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Escuela De Ciencias Básicas Tecnología E Ingeniería Sede José Clestino Mutis Calle 14 Sur No 14-23 Teléfono 3443700 Ext.454 UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD BEBIDAS FERMENTADAS Ing. Francisco Cabrera Diaz ACREDITADOR Ing. Norman Andres Serrano Bogotà, Febrero 4 de 2012 2 COMITÉ DIRECTIVO Jaime Alberto Leal Afanador Rector Roberto Salazar Ramos Vicerrector Académico Nancy Rodriguez Mateus Gerencia Administrativa Y Financiera Maribel Córdoba Guerrero Secretaria General Leonardo Andres Urrego Cubillos Asesor Oficina de Planeación MÓDULO CURSO BEBIDAS FERMENTADAS VERSION PRELIMINAR © Copyrigth Universidad Nacional Abierta y a Distancia 3 TABLA DE CONTENIDO Pág. INTRODUCCION 13 OBJETIVOS GENERALES 18 UNIDAD I Principios Generales 19 CAPITULO 1. Historia. Agentes causantes de la fermentación alcohólica. Las enzimas en la actividad alcoholizante de las levaduras. LECCION 1 Historia 23 LECCION 2 Agentes causantes de la fermentación alcohólica. Levaduras 24 LECCION 3 Estructura 25 LECCION 4 Especies de levaduras 29 LECCION 5 Las enzimas en la actividad alcoholizante de las levaduras 32 CAPITULO 2 Definición. Condiciones para lograr una fermentación óptima. Calidad de la materia prima 34 LECCION 1 Historia 34 LECCION 2 Fermentaciones que acompañan a la fermentación alcohólica 35 LECCION 3 Definición. Fermentación alcohólica 37 LECCION 4 Condiciones para lograr una fermentación óptima 41 LECCION 5 Calidad de la materia prima 44 CAPITULO 3 Materias primas para la elaboración de vinos. Materias primas para la elaboración de cerveza. Materias primas para la elaboración de aguardientes. Materias primas para la elaboración de bebidas autóctonas. Manejo preliminar de la materia prima 45 LECCION 1 Materias primas para la elaboración de vinos 45 LECCION 2 Materias primas para la elaboración de cerveza 48 LECCION 3 Materias primas para la elaboración de aguardientes 52 LECCION 4 Materias primas para la elaboración de bebidas autóctonas 53 LECCION 5 Manejo preliminar de la materia prima 55 UNIDAD II Vinificación 62 CAPITULO 1 Conceptos generales. Clasificación de vinos. De acuerdo 4 con sus características. De acuerdo con el color. De acuerdo con el contenido de azúcares. LECCION 1 Conceptos generales. Clasificación de vinos. De acuerdo con sus características. De acuerdo con el color. De acuerdo con el contenido de azúcares. 64 LECCION 2 La uva. La piel u hollejo. Las pepitas. La pulpa o mosto. Minerales en el gajo de uvas. 76 LECCION 3 Factores que influyen en el color de los vinos tintos. Manejo preliminar de la uva. Densidad del mosto para la determinación aproximada del grado alcohólico del vino. Determinación de la acidez. 81 LECCION 4 Elaboración del vino. Fabricación y preparación de los recipientes. Operaciones comunes. 100 LECCION 5 Vinificación de tintos. Vinificación de blancos. 111 CAPI TULO 2 Vinificación de rosados y claretes. Autovinificadores. Preparación de productos particulares del mosto. Mostos apagados. Mostos concentrados. Composición química, aspectos físicos y reacciones químicas en el vino. Vigilancia y tratamiento de los vinos. Los trasiegos sucesivos. Rellenos. Clarificación. Filtración. Centrifugación. Pasterización. El frío en enología. 135 LECCION 1 Vinificación de rosados y claretes. Autovinificadores. 135 LECCION 2 Preparación de productos particulares del mosto. Mostos apagados. Mostos concentrados. 132 LECCION 3 Composición química, aspectos físicos y reacciones químicas en el vino. 146 LECCION 4 Vigilancia y tratamiento de los vinos. Los trasiegos sucesivos. Rellenos. Clarificación. Filtración. 152 LECCION 5 Centrifugación. Pasterización. El frío en enología. 156 CAPI TULO 3 Elaboraciones especiales. Mistelas. Vermut. Vinos aquinados. Vinos espumosos. Maduración de vinos. Defectos y enfermedades de los vinos. Vino de manzana. Control de calidad. Análisis de vinos. Caracterización de vinos alterados, fraudulentos o adulterados. 160 LECCION 1 Elaboraciones especiales. Mistelas. Vermut. 160 LECCION 2 Vinos aquinados. Vinos espumosos. 161 LECCION 3 Maduración de vinos. 167 LECCION 4 Defectos y enfermedades de los vinos. 169 LECCION 5 Vino de manzana. Control de calidad. Análisis de vinos. 171 5 Caracterización de vinos alterados, fraudulentos o adulterados. UNIDAD III Productos Fermentados, Destilados y Autóctonos 181 CAPI TULO 1 Productos Fermentados. 186 LECCION 1 Consideraciones generales 186 LECCION 2 Definiciones 187 LECCION 3 Obtención de la malta 188 LECCION 4 La sacarificación 191 LECCION 5 La destilación. Principios. Equipos 193 CAPI TULO 2 Productos Destilados. 196 LECCION 1 Elaboración de aguardientes 196 LECCION 2 Materia prima para la elaboración de aguardiente. Detalle del proceso para la obtención del alcohol a partir de melazas. Riqueza alcohólica. 197 LECCION 3 Clasificación. Tratamientos posteriores a la destilación 202 LECCION 4 Preparación de los anisados. Maduración de los aguardientes. Defectos y alteraciones de los aguardientes. Análisis de los aguardientes 207 LECCION 5 Elaboración de cognac (coñac). Proceso y maduración. Cognac artificial. Análisis de cognac 210 CAPITULO 3 Productos Destilados. Cerveza. Bebidas Autóctonas 218 LECCION 1 Elaboración del brandy 218 LECCION 2 Elaboración del whisky. Proceso de producción. Maduración. Análisis de whisky 224 LECCION 3 Cremas y licores. Materias primas y operaciones corrientes en la elaboración de cremas y licores. Esencias o aceites esenciales en la elaboración de cremas y licores. El caramelo en la coloración de cremas y licores. Algunas cremas y licores más representativos. Análisis de cremas y licores. 231 LECCION 4 La cerveza. Definición consideraciones legales. Proceso de elaboración. 243 LECCION 5 Bebidas alcohólicas autóctonas. La chicha. Masato. Chirrinchi. Guarruz. Majule. Guarapos 278 BIBLIOGRAFIA: 292 6 LISTA DE TABLAS No. NOMBRE Pág Tabla 1 Composición aproximada expresada en porcentajes 47 Tabla 2 Composición media de la cebada en base seca 49 Tabla 3 Requisitos físicos para la malta cervecera 50 Tabla 4 Requisitos químicos para la malta cervecera 50 Tabla 5 Composición del lúpulo 51 Tabla 6 Condiciones de almacenamiento en atmósferas controladas 57 Tabla 7 Composición media del raspón (en porcentaje) 77 Tabla 8 Composición media del grano de uva 77 Tabla 9 Distribución de los fenoles totales en el grano de uva tinto 78 Tabla 10 Composición de las pepitas en el grano de uva 79 Tabla 11 Composición de la pulpa en el grano de uva 80 Tabla 12 Sustancias minerales (mg/g ceniza) en los componentes del grano de uva 81 Tabla 13 Corrección de la densidad del mosto según temperatura 90 Tabla 14 Valores densimétricos de los mostos de uva, contenido probable en azúcar y alcohol que se pueden obtener por fermentación (JAULMES) 90 Tabla 15 Correcciones del índice de refracción en función de la Temperatura sobre la lectura de los refractómetros Ópticos no automáticos 94 Tabla 16 Valores refractométricos de los mostos de uva 94 Tabla 17 Contenidos límites de SO2 (en mg/I) 105 Tabla 18 Valores del porcentaje de SO2 molecular con respecto a la tracción libre en función del pH 122 Tabla 19 Parámetros de calidad para un vino espumoso 164Tabla 20 Solubilidad del CO2 en agua y alcohol a 760 mm de Hg (en litros) 166 Tabla 21 Agentes causantes de anormalidades en los vinos y tratamientos adecuados para evitarlos 169 Tabla 22 Composición media del mosto de manzana 171 Tabla 23 Requisitos para vinos 178 Tabla 24 Contenido de azúcar de un jarabe conociendo su densidad 198 Tabla 25 Equivalencias entre grados Baumé y pesos específicos 199 Tabla 26 Graduaciones alcohólicas con corrección de temperatura (tablas de Gay - Lussac) 203 7 Tabla 27 Cantidad de agua que se debe añadir para reducir graduación alcohólica por hectolitro de aguardiente 205 Tabla 28 Formulaciones para la preparación de la imitación del aguardiente anisado 208 Tabla 29 Requisitos para el aguardiente de caña 210 Tabla 30 Composición media de una cognac legítimo 214 Tabla 31 Esencias o extractos para cognac 216 Tabla 32 Éteres del coñac 217 Tabla 33 Aromas de cognac 218 Tabla 34 Requisitos para el coñac 219 Tabla 35 Composición media de dos clases de whisky recién destilados (g/100 1) 228 Tabla 36 Análisis medios de dos clases de whisky (gibo 1 calculados respecto al volumen inicial) 228 Tabla 37 Pérdidas ocurridas en el almacenamiento de whisky a 25-27°C 230 Tabla 38 Requisitos para el whisky 231 Tabla 39 Materias colorantes sintéticas permitidas en la adición de alimentos 238 Tabla 40 Formulación para la preparación del extracto de la ginebra holandesa 240 Tabla 41 Formulación para la crema de nuez moscada 241 Tabla 42 Formulación para el extracto de Benedictine 241 Tabla 43 Formulaciones para la preparación del Chartreuse 242 Tabla 44 Requisitos para las cremas 243 Tabla 45 Papeles de filtro recomendados en la filtración de mostos para la determinación del color 255 Tabla 46 Composición de una muestra de chicha 281 Tabla 47 Composición de las cenizas de la chicha 282 8 LISTA DE FIGURAS No. TITULO Pag Figura 1 Esquema de una célula. 26 Figura 2 Reproducción por gemación. 28 Figura 3 Reproducción por esporas. 28 Figura 4 Paso de la glucosa o ácido pirúvico por glucólisis con fosforilación. 