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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE QUÍMICA “EVALUACIÓN DE UNA CREMA CON EXTRACTO DE MUSA BALBISIANA (PLÁTANO MACHO) COMO POSIBLE REGENERADOR DE LA PIEL POR ENVEJECIMIENTO CUTÁNEO. ESTUDIO PILOTO EN MUJERES ADULTAS ENTRE 40 Y 65 AÑOS.” T E S I S QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: QUÍMICA FARMACÉUTICA BIÓLOGA P R E S E N T A: MELISSA GONZÁLEZ CHÁVEZ TUTOR DE TESIS: DRA. RUTH BUSTAMANTE GARCÍA CIUDAD UNIVERSITARIA, CD. MX., 2018 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. JURADO ASIGNADO: PRESIDENTE: Prof. Martha Leticia Jiménez Pardo VOCAL: Prof. Ruth Bustamante García SECRETARIO: Prof. José Vergara De La Fuente 1er. SUPLENTE: Prof. María Del Rosario López García 2° SUPLENTE: Prof. Atonatiu Edmundo Gómez Martínez SITIO DONDE SE DESARROLLÓ EL TEMA: BIOTERIO, EDIFICIO A, 5°PISO, FACULTAD DE QUÍMICA, UNAM. ASESOR DEL TEMA: Dra. Ruth Bustamante García SUPERVISOR TÉCNICO: M.V.Z. Atonatiu Edmundo Gómez Martínez SUSTENTANTE: p.Q.F.B. Melissa González Chávez ÍNDICE DE CONTENIDO Página Índice de Figuras i Índice de Cuadros ii Símbolos y Abreviaturas iii 1. Introducción 1 2. Generalidades 2 2.1. Piel 2 2.1.1. Epidermis 3 2.1.2. Dermis 4 2.1.3. Colágeno 6 2.1.4. Elastina 7 2.1.5. Tipos de piel 8 2.1.6. Etnia de la piel 10 2.1.7. La piel en diferentes etapas de la vida 10 2.1.8. Cambios en el colágeno causados por el envejecimiento 12 2.1.9. Cambios en la elastina causados por el envejecimiento 12 2.2. Envejecimiento cutáneo 13 2.2.1. Tipos de arrugas 14 2.2.2. Causas de la formación de arrugas 15 2.2.2.1. Causas intrínsecas 15 2.2.2.2. Causas extrínsecas 15 2.2.2.2.1. Fotoenvejecimiento 15 2.2.2.2.2. Radicales libres 16 2.3. Musa balbisiana 18 2.3.1. Propiedades nutricionales de la Musa balbisiana 20 2.3.2. Propiedades antioxidantes 22 2.4. Polifenoles 22 2.4.1. Taninos 24 2.4.1.1. Taninos condensados 25 2.4.1.2. Taninos hidrolizables 26 2.4.2. Actividad antioxidante 27 2.4.3. Beneficios para la salud 27 2.5. Cosméticos 28 2.6. Fitocosmética 29 2.7. Emulsiones 29 2.7.1. Tipos de emulsiones 30 2.7.2. Excipientes 30 3. Objetivos 32 4. Hipótesis 32 5. Materiales y métodos 33 5.1. Material vegetal 33 5.2. Animales de experimentación 33 5.3. Métodos 34 5.3.1. Propuesta de diseño para una crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) 35 5.3.2. Estudio de compatibilidad de materias primas 35 5.3.3. Preformulación 36 5.3.4. Formulación 37 5.3.4.1. Obtención del extracto de Musa balbisiana (plátano macho) 37 5.3.4.2. Metodología para la crema base 38 5.3.4.3. Metodología para la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) 39 5.4. Pruebas de calidad de la crema con el extracto de Musa balbisiana (plátano macho) 40 5.4.1. Determinación de las propiedades organolépticas 40 5.4.2. Determinación de la propiedad fisicoquímica 40 5.4.2.1. Determinación del pH 40 5.5. Prueba de irritabilidad en piel 41 5.6. Estudio piloto de la crema de Musa balbisiana (plátano macho) 42 5.7. Análisis estadístico 43 6. Resultados 44 6.1. Resultados de las pruebas de compatibilidad de ingredientes 44 6.2. Resultados de las pruebas de calidad de la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) 44 6.3. Resultado de la prueba de irritabilidad en piel de conejos (Nueva Zelanda) 45 6.4. Evaluación de las mediciones de las arrugas en el estudio piloto 46 6.5. Evaluación de las encuestas sobre la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) 50 7. Discusión 54 8. Conclusiones 56 9. Referencias 57 10. Anexos 67 10.1. Carta de aprobación del CICUAL 67 10.2. Consentimiento informado 68 10.3. Encuesta sobre la crema de plátano macho 70 10.4. Prueba de irritación en piel 71 i ÍNDICE DE FIGURAS Páginas Figura 1. Capas histológicas de la piel 3 Figura 2. Capas de la epidermis 4 Figura 3. Capas de la dermis 5 Figura 4. Colágeno 6 Figura 5. Elastina 8 Figura 6. Envejecimiento 13 Figura 7. Musa balbisiana (plátano macho) 19 Figura 8. Estructura química de los fenoles 22 Figura 9. Estructura química de los diferentes tipos de polifenoles 23 Figura 10. Estructura química de los diferentes tipos de taninos 25 Figura 11. Diagrama general de trabajo 34 Figura 12. Diagrama de flujo de elaboración de crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) 39 Figura 13. Diagrama de flujo de las pruebas realizadas para determinar las propiedades organolépticas y fisicoquímica de la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) 41 Figura 14. Áreas delimitadas en el conejo para la prueba de irritabilidad en piel 42 Figura 15. Prueba de irritabilidad en conejos 45 Figura 16. Gráfica comparativa de las longitudes de las arrugas de cada participante del día 1 y el día 30 del estudio piloto 48 Figura 17. Gráfica del promedio de evaluación de la longitud de las arrugas post-administración de las cremas, con los tratamientos de la crema con el extracto de Musa balbisiana y la crema control- 50 Figura 18. Gráfica de porcentaje de opiniones sobre la consistencia de la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) 51 i Figura 19. Gráfica de porcentajes de opiniones sobre el aroma de la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) 51 Figura 20. Gráfica de porcentaje de opiniones sobre la apariencia de la piel con el uso de la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) 52 Figura 21. Gráfica de porcentaje de opinión sobre el cumplimiento del objetivo inicial (disminución de las arrugas) de la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) 53 Figura 22. Gráfica de porcentaje de personas que presentaron algún malestar por la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) 53 ii ÍNDICE DE CUADROS Páginas Cuadro 1. Principales tipos de colágeno 7 Cuadro 2. Diferencias de la piel en distintas edades de la vida 11 Cuadro 3. Especies reactivas del oxígeno (ER) 17 Cuadro 4. Tipos de antioxidantes 18 Cuadro 5. Composición nutricional de la Musa balbisiana 21 Cuadro 6. Tipos de emulsiones 30 Cuadro 7. Especificaciones de calidad para la crema de Musa balbisiana 35 Cuadro 8. Excipientes y aditivos seleccionados para la formulación 36 Cuadro 9. Formula patrón para una emulsión O/W 36 Cuadro 10. Reactivos utilizados para la formulación de la base de la emulsión (crema) 37 Cuadro 11. Resultados de las especificaciones de las pruebas de calidad 44 Cuadro 12. Resultados de la caracterización de la crema con el extracto de Musa balbisiana 45 Cuadro 13. Resultados de la presencia de eritema y formación de escara 46 Cuadro 14. Medidas de las arrugas de las participantes durante el estudio piloto 47 Cuadro 15. Evolución de las arrugas a lo largo del estudio piloto 49 Cuadro 16. Valoración de reacciones cutáneas 71 Cuadro 17. Clasificación del grado de irritación 72 Cuadro 18. Clasificación del grado de irritación en reacciones mixtas72 iii Abreviaturas · Electrón desapareado ·OH Radical hidroxilo 1ΔO2 Oxígeno singulete cbp Cuanto baste para -COOH Carboxilo cps Centipoise cs Cantidad suficiente Da Daltons DNA Ácido Desoxirribonucleico (del inglés, Deoxyribonucleic acid) ERO Especies reactivas de oxígeno FDA Agencia de alimentos y medicamentos (del inglés, Food and Drug Administration) FEUM Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos Gli Glicina GPx Enzima glutatión peroxidasa HClO Ácido hipocloroso LDL Lipoproteinas de baja densidad MGA Método General de Análisis N/A No aplica NOM Norma Oficial Mexicana O/W Aceite en agua O2-· Radical anión superóxido O3 Ozono -OH Alcohol pH Potencial de hidrógeno PVC Cloruro de polivinil PROY Proyecto RL Radicales libre iii RO· Radical Alcóxido ROO· Radical peróxido RNS Radicales libres de nitrógeno rpm Revoluciones por minuto SSI Solución Salina Isotónica 0.9% UV Rayos Ultra Violeta UVA Rayos Ultra Violeta A UVB Rayos Ultra Violeta B W/O Agua en aceite 1 1. Introducción La sociedad actual impone el mantenimiento de una apariencia joven y saludable, en donde la batalla contra las arrugas se ha convertido en una carrera contrarreloj. Actualmente a la sociedad le intimida el paso del tiempo y pretende conservarse joven, casi como demanda. Es innegable que no se puede detener el tiempo y que con la edad la vida traza surcos en nuestro rostro que reflejan las experiencias que hemos vivido. El envejecimiento cutáneo es un proceso continuo en el que progresivamente se producen cambios morfológicos y funcionales en la piel; hay un deterioro en las funciones biológicas y en la habilidad para adaptarse al estrés metabólico. Aunque es un proceso gradual e inevitable en la vida de todos los seres vivos también se relacionan otros factores como la exposición a la radiación solar, alimentación o enfermedades de la piel que pueden acelerar el envejecimiento epitelial. Los daños dérmicos y epidérmicos de la piel envejecida pueden prevenirse en cierta medida mediante una buena fotoprotección, además de ser tratados con productos de origen natural cuyas propiedades puedan mejorar o disminuir la apariencia de envejecimiento. Dentro de los productos que pueden ser utilizados se encuentra el extracto de Musa balbisiana (plátano macho), al cual le han atribuido propiedades antioxidantes y reparadoras debido a los compuestos polifenólicos que contiene; por tal motivo el objetivo de este trabajo fue evaluar que el extracto de Musa