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La placa de tipo en la E. coli Cepas Cepa de fagos T4 r * rl RLL rlll B Salvaje Grande Grande Grande S Salvaje Grande Salvaje Salvaje K salvaje Grande Sin placas Salvaje Ejemplo 12.27. Si dos mutantes RLL arco añadió que esforzarse KI2 en número suficiente para asegurar que cada célula está infectado con al menos uno de cada mutante, unc de los dos resultados se observa. Si todo el E. cali Células K12 LysC después de un ciclo de propagación normal (20-30 minutos), podemos inferir que los mutantes eran en diferentes unidades funcionales (cistrones). Cada mutante estaba haciendo una cadena de polipéptido diferente, y las dos cadenas "cooperaron" para permitir un tamaño normal ráfaga de ocurrir. Por otro lado, si los dos fagos RLL contienen una mutación en el mismo cistrón, fago progenie sólo puede ser producida por recombinación genética con una frecuencia depende de cómo clo.se las dos mutaciones puntuales están vinculados. En cualquier caso, sólo unos pocos de las células que se esperaría para lisar por este mecanismo en el mismo período de tiempo. Por lo tanto, los resultados de la complementación de arco distinguen fácilmente de los de recombinación. Benzcr encontró que todas las mutaciones puntuales en la región rU asignada en 2 cistrones (A y B). (B) Asignación de borrado. Benzer también encontró que alrededor del 10% de sus mutantes RLL más de 2000 no lo hizo backmutate a su forma natural porque eran supresiones de varias longitudes. Al infectar células con dos diferentes deleciones, recombinantes de tipo salvaje se podrían producir si las supresiones no se superponían. De Por supuesto, los recombinantes de tipo salvaje no se puede producir si las dos deleciones se superponen a cualquier medida. Por lo tanto. por una serie de cruces fue capaz de dibujar un mapa topológico en el que las supresiones se mostró a solaparse o no solaparse. Las longitudes de las deleciones o el grado de solapamiento o nonoverlap es arbitraria en este punto, a pesar de que se pueden determinar por cruces con mutaciones puntuales. Después de haber obtenido un mapa topológico. es entonces posible asignar una o más mutaciones puntuales a un segmento relativamente pequeño de un cistrón cruzándolas con mutantes de deleción. Una mutación puntual no puede recombinarse con una deleción en el mismo sitio. Este principio permite Benzer a mutantes grupo dentro de regiones relativamente pequeñas de cada cislron. No allempl para ordenar las mutaciones puntuales dentro cada uno de estos pequeños segmentos, pero él no les someta a pruebas de recombinación para determinar la identidad o no identidad. Esto se logró mediante doblemente infectar la cepa B con un par de mutantes puntuales RLL (Ej. Rlla y rllb) en caldo, y luego lo que les permite lisar la cultura. El número total de progenie fago se puede estimar mediante diluciones de galvanoplastia de este lisado sobre E. coli B y contando el resultado placas. Recombinantes de tipo salvaje se puntúan en placas el lisado de la cepa K. Para cada tipo salvaje de una región genética cuya longitud total está a sólo 8 unidades de recombinación. Por lo tanto se concluyó que los cistrones de la región RLL cada uno contenía cientos de posibles sitios de mutación, y que la recombinación puede ocurrir entre el más cercano de estos CHAP. I2 | GENÉTICA DE BACTERIAS Y BACTER1OPHAGES 333 sitios mutante. Razonó que la distancia más pequeña dentro de la cual se produce la recombinación (Recon) fuerza ser tan pequeño como pares de nucleótidos adyacentes. El bit más pequeño de ADN que cuando mutado podría causar una efecto fenotípico (Muton) se encontró que era tan pequeño como cinco pares de nucleótidos o más pequeñas. Desde Benzer de observaciones, el muton se ha demostrado que es un solo par de bases de nucleótidos. Un hallazgo