39 Figura 5 Evolución de la acidez en el grano de uva en función del grado de maduración (de lannini) 48 Figura 6 Estructuras de los componentes básicos de los antocianos 83 Figura 7 Estructura de flavillo (Cianidina) 84 Figura 8 Estructura del malvidin -3-monoglucósido 84 Figura 9 Estructura del malvidin -3-Cp-cumaril-4 glucósido 85 Figura 10 Estructura química de los monómeros de taninos 86 Figura 11 Aireación del mosto por remontado 111 Figura 12 Estrujadora despalilladora centrífuga horizontal 114 Figura 13 Sección de la estrujadora despalilladora de la figura precedente 115 Figura 14 Estrujadora despalilladora centrífuga vertical con alimentación superior 115 Figura 15 Esquema de estrujadora despalilladora centrífuga vertical, con alimentación inferior 116 Figura 16 Despalilladora vertical 117 Figura 17 Despalilladora estrujadora 118 Figura 18 Aspirador centrífugo para transporte de raspones 119 Figura 19 Bomba de paletas flexibles con rotor excéntrico 120 Figura 20 Bomba centrífuga con rotor central desplazado e Impulsión tangencial 121 Figura 21 Equipo de sulfitado 124 Figura 22 Instalación automática para dosificación de anhídrido sulfuroso 125 Figura 23 Esquema de instalación automática para la dosificación en continuo del anhídrido sulfuroso 126 Figura 24 Depósitos para la vinificación en tinto 127 Figura 25 Desvinador de tambor perforado y sinfin 131 Figura 26 Prensa continua rotatoria 133 Figura 27 Autovinificador de extracción por la parte inferior de los orujos escurridos 139 Figura 28 Autovinificador con sombrero sumergido y extracción por bajo de 140 9 los orujos escurridos Figura 29 Autovinificador horizontal giratorio 142 Figura 30 Esquema de concentrador a presión atmosférica sin agua de condensación 145 Figura 31 Esquema de instalación para concentración de mostos, de doble efecto, con condensación de agua 147 Figura 32 Centrífuga con tambor autolimpiante con descarga parcial y total 158 Figura 33 Pasterizadores para vino 159 Figura 34 Equipo para refrigeración de vinos a.c. 161 Figura 35 Planta de malteado 190 Figura 36 Esquema de la operación destilación-rectificación 196 Figura 37 Esquema del plato en una columna 197 Figura 38 Alcohómetros 203 Figura 39 Destilador de cognac 213 Figura 40 Proceso de elaboración de whisky 227 Figura 41 Fábrica de cerveza 142 Figura 42 Secciones de un grano de cebada 145 Figura 43 Grano de cebada modificado con el maltaje 147 Figura 44 Gráfica temperatura-tiempo de las operaciones de cervecería 158 10 LISTA DE SIGLAS Y ABREVIATURAS a.c. antes de cristo atm atmósfera ADN ácido desoxirribonucléico ADP difosfato de adenosina ARN ácido ribonucléico A.S.B.C American Society of Breweer Chemists ATP trifosfato de adenosina cm centímetro cm2 centímetro cuadrado cm3, cc centímetro cúbico Co-E coenzima cP centipoise cS centistokes dm3 decímetro cúbico DPT difosfotiamina G gramo Hl hectolitro H.S.I. Hop Storage lndex (índice de almacenamiento) Ibid. ibidem 11 Icontec Instituto Colombiano de Normas Técnicas Kg kilogramo Kcal kilocaloría l litro m metro mg miligramo mm minuto ml mililitro mm milímetro mm de Hg milímetro de mercurio nm nanomicrón N normalidad Op. clt. obra citada pH potencial de hidrógeno ppm partes por millón Pa presión absoluta PRFV plástico reforzado con fibra de vidrio r.a. reactivo analítico r.p.m. revoluciones por minuto soln. solución v volumen g/cm3 gramo por centímetro cúbico 12 g/dm3 gramo por decímetro cúbico g/Hl gramo por hectolitro gil gramo por litro kg/cm2 kilogramo por centímetro cuadrado kg/Hl kilogramo por hectolitro mg/cm3 miligramo por centímetro cúbico mg/dm3 miligramo por decímetro cúbico mg/Hl miligramo por hectolitro mg/kg miligramo por kilogramo mg/l miligramo por litro p/v peso a volumen v/v volumen a volumen °Bé grado Baumé ºC grado centígrado °L grado Lintner. Para expresar la fuerza diastásica de la malta cervecera ºp grado plato 13 INTRODUCCION Una de las actividades que le abren grandes expectativas al Tecnólogo de Alimentos esta relacionada con la elaboración de las bebidas alcohólicas, ya sea en grande o pequeña escala. En los contextos regionales esta intención puede ser canalizada convenientemente ya que, de acuerdo con los postulados filosóficos de la Institución y frente a las competencias definidas en este modulo de formación se generan oportunidades para la aplicación de los conocimientos adquiridos en la generación de grandes ideas que contribuyan al desarrollo regional. Un aspecto inherente a la actividad del tecnólogo es la permanente preocupación por la calidad del producto, siendo esta una variable determinante de los productos frente a las exigencias de la competitividad en los mercados globalizados. Dado que el destino final del producto elaborado es el de satisfacer las necesidades y deseos del consumidor, se require que el estudiante tenga el dominio del conocimiento en torno a las reglamentaciones y normas vigentes en el territorio nacional para este tipo de actividades. Por ello, en el cuerpo del módulo se hace referencia al Decreto 3192 expedido en noviembre de 1983 para garantizar la inocuidad de las bebidas alcohólicas y su aceptación en los mercados. Para el control y análisis de la calidad, tanto de las materias primas como del producto terminado,se entrega en cada sección las normas reguladoras del Instituto Colombiano de Normas Técnicas, lcontec. A pesar de que cada empresa tiene establecido sus propios parámetros para aceptar o rechazar la materia prima o el producto terminado, sin embargo, es conveniente considerar que debe ser un propósito por parte del estudiante conocer las normas generales que en materia de control de calidad regulan esta actividad. El aparte de mayor interese de este modulo de formación esta asociado al desarrollo de la capacidad creativa e innovadora del estudiante el cual se estimula mediante propuesta relacionadas con la exploración de los recursos naturales autóctonos, para este caso las frutas, como materias primas para la elaboración de las bebidas alcohólicas autóctonas. Son bebidas que se preparan con frutas regionales, con técnicas y tecnologías elementales, pero que pueden convertirse en un campo de actividad empresarial e investigativo de los estudiantes. 14 Esperamos a través de este medio y con los valiosos aportes suministrados por el Ingeniero Juan Agustin Mercado Ditta, a través del texto BEBIDAS FERMENTADAS, editado en 1995 por UNISUR, generar procesos formativos y contribuir al descubrimiento de caminos que conduzcan a la superación y al mejoramiento social de las regiones. Lo anterior se consigue si detrás de cada actividad formativa se coloca el máximo interés y la disciplina necesaria para al apropiación del conocimiento. 15 RESUMEN Como un preámbulo a la descripción de los procesos tecnológicos sobré elaboración de las bebidas fermentadas más comunes, se presenta una reseña de los hechos científicos relacionados con los microorganismos que dinamizaron los avances de la fermentación alcohólica. El cual es manejado teniendo en cuenta los aspectos biológicos en relación con la clase de organismos microscópicos, diseminados por el globo terrestre y posiblemente unidos a las primeras formas de vida, sobre los cuales al hombre le han bastado unos pocos años para tener un pleno conocimiento de su existencia, estructura, actividades y formas de reproducción. Y su aprovechamiento industrial, en beneficio de la sociedad. Se trata de explorar las bases del conocimiento para el estudio de la fermentación alcohólica, siendo el resultado de la actividad metabólica, en condiciones anaerobias, de ciertas especies de levaduras que tienen la capacidad de transformar los azúcares en alcohol y dióxido de carbono. Un factor que influye fuertemente en el proceso fermentativo es el tipo de levadura: por eso se realizan cultivos en el laboratorio, antes de inocularlo al mosto, para obtener cepas de una misma especie que cumplan fielmente su cometido. Se presentan una variedad de la especie Saccharomyces, considerada la verdadera levadura del vino: la Saccharomyces ellipsoideus. Y esa razón de ser se debe a que resiste altas concentraciones de etanol, compuesto que en determinado momento y en la medida que se va produciendo, se convierte en antiséptico de su mismo medio gestor. También se analizan los requerimientos de la fermentación alcohólica, las condiciones especiales, que en su conjunto son: temperatura, pH, concentración del sustrato, antisépticos, presión, N03 y NO2 en el agua. Ahora bien, la levadura para realizar su trabajo requiere de un tipo especial de sustancias llamadas enzimas. De ellas distinguimos dos clases: las que actúan fuera de la célula, las exoenzimas y las que actúan dentro de ella, las endoenzimas. El resultado final de su acción, es la producción de etanol y dióxido de carbono. Este último, en muchos procesos fermentativos, se separa y purifica para volver a inyectarlo en el producto final. Finalmente, se señalaron las condiciones de calidad de la materia prima que se emplea en los distintos procesos y sus manejos preliminares. Estos, están 16 referidos a las condiciones de almacenamiento y ensayos previos para conocer el estado y la calidad de la materia prima que va a proceso. Además se revisa la fundamentación científica y tecnológica de la elaboración del vino y se generan tópicos para la prospectiva