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Ex -Hacienda de Nazareno, Xoxocotlán, Oaxaca. Agosto de 2019. Instituto Tecnológico del Valle de Oaxaca DIVISIÓN DE ESTUDIOS DE POSGRADO E INVESTIGACIÓN POTENCIAL REPRODUCTIVO EN Chamaedorea metallica Y CRECIMIENTO VEGETATIVO EN Chamaedorea tepejilote Y Chamaedorea elatior TESIS QUE PRESENTA: Marian Teresa Jiménez Zarate COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL GRADO DE: MAESTRA EN CIENCIAS EN PRODUCTIVIDAD EN AGROECOSISTEMAS DIRECTORA: Dra. Gisela V. Campos Ángeles Ex -Hacienda de Nazareno, Xoxocotlán, Oaxaca. Agosto de 2019. Instituto Tecnológico del Valle de Oaxaca DIVISIÓN DE ESTUDIOS DE POSGRADO E INVESTIGACIÓN POTENCIAL REPRODUCTIVO EN Chamaedorea metallica Y CRECIMIENTO VEGETATIVO EN Chamaedorea tepejilote Y Chamaedorea elatior TESIS QUE PRESENTA: Marian Teresa Jiménez Zarate COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL GRADO DE: MAESTRA EN CIENCIAS EN PRODUCTIVIDAD EN AGROECOSISTEMAS DIRECTORA: Dra. Gisela V. Campos Ángeles El presente trabajo se llevó a cabo con el apoyo del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT) a través del número de becario 447568, con el tema de investigación “Potencial reproductivo en Chamaedorea metallica y crecimiento vegetativo en Chamaedorea tepejilote Y Chamaedorea elatior”. ÍNDICE GENERAL Página ÍNDICE DE FIGURAS…………………………………………………...…... iii ÏNDICE DE CUADROS………………………………………………………. iv CAPITULO l. INTRODUCCIÓN…………………………………....……….. 1 CAPITULO II. REVISIÓN DE LITERATURA……….…………...…………. 4 2.1 Antecedentes…………………………………………..……….…….. 4 2.2 Descripción del género Chamaedorea….........………………….… 6 2.3 Descripción de Chamaedorea metallica………………………….... 7 2.4. Descripción de Chamaedorea elatior….……………………….….. 8 2.5 Descripción de Chamaedorea tepejilote…………………..……..… 10 2.6 Distribución del género Chamaedorea…………………………….. 12 2.7 Fenología de Chamaedorea spp……………………………………. 14 2.7.1 Crecimiento vegetativo………………………………………... 17 2.8 Las semillas…………………………………………………………… 17 2.8.1 Particularidades de las semillas de palma………………….. 17 2.8.2 Germinación………….....……………………………………... 19 2.8.3 Calidad física de la semilla……………………………………. 21 2.9 Respuesta a la defoliación……………………………..……………. 22 2.10. Reguladores de crecimiento………………………………………. 23 2.10.1 Citoquininas…………….……………..…………………….. 24 2.10.2 Giberelinas…………………………………………………... 25 2.10.3 Aminoácidos……………………………………………….… 26 2.10.4 Bioestimulantes……………………………………………… 27 CAPITULO III. Potencial reproductivo en plantas madre de Chamaedorea metallica bajo manejo ex situ……………………………….. 30 ii 3.1 Introducción…………………………………………………………… 32 3.2 Materiales y métodos…………………………………………………. 34 3.2.1 Localización del área de estudio y preparación de las plantas…………………………………………………………. 34 3.2.2 Calidad física de las semillas de C. metallica………………… 37 3.3 Resultados y discusión……………………………………………….. 39 3.3.1 Bioestimulación y poda de plantas madre de C. metallica………………………………………………......…… 39 3.3.2 Calidad física de las semillas de C. metallica………………... 45 3.3.3 Observaciones al microscopio electrónico de barrido………. 46 3.4 Conclusiones………………………………………………………….. 49 CAPITULO IV. Crecimiento vegetativo de Chamaedorea tepejilote y Chamaedorea elatior en respuesta a concentraciones de ácido giberélico……...……………………………………………………………….. 54 4.1 Introducción…………………………………………………………… 56 4.2 Materiales y métodos…………………………………………………. 58 4.2.1 Localización del área de estudio y preparación de las plantas……........................................................................... 58 4.2.2 Análisis de la información………………………………………. 60 4.3 Resultados y discusión……………………………………………….. 61 4.4 Conclusiones………………………................................................. 66 CAPITULO V. CONCLUSIONES GENERALES…………………..………. 70 CAPITULO VI. RECOMENDACIONES……………………..…………….... 72 ÍNDICE DE FIGURAS Figura FIGURA Página 1 Planta madre de Chamaedorea metallica Jardín Ye´tsil……… 8 2 Palma de la especie Chamaedorea elatior en estadío juvenil.. 10 3 Palma de la especie Chamaedorea tepejilote en estadío juvenil……………………………………………………………….. 11 4 Distribución del género Chamaedorea…………....………....…. 12 5 Distribución C. metallica….…………………………………....…. 14 6 Plantas madre de C. metallica establecidas en contenedor….. 35 7 Estructuras reproductivas y semillas de C. metallica…………. 37 8 Observaciones de embrión de C. metallica al Micrsocopio Electronico de Barrido…………………………………………….. 48 ÍNDICE DE CUADROS Cuadro FIGURA Página 1 Calendario fenológico de especies de palma presentes en la estación de biología “Los Tuxtlas” Veracruz, México y en la Isla de Barro Colorado, Panamá……………………………………… 16 2 Cuadrados medios del error del análisis de varianza de medidas repetidas para las variables evaluadas de plantas madre de C. metallica…………………………………………….. 41 3 Cuadrados medios del error del análisis de varianza de medidas repetidas de cada fecha de las variables evaluadas… 42 4 Valores promedio de cuatro variables evaluadas en C. metallica……………………………………………………………. 43 5 Calidad física de semillas de C. metallica de dos periodos de fructificación, 2017 y 2018………………………………………… 46 6 Resumen del análisis de varianza de las variables evaluadas en plantas de C. tepejilote y C. elatior………………………….. 62 7 Valores promedio de las variables C. metallica en función de los factores principales……………………………………………. 64 Resumen El desarrollo ex situ de Chamaedorea es una alternativa viable que permite su cultivo y aprovechamiento, el objetivo de la presente investigación fue evaluar el potencial reproductivo de Chamaedorea metallica como respuesta a prácticas de manejo ex situ las cuales consistieron en el mejoramiento de la nutrición y optimización del área foliar a través de podas selectivas. Se probaron bioestimulantes a base de citocininas y aminoácidos oligopéptidos en combinación con una intensidad de poda, plantas a las que se eliminaron dos o cuatro hojas basales. Se realizó una evaluación de la calidad física de las semillas, de acuerdo con los parámetros que menciona la ISTA. El uso de reguladores de crecimiento ha contribuido a mejorar características físicas y fisiológicas en las plantas, con el fin de conocer su efecto, el objetivo del presente estudio fue evaluar el crecimiento de Chamaedorea. tepejilote y Chamaedorea elatior como respuesta a la aplicación de diferentes dosis de ácido giberélico. Se estableció un experimento completamente aleatorizado con arreglo factorial 4×2, 4 (tratamientos –especies); los tratamientos fueron: 1) ácido giberélico grado reactivo diluido a 22 ppm; 2) ácido giberélico (Activol®) 40% diluido a 15 ppm; 3) ácido giberélico (Acigib®) 8.20% diluido a 15 ppm y tratamiento testigo el cual no contenía ácido giberélico. Se registraron las variables, altura de la planta, número de hojas, diámetro del tallo, diámetro del cuello de raíz y clorofila durante ocho meses de marzo- noviembre del 2018, cada dos semanas. Abstract The ex situ development of Chamaedorea is a viable alternative that allows its cultivation and exploitation, the objective of the present investigation was to evaluate the reproductive potential of Chamaedorea metallicain response to ex situ management practices which consist of the improvement of nutrition and leaf area optimization through selective pruning. Biostimulants based on cytokinins and oligopeptide amino acids were tested in combination with a pruning intensity, plants to which two or four basal leaves are removed. An evaluation of the physical quality of the seeds was carried out, according to the parameters mentioned by the ISTA. The use of growth regulators has contributed to improve the physical and physiological characteristics in plants, in order to know their effect, the objective of the present study to evaluate the growth of Chamaedorea. Tepejilote and Chamaedorea elatior in response to the application of different doses of gibberellic acid. A completely randomized experiment was carried out with factorial arrangement 4 × 2, 4 (treatments – species); the treatments were: 1) reactive grade gibberellic acid diluted to 22 ppm; 2) 40% gibberellic acid (Activol®) diluted to 15 ppm; 3) gibberellic acid (Acigib®) 8.20% diluted at 15 ppm and control treatment which does not contain gibberellic acid. The variables, plant height, number of leaves, stem diameter, root neck diameter and chlorophyll were recorded for eight months from March to November 2018, every two weeks. 