balbisiana (plátano macho) incluido en una forma cosmética (crema) disminuye la apariencia de envejecimiento en mujeres de entre 40 a 65 años, en un estudio piloto, en donde se demostró que el uso de la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) disminuyo las arrugas y hubo mejora en la apariencia de la piel. 2 2. Generalidades 2.1 Piel La piel forma la cubierta externa del cuerpo y es el órgano más grande dado que representa del 15 al 20% de su masa total. Esta unida a las mucosas por estrechas zonas de transición, las zonas mucocutáneas. La piel está constituida por dos estratos principales: La externa o la epidermis y la subyacente o la dermis. Las dos capas forman una masa compacta, que descansa sobre una capa más subyacente que es más rico en lípidos llamada hipodermis (Figura 1) (1). Cada capa es descrita de la siguiente manera (1): La epidermis: compuesta por un epitelio estratificado plano queratinizado que crece constantemente, pero mantiene su espesor normal por el proceso de la descamación. Tiene un grosor de 0.1 mm. La dermis: compuesta por un tejido conjuntivo denso provee sostén mecánico, resistencia y espesor a la piel. Su grosor promedio varía de 0.5 a 3 mm o más. La hipodermis: contiene una cantidad variable de tejido adiposo organizado en lobulillos separados por tabiques de tejido conjuntivo. Está situada a mayor profundidad de la dermis y dependiendo de la zona del cuerpo puede no tener tejido adiposo, o llegar a tener 3 o más centímetros de espesor. 3 Figura 1. Capas histológicas de la piel (81). 2.1.1 Epidermis La epidermis está compuesta por un epitelio estratificado plano cuya función es proteger contra acciones agresivas del medio y contra la perdida de líquidos en el que pueden identificarse cuatro estratos bien definidos (Figura 2). Desde el más profunda hasta el más superficial estos estratos son (1): Estrato basal: consiste en una capa celular de una sola célula de espesor que se apoya sobre la lámina basal. Contiene las células madre que dan origen a células nuevas, los queratinocitos, por división mitótica (1). Estrato espinoso: tiene de ocho a diez capas de espesor. Sus células son más grandes que las del estrato basal y las múltiples proyecciones citoplasmáticas o "espinas" que poseen le dan su nombre a este estrato (1). Estrato granuloso: la capa más superficial de la porción no queratinizada de la epidermis, tiene de una a tres células de espesor. Las células poseen numerosos gránulos de queratohialina, de allí el nombre de este estrato (1). Estrato corneo: está constituido por 25 a 30 capas de células escamosas anucleadas en gran medida llenas de filamentos de queratina, son las más diferenciadas de la epidermis. Las células queratinizadas de la porción más profunda de este estrato poseen una gruesa membrana plasmática cubierta https://www.google.com.mx/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwj78-v14KXTAhVERSYKHV7SA0QQjRwIBw&url=http://curiosidades.info/que-es-la-dermis&bvm=bv.152479541,d.eWE&psig=AFQjCNHvk38-Vc-rYj0Npz2E2F9hPhHirw&ust=1492321466470810 4 por una capa extracelular de lípidos que forman el componente principal de la barrera contra el agua en la epidermis (1). Figura 2. Capas de la epidermis (82). 2.1.2 Dermis La dermis está compuesta por dos capas (Figura 3) (1): Dermis papilar: ubicado justo debajo de la epidermis, es la más superficial y consiste en tejido conjuntivo laxo. Representa alrededor de la quinta parte del grosor total de la capa. Los haces de las fibras de colágenas de esta parte de la dermis no son tan gruesos como los de la porción más profunda. Esta delicada red de colágeno contiene en forma predominante moléculas de colágeno de tipo I y de tipo III. Las fibras elásticas que también se encuentran en esta capa son filiformes y se organizan en una red irregular. La dermis papilar es relativamente delgada. Contiene vasos sanguíneos que irrigan la epidermis, pero no se introduce en ella y también contiene prolongaciones nerviosas (1). Dermis reticular: es más profunda con respecto a la dermis papilar y abarca alrededor del 80% del grosor total de la dermis. Aunque su espesor varía en 5 diferentes partes de la superficie corporal, siempre es bastante más gruesa y contiene menos células que la dermis papilar. Se caracteriza por tener gruesos haces irregulares de fibras colágenas sobre todo de tipo I y fibras elásticas mucho menos delicadas. Las fibras colágenas y elásticas no están orientadas al azar, sino que forman las líneas regulares de tensión de la piel que se conocen con el nombre de líneas de Langer (1). Figura 3. Capas de la dermis (83). Debajo de la dermis reticular hay una capa de tejido adiposo de espesor variable, el llamado panículo adiposo. Esta capa cumple una función importante de almacenamiento de energía y también sirve como aislante. Esta capa y su tejido conjuntivo laxo asociado constituyen la hipodermis o tejido celular subcutáneo (1). Parte importante de la piel son los tejidos conjuntivos que son constituidosprincipalmente por dos proteínas, estas son el colágeno y la elastina que serán explicadas a continuación. 6 2.1.3 Colágeno El colágeno es una proteína constituyente de los tejidos conjuntivos (piel, tendones y hueso), y es la proteína más abundante del organismo (Figura 4). Se caracteriza principalmente por su resistencia: una fibra de 1 mm de diámetro puede soportar una carga de 10 a 40 kg (5). Figura 4. Colágeno (84). El colágeno de la piel es rico en glicina (33% de los aminoácidos) y prolina (13%), así como también lo constituye los aminoácidos derivados hidroxiprolina (9%) e hidroxilisina (0.6 %) (6). Está constituido por un conjunto de tres cadenas polipeptídicas agrupadas en una estructura helicoidal. La repetición de 333 tripletes de forma Gli-X-Y preside la estructura de cada una de las cadenas (5). En posición X se encuentra en la mayoría de los casos la prolina, y en posición Y se encuentran la hidroxiprolina y la hidroxilisina, dos aminoácidos que no abundan en la constitución de las otras proteínas del organismo (5). La estructura helicoidal responsable de la rigidez y la resistencia de las fibras es específica de la molécula de colágeno (5). 7 Hasta la fecha se han identificado y descrito al menos 28 tipos de colágeno, de los cuales cuatro tipos de colágeno genéticamente distintos son los principales, estos son descritos en el Cuadro 1 (5). Cuadro 1. Principales tipos de colágeno (5). TIPO DISTRIBUCIÓN TISULAR CARACTERÍSTICAS I Huesos, tendones, piel, dentina, ligamentos, aponeurosis, arterias y útero Contiene poca hidroxilisina e hidroxilisina glucosilada. II Cartílagos hialinos Contenido relativamente alto de hidroxilisina e hidroxilisina glucosilada. III Piel, arterias y útero Contenido alto de hidroxiprolina; contiene enlaces disulfuro entre las cadenas. IV Membranas basilares Contenido alto de hidroxilisina e hidroxilisina glucosilada; contiene enlaces disulfuro entre las cadenas y puede presentar importantes zonas globulares. 2.1.4 Elastina Es el componente principal de las fibras elásticas, estas son esenciales para recuperar la conformación inicial de algunos tejidos. Esta proteína es muy abundante en la matriz extracelular de la piel, pulmones, ligamentos, vasos sanguíneos y especialmente en las paredes arteriales (7). En la piel, la mayoría de la elastina se encuentra en la dermis. Este tejido elástico se monta como una continua red de fibras (Figura 5). La masa densa de las fibras elásticas en la dermis reticular domina la región y es particularmente importante en la elasticidad general de la piel. Las fibras gruesas de la elastina se encuentran en la dermis profunda donde funcionan como una red de elastina interpenetrantes (8). 8 Figura 5. Elastina (85). La elastina es una proteína compuesta principalmente de los aminoácidos glicina, valina, alanina y prolina. Casi un tercio de los aminoácidos de la elastina son de glicina y el 11% es de prolina (9). La elastina es producida por las células del tejido conectivo llamadas fibroblastos. Los fibroblastos secretan la tropoelastina, la forma inmadura y soluble de la elastina. Las moléculas de tropoelastina se reticulan a través de sus residuos de lisina con las moléculas de reticulación desmosina e isodesmosina, la enzima que realiza la reticulación es la lisil oxidasa, formando una red elástica duradera que se comporta de forma similar al látex (8). 