tecnológica orientadas al descubrimiento y aplicación de los procedimientos que enriquecen la experiencia del enólogo. A la luz de la normatividad y las leyes que rigen este sector en el territorio nacional. Se analiza el proceso tecnológico de manera global esto es desde las riquezas regionales en la producción de frutales, los requisitos de calidad que deben cumplir esta clase de bebidas así como las anormalidades más frecuentes presentadas en ellas como consecuencia de una falta de control sobre los agentes que las causan. Se hace un análisis del comportamiento bioquímica de la fermentación alcohólica en la vinificación y las variables que deben tenerse en cuenta para lograr la efectividad del proceso. De la misma manera estudiamos los equipos y maquinarias que entran en operación. Se estudian las bebidas fermentadas que tienen como principio básico la obtención de alcohol a través de un procedimiento adicional: la destilación. La elaboración de aguardientes, brandy, whisky, coñac y licores son los temas de los cuales nos ocuparemos con sus correspondientes controles de calidad. Entre ellas se da una diferencia en cuanto a la materia prima utilizada como medio para la obtención de alcohol. Ahora, la operación básica para la obtención de alcohol es la destilación con posterior rectificación del producto como medio para mejorar la calidad y garantizar su optimización. Retornando al tema de la variedad de materias primas utilizadas en la obtención de alcohol podemos acotar que éstas van desde mostos fermentados de uvas y vinos hasta las melazas, pasando por los cereales como trigo, centeno, maíz, arroz y, lógicamente, la cebada. De todas maneras el procedimiento para obtener el alcohol como materia prima es un procedimiento universal y es a él a quien le dedicaremos el suficiente espacio. El whisky se elabora a partir de cereales éstos están constituidos por almidones, de tal suerte que antes de obtener el alcohol es necesario someterlos a una previa operación para convertir ese almidón en azúcares fermentables. Esa operación es la sacarificación. Otra bebida que se obtiene por el mismo procedimiento del 17 whisky es la cerveza. Así pues se tratará la sacarificación y la preparación de la malta. Ahora bien, manteniéndonos fiel a nuestro principio rector de darle a conocer al estudiante las disposiciones legales vigentes en nuestro país, expondremos las reglamentaciones y la normatividad que regulan esta actividad en función de la calidad de vida del consumidor. Se hace un reconocimiento de los tipos de bebidas de menor contenido alcohólico y de mayor consumo popular. Analizando la cerveza, en primera instancia y, posteriormente, las bebidas que se elaboran en las distintas regiones del país con sus propias técnicas de preparación y su legado tecnológico de nuestros antepasados. Para el caso de las bebidas fermentadas autóctonas, se estudia el masato, la chicha, el guarapo, el Chirrinchi y otras bebidas de amplio consumo popular. En relación con el desarrollo de las prácticas en el ámbito del laboratorio, se proponen una serie de actividades estructuradas para lograr la consolidación de proyectos de desarrollo regional, buscando la exploración de oportunidades a partir de la gama de bebidas alcohólicas que se puedan obtener a partir de la disponibilidad de materias primas como frutales con propiedades biológicas, físicas y químicas, que permitan su procesamiento. Se espera que la aplicación de esta estrategia de formación contribuya al desarrollo integral del tecnólogo, potencializando las habilidades, destrezas, conocimientos y actitudes necesarias para la elaboración de estetipo de bebidas. Se trata de conseguir en el estudiante a la explotación de la creatividad, el espíritu empresarial y la capacidad de análisis tecnológico de acuerdo con las condiciones sociológicas y económicas en las diferentes regiones de influencia, logrando así la trascendencia de la formación en la transformación del contexto social y productivo, el desarrollo regional y la realización personal del estudiante. Para el desarrollo del proyecto, se orientan las diferentes actividades en el laboratorio por fases de desarrollo de acuerdo con el orden lógico para la apropiación del conocimiento. La primera actividad esta orientada al análisis de la calidad apropiada de las materias primas en relación con las condiciones biológicas, física y químicas para lograr el desarrollo de procesos de fermentación alcohólica con los niveles de confiabilidad y rendimiento esperado, teniendo en cuenta además, la responsabilidad social derivada del consumo de este tipo de bebidas alcohólicas y la disponibilidad de las materias primas frutales. 18 Las prácticas propuestas están asociadas al interés del estudiante en el desarrollo del proyecto formativo, productivo empresarial y los resultados obtenidos en el avance experimental permiten la construcción del proyecto tecnológico. En esta fase es importante la caracterización de las variables de calidad de la uva y demás frutas desde un enfoque sensorial asociado a la apariencia y su calidad fitosanitaria. Seguidamente se requiere realizar el análisis fisicoquímico de las frutas en relación con la determinación de la densidad y de la acidez Otra materia prima de amplia utilización en la preparación de las bebidas alcohólicas es la melaza, la cual es de fácil consecución en el mercado nacional. En el contexto experimental es importante al caracterización de las variables relacionadas con grado de acidez, concentración de sólidos, determinación de los azúcares reductores y el contenido de dióxido de azufre. De acuerdo con los resultados obtenidos se someten al proceso de fermentación para obtención del alcohol. En esta fase del proyecto se trata de estandarizar a nivel de prototipo la elaboración del vino. Valorando el comportamiento biológico, químico y sensorial de cada una de las reacciones ocurridas al interior de las diferentes fases de producción. Es importante además reconocer las tecnologías, la infraestructura y la necesidad de maquinaria y equipo para el proyecto, esto a escala semi industrial o industrial como este definida en la idea del proyecto. El método de elaboración propuesto a nivel experimental se adapta los recursos disponibles, lo importante es tener en cuenta las condiciones higiénicas para garantizar la calidad microbiológica, El micro proceso se orienta a la obtención de un vino tinto joven. Lo anterior teniendo en cuenta que el estudiante tiene que mostrar unos productos y, practicarles los respectivos análisis en el tiempo definido para el desarrollo del módulo. Finalmente, se maneja la fermentación del mosto partiendo de la inoculación de cepas de levadura teniendo en cuenta las variables físicas y químicas relacionadas con el pH, niveles de oxido-reducción, SO2, presencia del lón férrico. En la preparación de las bebidas alcohólicas se requiere de gran responsabilidad del estudiante, un estricto cumplimento de la normatividad legal vigente. En esta fase de formación el estudiante amplia la gama de productos relacionados con su proyecto y se adapta a los recursos disponibles y a las oportunidades de consecución de de los mismos, para una mayor aplicación tecnológica en el proceso de elaboración. Entre estas oportunidades tenemos aguardiente, aguardiente anisado (imitación), whisky (imitación) y Ginebra holandesa (imitación) 19 En esta fase de evaluación de los productos obtenidos en los procedimientos para la elaboración de bebidas alcohólicas se requiere la aplicación de las técnicas de control de calidad del producto terminado de acuerdo con la disponibilidad tecnológica existente en el medio. En el caso de los análisis que se practican a una muestra de vino tinto son los siguientes: grado alcoholimétrico, acidez total, acidez volátil, pH, contenido de alcohol metílico, azúcares, extracto seco, sulfatos, cloruros, anhídrido sulfuroso, ácido sórbico, hierro, cobre, colorantes artificiales, ésteres, aldehídos, furfural y preservativos valorando así su idoneidad para el consumo humano. Algunas determinaciones para los vinos también se siguen para los aguardientes, por consiguiente, además de los ensayos correspondientes a ésteres, aldehídos y furfural, están las determinaciones de hierro y cobre. 20 OBJETIVOS GENERALES Describir los fundamentos teóricos y metodológicos que permiten la fermentación alcohólica en condiciones óptimas. Identificar la tecnología de elaboración del vino. Analizar la tecnología empleada en la elaboración de bebidas alcohólicas destiladas. Interpretar la tecnología de elaboración de la cerveza. Diferenciar los tipos y la tecnología empleada en la elaboración de bebidas alcohólicas autóctonas. 21 UNIDAD I PRINCIPIOS GENERALES OBJETIVOS ESPECÍFICOS Describir los microorganismos que inciden en la fermentación alcohólica. Identificar las sustancias (enzimas y proteínas) que complementan la actividad celular en la fermentación. Describir el proceso de la fermentación alcohólica según el ciclo de Embden Meyerhof. Indicar las condiciones de la calidad que deben cumplir las materias primas sometidas a elaboración de bebidas alcohólicas. Describir las condiciones de almacenamiento y los procedimientos a que deben ser sometidas las materias primas antes de su utilización. 