálamo, la glándula pituitaria, la glándula adrenal y los riñones. Cuando se percibe un evento estresante la glándula pituitaria libera ACTH, las glándulas adrenales producen y liberan entonces glucocorticoides “hormonas del estrés” las cuales movilizan recursos energéticos al promover el rompimiento metabólico de proteínas (Welch 1992). El estrés es entonces una respuesta normal y adaptativa a los cambios y retos del ambiente, de esta manera el estrés no puede ser necesariamente catalogado como “malo” para los animales. Sin embargo, las consecuencias de un estrés continuo e incontrolado si pueden ser muy nocivas (Chrousos 1998). 19 Estudios previos han mostrado que las diferencias individuales en las respuestas al estrés en animales son causadas por: tipo de crianza, tiempo en cautiverio, edad, sexo, especie y genética (Welch 1992). Así mismo se ha sugerido que la modificación repentina de atributos cotidianos en las exhibiciones, eventos como construcciones o reparaciones, cambios en el personal al cual están acostumbrados los animales y eventos fisiológicos como enfermedad o ciclos hormonales pueden ser agentes potenciales de estrés para animales en cautiverio, estos eventos se denominaron eventos significativos dentro de este estudio (Shepherdson 2004). De esta manera, analizar las medidas fisiológicas de respuesta al estrés y las diferencias individuales en patrones de comportamiento en animales cautivos, es una medida del bienestar de los mismos y es la clave necesaria para entender cómo hacer de su ambiente un estimulo benéfico. Adicionalmente estos estudios facilitan la comparación de los animales bajo una amplia variedad de condiciones ambientales y permite a los investigadores obtener muestras lo suficientemente extensas para análisis estadísticos exitosos (Shepherdson 2004). La importancia de monitorear el estrés en animales cautivos guía directamente a evaluar las responsabilidades de los zoológicos, estas se extienden a todo lo largo de la palabra conservación incluyendo entonces: reproducción, soporte in situ, reintroducciones, educación e investigación (Shepherdson 2004). Es esencial que los animales cautivos tengan asegurado su bienestar y un mínimo de estrés, para maximizar el fitness reproductivo, longevidad y para la conservación de comportamientos naturales (Dollinger 1996). Las evidencias directas que se han observado y analizado del animal experimentando estrés, incluyen las medidas hormonales del cortisol, la pérdida de pelo del tipo alopécico y exhibiciones de comportamientos estereotípicos; integrando entonces indicadores a nivel bioquímico, fisiológico y comportamental del bienestar del animal en cautiverio (Welch 1992). 20 2.3 MEDIDAS DE CORTISOL Condiciones estresantes pueden inducir la liberación de ACTH (hormona adrenocorticotrópica) y posteriormente incrementar la síntesis y secreción de gluococorticoides a través de la glándula adrenal (Máson 1968, Hennesy & Levine 1979 y Jones 1979), los cuales son excretados a través de la saliva, la orina y las heces fecales. Las medidas de corticoides fecales son un método recientemente desarrollado para monitorear la actividad adrenal en especies en estado silvestre y bajo condiciones de cautiverio. Una ventaja es que pueden ser obtenidas de forma no-invasiva (externas al animal) a diferencia de las medidas de cortisol en sangre, las cuales añaden un estresor más al animal en el momento de tomar la muestra. En animales cautivos, esta medida de cortisol en heces se realiza de forma sencilla como una parte de la rutina del cuidado diario de los animales (Shepherdson et al. 2004). Son fáciles de colectar y analizar y proveen una aproximación al estado anímico subjetivo de los animales que se estudian independientemente de las medidas comportamentales. La mayoría de los zoológicos no aprueban el uso de medidas invasivas dentro de las investigaciones y las razones para preferir el uso de medidas no invasivas sobre las invasivas incluyen: • La minimización ética sobre el dolor y la incomodidad. • Los procedimientos asociados con la colección de sangre usualmente incrementan la actividad hormonal y potencialmente podrían modificar las respuestas a los tratamientos. • Las muestras puedenser colectadas con mayor frecuencia. • No se requiere una licencia oficial para el tratamiento. • Personas no especializadas pueden realizar la colección de las muestras por 21 tanto se reduce el personal requerido (Dehnhard M et al. 2001). Es así como las medidas de los corticoides ha permitido establecer relaciones como las mencionadas por Carlsteed (1993) y Wielebnosky (2002) al encontrar que las caminatas repetitivas en leopardos están correlacionadas con altos niveles de cortisol. Jurke (1997) clasifico hembras cheetas en tres categorías de estrés según sus niveles de cortisol (bajo, intermedio y alto) y logró correlacionar estos niveles con problemas en los ciclos reproductivos. Otros estudios han mostrado que encierros enriquecidos ambientalmente ayudan a disminuir los niveles de cortisol y de estrés especialmente si el animal ya estaba estresado (Shepherdson 2004). Un patrón altamente variable de corticoides fecales puede ser una medida de estrés crónico, lo cual ha sido comprobado en rinocerontes y otras especies (Shepherdson 2004). 2.4 LA PÉRDIDA DE PELO Otro de los indicadores mencionados es la pérdida de pelo. Los eventos estresantes han sido incluidos frecuentemente como posibles causales de alopecia areata en humanos (telogen effluvium) (Manolache 2003 y Gupta 1997). La evidencia acumulada explica la ruta fisiológica del estrés causando la pérdida de pelo. Esta sugiere que neurohormonas, neuropéptidos, neurotransmisores y citoquinas liberadas durante la respuesta al estrés pueden influenciar de forma significativa el ciclo del pelo, atacando directamente los folículos pilosos ya que estos representan un punto de recepción importante para los agentes estresantes (Botchkarev V. 2003 y Gupta 1997). Los únicos estudios realizados en pérdida de pelo en especies diferentes a la humana, se realizaron recientemente en ratones (Arck et al. 2003, 2001). Estos 22 mostraron que sonidos de alta frecuencia actuaban como un estresante directo e inducían patrones de pérdida de pelo en los animales al incrementar el número de folículos pilosos que contienen células apoptóticas, el número de clusters macrófagos perifoliculares activados y el número de mástocitos degranulados que dañan los folículos pilosos causando muchas veces una pérdida permanente (Arck et al. 2003). El mayor neuropéptido que ha mostrado estar involucrado en la mediación de las respuestas sistémicas y locales al estrés es la sustancia P (SP) (Chancellor- Freeland, et al. 1995, Zhu et al. 1996, De Felipe, et al. 1998 y Jessop et al. 2000). SP puede también activar las células T, los macrófagos, y los mástocitos, causando grandes efectos modulatorios sobre el crecimiento del pelo en ratones (Stenn et al. 1994; Paus et al. 1994, Dawber 1997 y Mc. Ewen 1997). SP puede tener también efectos inhibitorios sobre el crecimiento del cabello en humanos debido a que el desorden auto inmune de la pérdida de pelo “alopecia areata” esta asociada con anormalidades en el arreglo y contenido de las fibras nerviosas del neuropéptido SP (Ericson et al 1999, Hordinsky et al 1999). Ciertos pacientes con esta enfermedad sufren de un patrón de pérdida de pelo aparentemente inmediata como consecuencia a un evento estresante (Whitlock, F.A 1976, Paus, R in press y García-Hernández et al. 1999). De esta manera el estrés puede inhibir el crecimiento en vivo del pelo, probablemente vía sustancia P-dependiente al activar macrófagos y/o mastocitos a través de una ruta cerebro-eje folicular (Manolache 2003). 