ecotoxicologia vibrio fischeri

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Uso de la bacteria Vibrio fischeri como herramienta para
la evaluación de la toxicidad del plomo: Una revisión
bibliográfica
Resumen
En este informe de investigación, se evaluó la toxicidad del plomo (Pb) utilizando la bacteria
Vibrio Fischeri como organismo de prueba. El Pb es un contaminante altamente tóxico que se
encuentra en el ambiente debido a actividades industriales. Se analizaron diez artículos de
investigación que utilizaron la técnica Microtox con bacterias reconstituidas.
Los resultados revelaron que el Pb mostró un alto efecto de inhibición de la bioluminiscencia en
los organismos hidrobiológicos en un intervalo de tiempo corto, lo que indica su toxicidad. La
concentración efectiva que inhibe el 50% de la bioluminiscencia (EC50) varió entre 0.48 y 6.78
mg/L, confirmando la toxicidad del plomo. Además, se observó que variables como el pH, la
concentración, el tiempo de exposición y la presencia de materia orgánica y cationes afectaron
los resultados de los bioensayos. Un pH inferior a 7 aumentó la toxicidad, mientras que un pH
mayor a 7 no mostró efectos tóxicos. El tiempo de exposición también influyó en la toxicidad, y
la presencia de ciertos cationes mitigó la toxicidad del plomo. En cuanto a la materia orgánica,
algunos estudios encuentran que adicionar cierta cantidad puede actuar como un potenciador para
la bioluminiscencia o como nutriente para las bacterias, mientras que otras investigaciones
muestran que, al adicionar cierta cantidad de materia orgánica, se observó un aumento en la
toxicidad del plomo.
Estos hallazgos resaltan la importancia de considerar estas variables al evaluar la toxicidad del
plomo utilizando bioensayos con Vibrio Fischeri.
Palabras Claves: Vibrio Fischeri, Plomo, Microtox, toxicidad
Introducción
En la actualidad los cuerpos de agua se encuentran amenazados diariamente por la
presencia de contaminantes, que en su gran mayoría son metales pesados, estas
sustancias químicas procedentes de la actividad humana suponen un desafío analítico y
más aún en sus interacciones con el medio ambiente. La contaminación por metales
pesados desencadena una serie de impactos que irán repercutiendo en la salud de las
personas y el medio ambiente. (Lagomarsino, A. ,2022)
En ese sentido entre los metales pesados más comunes encontramos al plomo (Pb), este
elemento afecta sistemas, órganos y tejidos, es un contaminante muy dañino para
adultos y principalmente para los niños que se encuentran en desarrollo. Por lo tanto, es
primordial realizar evaluaciones en las corrientes de agua contaminadas para conocer el
nivel de toxicidad que en ella supone para el medio y las personas. (Poma, P., 2008).
La toxicidad es un parámetro primordial en la evaluación del impacto ambiental de una
corriente contaminante, ya que evalúa las determinaciones físicas y químicas solas
pueden resultar insuficientes para la evaluación de los potenciales efectos sobre los
seres vivos. La forma de obtener una mayor información del impacto de un
determinado residuo sobre el medio ambiente es registrar el efecto producido sobre un
ser vivo. Existe una gran variedad de ensayos ecotoxicológicos de una sustancia
utilizando diferentes organismos (algas, fitoplanctos, protozoos, microcrustáceos,
insectos, peces, conejos, etc.). (Gazulla, F., Gomez, M., Monfort, E., y Orduña, M.,
2004).
Sin embargo, una técnica de gran implantación en la actualidad, debido a ventajas como
simplicidad, buena reproducibilidad y obtención de secuencias temporales de
comportamiento biotóxico; es el test de bioluminiscencia usando como indicador a la
bacteria marina Vibrio Fischeri. (Galvin, M., Perez, L., Chamber, I., y Jimenez, I.,
2006). Este bioensayo se basa en medir el grado de reducción de luz que se produce al
poner en contacto diferentes concentraciones de una muestra problema con bacterias
Vibrio Fischeri, asociándose dicha disminución de luz a una inhibición del proceso,
metabólico de las bacterias, y por tanto a la toxicidad de la muestra, donde el resultado
se expresa como la concentración de muestra que reduce la intensidad inicial de luz.