1 CAPÍTULO I INTRODUCCIÓN Las palmas del género Chamaedorea conforman uno de los grupos más abundantes de plantas que conforman el sotobosque. Su distribución se restringe al continente americano desde el centro de México, hasta Brasil y Bolivia; respecto al número de especies se pueden encontrar hasta 193. Tan solo en México se encuentran 50 de las cuales 21 son de importancia económica, se distribuyen entre los estados de Campeche, Chiapas, Oaxaca, Quintana Roo, San Luis Potosí, Tabasco, Veracruz, estados que corresponden en su mayor parte con la zona tropical húmeda de México (López y Meza, 1999). Desde hace varios años, el aprovechamiento de palma camedor, ya había provocado una alarmante disminución en las poblaciones silvestres (Villafuente et al., 1997; Aguilar et al., 2001; Svenning y Macía, 2002; Pineda-Morales, 2010). Al menos 39 especies del género Chamaedorea se encuentran en alguna 2 categoría de riesgo de acuerdo a la NOM-059-SEMARNAT-2010 (SEMARNAT, 2010). Las especies Chamaedorea tepejilote, Chamaedorea elatior y Chamaedorea metallica, han sido comercializadas de manera ilegal colocando a esta última en peligro de extinción. El género Chamaedorea, debido a la naturaleza de la semilla presentan un estadío de dormancia, provocado por condiciones fisiológicas como la inmadurez del embrión o el contenido de compuestos fenólicos que inhiben la germinación natural de la semilla, aun cuando las condiciones externas sean aptas para su germinación. Además, debido a la morfología de la semilla el embrión se encuentra cerca de la testa lo cual la hace susceptible a la muerte durante el manejo. (Carpenter & Ostmark, 1994; Nambara et al., 2010). Por esta razón, se cree que los problemas anteriormente mencionados están relacionados con las condiciones de vigor de la planta madre, que determinan la calidad genética, fisiológica, y morfológica de sus semillas. Debido a la relevancia que ha tomado este grupo, se han realizado diversos estudios sobre las especies de mayor importancia económica, como es el caso de Chamaedorea tepejilote Liebm., C. elegans Mart., C. oblongata Mart., C. radicalis, y C. metallica; en aspectos como su historia de vida, demografía, respuestas a la defoliación y reproducción (Oyama y Mendoza, 1990; Anten et al., 2003; Endres et al., 2004). El jardín Ye´tsil del Instituto Tecnológico del Valle de Oaxaca cuenta con una población de especies del género Chamaedorea, algunas en edad adulta y otras en edad juvenil que han sido propagadas de plantas madre. Con el presente estudio se pretende contribuir a generar un adecuado esquema de manejo ex situ de tres 3 especies de palma camedor (Chamaedorea tepejilote, Chamaedorea elatior y Chamaedorea metallica), para ofrecer una alternativa ideal de crecimiento y reproducción ex-situ, lo que puede ser otra alternativa de aprovechamiento por las comunidades donde éstas se extraen de manera ilegal y que su obtención no sea directamente de poblaciones silvestres. Por lo anterior el objetivo del presente trabajo fue evaluar el potencial reproductivo de Chamaedorea metallica, y el crecimiento vegetativo en Chamaedorea tepejilote y Chamaedorea elatior, como respuesta a diferentes prácticas de manejo ex situ. 4 CAPÍTULO II REVISIÓN DE LITERATURA 2.1 Antecedentes El aprovechamiento extractivo por los grupos humanos, ocasiona un fuerte impacto que afecta negativamente el vigor de las plantas, disminuyendo su capacidad reproductiva y la sobrevivencia de poblaciones silvestres. Por otra parte, la cosecha de semillas para venta hace que disminuyan las posibilidades de renovación y extensión de los palmares. En algunas comunidades en los estados de Chiapas, Veracruz y Oaxaca, México, que tienen antecedentes de extracción intensiva de hojas de palma camedor en la selva virgen, se promueve su cultivo y reproducción mediante el establecimiento de viveros comunitarios (Svening y Macía, 2002; Aguilar y Jiménez, 2009; Pineda-Morales, 2010; Buda- Arango, 2017). A finales de la década de los 90´s la IUCN (The world Conservation Union) consideraba a las palmas camedor en el grupo con mayor 5 cantidad de especies amenazadas (Walter y Gillet, 1998). Broschat (1994), ya señalaba que los porcentajes de germinación en semillas de palma eran erráticos de germinación lenta. Las diásporas de palma tienen varios tipos de latencia: 1) el embrión esta subdesarrollado; 2) el endocarpio es permeable al agua; 3) las diásporas tardan mucho tiempo en germinar; 4) debido a la ubicación del embrión en la semilla, es susceptible a daños provocados en el manejo de la misma. Baskin y Baskin (2014), mencionan que las diásporas de la mayoría de las especies dela familia Arecaceae tienen latencia morfofisiologica o morfológica. La latencia es una condición desfavorable en algunas especies, ya que provoca un germinación prolongada e irregular, pero para otras es favorable ya que aseguran su supervivencia (Willan, 2000). El estado de dormición, latencia o letargo es la incapacidad que tiene una semilla viable para germinar en condiciones favorables de temperatura, humedad y concentración de gases (Varela y Arana, 2011). La propagación es la primera de todas las prácticas hortícolas; es la base de todo cultivo o de toda plantación, sin embargo, en especies de Chamaedorea ésta se ha vuelto un problema debido a las características propias de la semilla (condición fisiológica de dormancia, contenido de compuestos fenólicos), que han dificultado su propagación en condiciones de vivero aun cuando el ambiente de propagación sea adecuado para la germinación de semillas (Carpenter & Ostmark, 1994; Nambara et al., 2010). El cultivo de palma camedor se ha presentado como una opción productiva para campesinos en el trópico mexicano, como una alternativa viable para impulsar el desarrollo rural, ya que existen 6 experiencias productivas y un mercado integrado (Licona et al., 1995). Las plantaciones de Chamaedora generalmente se establecen en zonas cercanas a las poblaciones silvestres, en que se tienen condiciones edáficas y climáticas similares al sitio de origen de la especie, en donde es posible asegurar un adecuado desarrollo de las especies. Se han llevado a cabo estudios de sustentabilidad en poblaciones silvestres, en la selva Maya lo cual ha servido para el desarrollo de indicadores de manejo forestal de palma camedor. De igual manera en la zona de Los Tuxtlas, específicamente en la reserva de la biosfera“La sepultura” en Chiapas se han llevado a cabo evaluaciones de sustentabilidad en cooperativas de aprovechamiento como sistema agroforestal. Así mismo, estudios de diversidad de poblaciones silvestres, defoliación y reproducción (Quero, 1994; González, 2002; Granados-Sánchez et al., 2004; Antonio-García et al., 2006; Valverde et al., 2006; Pérez y Geissert et al., 2008; Martínez-Camilo et al., 2011). El Instituto Tecnológico del Valle de Oaxaca cuenta con un jardín botánico en donde se encuentran diversas especies de palmáceas del género Chamaedorea las cuales han sido objeto de estudio en diferentes trabajos de investigación respecto a la reproducción, crecimiento, fenología, y a la elaboración de planes de manejo. 2.2 Descripción del género Chamaedorea Palmas dioicas, inermes, erectas o procumbentes; tallos solitarios o cespitosos, generalmente pequeños y delgados, verdes y anillados. Hojas pinnadas o 7 simples; pinnas anchas o angostas, numerosas o pocas; pecíolo delgado y cilíndrico; vaina tubular, corta o larga. Inflorescencia infrafoliar o interfoliar, simple o ramificada; pedúnculo corto o largo; raquillas con muchas o pocas flores; espatas 3 o más, tubulares, envolviendo el pedúnculo, generalmente persistentes; flores sésiles o algo embebidas en la raquilla; flores masculinas con cáliz cupuliforme, entero, trilobulado o tripartido; pétalos 3, valvados o imbricados, libres o fusionados; estambres 6; filamentos cortos; anteras dorsifijas; pistilodio presente o ausente; fiores femeninas con cáliz cupuliforme; pétalos valvados, imbricados o fusionados; ovario tricarpelar, trilocular; estigmas pequeños, con 1 óvulo basal por lóculo. Fruto pequeño, globoso, oblongo y a veces falcado, madurando por lo general 1 carpelo y 1 óvulo; remanente estigmátíco basal; pericarpo generalmente carnoso, poco fibroso; endocarpo cartilaginoso; semilla globosa o elipsoide, endospermo cartilaginoso, homogéneo; embrión basal a dorsal. 2.3 Descripción de Chamaedorea metallica La palma metálica es dioica con aspecto herbáceo llega a medir hasta metro y medio. Tallo delgado no trepador de 1 cm de diámetro con entrenudos de hasta 3 cm de largo. Hojas simples con ápice bífido, no obovadas ni elípticas de menos de 30 cm de largo; lámina verde obscuro; inflorescencia femenina ascendente ligeramente arqueada hacia el raquis (Quero, 1994). Las flores se desarrollan en ramas especializadas (inflorescencias) que nacen del tallo en las axilas de las hojas. Las inflorescencias miden hasta 40 cm de largo. Las flores son poco 8 densas y muy especiadas en las raquillas. Las inflorescencias masculinas se ramifican con 5 a 10 ramillas penduladas de 10 a 15 cm de largo. Sobre un pedúnculo de hasta 28 cm de largo, son trilobuladas y pequeñas (hasta 1 cm de largo). Los frutos son ovoides, negros de alrededor de 1 cm de largo y la semilla es elipsoidal de 9 mm de largo (CONABIO, 2010). Figura 1. Planta madre de Chamaedorea metallica Jardín Ye´tsil. 2.4 Descripción botánica de Chamaedorea elatior (Mart.) Plantas de hábito solitario, o infrecuentemente cespitoso, ramificado a un metro o más de altura, subsecuente y arqueado, casi erectas cuando jóvenes, hasta 20 m o más de longitud, trepando sobre la vegetación o postrada sobre el suelo. Tallos de 0.8 a 2 cm de diámetro verdes lisos, nudos ligeramente prominentes, entrenudos de 10 a 30 cm de longitud. Hojas en números de 5 a 15 profundamente bífidas cuando jóvenes y después progresivamente más 9 pinnadas hasta completamente pinnadas, abiertamente arqueadas; vaina hasta de 60 cm de longitud, alargada, tubular, persistente, verde, diminutamente manchada de blanco, fina y longitudinalmente estriadonervada; pecíolos de 0 a 30 cm de longitud, planos y verdes arriba, raquis de 0.5 a 3 m de longitud, marcadamente angulado y verde arriba, redondeado; lámina hasta 3 m de longitud en individuos muy robustos pero normalmente de 0.5 a 1.5 m de largo; pinnas de 10 a 55 a cada lado del raquis, de 20 a 45 por 1.5 a 5 cm, linear - lanceoladas a lineares, alternadas basalmente, opuestas apicalmente, igualmente atenuadas, fuertemente endurecido-callosas en una base muy estrecha, de color verde obscuro progresivamente más reflexas y semejando ganchos hacia el ápice de la lámina, nervio central prominente y nervios secundarios inconspicuos. Inflorescencias interfoliares brotando entre las vainas, erectas; pedúnculos de 10 a 20 cm de largo, aplanados de 1.2 cm de ancho y 6 mm de grosor, erecto, verdes en las partes expuestas; brácteas de 3 a 7, la superior hasta 13 cm de longitud, grueso, fibrosa, longitudinalmente estriadonervadas, agudo-acuminadas, bífidas los 2 superiores excediendo al pedúnculo, raquis de 5 a 25 cm de longitud, verde, obtusamente angulado. Inflorescencias estaminadas con 35 raquillas de hasta 25 cm de longitud, distalmente redondeadas, de 3 mm de diámetro, las inferiores aplanadas cerca de la base y ahí de 5 mm de ancho, simple, abiertas, divaricadas en ángulo recto, obtusas o más o menos reflexas. Inflorescencias pistiladas similares a las masculinas, pero más grandes, la parte ramificada de 40x30 cm, las raquillas pocas y muchas, hasta de 30 cm de longitud, simples de color naranja pálido o salmón o parduscas en fructificación madura (Hodel, 1992). 