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0325-7541
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Revista Argentina de Microbiología 54 (2022) 15---21
www.elsevier.es/ram
R E V I S T A A R G E N T I N A D E
MICROBIOLOGÍA
AL
er reporte de Escherichia coli diarreogénica en
ción pediátrica ambulatoria con diarrea atendida
 ciudad de La Plata, Argentina
eatriz Molinaa,∗, Sebastián Oderizb, Cecilia Vescinab, Alejandra Córdobaa,
ngel Basualdoa y Mónica Delfina Sparoa
Universitario de Estudios Microbiológicos y Parasitológicos (CUDEMYP)-CIC, Universidad Nacional de La Plata, La Plata,
Microbiología, Hospital Interzonal de Niños Sor María Ludovica, La Plata, Argentina
el 19 de diciembre de 2019; aceptado el 12 de febrero de 2021
e en Internet el 17 de abril de 2021
RAS CLAVE
ichia coli
génica;
ría;
a;
ina
Resumen Escherichia coli diarreogénica comprende un grupo heterogéneo de cepas que pre-
sentan diversos factores de virulencia y causan diferentes síndromes diarreicos. Los patotipos
más estudiados son Escherichia coli enteropatogénica (EPEC), Escherichia coli enterotoxigé-
nica (ETEC), Escherichia coli enteroagregativa (EAEC), Escherichia coli enteroinvasiva (EIEC)
y Escherichia coli productora de toxina Shiga (STEC). El objetivo de este estudio fue estimar
la frecuencia de infección de los diversos patotipos de E. coli diarreogénica en una población
pediátrica ambulatoria con diarrea, atendida en el Hospital Sor María Ludovica de La Plata,
Argentina, durante el período mayo-octubre de 2017. Los patotipos fueron detectados mediante
la amplificación molecular de ocho genes de virulencia característicos. Se estudiaron las heces
de 211 niños (76% menores de 5 años). Se detectó infección con E. coli diarreogénica en el 12,3%
(n = 26/211) de los niños con diarrea. Los patotipos identificados fueron EAEC, ETEC (todos lt
positivos), EPEC y STEC (stx2 y eae positivos). El patotipo EAEC fue prevalente en todos los
grupos etarios, mientras que los patotipos ETEC, EPEC y STEC solamente se observaron en niños
menores de 5 años. Este estudio constituye el primer reporte de detección por técnicas de
amplificación molecular de Escherichia coli diarreogénica en una población pediátrica ambu-
latoria con diarrea, de la zona de La Plata. Se necesitan estudios más amplios que incluyan
la caracterización de los aislamientos abarcando un mayor número de genes, controles asinto-
máticos, distintas épocas del año y población de diversas áreas geográficas para esclarecer la
i diarreogénica en niños de Argentina.
obioloǵıa. Publicado por Elsevier España, S.L.U. Este es un
a CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-
relevancia de la infección por E. col
© 2021 Asociación Argentina de Micr
art́ıculo Open Access bajo la licenci
nc-nd/4.0/).
para correspondencia.
 electrónico: nbmolina@med.unlp.edu.ar (N.B. Molina).
oi.org/10.1016/j.ram.2021.02.006
/© 2021 Asociación Argentina de Microbioloǵıa. Publicado por Elsevier España, S.L.U. Este es un art́ıculo Open Access bajo la
C BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
https://doi.org/10.1016/j.ram.2021.02.006
http://www.elsevier.es/ram
http://crossmark.crossref.org/dialog/?doi=10.1016/j.ram.2021.02.006&domain=pdf
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
mailto:nbmolina@med.unlp.edu.ar
https://doi.org/10.1016/j.ram.2021.02.006
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
N.B. Molina, S. Oderiz, C. Vescina et al.