22 AUTOEVALUACION No. 1 Es importante que trate de contestar las siguientes preguntas para que determine que tanto sabe del tema y que tanto necesita y debe saber. 1. ¿Cúal es el agente microbicida más utilizado en las bebidas alcohólicas, para controlar los microorganismos patógenos de la frutas utilizadas como materia prima para el desarrollo del proceso tecnológico? 2. ¿Cúal es el principal constituyente de las farináceas?. 3. ¿Cúales son los productos de la hidrólisis, de la sacarosa?. 4. ¿Cómo se clasifican los aguardientes por el contenido en azúcares?. 5. ¿Cuál es la proporción de amilosa y amilopectina en unidades de dextrosa para un grano de almidón? 6. ¿Cuál es el compuesto que se forma en el vino por la reacción entre el alcohol y los ácidos? 7. Los microorganismos necesitan ciertas condiciones mínimas para su desarrollo. Investiga los factores intrínsecos que determinan su crecimiento. 8. Investiga la coloración que presenta la amilosa y la amilopectina cuando reaccionan con el lugol. 9. Menciona dos condiciones para obtener un vino blanco. 10. ¿Cuál es el nombre de la sustancia permitida por el Ministerio de la protección social que puede utilizarse como colorante en las bebidas alcohólicas? 11. ¿En que categoría se puede ubicar a las bebidas alcohólicas de acuerdo con la resistencia que ofrecen los líquidos a la deformación producida por los esfuerzos cortantes? 23 12. Cómo se clasifican los microorganismos de acuerdo con el rango de temperaturas empleadas para su desarrollo? ASPECTOS GENERALES Como un preámbulo a la descripción de los procesos tecnológicos sobré elaboración de las bebidas fermentadas más comunes, es necesario brindarle al estudiante una reseña de los hechos científicos relacionados con los microorganismos que dinamizaron los avances de la fermentación alcohólica. El papel protagónico de la fermentaciónalcohólica desde el punto de vista biológico corresponde a una clase de organismos microscópicos, diseminados por el globo terrestre y posiblemente unidos a las primeras formas de vida, sobre los cuales al hombre le han bastado unos pocos años para tener un pleno conocimiento de su existencia, estructura, actividades y formas de reproducción. Y su aprovechamiento industrial, en beneficio de la sociedad. CAPITULO 1. Historia. Agentes causantes de la fermentación alcohólica. Las enzimas en la actividad alcoholizante de las levaduras. LECCION 1 Historia El punto de partida se remonta hacia los años 8.000 a 6.000 a.c. con la aparición de los primeros utensilios de cocina en el próximo oriente y con ellos las técnicas de conservación de alimentos. Entre 7.000 a 5.000 a.c., en la antigua Babilonia, se elaboró la primera cerveza. Hacia el año 3.500 a.c., los asirios elaboraban el vino y en el año 1.000 a.c., los romanos ya conservaban carnes distintas a las de vaca; utilizaban la nieve como elemento conservador de alimentos altamente perecederos. Se cree que durante este período apareció el ahumado, como técnica de conservación, así como la elaboración de vinos y quesos. En 1676 le correspondió a Antonio Van Leeuwenhoek (1632- 1723), en Delft (Holanda), dividir la historia del mundo microbiológico en dos: fue el primero en observar bacterias intentando ver el origen del sabor de la pimienta. A él se debe la construcción y desarrollo del microscopio y la iniciación de la microscopia. 24 De ahí en adelante los avances fueron notables. Poco a poco el hombre iba corriendo el velo que ocultaba a los seres microscópicos. Un resumen de las fechas más importantes que tiene que ver con el campo de la fermentación es el siguiente: Año Autor Evento 1786 O.F. Müller (zoólogo danés), Estudio de las bacterias y describe varios detalles de su estructura. 1795 El gobierno francés Ofrecimiento de 12.000 francos de recompensa por el hallazgo de un método práctico de conservación de alimentos. 1809 Francoise Appert Conservación de carne en frascos de vidrio que mantenía en agua caliente durante períodos de tiempos variables 1810 Appert Patentamiento del proceso de appertización. 1836 Latour Descubrimiento de la existencia de las levaduras 1838 Ehremberg Restablecimiento del estudio de los microorganismos sobre una base sistemática. Utiliza nombres como bacterium y spirillum. Su significado actual no fue el que él le asignó inicialmente. 1854 Louis Pasteur Investigación sobre el vino. 1857 Pasteur Demuestra que el agriado de la leche era producto de una actividad microorgánica. 1866 Pasteur Publica la obra de Estudio del vino. 1867 Martín Publica la analogía entre los procesos de maduración del queso y las fermentaciones alcohólica, láctica y butírica. 1867 - 1868 Pasteur Desarrolla y publica su método de pasteurización. 1882 Krukowitsch Presenta el manifiesto los efectos bactericidas del ozono. 1890 EE.UU. Se Inicia la legislación para regular la exportación de carnes. 1895 S.C. Prescott y W. Underwood Denuncia la alteración del maíz enlatado como consecuencia de su incorrecto tratamiento térmico. 1907 B.T.P. Barker Observación del papel de las bacterias productoras de ácido acético en la producción de sidra. 1912 Richter Invención del término osmofílico para referirse a las levaduras que tienen buen crecimiento en un ambiente de elevada presión osmótica. 1917 P.J. Donk Aislamiento por primera vez el Bacillus stearothermophilus en el maíz tierno. 1983 Colombia. Decreto 3192 de noviembre 21 Reglamentación de la elaboración de bebidas alcohólicas en Colombia. LECCION 2 Agentes causantes de la fermentación alcohólica. Levaduras 25 En la fermentación alcohólica, además de los microorganismos, juegan un papel importante las enzimas, sin éstas no es posible la realización de tan compleja operación. Son, por decirlo así, el complemento de la actividad celular fermentativa. Además de los microorganismos y de las enzimas se requiere que en el medio sobre el cual actúan se den unas condiciones especiales para que el proceso llegue a completarse: pH, potencial de óxido-reducción, temperatura, concentración de los nutrientes en el sustrato, entre otros. Ahora, los microorganismos que ocuparán nuestra atención son las levaduras. Levaduras O fermentos, son organismos unicelulares, agrupadas en la subdivisión de las talofitas, formadas por los hongos ascomicetos, de formas esférica y elipsoidal, se encuentran ampliamente difundidas en la superficie terrestre, especialmente en viñedos, frutales y huertos. Su tamaño puede oscilar entre 1-5 micras de anchura y de 1-10 micras de longitud en las formas ovoidales, con un diámetro de 5 micras en las esféricas. Las células de las levaduras son, en general, de mayor tamaño que las de las bacterias (figura 1). LECCION 3 Estructura Citología La estructura de las levaduras varía según las especies. La mayor parte de la información corresponde a la Saccharomyces cerevislae, aunque se están incorporando los resultados de los estudios sobre otras especies. En la célula distinguimos las siguientes partes: Cápsulas Algunas especies tienen un recubrimiento exterior, la sustancia capsular, compuesta por polisacáridos, incluyendo heteropolisacáridos. Pared celular Cuando las células son jóvenes la pared celular es fina, a medida que la célula envejece la pared celular se engruesa. El espesor de la pared celular es la séptima parte de su diámetro. Los constituyentes son dos polisacáridos: (glucano (unidades de D-glucosa) está en Un 30-40%, y el manan (Unidades de D-manosa) en un 30%. Este último no se encuentra en todas las especies (Schizosaccharomyces, Nadsonia, Rhodotorula). Las proteínas se encuentran 26 en todas las especies aunque en proporciones variables. Lípidos entre 8,5 a 13, 5%. La quitina no se encuentra en todas las especies, siendo su concentración promedio alrededor de un 2%. La glucosina está en pequeñas cantidades. La membrana citoplasmática Las tres capas que la componen tienen un grosor de 8 micras. Desempeña la misma función que en los organismos celulados, la de servir como barrera osmótica. En su composición se incluyen lípidos, proteínas y polisacáridos. Protoplasma Contiene citoplasma en estado semilíquido. En el citoplasma se encuentran numerosas enzimas. FIGURA 1 Esquema de una célula RE: retículo endoplasmatico; F: filamento; G: célula de Golgi; L: gotas de grasa; M- Mt: mitocondrias; N: núcleo; Mn: membrana nuclear; Nn: nucleolo; V: vacuola; Vp: gránulos de polimetafosfato, W: pared celular; Pl: membrana celular; Pi: punto de invaginación de la membrana; Ws: cicatriz de gemación 27 Núcleo Definido por una membrana nuclear semipermeable, funcional en el metabolismo y la reproducción. Durante la división celular permanece intacta y, en la gemación, una parte va a la célula hija y la otra permanece en la célula madre. Aquí se encuentra el ácido nucleico en combinación con una proteína. Mitocondrias Se presentan como organelos rodeados de dos membranas con diámetros entre 0,3 y 1,O micra y longitudes mayores de 3,0 micras. Se componen de lipoproteinas, ARN y ADN (diferente del ADN nuclear) en pequeñas cantidades. Aquí se encuentran las enzimas respiratorias. Vacuolas Ubicadas en el citoplasma. En la fase adulta se componen de metafosfatos, poilfosfatos o lípidos, enzimas hidrolíticas (proteasa, ribobonucleasa y estearasas). Funcionan como depósitos para reserva de energía. Reproducción Se pueden reproducir por gemación, fisión y esporulación. La primera y la tercera son las más frecuentes, siendo la segunda una forma de reproducción de muy pocas especies. En la reproducción por gemación, lamembrana celular de la célula adulta sufre un estrangulamiento, a partir de la cual nace una nueva célula. A través de esta forma de reproducción se pueden conformar cadenas, en ellas cada célula hija antes de separarse produce yemas, o sea, nuevas células (figura 2). 