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LA MICROBIOTA HUMANA. Miles de millones de microorganismos habitan el cuerpo humano e influyen en su desarrollo, fisiología, inmunidad y nutrición. La composición y los efectos de la microbiota humana están determinados por varios factores desde el momento del nacimiento hasta la vida adulta. En una persona saludable: → Las células microbianas superan en número a las células del cuerpo en una proporción de diez a uno (10:1). En el intestino: → Existen aproximadamente 1×1012 microbios → forman un consorcio íntimamente relacionado con el organismo humano: interactúa con él a través de diferentes mecanismos e influye en su desarrollo, fisiología, inmunidad y nutrición. → Este consorcio está compuesto principalmente de bacterias y, en menor medida, hongos, arqueas y virus. Los microbios habitan en nuestra piel, boca, áreas genitales y, especialmente, en el intestino. La microbiota intestinal. Tracto gastrointestinal → Uno de los hábitats con mayor diversidad de microorganismos, por características tales como las condiciones estables de temperatura, osmolaridad y suministro de alimentos. Otras características a lo largo del tracto, como la cantidad de oxígeno en el interior del tubo digestivo, promueven la creación de nichos específicos; esto es, sitios con cualidades que sólo algunas especies microbianas pueden soportar. o Estomago → Tiene un pH 2, en este nicho pueden desarrollarse las especies aerobias y resistentes a la acidez (ej. Helicobacter pylori). o Intestino delgado → Tiene un pH 4 y poco oxígeno, por lo que ahí se encuentran especies aerotolerantes (ej. Principalmente del género Streptococcus y Lactobacillus). o Intestino grueso → Tiene un pH 7 (neutro), es casi en su totalidad anaerobio. Es favorable para la mayoría de los microorganismos. Las especies bacterianas que podemos encontrar aquí son Faecalibacterium, Escherichia y Bifidobacterium, de relevancia clínica por su relación tanto con enfermedades como con su tratamiento. La microbiota intestinal y la salud humana. La microbiota influye en los procesos de salud-enfermedad y otros procesos fundamentales, como el desarrollo y crecimiento. La microbiota es una entidad viviente independiente, que se rige por reglas también independientes del cuerpo humano. Un microbiota normal o en equilibrio contiene especies de microbios que funcionan en conjunto con el cuerpo humano; en este caso, representan una ventaja evolutiva y los Resumen microorganismos comensales (que no producen daño) conviven y trabajan junto con los oportunistas (que pueden producir daño) para evitar que las bacterias patógenas (las que seguramente producen daño) tomen el control de los recursos. Disbiosis → Estado en el que la microbiota es la causa de alguna enfermedad o la fuente de daño hacia el huésped (en este caso, el humano). ¿Qué determina la composición de la microbiota intestinal? La composición de la microbiota intestinal en los humanos está determinada por varios factores: - El modo en que nacemos (parto normal o cesarea). - Dieta que llevamos desde la infancia - El uso de antibióticos - Hábitos sanitarios. Desde el nacimiento. La primera colonización de la microbiota ocurre en el momento del nacimiento. El modo en el que se lleva a cabo el parto (ya sea por vía vaginal o por cesárea) determina el predominio de diferentes grupos microbianos en el intestino de los neonatos. Esto se debe a que, durante el paso a través del canal del útero, los microorganismos de la piel y la vagina de la madre entran en contacto con el recién nacido. Las bacterias dominantes en esta etapa: los géneros Bifidobacterium Clostridium y Bacteroides. Existe otro frente de colonización que se logra por la transferencia horizontal, la cual se da mediante la interacción del neonato tanto con su entorno como con sus grupos sociales más cercanos. Este proceso es especialmente importante para la maduración del sistema inmune, ya que, al parecer, mientras mayor sea la diversidad de microorganismos a los que esté expuesto un infante, más baja será la probabilidad de que presente reacciones alérgicas. Lo que comemos. La dieta es un factor determinante para la