10 Figura 2. Palma de la especie Chamaedorea elatior en estadío juvenil. 2.5 Descripción botánica de Chamaedorea tepejilote (Liebmann) Son palmas que se encuentran en colonias, con tallos cortos horizontales en o a nivel del suelo, formando grupos densos o abiertos, hasta de 6 m de alto y 2–6 cm de diámetro, con entrenudos de 5–30 cm de largo. Las hojas 4–6,son erecto- patentes, pinnadas de 1–2 m de largo; con pinnas 20–26 a cada lado, ligeramente sigmoides o falcadas, de 25–40 cm de largo y 2.5–5 cm de ancho, largamente acuminadas, 2 nervios prominentes a cada lado del nervio principal, raquis 100– 120 cm de largo; vaina tubular, de 20–60 cm de largo, con una extensión alargada triangular opuesta a la inserción del pecíolo, formando lobos auriculados a cada lado del pecíolo, pecíolo de hasta 35 cm de largo, abaxialmente con una banda 11 pálida que se extiende hasta la vaina. Inflorescencias infrafoliares, solitarias, con pedúnculo de 20–45 cm de largo, erecto en flor, péndulo en fruto, brácteas 5–8, raquis 10–20 cm de largo (Figura 4); inflorescencias estaminadas con 15–30 raquillas, 20–30 cm de largo, flexuosas y péndulas, verdes a amarillas en flor, flores 2.5–3.5 mm de largo y 2.5–3 mm de ancho, amarillo-verdosas, sépalos libres casi hasta la base, pétalos valvados, libres casi hasta la base; inflorescencias pistiladas con 10–20 raquillas, 20–35 cm de largo, frecuentemente sólo bífidas, anaranjadas y abultadas en fruto, flores 3–3.5 mm de largo y 2–2.5 mm de ancho, en espirales laxas, amarillo pálidas, ligeramente hundidas, sépalos connados brevemente en la base, pétalos imbricados casi hasta el ápice, libres. Frutos globosos a subglobosos, 7–10 mm de diámetro, verdes y tornándose negros o negro-purpúreos (CONABIO, 2010). Figura 3. Palma de la especie Chamaedorea tepejilote en estadío juvenil. 12 2.6 Distribución del género Chamaedorea En México existe un importante reservorio de bosque tropical, localizado en el este en la Región de Los Tuxtlas, Veracruz. En el estado de Chiapas existen cuatro áreas prioritarias para la conservación; El ocote, El triunfo, La sepultura, Montes Azules. En estas zonas se encuentra el “Cinturón de las palmáceas, para la protección de la biodiversidad en la Reserva de la Biósfera”. Figura 4. Distribución del género Chamaedorea en el Continente Americano. Fuente: (Granados-Sánchez et al., 2004). ´ La Reserva de la Biósfera “Los Tuxtlas” fue proclamada como tal en 1998, se componede tres áreas principales, juntas conforman 155,122 ha de bosque tropical. San Martín Tuxtla “Volcano” (9,805 ha); Santa Martha Sierra (18031 ha); San Martín Pajapan Volcano (1883 ha). La distribución del género Chamaedorea 13 en bosque de niebla se distribuye a lo largo de las laderas del Atlántico del sur de San Luis Potosí y Tamaulipas al norte de Ecuador, Este de Brasil y norte de Bolivia. México y Centroamérica son el centro de diversificación y especiación del género (Peñaloza-Ramírez et al. 2016) (Figura 4). El género Chamaedorea pertenece a uno de los 50 géneros los cuales se distribuyen al sur de Ámerica. Habitan zonas de transición de selvas Amazonicas y las formaciones más secas del sur y sur-este. En zonas al sur-Este de Madre de dios en Perú, se puede observar un cambio brusco entre un bosque tropical con estación seca. De igual manera en la región pacifica que presenta una mezcla de influencias biogeográficas, se encuentran alrededor de ocho especies del género Chamaedorea. C. pygmaea es una especie que se distribuye por Suramérica por el istmo alcanzando el lado Altlántico. El bosque premontano mesófilo contiene una sola especie de palmeras, Chamaedorea linearis (Pintaud & Millán 2004). Dentro de las especies que están presentes a todo lo largo de los Andes tropicales, desde Venezuela hasta Bolivia se destacan Chamaedorea pinnatifrons y C. linearis, que se encuentran desde el nivel del mar, hasta 2700 y 2800 m, respectivamente, mostrando la más amplia plasticidad en palmeras tropicales, en términos altitudinales (Cuenca y Asmussen, 2007). Distribución de Ch. metallica 14 Chamaedorea metallica es una especie endémica de México, de distribución restringida en bosques húmedos con suelos rocosos por arriba de los 600 msnm en los estados de Veracruz y Oaxaca (Figura 5). Se desarrolla favorablemente en lugares húmedos con suelos ricos en humus (CONABIO, 2010). López-Paniagua et al. (2005) reportan en el estado de Oaxaca, la distribución de Chamaedorea metallica especie de cual se aprovecha su follaje, semilla y ejemplares completos como ornato. Figura 5. Distribución conocida de Chamaedorea metallica. Fuente: (CONABIO, 2010). 2.7 Fenología de Chamaedorea Spp. Se trata de una planta perennifolia escíofita que tolera temperaturas de climas templados debido a su creciente demanda como planta de ornato (Granados- 15 Sánchez, 2004). Ibarra-Manríquez (1992), realizó un estudio en el cual se compara la descripción cualitativa de la fenología de cinco especies del género Chamaedorea en regiones del trópico húmedo, indica que la mayor cantidad de plantas reproductivas corresponde a la temporada de secas (abril y mayo), reduciéndose claramente durante el resto del año. Algunos ejemplares muestran patrones diferentes en cuanto a la temporada de floración, lo cual se vio definido por la especie y dependiendo de ella puede durar de tres a cinco meses o de siete a 12 meses. Con respecto al fructificación las palmas presentan picos de producción durante toda la temporada de lluvias, con un ligero máximo en febrero y la menor cantidad durante la época de secas. La mayor fructificación ocurre desde octubre hasta enero por lo que se recomienda recolectar los frutos en estos meses. La coloración de los frutos se torna de verde (inmaduro) a morado, púrpura obscura (maduro), debido a que se trata de semillas recalcitrantes es recomendable sembrarlas antes de cuatro meses después de su obtención (Miceli et al., 2013). Con respecto a la fenología del género Chamaedorea, se sabe que tienen sexos separados, aunque puede haber plantas hermafroditas. Se atribuye la polinización al viento y a insectos que se ven atraídos por el polen pegajoso como Brooksithrips Chamaedorea Retana Salazar & Mound 2005 (Retana-Salazar y Rodríguez-Arrieta, 2016). La floración ocurre una vez al año, con varias inflorescencias, lo que origina una prolongada fructificación por varios meses. Existe variabilidad entre especies en cuanto al número de frutos; tal es el caso 16 de C. elegans donde pueden ser más de 500, mientras que C.ernesti-augusti de 40 a 50 (Eccardi, 2003). Cuadro 1. Calendario fenológico de especies de palma presentes en la Estación de Biología “Los Tuxtlas”, Veracruz, México y en la Isla de Barro Colorado, Panamá (Ibarra-Manríquez,1992). Especie E F M A M J J A S O N D Los Tuxtlas Chamaedorea alternans + = + + o o + = + + + + C. concolor = = o o o o o = = C. elatior = = = + + + = = = = = = C. ernesti- augustii + + + + = = = = = = = = C. oblongata = = = o o o = = C. woodsoniana o o o = = = = Barro colorado C. tepejilote o o = + = = = + + o o Simbología: flor ( o ); fruto ( = ); ambos ( + ). 2.7.1Crecimiento vegetativo. Los cambios morfológicos están directamente relacionados con el desarrollo y crecimiento de la planta, de acuerdo con un estudio realizado en poblaciones silvestres del género camedor en base a estos se pueden distinguir tres etapas de crecimiento (Ataroff y Schwarzkopf, 1994; Tomlinson, 2013): a) Etapa juvenil: ésta comienza con la germinación, durante esta etapa el desarrollo de internudos del tallo ocurre por debajo del sustrato de manera horizontal, estos comienzan a desarrollarse desde la aparición de la segunda hoja. Las hojas son pequeñas y de apariencia bífida, generalmente al final de esta etapa las primeras hojas presentan sus primeros foliolos. Esta etapa concluye cuando se forman de 10-12 entre nudos del tallo. Etapa pre-reproductiva: Comienza cuando el crecimiento horizontal de los nodos se detiene, y nuevos nodos que se desarrollan 17 causan el crecimiento vertical o por encima del sustrato, los internudos antes formados conformarán el tallo de la palma, simultáneamente las hojas comienzan su desarrollo pinado. Etapa Adulta: En esta etapa el crecimiento del tallo es vertical, y el peso de las ramas de las hojas hace que cuelguen, las hojas se vuelven completamente pinnadas y largas de hasta 68.3 cm, con algunas pinnas más anchas que otras. 