2.5 COMPORTAMIENTOS ESTEREOTÍPICOS Un animal que experimenta estrés puede exhibir comportamientos estereotípicos, los cuales se constituyen en exhibiciones repetitivas y patrones de comportamiento invariables sin objetivo o función evidente (Odberg 1978 y Mason 1991) que comúnmente están asociados con problemas de bienestar (Lawrence & Rushen 23 1993 y Appleby 1999). Dichos comportamientos han sido referidos exclusivamente a animales en cautiverio, humanos discapacitados, mentalmente impedidos y pacientes bajo el efecto de drogas estimulantes (Mason 1991). Estos comportamientos anormales ampliamente asociados con aspectos subóptimos del pasado o presente del ambiente que les rodea han sido usados como indicadores de bienestar de animales cautivos (Mason 2001-2004). El comportamiento estereotípico puede indicar un problema de bienestar previo, pero no necesariamente uno actual. La teoría sugiere que los comportamientos estereotípicos tienen varias funciones: incrementar la estimulación en un ambiente aburrido, ser respuesta a la frustración típica del cautiverio, satisfacer la necesidad de los animales por estar activos y responder a necesidades específicas de comportamiento como la caza (Mason 2001). Es necesario ampliar los conocimientos sobre el comportamiento estereotípico en animales cautivos. Algunos autores sugieren que “cualquier” nivel de exhibición de estereotipos es indicador de un bienestar deficiente (Broom & Johnson 1993; EC 1996 y Laidlow 2001). Otros autores postulan que el incremento en la exhibición de estereotipos indica una disminución en los niveles de bienestar (Fox 1984; Dawkins 1990 y Broom & Johnson 1993). Inclusive se afirma que el bienestar es inaceptable si los estereotipos ocurren en más del 5 % de la población (Wiepkema et al 1983) o más del 10% del tiempo de actividad del animal (Broom 1983 y Broom 1991). Sin embargo no es claro cuales de estos postulados son completamente correctos. El tema es de vital importancia ya que se estima que el comportamiento estereotípico es exhibido por 85 millones de animales en zoológicos, laboratorios y granjas y por el 82% de los 325.000 carnívoros cautivos en zoológicos para ser 24 más exactos, por lo cual un gran número de animales estarían entonces experimentando un bienestar deficiente (Mason 2001). De esta manera algunas veces los comportamientos estereotípicos se incrementan en condiciones mejoradas, y en otras los comportamientos estereotípicos parecen una mejor alternativa que la misma ausencia de ellos, esto se ejemplifica con los altos niveles de caminatas estereotipadas en pequeños mustélidos los cuales han sido asociados con niveles reducidos de cortisol (Reviewed EC 2000) y en el caso en que los machos que exhiben mayor cantidad de estereotipos han resultado más atractivos a las hembras (Thom 2002). Por ejemplo en osos polares el comportamiento perturbador, ausencia de oportunidad de cópula en estado cautivo y el estrés social, son considerados la principal causa de los comportamientos estereotípicos, infanticidios y lesiones de piel que presenta esta especie (Hoff 1979 y Kock 1986). Con el fin de disminuir la incidencia de comportamientos estereotípicos, el ambiente del animal puede ser alterado logrando que la realización de los estereotipos sea incómoda y difícil, o inclusive el fenotipo mismo del animal puede ser alterado, como en el caso en el que se logró disminuir con gran éxito los estereotipos de un oso polar cautivo en un zoológico a través de anti-depresivos (Poulsen 1995). Es por ello que los estereotipos están siendo genéticamente discriminados, un ejemplo de ello es que cada vez, con mayor frecuencia en los zoológicos se evita reemplazar o aparear individuos con altos índices de comportamiento estereotípicos (Máson 2004). Es así como estos indicadores bioquímicos, fisiológicos y comportamentales pueden potencialmente ofrecer información sobre el estrés que el animal está experimentando y los posibles causales de este (Máson 2004). 2.6 EL ENRIQUECIMIENTO AMBIENTAL El enriquecimiento ambiental es un principio básico dentro del cuidado de animales cautivos, ya que identifica y provee los estímulos ambientales necesarios para un 25 desarrollo fisiológico y psicológicoóptimo (Dantzer 1986). Este enriquecimiento incrementa el desarrollo cognitivo de los animales al ofrecerles un ambiente lleno de estímulos y novedades. En este sentido modificar una exhibición estática que frena el desarrollo creativo de los animales por un ambiente que les mantiene ocupados, ofreciéndoles labores nuevas, entretención e interacción, se considera el fundamento del enriquecimiento ambiental (Shepherdson 2004). La investigación en el campo del enriquecimiento ambiental esta enfocada a identificar, caracterizar y evaluar la importancia de los diferentes estímulos ambientales, así como el encontrar los medios más efectivos para proveerlos. Igualmente busca establecer los principios y conceptos fundamentales necesarios para guiar este proceso. (Shepherdson 2004). Reducir los estereotipos, es por ejemplo, el objetivo más común de los programas de enriquecimiento ambiental en los zoológicos (Shepherdson 1999 y Young 2003). Los objetivos del enriquecimiento ambiental son: incrementar la exploración, reducir comportamientos anormales, incrementar la diversidad de comportamientos, incrementar la actividad y el ejercicio, incrementar el comportamiento social, incrementar los comportamientos altamente cognitivos. Dentro de los hallazgos importantes con respecto a la ayuda que puede brindar el enriquecimiento ambiental, se puede citar a Van Keulen-Kromhout; 1978, quien encontró que el tamaño del encierro y la topografía tenían efectos en el comportamiento estereotípico de los osos. Roberts 1989 encontró que el tamaño y número de nidos esta correlacionado con el éxito reproductivo en pandas. Un atributo de las exhibiciones como lo es la complejidad confiere competencia comportamental, la opción comportamental confiere control, y el cambio resulta en exploración. 