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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE QUÍMICA ALIMENTOS FERMENTADOS DE MAÍZ EN MÉXICO, LATINOAMÉRICA Y ÁFRICA TRABAJO MONOGRÁFICO DE ACTUALIZACIÓN QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE QUÍMICA DE ALIMENTOS PRESENTA MARIANA CAPORAL FLORES MÉXICO, D.F. 2014 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. JURADO ASIGNADO: PRESIDENTE: Profesor: OLGA DEL CARMEN VELAZQUEZ MADRAZO VOCAL: Profesor: MARIA DEL CAMEN WACHER RODARTE SECRETARIO: Profesor: GLORIA DIAZ RUIZ 1er. SUPLENTE: Profesor: MARTHA GILES GOMEZ 2° SUPLENTE: Profesor: NORMA ANGELICA CAMACHO DE LA ROSA SITIO DONDE SE DESARROLLÓ EL TEMA: LABORATORIO 324 DEPARTAMENTO DE ALIMENTOS Y BIOTECNOLOGÍA CONJUNTO E FACULTAD DE QUÍMICA ASESOR DEL TEMA: MARÍA DEL CARMEN WACHER RODARTE SUSTENTANTE : MARIANA CAPORAL FLORES Contenido Resumen……………………………………………………………………………........... 1 Objetivos………………………………………………………………………………........ 2 Metodología……………………………………………………...………………….......... 3 Capítulo 1. Introducción…………………………………………………........................ 4 1.1 El maíz................................................................................................................. 4 1.2 Historia ................................................................................................................ 4 1.3 Importancia ceremonial y religiosa....................................................................... 5 1.4 Botánica y crecimiento......................................................................................... 8 1.5 Clasificación......................................................................................................... 8 1.6 Estructura y composición .................................................................................... 9 1.7 Compuestos bioactivos y antinutrientes............................................................... 11 1.8 Producción........................................................................................................... 13 1.9 Usos del maíz...................................................................................................... 13 Capítulo 2. Nixtamalización ……………………………………………….……….......... 15 2.1 Historia …………………………..…………….…................................................... 15 2.2 Beneficios y desventajas ……….......................................................................... 15 2.3 Proceso ………………………………………………………………......................... 15 2.4 Cambios físicos y químicos ……………………………………………................... 16 2.4.1 Pericarpio……………………………………………………………....................... 17 2.4.2 Almidón…………………………………………………………………....…............ 18 2.4.3 Calcio………………………………………………………………….…….............. 20 2.4.4 Proteínas………………………………………………………………..................... 22 2.4.5 Lípidos………………………………………………………………….................... 23 2.4.6 Agua…………………………………………………………………........................ 24 2.4.7 Nejayote …………………………………………......………………....….............. 25 2.5 Cambios sensoriales …………………………………………………….................. 25 2.6 Microbiología de masa nixtamalizada………………………………………........... 26 Capítulo 3. Fermentación ……………………….……………………............................ 27 3.1 Fermentación………………………………………………………...………..…........ 27 3.1.1 Fermentación láctica……………………………………………...………..…........ 27 3.1.2 Fermentación de ácidos mixtos…………………………………………....…....... 27 3.1.3 Fermentación alcohólica……………………………………………...……............ 27 3.1.4 Fermentación acética……………………………………………...……..……......... 28 3.2 Fermentación en alimentos y productos fermentados …………………................. 28 3.2.1 Alimentos fermentados de cereales ………….................................................... 29 3.3 Microorganismos involucrados en la fermentación de alimentos …….................. 29 3.3.1 Bacterias ácido lácticas........……………………………………………..............… 29 3.3.2 Bacillus……………………………………………...…………................................. 30 3.3.3 Levaduras........................................................................................................... 30 3.3.4 Hongos……………………………………………...…………................................. 30 3.4 Fermentación natural o inducida …………………………………………....…....... 31 3.5 Prebióticos y prebióticos en la fermentación de alimentos…………….................. 31 Capítulo 4. Alimentos fermentados de maíz en México y Latinoamérica….…............ 35 4.1 México ………………………………………………………………………............... 36 4.1.1 Pozol………………………………………………………………………………..... 36 4.1.1.1 Propiedades funcionales del pozol................................................................ 43 4.1.2 Chorote…………………………………………………………………………..…... 44 4.1.3 Tesgüino…………………………………………………………………..……........ 46 4.1.4 Axocot…………………………………………………………….........………......... 50 4.1.5 Sendecho o pulque de maíz ………………………………………………............ 52 4.1.6 Tepache …………………………………………………………………….............. 53 4.1.7 Paj sa’il…………………………………………………………………………......... 53 4.1.8 Sambumbia……………………………………………………………......….…...... 54 4.1.9 Tejuino …………………………………………………………………………......... 55 4.1.10 Atole agrio de Tabasco……………………………………………...................... 56 4.1.11 Otros alimentos fermentados de México……………………………………...... 60 4.2 Perú ………………………………………………...............…………………........… 61 4.2.1 Chicha ………………………………………………………………….....……........ 61 4.3 Brasil………………………………………………………………………………........ 65 4.3.1 Cauim…………………………………………………………………………........... 65 4.4 Colombia……………………………………………………………….……….…....... 65 4.4.1 Champús………………………….....……………………..………………….......... 65 4.5 Otros alimentos fermentados de Latinoamérica…………………………............... 66 Capítulo 5. Alimentos fermentados de maíz en África…………………….….............. 67 5.1 Introducción……………………………………………............................................ 67 5.2 Ogi……………………….………………………………………..………………........ 68 5.3 Mahewu o amahewu……………………………………...………………….…......... 69 5.4 Pito………………………………………………………………………………......…. 69 5.5 Uji …………………………………………………………………………………........ 70 5.6 Kenkey ……………………………………………………………………………........ 70 5.7 Otros alimentos fermetados de África………………………………..…….............. 71 Conclusiones……………………………………………………………………….......….. 72 Referencias …………………………………………………………………………......... 73 Índice de Tablas Tabla 1. Composición química de diferentes tipos de maíz....................................... 10 Tabla 2. Composición química de las estructuras de maíz........................................ 11 Tabla 3. Composición del nejayote............................................................................ 25 Tabla 4. Microorganismos considerados probióticosy ejemplos............................... 32 Tabla 5. Composición del pozol con y sin cacao....................................................... 36 Tabla 6. Concentración de bacterias en función del pH y del tiempo de fermentación...........................................…..…..…..…..…..…..…..…..…..…..…..….. 41 Tabla 7. Cambios químicos durante la fermentación del chorote.....…………......…. 45 Tabla 8. Análisis químico del tesgüino..………………………………...……….....…... 49 Tabla 9. Análisis químico del axokot .......…………………………....…,..................... 50 Tabla 10. Alimentos indígenas elaborados a base de maíz en México …………...... 60 Tabla 11. Composición química de la chicha.……………………………….....……... 62 Tabla 12. Productos fermentados de maíz de Latinoamérica..........……………….… 66 Tabla 13. Composición química del ogi.......…………………………………….…....... 69 Tabla 14. Productos fermentados de maíz producidos en África............................... 71 Índice de Figuras Figura 1. Teosinte e híbridos del teosinte y del maíz……………………….....…….... 4 Figura 2. Diferentes variedades de maíz................................................................... 8 Figura 3. Diagrama de bloques del proceso de nixtamalización……………….......... 16 Figura 4. Imagen microscópica 400X, del (a) grano cocción-alcalina 1 h, 92 ºC, (b) grano remojado 3 h, 92ºC……………………………………….....……….................... 18 Figura 5. Imagen obtenida por microscopía electrónica del almidón en la masa de maíz.........................................................................................................…......…….. 20 Figura 6. Imagen microscópica de la entrada de calcio (a) por percolación; (b) formación de agregados de calcio en las capas internas del pericarpio; 4 h remojo a 82ºC ……………..…………………………............................................................... 21 Figura 7. Efecto de la nixtamalización en la estructura del grano (a) cocción 50 min, 90ºC; (b) cocción 120 min, 90ºC........................................................................ 23 Figura 8. Contenido de calcio y humedad durante la cocción y remojo en el grano de maíz ……………………………………………………………….......……................. 24 Figura 9. Diagrama de flujo para la elaboración de pozol...…………………......….... 38 Figura 10. Danzante odami bebiendo tesgüino en una ceremonia de maíz…......… 47 Figura 11. Diagrama de flujo para la elaboración del tesgüino…………….......…….. 48 Figura 12. Elaboración del axokot. (A) Elaboración de la pasta dulce, (B) vaciado del atole hervido al cántaro, (C) adición de las brasas de carbón, (D) cántaro cubierto con hojas de platáno, (E) condiciones de fermentación............................... 50 Figura 13. Diagrama de flujo para la elaboración de axokot……………….......