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1 Revista Ecuatoriana de Ciencia Animal, Vol 4, No 2, 2020, ISSN 2602-8220, Latindex Actividad probiótica de (Lactobacillus spp.), y su incidencia en el desarrollo de los parámetros zootécnicos, alométricos y de la microbiota gastrointestinal en pollos broilers (Probiotic activity of (Lactobacillus spp.), And its incidence in the development of zootechnical, allometric and gastrointestinal microbiota parameters in broiler chickens). Braulio E. Loor Gorozabel1; Maritza V. Talledo Solórzano1; Gerardo J. Cuenca Nevárez1; Frank G. Intriago Flor1 1Facultad de Ciencias Zootécnicas, Universidad Técnica de Manabí, Ecuador. Correo electrónico de autor para correspondencia: mtalledo4282@utm. edu.ec Braulio E. Loor Gorozabel Braulio.loor@utm.edu.ec Frank Guillermo Intriago Flor frankgintriagfo@utm.edu.ec Gerardo J. Cuenca Nevárez gercuenevarez12@aol.com Resumen El objetivo de este estudio fue evaluar la actividad probiótica de (Lactobacillus spp.) en el desarrollo de los parámetros zootécnicos, alométricos y de la microbiota gastrointestinal en pollos broilers. Se usaron 180 pollos, distribuidos en tres tratamientos: Control T0 (sin probióticos n=45), T1 (1,5 mL probiótico L-1 de agua n=45), T2 (3 mL probiótico L-1 de agua n=45) y T3 (4,5 mL probiótico L-1 de agua n=45). Los probióticos se administraron vía agua de bebida por 42 días. Se observó que en lo que respecta a los análisis llevados a cabo para determinar el desempeño del probiótico sobre el desarrollo de los parámetros zootécnicos, alométricos y de la microbiota gastrointestinal el T1 presento mejor desempeño (p<0,05) en comparación con los otros tratamientos. Por lo que se concluye que la adición de probióticos a base de Lactobacillus sp., en el agua de bebida de pollos, tienen un efecto destacado en la producción de pollos broiler. Palabras clave: eficiencia europea, probiótico, producción, rendimiento, supervivencia Abstract The objective of this study was to evaluate the probiotic activity of (Lactobacillus spp.) In the development of zootechnical, allometric and gastrointestinal microbiota parameters in broiler chickens. 180 chickens were used, distributed in three treatments: Control T0 (without probiotics n = 45), T1 (1.5 mL probiotic L-1 of water n = 45), T2 (3 mL probiotic L-1 of water n = 45) and T3 (4.5 mL probiotic L-1 of water n = 45). The probiotics were administered via drinking water for 42 days. It was observed that with regard to the analyzes carried out to determine the performance of the probiotic on the development of zootechnical, allometric and gastrointestinal microbiota parameters, T1 presented better performance (p <0.05) compared to the others. treatments Therefore, it is concluded that the addition of probiotics based on Lactobacillus sp., In chicken drinking water, has a prominent effect on broiler chicken production. mailto:jorge.vanegas@ucuenca.edu.ec 2 Key words: european efficiency, probiotic, production, performance, survival Introducción La definición más utilizada de probiótico es: un suplemento de alimento microbiano vivo que afecta de manera beneficiosa al huésped al mejorar su equilibrio microbiano intestinal (Fuller, 1999). El mecanismo de trabajo de los suplementos de antibióticos no se conoce con exactitud. Parte de sus acciones incluye la influencia bacteriostática en constituyentes específicos de la microflora. La suplementación con probióticos alimentarios puede reparar las deficiencias en la composición y / o la actividad de la flora intestinal y proporcionar el tipo de microflora que contribuye a la resistencia a la enfermedad del huésped (Mercenier, Pavan & Pot, 2003). En la producción y bienestar de las aves es fundamental que exista una adecuada absorción de nutrientes en sus componentes básicos ya que esto permite una conversión eficiente del alimento, por esta razón se ha incurrido en la adición de antibióticos con el afán de mantener la salud gastrointestinal de las aves (Gaggia, Mattarelli & Biavati, 2010).En la industria actual del manejo de pollos, este equilibrio microbiano intestinal