2.1.5 Tipos de piel Existen diferentes criterios para clasificar la piel, una de las más aceptadas se basa en la naturaleza de la emulsión que se forma sobre la superficie corporal denominada manto hidrolipídico o emulsión epicutánea. La emulsión epicutánea o manto hidrolipídico es la emulsión formada por el agua procedente de las glándulas sudoríparas y el ambiente, junto con los lípidos de las glándulas sebáceas. El sebo humano se compone de glicéridos y ácidos grasos libres (57.5%), esteres de ceras (26%), escualeno (12%), esteres del colesterol (3%) y colesterol (1.5%). Los lípidos 9 producidos por la epidermis superficial difieren por carecer de esteres de ceras y escualeno y por tener una proporción mucho más elevada de esteres de colesterol y colesterol (53). Los distintos tipos de pieles de acuerdo a esta clasificación son (11): Piel grasa: este tipo de piel presenta una mayor actividad de las glándulas sebáceas y tiende a segregar mayor cantidad de lípidos (11). Esta resiste más tiempo a la aparición de signos de envejecimiento, las arrugas aparecen más tarde y generalmente son menos numerosas, pero más profundas. El primer signo de edad en sujetos con piel grasa es la flacidez cutánea (12). Piel seca: las pieles secas se desarrollan como consecuencia de una disminución en el contenido de agua del estrato córneo, dificultando la acción de protección barrera de la piel (11). Las pieles secas tienden a envejecer más rápido que las pieles grasas o mixtas. Las arrugas en particular surgirán más rápido y en mayor número. Sin embargo, la flacidez es menos evidente en la piel seca que en la piel grasa. Si la piel no está hidratada esta se marcará con mayor facilidad (12). Piel normal: en la piel normal la cantidad de lípidos es ideal, la protección de la piel no presenta ninguna alteración y la hidratación cutánea es normal. Las características de la piel normal son: uniformidad, tacto muy suave, aterciopelado, espesor fino, lisa, poros cerrados y pequeños, sin brillo grasiento (11). Con la edad el aspecto aterciopelado se atenúa poco a poco. Pierden espesor, sensibilidad, flexibilidad, se debilitan y se deshidratan, tienden a aparecer marcas más rápido que la piel grasa. La grasa debajo de la piel desaparece gradualmente, y la producción de colágeno y elastina disminuye (12). Piel mixta: hay situaciones donde según la localización, la piel es seca o grasa, porque la distribución de las glándulas sebáceas y sudoríparas no es homogénea (11). Las personas con piel mixta tienen la ventaja de tener un rostro parcialmente protegido de los efectos del tiempo gracias al exceso de sebo producido en la barbilla, la nariz y la frente. Los signos de 10 envejecimiento como las arrugas aparecen más lentamente. Con el tiempo, las pieles mixtas tienden a deshidratarse como las pieles secas. También son propensas a una pérdida de la flexibilidad y tonicidad, y a la aparición de arrugas en las zonas secas (12). 2.1.6 Etnia de la piel Nuestros orígenes étnicos influyen sobre la estructura y el aspecto de nuestra piel. Si bien el envejecimiento aparece de forma natural en todos los tipos de piel, sus signos pueden variar de acuerdo con la etnia de la piel (13): • En las pieles más oscuras, los signos de envejecimiento aparecen con menos intensidad y comienzan en una etapa más tardía. El envejecimiento se manifiesta en forma de pliegues profundos, principalmente en los surcos nasolabiales (13). • En pieles más pálidas, el envejecimiento aparece en forma de finas líneas y arrugas (13). 2.1.7 La piel en diferentes etapas de la vida La piel es un órgano vivo que experimenta cambios significativos durante la vida de una persona. Desde la delicada piel de bebe hasta las arrugas de la vejez, pasando por la adolescencia, cuando son propensas al acné. Los cambios generales de cada etapa son mostrados en el Cuadro 2 (14). 11 Cuadro 2. Diferencias de la piel en distintas edades de la vida (14). ETAPAS DIFERENCIAS EN LA PIEL DE 0 A 12 AÑOS La capa más externa de la epidermis (la capa córnea) es particularmente delgada y las células están menos compactadas que en la piel de adulto. La piel de bebe es menos resistente, especialmente sensible a agentes químicos, físicos y microbiológicos. Propensa a la resequedad, más sensible a los rayos UV.A los 4 años la piel madurara, pero es todavía muy sensible. A los 12 años de edad, la estructura y función de la piel del niño corresponden a las del adulto. DE 12 A 20 AÑOS Los cambios hormonales de la pubertad pueden tener efectos dramáticos en la piel. El incremento en la producción de sebo y la alteración del desprendimiento de las células pertenecientes al estrato corneo pueden dar lugar a que la piel llegue a ser grasa y propensa al acné. DE 20 A 30 AÑOS La genética, el estilo de vida y el medio ambiente determinarán la etapa en la cual la epidermis y la dermis comienzan a adelgazarse. Alrededor de los 25 años aparecen los primeros signos de la edad. La masa de colágeno y la flexibilidad también empiezan a disminuir a una tasa de aproximadamente 1% al año. DE 30 A 40 AÑOS La función de barrera de la piel se debilita cada vez más. Los procesos metabólicos de las células comienzan a disminuir. La pérdida de la humedad y elasticidad de la piel aumenta. DE 40 A 60 AÑOS EPIDERMIS: Se pierde la disposición ordenada de las capas individuales de la epidermis. Se forman menos células, las células existentes se encogen y las capas superiores de la piel se vuelven más delgadas. DERMIS: Los tejidos conectivos en la capa media de la piel pierden su estructura fibrosa y su capacidad para fijar agua, y las fibras elásticas se degeneran, lo que resulta de la pérdida de resistencia y elasticidad, y la aparición de arrugas. También la disminución gradual de los vasos sanguíneos de la dermis. La dermis proporciona nutrientes a la epidermis, lo que resulta de una perdida de la densidad y de la firmeza de la piel. HIPODERMIS: La capa más profunda de tejido graso se reduce gradualmente, resultando en una pérdida de volumen y pérdida de densidad. La energía de la piel se reduce y la piel se vuelve menos elástica a la presión. DE 60 Y 70 AÑOS La capacidad natural de la piel para producir lípidos disminuye, la regeneración de la piel es más lenta y la piel cada vez se vuelve más delgada, con el resultado de una pérdida de volumen y una pérdida de densidad. Aumenta la sensibilidad de rayos UV y la piel es propensa a la hiperpigmentación. 12 Como se indicó en el cuadro anterior, con el envejecimiento se da una reducción progresiva de la dermis vascular presente, debido a la disminución en el número y tamaño de los vasos vasculares, que provoca la pérdida de la firmeza de la piel y luminosidad a medida que avanza el proceso de envejecimiento. También se ejecuta la generación de lisis de las fibras elásticas más rápido en comparación con la lisis de las fibras de colágeno (15). Estos últimos cambios serán explicados en los apartados posteriores. 2.1.8 Cambios en el colágeno causados por el envejecimiento Los daños causados por el envejecimiento en las fibras de colágeno se inician al mismo tiempo que en las fibras de elastina, pero la velocidad del proceso y sus consecuencias sobre la estructura son en gran parte diferentes (16). Inicialmente las fibras de colágeno más finas se ven afectadas. El proceso se extiende con el envejecimiento, por lo que cada vez más y más fibras a nivel de la dermis superficial se adelgazan, después de los 70 - 75 años estas son afectadas por la lisis (16). El adelgazamiento de la dermis superficial es debido a la reducción cuantitativa de las fibras de colágeno. En la dermis profunda las fibras de colágeno se ensanchan lo que da una cierta densidad a esta capa, es una tendencia lenta y gradual (16). Posteriormente la lisis de algunas fibras determina la aparición de espacios entre las fibras restantes. La dermis se vuelve menos resistente de lo normal, ya que las fibrillas que constituyen las fibras de colágeno se separan y tienen repercusiones sobre la función de las fibras de colágeno. En general se pierde del 1 al 1.5% de colágeno por año a partir de los 30 años (16). 2.1.9 Cambios en la elastina causados por el envejecimiento Las fibras de elastina parecen ser más sensibles a procesos de lisis fibrilar comparada con las fibras de colágeno. Después de los 70- 75 años el proceso de envejecimiento afecta la gran mayoría de las fibras de elastina (16). 13 Las fibras de elastina son gruesas en la piel de personas mayores comparadas con la piel de individuos jóvenes. Las alteraciones de las fibras de elastina se extienden en la superficie y en la profundidad de la dermis con la edad (13). El proceso de elastosis parece comenzar al mismo tiempo en la parte superficial y en la parte profunda de la dermis. La elastolisis es más rápida en la superficie de la dermis, ya que en la dermis superficial las fibras de elastina son más delgadas que las que existen en la dermis profunda. (16). Al inicio son afectadas las fibras más delgadas de elastina, con la edad más y más fibras sufren un proceso de separación de las fibrillas y finalmente después de los 70-75 años son afectados por la lisis. La desaparición gradual de las fibras de elastina resulta en la pérdida progresiva de la elasticidad de la piel (16). 2.2 Envejecimiento cutáneo El envejecimiento cutáneo es un proceso biológico complejo, progresivo e irreversible (Figura 6). Está condicionado por determinantes genéticos individuales, factores nutricionales y el acumulo de diversas agresiones ambientales, mucha de ellas influenciadas por la actividad laboral y/o diferentes estilos de vida (20). Figura 6. Envejecimiento (90). 