26 Un estudio multi-institucional en gorilas realizado por Miller- Schroeder y Paterson (1989) encontró que el tamaño del encierro, la complejidad y la disponibilidad de privacidad estaba positivamente correlacionada con un buen cuidado parental y éxito reproductivo. Carlstead en 1999 realizó un estudio en zoológicos con 72 rinocerontes negros e identifico tres predictores estadísticamente independientes para el éxito reproductivo de los animales: dominancia de la hembra, área cubierta y ausencia de paredes de concreto alrededor de la exhibición. Su estudio además indicó que un alto grado de exposición abierta al público a lo largo del perímetro de la exhibición podía ser una significante fuente de estrés para algunos individuos. Teniendo en cuenta que el bienestar de animales en cautiverio puede ser evaluado a través de indicadores de estrés como lo sugieren Arck, Selye y Shepherdson; y que evaluar el ambiente facilita la comparación de elementos claves que pueden influir directamente sobre el comportamiento y el estado anímico como lo propone Shepherdson et al, este estudio propone evaluar las relaciones entre posibles indicadores de estrés como lo son: la pérdida de pelo y el comportamiento estereotípico frente a las medidas control del cortisol y evaluar las condiciones ambientales en que se presentan, para poder categorizar a nivel individual las respuestas al estrés que exhiben los osos bajo estas determinadas condiciones ambientales y eventos significativos potencialmente causales de estrés. 3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN 3.1 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Los animales en cautiverio están expuestos a condiciones muy diferentes a su ambiente natural, sin embargo el esfuerzo de las exhibiciones zoológicas por recrear pertinentemente estas condiciones ha favorecido el bienestar de estos animales. Aún así, algunas especies siguen exhibiendo condiciones anormales, 27 tanto físicas como comportamentales que han sido referidas como expresiones de estrés (Wielebnosky 2002). Mamíferos de gran tamaño, y en especial el orden Carnívora han sido ampliamente estudiado en este ámbito, ya que especies como los osos polares de forma constante continúan exhibiendo dichos patrones (Shepherdson 2004). La necesidad de evaluar el estrés al que se encuentran expuestos los animales, cuantificarlo y plantear alternativas eficaces para disminuirle es una prioridad para mejorar la calidad de vida de estos animales. Una medición directa de los niveles de estrés de los animales han sido los niveles hormonales del cortisol, en animales en cautiverio son ampliamente conocidas las técnicas no invasivas para medir el cortisol. Así mismo la pérdida de pelo y el comportamiento estereotípico han sido ampliamente observados en mamíferos cautivos de gran tamaño, estos patrones se han asociado con estrés derivado de la condición propia del cautiverio también y su precisión como indicadores de estrés puede ser establecida a través de su relación con los niveles control del cortisol. Sin embargo dicha relación nunca ha sido esclarecida a través de modelos científicos apropiados. La investigación en patrones de pérdida de pelo en mamíferos, relacionada con estrés en animales cautivos ha sido vagamente abordada, y por mucho tiempo se ha ligado al estrés como una de las causas de pérdida de pelo o alopecia (telogen effluvium) en varias especies incluyendo la humana. Por su parte el comportamiento estereotípico en un principio se considero una muestra de baja calidad de vida en los animales que le exhibían, algunos análisis recientes, ambiguamente han mostrado que en algunas ocasiones los animales utilizan el comportamiento estereotípico como una estrategia de disminución de estrés, por ello su consecuente relación con este también ha sido propuesta. Son muchas las hipótesis que se pueden encontrar en las referencias acerca de estos diferentes indicadores, pero la condición más importante por evaluar inicialmente es si estos en realidad son indicadores de alta precisión diagnóstica 28 cuando de estrés se trata. Preguntas como: ¿están estos interrelacionados?, ¿funcionan de manera indistinta o se afectan entre si?, ¿son en realidad comparables frente a las medidas estándar del cortisol?, ¿son estos afectados por los eventos significativamente estresantes del ambiente y el enriquecimiento ambiental al cual están los animales expuestos? fácilmente surgen cuando se aborda este tema. Estos patrones hasta el momento no han sido esclarecidos de forma apropiada y cuando han sido evaluados a nivel grupal no ha sido posible establecer relaciones, sin embargo el análisis a nivel individual puede encontrar relaciones interesantes que pueden esclarecer estos procesos y ofrecernos alternativas efectivas para mejorar la condición de estrés en animales cautivos. Debido a que el Orden Carnívora y en especial los osos polares han incrementado la exhibición de dichos patrones en cautiverio, esclarecer estas relaciones podría dar una mejor idea sobre sus posibles causas, diferentes categorías de respuestas al estrés y las estrategias efectivas para contrarrestar sus efectos. 3.2 PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN ¿Cuáles son las categorías de respuestas al estrés en osos polares cautivos (Ursus maritimus) a partir de la relación entre pérdida de pelo, comportamiento estereotípico y niveles de cortisol? 3.3 JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN Los osos polares son uno de los animales más populares de los zoológicos y son bien conocidos por la exhibición de estereotipos (Shepherdson 2004). Velar por su bienestar en cautiverio asegura longevidad, taza de crecimiento normal, aumento en la tasa reproductiva, y ayuda a prevenir un bienestar deficiente caracterizado por comportamientos anormales. Debido a ello en el año 2000 en el Zoológico de Oregon se inició una investigación liderada por el Doctor David Shepherdson que busca entender los patrones de estrés y de comportamientos estereotípicos en osos 29 polarescautivos a lo largo de los zoológicos de Norteamérica. Este estudio entonces está enmarcado dentro del estudio del zoológico de Oregon, e incluye como aporte principal, el análisis de la pérdida de pelo como un indicador físico de la experimentación de estrés adicional a los niveles de cortisol y a los estereotipos. El realizar este estudio multi-institucional aportó un mayor tamaño de la muestra, analizó individuos no relacionados y ofreció gran diversidad al evaluar características como: cuidado y manejo animal, tipos de exhibiciones, y temperamento animal. Además permitió entender las bases de las diferencias individuales en las respuestas al estrés a través de un análisis integral que involucra características físicas, fisiológicas y comportamentales, lo cual es crítico para entender como los animales se adaptan y actúan bajo condiciones de cautiverio, sobre todo en cuanto al comportamiento estereotípico y