se ve afectado por factores estresantes, como la composición del alimento, las condiciones higiénicas, la presión de infección y el rápido crecimiento y los altos rendimientos de producción alcanzados por la selección genética. Con el fin de lograr mayores tasas de crecimiento y suprimir bacterias patógenas, los aditivos de antibióticos para alimentos se agregan comúnmente en la cría de animales (Bratz et al., 2015). Por lo que el uso continuo de cantidades relativamente altas de antibióticos en la alimentación animal puede conducir a la contaminación de la cadena alimentaria con residuos de antibióticos y microorganismos resistentes a los antibióticos, incluidos los patógenos. Además, la posible transmisión de resistencia a los antibióticos de los animales a los seres humanos, junto con una mayor conciencia de la seguridad del consumidor, ha llevado a prohibir estos aditivos para piensos y los antibióticos solo se permitirán con fines terapéuticos (Dec et al., 2016). Sin embargo; Huyghebaert, Ducatelle & Van Immerseel. (2011), han manifestado los efectos nocivos que para la salud humana genera el uso de antibióticos, ya que inducir a la resistencia al mismo, por lo que se ha determinado usar cepas de microorganismos seleccionados, que estimulen la estabilidad de la flora intestinal de las aves, lo cual permite que se mantenga la funcionalidad de las mucosas digestivas, garantizando el aprovechamiento de los nutrientes suministrados en la dieta (Gaggia et al., 2010). Las bacterias ácido-lácticas utilizadas como probióticos poseen una ruta metabolica de carácter anaeróbico, en el cual la glucosa se fermenta hasta producir ácido láctico, con la consiguiente reducción del pH intestinal, lo que genera un hábitat inadecuado para la reproducción y colonización de bacterias patógenas, lo que permite prevenir la generación de lesiones en la superficie de absorción del intestino (Cao et al., 2013). La adición de cultivos de lactobacilos puros o mezclas de lactobacilos y otras bacterias en las dietas de pollos de engorde han producido resultados variables. Kizerwetter-Świda & Binek (2009) mostraron que la suplementación de un probiótico comercial (L. sporegenes) aumentó el aumento de peso de los pollos a las 2 o 6 semanas de edad. Ghadban (2002), también reportó mejoras consistentes en el aumento de peso corporal de los pollos alimentados con un cultivo de L. sporegenes. 3 Para la extracción de estos microorganismos, las principales fuentes son el contenido intestinal y las heces fecales de animales (Kalantzopoulos, 1997). A lo largo del proceso de colonización, las cepas endógenas presentan mayor capacidad de adaptaión y proliferación, debido a que se hallan en un ambiente similar al del que fueron aisladas (Vinderola, Medici & Perdigón, 2004). Por este motivo, bacterias como Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus lactis, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus plantarum, Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis y Bifidobacterium spp., son comúnmente usadas para adicionarlas en los suplementos probióticos. Para su metabolismo, algunas de estas bacterias utilizan hidratos de carbono como fuente energética, lo que genera ácidos grasos de cadena corta (acético, propíonico, butírico y láctico), los cuales poseen propiedades saludables para el tracto gastrointestinal, lo que a su vez genera bienestar para las aves (Hamid & Ezureen, 2011). Las bacterias Clostridium perfringens y Escherichia coli son vectores causantes de severas infecciones del tracto intestinal lo que repercute desfavorablemente en los parámetros productivos. Se ha observado que la suplementación con probióticos puede disminuir la concentración de estas enterobacterias en el intestino, lo que evita que generen efectos adversos sobre las aves(Mikulski et al., 2012). Es así, que los probióticos han demostrado en varios estudios poseer propiedades que contribuyen a mejorar las condiciones de diversas patologías en las aves de producción (Kumar et al., 2013). Por lo tanto, el objeto de esta investigación es evaluar la actividad probiótica de