14 2.2.1 Tipos de arrugas Las arrugas son los principales signos evidentes del envejecimiento de la piel, las cuales se clasifican en (17): Arrugas de expresión: a diario la cara se expresa realizando una infinidad de movimientos que provocan la contracción y relajación de las células de la dermis y los fibroblastos. Con la repetición de estos movimientos faciales la piel pierde la capacidad de regresar a su estado original, los fibroblastos ya no se relajan, de manera que el tejido cutáneo queda contraído formándose una arruga de expresión permanente. Arrugas generadas por el paso del tiempo: el resto de las arrugas se forma por la degeneración paulatina de la piel con el paso del tiempo. Según la zona del tejido cutáneo que se encuentre más afectada se pueden dividir en (17): Arruga de trama: El estrato corneo de una piel joven está formada por una trama de líneas e incisiones que se cruzan de manera ordenada creando formas romboidales. Con los años este entramado pierde su estado original, ya que disminuyen las líneas y se organizan desordenadamente formando así las arrugas. Arruga de laxitud: Con la edad se disminuye el volumen de la piel y aumenta su flacidez, de manera que se forman pliegues por la relajación de la piel. Arruga de posición: Con el envejecimiento las fibras de colágeno y elastina se degeneran, de manera que los pliegues que se forman en el tejido cutáneo no tienen capacidad de volver a su estado original (17). 15 2.2.2 Causas de la formación de arrugas Las arrugas son el resultado del proceso normal del envejecimiento del tejido cutáneo, las causas que provocan la aparición de arrugas se pueden clasificar en dos grandes grupos; causas intrínsecas y causas extrínsecas (17). 2.2.2.1 Causas intrínsecas Las causas intrínsecas son las que dependen de la morfología de la piel y del envejecimiento propio del organismo como la contracción cutánea (los fibroblastos del tejido conectivo se contraen y se relajan generando una tensión o un alisamiento de la piel), el envejecimiento cronológico (con la edad, la dermis pierde su capacidad de soporte), y el envejecimiento hormonal (la piel en la mujer sufre también cambios hormonales que disminuye la cantidad de colágeno, específicamente el de tipo I y III) (17). 2.2.2.2 Causas extrínsecas Las causas extrínsecas son todos aquellos factores externos al organismoque favorecen la aparición de arrugas, el más dañino para la piel es la radiación solar. Los efectos nocivos de la radiación solar en la piel se denominan fotoenvejecimiento y se caracterizan por elastosis, flacidez y arrugas muy marcadas (17). 2.2.2.2.1 Fotoenvejecimiento Fotoenvejecimiento es la fotodermatosis más frecuente y representa la demostración clínica de que el daño por radiación UVB (315-280 nm) y UVA (400- 315 nm) es acumulativo e irreversible. Se manifiesta por modificaciones funcionales y estructurales en zonas expuestas como la cara, cuello, orejas, escote, antebrazos, dorso de las manos y piernas (20). Desde el punto de vista molecular, el fotoenvejecimiento difiere del envejecimiento intrínseco por dos razones principales (20): La acumulación de mayor número de mutaciones genéticas que aumenta la posibilidad de malignidad. 16 Por la señal celular inducida por la radiación ultravioleta que posee una acción pro-inflamatoria, que estimula la degradación de la matriz de colágeno (20). En el fotoenvejecimiento los rayos UVA tienen el rol protagónico, ya que tienen la capacidad de penetrar los estratos profundos de la piel, estos alteran y disminuyen la cantidad de colágeno de la dermis superior, y además producen importantes alteraciones en las fibras elásticas (20). Los cambios que tiene lugar en el envejecimiento son de gran complejidad, se han propuesto diversas teorías que implican otras causas a parte de las mencionadas anteriormente, una de los más aceptadas es la de los radicales libres que se menciona a continuación. 2.2.2.2.2 Radicales libres Esta teoría propone que debido a la alteración de los mecanismos antioxidantes se genera y acumula los radicales libres, lo que produce un estrés oxidativo (desbalance entre las especies reactivas de oxígeno y la actividad de defensa de los antioxidantes) que daña estructuras celulares y conduce a la muerte celular (17). Los radicales libres (RL) son átomos que poseen un electrón extra no apareado en su órbita externa, el cual los vuelve altamente reactivos con las células de su entorno, con la capacidad de modificar la estructura y función de aquellas (22). El origen de los RL puede ser endógeno (metabolismo aeróbico celular o daño oxidativo por las células fagocíticas) y exógeno (radiación ultravioleta, contaminación ambiental, humo de tabaco, pesticidas, entre otros) (23). En los sistemas vivos se generan muchos tipos de radicales libres siendo los más conocidos los radicales del oxígeno. Se utiliza el termino especies reactivas de oxígeno (ERO) como nombre colectivo para referirse a las especies derivadas del oxígeno, incluyendo tanto los derivados radicales como los no radicales que son agentes oxidantes y/o fácilmente convertibles en radicales (24). 17 Las ERO son los radicales libres derivados de la cadena respiratoria, que a nivel cutáneo pueden provocar acumulación de lesión oxidativa en moléculas de vida larga como el colágeno y la elastina, favorecer la acumulación de materiales como la lipofucsina (pigmento del envejecimiento) y provocar fibrosis arteolocapilar en los vasos que nutren la dermis (24). En el Cuadro 3 se presentan las especies reactivas del oxígeno (ERO) que son las responsables del estrés oxidativo (25). Cuadro 3. Especies reactivas del oxígeno (ERO) (25). ERO Símbolo Radicales Anión superóxido Hidroxilo Alcóxido Peróxido O2 -· ·OH RO· ROO· No radicales Peróxido de hidrógeno Ácido hipocloroso Ozono Oxígeno singulete H2O2 HClO O3 1ΔO2 El envejecimiento se caracteriza por la acumulación de muchas de las macromoléculas dañadas, y un desgaste progresivo de los mecanismos de reparación y degradación (24). Las células han desarrollado mecanismos que las protegen del efecto nocivo de los radicales libres con base en el sistema de defensa constituido por los agentes antioxidantes. Cuando se incrementa la producción de radicales libres, estos mecanismos se activan para controlar y estabilizar el ambiente redox intracelular o extracelular (26). Los antioxidantes se definen como aquellas sustancias que, presentes en bajas concentraciones respecto a las de un sustrato oxidable (biomoléculas) retardan o previenen la oxidación. Al interactuar con el radical libre, el antioxidante cede un 18 electrón. Se oxida y se transforma en un radical libre débil no tóxico. Algunos tipos de antioxidantes se describen en el Cuadro 4 (26): Cuadro 4. Tipos de antioxidantes (26). Tipos de antioxidantes Características Ejemplos Primarios Previenen la formación de nuevos radicales libres, convirtiéndolos en moléculas menos perjudiciales antes que puedan reaccionar o evitando la formación de radicales libres a partir de otras moléculas. Enzima glutatión peroxidasa (GPx). Las catalasas El glutatión reductasa. El glutatión S transferasa. Secundarios Capturan los radicales libres evitando la reacción en cadena. La vitamina E. La vitamina C. El beta-caroteno. El ácido úrico Terciarios Reparan las biomoléculas dañadas por los radicales libres. Las enzimas reparadoras de DNA (endonucleasas, exonucleasas). La piel es el órgano más expuesto de manera directa al daño por diversos factores (radicales libres, rayos UV, contaminación, etc.), por lo que a veces se recurre a la utilización de productos naturales por el efecto protector o reparador que llegan a proporcionan, como es el caso de la Musa balbisiana (plátano macho) del que se explicara en el siguiente apartado. 2.3 Musa balbisiana Existen una gran variedad de híbridos del plátano, su clasificación es extremadamente compleja y aún inacabada, por lo que se utilizan diferentes nombres para dirigirse al plátano macho, en este trabajo utilizaremos la clasificación de Cheesman. Cheesman en 1948 en la publicación “Classification of the bananas” introdujo el orden taxonómico e identificó a los tipos linneanos como híbridos producidos por el 19 cruzamiento de dos especies descritas por Luigi Colla, M. acuminata y M. balbisiana. A partir de ellos clasificó a las múltiples variedades cultivables según su dotación genética. Cheesman clasifico a los plátanos machos y sus variedades híbridos como Musa balbisiana (27). La Musa balbisiana (plátano macho) (Figura 7) es de la familia Musaceae, del género Musa, y de genoma AAB (28). Figura 7. Musa balbisiana (plátano macho) (86). La Musa balbisiana se caracteriza por ser una fruta sin madurar que tiene diferentes usos y beneficios para la salud, usualmente es comido de manera frita, hervida o cocida. Las propiedades de la Musa balbisiana se relacionan con la fuente de vitaminas, fibras y minerales de esta fruta, las que pueden ayudar a controlar los niveles de colesterol en la sangre, controlar la glicemia y además cuidar el peso (29). La Musa balbisiana es mucho más grande en tamaño que uno común, y su color es verde hasta que llega a un estado óptimo de maduración. En cuanto a su sabor, este es amargo cuando está crudo y al ser cocido se vuelve suave, blando y mantecoso. Debido a que la Musa balbisiana es difícil de ingerir cuando se encuentra en este estado, debe ser cocido o bien horneado tal como si fuera una papa. Pero sin duda son sus propiedades medicinales las que llaman mucho la 20 atención de esta fruta, la cual puede ser utilizada como un tratamiento para dolencias crónicas como hipertensión arterial, enfermedades renales y enfermedades cardíacas donde se debe reducir el consumo de sal (29). Su planta es perenne, de gran tamaño, carece de verdadero tronco. En su lugar, posee vainas foliares que se desarrollan formando estructuras llamadas pseudotallos, similares a fustes verticales de 30 cm de diámetro basal, aunque no son leñosos. Alcanzan los 7 m de altura, de color verde o amarillo verdoso intenso, la partedistal de las vainas presenta marcas negras, mientras que la basal se orla de rojo (30). 