28 En la fisión, la célula, esférica u ovalada, sufre un esponjamiento o alargamiento, el núcleo se divide dando origen a dos células nuevas. Esta forma de reproducción es propia del género Schlzosaccharomyces. FIGURA 2 Reproducción por gemación El mecanismo de reproducción por gemación no garantiza la perpetuidad de las especies. En la reproducción por esporulación, dos células de una misma o de distintas colonias al fusionarse desaparece la membrana que las separa quedando una célula de mayor tamaño. El nuevo núcleo se fracciona en corpúsculos, cada uno de los cuales se rodea d una nueva membrana. Todo el conjunto queda guardado en la antigua membrana formando un saco; de ahí su nombre de asca. Bajo esta forma es como la especie resiste las condiciones adversas (figura 3). FIGURA 3 Reproducción por esporas 29 Las esporas son las que se encuentran en las superficies de los frutos. En el caso de las uvas están adheridas por una sustancia cerosa llamada pruina. Por eso el estrujado constituye una etapa importante por cuanto su objetivo primordial es poner en contacto las esporas con la parte interna del fruto para iniciar el proceso fermentativo. LECCION 4 Especies de levaduras Hemos dicho que las levaduras se encuentran esparcidas por todo el planeta, desde las profundidades de los océanos hasta las capas superiores de la atmósfera. En campo abierto (viñedos, frutales, huertos) se encuentran en forma de esporas en las superficies de los frutos. Este tipo de levadura se conoce con el nombre de levadura silvestre por lo que corresponde a una especie no cultivada. La característica de ella es el tipo superficial de fermentación que produce. En tanto que existe otra especie cultivada, seleccionada que realiza su actividad fermentativa en el fondo de los recipientes, a ella se la distingue de una manera diferente. A las silvestres se les ha asignado el nombre Saccharomyces cerevisae, mientras que a la segunda Saccharomyces carisbergensis. Otros tipos de levaduras que describiremos son la S. elipsoideus, S. pastorianus, S. oviformis, Tórula, Kloeckera, Brettanomyces. Todas presentan un particular interés de acuerdo con el producto que se va a obtener. Por ejemplo, en la producción de la cerveza interesa trabajar con un tipo especial de levadura, la Saccharomyces carisbergensis. Entre más seleccionada sea la levadura garantizará un producto de mejores cualidades. No ocurre lo mismo con la producción de vino y otras bebidas derivadas en donde pueden participar más de una especie de levadura, unas como iniciantes del proceso, otras como finalizadoras del mismo. Las especies de levaduras más investigadas han sido cerevisiae, carisbergensis y elipsoideus; sobre las otras especies se están realizando importantes estudios aún no reportados. Saccharomyces carisbergensis (Saccharomyces uvarum) El método del cultivo puro fue desarrollado por Emil Christían Hansen, de los laboratorios Carlsberg (Dinamarca), con el objeto de buscarle una solución a los problemas presentados en la elaboración de cervezas cuando intervenían células procedentes de cepas diferentes. Hansen demostró que el producto final podía ser de mejores calidades si en su proceso se empleaban células da una misma 30 especie. Así se llegó al descubrimiento de la levadura Saccharomyces carisbergensis como la levadura auténticamente cervecera. Estas levaduras son ascosporógenas el tamaño varía entre 6-10 micras de diámetro. Su forma es ovalada siendo la levadura de fermentación de fondo más ovalada que la de superficie. En la medida que la célula envejece, se forman mayores cantidades de vacuolas en el protoplasma. Su composición química es de un 75% de humedad y 25% materia seca. De ésta 90-95% es materia orgánica distribuida así: Carbohidratos, 45% aproximadamente (hemicelulosa. glicógeno gomas) Materia nitrogenada 50% aproximadamente (90% proteínas 1 0% productos degradación de proteínas como péptidos y aminoácidos) Grasa, 1 .5 - 3.0% (reserva) Vitaminas, 0.5% (Complejo B) Trazas de unas pocas enzimas, pero muy activas. P, K, Mg, Ca, Si, Fe, 5 (trazas), constituye la materia inorgánica. Se nutre de proteínas, glicógeno, gomas, hemicelulosa, etc. a partir de azúcares y de sustancias nitrogenadas. De ese proceso metabólico celular resulta su crecimiento propagación, fermentación con ayuda de las enzimas y desprendimiento de calor como se puede observar en la siguiente reacción: enzimas C6H12O6 2C2H5OH+2CO2+27 kcal/mol De las 27 kcal generadas 3 kcal las utiliza para su crecimiento y 24 kcal las ibera como tal. En el proceso de l fermentación, esto es cuando la célula está trabajando, su fase de crecimiento se restringe. Una forma de diferenciar la levadura de fondo de la de superficie es por medio del test de Bau. Este consiste en la fermentación completa del trisacárido rafinosa en un disacárido (fructosa y melibiasa) gracias a la acción de la enzima melibiasa. Esta enzima aparece en las de fondo, pero no en las de superficie. 31 La reacción es la siguiente: Rafinasa 3(C6H10O5) + 2H2O C6 H12 O6 + C12 H22 O11 Rafinosa Fructosa Melibiosa Saccharomyces pastorianus Células ovaladas, en forma de salchicha. Su actividad fermentativa es de fondo. No es conveniente en la industria cervecera. Es resistente a altas concentraciones de alcohol y anhídrido sulfuroso. Tórulas Levaduras asporógenas, de formas esférica u oval. De distintos colores. Se reproducen por gemación. Su presencia en las cervezas causa turbidez. No son Saccharomyces. Su actividad alcoholizante es escasa. En el proceso de la elaboración del vino son iniciadoras quedando eliminadas luego por la creciente concentración de alcohol y por su sensibilidad al SO2. Están en gran cantidad en los mostos procedentes de uvas, atacadas de podredumbre (Botrytis). Brettanomyces Son asporógenas. Producen acidez. Células ovales, esféricas o alargadas. Se desarrollan lentamente formando cadenas de células. Desprenden olor a extractos de malta. En algunas cervezas europeas se siembran en maduración para obtener condiciones especiales de sabor y aroma por su fermentación tardía. Kloeckera apiculatis Células en forma de limón. Son asporógenas (levaduras falsas); comunes en flores, frutas y suelo. Muy activas al inicio de la fermentación. Poseen poder fermentativo y oxidativo. Suelen ser eliminadas en la medida que la concentración de alcohol aumenta. Son perjudiciales para los vinos, en los que determinan sabores anormales y producen acidez. Saccharomyces elipsoideus. 32 Es la auténtica levadura del vino. De gran tamaño (de 7 a 10 micras). Alto poder alcohógeno y transformativo. Domina todo el proceso de la fermentación hasta cuando es sustituida por la Sachharomyces oviformis, de un mayor poder alcoholizante. Ambas presentan gran resistencia al SO2. LECCION 5 Las enzimas en la actividad alcoholizante de las levaduras La palabra enzima fue tomada del término griego que significa en levadura. En la actividad alcoholizante de las levaduras, estas sustancias juegan un papel especial; tanta es su importancia, que se puede asegurar que las levaduras no realizan su actividad fermentativa sin el concurso de las enzimas. Las condiciones bajo las cuales debe trabajar la enzima afecta de igual manera a la colonia de microorganismos. Esas condiciones que determinan la actividad enzimatica son: concentracionesde sustrato y de la enzima, temperatura y pH. Definición. En su asignatura de Química General tuvo la oportunidad de comprender el término catalizador. En ese momento usted entendió el concepto como sustancias que Intervienen en una reacción sin sufrir alteración. Pues bien, en ese sentido queda especificado acá el término enzima. En esa definición queda establecido que las enzimas son parte integrante de la misma célula. Esta elabora dos clases de enzimas: las exaenzimas, que actúan en la parte externa a la célula (en el sustrato) y que tienen como función principal desdoblar las sustancias en materia asimilable para ellas; y las endoenzimas, que actúan en su interior encargándose de sintetizar el material celular y efectuar reacciones catabólicas, de las cuales se desprende energía empleando parte de ella para su crecimiento. La actividad de las enzimas es muy específica, esto es, cada enzima actúa sobre una sustancia particular logrando su transformación. Las coenzimas son Compuestos orgánicos que ayudan ala actividad de las enzimas. Las enzimas que requieren coenzimas son Inactivas sin ellas. Si la parte Las enzimas son sustancias orgánicas segregadas por los organismos vivos que actúan en los procesos fermentativos sin que sufran alteración. 