sorprendente de este trabajo fue que los mutantes puntuales no se encuentran al azar en el RLL región; unos pocos lugares en ambos cistrones tenían muchas más mutaciones que en otros lugares (más de cien en un par de posiciones frente sobre I 10 en otros lugares). La razón de estos llamados puntos calientes es actualmente desconocido. Problemas resueltos BACTERIAS I2.I.The disciplina de la genética bacteriana se inició en 1943, cuando SE Luria y Delbrück M. publicados un documento titulado "mutaciones de bacterias de la sensibilidad del virus a la resistencia a virus." Antes de esto tiempo, no se sabía si la herencia de bacterias cambiado de forma adaptativa en formas específicas como una consecuencia de la exposición a ambientes específicos, o si mutantes específicos existía en el población antes de un desafío ambiental, esta última actúa como un agente selectivo para aumentar los números de los mutantes adaptativos. La idea anterior era de Lamarck, este último era neo- Darwiniana. Luria y Delbrück encontraron que había una gran variación de un ensayo a otro en el número de E. colt que eran resistentes a la lisis por fagos T l. Con el fin de determinar cuál de las dos hipótesis era correcta, idearon el siguiente "prueba de fluctuación". Veinte 0,2 mililitros "culturas individuales" y un 10 mililitros "cultivo en masa" de medio nutriente se incubaron con aproximadamente IOJ E. coli células por mililitro. Los cultivos se incubaron hasta que contenían aproximadamente I0 8 células / ml 11 iliter. La totalidad de 0,2 mililitro de cada cultivo individual se extiende sobre un nutriente placa de agar en gran medida sembró con fagos Tl. Diez muestras de 0,2 mililitros del cultivo en masa eran también tratados de manera similar. Después de la incubación durante la noche, el número total de Tl-resistente (Ton ') células bacterianas se contó; los resultados se presentan en la siguiente tabla. ¿Qué inferencias pueden pueden extraer de esta "prueba de fluctuación"? Culturas Individuales Cultura Número 1 Número de Las colonias resistentes t Las muestras de Cultura granel Muestra Número 1 2 Número de Las colonias resistentes 14 15 13 21 15 14 26 16 20 13 2 3 4 5 6 7 8 9 0 3 0 3 4 5 6 7 8 9 10 0 5 0 5 0 6 107 0 a 1) 12 13 14 15 16 17 18 19 20 0 0 1 0 0 64 0 35 Solución: GENÉTICA DE BACTERIAS Y BACTER1OPHAGES | CHAP. 12 Las variaciones para cada experimento se pueden calcular a partir de la plaza de fórmula [9.2): las culturas individuales tienen una varianza de 714,5. mientras que la varianza de las muestras del cultivo a granel es 16,4. En una Poisson distribución, la media y la varianza son esencialmente idénticas; por lo tanto, la varianza / media razón debería ser la unidad (10). La varianza / media razón para las muestras de cultivo a granel es de 16,4 / 16,7 = 0,98 o casi 1.0, como esperado de una distribución aleatoria de eventos raros. Las muestras de la cultura mayor sirven colectivamente como un control para los cultivos individuales. La misma relación que para las culturas individuales, sin embargo, es 714,5 / 11,3 = 63.23. indicando que no son extremadamente amplias fluctuaciones de los números de células Ton 'en cada cultura alrededor de la media. Si la resistencia a los fagos Tl se produce con una probabilidad dada sólo después del contacto con el fagos, cada cultura tanto de los experimentos individuales y por lotes debe contener aproximadamente el mismo número promedio de células resistentes. Por otro lado, ocurrido si TONR mutantes antes del contacto con los fagos. gran variación alrededor de la media se espera de una cultura a otra persona, ya que algunos incurrirá en una mutación temprana y otros fines (o en absoluto) durante el período de incubación. Este experimento argumenta a favor de la hipótesis de la mutación y en contra de la hipótesis de la resistencia inducida. Ciertas mut