2.8. Las semillas La semilla corresponde básicamente al rudimento seminal de la flor fecundado y maduro, cuya función primordial es multiplicar y reproducir la especie que lo ha originado (Cronquist, 1997). Las semillas son la parte de la planta que más utiliza el hombre, pues son fuente importante de alimentos, bebidas, textiles y aceites (Ville, 1988). De manera general todas las semillas están formadas por un embrión que da lugar a la futura planta, tejidos que contienen reservas nutritivas (generalmente cotiledones y algunas veces endospermo) para alimentar a la planta en sus primeros días de crecimiento, y una testa o cubierta protectora más o menos aislante y resistente que cubre completamente a la semilla, protegiéndola de los efectos dañinos del medio ambiente hasta que se presenta la germinación (Arriaga et al., 1994; Hilhorst et al., 2010). 2.8.1 Particularidades de las semillas de palma 18 En muchas especies de palmas, la germinación es lenta, errática y con bajo porcentaje como en la palma abanico (Washingtonia robusta) y la palma real cubana (Roystonea regia). Por otro lado, muchas de las semillas de palmas deben de ser almacenadas correctamente, ya que pueden perder la viabilidad en dos a cuatro semanas (Meerow y Broschat, 2012). Los factores que se han considerado que establecen en mayor medida su respuesta germinativa en diversas especies de palmas son: la inmadurez del embrión, la cubierta de la semilla, las condiciones de luz, así como el manejo al que se someten las semillas (Doria et al., 2012). En general, las semillas de varias especies de palmas requieren ser almacenadas durante varios años para germinar, aunque tal periodo puede reducirse a sólotres meses si la temperatura y humedad de almacenamiento son elevadas (38 a 40 °C y 85 a 100 % de HR) (Meerow y Broschat, 2012). De León (1958), atribuye la errática germinación de semillas al mal manejo durante el envío y almacenamiento de las semillas. Leomis (1958) las semillas de palma no entran en un estado de latencia cuando se mantienen en entornos desfavorables después de la cosecha. Conover, (1974); Read, (1962) mencionan que el más alto porcentaje de germinación ocurre cuando las semillas son sembradas inmediatamente después de la cosecha, a pesar que la viabilidad continua por cuatro o seis meses. 19 La semilla de palma Chamaedorea Spp. tienen una delgada testa, con el embrión incrustado en los carbohidratos que contiene el endospermo. El embrión se encuentra muy cerca de la testa lo cual lo hace susceptible a lesiones durante el manejo y almacenaje a temperaturas desfavorables o desecación durante periodos de tiempo largos (Carpenter y Ostmark, 1994). La mayoría de las especies de palma producen semillas con embriones inmaduros o subdesarrollados en el momento de la dispersión, por lo que deben completar su desarrollo antes de que ocurra la germinación (Meerow y Broschat, 1991; Orozco-Segovia et al., 2003). Los mecanismos germinativos y la existencia de un periodo de latencia o inactividad son procesos poco conocidos para la mayoría de las especies de la palma Orozco-Segovia et al., 2003). Las semillas de las palmas, usualmente siguen la forma y tamaño del fruto y están provistas de abundante endosperma (endospérmicas o albuminosas), que en la mayoría de las especies es homogéneo, pero que en aún en un mismo género es ruminado. Otro rasgo constante es su pequeño embrión, el cual varia en su madurez en forma cilíndrico a cónico (Uhl y Dransfield, 1987). Oliveira et al. (2013) indicaron que la cubierta de las semillas de algunas especies de palma es rica en compuesto s fenólicos no lignificados y que el endospermo contiene reservas abundantes de proteínas y lípidos, y el embrión tiene reservas adicionales de almidón. 2.8.2 Germinación 20 La germinación de las semillas en vida silvestre depende directamente de las reservas con las que fueron provistas por las plantas madre. Algunas especies poseen características de importancia reproductiva y la prevalencia de la especie, no todas las semillas de una misma especie presentan las mismas características. Los periodos de latencia y dormancia aseguran que las semillas germinen en condiciones adecuadas para que las plantas tengan mayores posibilidades de sobrevivir a su medio natural. Las especies cuyas semillas presentan dormición o periodos de latencia son capaces de sobrevivir en ambientes muy variables. Para el caso de la palma camedor estas capacidades de supervivencia, además de otros factores como la altitud, el relieve, y el suelo, contribuyen a mantener en control la densidad poblacional silvestre que es aprovechada por comunidades (De La Cuadra, 1992; Granados-Sánchez et al., 2004; CONANP, 2011). La germinación involucra la imbibición de agua, un rápido aumento en actividad metabólica, la movilización de reservas de nutrientes y el inicio de divisiones celulares para que ocurra el crecimiento en el embrión. Es un proceso irreversible. Externamente, la germinación es evidente por la ruptura de la testa y la prominencia de la plántula o radícula (Fenner y Thompson, 2005). La importancia de la germinación de las semillas radica en propiciar una fase regenerativa de las plantas, mantenimiento y recuperación de sus poblaciones. Muchas especies de palmas muestran una germinación rápida, tales como Jubaea chilensis y Sabal causarium que requieren entre 13-20 y 12-22 días respectivamente para lograr su proceso germinativo completo (Wagner, 1982; 21 Carpenter, 1989). Por otra parte, Wagner (1982) menciona que Chamaedorea seifrizii requiere más de cinco años para empezar a germinar. 2.8.3 Calidad física de semilla Pureza de la semilla: este parámetro nos indica el grado de limpieza de la semilla, la semilla pura se separa de la impura y luego se pesan por separado, se considera impura la semilla que es demasiado pequeña que ha sido parcialmente comida por insectos o presenta manchas producidas por hongos. La semilla se considera pura, si presenta características aparentemente homogéneas en cuanto a tamaño y forma. El objetivo del análisis de pureza es determinar la composición por peso de la muestra de análisis (ISTA, 1993; ISTA, 2007). 𝑃𝑜𝑟𝑐𝑒𝑛𝑡𝑎𝑗𝑒 𝑑𝑒 𝑝𝑢𝑟𝑒𝑧𝑎 = 𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑠𝑒𝑚𝑖𝑙𝑙𝑎 𝑝𝑢𝑟𝑎 𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑋100 Cantidad de semilla por unidad de peso: este parámetro sirve para calcular el peso de semilla aproximado para producir una deseada cantidad de plántulas, así como para tener un mejor de manejo de las semillas en vivero. El peso de la semilla está directamente relacionado con la calidad de las semillas. El objetivo de esta prueba es determinar el peso de 1000 semillas. Para la obtención de este parámetro la ISTA recomienda el conteo de cuatro repeticiones al azar de 100 semillas puras. Se pesan individualmente (ISTA, 1993; ISTA, 2007). 𝐶𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑠𝑒𝑚𝑖𝑙𝑙𝑎 𝑝𝑢𝑟𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑘𝑖𝑙𝑜 = 𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑠𝑒𝑚𝑖𝑙𝑙𝑎𝑠 𝑝𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑠𝑒𝑚𝑖𝑙𝑙𝑎𝑠 𝑝𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑋1000 22 Contenido de humedad: El contenido de humedad y la temperatura son factores importantes durante el manejo de la semilla. El contenido determina la actividad fisiológica y bioquímica de la semilla. Existen dos métodos principales para medir la humedad de las semillas: los métodos directos, en donde se elimina el agua y se cuantifica la cantidad; y el método indirecto, que utiliza parámetros eléctricos. La determinación se debe realizar en duplicado en dos muestras obtenidas, para evitar cambio en el contenido de humedad, la muestra se debe mantener en un recipiente a prueba de humedad. El tamaño de la muestra, para semilla grande la norma es no utilizar menos de 30 semillas. Método de secado al horno: éste método es recomendado por ISTA para determinar el contenido de humedad de semilla. Las dos muestras de semilla son secados en dos recipientes durante 17 + 1 horas a 103 + ºC. Los duplicados se pesan en y se obtiene el contenido de humedad con base en el peso fresco. 𝑀2 − 𝑀3 𝑋 100 (𝑀2 − 𝑀1) M1= Peso del recipiente en g. M2= Peso del recipiente y su contenido en g antes del secado. M3= Peso del recipiente y su contenido en g después del secado. 2.9 Respuesta a la defoliación Uno de los factores determinantes del desempeño de las plantas es su área foliar, la cual depende del número y del tamaño de las hojas, así como del balance entre 23 la tasa de producción y abscisión foliar. Cuando este es alterado por la pérdida de área foliar (por ejemplo, debido a la herbívora, daños físicos o cosecha de hojas) se producen cambios funcionales que, a su vez, pueden afectar la supervivencia, el crecimiento, la reproducción y, en última instancia, la adecuación de plantas y la dinámica de las poblaciones (Anten y Ackerly, 2001). La defoliación tiene pocos efectos en la reproducción y en la supervivencia de la planta debido a los mecanismos compensatorios esta opera a través de procesos activos como los cambios en los parámetros relacionados con la fotosíntesis, la alteración de los patrones de distribución de fotosintatos y la movilización de carbohidratos o proteínas de reserva hacia la formación de nuevos tejidos foliares (Oyama y Mendoza, 1990; Agrawal, 2001; Anten y Ackerly, 2001; Ramos y Ackerly, 2003). En cuanto a la producción de frutos, la defoliación a un nivel menor al 50% no provoca alteraciones significativas en los ciclos reproductivosni en la producción de semillas, únicamente en niveles altos (>50%) de defoliación provocan inhibición de floración, por consecuencia la fructificación y altas probabilidades de mortalidad (Van Lent et al., 2004; López-Toledo et al., 2012). 