33 coenzimática es un compuesto inorgánico entonces se llama cofactor. Ejemplos: las amilasas requieren ion cloruro, la carboxilasa requiere co-carboxilasa, etc. Las levaduras para cumplir su cometido segregan un tipo especial de enzimas llamadas diastasas, las principales son: La cimasa, es el conjunto de enzimas y coenzimas que hacen posible la transformación de la glucosa en etanol, CO2 y calorías: C6H12O6 2C2H5OH + 2CO2 + 27 kcal Glucosa Etanol En esta reacción, que aparentemente se ve sencilla, intervienen 51 enzimas y 3 sistemas coenzimáticas. Según el ciclo de Embden - Meyerhof la descomposición de la glucosa se realiza en 14 pasos sucesivos. Otras enzimas integrantes de la cimasa, son: La carboxilasa y su coenzima la co-carboxilasa, responsables de descomponer el ácido pirúvico en acetaldehido y CO2: 0 ║ carboxilasa CH3 –C – COOH CH3 – CHO + CO2 ac. Pirúvico co-carboxilasa acetadehído La deshidrasa, o alcoholasa, que convierte el acetaldehído en etanol al proporcionarle hidrógeno: CH3 – CHO CH3 – CH2 OH Acetaldehído etanol La proteasa que hidroliza los prótidos a aminoácidos. La fosfatasa, que actúa Sobre compuestos fosfóricos La invertasa, que hidroliza la sacarosa a una molécula de glucosa y otra de fructuosa C12H22O11 + H2O C6H12O6 + C6H12O6 Sacarosa glucosa fructuosa 34 Azúcar invertido Los mecanismos de las reacciones enzimáticas no se tienen completamente definidos. En general se pueden representar de la siguiente manera: β (1) Enzima (E) + Sustrato (S) Complejo Enzima - Sustrato (E-S) ∞ k (2) Complejo Enzima – Sustrato (E-S) Producto (P) + Enzima (E) v En la reacción (1): β tiempo de combinación entre E y S para dar ES ∞, velocidad de disociación del complejo para dar E y S En la reacción (2): k velocidad de conversión de ES a P. v , constante de velocidad reversible específica Como toda reacción química, la producción de P se puede ver afectada por la modificación en las condiciones de temperatura concentraciones y pH. Por ejemplo si hay suficiente sustrato entonces se va a favorecer la producción de ES. Si en la reacción (2) se retira P, el equilibrio tiende a restablecerse hacia la derecha con una mayor concentración de E; si ésta se encuentra en exceso puede afectar la reacción (1). CAPITULO 2 La fermentación alcohólica y otras clases de fermentaciones. Definición. Condiciones para lograr una fermentación óptima. Calidad de la materia prima. LECCION 1 Historia El conocimiento sobre la fermentación alcohólica tuvo un desarrollo histórico, a mediados del siglo XIX el hombre no podía explicar satisfactoriamente el proceso deja descomposición de la materia orgánica. Los años transcurrían en discusiones entre los científicos de la época; así, fueron famosas las que sostuvieron Pasteur y Liebig sobre el tema. Precisamente, al primero le correspondió sentar las bases científicas de la fermentación al observar la formación del alcohol amílico en la fermentación láctica. Pasteur anunciaba entonces que las causas de la fermentación eran debidas a la actividad fisiológica de microorganismos vivos. A partir de ese momento, el tema llamó la atención de los estudiosos de la época quienes le encontraron un valor comercial por la gran cantidad de productos 35 derivados de ese proceso. Se puede decir, que con el descubrimiento de los mecanismos de la fermentación se dio una nueva revolución industrial, pues alrededor de ese tema nació una pujante industria: el desarrollo y explotación de productos orgánicos como etanol, ácidos láctico y acético, glicerina, butanol y acetona. Posteriormente tomó impulso la industria de las vitaminas y antibióticos. Desde hace un siglo, el conocimiento que se tiene sobre los microorganismos ha permitido extenderlos hacia la producción de las bebidas alcohólicas, materia de estudio de este texto. De acuerdo con el breve recuento histórico precedente se puede observar que la fermentación alcohólica es sólo un aspecto de esta compleja actividad del mundo microbiológico. En la naturaleza, además de las levaduras, también pueden realizar fermentación las bacterias y los mohos. Cada microorganismo realiza, bajo condiciones adecuadas, una actividad específica y como consecuencia desarrolla un producto particular. De acuerdo con el resultado final y el tipo de microorganismo que lo produzca, la actividad recibe un nombre específico, así conocemos las fermentaciones: acética, butírica, propiónica, láctica, cítrica, etc., además de la alcohólica. Entre las sustancias alimenticias que consumen estos microorganismos, además de los azúcares, están las grasas, proteínas, aminoácidos, ácidos e inclusive alcoholes, como es el caso de la bacteria que toma el alcohol etílico producido por la levadura y lo transforma en ácido bajo condiciones especiales de oxidación. Analicemos, antes de entrar a estudiar la fermentación alcohólica las distintas clases de fermentaciones que pueden acompañarla y los microorganismos que las producen. LECCION 2 Fermentaciones que acompañan a la fermentación alcohólica Fermentación Glicérica La glicerina es el alcohol más sencillo con tres grupos hidroxilo. Tiene múltiples usos e industrialmente se prepara por saponificación de aceites y grasas en la fabricación de jabones. También puede prepararse por síntesis a partir del propileno o propano. Un método alterno es por fermentación. Este está a cargo de la levadura Saccharomyces ellipsoideus (Var. Steimberg). El sustrato contiene azúcar fermentable y cuando es necesario se le añaden sales nutritivas (sulfito de sodio). El proceso se realiza entre 30 - 37°C. Fermentación acetobutílica 36 Este tipo de fermentación es producida por un grupo de bacterias que difieren en cuanto a la cantidad y naturaleza de los productos finales y las condiciones para que se realicen. Una de esas fermentaciones da como productos butanol, acetona, etanol ácidos acético y butírico, dióxido de carbono y gases hidrogenados. Otra, acetona y etanol, y un tercer tipo produce butanol, isopropanol y acetona.Para la producción del primer grupo de disolventes suele estar presente el Clostridium acetobutylilcum, organismos móviles, no patógenos y anaerobios. Es bastante susceptible a la acción de productos antisépticos y germicidas. Puede utilizar las proteínas y peptonas como fuente de nitrógeno. La temperatura Óptima para el trabajo de estos microorganismos oscila entre 37 y 42° C. En la obtención de la acetona y etanol, segundo grupo de disolventes, interviene el Bacillus aceto-ethylicum, organismo anaerobio, móvil y esporógeno. El rango de pH en que trabaja Óptimamente es de 8 a 9 y la temperatura de 40 a 43° C. Y en la fermentación del tercer grupo de disolventes actúa el Clostridium butylicum, anaerobio, esporógeno, posee flagelos; reduce los nitratos a nitritos, licua el almidón; la temperatura óptima para el desarrollo es 37° C. Fermentación acética Este tipo de fermentación corresponde a la actividad de un grupo de bacterias pertenecientes a la familia Pseudomonadaceae. Pueden ser móviles o inmóviles y no forman endosporas. Estas bacterias pueden tomar energía de la oxidación de etanol a ácido acético, o de la de varios azúcares o alcoholes. Los miembros más representativos del género Acetobacter son los siguientes: A. aceti, A acetigenum, A. oxidans, A. Suboxydans, A viscosum, A. turbidans y A.peroxidans. Fermentación láctica El ácido láctico (CH3 - CHOH-COOH) puede existir en tres formas: levógira, dextrógira la forma inactiva. Las bacterias lácticas producen todas estas formas y suele clasificarse en dos grandes grupos: las homofermentativas y las heterofermentativas. Las primeras producen exclusivamente ácido láctico, en tanto que las segundas producen además ácidos volátiles y en abundancia. Entre el primer grupo se ubican: L. delbrueckii L. casei L. leichmannii L. bulgaricus y Strept. lactis. Fermentación cítrica 37 El ácido cítrico (COOH-CH2-C(OH)-COOHCHCOOH) es un producto de la fermentación por mohos. El principal responsable es el Aspergillus niger. Este microorganismo emplea para la elaboración de este ácido muchas sustancias orgánicas (azúcares principalmente). Hasta aquí hacemos referencia de algunos tipos de fermentaciones que suelen acompañar a la alcohólica, pero indudablemente existen multiplicidad de ellas, las cuales no son el objeto principal de estudio en esta obra. Ahora, retornemos nuestro tema principal: la fermentación alcohólica. LECCION 3 Definición. Fermentación alcohólica Antes de definir fermentación alcohólica, analicemos los agentes que intervienen en ella: Sustrato, medio aportante de los nutrientes. Levaduras, microorganismos que realizan la operación Enzimas, sustancias orgánicas que facilitan la operación Etanol y dióxido de carbono , productos resultantes de la operación, además de las calorías producidas. Entonces, podemos decir que la fermentación se comporta como una reacción en la cual hay unos reactantes catalizados por las enzimas, y se obtiene unos productos. A ella hay agregar las condiciones óptimas para que el proceso se efectúe: enzimas Sustrato Etanol + dioxido de carbono + ∆ coenzimas De acuerdo con lo anterior, Fermentación alcohólica es el conjunto de reacciones químicas efectuadas en un medio orgánico (sustrato) propiciadas por microorganismos específico bajo condiciones adecuadas. 