composición de la microbiota intestinal, desde la primera etapa de la vida y hasta la edad avanzada. Estudios dependientes de cultivos convencionales y con técnicas moleculares han demostrado: - Las bifidobacterias y bacterias lácticas dominan el intestino grueso de los bebes alimentados con leche materna. - la microbiota intestinal de los infantes alimentados con leche de fórmula es más diversa pero menos estable. Contiene mas bacterias de otros grupos, como los bacteroides, clostridia y enterobacterias. En este sentido, se considera que la alimentación con leche materna promueve una estructura de comunidad microbiana que conduce a respuestas inmunes más eficaces en contra de posibles infecciones. Funciones y cambios de la microbiota Microbioma humano. Conjunto de genes presentes en todas las células microbianas que habitan el cuerpo humano. Después de la infancia, otros eventos importantes a lo largo de la vida se relacionan con modificaciones en la microbiota, por ejemplo, la pubertad y el embarazo. Durante la vida adulta, la composición se mantiene relativamente estable, hasta llegar a la edad avanzada, cuando la relación de los comensales disminuye. Los principios que determinan estos cambios pueden estar asociados a diferentes factores, como la disminución en la actividad física, la motilidad intestinal y otros cambios fisiológicos que modifican el hábitat intestinal Otras consideraciones Existen todavía muchas interrogantes sobre el modo exacto en que las modificaciones en la microbiota intestinal afectan la salud humana. Los microorganismos generan diferentes productos o metabolitos bajo circunstancias específicas, así como productos derivados de su expresión genética; a su vez, interactúan con el sistema inmunológico y sus componentes, así como con el sistema nervioso central. Todo esto crea una red de interacciones muy compleja y difícil de entender. Resumen. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA: CONOCIMIENTOS BÁSICOS PARA UN CLÍNICO. La microbiología clínica es una ciencia de juicio interpretativo que responde a las necesidades clínicas del médico tratante, con el fin de identificar el agente etiológico de una infección y establecer la actividad in vitro de las drogas antimicrobianas contra el (los) microorganismo (s) identificado (s). Para maximizar el valor clínico de las pruebas diagnósticas microbiologías debe de existir una estrecha colaboración entre el medico tratante, la enfermera y el laboratorio. Funciones principales del laboratorio de microbiología y del médico microbiólogo: • Garantizar un rápido resultado clínico, que contribuya a la toma de decisiones. • Coordinar el aviso telefónico de un resultado critico al medico tratante o personal del equipo médico. • Desarrollar guías de reporte de resultados de susceptibilidad antimicrobiana en conjunto con el personal medico • Publicar patrones de susceptibilidad antimmicrobiano, para ser usados como guías en tratamiento empírico. La interpretación de los resultados obtenidos en el laboratorio de microbiología depende de la calidad de las muestras recibidas, siendo el manejo previo a su recepción en el laboratorio, crítico para la exactitud de los resultados. Un manejo inadecuado de la muestra puede producir resultados erróneos, los que afectan directamente la salud del paciente e influencian las decisiones terapéuticas. Los mejores resultados para los pacientes derivan de las asociaciones sólidas entre el médico tratante y el especialista técnico del laboratorio. Se debe fomentar una comunicación clara y cercana entre médicos, enfermeras y personal del laboratorio. ETAPA PRE-ANALITICA: SELECCIÓN, RECOLECCIÓN Y TRANSPORTEDE LA MUESTRA. Para obtener resultados que avalen el diagnostico de enfermedades infecciosas, es esencial realizar una apropiada recolección y manipulación de la muestra. El manual de toma de muestras debe detallar: ▪ El tipo de muestra apropiado para cada caso. ▪ La forma de recolección de la muestra. ▪ Las condiciones de transporte hacia el laboratorio (tiempo de transporte ideal, tipo de envase para la recolección de la muestra y temperatura de transporte). ▪ Conservación de la muestra. ▪ Las políticas del