2.10 Reguladores de crecimiento Las fitohormonas son substancias producidas naturalmente por las plantas, regulan diferentes procesos como: crecimiento, desarrollo y metabolismo. Existe una amplia clasificación, se dividen en: auxinas, giberelinas, citoquininas, etileno, ácido absisico, brasinosteroides y jazmonatos. La aplicación exógena de 24 giberelinas, citoquininas y auxinas, promueven positivamente el aumento de brotes reproductivos y vegetativos, además puede producir una amplia variedad de respuestas en el desarrollo de una especie (Venegas-Gonzales et al., 2016). El crecimiento y reproducción de plantas por medio de semillas puede ser controlado por la aplicación exógena de reguladores de crecimiento vegetal en concentraciones fisiológicas, pueden actuar como promotoras o inhibidores de dichos procesos (Amador-Alferez et al., 2014). 2.10.1 Citoquininas Son un grupo de hormonas que deben su nombre a su función (citoquinesis). En conjunto con las auxinas estimulan la división celular. Derivan de adeninas, y las más frecuentes son la kinetina y bencilaminopurina que son sintéticas y la zeatina que es natural (Peter et al., 1992). Además de influenciar la división celular, promueven el alargamiento de órganos y la formación de órganos reproductivos, los frutos logran una mayor uniformidad en tamaño. En particular bencilaminopurina induce mayormente a la aparición de brotes vegetativos. Las citoquininas pueden derivarse de las adeninas y de fenil-urea. Entre los derivados de las adeninas se encuentra la zetaina, el isopentil adenina, kinetina y bencil adenina. Entre los fenil-ureal se encuentran el N-N difenilurea, clorfenuron y tidiazuron (Berrios, 2011). Las citocininas son reguladores de crecimiento, naturales o sintéticos que estimulan fundamentalmente el fenómeno de citocinesis o formación del 25 fragmoplasto en la división celular. También intervienen en la regulación de otros fenómenos bioquímicos y fisiológicos como por ejemplo el retardo de la destrucción de clorofila y la senescencia foliar, en la regulación del fenómeno de dominancia apical (juntamente con las auxinas) y controlan varios fenómenos morfogénicos (rizogénesis, crecimiento de tejidos callosos, formación de yemas, etc.) también con las auxinas (Sivori et al., 1986). Se les dio el nombre de citocininas debido a que provocan la citocinesis: división de la célula (formación de una nueva pared celular), 31 siendo la división del núcleo simultánea o previa a ella. (Jensen y Salisbury, 1994). 2.10.2 Giberelinas Sobre los efectos de AG3 en la producción de frutos y flores, se ha encontrado que existe repercusión en el incremento de producción de frutos afectando la calidad de los mismos, lo anterior de acuerdo a las concentraciones aplicadas y a la temporada de aplicación (Díaz et al., 2003). Las giberelinas se producen en la zona apical, frutos y semillas y sus principales funciones es interrumpir el periodo de latencia, inducir la brotación de yemas, promover el desarrollo de los frutos. La aplicación de AG3 estimula el crecimiento vegetativo ya que provoca elongación celular, desarrollo de brotes, induce la diferenciación celular, desarrollo de inflorescencia, raleo de frutos y madurez de bayas (Díaz et al., 2003). 26 2.10.3 Aminoácidos Los aminoácidos influyen en el equilibrio fisiológico de la planta, ya que se asimilan rápidamente por vía foliar y radicular, regulan el contenido hídrico de la planta así tambien un incremento en la producción, mejoran la cantidad de azúcar, dan más uniformidad y mayor calidad de frutos. Tambien reducen los efectos producidos por los cambios bruscos en la temperatura, trasplantes, heladas, etc. (Pérez, 2004). Las plantas sintetizan los aminoácidos a través de reacciones enzimáticas, por medio de procesos de animación y trasnominación, los cuales conllevan un gran gasto energético por parte de la planta. Partiendo del ciclo del nitrógeno, se plantea la posibilidad de poder suministrar aminoácidos a la planta para que ahorre el trabajo de sintetizarlos y de esta forma poder obtener una mejor rápida respuesta en la planta. Las aplicaciones exógenas de aminoácidos producen efectos variados, puede ayudar a estimular la germinación, así como el crecimiento y la producción de follaje, los cuales se reflejan en la etapa vegetativa y de fructificación (Albarrán, 2003; Rodríguez et al., 2006). Ayudan a la planta a superar mejor y más rápidamente las situaciones al estrés, adelantan la maduración, los aminoácidos son utilizados por las plantas dirigiéndose a todas las partes sobre todo en órganos de crecimiento. Su uso conocido actualmente, es específicamente en hortalizas; entre las que destacan, la lisina y el ácido glutámico (Salisbury-Ross, 1991). 27 2.10.4 Bioestimulantes Los bioestimulantes son sustancias y mezclas de origen vegetal, animal o mineral presentes en la naturaleza que tienen propiedades nutritivas para las plantas o repelentes y atrayentes de insectos para la prevención y control de plagas y/o enfermedades (IPES y FAO, 2010). Un bioestimulante es una sustancia que no es específicamente un nutrimento y existen de diferentes tipos. Los reguladores de crecimiento con mediadores en el desarrollo endógeno y sirven para integrar las señales extracelulares para regular y optimizar el desarrollo y crecimiento de las plantas. a) Bioestimulantes a base de aminoácidos El bioestimulante aplicado en la otra porción de Chamaedorea metallica está compuesto por los veinte aminoácidos esenciales que contribuyen a la formación de proteínas y enzimas que sirven para el crecimiento, desarrollo, floración, fructificación y hormonales. La composición de los aminoácidos se encuentra en cadenas cortas de 1-10 aminoácidos denominados oligopeptidos. Los aminoácidos son las unidades básicas que componen las proteínas y estas juegan un papel clave en todos los procesos biológicos como en el transporte y el almacenamiento, el soporte mecánico, la integración del metabolismo, el control del crecimiento y la diferenciación celular. La manera de sintetizarlos es a través de los procesos enzimáticos de aminación y transminación. El primero 28 de ellos es producido por sales de amonio absorbidas del suelo y ácidos orgánicos, producto de la fotosíntesis. La transminación permite, además, producir nuevos aminoácidos a partir de otros preexistentes. La estructura básica de un aminoácido se encuentra conformada por un grupo amino, un grupo carboxilo, un átomo de hidrogeno y un grupo R distintivo, unidos por un átomo de carbono central. Los diferentes aminoácidos se unen mediante enlaces peptídicos para formar las proteínas. Estos enlaces unen el grupo carboxilo de un aminoácido y el grupo amino del siguiente aminoácido. b) Respuesta de las plantas a los reguladores de crecimiento. La magnitud de respuesta a la concentración de un regulador de crecimiento es dada por la capacidad que contiene el receptor. Es común que, al aplicar concentraciones idénticas, bajo condiciones similares, se observen resultados diferentes. Esta respuesta la explica Trewards 1982 utilizando el termino sensibilidad. 1)La concentración del RC; 2) La capacidad del tejido de absorber el RC; 3) La concentración de los receptores al RC. 4) La afinidad de los receptores por los RC. 5) La reacción posterior a la interacción del RC/receptor. 6) La actividad de las enzimas que metabolizan los RC. Estos factores son afectados por condiciones de la planta y del ambiente: 1. Distintos tejidosy órganos responden diferente a los RC, lo cual tiene implicaciones importantes pues se pueden dar efectos secundarios de la 29 aplicación de los RC; 2. El equilibrio fitohormonal y específico de cada especie. Esto impide extrapolar resultados de un cultivo a otro, y aún dentro del mismo cultivo creciendo bajo condiciones diferentes; 3. Edad de la planta (etapa de desarrollo). El balance de RC varía durante el desarrollo de la planta y por ello debe analizarse el efecto de los RC en los diferentes estadíos. Esto retoma mayor importancia en cultivos en los cuales se mezclan diversos estadíos en un mismo espacio (ej. helechos); 4. Temperatura. En zonas templadas mayor importancia; 5. Estado hídrico. La condición de humedad en el suelo afecta la absorción y el balance hormonal interno. El ácido absícico en altas concentraciones durante períodos de estrés; 6. Fotoperíodo. Esto se observa claramente en plantas de día corto/día largo; 7. Residualidad. La planta es capaz de almacenar RC y liberarlos lentamente por lo que la respuesta puede extenderse por largos períodos de tiempo. Incremento de polifenoles, se sugiere que las plantas tratadas con bioestimulantes son más resistentes a los insectos, posiblemente porque ellas son más vigorosas, y pueden producir más de los compuestos defensivos como los polifenoles que son energéticamente caros. c) Reacciones secundarias del uso de aminoácidos. Adicionalmente, algunos de los efectos secundarios observados a la aplicación de RC son: caída de hojas, disminución de rendimiento en años posteriores, disminución del vigor de la planta, áreas foliares cloróticas, distorsión de flores/pedúnculos y deformaciones foliares (Saborio, 2002). 