KEYWORDS
Diarrheagenic
Escherichia coli;
PCR;
Pediatrics;
La Plata;
Argentina
First report of diarrheagenic Escherichia coli in pediatric outpatient population with
diarrhea in La Plata, Argentina
Abstract Diarrheagenic Escherichia coli is a heterogeneous group of strains that presents
various virulence factors and causes different diarrheal syndromes. The most studied pat-
hotypes are enteropathogenic Escherichia coli (EPEC), enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC),
enteroaggregative Escherichia coli (EAEC), enteroinvasive Escherichia coli (EIEC) and Shiga
toxin-producing Escherichia coli (STEC). The objective was to estimate the frequency of infec-
tion of diarrheagenic E. coli pathotypes in children with diarrhea, attended at the Sor María
Ludovica Hospital in La Plata, Argentina, during the period May-October 2017. E. coli pathotypes
were detected by molecular amplification of eight characteristic virulence genes. The feces of
211 children (76% under 5 years) were studied. Infection with diarrheagenic E. coli was detected
in 12.3% of the samples. The pathotypes were EAEC (10.43%), ETEC (1.42%, all of them positive
for thermolabile toxin), EPEC (0.95%) and STEC (0.47%, positive for Shiga toxin 2). The EAEC
pathotype was prevalent in children of all age groups, while ETEC, EPEC and STEC were only
observed in children under 5 years of age. This study constitutes the first report of diarrhea-
genic Escherichia coli detection in an outpatient pediatric population with diarrhea from La
Plata, using molecular amplification techniques. Broader future studies, including the charac-
terization of the isolates with the largest number of genes, asymptomatic controls, different
times of the year and population from different geographic areas will be necessary to clarify
the relevance of diarrheagenic E. coli infection in children from Argentina.
© 2021 Asociación Argentina de Microbioloǵıa. Published by Elsevier España, S.L.U. This is an
open access article under the CC BY-NC-ND license (http://creativecommons.org/licenses/by-
nc-nd/4.0/).
Introdu
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(ETEC), E
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cción
ia coli diarreogénica (DEC) comprende un grupo
neo de cepas de E. coli que causan diferentes
s diarreicos y presentan marcadas diferencias en
res de virulencia, la patogenia y la epidemiología
fección. A la fecha, se reconocen seis catego-
iantes patogénicas o patotipos: Escherichia coli
togénica (EPEC), Escherichia coli enterotoxigénica
scherichia coli enteroagregativa (EAEC), Escheri-
 enteroinvasiva (EIEC), Escherichia coli productora
a Shiga (STEC) y Escherichiacoli de adherencia
AEC). La capacidad patogénica y el alcance epide-
 de la última categoría, sin embargo, no se hallan
mente esclarecidos4,11,21.
ecuencias de infección humana con DEC presen-
plias variaciones según la región geográfica, con
ue oscilaron entre el 1 y el 52%4,6,9,10,20,23,25,26,32.
publicados en numerosos países de Latinoamérica
 una prevalencia regional diferencial de los diver-
tipos. Por ejemplo, la mayoría de los casos de
eportados en México, Colombia y Nicaragua esta-
iados a ETEC. En la población de Brasil, Paraguay
l patotipo más frecuente fue EAEC, mientras que,
pública Argentina, Chile, Venezuela y Uruguay, el
 patotipo asociado a diarrea fue EPEC1,2,8,16,21,28,30.
s reportes oficiales sobre agentes etiológicos de
agudas de nuestro país, Shigella spp. y EPEC apare-
con 
fue 
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 los patógenos bacterianos identificados con mayor
ia13. Sin embargo, existe información muy limitada
infección por los diversos patotipos diarreogénicas
i (a excepción de STEC) en la población pediátrica
amplifica
virulenci
mPCR2).
la intimi
16
rmedades diarreicas. El objetivo de este trabajo
ar la frecuencia de infección por los patotipos de
ia coli diarreogénica en la población pediátrica
ria con diarrea atendida en el Hospital Sor María
 de La Plata, Argentina, durante el período com-
 entre mayo y octubre de 2017.
les y métodos
o se realizó con una estrategia cuantitativa, con la
n de un diseño observacional, descriptivo, prospec-
 corte transversal. El período estuvo comprendido
yo y octubre de 2017. El estudio incluyó las heces
 menores de 15 años que presentaron un cuadro
 y que se atendieron en forma ambulatoria en el
de Niños Sor María Ludovica de La Plata, Argentina.