Lactobacillus spp., y su incidencia en el desarrollo de la microbiota gastrointestinal en pollos broilers. Materiales y Métodos Localización del área de estudio El trabajo de campo se realizó en los galpones de la granja experimental de la Universidad Técnica de Manabí, Facultad de Ciencias Zootécnicas, la misma que se encuentra en el kilómetro 2 de la vía Chone Boyacá, del cantón Chone, provincia de Manabí, localizados a 45 msnm, con una temperatura promedio de 28 ºC, una precipitación anual de 1025 mm y una humedad relativa del 83 %. Animales Se utilizaron 180 pollos broilers de un día de edad, con un peso promedio inicial de 47,10 g. El período experimental tuvo una duración de 42 días. La cría se realizó bajo los procedimientos comerciales establecidos en la granja de la FCZ. Instalaciones y Equipos Los pollos se establecieron dentro de un galpón de crianza de 64 m2, el cual consta con; estructura metálica, paredes de malla electro soldada y piso de tierra. La cama fue de tamo (cascara de arroz), el área se dividió en 12 cuartones, cada cuartón tuvo una medida de 1,0 x 2,0 metros, además de comederos y bebederos independientes; en cada cuartón se alojaron 15 pollos. Durante todo el experimento, se utilizaron 12 comederos individuales tipo tolva para el control del consumo de alimento, además 12 bebederos manuales de capacidad de 4 litros distribuidos de tal manera que pudieran proporcionar individualmente agua fresca a los pollos y así poder medir su consumo. 4 Por otra parte, se utilizaron dos recipientes tipo tanque, con capacidad de 60 litros, los cuales sirvieron para almacenar y tratar el agua de bebida de los pollos para lo cual se contó con descartables de 20 ml de capacidad y poder dosificar el fermento láctico a base de Lactobacillus spp. Cabe mencionar que para el pesaje de los pollos y el alimento suministrado se utilizó una balanza digital Ohaus 2000. Protocolo Sanitario y Alimentario Previo el desarrollo de esta actividad se procedió con las medidas sanitarias como fue la limpieza y desinfección total del galpón con varios desinfectantes (solido, líquido y por calor), así mismo se procedió con la limpieza de cortinas, comederos y bebederos; además, se hizo el control de roedores e insectos con productos obtenidos en casas agroquímicas de la zona. La alimentación de los pollos se la realizó con alimento comercial, en dos presentaciones crecimiento y engorde el cual se le suministro desde el primer día hasta los 21 y desde el día 22 hasta los 42 días respectivamente. El manejo de la alimentación de los pollos fue a voluntad y se la realizo siempre a la misma hora (07H00 y 17H00), el pesaje fue cada 7 días, siempre en ayuno. El agua proporcionada a los pollos fue potabilizada con cloro (a razón de 1/20000 es decir una gota de cloro por litro de agua o 50 ppm) y dejándola en reposo 24 horas antes de su uso. Cabe mencionar, que no se usó ningún tipo de fármaco o droga, solo se le vacuno con Gumboro y Newcastle a los 7 y 15 días. Obtención y manejo del probiótico Se seleccionó y sacrificó al azar un pollo de 7 días de edad extrayéndole del sistema digestivo (ciego) un raspado del mismo para obtener los microorganismos con los cuales se elaboró el probiótico usado para este estudio. Luego, el raspado fue colocado en 5 ml de suero fisiológico y se procedió a la siembra en cajas Petri conteniendo medios específicos para el desarrollo de bacterias acidolácticas, agar y caldo MRS (De Man-Rogosa-Sharpe), este medio de cultivo permite un abundante desarrollo de todas las especies de lactobacilos. Luego se colocaron en la incubadora a 37°C por 72 horas. Para la activación del probiótico se tomó una muestra con una pipeta graduada de 10 ml de la solución madre (solución de 30 g en 270 ml de agua con melaza) para ser inoculada. La inclusión del probiótico en el agua de bebida fue durante el ciclo productivo de los pollos y este se preparó diariamente. La aplicación del probiótico fue suspendida un día antes y un día después en procesos de vacunación. Se utilizaron 180 pollos broilers de un día de edad, con un peso promedio de 47,10 g., distribuidos en cuatro tratamientos (T0, T1, T2, T3) con tres repeticiones por tratamiento, dando un total de 12 unidades experimentales, cada unidad experimental conformada por 15 pollos distribuidos de forma aleatoria. 