la pérdida de pelo cuyos patrones no han sido esclarecidos. La investigación científica es la base para analizar patrones en animales cautivos y para entender como estos interactúan con el ambiente. La investigación llevada a cabo en los zoológicos contribuye a la conservación de los animales in situ. En los zoológicos es posible estudiar a los animales de cerca, lo cual es un excelente entrenamiento para los investigadores y permite el desarrollo de métodos y técnicas para estudios de campo (Dawkins 2004). Estos son objetivos primordiales para los zoológicos porque no solo aporta alternativas para mejorar la calidad de vida de los animales, sino que mejora la percepción de los visitantes y contribuye al éxito de los programas de conservación in situ. 3.4 HIPÓTESIS Y PREDICCIONES 1. La pérdida de pelo, el comportamiento estereotípico y los niveles de cortisol son medidas relacionadas al estrés en osos polares cautivos (Ursus 30 maritimus) P: La pérdida de pelo, el comportamiento estereotípico y los niveles de cortisol son indicadores de estrés relacionados entre si en osos polares cautivos (Ursus maritimus) 2. La relación entre pérdida de pelo, comportamiento estereotípico y los niveles de cortisol no es la misma en todos los osos. P: No es posible describir la relación entre pérdida de pelo, comportamiento estereotípico y los niveles de cortisol para cada oso. P: La relación entre pérdida de pelo, comportamiento estereotípico y los niveles de cortisol es similar entre ciertos osos. 3. La relación entre pérdida de pelo, comportamiento estereotípico y los niveles de cortisol permite crear categorías significativas. P: niveles altos para cortisol se relacionan con altos niveles de pérdida de pelo y comportamientos estereotípicos. P: niveles bajos para cortisol se relacionan con altos niveles de pérdida de pelo y comportamientos estereotípicos. P: niveles altos para cortisol se relacionan con altos niveles de pérdida de pelo y bajos niveles de comportamiento estereotípico. P: niveles bajos para cortisol, se relacionan con bajos niveles de pérdida de pelo y comportamientos estereotípicos. 31 4. OBJETIVOS 4.1 GENERAL Categorizar respuestas al estrés en osos polares cautivos (Ursus maritimus) basadas en la relación entre pérdida de pelo, comportamiento estereotípico y niveles de cortisol para predecir el efecto de los cambios en las condiciones ambientales sobre su comportamiento. 4.2 ESPECÍFICOS 4.2.1 Establecer si existe una relación entre la pérdida de pelo, el comportamiento estereotípico y las medidas de cortisol. 4.2.2 Establecer la precisión diagnóstica de la pérdida de pelo, el comportamiento estereotípico y los niveles de cortisol para definir categorías de respuestas al estrés en osos polares cautivos (Ursus maritimus) 4.2.3 Crear categorías significativas de respuestas al estrés en osos polares cautivos (Ursus maritimus) basadas en análisis a nivel individual para las tres variables 4.2.4 Identificar el efecto del enriquecimiento ambiental en las respuestas al estrés en osos polares cautivos (Ursus maritimus) 4.2.5 Identificar si hay un efecto entre los eventos significativos y valores altos de respuestas al estrés en osos polares cautivos (Ursus maritimus) 32 5. MATERIALES Y MÉTODOS 5.1 DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN 5.1.1 POBLACIÓN DE ESTUDIO Y MUESTRA La población de estudio fueron 57 osos de 20 zoológicos de Estados Unidos y Canadá, la descripción de los osos se muestra respectivamente en la Tabla N. 1 a continuación: Tabla N. 1 Descripción de los osos polares participantes en el estudio. CÓDIGO NOMBRE SEXO ZOOLÓGICO COD. ZOO. 1 Snow Lilly H Bronx 1 2 Tundra M Bronx 1 3 Arki H Brookfield 2 4 Aussie M Brookfield 2 5 Becky H Buffalo 3 6 Kelly H Buffalo 3 7 Junior M Buffalo 3 8 Lilly H Central Park 4 9 Ida H Central Park 4 10 Gus M Central Park 4 11 Little One M Cleveland 5 12 Herman M Como 6 18 Berlin H Duluth 8 19 Bubba M Duluth 8 20 Sweetheart H Los Angeles 9 21 Aquila M N. Carolina 10 22 Arcturus M N. Carolina 10 33 Continuación Tabla N. 1 23 Tasul H Oregon 11 24 Yugyan H Oregon 11 25 Conrad M Oregon 11 26 Coldilocks H Philadelphia 12 27 Klondike H Philadelphia 12 28 Nanuyaaq H Pt. Defiance 13 29 Nootka H Pt. Defiance 13 30 Blizzard M Pt. Defiance 13 31 Glacier M Pt. Defiance 13 32 Snowflake H San Diego Sea World 14 33 Szenja H San Diego Sea World 14 34 Charlie M San Diego Sea World 14 35 Chinook H San Diego Zoological Park 15 36 Shikari H San Diego Zoological Park 15 37 Buzz M San Diego Zoological Park 15 38 Neil M San Diego Zoological Park 15 39 Andy H San Francisco 16 40 Pika H San Francisco 16 41 Ulu H San Francisco 16 42 Liebchen H Sea World Orlando 17 43 Snow H Sea World Orlando 17 44 Johnny M Sea World Orlando 17 45 Klondike M Sea World Orlando 17 46 Aurora H Seneca Park 18 47 Yukon M Seneca Park 18 48 Hope H St. Louis 19 49 Penny H St. Louis 19 50 Churchill M St. Louis 19 51 Crystal H Toledo 20 34 Continuación Tabla N. 1 52 Alcor M Toledo 20 53 Marty M Toledo 20 54 Mizar M Toledo 20 55 Bisitek H Toronto 21 56 Sanikiluaq H Toronto 21 57 Kunik M Toronto 21 59 Aurora H Cleveland 5 60 Bob M Buffalo 3 70 Nan H Toledo 20 80 Danny M Buffalo 3 H: Hembra M: Macho 5.1.2 VARIABLES DEL ESTUDIO Las variables del estudio fueron la pérdida de pelo, el comportamiento estereotípico y las medidas de corticoides fecales: cortisol, que se consideraron como medidas control dentro de este estudio. 35 5.2 MÉTODOS 5.2.1 POBLACIÓN DE ESTUDIO Figura N. 1 Ubicación de los diferentes zoológicos participantes en el estudio 5.2.2 RECOLECCIÓN DE INFORMACIÓN Durante un período de 12 meses entre los años 2000 y 2002 cada una de las instituciones participantes contribuyó con tres pasos fundamentales para la toma de datos de este estudio: 36 A. GRABACIÓN DE COMPORTAMIENTO: El comportamiento de los osos fue grabado en video cada dos semanas, durante ocho horas (entre las 9:00 a.m. y las 5:00 p.m. aproximadamente), cada 10 minutos, por un período de 60 segundos (10 horas grabadas de comportamiento por cada oso, para un período aproximado de observación de 192 horas) en cada uno de los zoológicos anteriormente mencionados y para cada oso polar, de tal manera que cada zoológico constituye una replica y cada oso una repetición. B. ANÁLISIS DE MUESTRAS: Bimensualmente una inyección de ACTH fue aplicada bajo técnica de dardo a cada oso. Siete días después de aplicada esta inyección se recogieron muestras fecales de cada individuo. Las muestras fueron puestas en bolsas plásticas y congeladas hasta que se realizó su medición. Esto aportó las medidas de los corticoides, más específicamentepara la hormona del “cortisol”. Se colectaron en total 26 muestras para cada oso como mínimo. Estas fueron las medidas control de los niveles de estrés dentro del estudio. C. CUESTIONARIOS DE REGISTRO: El día de colecta de la muestra fecal, el cuidador en turno llenó un cuestionario donde se