30 CAPÍTULO III POTENCIAL REPRODUCTIVO EN PLANTAS MADRE DE Chamaedorea metallica BAJO MANEJO ex situ RESUMEN El desarrollo ex situ de Chamaedorea es una alternativa viable que permite su cultivo y aprovechamiento, el objetivo de la presente investigación fue evaluar el potencial reproductivo de Chamaedorea metallica como respuesta a prácticas de manejo ex situ las cuales consistieron en el mejoramiento de la nutrición y optimización del área foliar a través de podas selectivas. Se estableció un experimento en el cual se probaron bioestimulantes a base de citocininas y aminoácidos oligopéptidos en combinación con una intensidad de poda, plantas a las que se eliminaron dos o cuatro hojas basales. Se realizó una evaluación de la calidad física de las semillas, de acuerdo con los parámetros que menciona la ISTA. El análisis de medidas repetidas entre fechas, mostró diferencias significativas (p ≤ 0.05) en la variable clorofila; el factor del tiempo resultó ser altamente 31 significativo (p ≤ 0.01) en cada una de las variables. En altura y diámetro medio se encontraron diferencias significativas (p ≤ 0.05) en la interacción de los tratamientos dentrode cada fecha. Las variables número de hojas y área foliar fueron altamente significativas (p ≤ 0.01) para la misma prueba. El análisis físico general de las semillas realizado demostró que éstas son de buena calidad obteniendo valores de pureza por arriba del 99% y coeficientes de variación en peso por debajo del 4%. Palabras clave: Bioestimulantes, calidad de semillas, manejo. ABSTRACT The ex situ development of Chamaedorea is a viable alternative that allows its cultivation and exploitation, the objective of the present investigation was to evaluate the reproductive potential of Chamaedorea metallica in response to ex situ management practices which consisted in the improvement of nutrition and optimization of the leaf area through selective pruning. An experiment was established in which biostimulants based on cytokinins and oligopeptide amino acids were tested in combination with a pruning intensity, plants to which two or four basal leaves were removed. An evaluation of the physical quality of the seeds was carried out, according to the parameters mentioned by the ISTA. The analysis of repeated measures between dates, differences (p ≤ 0.05) in the chlorophyll variable; the time factor turned out to be highly significant (p ≤0.01) in each of the variables. In height and medium diameter, significant differences (p ≤ 0.05) were found in the interaction of treatments within each date. The variables number of leaves and leaf area were highly significant (p ≤ 0.01) for the same test. The general physical 32 analysis of the seeds carried out showed that they are of good quality obtaining purity values above 99% and coefficients of variation in weight below 4%. Index words: Bioestimulant, managment, quality seeds. 3.1 INTRODUCCIÓN En el género Chamaedorea se incluyen aproximadamente 193 especies que constituyen uno de los grupos más abundantes de plantas que conforman el estrato inferior en vegetación de bosque tropical húmedo. Su distribución se restringe al continente americano desde el centro de México, hasta Brasil y Bolivia. Tan solo en México se encuentran 50 especies, que se distribuyen naturalmente en los estados de Campeche, Chiapas, Oaxaca, Quintana Roo, San Luis Potosí, Tabasco y Veracruz, que corresponden en su mayor parte con la zona tropical húmeda de México, y de las cuales 21 especies son de importancia económica (López y Meza, 1999). Debido a la relevancia de este grupo vegetal, se han realizado diversos estudios sobre las especies de mayor importancia económica, como Chamaedorea tepejilote Liebm., C. elegans Mart., C. oblongata Mart., C. radicalis, y C. metallica; en aspectos como su historia de vida, demografía, respuestas a la defoliación y reproducción ( Oyama y Mendoza, 1990; Oyama y Dirzo, 1991; Oyama, 1992, Anten et al., 2003; Endres et al., 2004). Se tienen antecedentes de la propagación del género Chamaedorea mediante germinación de semillas en viveros, mostrando que cuando se someten a escarificación, mayor cantidad de éstas germinan, estos estudios han hecho posible documentar en condiciones fuera de su hábitat natural. Las plantaciones de Chamaedora generalmente se 33 establecen en zonas cercanas a las poblaciones silvestres, en donde se tienen condiciones edáficas y climáticas similares al sitio de origen de la especie, en donde es posible asegurar un adecuado desarrollo de las especies. Chamaedorea metallica es una especie en peligro de extinción incluida en la NOM-059-SEMARNAT, es de porte pequeño de hasta 1.50 m de altura, dioica, con follaje de un color peculiar verde-azul metálico brillante; lo cual la hace ser codiciada por coleccionistas botánicos. De manera similar que otras del género Chamaedorea el follaje de Ch. metallica también es comercializado y por ser una especie de lento crecimiento se vende a un precio más alto, sin embargo, hay poca o nula información publicada respecto al cultivo de la especie. En algunos trabajos realizados por estudiantes del Instituto Tecnológico del Valle de Oaxaca, hay registros no publicados, de experiencias comunitarias en donde el follaje es colectado para ser comercializado en el extranjero. Por otra parte, en el jardín botánico del ITVO a 10 km de la ciudad de Oaxaca, hay una población de esta especie las cuales de acuerdo a registros del jardín fueron reproducidas a partir de semillas extraídas hace 15 años de áreas de bosque en los límites entre Veracruz y Oaxaca. Ibarra-Manríquez (1992) ya mencionaba que las plantas de C. metallica en condiciones de jardín botánico tienen desarrollo y ciclo fenológico similar al de otras especies del género Chamaedorea en vida silvestre; lo que sugiere que el desarrollo ex situ de Chamaedorea es una alternativa viable que permite su cultivo y aprovechamiento, con lo cual se reduciría en intensidad el aprovechamiento de las poblaciones silvestres; sin embargo, es necesaria más investigaciónpara conocer los detalles de manejo de especies del género Chamaedorea, para mejorar su crecimiento y calidad de la cosecha. En ese 34 sentido el objetivo de la presente investigación fue evaluar el potencial reproductivo de Chamaedorea metallica implementando prácticas de manejo ex situ. 3.2 MATERIALES Y MÉTODOS 3.2.1 Localización del área de estudio y preparación de las plantas La presente investigación se realizó en la Unidad de Manejo Ambiental del Instituto Tecnológico del Valle de Oaxaca, en el municipio de Santa Cruz Xoxocotlán, Oaxaca, México, cuya ubicación geográfica es 17°02' LN, 96°44' LO y altitud de 1530 m. El clima en esta zona es templado, con 676 mm de precipitación anual, temperatura promedio de 20.4°C. Las plantas de Chamaedorea metallica usadas tienen aproximadamente 15 años de edad, y se establecieron en macetas de 40 cm de altura, 35 cm de diámetro, con capacidad de 12,100 cm3, en un área de 50 m × 28 m y 15 m de altura (Figura 6) cubierta con malla de 60% de sombra. El estudio se realizó durante un período de 10 meses iniciando en el mes de marzo del 2018; las plantas se transfirieron a macetas de 12,100 cm3, que tenían un sustrato preparado con una mezcla en proporción 1:1:1 de perlita, turba y tierra de monte. Posterior al trasplante se dejó transcurrir un periodo de 15 días, para adaptación de las plantas antes de aplicar los tratamientos. 35 En el vivero, el total de 160 plantas se agruparon de acuerdo a un diseño completamente al azar con cuatro tratamientos y un testigo, cada tratamiento constó de 37 plantas (unidad experimental) como repetición. Figura 6. Plantas madre de Chamaedorea metallica establecidas en contenedor. Los tratamientos consistieron en la aplicación de un bioestimulante comercial y la poda de dos o cuatro hojas basales en la planta. 1) Se aplicó bioestimulante que contiene reguladores de crecimiento de tipo citocininas, en combinación con una única poda de dos hojas (CQ2H); 2) Se aplicó bioestimulante que contiene aminoácidos oligopéptidos, en combinación con una única poda de dos hojas (AA2H); 3) Se realizó la aplicación de bioestimulante que contiene reguladores de crecimiento de tipo citocininas, en combinación con una única poda de cuatro hojas (CQ4H); 4) Consistió en la aplicación de bioestimulante que contiene aminoácidos oligopéptidos, en combinación con una única poda de cuatro hojas (AA4H); así mismo se agregó un tratamiento testigo, un grupo de plantas al cual no se le realizó ninguna poda ni bioestimulación. El bioestimulante con quinetinas es de la marca comercial X-Cyte®, producido por la empresa Stoller México y el producto que contiene oligopéptidos es de la marca Aminfit® Xtra, producido por la empresa Promotora Técnica Industrial. Se preparó una solución 36 con 17 mL de X-Cyte® L -1 y Aminfit ® Xtra se preparó en una solución de 22 mL L -1 de agua. Las soluciones, ya sea de citocininas o aminoácidos, se aplicaron de manera foliar 7 mL por planta hasta punto de goteo, en intervalos cada dos semanas durante siete meses. Al inicio del experimento y posteriormente cada mes se tomó registro de las variables, altura de la planta (cm), desde el cuello de raíz hasta el ápice del tallo, número de hojas, diámetro del tallo de la planta al tercer entrenudo superior (cm); se cuantificó la clorofila en una misma hoja mediante un analizador SPAD modelo de Konika Minolta 502 y el área foliar (cm2) con el equipo Portable laser leaf área meter CI-202. También se registró la etapa fenológica en la que se encontraban las plantas; ésta última únicamente en el periodo correspondiente a floración en los meses de abril, mayo y junio del 2018; y la fructificación que inició en julio 2018, finalizando en abril del 2019. Manejo y análisis de datos Con los datos registrados se elaboró una base de datos en el programa Excel®, la información se analizó estadísticamente en el programa SAS Institute Inc. University Edition, 2015. Para corroborar la normalidad y homogeneidad de los datos obtenidos se aplicaron las pruebas de Shapiro-Wilk y Bartlett, respectivamente. Las variables altura, número de hojas, diámetro medio, clorofila y área foliar no presentaron una distribución normal y homogénea, se les aplicó la transformación logaritmo decimal (Log10-x) y logaritmo natural (Log-x), como paso previo para someterlos a análisis de varianza. Se realizó un análisis de varianza para detectar diferencias significativas entre los tratamientos en relación con el tiempo; por lo anterior se implementó un análisis de medidas repetidas, tomando como factor los tratamientos, con siete registros de cada una 37 de las variables y como factor de medidas repetidas el tiempo. Así mismo se aplicó la comparación de medias mediante la prueba de Duncan (α=0.05). 