2.3.1 Propiedades nutricionales de la Musa balbisiana La Musa balbisiana aporta principalmente hidratos de carbono complejos, almidones, pero a diferencia de otros alimentos ricos en almidones como la papa, la mayoría de almidones de la Musa balbisiana son retrógrados, es decir, que actúan como fibra porque no son asimilables para el organismo (31). Los carbohidratos de la Musa balbisiana son, por tanto, en su mayoría complejos, que se absorben gradualmente en el organismo o en forma de fibra. También presenta un contenido menor en azúcares, y prácticamente no contiene grasa ni proteínas. A nivel nutricional constituye un alimento energético, similar a otros vegetales como tubérculos (31). La Musa balbisiana es sobre todo una excelente fuente de fibra, porque sus almidones resistentes actúan parcialmente como fibra soluble, y una pequeña parte como fibra insoluble, por lo tanto, aporta los beneficios de ambas (31). También han sido utilizados desde hace muchos años para el tratamiento de úlceras, esto por su contenido de vitamina A, glúcidos, potasio, ácido fólico, fibra y magnesio. Gracias al alto contenido de glúcidos es recomendada para que la coman niños, adultos con una vida activa, embarazadas y ancianos; además personas diabéticas también debido a su contenido de polisacaridos, los que regulan la 21 glucosa y retrasan su absorción. El contenido de vitamina A de la Musa balbisiana, protege los tejidos y a su vez también protege las células (29). Es la base de la alimentación en muchos países tropicales en los que resulta un alimento muy adecuado en verano para reponer electrolitos como el potasio, cuyas pérdidas aumentan con el sudor o la transpiración. Contiene vitamina B6, que contribuye al buen funcionamiento del sistema inmunitario (31). En el Cuadro 5 se muestra la composición nutricional de la Musa balbisiana (31). Cuadro 5. Composición nutricional de la Musa balbisiana (31). Valor nutricional de la Musa balbisiana por cada 100 g Nutrientes Musa balbisiana Agua (g) 65.3 Calorías (kcal) 122 Grasa (mg) 0.37 Proteína (g) 1.3 Hidratos de carbono (g) 30.89 de los cuales azúcar (g) 15 Fibra (g) 2.3 Potasio (mg) 499 Fósforo (mg) 34 Hierro (mg) 0.6 Sodio (mg) 4 Magnesio (mg) 37 Calcio (mg) 3 Zinc (mg) 0.14 Vitamina C (mg) 18.4 Vitamina A (UI) 1.127 Ácido fólico (µg) 22 Vitamina B1 (Tiamina) (mg) 0.05 Vitamina B6 (Ácido pantoténico) (mg) 0.3 Vitamina E (mg) 0.14 Niacina (mg) 0.67 22 2.3.2 Propiedades antioxidantes En algunos estudios realizados se ha determinado que la Musa balbisiana es una fuente importante de polifenoles, estos contienen compuestos polifenólicos de alto peso molecular con baja solubilidad; los taninos condensados y los taninos hidrolizables. Los taninos se asocian a la fibra dietética y a las proteínas (32). La distinta capacidad antioxidante de los compuestos fenólicos depende en el número y en las posiciones externas de los grupos OH- presentes en su estructura (32). La capacidad antioxidante de cada variedad de plátano podría estar influenciada por el tipo de compuesto fenólico presente, más que por la cantidad. En la Musa balbisiana está presente en el nivel más alto los polifenoles, que contribuyen a la actividad antioxidante (32). Los polifenoles pertenecientes a la Musa balbisiana podrían ser capaces de originar un efecto reductor de arrugas, estos compuestos serán descritos en el siguiente capítulo. 2.4 Polifenoles Los polifenoles son una amplia variedad de compuestos que presentan una estructura molecular característica por la presencia de uno o varios anillos fenólicos (Figura 8). Se originan principalmente en las plantas, frutas y vegetales, que los sintetizan en gran cantidad como producto de su metabolismo secundario (34). Figura 8. Estructura química de los fenoles (87). https://www.google.com.mx/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwjG-v7X5r7TAhUJ7IMKHY8KA8UQjRwIBw&url=https://es.wikipedia.org/wiki/Fenol&psig=AFQjCNHu2Tg_aQnqqBgwz8LIMaSf3sqiRA&ust=1493182005922891 23 Los compuestos fenólicos intervienen como antioxidantes naturales en los alimentos. Químicamente los fenoles pueden ser definidos como sustancias que poseen un anillo aromático con uno o más grupos hidroxilo, incluyendo a sus derivados funcionales (Figura 9) (35). Figura 9. Estructura química de los diferentes tipos de polifenoles (88). 24 2.4.1 Taninos Existen polifenoles más complejos, los cuales son responsables de precipitar algunas proteínas y alcaloides para convertir la piel del animal en cuero, estos polímeros se conocen como taninos (35). Los taninos son compuestos fenólicos hidrosolubles con un peso molecular comprendido entre 500 a 5000 Da. Estos compuestos contienen un número importante de grupos hidroxilos entre otros grupos funcionales, siendo capaces de unirse a proteínas y otras macromoléculas (35). Se distinguen por las siguientes características generales (37): Solubilidad en agua. Masa molecular entre 500 y 5000 Da. Estructura y carácter polifenólico (12-16 grupos fenólicos y 5-7 anillos aromáticos por cada 1000 unidades de masa molecular relativa). Sus propiedades principales están relacionadas con (38): La capacidad de formar complejos con las proteínas que les confiere una característica gustativa interesante, asociada al término globalmente conocido como astringencia o gusto tánico. Su poder antioxidante y su capacidad de consumir oxígeno disuelto, atribuyéndole su propiedad antioxidante, muy utilizada en la industria agroalimentaria y farmacéutica. Los taninos (Figura 10) se clasifican comúnmente en dos grupos, hidrolizables y no hidrolizables o condensados, los primeros tienen como núcleo central un alcohol polihídrico generalmente glucosa y grupos hidroxilo que se encuentran esterificados parcial o completamente ya sea con el ácido gálico o el ácido hexahidroxidifénico, formando los galotaninos y elagitaninos respectivamente (35). 25 Figura 10. Estructura química de los diferentes tipos de taninos (89). La estructura química de los taninos varía cualitativa y cuantitativamente en vegetales y frutas. 2.4.1.1 Taninos condensados Los taninos condensados han sido más estudiados respecto a su actividad antioxidante, además de que se ha reportado que poseen beneficios a la salud por su actividad antibacterial o bacteriostático, anticarcinogénica, inhibidora de la peroxidación lipídica y de la agregación plaquetaria relacionada a la formación de trombos en sistema circulatorio (43). En la literatura se indica que los taninos condensados como polifenoles complejos, demuestran ser secuestradores efectivos de radicales libres, inhiben la oxidación de tejidos y tienen una preferencia por neutralizar el radical hidroxilo ( .OH) (44). 26 También se ha indicado que tienen la capacidad de actuar como inhibidores no competitivos de la enzima xantina oxidasa, una de las mayores generadoras de radicales libres en el metabolismo celular (44). La actividad antioxidante de los taninos condensados tiene la capacidad de evitar la oxidación de lipoproteínas de baja densidad (LDL) y por ello inhibe la formación de trombosis en personas con padecimientos cardiacos como la aterosclerosis (44). Los taninos condensados muestran diversas propiedades físicas y químicas que, dentro del organismo que las consume, se traducen en diversas actividades biológicas: propiedades antioxidantes, quimio-terapéuticas, anti-inflamatorias y antimicrobianas. Sin embargo, por su incapacidad para ser hidrolizados, se les ha involucrado en diversas actividades antinutricionales (secuestro de micronutrientes) (44). 2.4.1.2 Taninos hidrolizables Los taninos hidrolizablesllamados también gálicos o pirogálicos, son taninos que como su denominación indica se hidrolizan con facilidad tanto por ácidos o álcalis, como por vía enzimática (38). Los galotaninos son considerados como las formas más simples de los taninos hidrolizables. Son ésteres del ácido gálico y del ácido di gálico unidos entre sí por enlaces ésteres entre el carboxilo (–COOH) de uno de ellos y el -OH del otro, y a su vez unidos a hexosas como la glucosa mediante un enlace anomérico beta (45). Los elagitaninos se forman a partir del ácido hexahidroxidifénico el cual al ser hidrolizado se deshidrata espontáneamente para formar el ácido elágico. Su estructura puede presentar diversos puntos de polimerización por esterificación, al igual que los galotaninos, tanto en la molécula glucídica como en los grupos que se forman del ácido hexahidroxidifenico disponibles, que le da la posibilidad de formar estructuras de mayor peso molecular en comparación a los galotaninos (45). Los taninos hidrolizados que poseen su núcleo glucídico (generalmente glucosa), son más susceptibles a hidrólisis en condición fisiológica permitiendo la liberación 27 gradual de sus componentes primarios, han mostrado una fuerte capacidad biológica como anti-tumorales, anti-mutágenos, anti-diabéticos y antibióticos (44). 