…….. 52 Figura 14. Diagrama de flujo para la elaboración de sambumbia………..…......…… 55 Figura 15. Venta de tejuino en Puerto Vallarta, Jalisco............................................. 56 Figura 16. Elaboración del atole agrio por fermentación sólida en la comunidad Cerro blanco, Tabasco............................................................................................... 57 Figura 17. Diagrama de flujo del atole agrio de Tabasco.......................................... 59 Figura 18. Elaboración de la chicha en Chulucanas, Perú………………….....…...... 61 Figura 19. a) Filtración de la chicha después de la cocción, b) fermentación de la chicha en ollas de barro…………………………………………………........................ 63 Figura 20. Diagrama de flujo de la chicha…………………………….......................... 64 1 Resumen En este trabajo se presenta una compilación de la información más reciente y relevante sobre el maíz, la nixtamalización y los productos fermentados de maíz en México, Latinoamérica y África. Se describe el proceso de nixtamalización y los cambios físicos y químicos más importantes que ocurren en el proceso. Se describen también las bebidas fermentadas de maíz más comunes e importantes, el proceso de elaboración, los cambios químicos y los microorganismos que participan en los procesos de fermentación. A partir de la investigación realizada se concluye la importancia de caracterizar las bebidas fermentadas de maíz indígenas, a fin de no perder dicho patrimonio. 2 Objetivos • Identificar en la literatura los alimentos fermentados de maíz en México, Latinoamérica y África. • Describir los cambios químicos y físicos que ocurren durante el proceso de nixtamalización. • Describir los alimentos fermentados de maíz, el proceso de elaboración, los cambios químicos y la microbiología de los alimentos fermentados de maíz en México, Latinoamérica y África. • Enfatizar la importancia de caracterizar los alimentos indígenas fermentados de maíz para que prevalezcan en el tiempo y su posible uso como alimentos funcionales. 3 Metodología Se realizó una revisión bibliográfica exhaustiva en artículos científicos, revistas científicas, libros y páginas de internet fidedignas. Entre las principales fuentes revisadas se encuentran: • Applied and Environmental Microbiology • International Journal of Food Microbiology • Journal of Applied Microbiology • Journal of Cereal Chemistry • Journal of Food Chemistry • Journal of Plant Foods for Human Nutrition • Letters in Applied Microbiology • Springer science • World Journal of Microbiology and Biotechnology Se revisó, identificó, clasificó y analizó la información más relevante de las fuentes consultadas tratando de hacer énfasis en las publicaciones más recientes; sin embargo, debido a la naturaleza del tema de investigación, se revisaron fuentes de años anteriores. 4 Capítulo 1. Introducción 1.1 El Maíz 1.2 Historia El maíz, cuyo nombre científico es Zea mays, es originario de Mesoamérica. La evidencia arqueológica sugiere que la domesticación ocurrió al menos hace 6 000 años en la región central de México. Es derivado del teosinte, el cual es un grupo de pastos largos del género Zea que se encuentran en México, Guatemala y Nicaragua. El teosinte tiene tallos ramificados con numerosas mazorcas pequeñas en diferentes ramas, cada mazorca contiene sólo dos hileras de granos envueltos en una estructura endurecida (Biodiversidad Mexicana, 2012); las semillas son amargas (Figura 1). Desde la época prehispánica el maíz fue gradualmente seleccionado y diversificado hasta establecer las diferentes formas, tamaños y colores que actualmente existen (Tuxill et al., 2010). La domesticación se llevó acabo mediante la hibridación y la cruza de teosinte con variedades de maíz silvestre ya que estos son capaces de autopolinizarse y polinizarse entre ellos. El maíz era de importancia ceremonial y económica para las culturas prehispánicas, éste fue diseminado en Europa después del descubrimiento de América en el siglo XV; actualmente es cultivado a nivel mundial. Figura 1. Teosinte e híbridos del teosinte y maíz (Biodiversidad Mexicana, 2012). 5 1.3 Importancia ceremonial y religiosa La función del maíz va más allá de su uso como alimento en las culturas prehispánicas, tuvo gran importancia económica, religiosa y sociocultural. Fue usado en alianzas, como símbolo de jerarquía, estatus y poder; de gran importancia religiosa y ceremonial evidenciado por las imágenes al dios(a) del maíz. Adicionalmente se utilizó para interpretar presagios, realizar profecías y adivinar el futuro (Staller, 2010). Para los Aztecas el maíz fue crucial en ritos y sacrificios ofrecidos a las deidades. Durante las sequías ofrecían pan de maíz y aves al dios Quetzalcóatl para que hubiera lluviasy fertilidad en la cosecha. Se ofrecían tamales con piezas de guajolote para evitar enfermedades y predecir la temporada de lluvias. El maíz azul en granos y harina era ofrecido al agua de las chinampas para el crecimiento de los cultivos. Al dios del cielo y la tierra Tezcatlipoca (espejo humeante) se le ofrecían mazorcas, guajolotes, corteza de pino, codornices y pescado. Durante las festividades las doncellas usaban una corona, joyería y vestimenta de maíz tostado. Durante el ritual al dios Xipe Totec (dios de la agricultura) se comían únicamente tortillas y tamales elaborados con harina de maíz, miel y frijol. La deidad que representaba al maíz en la cultura Azteca fue Chicomecoatl (serpiente de siete cabezas) o Calchiuhcihuatl (mujer de la preciosa piedra). Se le consideraba la deidad de la cosecha de todos los granos y plantas. La festividad de la diosa duraba 7 días en los cuales se hacían esculturas de madera de la deidad sosteniendo mazorcas y con un collar de maíz. Los aztecas creían que los granos de maíz estaban compuestos de la semilla visible e invisible, esta última era el corazón del maíz, cuando eran enterrados se iban a Tlalocan (inframundo) y la única forma de salir era la unión de la semilla visible con el corazón del maíz (Staller, 2010). 6 Para los mayas era un símbolo religioso y de poder. Fue y es percibido como la belleza ideal y se manifiesta como el señor joven del maíz (Staller, 2010). En textos sagrados de las culturas azteca y maya como el Popol-Vuh se narra el origen del hombre a partir de maíz. El Popol-Vuh (Fondo de Cultura Económica,1960) cuenta que todo estaba en suspenso, en silencio, inmóvil y vacía la extensión del cielo. No existía nada más que el cielo y el agua en reposo. Sólo se encontraban ocultos bajo plumas verdes y azules el Creador, el Formador, Tepeu, Gucumatz y los Progenitores rodeados de agua. Llegó entonces la palabra, Tepeu y Gucumatz hablaron en la obscuridad de la noche, se pusieron de acuerdo, juntaron sus palabras y pensamientos para que al amanecer apareciera el hombre . Dispusieron la creación de árboles, el nacimiento de la vida y la creación del hombre. La Tierra fue creada por Tepeu y Gucumatz, surgieron del agua las montañas, los valles, se dividieron las corrientes de agua, los arroyos, aparecieron los animales pequeños del monte, los venados, los pájaros, leones, tigres, serpientes y a cada uno se le repartió su morada. Les fue dicho hablar cada uno según su lengua decir sus nombres, alabar e invocar a sus creadores; pero no se consiguió que hablaran como los hombres, ya que sólo chillaban, cacareaban y graznaban cada uno de manera diferente. Al ver que no podían hablar fueron cambiados, su alimento lo obtendrían de bosques y barrancos y su carne sería triturada. Probaron suerte de nuevo pero no lo lograron por lo cual su carne fue inmolada y fueron condenados a ser comidos y matados los animales que existen sobre la faz de la tierra. De nuevo intentaron crear a seres obedientes, respetuosos que los recordaran. De lodo hicieron la carne del hombre. Pero vieron que era blando, no tenía movimiento, ni fuerza, se caía, estaba aguado, no movía la cabeza, la cara se le iba de lado y no podía ver hacia atrás. Al principio hablaba pero no tenía entendimiento, se humedeció rápidamente y no se pudo sostener. Entonces 7 dijeron: “no se puede sostener ni multiplicarse” por tanto desbarataron y deshicieron su obra. Se preguntaron nuevamente como harían para perfeccionar a sus adoradores. Consultaron a los adivinos Ixpiyacoc, Ixmucané, Hunahpú-Vuch y Hunahpú-Utiú, se acordó que el nuevo hombre sería hecho de maíz y Tzité (árbol usado para construir cercas). Se hicieron muñecos labrados de madera, se parecían al hombre hablaban como el hombre y poblaron la Tierra. Se multiplicaron y tuvieron hijos e hijas de palo pero no tenían alma, ni sangre ni entendimiento, ni se acordaban de su creador; sus mejillas estaban secas, sus manos y carnes amarillas, caminaban sin rumbo y andaban a gatas. No se acordaron del Corazón del Cielo y cayeron en desgracia, enseguida fueron aniquilados, destruidos y deshechos. Se produjo una inundación que cayó sobre las cabezas de los muñecos de palo. Los animales, palos y piedras les golpearon la cara por el trato que habían recibido de ellos. Se dice que los monos son la descendencia de los hombres de palo esa es la razón de que el mono se parezca al hombre. Nuevamente se juntaron y se decidió que el hombre sería de maíz, se trajo el maíz amarillo y blanco de Paxil y Cayalá. Del maíz se formó la carne y su sangre. De la masa de maíz se hicieron los brazos y las piernas del hombre. Cuatro hombres fueron creados llamados Balam-Quitzé, Balam-Acab, Mahucutah e Iqui-Balam. Dieron las gracias a sus creadores por poder ver, pensar, hablar y andar. Podían observar todo lo grande, lo pequeño, lejano o cercano. Los creadores decidieron que no podían observar todo como dioses por lo que les echaron un vaho sobre los ojos los cuales se empañaron, posteriormente sólo pudieron ver lo que estaba cerca. Así fueron creados y formados nuestros abuelos, nuestros padres por el Corazón del Cielo, el Corazón de la Tierra (Popol Vuh, Fondo de Cultura Económica, 1960). 