eron del análisis las heces de niños hospitalizados,
ados, inmunosuprimidos, con enfermedades onco-
gicas o enfermedad intestinal inflamatoria crónica.
encialidad fue observada mediante la asignación
digo alfanumérico interno, que permitió mantener
 en todo momento la identidad de las muestras de
scartadas al término del estudio) de cualquier tipo
ación personal. La investigación respetó las nor-
uenas prácticas clínicas, la declaración de Helsinki,
s sus enmiendas, y estuvo de conformidad con la
a vigente aplicable.
atotipos de DEC fueron detectados mediante la
ción molecular de ocho fragmentos de genes de
a característicos, con dos PCR múltiples (mPCR1 y
 Los genes investigados fueron los codificantes de
na (eae), la toxina termolábil LT (lt), las toxinas
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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ía 54 (2022) 15---21
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STEC (stx
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y EIEC (ip
la 1 Frecuencia de patotipos de E. coli diarreogénica
C) en heces de niños con diarrea. La Plata, Argentina.
yo-octubre de 2017
otipos de E. coli diarreogénica Niños con diarrea
Número Porcentaje
C 20 77,2
C (LT) 2 7,6
C 1 3,8
C (Stx2) 1 3,8
C + EPECa 1 3,8
C + ETEC (LT)a 1 3,8
al de casos positivos con DEC 26 100
: Escherichia coli diarreogénica, EAEC: E. coli enteroagrega-
, ETEC (LT): E. coli enterotoxigénica con toxina termolábil,
C: E. coli enteropatogénica, STEC: E. coli productora de
ina Shiga.
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ción
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Revista Argentina de Microbiolog
ables STP (stp) y STH (sth), el antígeno plasmídico
ón H (ipaH), el activador transcripcional R (aggR)
inas Shiga 1 (stx1) y Shiga 2 (stx2). Los patotipos
entificados según los genes de virulencia hallados
lonias aisladas: EPEC (presencia de eae, ausencia
 stx2), ETEC (presencia de lt, stp y/o sth), EIEC
ia de ipaH), STEC (presencia de stx1 y/o stx2, pre-
ausencia de eae) y EAEC (presencia de aggR). La
n molecular fue realizada aplicando una estrategia
ca en dos etapas. La primera etapa consistió en la
ón de las dos PCR múltiples con ADN proveniente
o confluente. En caso de que se hubiera observado
ción de algún gen, la segunda etapa consistió en
ficación de la colonia positiva (con genes de viru-
ara tal efecto, el ADN de 10 a 20 colonias aisladas
 como molde para las PCR individuales14. La colo-
resentó amplificación fue identificada por métodos
os (VITEK®2, Biomerieux) para confirmar la especie
a3,14.
tracción de ADN y la amplificación molecular se
a cabo según metodologías ya descritas3,14. Breve-
a materia fecal fue sembrada en agar MacConkey
da a 37 ◦C durante 24 h. Las colonias caracterís-
 se desarrollaron se resuspendieron en buffer TE
n X-100, se lisaron a 100 ◦C y se centrifugaron a
m. El ADN se conservó a ---20 ◦C hasta su utiliza-
 concentraciones en la mezcla de reacción fueron
ntes: buffer 1 X y dNTP, 0,1 mM; Taq polimerasa,
l y ADN, 1-5 ml. La concentración de MgCl2 fue
ara mPCR1 y 0,75 mM en la mPCR214. Las concen-
 de primers fueron 0,2 pmol/ml (SK1, SK2, STh-f,
p-f y STp-r); 0,25 pmol/ml (LT-R, LT-F, IpaH8 e
 1 pmol/ml (aggRks1 y aggRkas2); 1,6 pmol/ml (stx1-
R); 0,4 pmol/ml (stx2-F y stx2-R) y 0,125 pmol/ml
6S-r)14 (tabla S1, material suplementario).