2.4.2 Actividad antioxidante Los compuestos fenólicos forman parte del denominado sistema antioxidante de defensa exógeno del organismo, que son aquellas defensas que se adquieren a través de la dieta (25). Su estructura química es la ideal para reaccionar con los radicales libres y formar un radical intermedio más estable y menos reactivo, ya que la presencia de anillos aromáticos y grupos hidroxilo permite que se deslocalicen los electrones (25). El mecanismo por el cual estos compuestos ejercen su actividad antioxidante es la transferencia de electrones que forma una molécula radical activa, esto proviene de su gran reactividad como donantes de electrones e hidrógenos y de la capacidad del radical formado para estabilizar y deslocalizar el electrón desapareado (25). El radical fenólico formado (llamado radical aróxilo) debe ser lo suficientemente estable para que la función antioxidante del compuesto fenólico sea efectiva, y a bajas concentraciones debe proteger los compuestos contra el daño de los radicales libres (25). 2.4.3 Beneficios para la salud Además de sus propiedades antioxidantes, los polifenoles poseen otras actividades biológicas específicas derivadas o no de su acción antioxidante. Se les atribuyen propiedades antimicrobianas y antimutagénicas, inhiben in vitro la oxidación de las lipoproteínas de baja densidad (LDL) relacionadas con enfermedades coronarias, y protegen el DNA del daño oxidativo que tiene graves consecuencias en algunos cánceres relacionados con la edad, además inhiben la agregación plaquetaria y presentan efectos antiinflamatorios (25). Con la finalidad de aplicar los componentes pertenecientes a la Musa balbisiana sobre la piel se requiere emplear las formas cosméticas como medio de administración. 28 2.5 Cosméticos Los cosméticos son productos que se utilizan para la higiene corporal o para mejorar la apariencia, especialmente del rostro. Generalmente son mezclas de compuestos químicos, algunos se derivan de fuentes naturales y muchos otros son sintéticos. En los Estados Unidos, la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA), define a los cosméticos como "sustancia destinada a ser aplicada al cuerpo humano para limpiar, embellecer o alterar la apariencia sin afectar la estructura del cuerpo o funciones". Esta definición abarca también los componentes destinados para la preparación de los productos cosméticos (76). El Reglamento Europeo 1223/2009 define a los productos cosméticos como "toda sustancia o mezcla destinada a ser puesta en contacto con las partes superficiales del cuerpo humano (epidermis, sistema piloso y capilar, uñas, labios y órganos genitales externos) o con los dientes y las mucosas bucales, con el fin exclusivo o principal de limpiarlos, perfumarlos, modificar su aspecto, protegerlos, mantenerlos en buen estado o corregir los olores corporales". Indica que los cosméticos solo deben aplicarse vía tópica con los fines antes mencionados (77). En México se tiene el proyecto de Norma Oficial Mexicana PROY-NOM-259-SSA1- 2014, Buenas prácticas de fabricación en productos cosméticos, que define a los cosméticos como "las sustancias o formulaciones destinadas a ser puestas en contacto con las partes superficiales del cuerpo humano: epidermis, sistema piloso y capilar, uñas, labios y órganos genitales externos, o con los dientes y mucosas bucales con el fin exclusivo o principal de limpiarlos, perfumarlos, ayudar a modificar su aspecto, protegerlos, mantenerlos en buen estado o corregir los olores corporales o atenuar o prevenir deficiencias o alteraciones en el funcionamiento de la piel sana"(78). En la actualidad se ha hablado de otras clasificaciones de cosméticos, y se le han dado mucha importancia por contener ingredientes naturales. El estudio que se 29 encarga de explicarlos es la fitocosmética que será presentado en el siguiente capítulo. 2.6 Fitocosmética Es el estudio del uso de las materias de origen vegetal (fitoingredientes) en la formulación de productos cosméticos. El nombre de fitocosmética deriva de las palabras griegas "fitos" (plantas) y "kosmein" (decorar) (47). Para clasificar cualquier producto como fitocosmético la concentración de los fitoingredientes (cualquier materia prima vegetal) debe ser significativa o preponderante (46), de acuerdo con Ecocert (organismo de certificación para el desarrollo sostenible) se debe tener un mínimo del 50% de los ingredientes vegetales en la fórmula (48). Los fitocosméticos se clasifican en: Clasificación botánica: se da por familia, género y especie. (46). Clasificación por funcionalidad cosmética: se encuentra ligada a la presencia de determinados grupos químicos y dependerá del uso al que será destinado (47). Clasificación por grupos fitoquímicos: Por los grupos fitoquímicos que contiene, permite predecir tanto la funcionalidad, el tipo de extracción a utilizar y la formulación más indicada (46). Con la finalidad de facilitar la aplicación del plátano macho, este será presentado en forma de emulsión (crema) para una aplicación más sencilla y aceptable en el estudio piloto a realizar. 2.7 Emulsiones Una emulsión es un sistema bifásico termodinámicamente inestable que consta de al menos dos líquidos inmiscibles, uno de los cuales está disperso en forma de pequeñas gotitas en el otro y un agente emulsionante. El líquido dispersado se 30 conoce como fase interna o discontinua, mientras que el medio de dispersión se conoce como fase externa o continua (50). Son inestables, y si se les permite reposar por algún tiempo las moléculas de la fase dispersa tienden a asociarse para constituir una capa que puede precipitar o migrar a la superficie, según la diferencia de densidades entre las dos fases (50). Por lo general, las emulsiones son sustancias cuyas moléculas contienen una parte no polar y otra polar, por lo que es posible que se disuelvan tanto en agua o soluciones acuosas como en disolventes orgánicos y aceites (50). 2.7.1 Tipos de emulsiones La consistencia de las emulsiones varía desde líquidos fácilmente vertibles a cremas semisólidas (50). Existen diferentes tipos de emulsiones, estos se especifican en el Cuadro 6 (51): Cuadro 6. Tipos de emulsiones (51). TIPO CARACTERISTICAS Aceite en agua (O/W) Sistema en que las gotas de aceite se dispersan a través de la fase acuosa. Agua en aceite (W/O) Sistema en el que el agua se dispersa a través del aceite. Agua en aceite en agua (W/O/W) Sistema en que se encierran varias gotas de aguaen gotas de aceite de mayor tamaño que después se dispersan a su vez en agua. Aceite en agua en aceite (O/W/O) Sistema que encierra varias gotas de aceite en gotas de agua de mayor tamaño que después se dispersan a su vez en aceite. 2.7.2 Excipientes La fase oleosa de una emulsión puede estar constituida por un producto químico orgánico de síntesis, como por ejemplo: hidrocarburos, o grasas y aceites procedentes de materias primas apenas manipuladas, por tanto próximos a 31 productos naturales de naturaleza orgánica, como por ejemplo, aceites vegetables (52). La fase acuosa de las emulsiones raramente consiste en agua pura, lo normal es que además se encuentren varios productos de naturaleza hidrófila. Entre los componentes solubles en medio acuoso se encuentran sales, ácidos, bases, azúcares, tensoactivos, proteínas, (en los dos últimos casos puede ser por exceso respecto a las cantidades presentes en la interfase O/W, por incompatibilidad con la interfase o material desplazado de la misma durante el procesado), estabilizantes (polisacáridos, polímeros), conservantes y algunos colorantes (52). Para la obtención de una emulsión estable se necesitan, al margen de la fase acuosa y oleosa, un tercer componente; el agente emulsificante este actúa disminuyendo el valor de la tensión interfacial entre las dos fases inmiscibles (52). La inclusión de un agente emulsificante es necesario para facilitar la unión de los compuestos acuosos y oleosos utilizados en la elaboración de emulsiones, y para garantizar la estabilidad de las mismas hasta su utilización. Estos agentes tienen tanto una parte hidrófila como una parte lipófila en su estructura química. Este efecto se debe a la formación de una película interfacial que tiene afinidad por las dos fases (acuosa y oleosa), constituidas por las moléculas del agente emulsificante que orienta sus grupos polares hacia la fase acuosa y sus restos apolares hacia la fase oleosa (52). 32 3. Objetivos Objetivo general: Evaluar que el extracto de Musa balbisiana (plátano macho) incluido en una forma cosmética (crema) disminuye la apariencia de envejecimiento en mujeres de entre 40 a 65 años, en un estudio piloto. Objetivos particulares: Obtener una emulsión (crema) con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) indicada para la piel afectada por el envejecimiento. Realizar la prueba de irritación de piel en conejos Nueva Zelanda. Evaluar mediante un estudio clínico si la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) disminuye las arrugas en mujeres de adultas entre 40 a 65 años. Probar si la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) logra mejorar el aspecto de la piel dañada por el envejecimiento. Relacionar los resultados obtenidos y evaluar el impacto de la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) en la piel de mujeres adultas entre 40 a 65 años, sobre los resultados obtenidos con una crema control. 