8 1.4 Botánica y crecimiento El maíz pertenece a la familia Poaceae, es un pasto alto anual, de tallo único aproximadamente de 1.1 m de alto, las hojas miden aproximadamente 50-10 cm de largo y 3-7 cm de ancho. El fruto del maíz es el cariópside. El pericarpio y testa se fusionan para formar la pared del grano. El grano está compuesto de tres partes: germen, endospermo y pericarpio. Cada mazorca contiene alrededor de 200-400 granos los cuales pueden variar de color negro, gris-azulado, morado, verde, rojo, blanco y amarillo (Lim, 2013). El maíz está adaptado a una amplia variedad de climas, sin embargo crece mejor en climas cálidos, la producción se concentra en regiones tropicales y subtropicales (Lim, 2013). El maíz requiere una temperatura de al menos 20º C para un crecimiento y desarrollo adecuados. 1.5 Clasificación Existen diferentes razas de maíz, las cuales son poblaciones cuyas semejanzas entre sí son mayores a las de otras poblaciones por lo que hay mayor parentesco genético. En general, razas se designa a las variedades nativas de maíz, actualmente se cree que existen entre 220 y 300 razas de maíz en el continente americano (Lim, 2013). Figura 2. Diferentes variedades de maíz (Tuxtil et al., 2010). 9 El maíz puede ser catalogado en diferentes tipos de acuerdo al endospermo, grano, características y composición. Por ejemplo: • Maíz pedernal: tiene un endospermo grueso, duro y vítreo, el centro es suave. Es cultivado principalmente en Latinoamérica y Europa para la producción de alimentos. • Maíz dentado: caracterizado por su duro endospermo. El color varía de blanco a amarillo. Es usado como grano y forraje para animales. • Maíz para harina: el endospermo es suave, facilitando la molienda. Se cultiva en la región andina. • Maíz ceroso: el grano contiene principalmente amilopectina. Tiene poca tendencia a la retrogradación. • Maíz dulce: son mazorcas inmaduras producidas de 18-20 días después de la polinización cuando la humedad del grano es del 70 % aproximadamente. El contenido de azúcar es mayor al del almidón en el maíz en desarrollo debido a factores genéticos (Lim, 2013). 1.6 Estructura y composición La composición del maíz varía según el tipo como se observa en la tabla 1. Las estructuras principales del grano son pericarpio 5-6%, endospermo 82-83 % y germen 10-11 % del grano; el pedicelo es el tejido que conecta al grano con la mazorca. El pericarpio es la capa más externa y se compone principalmente de fibra como hemicelulosa(67-70%), celulosa (23%) y lignina (0.1%); entre los componentes secundarios se encuentran el almidón (7%), proteínas (1.4%), lípidos (1%) y 10 azúcares 0.5 % (Singh et al., 2011; Gutiérrez et al., 2010). El grosor del pericarpio es diferente de acuerdo con la variedad de maíz, se extiende a lo largo del grano unido a la cutícula, la cual es una capa cerosa impermeable al agua. El endospermo contiene aproximadamente 87-88 % de almidón, posee una capa exterior o aleurona la cual contiene gránulos ricos en proteína y minerales (Tabla 2) así como pigmentos que confieren colores característicos a los granos de ciertas variedades como azul, rojo o púrpura. El endospermo está compuesto por células que contienen gránulos de almidón embebidos en un capa continua de proteínas. La pared de las células consiste de β-glucanos, arabinoxilanos, proteínas y ácidos fenólicos. El contenido de lípidos en el endospermo es escaso (1%) y contiene en su mayoría ácidos grasos saturados. Las proteínas del endospermo están divididas en prolaminas llamadas zeínas, glutelinas, albúminas y globulinas (Lim, 2013). Tabla 1. Composición química de diferentes tipos de maíz (FAO, 1992). Tipo de maíz Humedad (%) Cenizas (%) Proteína (%) Fibra cruda (%) Carbohidratos (%) Harinoso 9.6 1.7 10.7 2.2 70.4 Dulce 9 5 1 5 12.9 2.9 69.3 Palomero 10.4 1.7 13.7 2.5 66.0 Morado 12.3 1.2 5.2 1.0 75.9 El endospermo puede ser vítreo o ceroso y puede presentar una consistencia suave o harinosa dependiendo de la proporción amilosa–amilopectina. El almidón se compone de amilosa y amilopectina, la primera es una cadena lineal de glucosa unidas mediante enlaces α-1,4 mientras que la segunda es una cadena ramificada; la proporción amilosa-amilopectina varía con el tipo de maíz. 11 El germen contiene aproximadamente 33% de lípidos y 18% de proteínas; los lípidos son principalmente ácidos grasos poliinsaturados como el oleico y el linoleico. En el germen se almacena una gran cantidad de nutrientes, que se utilizan durante la germinación (Lim, 2013). Tabla 2. Composición química de las estructuras de maíz (FAO, 1992). Componente químico Pericarpio (%) Endospermo (%) Germen (%) Proteína 3.7 8.0 18.4 Fibra cruda 86.7 2.7 8.8 Cenizas 0.8 0.3 10.5 Almidón 7.3 87.6 8.3 Azúcar 0.34 0.62 10.8 1.7 Compuestos bioactivos y antinutrientes El maíz contiene algunos compuestos bioactivos como los carotenoides, las antocianinas y los compuestos ferúlicos (Singh et al., 2011). Los compuestos bioactivos son compuestos que promueven la salud y están asociados a la prevención de enfermedades. El contenido de antocianinas, carotenos y fenoles totales difieren con el tipo de maíz por ejemplo el maíz blanco tiene menor capacidad antioxidante debido a que contienen menor cantidad de antocianinas y carotenoides que el maíz amarillo, rojo o morado. Los carotenoides son un grupo de pigmentos solubles en lípidos responsables del color amarillo, anaranjado y rojo; son sensibles al calor, luz, aire y pH. Adicionalmente son precursores de la vitamina A. En el maíz las xantófilas son las responsables del color amarillo; la luteína y zeaxantina son los principales carotenos en el maíz. Aproximadamente el 90% de los carotenos se encuentran en el endospermo. El contenido de carotenos varía con el tipo de maíz, el maíz amarillo contiene más carotenoides que el maíz harinoso, mientras que la 12 concentración de luteína y zeaxantina es menor en el maíz blanco y azul (Singh et al., 2011). Los carotenos tienen ciertas propiedades relacionadas con la salud, poseen actividad antioxidante y han sido asociadas a la prevención de cataratas (Drago et al., 2006). Los compuestos bioactivos asociados al maíz morado, azul y rojo son las antocianinas. Las antocianinas son un grupo de pigmentos responsables del color anaranjado, rojo, morado y azul presentes en frutas, vegetales, cereales, flores, hojas y raíces (Escribano et al., 2004). Las antocianinas del maíz azul provienen de la cianidina, malvidina, pelargonidina, peonidina (Escribano et al., 2004) mientras que en el maíz rojo provienen de la pelargonidina, cianidina y malvidina, entre otros (Singh et al., 2011). Dichos compuestos poseen actividad antioxidante lo que ayuda a la prevención de enfermedades cardiovasculares, cáncer entre otras. Entre los compuestos fenólicos se encuentra el ácido ferúlico. El ácido ferúlico es un fitoquímico importante en el maíz y otros cereales; su concentración varía con el tipo de maíz. El maíz de alto contenido de carotenoides contiene concentraciones mayores de ácido ferúlico comparado con el maíz blanco, rojo y azul (Singh et al., 2011). El ácido ferúlico se usa como aditivo para prevenir la oxidación de lípidos, se ha probado su utilidad contra el estrés oxidativo atenuando la respuesta glicémica asociado con la diabetes, así como actividad antiinflamatoria, neuroprotectora y hepatoprotectora (Rotimi, 2012; Singh et al., 2011). Los anti-nutrientes son compuestos capaces de disminuir la disponibilidad de los nutrimentos indispensables. El maíz contiene algunos anti-nutrientes en baja concentración como el fitato. El fitato quela los metales como el hierro por lo que son inaccesibles para los humanos (Lim, 2013), la mayor parte de éste se encuentra en el escutelo (90%) y 10% en la aleurona, donde se encuentra 13 depositado en las proteínas del maíz. Durante la cocción alcalina o nixtamalización se remueve el ácido fítico. 1.8 Producción Estados Unidos, China, Brasil, México (Sagarpa, 2012), Argentina, India, Francia e Indonesia son los principales países productores de maíz (Singh et al, 2011). En México es el cultivo más importante, representa casi una tercera parte del total de la producción agrícola y es el cuarto productor mundial, se cosechan aproximadamente 20.5 millones de toneladas de maíz (Sagarpa, 2012). México exporta el 70% de la producción dejando el resto para el consumo nacional (ProMéxico, sin año). El consumo per cápita por año es de 300 kg de derivados del maíz provenientes principalmente de productos nixtamalizados (Ruiz et al., 2012). 