5 Se evaluó semanalmente el efecto de los cuatros niveles de Lactobacillus spp., suministrados en el agua de bebida (relación v/v) de manera proporcional (0,0; 1,5; 3,0 y 4,5, ml) por litro de agua sobre el comportamiento zootécnico y productivo de los pollos. Cuadro 1. Esquema del diseño experimental usado en la presente investigación Tratamiento Descripciones (Lactobacillus sp. por litro de agua) Repeticiones # de pollos por UE T0 Testigo 3 15 T1 1,5 mL probiótico * L- 1 de agua 3 15 T2 3,0 mL probiótico * L- 1 de agua 3 15 T3 4,5 mL probiótico * L- 1 de agua 3 15 Parámetros zootécnicos Estos parámetros se evaluaron los días: 7, 21 y 42; para luego trabajar con los valores promedios de estos parámetros y poder testearlos con los tratamientos. Índice de Conversión Alimenticia (I.C.A) Cuantifica los kilogramos de alimento que se ha consumido un ave para producir un kilogramo de carne. Cuanto más bajo sea el índice de conversión más eficiente ha sido criado el animal (Manzano et al., 2010). Fórmula 1. 𝐼. 𝐶. 𝐴 = 𝐶𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑜 𝑖𝑛𝑐𝑟𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑑𝑒 𝑃𝑒𝑠𝑜 Ganancia Diaria de Peso (GDP) Se refiere a cuanto ha ganado un pollo en peso corporal al día. Rosero et al., (2012). Fórmula 2. 𝐺. 𝐷. 𝑃 = 𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 − 𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑í𝑎𝑠 Mortalidad Porcentaje de pollos muertos en un período determinado. Fórmula 3. % 𝑀 = # 𝑝𝑜𝑙𝑙𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑟𝑡𝑜𝑠 # 𝑑𝑒 𝑝𝑜𝑙𝑙𝑜𝑠 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙𝑒𝑠 𝑥 100 6 Eficiencia Europea (EE) Este índice, compara los diferentes lotes dentro de una integración o país, el número mínimo esperado para definir si un lote tiene buen comportamiento es de 200, por lo que cualquier resultado por debajo de 200 se estima que no fue un buen lote en cuanto a rendimiento Anwar et al., 2012. Fórmula 4. 𝐸𝐸 = %𝑉𝑖𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑥 𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙(𝑘𝑔) 𝑇𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 (𝑑í𝑎𝑠)𝑥 𝐼. 𝐶. 𝐴 𝑥 100 Parámetros alométricos Durante la fase de eutanasias escalonadas se sacrificaron 36 aves de la siguiente forma: los días 7, 21 y 42 se sacrificaron 12 aves respectivamente (una por cada replica). Los animales se aturdieron aplicándoles una atmósfera de dióxido de carbono durante 3 minutos. Todas las aves fueron sacrificadas después de 3 horas de la última comida. Los pesos de los órganos fueron convertidos a porcentaje en relación al peso vivo (% PV) por medio de la siguiente fórmula: Fórmula 5. % 𝑃𝑉 = 𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒𝑙 ó𝑟𝑔𝑎𝑛𝑜 𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜/𝑎𝑣𝑒 𝑥 100 Para determinar la ontogénesis del crecimiento de los diferentes órganos y su relación con el peso corporal, se utilizó la constante de Crecimiento alométrico (CA), así: Fórmula 6. 𝐶𝐴 = 𝑂𝑛 𝑂ℎ 𝑃𝐶𝑛 𝑃𝐶ℎ Donde: O= peso del órgano; n= días después del nacimiento; h= peso al nacimiento PC= peso corporal. Cuando el órgano crece en la misma proporción al peso corporal, CA es de 1; si el crecimiento del órgano es menor al peso corporal, CA es menor a 1; y cuando CA es mayor a 1, hay un crecimiento rápido en relación con la ganancia total de peso corporal (Jaramillo, 2012). Análisis morfométrico del intestino delgadoDespués de 48 horas de la colecta, las muestras de las diferentes secciones del intestino se conservaron en formalina al 10 %, para luego ser incluidas en parafina, cortadas a 4 µm de espesor y coloreadas con hematoxilina-eosina para ser lavados y almacenados en 7 etanol:agua (75:25, v:v) de acuerdo con el método reportado por Vente-Spreeuwenberg et al. 2001). Luego se procedió a analizar: • Vellosidades intestinales Altura: una vez que se estableció la base de la vellosidad, desde su punto