registraban los ítems que constituyeron el enriquecimiento ambiental proporcionado a los animales y los eventos significativos, de los tres días anteriores a la colecta de la muestra. Para ver una descripción completa de los ítems evaluados en los cuestionarios de registro ver Tabla N. 2 37 Tabla N. 2. Cuestionarios de registro quincenales para los cuidadores Cuestionario de Registros Quincenales Oso Fecha colecta muestra Lista de objetos de enriquecimiento ambiental provistos los últimos 3 días Eventos significativos de los 3 últimos días Cantidad de protocolos en los 3 últimos días 1 2 3 4 Zoológico Cuidador Fecha Notas: • PÉRDIDA DE PELO Para evaluar la pérdida de pelo se seleccionaron de los videos de comportamiento, video clips de 10 a 15 segundos, que mostraban claramente la parte frontal, posterior, derecha e izquierda para cada oso en cada mes de muestreo. Se usó indistintamente uno o ambos registros de video quincenales disponibles para el mes. Con los videoclips se midió la cantidad de pérdida de pelo mediante la Técnica de Valores Sistemática, que se basa en la pérdida de pelo evidente que afecta la superficie de la piel. Aproximadamente 1800 video clips fueron obtenidos usando el programa Broadway Pro 5.0 Video Device Software Program. El tamaño y la severidad de cada parche fue codificada en valores para zonas específicas: zonas menores (hocico, orejas, zarpas), zonas mayores (cabeza, cuello, pecho, 38 espalda, extremidades, glúteos, laterales y vientre) para todas las diferentes vistas siguiendo este patrón de categorías: Tamaño (Basado en las dimensiones de cada oso) Pequeño: Menor parche visible-parche menor al tamaño del hocico. Medio: Tamaño del hocico-parche menor al tamaño de la pata. Grande: Mayor que el tamaño de las patas en una zona. Extra grande: Grandes parches que cubren más de una zona mayor. Severidad Pérdida de pelo evidente. Piel completamente expuesta (piel negra). Los valores de severidad y tamaño para cada parche por mes fueron multiplicados, estos valores obtenidos fueron sumados obteniéndose un acumulado mensual, y finalmente el promedio de los acumulados mensuales conformaron un valor total para cada oso durante el estudio. Un ejemplo de esta tabulación se puede ver en la Tabla N. 3 Los parches alopécicos fueron previamente evaluados dermatológicamente para descartar causas infecciosas en la piel que pudieran estar causando la pérdida de pelo. 39 Tabla N. 3 Ejemplo de formato de tabulación de parches alopécicos para la cuantificación de la pérdida de pelo ZOOLÓGICO OSO Mes-Año Rangos Total Número Tamaño Severidad Ubicación Total Cabeza 1 2 2Lateral izq. 4Bajo 0-20 1 2 2Frente 4 1 1 2Derecha 2 Hocico 3 1 2Dorsal 6Medio 20-40 Cuello 2 1 3 Izquierda 6 Pecho 1 3 2Central 6Alto 40 en adelante Total: 28 • COMPORTAMIENTO ESTEREOTÍPICO Este fue evaluado a partir de las videocintas de comportamiento para cada oso del estudio, a través de la medición directa de la proporción de tiempo en la cual el animal exhibía estereotipos con respecto al 100% del tiempo total de observación. Este valor se calculó para cada día de observación, es decir bimensualmente Dichas proporciones fueron finalmente convertidas a porcentajes. • CORTISOL Las medidas de cortisol obtenidas fueron estandarizadas estadísticamente al ser extraídos de ellas los valores extremos. Posteriormente estos valores se transformaron en función de porcentaje. • ENRIQUECIMIENTO AMBIENTAL 40 El enriquecimiento ambiental fue cuantificado a través de dos métodos complementarios entre si, las categorías de clasificación para ambos métodos están especificadas en la Tabla N. 4. El primer método colectó información a través de los cuestionarios provistos por los cuidadores donde cada ítem de enriquecimiento fue codificado teniendo en cuenta las siguientes reglas: 1. Todos los objetos eran clasificados como pequeños a menos que se especificara lo contrario 2. Si el objeto era nombrado en plural se codificó como 2, si se mencionaban adjetivos como muchos, bastantes, etc., se codificó como 3 3. Para cantidades de comida que entran dentro de la categoría de comida aleatoria, aún a pesar de estar especificada la cifra, se codificó como un solo evento de comida aleatoria 4. Los ítems fueron cuantificados cuantas veces eran reconocidos como eventos independientes dentro de los tres días de conteo. El segundo método fue la evaluación del enriquecimiento ambiental a través de los videos bimensuales de comportamiento, lo que permitió identificar claramente la naturaleza de los objetos, cantidades y tamaños. Se mantuvo vigente la tercera regla del primer método. Los datos obtenidos a través de ambos métodos fueron promediados. Adicionalmente los cuidadores incluían dentro de los cuestionarios el número de veces que los osos recibían protocolos tanto de entrenamiento como de alimentación. Datos correspondientes a las características físicas de la exhibición fueron colectadas al iniciar el estudio para cada zoológico participante estos datos fueron: área total de la exhibición, área de la piscina, volumen de la piscina, área de sustrato duro, área de sustrato suave, vista fuera de la exhibición, vista bajo agua, tipo de agua, temperatura del agua, acceso a nidos, complejidad y número de exhibiciones. 41 Tabla N. 4 Categorías para enriquecimiento ambiental Abrev. Cod. Ítem Descripción del Ítem Bl 2 Pelota Objeto plástico y esférico de cualquier tamaño (incluye pelotas de caucho, pelotas de piscina) fd_ball 3 Pelota con comida Objeto plástico y esférico de cualquier tamaño incluye (pelotas de caucho, pelotas de piscina) con comida Ba 4 Barril Objeto cilíndrico de cualquier material, cerrado en ambos lados fd_barl 5 Barril con comida Objeto cilíndrico de cualquier material, cerrado en ambos lados con comida Ib 6 Bloque de hielo Bloque compacto de hielo de cualquier tamaño Fd_iblo c 7 Bloque de hielo con comida Bloque compacto de hielo de cualquier tamaño con comida (incluye paletas) Ice_pile 8 Cubos de hielo o nieve Montones de cubos de hielo o nieve preparados por los cuidadores Sb 9 Recipiente pequeño Cualquier objeto con un lado abierto cuya capacidad es inferior a 20 litros Fd_smb kt 10 Recipiente pequeño con comida Cualquier objeto con un lado abierto cuya capacidad es inferior a 20 litros y con comida Lb 11 Recipiente Grande Cualquier objeto con un lado abierto cuya capacidad es superior a 20 litros (incluye canastas de leche o gaseosa) Fd_lgbk t 12 Recipiente Grande con comida Cualquier objeto con un lado abierto cuya capacidad es superior a 20 litros (incluye canastas de leche o gaseosa) con comida. Nota: Todos los recipientes u otros contenedores 42 que contengan agua o hielo, se ignora su contenido. Bn 13 Huesos Pedazo(s) de hueso o cartílago Lc 14 Galón Grande Galón plástico con medidas superiores a 3 pies cuadrados incluye balsas, flotadores y plataformas flotantes Continuación Tabla N. 4 Sc 15 Galón Pequeño G