1.9 Usos del maíz El maíz desde los granos, mazorca, hojas y cabellos del elote tienen diversos usos. En la industria alimentaria se utiliza para la fabricación de aceite, obtención de almidón, fructosa, dextrinas, almidones modificados, sorbitol, cereal para desayuno, bebidas alcohólicas, sémola, entre otros. Es usado para la fabricación de jabones, pinturas, plásticos, telas, adhesivos, productos de lavandería y forraje. El olote es usado para la fabricación de papel, envoltura para cigarros, tapetes en América del Sur, así como para la obtención de potasio, producción de ácido acético y acetona por destilación. Los cabellos de elote contienen compuestos insecticidas y antifúngicos los cuales impiden el ataque de insectos y patógenos de la plantas; y es usado como remedio medicinal. El agua de remojo para la molienda húmeda es ampliamente usada en la industria bioquímica para estudiar el crecimiento de diversos microorganismos (Lim, 2013). Rivas et al. (2004) estudiaron el crecimiento de Lactobacillus rhamnosus en un medio basado en agua de remojo y en células de levaduras. 14 Producción de etanol Diferentes partes del maíz (hojas, cascarilla, olote, tallo) son utilizadas para la producción de etanol, debido a su alta concentración de almidón. El almidón se fracciona para formar azúcares simples y mediante el uso de microorganismos se produce etanol utilizando a Saccharomyces cerevisiae. 15 Capítulo 2. Nixtamalización 2.1 Historia La práctica de hervir el maíz con cal fue la base de la cultura mesoamericana,es un proceso de cocción desarrollado por los mayas y aztecas llamada nextamalli por estos últimos, para convertir el maíz en tortillas (Pappa et al., 2010) dicho proceso continúa hasta nuestros días. La nixtamalización consiste en la cocción alcalina del maíz seguido del remojo hasta por 24 horas, lavado y por último la molienda para la obtención de la masa. Anteriormente la cal provenía de leña, conchas y de la caliza. 2.2 Beneficios y desventajas de la nixtamalización Entre los beneficios de la nixtamalización se encuentran la remoción del pericarpio y el incremento del valor nutrimental. Se incrementa la biodisponibilidad de la niacina, mejora la calidad de la proteína, incrementa la concentración de calcio y disminuye la concentración de aflatoxinas (Sefa-Dedeh et al., 2003). Por otro lado se ha reportado la pérdida de tiamina, riboflavina, niacina y carotenos. Los productos nixtamalizados aportan el 70% de las calorías diarias y el 50% de la ingesta diaria de calcio recomendada en México (Ruiz et al., 2012). 2.3 Proceso En el proceso tradicional los granos se cuecen en una solución alcalina sobresaturada con hidróxido de calcio del 0.6-1.2% del peso del maíz durante 50- 70 minutos, remojo de 12-16 horas y dos-tres lavados, posteriormente el maíz se muele para obtener la masa y de ahí una gran cantidad de productos como tortillas, tamales, atoles, entre otros. La proporción de agua usada es 1:2 o 1:3 grano-agua (García, 2004), sin embargo las condiciones pueden variar por lo que el grado de gelatinización también. 16 Figura 3. Diagrama de bloques del proceso de nixtamalización. 2.4 Cambios físicos y químicos Existen diversos factores que afectan las propiedades de los compuestos presentes en el grano durante la nixtamalización así como las propiedades fisicoquímicas y sensoriales de los productos terminados, como el tiempo de cocción, remojo y concentración de Ca(OH)2 (hidróxido de calcio). Temperaturas entre 85-100 ºC y el pH (12) facilitan la transformación de los componentes del grano como proteínas, lípidos y almidón (Méndez et al., 2008). Se degrada el pericarpio, hay pérdida de proteínas solubles (albúmina y globulina), gelatinización parcial del almidón, solubilización de componentes de la pared celular, parte de los lípidos son saponificados, aumento de la concentración y biodisponibilidad del calcio (Mondragón et al., 2004B), así como un pequeño incremento tanto en hierro, cobre o zinc debido a que la cal no es pura. La niacina Maíz Cocción 1-‐2 horas Remojo 12-‐16 horas Lavado Molienda Agua 1:3 (grano-‐agua) Cal 0.6-‐1.2 % Masa Agua Nejayote 17 es convertida a ácido nicotínico mejorando su biodisponibilidad (Guzmán de Peña, 2010). Probablemente la nixtamalización tenga un efecto adverso en la moléculas relacionadas con la capacidad de absorción de agua (almidón, proteínas y fibra) lo que influye en la propiedades de hinchamiento y viscosidad de la masa (Sefa- Dedeh et al., 2003). La eficiencia de la nixtamalización depende del grado óptimo de cocción y remoción del pericarpio, es decir al remover el pericarpio con facilidad. 2.4.1 Pericarpio Antiguamente se reconocía el tiempo de cocción como el tiempo en el que se podía remover el pericarpio al frotar con los dedos, debido a que la solución alcalina facilita la degradación de los componentes de la pared celular del pericarpio promoviendo la remoción parcial. Actualmente se utilizan métodos como difracción de rayos X, microscopía electrónica de barrido para evaluar los cambios en el pericarpio. El hidróxido de calcio, temperatura y tiempo de cocción son factores involucrados en la remoción parcial de hemicelulosa y lignina durante la nixtamalización (Figura 4). La hemicelulosa presente en el pericarpio es un polímero de pentosas que contiene xilosa, arabinosa, galactosa, ácido urónico y heteroxilanos que son adyacentes a puentes diferúlicos. Durante la nixtamalización se disuelve la matriz hemicelulosa-lignina y los ácidos urónicos se neutralizan formando las sales de calcio (Gutiérrez et al., 2010). La hemicelulosa y celulosa no pierden su estructura ya que para ello se necesitan temperaturas de hasta 285-340ºC, sin embargo debido a la temperatura, tiempo de cocción y concentración de Ca(OH)2 la mayor parte de hemicelulosa y lignina se liberan en el nejayote en forma de gomas solubles (Méndez et al., 2006). 18 La remoción de la capa cerosa debido a la temperatura o la remoción de la epidermis (primera capa del pericarpio) permite la entrada de agua y calcio hacia las capas internas del grano. El pericarpio gobierna la difusión de calcio y agua hacia las estructuras internas; la difusión depende de la temperatura y el gradiente de concentración, sin embargo, debido a que no es una estructura homogénea el agua y calcio difunden de diferente manera (Gutiérrez et al., 2010). Figura 4. Imagen microscópica 400 X del (a) grano cocción-alcalina 1 hora, 92 ºC, (b) grano remojado 3 h, 92ºC (Valderrama et al., 2010). 2.4.2 Almidón El tratamiento alcalino y la molienda modifican la estructura y propiedades del almidón morfológica y reológicamente (Mondragón et al., 2004A; Méndez et al., 2008), dichas características son importantes para la elaboración de la masa y las tortillas (Méndez et al., 2008). Análisis microscópico, análisis de imágenes y calorimetría son algunas de las técnicas utilizadas para estudiar los cambios en el almidón. Durante la cocción el almidón se gelatiniza parcialmente, se hincha el grano y se rompe la estructura cristalina, Figura 5. Una vez que se remueve la capa cerosa del pericarpio se facilita la entrada de agua permitiendo la gelatinización de las capas más externas del endospermo. Rojas et al. (2007) han sugerido que el almidón se gelatiniza completamente en las capas más externas del endospermo b) Agregados de calcio Fibras hinchadas de hemicelulosa a) 19 y que la gelatinización es parcial en las capas internas del mismo. En el remojo se forman estructuras ordenadas del almidón debido a que el proceso de recristalización disminuye, puesto que algunas cadenas de amilosa se solubilizan en el nejayote; los granos continúan hinchándose a través del endospermo y la solubilidad del almidón incrementa. En la molienda se permite la liberación y dispersión de los gránulos de almidón hinchados. Factores como la concentración de Ca(OH)2 (hidróxido de calcio), la temperatura, el tiempo de cocción y la presencia de otros compuestos afectan las propiedades del almidón. La concentración de Ca(OH)2 tiene influencia en la solubilidad, el grado de gelatinización y el poder de hinchamiento (Mondragón et al., 2004A), aumenta la estabilidad de los gránulos de almidón afectando propiedades reológicas debido a que provocan cambios en la viscosidad del mismo. Durante el remojo los iones de calcio inhiben la gelatinización por la fuerte interacción calcio- amilosa previniendo la entrada de agua, hinchamiento y degradación de los gránulos. A mayor temperatura la movilidad de las cadenas de almidón incrementa evadiendo la interacción entre ellas y en consecuencia la reorganización, sin embargo hay entrecruzamiento entre las cadenas de almidón durante la gelatinización (Quintanar et al., 2010). El tiempo de cocción afecta las propiedades térmicas y el poder de hinchamiento, mientras que el remojo tiene efecto sobre la temperatura pico de gelatinización y la solubilidad del almidón. Mientras mayor sea el tiempo de cocción se produce mayor almidón gelatinizado, el poder de hinchamiento decrece con el tiempo de cocción y la solubilidad disminuyecon el tiempo de remojo. La presencia de otros compuestos puede influir en ciertas propiedades como el poder de hinchamiento y solubilidad, ya que durante la cocción es posible la formación de complejos entre el almidón gelatinizado (amilosa) con los lípidos y calcio, a mayor tiempo de cocción aumenta la probabilidad de formación de dichos 20 compuestos. La presencia de calcio estabiliza la estructura de almidón (Méndez et al., 2006). Figura 5. Imagen obtenida por microscopía electrónica del almidón en la masa de maíz (Retnayake et al., 2007). 