medio se trazó una línea hasta el ápice. Ancho: con una línea se unieron los bordes apicales de las células epiteliales de lados opuestos, ubicadas aproximadamente en la mitad de la vellosidad. • Criptas intestinales De acuerdo con Marion et al., (2002), se determinó la profundidad y el ancho de las criptas intestinales. Análisis microbiológico Para los análisis microbiológicos sobre entero bacteria, Aero bacteria mesofilas y lactobacilos se tomaron muestras del intestino delgado y músculo, para lo cual se sacrificaron 3 pollos por tratamiento (uno por replica) y se tomaron muestras para realizar el respectivo cultivo microbiano, luego se procedió a realizar el contaje de Unidades Formadoras de Colonias (UFC), de cada grupo bacteriano cultivado. Análisis Estadístico Para el análisis de los resultados experimentales obtenidos desde el punto de vista zootécnico, alométrico, histomorfológico del intestino delgado y microbiológico; se realizó un diseño estadístico de bloques completos al azar, luego se aplicó un análisis ANOVA y las comparaciones múltiples de medias en caso de existir se procedió a usar la prueba de Duncan (p<0,05) del programa estadístico R version 3.5.2 (2018-12-20). Resultados Análisis de los parámetros zootécnicos y productivos En general los pollos que se sometieron a los 4 tratamientos de inclusión de probióticos (Lactobacillus spp) en el agua de bebida respondieron de forma aceptable presentando un buen estado de salud y no se determinó la presencia de algún agente infeccioso o patológico que obligue a sacrificar de manera inmediata a las aves en estudio. En esta investigación, no se encontró interacción estadística entre los diferentes tratamientos para ninguna de las variables en estudio, por lo que no fue necesario analizar dichas variables de forma independiente. En lo que se refiere al consumo (kg animal-1), se puede observar diferencias significativas entre los tratamientos, en donde los pollos que recibieron el T1 presentaron los menores valores de consumo de alimento con respecto a los demás tratamientos (p<0,05; cuadro 2). Cabe mencionar, que los pollos que se sometieron al tratamiento T0 presentaron mayor valor de consumo, mientras que el resto de pollos que se sometieron a los tratamientos T2 y T3 tuvieron un consumo moderado de alimento. En lo que respecta al peso (kg animal-1), también existió diferencias significativas en el T1 con respecto al resto de tratamientos. 8 La mejor conversión alimenticia de los pollos se tiene con el T1 (1,480) en comparación a los otros 3 tratamientos. Es importante resaltar que el porcentaje de supervivencia y el índice europeo de eficiencia también se logra con T1 en comparación con el resto de tratamientos. Este trabajo, tiene relación con investigaciones realizadas por Anwar et al, (2012), ya que se pudo apreciar el aumento en el peso corporal, el cual puede aumentar la proliferación de tejido muscular o la deposición de grasa en el cuerpo de los pollos. Cuadro 2. Análisis zootécncio y productivo de pollos que se sometieron al probiótico (Lactobacillus spp) en el agua de bebida durante 42 días. Variables Tratamientos RMSE T0 T1 T2 T3 Parámetros zootécnicos Consumo (kg animal-1) 4,987 a 4,346 c 4,656 b 4,636 b 0,065 Peso (kg animal-1) 2,698 c 2,946 a 2,772 b 2,728 bc 0,066 Conversión alimenticia 1,850 a 1,480 c 1,680 b 1,701 b 0,047 Indicadores productivos Supervivencia (%) 84,397 d 95,604 a 88,902 c 90,998 b 0,303 EE 233,493 d 474,462 a 336,714 c 352,774 b 0,208 Grupos según probabilidad de diferencia de medias y nivel alfa (0,05) Las medias con la misma letra no son significativamente diferentes. Se presentaron diferencias significativas (p<0,05) para la variable peso de órganos (%PV) durante el tiempo de desarrollo de esta investigación, donde molleja alcanzo un peso promedio (2,269%), hígado (2,928%) e intestino delgado (6,312%). Cabe destacar, que tanto hígado como intestino delgado obtuvieron los mayores pesos con el T1 no así para el caso de la molleja que alcanzó el mayor peso con el T3 (2,443%). En el análisis alométrico de órganos en los cuatro tratamientos se presentaron diferencias estadísticamente significativas (p<0,05), obteniéndose que la molleja de los pollos presenta un crecimiento promedio (CA=0,49), el hígado (CA=0,62) y el intestino delgado (CA=0,47), como se puede apreciar los órganos analizados en esta investigación, presentan un crecimiento lento (CA<1) en relación con el peso corporal en los diferentes tratamientos (Cuadro 3). El consumo de probióticos ha sido asociado a mejoras en parámetros productivos, los cuales influyen sobre el peso y desarrollo de órganos, específicamente del intestino (Franz et al., 2011). 