tocolo de ciclado de mPCR1 consistió en 94 ◦C
 min, seguido de 30 ciclos de 94 ◦C 30 s, 56 ◦C 1 min
min. El protocolo de mPCR2 fue 94 ◦C 5 min, seguido
los de 94 ◦C 30 s, 57 ◦C 1 min y 72 ◦C 30 s. La exten-
l para ambos protocolos fue a 72 ◦C por 2 min3,14.
amplificación, se utilizaron cepas control: E. coli
(eae), E. coli KNH-172 (lt, stp), E. coli O126-53
coli C-481 (ipaH), E. coli 17-2 (aggR), E. coli EDL933
2) y E. coli ATCC 2592214. Los productos de ampli-
ueron detectados mediante electroforesis en geles
sa al 2,5% y tinción con bromuro de etidio. Los
e bandas fueron documentados con el sistema de
ón de imágenes UVP Doc-It® LS, LifeScience Soft-
dos
de estudio quedó constituido por 211 niños, con un
edominio del género masculino (54%). La población
 5 años representó el 76% de los casos.
richia coli (E. coli) diarreogénica se detectó en el
 = 26/211) de los niños con diarrea. Los patotipos
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dos fueron EAEC, ETEC (todos lt positivos), EPEC y
2 y eae positivos) (tabla 1 y figs. 1 y 2). Los pato-
C con toxina termoestable (stp o sth), STEC (stx1)
aH) no fueron detectados.
una inve
informó 
de la pob
los patóg
17
ección en el mismo paciente.
cuencias de infección de los patotipos EAEC, ETEC,
TEC fueron 10,43; 1,42; 0,95 y 0,47%, respectiva-
l patotipo EAEC fue prevalente en todos los grupos
ientras que ETEC, EPEC y STEC solamente se obser-
 niños menores de 5 años (fig. 3).
ón
tados de este estudio permitieron estimar la fre-
e infección entérica de los patotipos de Escherichia
eogénica en una población pediátrica ambulatoria
ea, atendida en el Hospital Sor María Ludovica de
 Argentina, durante el período comprendido entre
ctubre de 2017.
pas diarreogénicas y comensales de E. coli poseen
sticas fenotípicas similares, que dificultan su iden-
 en el laboratorio de diagnóstico y por lo cual es
te el uso de métodos moleculares11. En las últimas
 se han hecho grandes avances en el diagnóstico
r de los agentes productores de diarrea. La estra-
gnóstica utilizada en esta investigación permitió
la viabilidad del patógeno mediante el estudio
al de cultivo in vitro y la posterior amplificación
acteriano. Asimismo, para descartar los resultados
gativos por la presencia de inhibidores de reacción,
 reacciones moleculares incluyeron un control de
ción interno14.
sencia de E. coli diarreogénica fue observada en
de los niños estudiados. Dicho valor fue compara-
los documentados en estudios realizados en Chile
ay30,31. Otros informes reportan valores de infec-
 elevados4,11,20,23,25. Las diferencias en la frecuencia
ión podrían deberse a diversos factores, como el
l estudio, la época del año, la región estudiada, la
 de la diarrea, la población seleccionada o los méto-
iagnóstico etiológico utilizados4,21. Por ejemplo,
20
stigación realizada en India por Rajendran et al.
que la infección estuvo presente en más del 50%
lación. Sin embargo, dichos autores caracterizaron
enos en niños menores de 5 años con diarrea aguda
N.B. Molina, S. Oderiz, C. Vescina et al.
Figura 1 Productos de amplificación de factores de virulencia de cepas control de Escherichia coli. Izquierda: PCR múltiple 1.
Calle 1: E. coli 2348/69 (eae, 864 pb), calle 2: E. coli KNH-172 (lt, 322 pb) y (stp, 166 pb), calle 3: E. coli O126-53 (sth, 120 pb),
calle 4: E. coli ATCC 25922 (16S rRNA, 204 pb). Derecha: PCR múltiple 2. Calle 1: E. coli C-481 (ipaH, 619 pb), calle 2: E. coli 17-2
(aggR, 254 pb), calle 3: E. coli EDL933 (stx1, 130 pb) y (stx2, 346 pb), calle 4: E. coli ATCC 25922 (16S rRNA, 204 pb).