2.4.3 Calcio Durante la nixtamalización el calcio incrementa aproximadamente 400% (Fernández et al., 2004); penetra en el grano modificando las propiedades físicas, térmicas, estructurales, ópticas, químicas, reológicas, sensoriales y nutrimentales de los productos nixtamalizados (Valderrama et al., 2010). Mediante técnicas como espectroscopia de absorción atómica, difusión térmica, espectro infrarrojo, análisis de microscopía electrónica, entre otros, se estudian los mecanismos por los cuales penetra el calcio en el grano, sin embargo la difusión es diferente en cada grano. Existen diversos mecanismos por los cuales el calcio entra al grano principalmente la difusión y la percolación. El contenido de calcio durante el proceso de nixtamalización es gobernado por la temperatura de cocción, el tiempo de remojo, la concentración de Ca(OH)2 (hidróxido de calcio), el contenido de agua (Fernández et al., 2004), los cambios en el pericarpio (Gutiérrez et al., 2007) y el estado físico de los granos, la mayor cantidad de calcio penetra en los granos que han perdido su integridad (Zazueta et al., 2002). 21 Los iones de calcio penetran el grano durante la cocción y remojo finalizando en la región del germen (Pappa et al., 2010). La difusión comienza en el pericarpio debido a su capacidad para retener Ca2+ mediante la interacción de éstos con los grupos ácidos de la hemicelulosa. Durante la cocción el calcio se fija en el exterior del endospermo, posiblemente en la aleurona, posteriormente en las primeras etapas del remojo pequeñas concentraciones de calcio entran al endospermo y germen. Las capas más externas del endospermo son la principal barrera en la entrada del calcio (Zazueta et al., 2002). Después de varias horas de remojo el calcio penetra progresivamente desde el exterior hacia el centro del endospermo. Valderrama et al. (2010) han sugerido que durante el remojo se forman micro-poros que podrían contribuir a la entrada de calcio (percolación), éstos pueden pasar a través del pericarpio o bien formar canales interconectados por lo que el calcio entra directamente hasta las capas más externas del endospermo (Figura 6). Figura 6. Imagen microscópica de la entrada de calcio (a) por percolación; (b) formación de agregados de calcio en las capas internas del pericarpio; 4 h de remojo, 82ºC (Valderrama et al., 2010). a) Micro hoyos b ) Agregados de calcio 22 Posterior al remojo prolongado, el calcio se hace presente en el germen como sales de los ácidos grasos debido a la saponificación parcial de los lípidos durante el tratamiento alcalino, mientras que en el endospermo forma entrecruzamiento con la amilosa. Adicionalmente el incremento de calcio mejora la relación Ca/P en las tortillas, de 1:20 en el grano a 1:1 en la tortilla lo que permite la mejor absorción de calcio y otros minerales (Zazueta et al., 2002; Guzmán de Peña, 2010). 2.4.4 Proteínas Durante la nixtamalización ocurren cambios en las proteínas debido al tratamiento termo alcalino, los cuales se describen a continuación. La matriz de proteínas embebidas en el endospermo reacciona con el Ca(OH)2 y la matriz se desintegra (Laria et al., 2007). Hay formación de péptidos como lisino-alanina, ornitina, lantionina los cuales no están disponibles y disminuyen el valor nutrimental de las proteínas (Zazueta et al., 2002), sin embargo también se ha sugerido el incremento en la biodisponibilidad de lisina y glutelina (Quintanar et al., 2010). El contenido de globulinas, albúminas y glutelinas disminuye debido al cambio en la solubilidad, probablemente las proteínas del germen son las que se insolubilizan o se pierden durante la cocción, al igual que la zeína. El 20% de la leucina se pierde durante el proceso corrigiendo la desproporción isoleucina-leucina por lo que mejora el valor biológico de la proteína (Guzmán de Peña, 2010). De acuerdo con Quintanar et al. (2010) la zeína es capaz de formar compuestos poliméricos formando enlaces con puentes disulfuro además de promover las interacciones calcio-zeína (mediante puentes de calcio) incrementando la resistencia térmica de la proteína dificultando su ruptura y el entrecruzamiento de la zeína con la amilopectina. 23 Ocurren también importantes alteraciones estructurales causadas por la desnaturalización, entrecruzamiento y ruptura de la estructura terciaria de las proteínas (Figura 7). La digestibilidad de la proteína disminuye por los cambios antes mencionados y a las interacciones hidrofóbicas, ya que cambia la solubilidad y la liberación de aminoácidos durante la digestión (Quintanar et al., 2011). *A gránulos de almidón. * P proteínas Figura 7. Efecto de la nixtamalización en la estructura del grano (a) cocción 50 min, 90ºC; (b) cocción 120 min 90ºC (Quintanar et al., 2009). 2.4.5 Lípidos Durante la nixtamalización el contenido lipídico disminuye del 2-6% (Guzmán de Peña, 2010). Los ácidos monoacílicos presentes en el maíz pueden formar compuestos con la amilosa durante la cocción y gelatinización (Mondragón et al., 2004B). Estos complejos afectan la solubilidad, la absorción de agua, el ataque enzimático, las propiedades reológicas y mecánicas. Martínez et al. (2001) reportaron un aumento en la concentración de ácido linoleico y linolénico en el germen nixtamalizado de 43.5 a 47.28% y 0.92 a 0.96% respectivamente debido a la remoción del pericarpio. Sin embargo en general la concentración de lípidos disminuye por la saponificación de los ácidos grasos con a) b) A A 24 el hidróxido de calcio, cuando los lípidos se saponifican disminuye la interacción con el almidón. 2.4.6 Agua Durante la cocción se absorbe la mayor parte de agua y disminuye durante el remojo. El agua entra al grano a través del pedicelo por capilaridad y difunde rápidamente a través de las células tubulares del pericarpio (Ruiz et al., 2012). La humedad aproximada después de la nixtamalización es de 46-56%. La velocidad y cantidad de agua absorbida durante el tratamiento térmico alcalino depende de la concentración de calcio, genotipo del maíz y condiciones del proceso (Martínez et al., 2001). La presencia de cal permite la rápida absorción y distribución del agua en el grano, la cual se acelera al aumentar la concentración de cal (Sefa-Dedeh et al., 2004) y al incrementar la temperatura, Figura 8. Figura 8. Contenido de calcio y humedad durante la cocción y remojo en el grano de maíz (Laria et al, 2007). Tiempo (min) H um ed ad (g /g ) ) C alcio (ppm ) ) Contenido de agua Contenido de calcio Cocción Remojo 25 2.4.7 Nejayote El nejayote es el exceso de agua y cal junto con fragmentos del pericarpio; posee pH alcalino que varía de 9 a 12. En la tabla 3 se observa que el nejayote contiene una gran cantidad de sólidos solubles que varia del 5-14%, adicionalmente contiene nutrimentos como compuestos de nitrógeno, carbohidratos, lípidos, vitaminas y minerales. Durante la cocción alcalina la hemicelulosa y la lignina se solubilizan formando parte del nejayote (Martínezet al., 2001; González et al., 2005). Tabla 3. Composición del nejayote (Martínez et al., 2001). Componente Sólidos solubles (%) Arabinosa (g/Kg *TAN) 0.54 Xilosa (g/Kg TAN) 64.23 Galactosa (g/Kg TAN) 1.10 Ácido D-Glucorónico (g/Kg TAN) 8.60 Hemicellulosa arabinoxilanos (g/Kg TAN) - *TAN Total de azúcares neutros 2.5 Cambios sensoriales Durante la nixtamalización ocurren cambios sensoriales en el color, textura, adhesividad y cohesividad relacionados directamente con la humedad y contenido de calcio (Ruiz et al., 2012). Los cambios en la textura se deben al grado de gelatinización y retrogradación del almidón, la presencia de pericarpio en la masa, los ácidos grasos saponificados afectados por la concentración de hidróxido de calcio, cocción y tiempo de remojo. El color amarillento se relaciona con la presencia de carotenoides, flavonoides y del pH que sufren cambios durante la cocción alcalina (Sefa-Dedeh et al., 2003). El Ca(OH)2 reacciona con los diferentes pigmentos presentes en el maíz e 26 interfieren con las reacciones de pardeamiento como caramelización y reacciones de Maillard (Martínez et al., 2001). 2.6 Microbiología de la masa nixtamalizada Debido al contenido de humedad (56% aproximadamente), disponibilidad de nutrientes y temperatura de almacenamiento de la masa diversos microorganismos son capaces de crecer, fermentar y agriar la masa en un lapso de 4 a 6 horas (Adolphson et al., 2013). El tratamiento alcalino puede inhibir la proliferación microbiana o favorecer el crecimiento de otros organismos (Adolphson et al., 2013). En un estudio sobre la caracterización e identificación de la microflora en la masa nixtamalizada, los principales microorganismos encontrados fueron Streptoccocus y Lactobacillus. En menor concentración puede haber presencia de coliformes y bacterias mesófilas; en concentraciones mínimas o nula presencia de levaduras y mohos (Adolphson et al., 2013; Sefa Dedeh et al., 2004). Los principales lactobacilos encontrados fueron Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum y Lactobacillus cellobiosus (Sefa-Dedeh et al., 2004). De acuerdo con Sefa-Dedeh et al. (2004) la fermentación de la masa inhibe el crecimiento de Shigella y E. coli enterotoxigénica, mientras que la presencia de calcio estimula el crecimiento de las bacterias ácido lácticas. La presencia de Lactobacillus en la masa es aprovechada para la producción de metabolitos como los ácidos orgánicos. 