Se utiliza técnicas comerciales con anticuerpos monoclonales que contienen anticuerpos eritrocitarios conocidos para probar que la sangre del donad...

Se utiliza técnicas comerciales con anticuerpos monoclonales que contienen anticuerpos eritrocitarios conocidos para probar que la sangre del donador está libre del antígeno, para confirmar la ausencia de una reacción antígeno-anticuerpo, el suero del receptor se prueba en contra de las células sanguíneas del donador.24, 1.6.2.5.- Anticuerpos Monoclonales Los reactivos de tipificación monoclonales son una poderosa herramienta y están siendo usados cada vez con mayor insistencia para la fenotipificación antigénica de los glóbulos rojos en lugar de los reactivos policlonales. Los anticuerpos monoclonales difieren de los anticuerpos convencionales en tres características: Especificidad: reaccionan con un único determinante antigénico en lugar de hacerlo con múltiples de ellos. Pureza: todo, no solamente una fracción del contenido proteico sérico es inmunoglobulina. Reproductibilidad: se espera la misma especificidad y afinidad para cada subcultivo proveniente de un único clon. Los anticuerpos monoclonales del anti-D, anti-C, anti-E, anti-c, anti-e son derivados de humanos no así los anticuerpos monoclonales para la tipificación ABO son derivados de animales murinos.4 1.6.2.6.- Determinación de fenotipo Rh en gel El principio del método se basa en la técnica de aglutinación en gel por Lapierre para la detección de las reacciones de aglutinación de los eritrocitos. La aglutinación se produce al entrar en contacto los antígenos eritrocitarios con los anticuerpos correspondientes, presentes en el reactivo o en la muestra de suero o plasma. La tarjeta en gel de ID-Cards es un soporte de plástico constituido por 6 microtubos (Figura 3). Cada microtubo está formado por una columna y una cámara de dispensación/incubación. Figura 3. Tarjeta en gel de ID-Cards. Específicos para la fenotipificación del Rh. Cada columna contiene microesferas de dextranos polimerizados en un medio amortiguado que actúan como filtro. Los dextranos se encuentran mezclados en un reactivo que contiene anticuerpos específicos en un amortiguador. Los microtubos que contienen específicos incorporados a la solución de gel actúan como medio de reacción y los eritrocitos aglutinan al contacto con los anticuerpos. Durante la centrifugación, los aglutinados de hematíes son atrapados según su tamaño, en la superficie o a lo largo de la columna de gel (Figura 4). Los hematíes no aglutinados descienden hasta el fondo del microtubo. Figura 4. Aspecto de la reacción con diferentes grados de aglutinación en la tarjeta en gel de ID-Cards Cada microtubo de la tarjeta ID-Cards Gel Rh contiene dextranos polimerizados en medio amortiguado, con conservadores y mezclados con distintos reactivos. Los diferentes microtubos se identifican mediante la etiqueta frontal de la tarjeta. Microtubos C: anti-C monoclonal (anticuerpos IgM de origen humano, clon P3x25513 G8) Microtubo c: anti-c monoclonal (anticuerpos IgM de origen humano, clon MS 33) Microtubo E: anti-e monoclonal (anticuerpos IgM de origen humano, clon 906) Microtubo e: anti-e monoclonal (mezcla de anticuerpos IgM de origen humano. Clones MS 16 Y MS 63) Las muestras de sangre a analizar deben ser de extracción reciente. No se deben utilizar muestras hemolizadas, turbias, contaminadas o con presencia de coágulos. Si es necesario, pueden usarse muestras conservadas entre 2.8°C hasta por 48 horas después de su extracción. 1.6.3.- Definición de Términos Antígenos: Sustancia propia o extraña, que introduciendo en el organismo es capaz de provocar una reacción inmunitaria. Antígenos Eritrocitarios: Son distribuciones inmunoquímicas presentes en la membrana de los glóbulos rojos pudiendo ser glucolípidos, proteínas y glucoproteínas. Anticuerpos: Son proteínas que se encuentran en la circulación sanguínea en respuesta a la entrada de un antígeno extraño. Anticuerpos Eritrocitarios: Son usualmente Ig G y/o IgM y en casos raros IgA. Aloinmunización: Es la producción de anticuerpos por un organismo en respuesta a la introducción de antígenos provenientes de otro diferente, pero de la misma especie. Inmunogeno: Son antígenos que elucitan una fuerte respuesta inmune. Epítope: Es la unión específicamente de la región de un antígeno que puede unirse a un anticuerpo. In vivo: La reacción entre el antígeno y su correspondiente anticuerpo se efectúa en el organismo. In vitro: Cuando se realiza en un tubo de ensayo, donde se mezclan e incuban eritrocitos adecuados con el suero en estudio. Autoinmunidad: Es consecuencia de la activación de clones autorreactivos por parte de antígenos propios con las subsecuentes respuestas humorales y celulares dirigidas contra ellos. Homozigoto: Organismo diploide que lleva alelos idénticos en uno o más locus génicos. Heterozigoto: Individuo que para un gen dado tiene en cada cromosoma homologo un alelo distinto. Inmunización: La inmunidad es la capacidad del organismo para hacer frente a la entrada de patógenos o sustancias extrañas, es decir, es un estado de protección. Aloanticuerpos: Es aquél anticuerpo que se produce como resultado de la exposición de un organismo a antígenos extraños, no reacciona con los antígenos presentes en los hematíes del productor de los anticuerpos. Fenotipo: Son los antígenos presentes en los glóbulos rojos de una persona. Alelo: Es una forma alternativa de un gen que se localiza en una posición específica de un cromosoma específico. Estos códigos genéticos determinan distintas características o rasgos que se heredan de padres a hijos. Auto anticuerpo: Son anticuerpos que aparecen en la sangre y que luchan contra las células del propio cuerpo. Anticuerpos monoclonales: Son excelentes como anticuerpos primarios en un ensayo, o para detectar antígenos en un tejido y frecuentemente dan significativamente menos tinción de fondo. Sensibilización: Proceso por el que la respuesta inmunitaria activada por un antígeno se da posteriormente con mayor intensidad cuando se presenta otra vez este antígeno. Alosensibilización: Aparición de anticuerpos en un organismo que ha recibido un antígeno procedente de un individuo de la misma especie. Sistema de columna (gel): Prueba basada en la exclusión en base al tamaño de los elementos reactantes que tiene lugar en el seno de una matriz inmunológicamente inerte.