a l ó n p l á s t i c o c o n m e d i d a s 43 i n f e r i o r e s a 3 p i e s c u a d r a d o s Rh 16 Cuero másticable P e d a z o s 44 c o m e r c i a l e s d e c u e r of a b r i c a d o s c o m o 45 “ h u e s o s ” p a r a m á s c o t a s Br 17 Vegetación C u a l q u i e r p e d a 46 z o d e v e g e t a c i ó n l o s u f i c i e n t e m e n t e p 47 e q u e ñ a p a r a s e r c a r g a d a p o r u n h u m a n o 48 . ( i n c l u y e r a m á s , n o i n c l u y e g r a n d e s t 49 r o n c o s ) Sp 18 Carrete O b j e t o s p l á s t i c o s e n l a f o r m a 50 d e r e l o j e s d e a r e n a fd_spol 19 Carrete con comida O b j e t o s p l á s t i c o s 51 e n l a f o r m a d e r e l o j e s d e a r e n a c o n c 52 o m i d a Ds 20 Frisbee O b j e t o r e d o n d o y p l a n o d e c u a l q u 53 i e r t a m a ñ o y c u a l q u i e r m a t e r i a l Fh 21 Manguera C u a l q u 54 i e r t i p o d e m a n g u e r a Hg 22 Objeto colgante C u a l q u i e r o b j e t o 55 c o l g a n t e Fd_han g 23 Objeto colgante con comida C u a l q u i e r o b j e t o c o l g a n t e c o n 56 c o m i d a Scatter 24 Alimentación aleatoria C u a l q u i e r t i p o d e c o m i d a n o l i 57 s t a d a p r e v i a m e n t e y q u e e s a r r o j a d a o 58 e s c o n d i d a a l o s a n i m a l e s ( i n c l u y e p e 59 s c a d o ) Lf 25 Peces C u a l q u i e r t i p o d e p e z n a d a n d o e 60 n l a e x h i b i c i ó n Pp 26 Tubos T u b o p l á s t i c o d e c u a l q 61 u i e r t a m a ñ o y f o r m a Fd_pvc p 27 Tubos con comida T u b o p l á s t i c o d e c 62 u a l q u i e r t a m a ñ o y f o r m a c o n c o m i d a Cb 28 Cartón P e d 63 a z o d e c a r t ó n d e c u a l q u i e r t a m a ñ o o f 64 o r m a ( i n c l u y e c a j a s ) Fd_cbr d 29 Cartón con comida P e d a z o d e c a r t ó n 65 d e c u a l q u i e r t a m a ñ o o f o r m a ( i n c l u y e 66 c a j a s ) c o n c o m i d a Bo 30 Botas de caucho C u a l q u i e r t i p o d e b o 67 t a s d e c a u c h o Fd_boo t 31 Botas de caucho con comida C u a l q u i e r t i p o d e b o t a s 68 d e c a u c h o c o n c o m i d a Ti 32 Llanta C u a l q u i e r t i p o d e 69 l l a n t a Continuación Tabla N. 4 fd_tire 33 Llanta con comida C u a l q u i e r t i p o d e l l a n t a s c o n 70 c o m i d a Scent 34 Esencias C o n d i m e n t o s , p e r f u m e s , e s e n c i a 71 s , m a t e r i a l e s p r o c e d e n t e s d e o t r o s z o 72 o l ó g i c o s Burlap 35 Tela C u a l q u i e r t i p o d e o b j e t o f a b r 73 i c a d o c o n t e l a ( i n c l u y e r o p a y t o a l l a 74 s ) fd_brlp 36 Tela con comida C u a l q u i e r t i p o d e o b j e t o f a b r i c a d o 75 c o n t e l a ( i n c l u y e r o p a y t o a l l a s ) c o n 76 c o m i d a Mscpla st 37 Objeto plástico C u a l q u i e r o t r o o b j e t o p l á s t i c o 77 n o d e s c r i t o p r e v i a m e n t e Fd_msc pl 38 Objeto plástico con comida C u a l q u i e r o t r 78 o o b j e t o p l á s t i c o n o d e s c r i t o p r e v i a m 79 e n t e c o n c o m i d a Un 39 Desconocido E l o s o i n t e r a c t ú a c o n 80 u n o b j e t o n o d e t e r m i n a d o fd_unk 40 Desconocido con comida E l o s o i n t e r a 81 c t ú a c o n u n o b j e t o n o d e t e r m i n a d o c o n 82 c o m i d a other_e 41 Otro O t r o n o d e s c r i t o a n t e r i o r m e n t e 83 Fd_oth _e 42 Otro con comida O t r o n o d e s c r i t o a n t e r i o r m e n t e c o n c o 84 m i d a • EVENTOS SIGNIFICATIVOS Los eventos significativos fueron codificados a partir los cuestionarios de registro provistos por los cuidadores siguiendo la clasificación de la Tabla N. 5; en este caso la codificación fue de tipo binomial según la presencia o ausencia del ítem dentro de los tres días anteriores a la colecta fecal. Tabla N. 5 Categorías para eventos significativos Cod. Ítem Descripción 43 Agresión Cualquier tipo de agresión 44 Comportamiento de apareo Contacto físico, cópula 45 Eventos Eventos no usuales en el zoológico 46 Construcción Reparación 47 Veterinario Enfermedad, baja estado anímico, pérdida de apetito, comportamientos letárgicos, debe involucrar la visita del veterinario. 48 Cambio en exhibición Cambio a la exhibición ejecutado por cuidadores usuales del área, Ej.: drenaje de las piscinas 49 Cambio estructura social Cambio permanentes en la estructura social 85 social 50 Cambio personal Cambios de personal o cuidadores del área o de los turnos que generalmente realizan 51 Otro Otro no mencionado anteriormente potencialmente significativo por su anormalidad 52 Ciclos hormonales Ciclos de calor 53 Rehúso a protocolos El animal no realiza los ejercicios de rutina o no duerme en las exhibiciones internas 55 Cambio rutina Modifica el tiempo que usualmente los animales permanecen en las exhibiciones tanto internas como externas y/o alimentación 5.3 ANÁLISIS DE INFORMACIÓN Para el análisis de la pérdida de pelo, el comportamiento estereotípico y el cortisol, primero se realizó la prueba de distribución normal (Kolmogorov-Smirnov). Como los valores no presentaron normalidad se realizó una correlación de Spearman para determinar si había una relación existente entre dichas variables. Se promediaron los valores quincenales de cada variable por individuo obteniéndose entonces un promedio total mensual (Anexo 5). Dichos promedios fueron estandarizados en función de porcentaje siendo el mayor valor encontrado para cada variable el 100% (Anexo 6). Los 57 osos fueron entonces clasificados en tres rangos Alto, Medio y Bajo (Anexo 7) para cada una de las variables: pérdida de pelo, comportamiento estereotípico y cortisol, con el fin de relacionar las respuestas a dichas variables como lo propone Jurke (1997). 86 Estos rangos permitieron crear categorías descriptivas y artificiales sobre la relación que existe entre la respuesta al estrés de las tres diferentes variables. Dicha categorización fue luego corroborada a través de un análisis de clasificación jerárquico que uso el métododel vecino cercano y el cuadrado euclidiano, aportando entonces el dendograma de la categorización. Se aplicó un índice para evaluar el enriquecimiento ambiental que ofrece cada uno de los zoológicos del estudio, Conceptualmente incluye los atributos que han sido sugeridos como importantes dentro de la evaluación de encierros por Van Keuen & Kromhout 1978, Roberts 1989, Miller-Schroeder & Paterson 1989 y Carlstead 1999. La operacionalización de variables y el tratamiento matemático adopta los criterios del índice SUMIN (Reca et al., 1994 y Pérez-Torres 2002). El objetivo de este índice fue categorizar el enriquecimiento ambiental de todos los zoológicos participantes, para ello se asignó un valor numérico a los diferentes atributos del enriquecimiento ambiental ofrecido a los animales en cada zoológico, de tal manera que estos se jerarquizaron respecto a las mejores condiciones disponibles para los individuos. Para desarrollar