laboratorio (por ejemplo: número de muestras que pueden ser sometidas a una determinada prueba y el tiempo de respuesta de cada una). Se debe procurar obtener la muestra antes de instaurar una terapia antimicrobiana o bien antes de introducir cualquier modificación del tratamiento antimicrobiano, debido a que disminuye el rendimiento de la prueba. Los sistemas de recolección utilizados deben ser estériles, herméticos y apropiados al tipo y volumen de muestra que se desea obtener. Las condiciones de transporte de las muestras deben ser mantenidas cuidadosamente, desde su recolección hasta su recepción en el laboratorio, ya que permiten mantener su integridad. Éstas deben llegar rotuladas perfectamente y con la información completa, idealmente con uan etiqueta adherida al envanse. Algunos de estos datos son: ▪ Antecedentes personales del paciente. ▪ Diagnóstico presuntivo. ▪ Sitio específico de recolección y tipo de muestra. ▪ Administración previa de antimicrobianos. ▪ Datos de médico tratante. ▪ Alerta en caso de sospecha de un microorganismo altamente patogénico (por ejemplo: Neisseria meningitidis). ETAPA ANALÍTICA: DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO. Una vez recibida la muestra en el laboratorio, el personal verifica: - Adecuada calidad, correcto transporte, completa y concordante rotulación entre el sistema de recolección y la orden del examen. - Cuando cumple con todos los requisitos establecidos, se registra en el sistema informático o libro de registro, iniciándose así la etapa analítica. Esta etapa de diagnóstico microbiológico puede ser abordada con diversas estrategias, ya sea realizando una detección directa del agente etiológico a través del diagnóstico microbiológico directo o mediante el diagnóstico microbiológico indirecto: 1. DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO DIRECTO. - Permite evidenciar directamente el microorganismo o parte de su estructura en una muestra. - Cuando el agente patógeno es recuperado completamente en una muestra a través del cultivo es posible caracterizarlo y conocer su susceptibilidad antimicrobiana. En ocasiones los microorganismos no son recuperados desde un cultivo o presentan un crecimiento muy lento → en estos casos se utilizan metodologías aplicadas directamente a la muestra (Diagnostico no tradicional). a. Diagnostico directo tradicional consiste en: I) Observación directa de la muestra: entrega información rápida a través de la examinación microscópica de la misma, donde es posible observar bacterias, hongos, algunas estructuras parasitarias e inclusiones virales. Este procedimiento puede realizarse a través de la microscopia directa al fresco, sin utilizar tinciones o a través de la microscopia directa con tinciones. II) Cultivo de la muestra: Constituye una técnica básica para poder aislar y posteriormente identificar los microorganismos presentes, a través de la siembra e incubación en medios de cultivo artificiales. El éxito del procedimiento es dependiente de las condiciones de incubación. La selección del medio de cultivo utilizado para realizar el cultivo primario se basa en el conocimiento del diagnostico presuntivo del paciente, sitio de recolección de la muestra y en la fisiología de las bacterias u hongos que podrían estar causando la infección. cabe destacar que el cultivo microbiano requiere de más tiempo que otras pruebas. III) Identificación del organismo aislado: En un cultivo se realiza a través de diferentes metodologías, tales como, observación de las características macroscópicas de las colonias, observación microscópica con tinción de la colonia, estudio del comportamiento metabólico y químico, a través de la aplicación de pruebas manuales o automatizadas; pruebas de requerimiento nutricional y pruebas diagnósticas no tradicionales. b. Susceptibilidad antimicrobiana. Posterior al aislamiento e identificación de un microorganismo clínico significativo, se realiza la prueba de susceptibilidad antimicrobiana. El estudio de susceptibilidad antimicrobiana, es un método que determina, in vitro, la susceptibilidad de las bacterias y hongos, respectivamente, a los antimicrobiano. La susceptibilidad antimicrobiana puede ser