PRACTICA 8 BIO

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INSTITUTO TECNOLOGICO DE ZACATEPEC 
 
Nombre del laboratorio: Laboratorio de Bioquímica 
Numero de práctica: 7 
Nombre de la práctica: Determinación de azúcares 
reductores 
Fecha de entrega del reporte: 23 de Abril del 2018 
Integrantes: 
 Rangel Ramos Rocío Esther 100% 
 Rodríguez Guevara Alan 100% 
 Rodríguez Noguerón Ricardo 100% 
 Batalla López Alan Joseph 100% 
 Medrano Nava María Teresa 100% 
 
 
INTRODUCCION: 
Los azucares reductores es aquellos azucares que tienen un grupo carbonilo intacto el cual a 
través del mismo pueden reaccionar reductores de moléculas. 
Los monosacáridos son azucares reductores, ya que al menos tienen en un estructura un –OH 
hemiacetálico libre, por lo que dan positivo a una reacción de fehling y a otros tipos de reacciones. 
Presentan equilibrio de forma abierta, presentan mutarotación (cambio espontaneo entre las dos 
formas cicladas alfa y beta), los azucares reductores también provocan la alteración de las 
proteínas con la reacción de glucolizacion no enzimática. 
La glucosa es el azúcar reductor más abundante en el organismo. Su concentración en la sangre 
está sometida a un estricto y cuidadoso mecanismo de regulación en los individuos sanos y, a 
personas que tienen diabetes, aumenta gradualmente. Sin embargo, cualquier azúcar que posea 
un grupo carbonilo libre puede reaccionar con los grupos amino de las proteínas para formas 
bases de Schiff. 
 
OBJETIVO GENERAL: 
Analizar y observar las absorbancia y las reacciones requeridas. 
 
MARCO TEORICO: 
Entre los distintos componentes de los alimentos, después del agua, los carbohidratos son las 
sustancias más abundantes y más ampliamente distribuidas en la naturaleza; siendo la celulosa 
la molécula que se encuentra en mayor cantidad en la biosfera y el almidón, la fuente energética 
alimentaria más empleada en el mundo. 
En todos los seres vivos se encuentran presentes los carbohidratos, ya que la ribosa y la 
desoxirribosa son parte de su material genético. De la misma forma en las frutas y hortalizas los 
carbohidratos cumplen funciones estructurales y energéticas, constituyendo algunas la 
estructura rígida o mecánica de los tejidos vegetales; en tanto que en las semillas, raíces y 
tubérculos funcionan básicamente como reservas energéticas. Por otro lado, en algunos 
animales estos compuestos son parte de sus reservas energéticas (glucógeno) o constituyen un 
componente esencial de su estructura externa (quitina). 
Además de ser componentes naturales de muchos alimentos, la industria alimentaria emplea los 
carbohidratos en función de sus propiedades funcionales, usándolos como ingredientes para 
mejorar la aceptabilidad, palatabilidad y vida útil de diversos alimentos. 
El método DNS (técnica de Miller) es una técnica colorimétrica que emplea acido 3,5 
dinitrosalicilico para la hidrolisis de polisacáridos presentes en una muestra. Determina las 
absorbancias por medio de un espectrofotómetro a 540nm. Esta técnica sirve para cuantificar los 
azucares reductores producidos durante una fermentación o para cuantificar los productos de 
una reacción enzimática. La curva de calibración es la representación gráfica en un eje de 
coordenadas, de la absorbancias (eje de ordenadas: Y) frente a la concentración (eje de 
abscisas: X). se ensayan varias soluciones de concentración conocida y se determina sus 
absorbancias, construyéndose la curva de calibrado, que es una recta. La concentración de una 
solución problema (desconocida). Se averigua por interpolación de la Abs de la solución de la 
curva de calibración, o a través de la ecuación de la recta (y=m+b) donde: absorbancia 
(y)=constante (m) x concentración + absorbancia del blanco. 
El DNS reacciona únicamente con los azucares reductores. La sacarosa es un disacárido no 
reductores, pero tras su hidrolisis en medio acido se liberan glucosa y fructosa que si son 
reductores y reaccionan con en el DNS generando un producto coloreado. La intensidad de color, 
que se puede medir por método espectrofotométricos es proporcional a la concentración 
sacarosa. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
MATERIALES 
 Vasos de precipitado 
 Matraces Erlenmeyer 
 Agitador de vidrio 
 Pipetas 
 Probetas 
 Tubos de ensayo 
 Perilla 3 vías 
 Papel filtro 
 Piceta 
 Espátula de acero 
 Vidrios de reloj 
 Embudo de plástico 
 Disco de papel filtro 
 Celda para espectrofotómetro 
 Gradilla roja 
 Micropipeta 
 Caja de puntas azules 
 Matraces aforados 
 Barra de agitación magnética 
 Agitador magnético 
 Extractor de barras magnéticas 
 Termómetro 
 Guantes de látex 
 Jeringa para pipetear 
EQUIPO 
 Balanza analítica 
 Espectrofotómetro 
 Baño María Eléctrico 
REACTIVOS 
 Dextrosa anhidra 
 Hidróxido de sodio 
 Tartrato de sodio y potasio 
 Acetona 
 Ácido 3-5-dinitrosalicilico 
 