el índice se asignaron y se analizan los puntajes (Vi) para cada atributo (Xi) del índice como se muestra a continuación en la Tabla N. 6. Tabla N. 6 Atributos que conforman el índice para evaluar el enriquecimiento ambiental de Ursus Maritimus en cautiverio Vi Atributo (Xi) V1=0 V2=0.25 V3=0.5 V4=0.75 V5=1 Exhibición Muy eficiente Eficiente Normal Simple Deficiente Recursos 0-20% 20-40% 40-60% 60-80% 80-100% Protocolos de 0-20% 20-40% 40-60% 60-80% 80-100% 87 entrenamiento Cohabitación Muy Favorable No favorable Cada uno de los 4 atributos (Xi) del índice tiene el mismo peso, por tanto su valor de ponderación (Aj)= 1/Vp, siendo (Vp) la cantidad de atributos para (Xi). El valor del índice se obtuvo mediante la siguiente ecuación: At=Σ Vi*Aj (1) Aj= 1/Vp (2) Siendo Vp= Cantidad de atributos (Xi) De esta manera el valor At+1 representa las condiciones ideales de enriquecimiento ambiental de los zoológicos para Ursus maritimus y el valor At=0 representa un enriquecimiento pésimo para esta especie. Al valor At obtenido para cada encierro se le asignó una valoración jerárquica (pésimo, malo, subóptimo, óptimo) de la siguiente forma: 0.00 - 0.25 = Pésimo 0.26 - 0.50 = Malo 0.51 - 0.80 = Subóptimo 0.81 - 1.00 = Óptimo Los atributos se evaluaron de la siguiente forma: 88 Para evaluar la exhibición se incluyeron los factores que han sido sugeridos como importantes dentro del diseño óptimo de las exhibiciones, estos están descritos en la Tabla N.7 Para los factores binomiales*, estos podían obtener un valor de 2 si contaban con la característica o un 0 si no contaban con ella, para los factores numéricos estos fueron estandarizados en función de porcentaje siendo el mayor valor encontrado para cada categoría el 100% . Luego estos porcentajes fueron jerarquizados de la siguiente manera: 0.0% - 33% = 0 34% - 66% = 1 67% - 100% = 2 Estos valores fueron sumados y nuevamente estandarizados en función de porcentaje siendo el mayor valor encontrado el 100%. Estos porcentajes finales son promediados para cada oso obteniéndose un valor final y los valores finales de los osos pertenecientes al mismo zoológico son promediados, obteniéndose un valor total del atributo para cada institución. Estos valores totales son nuevamente estandarizados en función de porcentaje, siendo el valor mayor encontrado el 100%, obteniéndose entonces Vi quien adquiere entonces su categoría y valor en la Tabla N. 6 Tabla N. 7 Factores de evaluación para el atributo de exhibición Factores a evaluar Descripción 0 (no) 1 2 (si) Disponibilidad de nido* Disponibilidad de área aislada para anidar vs. Área no disponible Complejidad* Exhibición uní modular vs. 3 módulos o más Área seca Área seca total 89 Área piscina Área total de las piscinas Exhibición cerrada* Exhibición cubierta vs. Exhibición al aire libre Vista bajo agua* Presencia de vista bajo agua al publico vs. no presencia Agua fresca o salada* Agua fresca vs. agua salada # de exhibiciones # total de exhibiciones disponibles en el zoológico Vista fuera de la exhibición* Visibilidad disponible fuera de la exhibición Temperatura del agua* Agua fresca vs. agua helada (bajo 0) Área total Área total de la exhibición Volumen piscina Volumen total de la piscina Sustrato suave Área de sustrato suave (pasto, arena, caucho) de la exhibición Para evaluar los recursos, estos fueron divididos en tres grupos según el nivel cognitivo que buscan desarrollar en los individuos, siendo 1 un nivel cognitivo simple, 2 un nivel cognitivo medio y 3 un nivel cognitivo complejo, tanto para los recursos obtenidos con los cuestionarios de registro y los obtenidos con las grabaciones de comportamiento. La clasificación de estos recursos se presenta en la Tabla N. 8 Tabla N. 8 Categorías de clasificación cognitiva de objetos utilizados para enriquecimiento ambiental Nivel Cognitivo I=1 Nivel Cognitivo II=2 Nivel Cognitivo III=3 Pelota Pelota con comida Objeto colgante con 90 comida Barril Barril con comida Peces Bloque de hielo Bloque de hielo con comida Cubos de hielo o nieve Recipiente pequeño con comida Recipiente pequeño Recipiente grande con comida Recipiente grande Cuero masticable Huesos Carrete con comida Galón grande Objeto colgante Galón pequeño Tubos con comida Vegetación Cartón con comida Carrete Botas con comida Disco Llanta con comida Manguera Esencias Alimentación aleatoria Tela con comida Tubos Objeto plástico con comida Cartón Desconocido con comida Botas Otro con comida Llanta Tela Continuación Tabla N. 8 Objeto plástico Desconocido Otro Cada recurso recibió entonces el valor correspondiente a su categoría de nivel cognitivo, estos valores fueron sumados por categoría y promediados para los obtenidos por grabaciones de comportamiento y cuestionarios. Estos valores finales para las categorías I, II y III fueron sumados y estandarizados en función de porcentaje, siendo el mayor valor encontrado el 100%. 91 Estos porcentajes finales fueron promediados para cada oso obteniéndose un valor final y los valores finales de los osos pertenecientes al mismo zoológico fueron promediados, obteniéndose un valor total del atributo para cada institución. Los valores totales fueron nuevamente estandarizados en función de porcentaje, siendo el valor mayor encontrado el 100%, obteniéndose entonces Vi que tomó los valores de la Tabla N. 6. Los protocolos de entrenamiento fueron evaluados a través de la información proporcionada en los cuestionarios de registro. Se evaluaron dos categorías de protocolos: los de entrenamiento y los de alimentación. Cada categoría obtenía un valor de 0 si el cuestionario reportaba solo un protocolo diario, y un 1 si reportaba 2 protocolos o más diarios. Estos valores por categoría fueron sumados y se les asignaron porcentajes así: 0 = 0% 1= 50% 2=100% Estos porcentajes Vi fueron entonces ubicados en la Tabla N.6 La cohabitación de cada zoológico fue evaluada de forma binomial así: a menos que la estructura social del grupo presentara algunas de las siguientes características recibió un valor para Vi= 1, de lo contrario recibió un Vi=0 • Una proporción mayor de machos sobre hembras • Osos únicos por exhibición Para realizar el análisis de los eventos significativos proporcionados por los cuestionarios de registro, se graficó para cada oso el comportamiento mensual de 92 las variables, luego de que están hubiesen sido estandarizadas en función de porcentaje siendoel mayor valor encontrado para cada una el 100%. Un ejemplo de estos gráficos es la Figura N. 13. Luego se evalúo si cada evento significativo podía ser relacionado para el respectivo individuo y mes de incidencia con niveles altos de pérdida de pelo, comportamiento estereotípico o cortisol. 