obtenida a través de 3 tecnicas: i) Difusión con disco (método de Kirby-Bauer) → entrega información cualitativa de la sensibilidad de un microorganismo a un determinado antimicrobiano. ii) Epsilometria o E-test → entrega información cuantitativa de la sensibilidad del microorganismo, determinando la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) de un antimicrobiano, es decir, la concentración mínima del antimicrobiano que es capaz de inhibir el crecimiento de un microorganismo determinado. iii) Dilución → Es la metodología estándar de oro para obtener susceptibilidad antimicrobiana, entrega información cuantitativa, determinando la CIM. c. Diagnostico directo no tradicional: Permite realizar la detección del agente etiolgico directamente de la muestra o a partir de un microorganismo aislado previamente desde un cultivo. Entre las metodologías utilizadas para realizar un diagnostico directo no tradicional se encuentran: I. Métodos inmunológicos. Detectan antígenos del microorganismo utilizando un anticuerpo especifico, el cual esta unido a un sistema de detección. Entre las técnicas mas utilizadas en el laboratorio de microbiología se encuentra: inmunocromatografia, la aglutinación con partículas de latex, la inmunofluorescencia. II. Métodos basados en acido nucleico. Son técnicas altamente sensibles y especificas, capaces de detectar y cuantificar pequeñas cantidades de ADN o ARN de microorganismos no cultivables in vitro o desde un microorganismo aislado desde un cultivo. Este avance también ha permitido estudiar los mecanismos de resistencia bacteriana y desarrollar la epidemiologia molecular. La técnica mas utilizada en microbiología es la Reacción de Polimerasa en Cadena (RPC). III. Espectrometria de la masa. Es una metodología recimiente incorporada al diagnostico microbiologico. Permite una rápida detección (pocos minutos) de un microorganismo aislado desde un cultivo a través del análisis de sus proteínas y posterior búsqueda y comparación de su espectro de proteínas en una base de datos, donde se identifica el microorganismo a nivel de genero y especie. 2. DIAGNÓSTICO MICROBIOLOGICO INDIRECTO. El diagnóstico microbiológico indirecto o estudio serológico permite detectar indirectamente un agente patógeno a través de los anticuerpos específicos producidos por el hospedero frente a dicho patógeno. Permite diferenciar una infección primaria de una reinfección o infección crónica. Los laboratorios de microbiología utilizan principalmente las técnicas de ELISA, inmunofluorescencia indirecta y de floculación. ETAPA POST-ANALITICA: REPORTE DE RESULTADOS. En esta etapa los resultados obtenidos por el laboratorio de microbiología son transferidos al sistema informático, emitiéndose un informe final, el cual debe estar rápidamente disponible para ser visualizado por el personal de las diferentes áreas del laboratorio clínico y por el médico tratante. PARED BACTERIANA DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS Membrana citoplasmática GRAM NEGATIVAS ESTRUCTURA Peptidoglucano: - Proporciona rigidez y forma. - Constituido por cadenas detipo glucano de N- acetilglucosamina y ácido N- acetilmuramico. Pared celular Espacio periplasmatico: - Zona comprendida entre la superficie externa de la membrana citoplasmatica y la superficie interna de la membrana externa. - Contiene enzimas hidrolíticas. Membrana externa: - Constituida de fosfolípidos y moléculas anfipaticas Proteínas: - Lipido A - Núcleo o región central “R”. - Antigeno O. Capsula y capa de limo Flagelos Membrana citoplasmática Pared celular - Gruesa capa de peptidoglicano: otorga rigidez y forma - ácidos teicoicos - ácido lipoteioico - -Proteínas - polisacáridos Periplasma GRAM POSITIVAS ESTRUCTURA TABLA DE DIFERENCIAS DE ENTRE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS. GRAM NEGATIVAS GRAM POSITIVAS Tienen capa delgada de peptidoglicano Tienen una capa gruesa de peptidoglicano Contienen membrana lipídica externa No tienen membrana lipídica externa Contienen endotoxina: Contiene LPS No contienen endotoxina Se tiñen de rojas- rosas Se tiñen de Azul-violeta Contienen acido teicoico
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