Figura 2 Productos de amplificación de factores de virulencia de Escherichia coli provenientes de aislamientos de pacientes y de
cepas control. Calles 1, 13 y 14: E. coli 2348/69 (eae), calles 2, 9 y 16: E. coli KNH-172 (lt y stp), calles 3, 18 y 19: ausencia de
factores de virulencia (pacientes), calle 4: E. coli C-481 (ipaH), calles 5 y 12: aislamientos de pacientes (aggR), calle 6: aislamiento
de pacien 8: E
(sth), cal A). C
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señalan otros estudios de Argentina12,19,29. Sin embargo,
te (stx2), calles 7 y 15: aislamientos de pacientes (eae), línea
le 17: E. coli 17-2 (aggR), calle 20: E. coli ATCC 25922 (16S rRN
ue habían sido hospitalizados por el cuadro enté-
gual modo, publicaciones referidas a dos provincias
entina señalaron frecuencias de infección por DEC
que las reportadas en el presente estudio. Una de
stigaciones fue realizada en Corrientes por Esqui-
5, quienes señalaron la presencia de patotipos DEC
 de los casos. Sin embargo, dichos autores selec-
 pacientes pediátricos y adultos con diarrea aguda
 heces no se hubieran aislado otros patógenos bac-
 El segundo estudio fue realizado en Misiones por
et al.19, quienes reportaron la presencia de DEC
% de los casos. No obstante, dicho estudio aplicó
a dis
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y ST
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aisla
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o longitudinal, incluyó solamente niños menores
ses y utilizó una metodología de laboratorio dife-
s estudios citados fueron heterogéneos en cuanto
el porcen
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pecto, un
18
. coli EDL933 (stx1 y stx2), calle 10: E. coli O126-53
alle 11: marcador de PM (100 pb).
 metodológicos, técnicas de detección y criterios
ión, lo que dificulta la comparación.
otipo EAEC fue prevalente y presentó una frecuen-
na al 10%, mientras que los patotipos ETEC, EPEC
eron hallados en menor proporción. El predominio
está en concordancia con lo que informan diver-
jos realizados en Argentina, Bolivia, Brasil, India,
araguay y Perú4,5,9,12,20,21,27.
cuencia de ETEC fue menor del 2% y todos los ais-
s presentaron la toxina termolábil. La presencia de
tos de ETEC con dicha toxina fue coincidente con lo
taje de niños infectados con el patotipo ETEC fue
e el informado en otros trabajos del país. Al res-
 estudio de cohorte realizado en niños menores de
Revista Argentina de Microbiología 54 (2022) 15---21
Figura 3 Número de niños con Escherichia coli diarreogénica (DEC) según grupo etario y patotipo detectado. EAEC: E. coli ente-
roagregat tox
y EPEC/E . La 
dos años
un 13% d
de Corrie
patotipo
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diarr
hech
prod
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cula
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iva, ETEC: E. coli enterotoxigénica, STEC: E. coli productora de
AEC: coinfección de dos patotipos en el mismo niño con diarrea
 de Misiones reportó que ETEC estuvo presente en
e los casos29. Asimismo, otro relevamiento en niños
ntes reportó una frecuencia de infección con dicho
 del 8%12. La menor frecuencia de ETEC hallada en el
 estudio podría deberse a diferencias en la edad de
duos, al período estudiado o al sesgo de selección
nal. Por ejemplo, el trabajo de Misiones evaluó la
 de ETEC solamente en lactantes, el grupo etario
r prevalencia del patógeno, mientras que el estu-
ntino solamente realizó la pesquisa de ETEC en las
 los niños con diarrea cuyos coprocultivos habían
tivos para otras bacterias.