38 También se puede definir la fermentación alcohólica como el resultado del catabolismo anaeróbico de la célula. El sustrato es rico en azúcares que son tomados por la célula para su desdoblamiento La manera más simple de representar el proceso es: enzimas C6H12O6 2CH5OH+2CO2+27 kcal En realidad, este proceso es muy complejo, en él intervienen 51 enzimas y 3 sistemas coenzimáticos. El enlace entre la glucosa y los productos finales, etanol y dióxido de carbono, es el ácido pirúvico: enzimas enzimas C6H12O6 CH3COCOOH CH3CHO glucosa coenzimas ácido piruvico acetaldehído enzimas CH3CHO CH3CH2OH + CO2 Acetaldehído alcohol etilico En la transformación de la glucosa a acido pirúvico interviene todo un conjunto de enzimas que embden-Meyerhot denominaron glucólisis; y por actuar el ácido fosfórico en la fosforilación. En su conjunto, el proceso recibe el nombre de glicólisis con fosforliación. o vía de ciclo de Embden-Meyerhof, como más comúnmente se le conoce. El proceso se explica en la figura 4. Luego, el desdoblamiento del ácido pirúvico, formado por glucólisis, hasta etanol y dióxido de carbono, ocurre como sigue: descarboxilasa CH3 COCOOH + DPT CH3 CHOH - DPT + CO2 piruvica acido piruvico difosfotiamina hidroxietil de difosfotiamina 39 escarboxilasa CH3 CHOH - DPT CH3 CHO + DPT piruvica hidroxietil de acetaldehído difosfotiamina difosfotiamina eshidrogenasa CH3CHO + DPN-H2 CH3CH2OH + DPT acetaldehído de alcohol alcohol nucleótido de etílico difosfopiridina En este proceso intervienen tres coenzimas, la difosfotiamina (DPT), el acido alfalípoico, coenzima que sufre oxidación y reducción reversible y la coenzima A, las estructuras de esas tres sustancias se muestran en la página 37 FIGURA 4 Paso de la glucosa a ácido piruvico por glucólisis con fosforilación 40 41 LECCION 4 Condiciones para lograr una fermentación óptima En un apartado anterior se llamó la atención sobre la importancia que tienen las enzimas en la actividad celular de la levadura; actividad que se ve influenciada por agentes externos y se reflejan en el rendimiento de la operación. En la fermentación inciden algunos factores que de no controlarse, el costo puede aumentar considerablemente. Entre esos factores tenemos: pH, temperatura, presión, azúcares presentes, ácidos, actividad alcohólica, sustancias utilizadas como antisépticos, taninos presentes y las aguas contaminadas. Veamos, en su esencia, cada uno de ellos. pH El rango de pH dentro del cual las levaduras fermentadoras realizan su actividad está comprendido entre 2,5 mínimo y de 8,0 a 8,5 como máximo. La fermentación se realiza a pH bajo, alrededor de 3,5. Este valor queda incluid en el rango indicado anteriormente; por eso el mosto constituye un medio propicio para el desempeño de la levadura. El bajo grado de acidez no permite que en él se desarrollen agentes patógenos. Entonces) las levaduras son, por decirlo así, una especie de microorganismos privilegiados al servicio del hombre. Temperatura El estrecho rango de temperatura de la sangre caliente nos brinda un parámetro para entender la actividad celular en la fermentación. Ese rango es de 36,1° a 37,7° C. En él los microorganismos se reproducen geométricamente. En el rango de 15° a 36,1° C y de 37,7° a 40° C, los microorganismos se multiplican. Entre 7,2° y 15° C y de 40° hasta 62,8° C, su ritmo de multiplicación disminuye ostensiblemente. Por encima de 62,8° y por debajo de 7,2° C, la actividad celular es anulada. De acuerdo a como se trabaja industrialmente lafermentación, se puede afirmar que: Fermentación alcohólica es el conjunto de reacciones químicas efectuadas en un medio orgánico (sustrato) propiciadas por microorganismos específico bajo condiciones adecuadas. La actividad de las levaduras es Intensa entre 20° y 25°C; máxima entre 30° - 35°C y por encima de los 40 oC disminuye. Nunca se debe permitir que un mosto fermente por encima de los 40° C. . 42 En este punto debemos recordar que la fermentación es una reacción exotérmica y que esa producción de calor contribuye a un aumento en la temperatura; por consiguiente, en caso de sobrepasar el límite de 40° C, se debe proceder a enfriar el mosto en plena actividad fermentativa. Para ello, se recurre a distintos métodos de enfriamiento: remontado, trasiego, empleo de anhídrido sulfuroso (SO2) y refrigeración tubular. En el remontado, el mosto se vierte de un recipiente superior a otro inferior de modo que al caer con fuerte chorro se emulsione con el aire. En la gran mayoría de los casos resulta ineficaz. En el trasiego, se transvasa el mosto a otro recipiente. Es mínimo el descenso en la temperatura. Empleo de óxido sulfuroso (SO2): dosis de 20 a 40 g/Hl disminuye la actividad fermentativa con el consiguiente descenso en la temperatura. Más adelante trataremos los otros efectos que tiene su uso. Sin embargo, para estos fines se aconseja tener mucho cuidado porque puede tener influencia en el final de la fermentación. Refrigeración tubular: Es el método mas efectivo para estos casos. Se emplea agua como refrigerante; ésta es repartida por el exterior de los tubos, mientras que por su interior circula el mosto. El principio de la transferencia de calor se emplea aquí con mucha simplicidad: del mosto caliente al agua. Presión Recordemos que en la actividad de las levaduras además de formarse etanol también se desprende gas carbónico; en la medida que su concentración crece al interior del recipiente, su presión también aumenta, esto trae como consecuencia una disminución de la actividad celular. En la ecuación, E C6H1206 2CH5OH + 2C02 + ∆ Co-E una forma de incentivar la actividad celular es retirando el CO2 y con ello se disminuye el perjuicio de su elevada presión. 43 Azúcares La materia prima para las levaduras lo constituyen los azúcares presentes en el sustrato; pero otro tanto es la humedad del medio en que se desenvuelven. Los microorganismos tienen unas necesidades en agua mínimas para realizar a cabalidad sus funciones. Esas necesidades se miden en términos de actividad de agua; que para las levaduras está estimado en 0,60 -0,62. Por consiguiente, si se colocan en un medio donde el contenido de humedad está por debajo del indicado, la célula cederá parte de su líquido al medio; si por el contrario, el contenido del líquido en el sustrato es superior al establecido, entonces si podrá cumplir su actividad funcional. Ácidos La acidez total de un mosto expresa el conjunto de ácidos titulables contenidos en ese mosto. Si al inicio de la actividad fermentativa la acidez total es escasa, entonces se hace necesario adecuarla con ácidos cítrico o tartárico, acompañados de convenientes cantidades de SO2. Alcohol El alcohol, en la medida en que se va produciendo por las levaduras, tiene un poder antiséptico sobre algunas especies. Las levaduras Kloeckera apiculatis y Tórulas son víctimas de las crecientes concentraciones de alcohol además de la actividad antiséptica del SO2. Ellas dan paso a las verdaderas levaduras alcohógenas: la Saccharomyces ellipsoideus y la S. oviformis. Antisépticos Dos son las sustancias aceptadas unánimemente como antisépticos: el anhídrido sulfuroso y ácido sórbico. Ambos realizan acciones de inhibición sobre las levaduras Kloeckera apiculatis y Tórulas. Parece ser que la actividad antimicrobiana del SO2 radica en su fuerte poder reductor o por la acción directa sobre ciertos sistemas enzimáticos, actuando con El pH óptimo para el desarrollo de las levaduras alcohogenas es 3,0 a 3,5. Un pH comprendido en este rango impide el desarrollo de microorganismos patógenos. 44 mayor eficacia frente a las especies aerobias que las anaerobias. Por su parte, el ácido sórbico inhibe el consumo de aminoácidos, fosfatos, ácidos orgánicos y similares por parte de la célula. Su acción recae fuertemente sobre la Micoderma vini, un tipo de levadura que escapa a la acción del SO22 .La actividad de las sustancias es, en cierta forma, complementaria. Taninos Los taninos son un grupo de compuestos fenólicos muy diferentes entre sí pero con la característica común de precipitar las proteínas. Al actuar sobre las apoenzímas, parte constitutiva de la enzima, impide que la célula se alimente convenientemente. Aguas contaminadas En la industria cervecera, concentraciones de nitratos (NO3-) en 25 ppm, de nitritos (NO2-) en 2 ppm o de amoníaco (NH3) en 0,1 ppm, afectan la fermentación. Hasta aquí se han mencionado los aspectos más sobresalientes que inciden en la fermentación. Sin duda, existen otros que son particulares para cada producto que se va a elaborar y a los cuales nos estaremos refiriendo cuando se traten los temas respectivos. En general, el proceso de la fermentación debe ser muy cuidadoso; sin embargo, algunas bebidas requieren un control más exhaustivo sobre unas variables que otras. Por ejemplo, el proceso de fermentación para la cerveza, en cuanto a la cepa que se utilizará, demanda mayores cuidados que para el vino. En la producción del alcohol por las levaduras aparecen otras sustancias orgánicas que, si se dejan prosperar, imparten a la bebida sabores y olores desagradables. Alcoholes, aldehídos, ácidos, glicerina y éteres acompañan al etanol. En la cerveza no se admite su presencia, en tanto que en el vino si pueden aparecer, algunas de ellas, en cantidades mínimas reglamentarias. En la elaboración de bebidas alcohólicas con alto contenido de alcohol (aguardiente, ron, whisky, brandy, etc.), tienen la oportunidad, en la destilación y posterior rectificación, de corregir tales anomalías y obtenerlo deseado: alcohol de alta pureza. Para ellos el paso inicial de la fermentación no es tan exigente