4. Hipótesis La Musa balbisiana al ser aplicado sobre el cutis en forma de emulsión (crema) en mujeres adultas (entre 40 y 65 años), podría restaurar los efectos causados por el envejecimiento debido a los taninos hidrolizables y los taninos condensados contenidos en el plátano macho. 33 5. Materiales y métodos 5.1 Material vegetal Se utilizó 146.76 g de Musa balbisiana (plátano macho) como principio activo para la crema, con las siguientes características; el fruto era verde, un poco grueso y largo, comprado en la Bodega Aurrera en Naucalpan, Estado de México. 5.2 Animales de experimentación Se utilizaron tres conejos machos (Oryctolagus cuniculus) de raza Nueva Zelanda, sanos, con un peso de 3.0 ± 1.0 kg, sin daño en la piel. Los animales utilizados fueron proporcionados y alojados por la unidad de Bioterio de la Facultad de Química, UNAM. Los animales se mantuvieron bajo condiciones controladas de luz, temperatura y humedad, con acceso de alimentos y agua ad libitum, de acuerdo a la NOM-062-ZOO-1999; Especificaciones técnicas para la producción, cuidado y uso de los animales de laboratorio, y el Comité para el Cuidado y Uso de los Animales de Laboratorio (CICUAL). Carta de aprobación OFICIO/FQ/CICUAL/210/17 (Anexo1). 34 5.3 Métodos En la Figura 11 se presenta el diagrama de flujo de la parte experimental que se realizó para el desarrollo y evaluación de la crema con extracto de Musa balbisiana. Inicio Obtención del Ensayo de compatibi- extracto de Musa balbisiana lidad de material pri- mas con principio ac- tivo Elaboración de la crema con el extracto de Musa balbisiana Determinación de propiedades fisicoquímicas Prueba de irritación en piel de conejo (FEUM 11ª ed) Evaluación del efecto Estudio piloto regenerador del cutis con voluntarios envejecido Recopilación de resultados Análisis estadístico Conclusión Fin Figura 11. Diagrama general de trabajo. 35 5.3.1 Propuesta de diseño para una crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) Se realizó el diseño de la formulación para una crema de uso tópico como vehículo del extracto de Musa balbisiana (plátano macho), para su evaluación dérmica (prueba de irritabilidad según la FEUM 11a ed.) al ser aplicado en animales de experimentación y para la prueba de regeneración cutánea en voluntarias mujeres entre 40 a 65 años. Previamente se plantearon las características fisicoquímicas y de usó, para la elaboración de la crema con extracto de Musa balbisiana. Las especificaciones del producto que fueron propuestos se describen en el Cuadro 7: Cuadro 7. Especificaciones de calidad para la crema de Musa balbisiana. Características Especificación Apariencia Cremoso, semisólido, viscoso, suave al tacto, libre de partículas. Color Amarillo claro Olor Floral pH 5 – 11 Uso Tópico 5.3.2 Estudio de compatibilidad de materias primas Los estudios de compatibilidad encuadrados dentro de la preformulación farmacéutica consisten en la evaluación de la estabilidad del principio activo en presencia de aquellos excipientes que, previsiblemente, entrarán a formar parte de la forma farmacéutica. Elaborar formas farmacéuticas con un principio activo conlleva, habitualmente, la utilización de distintas sustancias auxiliares que al estar en contacto directo con el fármaco, pueden afectar su estabilidad (55). Con el propósito de obtener una crema base de uso tópico compatible con el principio activo se realizaron estos estudios de compatibilidad y solubilidad de 36 materias primas para la elección de los excipientes adecuados. Los excipientes y aditivos para la elaboración de la crema base se muestran en el Cuadro 8. Cuadro 8. Excipientes y aditivos seleccionados para la formulación. Excipiente o aditivo Función Aceite de almendras y oliva Emolientes Tween 80 y 20 Emulsificadores Vitamina C y E Antioxidantes Glicerina Humectante Dimeticona Lubricante Trietalonamina Ajustador de pH Carbopol Ultrez 10 Estabilizador Benzoato de sodio, Sulfito de sodio, Metilparabeno, Propilparabeno Conservadores Agua Disolvente Aromatizante Floral Aromatizante Con esta formulación se propusieron cinco formulaciones diferentes, tres con el extracto de Musa balbisiana (plátano macho) y dos únicamente con la base. 5.3.3 Preformulación Para la elaboración de la formulación de la crema de uso tópico se tomó como base la fórmula patrón para una emulsión O/W mostrado en el Cuadro 9 obtenido de Cumbreño Barquero S., Pérez Higuero F.L. (56). Cuadro 9. Formula patrón para una emulsión O/W. Fórmula patrón de una emulsión O/W Componentes Porcentaje Principios activos Fase grasa Fase acuosa Emulgentes Conservantes Antioxidantes X% 10-30% 70-90% <10% X% X% 37 5.3.4 FormulaciónEmpleando los excipientes seleccionados del Cuadro 8, se elaboró la formulación para la base de una emulsión (crema) de uso tópico, la cual estaba conformada por los siguientes reactivos con sus respectivas funciones (Cuadro 10). Cuadro 10. Reactivos utilizados para la formulación de la base de la emulsión (crema). Reactivo Función Aceite de almendras Emoliente Aceite de oliva Emoliente Tween 80 Emulsificador Tween 20 Emulsificador Vitamina E Antioxidante Glicerina Humectante Dimeticona Lubricante Trietalonamina Ajustar pH Carbopol Ultrez 10 Estabilizador Benzoato de sodio Conservador Sulfito de sodio Conservador Ácido cítrico Antioxidante Metilparabeno Conservador Propilparabeno Conservador Agua Disolvente La información mencionada en el apartado de Preformulación influyó para determinar la proporción de cada uno de los componentes y el procedimiento para la base de la crema con extracto de Musa Balbisiana (plátano macho) y de la crema control. 5.3.4.1 Obtención del extracto de Musa balbisiana (plátano macho) Se separó la cáscara de la pulpa del plátano macho previamente ozonificado. A continuación, se licuó con un poco de agua esterilizada, junto con el ácido cítrico y el benzoato de sodio (Sigma Aldrich). Se reservó en un recipiente aparte, tapado y etiquetado. 38 5.3.4.2 Metodología para la crema base Se lavó y ozonificó previamente el material a utilizar. En un vaso de precipitados de 1 L con agua esterilizada se agregó el carbopol Ultrez 10 (Lubrizol) y se dejó reposar por 24 horas. Al siguiente día, se pesó cada uno de los componentes y se separó por fases (acuosa y oleosa). Se mezcló en un vaso de precipitados el aceite de oliva, el aceite de almendras, la glicerina (Multiplus), la vitamina E, el tween 20 y el tween 80 (Sigma Aldrich), esta fue la fase oleosa. Se emulsionó con agitación tipo propela la fase oleosa sobre el carbopol hidratado, posteriormente se le agregó más agua esterilizada hasta obtener una emulsión. Al producto formado se le agregó, sin dejar de agitar, la silicona y la trietanolamina (Sigma Aldrich), hasta obtener una consistencia cremosa. Por último, se le adiciono el propilparabeno y el metilparabeno (Sigma Aldrich), mezclándolos con agua a 85°C, y posteriormente añadiéndolo al producto y mezclándolo. Se dividió la mezcla en dos partes, se reservaron y envasaron adecuadamente para su posterior utilización. 5.3.4.3 Metodología para la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) A una de las partes de la crema reservada se le agregó el extracto de Musa balbisiana (plátano macho) y se mezcló con cuidado hasta obtener un producto homogéneo. Por último, se le agregó la esencia, hasta conseguir el aroma deseado. Una vez completamente unificado, se prosiguió a envasar, etiquetar y guardar adecuadamente ambas cremas (Figura 12). 39 Inicio Verificar limpieza, material y equipo Identificar materias Preparar dispersión primas coloidal del polímero 24 horas antes Preparar la mezcla de fase oleosa Incorporar la mezcla a la dispersión del polímero con agitación constante Agregar la cantidad de agua necesaria con agitación constante Agregar los reactivos faltantes Preparar el extracto de para obtener la consistencia Musa balbisiana (plátano deseada macho) Agregar el extracto a la crema base Acondicionar y etiquetar Fin Figura 12. Diagrama de flujo de elaboración de crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho). 40 5.4 Pruebas de calidad de la crema con el extracto de Musa balbisiana (plátano macho) Con la finalidad de garantizar la calidad de los productos fabricados, se propusieron los siguientes parámetros de evaluación como especificaciones que debe cumplir la crema de Musa balbisiana. Los parámetros que se evaluaron fueron las propiedades organolépticas (aspecto, color y olor) y las propiedades fisicoquímicas (pH). 5.4.1 Determinación de las propiedades organolépticas El examen macroscópico y de las características organolépticas de una emulsión se realiza sobre la formulación recién preparada y tras su almacenamiento en condiciones drásticas. Además de las posibles consecuencias terapéuticas, unas características organolépticas adecuadas son indispensables para lograr la aceptación y seguimiento del tratamiento por parte del paciente (55). 5.4.2 Determinación de la propiedad fisicoquímica 5.4.2.1 Determinación del pH Se determinó el pH de acuerdo a las indicaciones del fabricante del papel indicador. En la Figura 13 se muestra el diagrama de flujo de las pruebas para evaluar las propiedades organolépticas y fisicoquímica realizadas a la crema con extracto de Musa balbisiana. 