9 Cuadro 3. Peso de órganos (%PV) y análisis alométrico de pollos que se sometieron al probiótico. Órgano Variables Alométricas Tratamientos EEM T0 T1 T2 T3 Molleja % P.V 1,966 d 2,443 a 2,320 c 2,347 b 0,026 C.A 0,469 b 0,539 a 0,501 ab 0,410 c 0,047 Hígado % P.V 2,208 c 3,517 a 3,208 b 2,779 d 0,029 C.A 0,589 b 0,673 a 0,608 b 0,600 b 0,031 Intestino delgado % P.V 5,42 d 6,98 a 6,25 c 6,60 b 0,043 C.A 0,31 d 0,63 a 0,44 c 0,49 b 0,020 %PV = peso de órganos, C.A = crecimiento alométrico Grupos según probabilidad de diferencia de medias y nivel alfa (0,05) Las medias con la misma letra no son significativamente diferentes. Como podemos observar, se hallaron mayores pesos de órganos en los pollos que se sometieron al T1 (1,5 ml L-1 de probiótico) en el agua de bebida, concretamente Lactobacillus sp., se puede destacar que la cantidad de probiótico a añadir en el agua de bebida no debe ser añadida en exceso ya que pueden tener un efecto contrario al que se busca ya que la utilización de probióticos incide en la retención de nutrientes incluidos en el agua de bebida, la ganancia de peso y el desarrollo de órganos del animal (Tizard, 2009). Tal como lo destacó Alkhalf et al., (2010), el proveer a los pollos con dietas que incluyen probióticos, estos tienen el beneficio de que el tracto digestivo mejore su desempeño. En la presente investigación pudimos constatar el efecto positivo del probiótico añadido al agua de bebida ya que como lo señalan los resultados obtenidos, los procesos de digestión y absorción de nutrientes son más eficaces, ya que esto se refleja en las ganancias de peso de los pollos. Según Svihus (2011), cuando se añaden a la dieta componentes que mejoran la disponibilidad de nutrientes, como en este caso los probióticos, se estimula el crecimiento y desarrollo de la molleja. Análisis morfométrico del intestino delgado Luego de haber realizado el corte histológico del intestino delgado, se procedió a tomar microfotografías para proceder a observar las principales características histomorfológicas, el cuadro 4, presenta los resultados de los parámetros histomorfológicos evaluados en los pollos, así como también los valores de significancia de la interacción entre el efecto del probiótico en el crecimiento de los pollos el tratamiento administrado. Los resultados muestran que los parámetros de alto de mucosa y alto de vellosidad intestinal presentaron diferencias entre grupos. El ancho de vellosidad intestinal, en cambio, fue superior en el T2, observándose una dependencia positiva a la dosis de probiótico del T1(1,5 ml L-1), a diferencia de lo que ocurrió con lostratamientos T2 y T3, los cuales resultaron ser similares. Respecto de la profundidad de cripta, esta fue mayor para T1, diferenciándose del tratamiento control (T0), pero ligeramente cercano a los tratamientos T2 y T3. La relación de la altura de vellosidad y profundidad de cripta fue inferior para el tratamiento testigo (T0), grupo P1, mientras que los tratamientos T1 y T2 presentaron relaciones mayores y similares entre sí, pero el tratamiento T3 muestra un mayor valor para esta relación histomorfológica. 