27 Capítulo 3. Fermentación 3.1 Fermentación La fermentación es un proceso de obtención de energía en condiciones anaerobias durante la cual se degradan compuestos orgánicos en ausencia de un aceptor de electrones; los aceptores de electrones son compuestos intermediarios del metabolismo. Entre lo productos de la fermentación se encuentran el lactato y el etanol. Existen diferentes tipos de fermentación que se clasifican de acuerdo con el sustrato o los productos de fermentación como la fermentación láctica, la ácido-mixta y la alcohólica entre otras (Madigan et al., 2009). 3.1.1 Fermentación láctica Los azúcares fermentables son convertidos en ácido láctico como producto principal o único de la fermentación por bacterias del ácido láctico. Existen dos rutas fermentativas: la homofermentativa y la heterofermentativa. En la homofermentativa el único producto de la fermentación es ácido láctico, mientras que en la heterofermentativa además de ácido láctico se generan otros productos como etanol y CO2 (Madigan et al., 2009). 3.1.2 Fermentación de ácidos mixtos Característica de las bacterias entéricas, se forman tres ácidos diferentes: el ácido acético, el láctico y el succínico a partir de glucosa u otros azúcares fermentables. Adicionalmente se generan etanol, dióxido de carbono (CO2) e hidrogéno (H2) en diferentes concentraciones (Madigan et al., 2009). 3.1.3 Fermentación alcohólica Es aquélla en la que el ácido pirúvico es reducido a alcohol etílico por los electrones de NAD reducido. El etanol es el aceptor final de electrones mientras que la glucosa es el donador preferido de electrones. En la fermentación alcohólica las levaduras son los principales microorganismos involucrados (Steinkraus, 2002). 28 3.1.4 Fermentación acética Si los productos de la formación alcohólica no son conservados en condiciones anaeróbicas, las bacterias pertenecientes al género Acetobacter oxidan el alcohol a ácido acético (Steinkraus, 2002). 3.2 Fermentación en alimentos o productos fermentados Junto con el salado, ahumado y secado la fermentación es uno de los métodos más antiguos para conservar los alimentos. La fermentación permitió resistir los inviernos y sequías de las culturas más antiguas al prolongar la vida de anaquel e inocuidad de los alimentos (Prakash y Kailasapathy, 2010). Dependiendo de las materias primas es posible fermentar verduras, frutas, cereales, legumbres, leche y carne (Van Hijum et al., 2013). Los productos fermentados han sido definidos como aquéllos en los que diversos microorganismos o enzimas provocan cambios bioquímicos en los substratos durante el proceso de elaboración. La fermentación contribuyó a enriquecer la dieta, desarrollar sabores, aromas y texturas (Steinkraus, 1997). Así mismo se han definido los productos indígenas fermentados como aquellos alimentos producidos por los nativos, a partir de recursos disponibles en la localidad mediante la adición de cultivos o fermentación natural (Steinkraus, 2002). La fermentación enriquece la dieta al desarrollar una gran cantidad de alimentos diferentes en aroma, textura y sabor. Se incrementa la vida de anaquel y la seguridad alimentaria (Holzapfel, 2002), se mejora la calidad nutrimental disminuye el tiempo de cocción y se degradan compuestos y factores indeseables (Steinkraus, 1997). Adicionalmente se generan compuestos bioactivos que fomentan la salud, se producen compuestos antimicrobianos, mejora la digestibilidad y se estimulan las funciones probióticas (Prakash y Kailasapathy, 2010). 29 3.2.1 Fermentación de cereales Los cereales constituyen gran parte de la dieta en todo el mundo, proveen energía, gran cantidad de nutrientes y diversos antinutrientes. Los cereales son deficientes en aminoácidos esenciales, de manera que la fermentación es un modo simple y económico de mejorar las propiedades nutrimentales y sensoriales del alimento (Blandino et al., 2003). Durante la fermentación se remueven los compuestos antinutritivos como fitatos, enzimas inhibidoras, polifenoles y taninos; adicionalmente mejora la biodisponibilidad de ciertos componentes como las vitaminas. El tipo de cereal juega un papel importante en el tipo de fermentación, ya que se ve afectada la cantidad-calidad de los carbohidratos, las fuentes de nitrógeno, los factores de crecimiento (vitaminas, minerales) y la eficacia de los inhibidores (Hammes et al., 2005). Las bacterias, enzimas y levaduras endógenas juegan un papel importante en el proceso (Hammes et al., 2005). 3.3 Microorganismos involucrados en la fermentación de alimentos 3.3.1 Bacterias ácido lácticas Las bacterias ácido lácticas (LAB) son bacilos o cocos Gram positivos, no esporulados, catalasa negativos y fermentadores estrictos. Se desarrollan en ambientes anaeróbicos, sin embargo, pueden crecer en presencia de oxígeno. El producto principal de la fermentación es ácido láctico entre otros ácidos orgánicos lo que reduce el pH a niveles que inhiben el crecimiento de bacterias patógenas. Entre las bacterias lácticas se encuentran Lactobacillus, Pediococcus, Enterococcus, Lactococcus, Leuconostoc, Oenococcus, Streptococcus, Tetragenococcus, Carnobacterium, Vagococcus y Weissella. Estos microorganismos han sido identificados en productos fermentadoscomo leches agrias, yogurt, queso, pozol, chicha, entre otros (Prakash y Kailasapathy, 2010). 30 3.3.2 Bacillus Bacterias Gram positivas, formadoras de esporas, catalasa positivas, móviles y aerobias facultativas. Producen enzimas hidrolíticas extracelulares que degradan polímeros complejos como polisacáridos, lípidos y ácidos nucleicos. Algunas especies son B. subtilis, B. natto, B. licheniformis, B. thuringiensis, B. coagulans, B. megaterium, entre otras. Algunas especies han sido encontradas en productos fermentados de soya (Prakash y Kailasapathy, 2010). 3.3.3 Levaduras Son organismos unicelulares normalmente esféricos, ovalados o cilíndricos. La mayoría son anaerobios facultativos, sin embargo pueden presentar un metabolismo tanto aerobio como fermentativo. Son los principales microorganismos involucrados en la producción de bebidas fermentadas, entre ellos se encuentran Saccharomyces, Candida, Cryptococcus, Debaryomyces, Galactomyces, Geotrichum, Hansenula, Hanseniaspora, Hyphopichia, Kluyveromyces, Metschnikowia, Pichia, Rhodotorula, Saccharomycodes, Saccharomycopsis, Schizosaccharomyces y Zygosaccharomyces (Prakash y Kailasapathy, 2010; Sangwan et al., 2014). 3.3.4 Hongos Los hongos tienen necesidades nutricionales sencillas y en su mayoría son aerobios. Digieren compuestos orgánicos complejos como polisacáridos o proteínas. Los hongos son limitados en la producción de alimentos fermentados, algunos hongos involucrados en la fermentación son Actinomucor, Amylomyces, Aspergillus, Monascus, Mucor, Neurospora, Penicillium, Rhizopus y Ustilago (Prakash y Kailasapathy, 2010; Sangwan et al., 2014). 31 3.4 Fermentación natural o inducida Los microorganismos que participan en la fermentación pueden ser bacterias, levaduras u hongos. La fermentación puede ser natural o se puede inducir mediante la adición de cultivos iniciadores, lo que permite mejorar la inocuidad alimentaria y crear gran cantidad de productos. La fermentación natural se realizó mediante prueba y error a través de los años. La fermentación natural resulta de la actividad competitiva de diversos microorganismos, los mejores adaptados al sustrato y a las condiciones son los que dominan el proceso. La mayoría de los alimentos fermentados se realizan naturalmente. La fermentación natural es difícil de controlar y el riesgo de contaminación es mayor. Los microorganismos involucrados se encuentran en plantas, animales, utensilios, contenedores y en el ambiente. Un cultivo iniciador se define como la preparación que contiene grandes cantidades de uno o varios microorganismos los cuales pueden ser adicionados para acelerar el proceso de fermentación (Holzapfel, 2002). Los cultivos iniciadores están adaptados al sustrato por lo que se facilita controlar el proceso y predecir los productos a obtener (Holzapfel, 1997). Se puede seleccionar una cepa o múltiples cepas específicas para el sustrato. La descripción de los microorganismos que participan en la fermentación es esencial para mantener la tradición de los productos artesanales, lo que permitirá diseñar o manipular la elaboración de estos productos, mejorar sus propiedades sensoriales y su calidad (Holzapfel, 1997). 3.5 Probióticos y prebióticos en la fermentación de alimentos Los alimentos funcionales proveen beneficios a la salud mas allá de ser nutrimentos esenciales o básicos. Entre los alimentos funcionales se encuentran aquéllos que contienen componentes activos como los probióticos y los prebióticos. 