41 Inicio Verificar limpieza de Áreas, equipo y material Identificación de las muestras Propiedades pH organolépticas Apariencia, color, olor, Medir con tiras reactivas textura de pH Figura 13. Diagrama de flujo de las pruebas realizadas para determinar las propiedades organolépticas y fisicoquímica de la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho). 5.5 Prueba de irritabilidad en piel Esta prueba pone de manifiesto las reacciones inflamatorias locales que se presentan sobre la piel intacta y piel erosionada en conejos de raza Nueva Zelanda previamente rasurados después de la aplicación de la sustancia. Esta prueba se realizó según lo descrito en el MGA 0515. Irritabilidad en piel de la FEUM 11a edición. La prueba se realizó en tres conejos, un día antes de la prueba los conejos se sujetaron firmemente en cepos y se rasuró el área dorsal de cada animal a uno y otro lado de la columna vertebral, de la región escapular a la lumbar. Se evitó la irritación mecánica y se retiró el pelo suelto (76). El día de la prueba se delimitó seis áreas de 4 cm por lado (Figura 14). Se aplicó en dos áreas la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho); en dos áreas la crema control y en las otras dos áreas la solución salina isotónica (SSI). Se cubrió cada área de aplicación con un parche de gasa cuadrado de 2.5 cm de lado y un grosor de dos monocapas. Se aseguraron los parches con tela adhesiva y se protegió los bordes para evitar fugas del producto. Se evaluaron las áreas de las 42 pruebas a los 0, 5, 15, 30, y a los 60 min. Se efectuaron las lecturas nuevamente a las 24, y 48 h (76). Figura 14. Áreas delimitadas en el conejo para la prueba de irritabilidad en piel. 5.6 Estudio piloto de la crema de Musa balbisiana (plátano macho) Se realizó una prueba piloto para comprobar el efecto reparador de piel (disminución de arrugas) de la crema con extracto de Musa balbisiana(plátano macho), junto con la crema control a 10 mujeres de 40 a 65 años, durante 30 días. Se les proporcionó un consentimiento informado (Anexo 2) que describía el tipo de estudio y las instrucciones del modo de aplicación de las cremas (crema con el extracto de Musa balbisiana y la crema control), y su funcionalidad. Durante este tiempo las participantes se medían las arrugas (la zona del contorno de cada ojo) y se tomaban fotos periódicamente (cada semana), para complementar estos resultados se empleó una encuesta (Anexo 3) para conocer las diversas opiniones acerca de la eficacia de la crema. 43 5.7 Análisis estadístico Se utilizó la prueba de ANADEVA de dos vías para la comparación de los factores (longitud de arruga), tiempo y sus interacciones (longitud x tiempo) a p<0.05, se utilizó la prueba post-hoc: Holm-Sidak (diferencia de medias). Para la comparación entre el día del muestreo inicial (día 0) y el día del muestreo final (día 30) se utilizó una t pareada. El análisis de los datos se realizó mediante el programa SigmaPlot versión 11. 44 6. Resultados 6.1 Resultados de las pruebas de compatibilidad de ingredientes Con las pruebas de compatibilidad de ingredientes, se aseguró que los ingredientes eran estables entre sí, pero al hacer las pruebas con la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho), hubo una desestabilización en el producto por que se originaba una reacción de oxidación con un porcentaje de antioxidante al 1% en comparación con el peso del reactivo vegetal, por lo tanto, se realizó otras dos pruebas para determinar la cantidad de antioxidante (ácido cítrico) que se necesitaba para evitar su oxidación. 6.2 Resultados de las pruebas de calidad de la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) Se realizaron las pruebas organolépticas y fisicoquímica a la crema con la finalidad de determinar si cumplen con las especificaciones establecidas anteriormente, y garantizar la calidad del producto. En el Cuadro 11 se muestran los resultados de las pruebas de calidad. Cuadro 11. Resultados de las especificaciones de las pruebas de calidad. Especificaciones Resultados Color Amarillo claro Olor Floral Apariencia Cremoso, semisólido, homogéneo, suave al tacto, ligeramente grasosa, libre de partículas Ph 7-8 En el Cuadro 12 se relacionan los resultados obtenidos de las pruebas de calidad con las especificaciones ya establecidas y se observaron si cumplían los criterios de aceptación. 45 Cuadro 12. Resultados de la caracterización de la crema con el extracto de Musa balbisiana. Propiedades Especificaciones Resultado Criterio de aceptación Color Amarillo claro Amarillo claro Cumplen Olor Floral Floral Cumplen Apariencia Cremoso, semisólido viscoso, suave al tacto, libre de partículas Cremoso, semisólido, homogéneo, suave al tacto, ligeramente grasosa, libre de partículas Cumplen Ph 5-11 7-8 Cumplen De acuerdo con los resultados se establece que la crema de extracto de Musa balbisiana (plátano macho), es un producto de calidad. 6.3 Resultado de la prueba de irritabilidad en piel de conejos (Nueva Zelanda) En la Figura 15 se muestra que no hubo presencia de reacciones de irritación como edema, eritema o alguna otra reacción, realizada en el modelo in vivo en conejo (MGA 0515 FEUM 11a ed) en función del tiempo de evaluación, en el cual fueron expuestos los productos: crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho), crema control, y solución salina isotónica. A) B) C) D) Figura 15. Prueba de irritabilidad en conejos. Los cuadrantes 2 y 4 pertenecen a la crema control; los cuadrantes 1 y 5 pertenecen a la crema de plátano macho; y los cuadrantes 3 y 6 pertenecen a la solución salina isotónica. A) A los 0 min; B) A los 60 min; C) A las 24 h; D) A las 48 h. 4 1 5 2 6 3 46 En el Cuadro 13, se ejemplifica como se obtuvo el valor de irritación en los conejos en base al cuadro de resultados de la presencia de eritema y formación de escara, perteneciente al MGA 0515 de la FEUM 11a edición, que pueden ser observados en el Anexo 4. Cuadro 13. Resultados de la presencia de eritema y formación de escara. Reacción cutánea Tiempo de exposición (horas) Valor crema de plátano macho Valor crema control Valor solución salina isotónica Eritema y formación de escara Piel intacta 24 0 0 0 Piel intacta 48 0 0 0 Piel erosionada 24 No aplica No aplica No aplica Piel erosionada 48 No aplica No aplica No aplica Subtotal 0 0 0 Formación de edema Piel intacta 24 0 0 0 Piel intacta 48 0 0 0 Piel erosionada 24 No aplica No aplica No aplica Piel erosionada 48 No aplica No aplica No aplica Subtotal 0 0 0 Total 0 0 0 El grado de irritación es: 0/4 = 0 6.5 Evaluación de las mediciones de las arrugas en el estudio piloto Se evaluó la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) con la medición de la longitud de las arrugas a lo largo de todo el estudio piloto. En el Cuadro 14 se muestran los resultados de las mediciones de las 10 participantes, el 61% de las arrugas del total de las participantes presentó disminución en la longitud. En las respuestas de las encuestas fue mencionado por todas las participantes que hubo visiblemente disminución de la profundidad de las arrugas. 47 Cuadro 14. Medidas de las arrugas de las participantes durante el estudio piloto. Participantes (mujeres entre 45 a 60 años) Arrugas Longitud (cm)/Tiempo de evaluación 1 día 7 días 15 días 30 días 1 1 1.6 1.6 1.5 1.5 2 1 1.3 1.2 1.1 1.1 3 1 1.2 1.1 1 0.9 4 1 1.5 1.5 1.5 1.5 2 1.6 1.6 1.6 1.6 3 0.3 0.3 0.3 0.3 4 2 2 2 2 5 1 2.6 2.6 2.5 2.5 2 1.5 1.5 1.5 1.1 3 1 1 1 1 4 1.8 1.8 1.6 1.5 5 1.1 1.1 1 1 6 1.5 1.5 1.5 1.5 7 1 1 1 0.8 6 1 1.9 1.9 1.7 1.5 2 3.2 3.1 3 2.7 3 4.2 4.2 4.1 4 4 1.9 1.9 1.9 1.9 7 1 2.2 2 1.9 1.7 2 3.3 3.2 2.9 2.5 3 3.1 3.1 2.9 2.8 4 5.7 5.1 4.8 4.4 5 3.3 3.3 2.9 2.7 8 1 2 2 2 2 2 2 2 2 1.9 3 3.1 3.1 3.1 3 4 2.8 2.8 2.8 2.8 5 1 1 1 0.9 9 1 3.7 3.6 3.4 3.3 10 1 2.1 2.1 2.1 2.1 2 2.2 2.2 2.2 2.2 3 1.3 1.3 1.3 1.3 4 2.5 2.5 2.5 2.5 48 Se realizó una gráfica de barras para observar la comparación de la longitud de las arrugas al inició y al final del estudio piloto. La Figura 16 muestra que existen pequeñas diferencias entre las medidas de las arrugas del día 1 al día 30 del estudio piloto. Figura 16. Gráfica comparativa de las longitudes de las arrugas de cada participante del día 1 y el día 30 del estudio piloto. Cada barra representa la medida de la arruga por sujeto de experimentación. Para corroborar los resultados de las mediciones, se tomaron fotografías de las áreas donde fueron aplicadas la crema con extracto de Musa balbisiana (plátano macho) y la crema control. En el Cuadro 15 se muestran las fotografías de los resultados más representativos de la evolución de la disminución de sus arrugas. 0 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5 5 6 6 6 6 7 7 7 7 7 8 8 8 8 8 9 10101010 Lo n gi tu d d e ar ru ga s (c m ) Participantes Medidas de las arrugas/participantes Día 1 Día 30 49 Cuadro 15. Evolución de las arrugas a lo largo del estudio piloto. Muestra Día 1 Día 7 Día 15 Día 30 Crema de Musa balbisiana Participante 1 Crema control Participante 1 Crema de Musa balbisiana Participante 2 . Crema control Participante 2 Se realizó el análisis de varianza de dos vías para las medidas de las arrugas en los días que duro el estudio piloto, donde el control no tuvo cambios, y se comprobó la disminución en la longitud de las arrugas con el tratamiento de la crema con extracto de Musa balbisiana, indicando que hubo diferencia estadísticamente
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