3.3.2 Calidad de las semillas de Chamaedorea metallica Se colectaron fructificaciones maduras de plantas madre de C. metallica del jardín Ye`tsil en el Instituto Tecnológico del Valle de Oaxaca. A partir de flores que desarrollaron en junio del 2017, se obtuvieron frutos que se cosecharon de marzo a septiembre del 2018; y a partir de flores que desarrollaron en junio del 2018 se colectaron frutos en marzo del 2019 (Figura 7). Los frutos colectados presentaban coloración morado purpura en el exocarpio; se sometieron a un proceso de limpieza para obtener las semillas, el cual consistió en remojar los frutos en agua durante 48 h, una vez transcurrido este tiempo se lavaron con agua corriente frotándolas unas contra otras hasta que el mesocarpio se desprendía completamente. Las semillas se colocaron sobre papel bond y pusieron a secar en un sitio ventilado bajo sombra durante cinco días. Figura 7. A) Inflorescencia masculina de Chamaedorea metallica; B) Fruto maduro de Chamaedorea metallica; C) Inflorescencia femenina de Chamaedorea metallica. La evaluación de la calidad física de las semillas, se realizó de acuerdo con los parámetros mínimos que menciona la International Seed Testing Association (ISTA, 1993). Se A) B) C) 38 obtuvieron datos de porcentaje de pureza (%), peso (g) y número de semillas kg-1 y contenido de humedad. Además de las pruebas físicas se realizaron observaciones al Microscopio Electrónico de Barrido (MEB) de las semillas colectadas del período de fructificación 2018. Se realizó el beneficiado de la semilla utilizando el método anteriormente mencionado. Una vez obtenida la semilla se prepararon seis repeticiones de semillas las cuales para su preparación se siguió el protocolo para la preparación de muestras de MEB. a) Fijado de semillas: se realizó un corte transversal a las semillas a mano alzada con una hoja de bisturí, de forma que el embrión quedara expuesto. Para facilitar el fijado, el resto de la semilla se cortó, hasta obtener un trozo de 6 mm3 conservando el embrión (Carrillo-Ocampo y Engleman, 2002; Büyükkartal et al., 2013). Con la finalidad de preservar las estructuras internas, las semillas cortadas fueron fijadas en una solución de Glutaraldehido al 3% a temperatura ambiente, cubriéndola con veinte veces el volumen de la muestra. Las muestras permanecieron 24 horas en refrigeración a 4ºC hasta el proceso de deshidratación y secado (Büyükkartal et al., 2013; Das Murthey y Ramasamy, 2016). Para continuar al proceso de deshidratación se realizaron seis lavados en solución buffer (fosfato 0.2 M pH 7.2), cada uno durante 10 minutos (Nakashima et al., 2014). Posteriormente la muestra se sumergió en una solución de paraformaldehído al 4%, durante dos horas. Enseguida se realizaron tres lavados en agua destilada por diez minutos (Das Murthey y Ramasamy, 2016). b) Deshidratación: La muestra fue sometida a diferentes concentraciones de etanol, para eliminar el agua, preservaradecuadamente las estructuras de los tejidos y evitar daños en los mismos al secarla por punto crítico. Las concentraciones utilizadas fueron 35% 39 etanol, 15 minutos; 50% etanol, 15 minutos; 75% etanol, 15 minutos; 95% etanol en dos ocasiones durante 15 min. Finalmente se sumergió la muestra en acetona por 15 min. c) Secado: Para el secado de la muestra se utilizó el método de secado por punto crítico de CO2 líquido utilizando acetona como liquido de transición. d) Montaje: Una vez que la muestra se encontraba seca, se fijó al porta muestras del MEB con adhesivo a base de carbón (Sorrivas-de Lozano et al., 2014). Por tratarse de una muestra biológica la muestra se cubrió con una capa de 3 µm oro y grafito. Posteriormente se realizaron observaciones a los embriones de las semillas en el MEB a diferentes resoluciones, de acuerdo a las estructuras que se deseaban observar. 3.3 RESULTADOS Y DISCUSIÓN 3.3.1 Bioestimulación y poda de plantas madre de Chamaedorea metallica Con los datos registrados en campo se realizó un calendario fenológico reproductivo de las plantas madre Chamaedorea metallica es una especie la cual cumple con ciclo reproductivo completo en un año. El ciclo comienza con el desarrollo de estructuras reproductivas masculinas y femeninas durante el mes de marzo (Figura 2 a,c ), el desarrollo de las panículas y flores continua durante tres meses más hasta el mes de junio, durante los meses de mayo y junio se logra la antesis de las flores. Durante julio, agosto y septiembre se hace evidente la hinchazón del ovario dando inicio al desarrollo de los frutos. Durante los meses de octubre y noviembre los frutos han alcanzado el 80% del tamaño final especifico, para dar inicio a la maduración del fruto; en algunas especies de Chamaedorea el comienzo de la maduración y coloración de los frutos es muy variable 40 C. metallica no es la excepción, la maduración de los frutos es desigual en cada panícula desarrollada por la planta, por lo cual el tiempo de maduración de al menos el 95% de frutos en este caso se prolonga hasta un nuevo ciclo reproductivo en el mes de abril, por lo que del mes de diciembre al mes de abril la planta retiene los frutos en madurando. Ibarra-Manríquez (1992) desde hace ya varios años realizó un estudio en el cual describe de manera cualitativa la fenología de cinco especies del género Chamaedorea en los Tuxtlas México, encontró que la floración de las palmas de este género es en los meses que corresponden a la temporada de secas y a mediados de la temporada de lluvias, sus resultados son similares a los observados en C. metallica con la gran diferencia de que éstas se encuentran en condiciones ex situ, lo cual hace suponer que a pesar de las diferencias físicas, las plantas se encuentran en condiciones óptimas de desarrollo. Retana- Salazar y Rodríguez-Arrieta (2016) mencionan tambien que la floración ocurre una vez al año, con varias inflorescencias, lo que origina una prolongada fructificación por varios meses. Para la especie C. tepejilote se observó que algunos ejemplares muestran patrones diferentes en cuanto a la temporada de floración, sin embargo, en su mayoría la floración comienza a finales de las temporadas de lluvia y continúan hasta mediados de la temporada de secas. El mayor fructificación ocurre desde julio hasta octubre por lo que se recomienda recolectar los frutos en estos meses, cuando normalmente la temperatura oscila entre los 26 - 28 °C y entre los meses de agosto a octubre cuando la temperatura es de 20 – 22 °C. La coloración de los frutos se torna de verde (inmaduro) a morado, púrpura obscura (maduro), debido a que se trata de semillas recalcitrantes es recomendable sembrarlas antes de cuatro meses después de su obtención (Miceli et al., 2013). 41 La prueba para efectos de los tratamientos entre fechas, muestra diferencias significativas (P=0.05) únicamente en la variable clorofila (Cuadro 2); es decir que la prueba encontró variaciones en el contenido de clorofila de los individuos de cada tratamiento. Casierra et al. (2012) mencionan que el contenido de clorofila en las hojas es un parámetro muy útil para evaluar el estado fisiológico de las plantas. Todas las hojas verdes presentan mayor capacidad de absorción en el rango de 400 a 700 nm, en donde sucede la transmisión de electrones entre clorofilas y carotenos. La homogeneidad en tamaño y edad de las plantas influyó en las variables altura número de hojas diámetro medio y área foliar las cuales no fueron estadísticamente diferentes (p > 0.05) (Cuadro 2), a diferencia de la clorofila la cual es una variable que puede cambiar no solo entre individuos, si no que en un mismo individuo se pueden encontrar diferentes concentraciones. También se obtuvieron los efectos de los tratamientos dentro de cada fecha y la interacción de la fecha con los tratamientos. Teniendo en cuenta los resultados del Cuadro 2 el tiempo resultó ser altamente significativo (p ≤ 0.01) en cada una de las variables. En altura y diámetro medio se encontraron diferencias significativas (p ≤0.05) en la interacción de los tratamientos dentro de cada fecha. Las variables número de hojas y área foliar fueron altamente significativas (p ≤0.01) a la interacción del tiempo con los tratamientos; por otra parte, la variable clorofila en donde los tratamientos fueron diferentes, la interacción del tiempo con los tratamientos no lo fue. Cuadro 2. Cuadrados medios del error del análisis de varianza de medidas repetidas para las variables evaluadas de plantas madre de Chamaedorea metallica a las que se les aplicó bioestimulación y poda. A. Prueba para efectos de los tratamientos entre fechas. F.V. G.L A NH DM CL AF Trat 4 791.23ns 5.45ns 0.36ns 587.13* 12717.58ns Error 153 858.60 24.70 0.21 633.33 14238.61 B. Prueba para efectos de los tratamientos dentro de cada fecha. 