32 Los probióticos, de acuerdo con la FAO (2006), son microorganismos vivos que administrados en cantidades adecuadas confieren beneficios a la salud de quien los consume. Los probióticos son ingeridos en alimentos o bien en suplementos alimenticios. La mayoría de los probióticos son del género Lactobacillus o Bifidobacteria implicados en la fermentación de alimentos, en la tabla 4 se enlistan algunos microorganismos cuyas cepas son consideradas probióticos. Para ser considerado probiótico se debe cumplir con ciertas características como : • No ser patógeno ni tóxico • Ser resistente al tracto gastrointestinal • Adherirse a las células epiteliales gastrointestinales • Adaptarse a la microbiota intestinal • Estimular al sistema inmune (FAO, 2006; Rotimi, 2012) Los probióticos se adhieren a la mucosa del intestino y secretan una biopelícula protectora que inhibe la adherencia de microorganismos patógenos, así mismo estimulan el sistema inmune ya que inhiben la colonización de bacterias patógenas previniendo la infección (Liong, 2011). Adicionalmente los probióticos secretan sustancias que inhiben a los patógenos como peróxido de hidrógeno, ácidos orgánicos y bacteriocinas; compiten por los nutrimentos y alteran el pH local el cual es desfavorable para los patógenos (Rotimi, 2012). Tabla 4. Microorganismos considerados probióticos y ejemplos (Floch, 2012; Liong, 2011). Lactobacillus spp. Bifidobacterium spp. Otros L. acidophilus (CL 1285 plus) B. bifidu* Saccharomyces boulardii* L. delbruekii* B. longum* Streptococcus salivarius* L. bulgaricus* B. breve* Propionibacterium freudenreichii* L. rhamnosus (GG) B. lactis (HN019) L. casei (Lbc80r y Shirota) B.infantis (35624 VSL#3) L. brevis* L. plantarum* *No se especifica el tipo de cepa 33 Los prebióticos son compuestos que estimulan el crecimiento de bacterias benéficas como las bifidobacterias, a expensas de bacterias patógenas. Dichos compuestos no son digeridos en el estómago o intestino delgado, solamente son fermentados en el colon por la microbiota. El incremento en su consumo modifica la microflora del colon, aumentan las bacterias benéficas y se reducen o eliminan las bacterias patógenas. Entre algunos prebióticos se encuentran el almidón resistente, la fibra soluble e insoluble, la inulina y los arabinoxilanos (Rotimi, 2012). Los carbohidratos bioactivos más importantes son los resistentes a la digestión en el tracto gastrointestinal superior, debido a la presencia de enlaces glicosídicos que son diferentes a los susceptibles por enzimas α-1,4 y α-1,6. Este tipo de carbohidratos se transportan al colon y sirven de alimento para la microbiota que los transforma en componentes bioactivos como ácidos de cadena corta o bien son fuente de energía para las bacterias benéficas. Su consumo incrementa la biodisponibilidad de minerales, reduce el riesgo de enfermedades como cáncer, infecciones gastrointestinales, problemas cardiovasculares, obesidad y diabetes (Rotimi, 2012; Panesar et al., 2014). La fibra insoluble es indigerible en el tracto gastrointestinal superior pero es fermentado por los microorganismos del colon. La fibra incrementa la velocidad con la que se mueven los nutrientes en el tracto, lo que reduce la cantidad de nutrientes absorbidos especialmente la glucosa. El almidón resistente contribuye con menos aporte calórico que los almidones normales. Este tipo de almidones tiene menor índice glicémico (capacidad de incrementar el nivel de glucosa en sangre). Su consumo puede ayudar a controlar el nivel de glucosa en sangre y reducir el impacto de los desórdenes metabólicos como obesidad y diabetes tipo 2. Los almidones resistentes son la fracción y los productos de degradación que son resistentes a las enzimas digestivas, pasan sin cambio y sin ser absorbidos del estómago al intestino delgado. En el intestino grueso son fermentados por la 34 microbiota del colon a ácidos grasos de cadena corta y una pequeña porción es excretada en las heces fecales (Rotimi, 2012). Entre otros prebióticos se encuentran las dextranas, las cuales son sintetizadas por ciertos microorganismos fermentadores. Las enzimas transfieren el residuo glicosilo de la sacarosa, que utilizan como sustrato, a una cadena en crecimientoo a otra molécula aceptora, formando polímeros u oligosacáridos que difieren en su tamaño de acuerdo con la especificidad de las enzimas y las condiciones de síntesis (Uscanga, 2010). Los alimentos fermentados contienen bacterias ácido- lácticas muchas de las cuales tienen la capacidad de sintetizar exopolisacáridos de naturaleza prebiótica (Rotimi, 2012). En la fermentación de cereales como el maíz es posible encontrar diversos prebióticos como los arabinoxilanos y el almidón resistente, en productos de maíz donde se ha llevado el proceso de retrogradación. Sin embargo las propiedades prebióticas no han sido documentadas (Ayala et al., 2014). Adicionalmente se ha reportado la presencia de diferentes probióticos en bebidas fermentadas de maíz como L. acidophilus y L. rhamnosus (Rotimi, 2012); Streptococcus, Weisella paramenterioides y Leuconostoc pseudomesenteroides (Rodríguez y Villalba, 2010). 35 Capítulo 4. Alimentos fermentados de Maíz en México y Latinoamérica La caracterización de los alimentos fermentados de maíz es de suma importancia a fin de que no se pierdan con el tiempo, sobre todo de aquéllos que se elaboran en comunidades indígenas. Los productos fermentados son parte integral de la cultura. Cada comunidad en el mundo tiene alimentos característicos que simbolizan la herencia y los aspectos socioculturales étnicos. La preparación de los productos fermentados es diferente en cada comunidad y único debido a la localización geográfica, los factores ambientales, la preferencia por ciertos alimentos y la disponibilidad de recursos (Prakash y Kailasapathy, 2010). En el caso del maíz existen algunas prácticas que se realizan antes de la fermentación entre ellas la nixtamalización (Capítulo 2), el remojo y la germinación. El remojo del maíz es un proceso simple utilizado frecuentemente para preparar alimentos que consiste en sumergir el alimento en agua. En los granos durante el remojo se absorbe agua y es posible remover el pericarpio con facilidad. Adicionalmente durante el remojo prolongado se puede disminuir el contenido de ácido fítico (Lestienne et al., 2005). En la preparación del ogi y del kenkey los granos de maíz se remojan previo a la fermentación. La germinación es el surgimiento y desarrollo de la planta a partir de un estado de reposo (FAO, 1991). Implica la absorción de agua, la activación del metabolismo y el crecimiento de la radícula a través de la testa (Suárez et al., 2003). Consiste en remojar los granos de maíz y almacenarlos entre 15-20ºC. Además de la temperatura y del agua existen otros factores que afectan la germinación como la cantidad de oxígeno y luz (Universidad Nacional de Bogotá, 2014). Durante la germinación se liberan nutrientes que se encontraban formando enlaces e incrementa la biodisponibilidad de los mismos. Entre los alimentos fermentados de maíz que se germinan previo a la fermentación se encuentran el tesgüino, la chicha, la fuba, entre otros. 36 4.1 México 4.1.1 Pozol “Siéntate, bebe mi ofrenda de pozol, es para ti”. Treinta y ocho textos lacandones El pozol es una bebida tradicional no alcohólica elaborada a partir del maíz nixtamalizado desde los tiempos prehispánicos por los mayas y aztecas. Es similar a la chicha en Latinoamérica, al koko y kenkey en Ghana y al mahewu en Sudáfrica (Sainz et al., 2001). Se prepara en el sur de México y Guatemala, es consumida como alimento básico por los chontales y choles de Tabasco, los mayas de Campeche, Yucatán y Quintana Roo, los lacandones, chamulas, tzeltales, zoques y mames de Chiapas. Es una bebida refrescante y nutritiva ingerida por adultos, niños e infantes (Wacher et al., 1993), su composición se describe en la tabla 5 . Tabla 5. Composición del pozol con y sin cacao (Guyot et al., 2003) Componente (g/100g materia seca) Masa fermentada (3 días) Masa fermentada con cacao (3 días) Proteína 10.2 10.6 Lípidos 5.5 9.2 Fibra 3.7 9.8 Cenizas 1.4 1.5 Azúcares totales 79.3 68.8 Energía *(Kcal/100g MS) 406.3 399.4 * Kcal/(100g de materia seca) El pozol se produce a baja escala en las familias de clase media y baja principalmente en las comunidades rurales (Guyot et al., 2003). Es usado en ceremonias religiosas y con fines médicos para la digestión (Green, 2010), para curar o prevenir infecciones y para disminuir la fiebre (CDI, 2003). 37 Para la elaboración del pozol se puede utilizar maíz amarillo, blanco o azul, sin embargo el más utilizado es el blanco. Una vez que se obtiene la masa nixtamalizada se forman bolas, las cuales se envuelven en hojas de plátano previamente flameadas (las hojas se pasan por una flama ya sea de leña, carbón o directo en la estufa) para hacerlas elásticas y se fermentan a temperatura ambiente de 2 a 7 días o más (Wacher et al.,1993) obteniendo una masa agria. La masa fermentada se disuelve en agua (Figura 9), es así como lo consumen los pueblos indígenas. Los mestizos pueden añadir sal, azúcar, cacao molido, leche, piloncillo, ente otros, si se desea. Cada comunidad o familia prepara el pozol de acuerdo a enseñanzas previas; de manera que el proceso básico es el mismo y pueden variar algunos detalles como hervir por segunda vez el nixtamal para disminuir el grado de sedimentación (Wacher et al., 2000), este proceso es realizado sólo por los mestizos. La calidad del pozol depende de las características del proceso. 