6. ANÁLISIS DE RESULTADOS 6.1 CORTISOL, PÉRDIDA DE PELO Y COMPORTAMIENTO ESTEREOTÍPICO Se hizo evidente la experimentación de estrés en los osos polares estudiados a través de los indicadores postulados por el estudio: pérdida de pelo del tipo alopécico y comportamientos estereotípicos terrestres y acuáticos, alternos a las medidas control de los corticoides fecales. Para el total de los 57 osos, 49 exhibieron pérdida de pelo, 52 exhibieron comportamientos estereotípicos y 50 exhibieron niveles de cortisol de moderado a alto. La prueba de normalidad Shapiro- Wilk/ Kolmogorov-Smirnov (Tabla N. 9) y los respectivos histogramas para cada una de las variables (Figuras N. 2-4, Anexos 1- 3) mostró que estas no presentaron una distribución normal. Tabla 9. Resultados del test de normalidad Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk Estadística df Sig. Estadística df Sig. PÉRDIDA DE PELO .290 517 .000 .584 517 .000 ESTEREOTIPOS .234 517 .000 .754 517 .000 CORTISOL .203 517 .000 .579 517 .000 93 HISTOGRAMA PARA PERDIDA DE PELO Perdida_Pelo FR EC U EN C IA -10 20 50 80 110 140 170 0 100 200 300 400 500 Figura 2. Histograma para pérdida de pelo HISTOGRAMA PARA ESTEREOTIPO Estereotipos FR EC U EN C IA -2 8 18 28 38 0 100 200 300 400 Figura 3. Histograma para los comportamientos estereotípicos 94 HISTOGRAMA PARA CORTISOL Cortisol FR EC U EN C IA -300 1700 3700 5700 7700 0 100 200 300 400 Figura 4. Histograma para el cortisol. Cuando se analizaron las relaciones entre las tres variables a través de una correlación de Spearman (Anexo N. 4), se probó la siguiente hipótesis: 0:0 =nCorrelacióH Vs. 0:1 ≠nCorrelacióH Para esta correlación, los valores P por debajo de 0.05 sugirieron una correlación estadísticamente significativa, (diferente a cero) con un nivel de confianza del 95%. De esta manera podemos interpretar a partir de los resultados de la correlación que debido a que las variables pérdida de pelo y cortisol tuvieron valores para P por debajo de 0.05 existe una correlación estadísticamente significativa. 95 Esta relación es directa y se aplica de la siguiente forma: Si el cortisol aumenta en una unidad, la pérdida de pelo aumenta solamente en un 12% de unidades de ésta variable. De otra forma se puede afirmar que la variable comportamiento estereotípico, no se puede relacionar con las variables cortisol y pérdida de pelo estadísticamente dentro de un patrón reconocible. RANGOS ALTO-MEDIO-BAJO Cuando los 57 osos fueron clasificados en los rangos Alto, Medio y Bajo para cada una de las variables pérdida de pelo, comportamiento estereotípico y cortisol, con el fin de relacionar las respuesta a dichas variables como lo propone Jurke (1997) se obtuvieron los siguientes resultados de las tablas N. 10 y 11. Tabla N. 10 Osos polares con niveles de cortisol alto. N. Oso Cortisol Nombre Zoológico Pelo Estereotipos Edad Tiempo en zool. Nacido 47 100 Yukon Seneca M A 11 9 C 8 97.99 Lilly Central Park A B 15 12 C 60 89.63 Bob Buffalo B B 14 13 C 6 71.7 Kelly Buffalo M M 14 14 C 19 66.99 Bubba Duluth A A 12 10 C 18 60.41 Berlin Duluth M A 11 10 C 40 58.46 Pika San Francisco B M 19 19 C 4 55.62 Aussie Brookfield B A 16 14 C 1 54.91 Snow Lilly Bronx A B 16 16 C 7 54.78 Junior Buffalo M A 23 23 C 5 54.53 Becky Buffalo A A 23 22 C 9 53.73 Ida Central Park A B 16 14 C 46 53.47 Aurora Seneca A M 12 9 C 41 53.28 Ulu San Francisco M M 20 16 S 12 48.26 Herman Como A A 23 22 C 48 47.9 Hope St louis A A 16 15 C 50 44.68 Churchill St louis A B 14 10 C 33 44.54 Szenja San Diego SW B B 6 4 C 52 43.8 Alcor Toledo M A 3 2 C 24 43.63 Yugyan Oregon M M 15 15 C 96 A= Alto M= Medio B= Bajo C= Nacido en cautiverio S= Capturado de estado silvestre El 45 % de los osos con niveles de cortisol alto presentaron alternamente niveles de pérdida de pelo altos, y el 40% de los osos con alta pérdida de pelo exhibieron alto nivel de comportamiento estereotípico, así mismo el 45% de los osos con altos estereotipos tuvieron altos niveles de cortisol. Dentro de esta categoría de niveles altos se encontró un 12.5% cuyos niveles para las tres variables fue alto. Estos osos además estaban entre edades de 3 a 23 anos, llevaban en el zoológico del que provienen del 45 al 100% de su tiempo total de vida, y un 95% de ellos nació en cautiverio. Dentro de la categoría media, el 31.6% de los individuos compartía los mismos niveles medios para cortisol y pérdida de pelo, el 42% compartían niveles medios de pérdida de pelo y comportamiento estereotípico y otro 31.6% compartían niveles medios de cortisol y estereotipos. Un 10.5% se encontraba con nivel medio para todas las variables. Para la categoría baja, el 29.4% exhibieron niveles bajos tantos de cortisol como de pérdida de pelo, 52.9% de pérdida de pelo y comportamiento estereotípico, y otro 29.4% de cortisol y estereotipos. Un 11.8% de los individuos de esta categoría exhibieron bajos niveles para las tres variables. 97 Tabla N. 11. Osos clasificados con niveles de cortisol medio y bajo 53 41.79 Marty Toledo M M 32 41.46 Snowflake San Diego SW B B 56 39.17 Sanikiluaq Toronto A M 39 38.78 Andy San Francisco M M 29 35.9 Nootka Pt Defiance B B 28 35.9 Nan Pt Defiance B B 26 35.8 Coldilocks Philadelphia M A 49 34.86 Penny St Louis B M 55 34.19 Bisitek Toronto A A 54 33.01 Mizar Toledo B M 3 32.67 Arki Brookfield B B 51 32.11 Crystal Toledo M A 20 32.09 Sweetheart LA M A 22 31.49 Arcturus N. Carolina M A 2 29.51 Tundra Bronx A B 57 29.5 Kunik Toronto B B 35 29.15 Chinook San Diego ZP B M 10 27.27 Gus Central Park A A 21 27.2 Aquila N. Carolina A A 36 26.93 Shikari San Diego ZP M A 25 26.88 Konrad Oregon M M 27 26.05 Klondike Philadelphia M M 37 25.63 Buzz San Diego ZP A M 30 24.66 Blizzard Pt Defiance A B 31 22.47 Glacier Pt Defiance M B 23 21.93 Tassul Oregon A A 34 20.61 Charlie San Diego SW B B 38 19.4 Neil San Diego ZP M M 59 18.71 Aurora Cleveland M A 11 15.17 Little one Cleveland B A 80 0 Danny Buffalo B B 70 0 Nan Toledo B M 45 0 Klondike Sea World Orlando B M 44 0 Johnny Sea World Orlando A M 43 0 Snow Sea World Orlando A B 42 0 Liebchen Sea World Orlando A M 98 6.2 CATEGORIZACIÓN DE LAS RESPUESTAS DE LAS VARIABLES Al realizar el análisis de clasificación se obtuvieron los siguientes resultados: La grafica de tendencia de los datos (Figura N. 5) mostró que no es evidente una agrupación de los datos que nos permita categorizar patrones, por el contrario todos los datos están asociados en un mismo grupo, sin embargo el dendograma (Figura N. 6) y la clasificación en niveles ya previamente expuesta, permiten separar grupos de osos que comparten respuestas similares con respecto a los patrones de estrés que experimentan y la forma de exteriorizarle. Número de casos completos: 517 Método del cluster: Vecino cercana (Conexión simple) Distancia Métrica: Cuadrado euclidiano Cluster Miembros Porcentaje -------------------------------- 1 517 100.00 -------------------------------- Cluster PÉRDIDA PELO ESTEREOTIPOS CORTISOL ------------------------------------------------ 1 10.7795 5.29691 536.562 ------------------------------------------------ Figura N 5. Tendencia de agrupación de los datos 99 El dendograma