42 Fecha 7 203.07** 78.39** 0.08** 310.41** 537.27** Fecha×Trat 28 4.37* 3.10** 0.02* 119.24ns 10.65** Error 1050 1.67 0.78 0.01 86.61 0.02 FV= fuentes de variación; GL= grados de libertad; TRAT=tratamiento; A=altura; NH= número de hojas; DM= diámetro medio; CL= clorofila; AF= área foliar; *= significativo (p ≤ 0.05); **= altamente significativo (p ≤ 0.01), ns = no significativo (p > 0.05). La variable altura no mostró diferencias significativas a los tratamientos en ninguna fecha. Los tratamientos para la variable número de hojas mostraron diferencias significativas (p ≤0.05) en la fecha 1 y 2, posteriormente diferencias altamente significativas (p ≤0.01) de la fecha 4 a la fecha 6; las diferencias al inicio se pudieron deber a que se realizó una única poda al momento del trasplante de las plantas madre al nuevo sustrato. En la fecha 7 los tratamientos no fueron estadísticamente significativos. Por tratarse de una especie de lento crecimiento, el diámetro del tallo se mantuvo relativamente similar durante el monitoreo, por lo cual en respuesta a los tratamientos el diámetro medio de las plantas madre mostraron diferencias significativas p ≤0.05) hasta las fechas 5 y 6. Los tratamientos en el contenido de clorofila mostró diferencias significativas (p ≤0.05) en la fecha 1. El área foliar en las palmas mostró diferencias altamente significativas por tratamientos (p ≤0.01) (Cuadro 3). Cuadro 3. Cuadrados medios del error del análisis de varianza de medidas repetidas de las variables evaluadas dentro de cada fecha. Altura F.V. G.L F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 Media 1 13.85* 5.19ns 8.54* 11.79** 1.72* 1.24* 0.18ns Trat 4 23.49ns 3.93ns 1.84ns 0.50ns 0.23ns 0.31ns 0.31ns Error 150 5.10 2.82 2.11 1.01 0.26 0.21 0.19 Número de hojas Media 1 294.37** 162.51** 12.98** 4.04* 37.44** 30.99** 6.43** Trat 4 8.06* 2.59* 1.26 4.13** 3.98** 1.49** 1.49ns Error 153 1.98 0.92 0.66 0.72 0.54 0.34 0.29 Diámetro medio Media1 0.13** 0.002ns 0.009ns 0.12** 0.28** 0.06** 0.001ns Trat 4 0.04ns 0.008ns 0.005ns 0.01ns 0.04* 0.01* 0.01ns Error 153 0.01 0.008 0.01 0.01 0.01 0.007 0.006 Clorofila 43 Media 1 184.58** 1.45ns 10.27ns 1.76ns 233.30* 496.88** 244.65* Trat 4 44.94* 57.15ns 153.97ns 41.42ns 46.27ns 50.97ns 39.95ns Error 153 138.70 79.34 93.50 99.47 77.17 56.45 61.68 Área foliar Media 1 973.96** 100.58** Trat 4 19.50** 1.80** Error 153 FV= fuentes de variación; GL= grados de libertad; TRAT=tratamiento; T= tiempo meses; F1=primer mes de registro; F2= segundo mes de registro; F3= tercer mes de registro; F4=cuarto mes de registro; F5=quinto mes de registro; F6=sexto mes de registro; F7=séptimo mes de registro *= significativo (p > 0.05); **= altamente significativo (p ≤ 0.01), ns = no significativo (p > 0.05). El no obtener diferencias estadísticas significativas en la última fecha de registro en las variables como altura, diámetro medio y clorofila pudo deberse a que la fecha corresponde a los registros del mes de diciembre 2018, periodo durante el cual la planta madre se encuentra en proceso de maduración de frutos, lo cual hace suponer que los nutrientes fueron traslocados a las áreas de mayor prioridad. Se obtuvieron diferencias significativas entre los tratamientos, en diferentes fechas de registro Al inicio del experimento las plantas mostraban una altura entre 37.69 y 40.51 cm, al finalizar el experimento las plantas alcanzaron una altura máxima de entre 40.01 y 44.61, magnitudes no significativamente diferentes (Cuadro 4). Cuadro 4. Valores promedio de cuatro variables evaluadas en plantas madre de Chamaedorea metallica a las que se les aplicó bioestimulación y poda. AA4H=tratamiento aminoácidos y poda de 4 hojas; CQ4H=tratamiento citoquininas y poda de 4 hojas; T= testigo; AA2H= tratamiento aminoácidos y poda de 2 hojas; CQ2H=tratamiento citoquininas y poda de 2 hojas; F1=primer mes de registro; F2= segundo mes de registro; F3= tercer mes de registro; F4=cuarto mes de registro; Número de hojas Fechas AA4H CQ4H T AA2H CQ2H F1 0.52±0.04ba 0.44±0.09ba 0.65±0.21a 0.58±0.03a 0.34±0.02b F7 5.56±0.28b 6.38±0.25ba 7.20±0.48a 6.40±0.24ba 5.50±0.26b Diámetro medio (cm) F7 1.46±0.02a 1.38±0.03ba 1.46±0.08a 1.34±0.02b 1.41±0.02ba Clorofila (SPAD) F1 1.33±0.02ba 1.29±0.02b 1.37±0.06ba 1.30±0.01b 1.40±0.02a F3 75.21±1.44a 74.81±1.97a 80.42±2.77a 78.57±1.45a 74.52±1.49a F6 79.74±1.33ba 81.59±1.10ba 84.39±1.63a 78.55±1.79ba 78.14±2.05b Área foliar (cm2) F1 80.09±3.08ba 76.11±1.46b 84.39±1.63a 78.59±1.74ba 77.08±1.71ba F2 177.91±10.86b 201.53±12.89ba 220.61±18.32a 180.96±9.7ba 185.00±11.06ba 44 F5=quinto mes de registro; F6=sexto mes de registro; F7=séptimo mes de registro; promedios con la misma letra por columna no difieren significativamente (Duncan p<0.05). Las plantas que fueron sometidas a la aplicación de alguna concentración de citoquininas o aminoácidos mostraron un decremento en los promedios del número de hojas; las plantas del tratamiento testigo mostraron menor reducción en promedio del número de hojas. En la especie C. tepejilote a medida que las plantas aumentan su altura la distribución de biomasa se asigna a estructuras reproductivas y al aumento de tallos mientras que la biomasa en hojas disminuye, este fenómeno se pudo observar en ambos sexos a excepción que las plantas femeninas tienen una mayor asignación de biomasa para reproducción (Oyama y Dirzo, 1998). Lo anterior también se pudo observar en C. metallica puesto que las plantas femeninas tenían una mayor cantidad de hojas a diferencia de los machos, por otra parte, la dominancia apical propia de las plantas monocotiledóneas se vio reforzada por la aplicación de citoquininas en el experimento lo cual pudo haber retrasado la aparición de nuevas hojas (Howell et al., 2003). Para la variable diámetro medio se mostró diferente entre los tratamientos obteniendo el mejor promedio el tratamiento la combinación de aminoácidos con la poda de cuatro hojas (AA4H). El tratamiento CQ2H mostró diferencias (p ≤ 0.05) en el contenido de clorofila con un promedio de 1.40 unidades SPAD en la fecha 1. En la fecha 3 el tratamiento testigo obtuvo un promedio 80.42, que de acuerdo con la prueba Duncan 0.05 fue igual al tratamiento AA2H, posteriormente ningún tratamiento fue diferente a otro hasta la fecha 6, en donde el tratamiento testigo (T) y la interacción CQ2H fueron diferentes con valores de 84.39 y 78.14 respectivamente. 45 Dentro de las principales funciones de las citocininas y de los aminoácidos aplicados, se encuentra la estimulación de síntesis de clorofila en las hojas, sin embargo, en el cuadro 4 se puede observar que el mejor promedio obtenido fue el de las citoquininas con un valor de 78.48 (Popko et al., 2018). El incremento en la síntesis de clorofila supondría un retraso en la senescencia foliar de las palmas; los resultados encontrados no muestran evidencia de dicho fenómeno (Kieber y Schaller, 2014). Para la variable área foliar (AF) de acuerdo con el test de Duncan (0.05) 180 DT el tratamiento testigo (T) obtuvo el promedio más alto de 84.39, éste a su vez diferente con el tratamiento CQ4H. A los 210 DT el tratamiento testigo (T) y la interacción AA4H fueron diferentes (p ≤ 0.05), con promedios de 220.61 y 177.91 respectivamente. El uso de los aminoácidos es recomendado para plantas que crecen bajo condiciones críticas: después de trasplantes, durante la floración y durante condiciones climáticas adversas. Las pequeñas diferencias encontradas en las variables entre los tratamientos a través de los días, se pudieron deber a que probablemente durante la aplicación de los tratamientos las plantas no se encontraban bajo condiciones de estrés o las plantas se encontraban bien provistas de nutrientes (Paleckiene et al., 2007; Popko et al., 2018). 3.3.2 Calidad física de las semillas de Chamaedorea metallica El porcentaje de pureza en semillas de Ch. metallica fue alto con un 99.97%. Los resultados muestran que las semillas se encontraban limpias de impurezas, esto pudo deberse a que la colecta de los frutos se realizó directamente de la planta evitando que se colectaran impurezas como suelo, vegetación u otras semillas. El peso y número de 46 semillas para cada especie se consideran validos de acuerdo a la ISTA puesto que los coeficientes de variación son menores a 4%. El contenido de humedad de las semillas colectadas durante las temporadas 2017 y 2018, y transcurrido el proceso de limpieza y secado fue de 7.1% y 8.2%, respectivamente. El peso de 1000 semillas colectadas en los años 2017 y 2018 fue de 22.81 y 28.66 g, respectivamente (Cuadro 5). Cobos y Rodríguez-Trejo (2009) reportan para un lote de semillas de Ch. elegans un porcentaje de pureza del 85%, un contenido de humedad de un 12% y el peso promedio de 1000 semillas fue igual a 140 g. Para la misma especie Ramón-Jiménez et al. (2002), indicaron un 98.81% de pureza, 33.21% de contenido de humedad. Miceli-Mendez et al. (2013), en semillas de C. ernesti-augusti, reportaron un 99.7% de pureza, 20.4% de contenido de humedad y un peso de 100 semillas de 34.5 g. Cuadro 5. Calidad física de semillas de Ch. metallica colectadas durante los periodos de fructificación 2017 y 2018. Dussan (2014) describe que los frutos en plantas tratadas bajo niveles de fertilización y fitohormonas como la kinetina, presentan mejor rendimiento además de presentar una maduración de fruto más uniforme. Quilambaqui (2003), menciona también que las aplicaciones de fitohormonas en la fruticultura pueden adelantar o retrasar la maduración de frutos. 3.3.3 Observaciones al microscopio electrónico de barrido Análisis 2017 2018 Pureza(%) 99.95 99.97 Peso promedio de 1000 semillas (g) 22.81 28.66 Coeficiente de variación
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