38 Figura 9. Diagrama de flujo para la elaboración de pozol. Maíz Cocción 1-‐2 horas Remojo 12-‐16 horas Lavado Molienda Agua 1:4 (grano-‐agua) Cal 0.6-‐1.2 % Masa Agua Nejayote Formación de bolas de masa Fermentación 1-‐7 días Envolver en hojas de plátano Mezclado de las bolas de masa con agua Sal o azúcar o cacao o leche, horchata Pozol 39 En Villahermosa, Tabasco existen más de 400 pozolerías, en las cuales se vende la masa para hacer el pozol en casa o bien la bebida preparada. La bebida se prepara licuando la masa, fermentada o no, con ingredientes como leche, horchata, chocolate entre otros. La bebida es consumida comúnmente junto con dulces de la región. La microbiota del pozol es muy compleja, ya que incluye diferentes tipos de bacterias, mohos y levaduras. Los microorganismos pueden provenir del proceso (equipo, superficie de preparación) o de la falta de prácticas higiénicas. Las principales fuentes de contaminación son durante el remojo y la molienda de los granos de maíz (Wacher et al., 1993). En la molienda se inocula una gran cantidad de microorganismos como bacterias lácticas, mesófilos, enterobacterias, levaduras y hongos, puesto que no se realiza limpieza entre cada lote y a que la limpieza diaria solo incluye el desarmar el molino y remover los restos de masa mas no se utiliza agua para tal fin. Otras etapas que contribuyen a la presencia de microorganismos son el contacto con la superficie de trabajo (mesa de madera o plástico), manejo de la masa con las manos y la exposición de la masa al medio ambiente (Wacher et al., 1993). El estudio de la microbiología del pozol inició con los doctores Ulloa y Herrera, micólogos del Instituto de Biología de la UNAM. Entre las levaduras que encontraron en el pozol están los géneros Saccharomyces, Candida, Kluyveromyces, Hansenula y Trichosporon. Entre los hongos encontrados están Geotrichum candidum y diversas especies del genero Penicillium, Aspergillus, Cladosporium, Monilia, Mucor, Rhizopus, Trichoderma,Phialophora y Fusarium (Herrera, 2003). Mediante métodos tradicionales (cuenta en placa) y métodos moleculares (secuenciación del gen 16rRNA, PCR-DGGE, cuantificación de rRNA, entre otros) se ha logrado identificar a los microorganismos que participan en las diferentes etapas de la fermentación. Por métodos tradicionales se han encontrado bacterias 40 de los géneros Lactobacillus, Enterococcus, Leuconostosc y Lactococcus (Wacher et al., 2000) y algunas especies de levaduras y hongos como Rhodotorula minuta, Rhodotorula mucilginosa, Candida guillermondii, Kluyveromyces lactis, Chadosporium cladosporioides y Geotrichum candidum (Wacher et al., 2000). Mientras que por métodos moleculares se han encontrado bacterias lácticas pertenecientes al género Lactobacillus como L. plantarum, L. fermentum; otros géneros como Leuconostoc, Bifidoboacterias y Weissella (Ben Omar y Ampe, 2000) y otras bacterias como S. bovis, S. macedonicus y E. sulfureus (Díaz-Ruiz et al., 2003). Después de la nixtamalización el contenido de sacarosa disminuye de 2-100 g (grano entero peso seco) a 0.1-0.7 g (masa seca). Con el bajo contenido de azúcares un gran número de microorganismos es capaz de crecer y desarrollar en la masa (Díaz-Ruiz et al., 2003) por lo que el almidón representa una fuente de energía importante en estas condiciones. La concentración de microorganismos es mayor en la periferia que en el centro de las bolas de masa e incrementa con el tiempo de fermentación (Ben Omar y Ampe, 2000). En la periferia coexisten microorganismos anaerobios y aerobios estrictos, posiblemente debido a que los aerobios consumen el oxígeno cercano a la superficie permitiendo el desarrollo de los anaerobios (Ben Omar y Ampe, 2000). El cambio en la concentración de microorganismos está ligado al descenso en el pH, enfatizado en el centro el cual es de 3.8 mientras que en la periferia se mantiene por arriba de 4. 41 Tabla 6. Concentración de bacterias en función del pH y del tiempo de fermentación (Díaz-Ruiz et al., 2003). Tiempo de fermentación (h) pH Concentración (log UFC g-1 de materia seca) ALAB* Bacterias Lácticas 0 7.4 4.5 4.9 6 5.9 7.6 8.2 24 4.8 8.4 9.9 48 4.8 8.7 10.4 72 4.4 8.7 10.2 * Bacterias lácticas amilolíticas. Se han encontrado bacterias de los géneros Lactobacillus, Streptococcus, Lactococccus, Leuconostoc, Bifidobacterium, y Enterococcus. La abundancia relativa de Bifidobacteria, Streptococcus y Lactobacillus incrementa mientras que Leuconostoc, Lactococcus y Enterococcus disminuye durante la fermentación (Humblot y Guyot, 2008). Durante todo el proceso las bacterias lácticas dominan el proceso (Tabla 6) y representan más del 90% de la población activa basado en la cuantificación de rRNA, pero solamente del 10-50% en cuenta en placa (Humblot y Guyot, 2008). Se identificaron especies de bacterias lácticas cercanas a Lactobacillus casei, Lactobacillus delbrueckii, L. fermentum, L. plantarum, Enterococcus saccharolyticus, B. mínimum, Lb. confusus, Lb. lactis, Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc citreum y Leuconostoc raffinolactis. Entre las bacterias no lácticas se encuentran Exiguobacterium (Exiguobacterium aurantiacum y Exiguobacterium acetylicum) y Oxalophagus (Ben Omar y Ampe, 2000). Algunas levaduras y hongos aislados son Candida guilliermondii, Cladosporium cladosporioides y Geotrichum candidum (Wacher et al., 2000). 42 Ben Omar y Ampe (2000) dividieron la fermentación del pozol en tres etapas, en la primera etapa hay gran concentración de microorganismos probablemente provenientes de la molienda. La microbiota incluye los géneros Streptococcus, Enterococcus y aerobios estrictos como Exiguobacterium presentes durante el primer día de fermentación, posteriormente se encuentran en niveles no detectables. Durante la segunda etapa de 24-48 h, las bacterias lácticas (LAB) heterofermentativas se hacen presentes como Leuconostoc y L. fermentum, alcanzan el máximo nivel a las 48 h durante las cuales se producen concentraciones similares de etanol y lactato, dichas bacterias poseen actividad amilolítica. La producción de ácido láctico por LAB heterofermentativas resulta en un disminución del pH el cual es responsable del crecimiento de hongos y levaduras en la superficie. La etapa final (48 a 96 h) se caracteriza por el decremento en la concentración de LAB heterofermentativas y el incremento de LAB homofermentativas relacionadas a L. plantarum, L. casei, L. delbrueckii y Bifidobacterium los cuales no fueron detectados durante las primeras etapas. Esto provoca la disminución nuevamente del pH principalmente en el centro. Las bacterias homofermentativas ácido resistentes son capaces de crecer y desarrollar mientras la concentración de ácido láctico es alta, pH por debajo de 4, y continúan con el proceso de acidificación; las condiciones son en su mayoría anaerobias. Díaz-Ruiz et al. (2003) reportaron que al inicio de la fermentación el 40% de las bacterias lácticas son amilolíticas (ALAB) y disminuyen hasta 3% después de 72 horas. Probablemente debido al pH (7) en la masa nixtamalizada se puede favorecer el crecimiento de las bacterias amilolíticas, conforme el pH disminuye la concentración de las mismas también. Las bacterias lácticas amilolíticas encontradas se relacionan con los géneros Streptococcus, Lactococcus; entre ellos S. bovis, S. macedonicus, L. lactis, E. sulfureus (Díaz-Ruiz et al., 2003). 43 S. bovis es la especie dominante durante las primeras etapas a pesar de hidrolizar poco el almidón, sin embargo, crece adecuadamente en presencia de éste lo que podría darle ventaja competitiva frente a las bacterias no amilolíticas. El papel de S.bovis podría ser proveedor de maltooligosacáridos de bajo peso molecular para la microbiota no amilolítica en las primeras etapas de la fermentación (Díaz-Ruiz et al., 2003). La nula presencia de Lactobacillus entre las bacterias amilolíticas se debe posiblemente a las condiciones del proceso, como la cocción alcalina. Al final de la fermentación se encuentran principalmente bacterias lácticas no amilolíticas capaces de usar mono y disacáridos con eficiencia y los derivados de la hidrólisis del almidón por las bacterias lácticas amilolíticas (Díaz-Ruiz et al., 2003). Adicionalmente se ha reportado la fijación de nitrógeno por bacterias fijadoras de nitrógeno entre ellas Agrobacterium azotophilum, Enterobacter aerogenes, Alcaligenes pozolis y Klebsiella pneumoniae (Herrera, 2003). Debido a la falta de prácticas higiénicas durante el proceso, se ha reportado la presencia de E. coli en las masas (Sainz et al., 2001), así como de otras enterobacterias y bifidobacterias probablemente de origen fecal (Humblot y Guyot, 2008). Aún cuando el pH disminuye es posible que existan microambientes con un valor de pH mayor donde las bacterias pueden crecer. Sería posible también la resistencia en condiciones ácidas de bacterias como Salmonella Typhimurium y Shigella flexneri. La concentración de enterobacterias disminuye durante la fermentación, pero tiende a permanecer en una cuenta baja al final del proceso (Sainz et al., 2001). 4.1.1.1 Propiedades funcionales del pozol Posiblemente durante la fermentación del pozol se producen homo- exopolisacáridos de naturaleza prebiótica, como la inulina y dextrana (Uscanga, 44 2010). Dichos compuesto son considerados fibra dietética ya que no son digeribles en el tracto gastrointestinal de los humanos pero son solubles en agua. La inulina facilita la absorción de minerales principalmente de Ca2+, disminuye los niveles de triglicéridos, produce sensación de saciedad por lo que disminuye la ingesta de alimentos y puede reducir el riesgo de tener cáncer de colon (Rotimi, 2012). La inulina y
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