como para la cerveza, más bien centran su atención en la calidad de la materia prima que se va a utilizar. En Europa, donde no tienen la facilidad para disponer de la melaza como fuente rica en carbohidratos, las empresas productoras de aguardientes se ven obligadas a utilizar el mosto de uva ya fermentado, las heces o lías y hasta los orujos son sometidos a destilación para obtener alcohol. LECCION 5 Calidad de la materia prima 45 Al hablar de calidad de la materia prima tenemos que referirnos a las condiciones mínimas que deben cumplir para poder ser utilizadas en los distintos procesos transformativos. Las empresas productoras de bebidas alcohólicas tienen establecido unos parámetros y, de acuerdo con ellos, exigen a su proveedor el cumplimiento de los mismos. Como sería una labor dispendiosa hacer un compendio de esos parámetros para cada empresa, nos referiremos en lo sucesivo a las normas generales establecidas por los organismos gubernamentales o asesores. Ellos, no solamente han definido criterios para la calidad del producto acabado sino también para la calidad de las materias utilizadas en su elaboración. Hoy, cuando está en boga la aplicación de la teoría zeta o Calidad Total, debe ser un propósito de todos los comprometidos en un proceso, entregar un buen producto final. En la elaboración de bebidas alcohólicas se emplean productos agrícolas, de tal suerte que la calidad debe empezar desdé el agricultor hasta el obrero en la factoría pasando desde luego por empresarios, analistas, técnicos y profesionales encargados del procesamiento. Tal propósitono parece ser exclusivo de la actualidad. Observemos lo que Mateo Carbonell Razquin escribía en la Introducción de su obra Tratado de Vinicultura, en 1970: “La calidad en constante aumento es el signo inequívoco de una producción progresista. Resignarse a una concreta dimensión de la calidad, muchas veces aparentemente lograda, es diluirse en las arenas del mar insatisfecho del mundo de hoy”3. En nuestro mundo de hoy se compite y se ganan los mercados con la calidad. CAPITULO 3 Materias primas para la elaboración de vinos. Materias primas para la elaboración de cerveza. Materias primas para la elaboración de aguardientes. Materias primas para la elaboración de bebidas autóctonas. Manejo preliminar de la materia prima LECCION 1 Materias primas para la elaboración de vinos Los vinos se producen a partir de uvas y de otras clases de frutas. Analizaremos la uva en primer término y después a las otras frutas en su conjunto. La calidad de la uva que se va a procesar influye en la calidad de la bebida que se obtendrá. Sobre la calidad del fruto influyen una serie de factores que determinan su grado de aceptabilidad: el terreno, el clima, las lluvias, las enfermedades, la utilización de productos con carácter preventivo o curativo, las modalidades de cultivo y la vendimia. 46 En Colombia, la región vinícola por excelencia es el Valle del Cauca, por presentar características de suelo, lluvias y clima ideales para el desarrollo de frutos sanos. Un fruto sano quiere decir que debe estar libre de enfermedades ocasionadas por hongos (Botrytis, Penldihlum y Geotrlchum) causantes de distintas clases de podredumbres, lo cual conlleva a una considerable pérdida del material o el aumento en los costos por tratamientos adicionales en el momento de la elaboración de la bebida. Si un lote presenta estas características se debe rechazar para evitar futuros inconvenientes. Para combatir las plagas y enfermedades que atacan a los cultivos, el vinicultor utiliza productos a base de cobre y soluciones de arseniato de plomo. El uso excesivo de fungicidas e insecticidas pueden tener su influencia en el mosto y darle gustos metálicos inconvenientes al producto final. En términos generales; el racimo debe presentarse completo, con la capa cérea de pruina y libre de maltratos y raspaduras. Recordemos que en la superficie de la vid no solamente se encuentran las levaduras (salvajes y de distintas otases) sIno también hongos y bacterias. Una vez que el fruto ha sido deteriorado, entran en acción las levaduras y los hongos, modificando las condiciones de acidez interna y facilitándole el ataque a las bacterias. Además de lo anterior, la uva debe estar en un estado óptimo de madurez. De acuerdo con la norma lcontec 883, la uva se considerará madura cuando el contenido de sólidos solubles expresados en grados Brix, sea igual o superior a 13. Se le recomienda al estudiante consultar la norma lcontec 440 sobre la determinación de sólidos solubles. En el desarrollo del fruto la acidez y los azúcares reductores tienen una evolución contraria. Como se puede observar en la figura 5, al inicio de la maduración predomina la acidez total representada por los ácidos málico y tartárico. En esta etapa la presencia de azúcares es mínima. Con la evolución de la madurez la situación se invierte totalmente, disminuyendo la acidez total y aumentando la concentración de azúcares. Esta situación se ve favorecida si en esta etapa aparecen las lluvias. Además de la uva se emplean, para la obtención de mostos fermentados, manzanas, peras, cerezas, ciruelas, albaricoques, melocotones, frambuesas, moras e higos. Los vinos que se elaboran a partir de mostos fermentados de frutas diferentes a la uva reciben el nombre de vinos de frutas. Ellas son muy apetecidas por el bouquet que imparten gracias a las cantidades moderadas de éteres y aceites aromáticos que contienen. Sin embargo, deben reunir condiciones de calidad para poderlas someter a procesos de fermentación alcohólica. 47 En la tabla 1 se puede observar la composición química de estas frutas comparadas con la de la uva. FIGURA 5 Evolución de la acidez en el grano de uva en función del grado de maduración de (de Ianníni) TABLA 1 Composición aproximada, expresada en porcentajes FRUTA AGUA CARBOHIDRATOS PROTEINAS CENIZAS GRASAS Uvas, tipo americano 81,9 14,9 1,4 0,4 1,4 Manzanas 84,1 14,9 0,3 0,3 0,4 Albaricoques 85,4 12,9 1,0 0,6 0,1 Moras 84,8 12,5 1,2 0,5 1,0 Cerezas (dulces y agrias) 83,0 14,8 1,1 0,6 0,5 48 Higos 78,0 19,6 1,4 0,6 0,4 Melocotones 86,9 12,0 0,5 0,5 0,1 Peras 82,7 15,8 0,7 0,4 0,4 Ciruelas 85,7 12,9 0,7 0,5 0,2 Frambuesas 80,6 15,7 1,5 0,6 1,6 Fuente: Tecnología del vino tinto/Tulio de Rosa.Madrid: Mundi-Prensa. 1988 Pag 47 Cómo son productos agrícolas tienen en un principio, el tratamiento adecuado para combatir plagas y hongos causantes de las distintas enfermedades que provocan el deterioro y mal estado del estado del fruto. En todos ellos, la membrana exterior cumple una función importante al impedir el paso a microorganismos que posan sobre ella de manera natural. Cuando esta membrana es deteriorada por alguna circunstancia, se inicia el ataque de hongos, levaduras y bacterias. Las podredumbres más frecuentes de encontrar son: la mohosa azul, mohosa gris, mohosa negra y mohosa verde. Y los hongos de mayor importancia que las producen Botrytis cinerea, Aspergillus niger, Rhizopus y Alternarla. El ataque Inicial nunca corresponde a una bacteria; sin embargo, en el caso de las peras, este ocurre; aún no se ha podido establecer el mecanismo bajo el cual la Erwinia caratovora logra atacar al fruto, a pesar de su pH comprendido entre 3,8 y 4,6. Antes de someter las frutas al proceso de maceración es necesario un control de calidad exhaustivo para desechar aquellos frutos que presenten deterioro o mal estado. Un fruto enfermo imparte mal olor y características desagradables al producto final. El fruto debe presentarse fresco y sano, libre de maltratos y deterioro de la membrana exterior. LECCION 2 Materias primas para la elaboración de cervezas Cebada Debe ser de una sola y buena variedad, con preferencia de granos grandes, de tamaño bastante uniforme y de color amarillo claro cuando está madura. Para consumo cervecero la variedad más utilizada es la correspondiente al género Hordeum. Existen dos categorías: las espigas de dos hileras y las de seis hileras. En la Tabla 2 se puede observar la composición media de la cebada. Las proteínas vegetales de la cebada son cuatro: gluceina, hordeina, Ieucosina y edestina. En la cáscara se encuentran las dos primeras, los taninos y las resinas 49 amargas; todo este conjunto constituye el ácido listínico. El almidón (constituyente principal del grano) y las dos últimas proteínas, se encuentran en el endospermo. Las grasas, ricas en lecitina, forman parte del embrión y de las capas de aleurona. TABLA 2. Composición media de la cebada en base seca COMPONENTE PORCENTAJE Almidón 63-65 Sacarosa 1-2 Otros Azucares 1 Gomas Solubles 1-15 Hemicelulosa 8-10 Lípidos 2-3 Proteínas 8-13 Proteínas 2-25 Cenizas 5-6 Otros componentes 63-65 Fuente: Industrial Uses of Cereals/ Pomeranz, Y. Chaiman. Minnesota. 1973.Pag 373. Los constituyentes predominantes de los lípidos son los ácidos grasos: linoléico, oleico y palmítico quienes, junto con los ácidos insaturados contabilizan alrededor de un 80% del total. La amilosa, componente lineal del almidón, constituye el 24% del almidón total. La cebada que se emplea debe tener buena capacidad germinativa. Según la norma icontec 1542, la capacidad germinativa se registra como “el número total de granos que hayan germinado en el tiempo seleccionado y se expresan como porcentajes. Ejemplo: 98% (48 horas)”.