 
PROCEDIMIENTO 
Se lavó el material de manera meticulosa, finalizando el lavado con un enjuague con agua 
destilada; se dejó secar el material mientras se continuó con la limpieza de la mesa de trabajo. 
Se preparó una disolución de NaOH a 2N en un matraz aforado, a la disolución se le agregaron 
37.5 g de Tartrato de Sodio y Potasio, y se completó a un volumen de 125 mL. Para la adición 
del DNS, se realizó en un recipiente color ámbar, a la disolución se le agrego 1.25 g de DNS, 
para la manipulación de este reactivo se usó el material de protección necesario. Se continuo 
con la preparación de una disolución de glucosa, se pesó 0.1 g de glucosa y se agregó agua 
destilada hasta el volumen de 50 mL. Se tomó una alícuota de 5 mL de la disolución y la alícuota 
se llevó a un volumen de 25 mL, para obtener una solución a una concentración de 0.4g/L y esta 
fue nuestra solución madre. Con la última solución se realizaron las disoluciones en los tubos de 
ensayo, se usó la micropipeta para medir los diferentes volúmenes que se presentaran en los 
resultados. Teniendo los tubos de ensayo a diferentes concentraciones se adiciono 2 mL de la 
solución de DNS, se llevaron todas las disoluciones a baño maría a una temperatura de 80 – 90 
°C durante 5 minutos. Después del baño maría se llevaron los tubos al refrigerador por 5 minutos, 
para posteriormente proseguir al análisis de las muestras en el espectrofotómetro. La celda se 
lavó con acetona y se manejó cuidando solo tocarla por la parte superior. En el espectrómetro 
se realizó la lectura de las absorbancias a diferentes concentraciones a 540 nm. 
 
MEMORIA FOTOGRÁFICA 
 
 
 
Se lavó y seco de manera meticulosa todo el material de 
laboratorio. 
 
 
 
 
 
 
 
Se preparó la disolución de Hidróxido de Sodio en un matraz 
aforado de 25 mL. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Preparación de reactivo DNS en un matraz Erlenmeyer. 
 
 
 
 
 
Fig. 1. Material usado en la 
práctica. 
Fig. 3. Reactivo DNS. 
 
ráctica. 
Fig. 2. Preparación de 
disolución de NaOH. 
 
 
Se agregó 2 mL del reactivo DNS a cada uno de los tubos de 
ensayo. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Se realizó el baño maría de los tubos de ensayo 
simultáneamente y tomando el tiempo de 5 minutos. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Los tubos de ensayo en el refrigerador durante 5 minutos, 
para proseguir con el análisis en el espectrofotómetro. 
 
 
 
 
 
Fig. 4. Baño María de los tubos 
de ensayo 
Fig. 4. Refrigerador. 
Fig. 3.1. Agregado del reactivo 
a los tubos de ensayo. 
RESULTADOS: 
 
Solución Concentración 
(g/L) 
Volumen de 
solución madre 
(mL) 
Volumen de agua 
destilada (mL) 
Absorbancia 
Blanco 0 0 2.0 0 
1 0.04 0.2 1.8 0.050 
2 0.08 0.4 1.6 0.215 
3 0.12 0.6 1.4 0.376 
4 0.16 0.8 1.2 0.585 
5 0.20 1.0 1.0 0.665 
6 0.24 1.2 0.8 0.745 
7 0.28 1.4 0.6 0.905 
8 0.32 1.6 0.4 1.55 
9 0.36 1.8 0.2 1.310 
10 0.40 2.0 0 1.25 
Muestra 
problema 
x x x 1.120 
 
 
y = 3.7439x - 0.055
-0.2
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
0 0.05 0.1 0.150.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45
A
b
so
rb
an
ci
a 
Concentracion 
Curva de concentración C6H12O6 
 
Ecuación 
Y=3.7439x-0.055 
Muestra de problema: 
Absorbancia- 1.120 
X= 0.314 g/L 
 
CONCLUSIONES: 
En esta práctica llegamos a observar los distintas absorbencias de cada una de los azucares 
reductores, llevando a cabo una serie de pasos con materiales peligrosos. Llegamos a observar 
como es algunas azucares reductores absorbían mas que otras y se observaba en el 
espectrofotómetro. 
 
BIBLIOGRAFIA: 
 Daniel Bello Gil, Emilia Carrera Bocourt y Yuset Díaz Maqueira. (2006). determinación 
de azucares reductores. s/f, de redalyc.org Sitio web: 
http://www.redalyc.org/pdf/2231/223120664006.pdf 
 Muños Rojas Andrea Gisela, Vega Viera Jhonas Abner. (2014). determinación de 
azucares reductores por espectrofotometría (DNS). s/f, de Slideshare Sitio web: 
https://es.slideshare.net/vegabner/determinacin-de-azcares-reductores-por-
espectrofotometra-mtodo-dns