10 En cuanto a la altura de la mucosa esta fue mayor para T1 en contraste con el resto de tratamientos. Cuadro 4. Valores de los parámetros histomorfológicos del intestino delgado de pollos que se sometieron al probiótico. Variables intestinales (μm) Tratamientos EEM T0 T1 T2 T3 Am 1837d 1912a 1908b 1899c 1,514 Avi 1302d 1501a 1498b 1492c 2,510 An-v 109d 179a 175b 171c 2,111 Pc 287b 298a 296a 290b 4,176 AIV:PC 4,54c 5,04b 5,06b 5,14a 0,026 Am= Altura de la mucosa, Avi= Altura de la vellosidad intestinal, An-v: Ancho de la vellosidad, PC= Profundidad de la cripta. Grupos según probabilidad de diferencia de medias y nivel alfa (0,05) Los tratamientos con la misma letra no son significativamente diferentes. Se puede observar que la altura de las vellosidades del intestino delgado difiere significativamente entre los tratamientos propuestos para este estudio, encontrándose mayor altura con el T1, esto está acorde con trabajos realizados por Nicoletti et al., (2010), quienes aportaron a la dieta de pollos de engorde ácidos orgánicos que coadyuvan con el sistema alométrico de los órganos del pollo. Así mismo, Pelicano et al., (2003) identificaron un mayor crecimiento de vellosidades intestinales con la utilización de un prebiótico (MOS) y un ácido orgánico más MOS, comparado con un control en pollos de engorde. Según Heinz (2000), encontraron vellosidades más altas en este segmento en aves alimentadas con dietas a base de probióticos del tipo Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis y Saccharomyces cerevisiae y prebióticos basados en manooligosacáridos (MOS). Análisis microbiológico Se encontró diferencias estadísticas entre los tratamientos para las poblaciones de bacterias pertenecientes al grupo de las enterobacterias, mesófilos y lactobacillus. Existió diferencias de medias para el caso del grupo microbiano de las enterobacterias en todos los tratamientos. En lo que se refiere a las bacterias mesófilas se presentan en un rango entre 8,4 log UFC g-1 para T0 y 9,1 log UFC g-1 para T3 respectivamente. La presencia de bacterias del género Lactobacillus, presenta menor presencia para el tratamiento T0 6,3 log UFC g-1 y la mayor presencia se registra con el tratamiento T1 con 9,9 log UFC g-1 (Cuadro 5). Cuadro 5. Contaje de poblaciones bacterianas en el intestino delgado del pollo, Microorganismo Tratamientos EEM T0 T1 T2 T3 Enterobacterias 8,9a 6,1d 7,4c 8,7b 0,101 Mesófilos 8,4c 8,9ab 8,7b 9,1a 0,122 Lactobacillus 6,3d 9,9a 9,3b 9,1c 0,069 Grupos según probabilidad de diferencia de medias y nivel alfa (0.05) Los medios con la misma letra no son significativamente diferentes. 11 Se puede destacar que la cantidad de enterobacterias (bacterias gram negativas) es menor con el tratamiento T1, esto se relaciona con investigaciones realizadas por Gunal & Yayli, (2006), al adicionar antibiótico y prebiótico. La población de mesófilos se mantuvo estable sin diferencias significativas entre todos los tratamientos, esto se encuentra relacionado con investigaciones realizadas por Williams et al., (2008) donde no encontró diferencias estadísticas en la población de aerobios mesófilos a nivel del ileón de pollos. Cabe destacar, que dentro de este grupo de bacterias se pueden encontrar como miembros a una parte de bacterias lácticas (anaerobias) ya que estas bacterias pueden llegar a ser facultativas. En cuanto a la cantidad de bacterias lácticas, es importante destacar que el T1 presenta el mayor contaje de este grupo de microorganismos. Conclusiones Los resultados obtenidos en ésta investigación mostraron que la adición de probióticos a base de Lactobacillus sp., en el agua de bebida de pollos, tienen un efecto destacado en lo que respecta a los parámetros zootécnicos, alométricos, histomorfológicos del intestino delgado y microbiológicos; dado que se traduce en un mayor crecimiento de las vellosidades intestinales del intestino delgado y en una disminución en la población de entero bacterias y aerobios mesófilos. Por consiguiente, la presencia de bacterias lácticas en el intestino delgado de los pollos de la presente investigación, determina que este grupo bacteriano tienen la capacidad inhibir el crecimiento de bacterias patógenas mediante la producción de bacteriocinas. Referencias Bibliográficas Alkhalf, A., Alhaj, M., & Al-homidan, I. (2010). Influence of probiotic supplementation on blood parameters and growth performance in broiler chickens. Saudi Journal of Biological Sciences 17, 219–225. 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