sencia de EPEC en niños con diarrea fue menor del
 resultado coincide con el reportado en México2.
rgo, estudios realizados en varias localidades de
tina han mostrado valores de infección del 6 al
5,19. La menor frecuencia de EPEC en este estudio
do con los antedichos podría deberse a la aplica-
istintas técnicas de diagnóstico para la búsqueda
serotipificación o métodos moleculares), a la selec-
otros grupos etarios, a la época del año o a la
 variable de este patógeno en las distintas regiones
,11,21.
e estudio se detectó un solo aislamiento deSTEC,
frecuencia cercana al 0,5%. Diversos estudios han
o valores entre el 0,3 y el 13% en la población
a2,4,5,12,14,17,21,22,24. Esta amplia variación encon-
 la bibliografía podría deberse a diferencias en
ios de inclusión, en el método de diagnóstico o a
socioeconómicos, entre otros. El aislamiento STEC
 los genes de la toxina Shiga 2 y de la intimina en
a. El hallazgo de dichos genes fue coincidente con
ado por diversos autores de Argentina14,17,21,22.
tribución de los patotipos DEC presentó diferencias
 edad de los niños con diarrea; EAEC fue obser-
todos los grupos etarios, mientras que ETEC, EPEC
por 
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EAEC
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olamente fueron detectados en niños de menor
patotipo EAEC ha sido reconocido como un pató-
ergente, tanto por su reciente descripción como
resultado
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la caract
19
ina Shiga, EPEC: E. coli enteropatogénica, ETEC/EAEC
Plata, Argentina. Mayo-octubre de 2017.
elevancia en cuadros gastrointestinales agudos y
tes9,14,16,20,25. En esta investigación, la presencia de
niños de mayor edad podría deberse a sus carac-
 patogénicas, ya que dicha bacteria es capaz de
 a la pared intestinal, favorecer la producción de
erar enterotoxinas, estimular la respuesta inflama-
stinal, evadir el sistema inmunitario y persistir en
no por períodos prolongados4,14,21.
dominio de infecciones con ETEC, EPEC y STEC
n niños menores de 5 años coincide con lo repor-
iversos estudios18,22,25,29. La evidencia ha señalado
las áreas endémicas, la disminución de las infec-
r dichos patotipos a medida que se incrementa la
ría deberse al desarrollo de la inmunidad adqui-
eterminantes genéticos individuales o a factores
les4,18.
sente investigación estuvo sujeta a varias limita-
n principio, no se contó con información sobre la
ción clínica o la duración del cuadro diarreico que
 consulta médica. En segundo lugar, este estudio
ó la detección de otras infecciones intestinales. En
gar, no se investigaron las cepas de EAEC atípicas
a diversidad de sus genes de virulencia. Por último,
ajo fue conducido en la población pediátrica de un
ana durante un período de seis meses y puede no
tar exactamente las frecuencias de infección enté-
la región.
studio constituye el primer reporte de detección de
ia coli diarreogénica mediante técnicas de ampli-
olecular en una población pediátrica ambulatoria
ea asistida en La Plata. En las últimas décadas, se
o grandes avances en el diagnóstico de los agen-
uctores de diarrea. Sin embargo, la investigación
 los patotipos diarreogénicos de E. coli por métodos
res no se realiza en forma rutinaria en la mayoría de
atorios de diagnóstico clínico. Por tal motivo, estos
s revisten particular interés. De todos modos, sería
te realizar estudios más amplios, que incluyeran
erización de los aislamientos a partir de un mayor
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en niños 
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investiga
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Los autor
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Anexo.
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doi:10.10
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e genes, controles asintomáticos, distintas épocas
 población de diversas áreas geográficas, para escla-
elevancia de la infección por E. coli diarreogénica
de la Argentina.
iación
te trabajo ha sido financiado por un subsidio a la
ción clínica de la Fundación Alberto J. Roemmers.
to de intereses
es declaran que no presentan conflictos de intere-
ta investigación.
 Material adicional
de consultar material adicional a este
en su versión electrónica disponible en
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rafía
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