(Gazulla, F., Gomez, M., Monfort, E., y Orduña, M., 2004).
Xenobiótico:
● Metal pesado: Plomo (Pb)
Organismo hidrobiológico:
● Bacteria: Vibrio fischeri
Objetivos:
● Objetivo General:
Determinr la toxicidad del metal pesado “Plomo (Pb)” usando como indicador a la
bacteria Vibrio fischeri.
● Objetivos Específicos:
Analizar la efectividad de la bacteria Vibrio fischeri en ensayos ecotoxicológicos,
evaluando los niveles de toxicidad que se miden en distintas muestras.
Evaluar el riesgo tóxico del plomo en base al nivel de inhibición de la
bioluminiscencia de la bacteria Vibrio fischeri, en base al EC50, y el bionsayo
Microtox
Justificación:
La contaminación ambiental es un problema a nivel mundial, uno de los más comunes es la
contaminación de aguas, en especial en los ríos, por metales pesados, los cuales son producidos
en su mayoría de manera antropogénica principalmente debido al impacto que generan los
relaves mineros debido a que no cuentan con un adecuado tratamiento, causando el deterioro de
especies hidrobiológicas y efectos negativos para la salud humana.
Uno de los metales pesados más comunes, procedentes de actividades mineras, es el Plomo, que
altera ciclos naturales, en los procesos de inhibición, crecimiento y germinación en cultivos, y su
exposición en personas puede causar anemia, hipertensión, disfunción renal, toxicidad
reproductiva, etc.
Es un xenobiótico que no es necesario para el organismo humano, para ninguna función
fisiológica conocida, pero sus efectos adversos inciden sobre diferentes procesos bioquímicos
esenciales, e incluso es tóxico a bajo niveles de exposición (agua, suelo y atmósfera), como en
sitios de trabajo en los que se desarrollan procesos de producción o manejo con plomo como la
metalurgia, fundición y refinado, la minería extractiva, la plomería, actividades de soldadura,
construcción civil, industria cerámica y fabricación de pinturas, manufactura de caucho y vidrio,
reparación de buques, procesos de cortado del metal, manufactura de plásticos, fabricación y
reciclados de baterías. (Rodríguez, A., Cuéllar, L., Maldonado, G., y Suardiaz, M., 2016 ).
Por lo que puede ingresar al organismo por tres vías: Respiratoria, Digestiva y Dérmica.
● Al entrar por el aire, pasa por las vías respiratorias, que absorben el 40%; en cambio al entrar
por ingesta, pasa por el tracto digestivo, donde en adultos se aborsbe el 10%, mientras que en
niños un 30-50%.
● Además, al distribuirse, el 2% se va a la sangre, con una vida media de 7-35 días, mientras
que en tejidos blandos, como en el cerebro y corazón, corresponde a un 8%, con una vida
media de 40 días, y por último en el tejido óseo, le corresponde un 90%, con una vida media
de 20 a 30 años, reemplazando al Calcio.
● Por último, al momento de ser eliminado, se hace por la piel (5-10%), por el riñón (80%), y
por el colon (85%).
Sin embargo el plomo posee muy baja biotransformación, y al ser inorgánico no se metaboliza,
sino que se absorbe, se distribuye, se acumula y excreta de forma directa, sin embargo el de
naturaleza orgánica sufre un proceso de transformación escasa donde pasa afosfato plumboso y
luego a fosfato plúmbico, el cual es menos soluble y por tanto se excreta en menor proporción, lo
que aumenta la concentración y acumulación en el organismo, causando graves problemas a la
salud, en especial en niños y/o bebés. (Rodríguez, A., Cuéllar, L., Maldonado, G., y Suardiaz, M.,
2016 ).
Por ello, se utilizará a la bacteria Vibrio fischeri para conocer la toxicidad del Plomo, el cual
posee las siguientes características:
● Posee una alta sensibilidad con respecto a los niveles de toxicidad de algunas
muestras, en comparación de otros organismos hidrobiológicos como la Daphnia
Magna.
● Tiene una característica principal de luminiscencia natural que la hace diferente a
otros organismos hidrobiológicos. Por otraparte, en la prueba bioluminiscencia
dichas bacterias son expuestas a las sustancias tóxicas presentes en la muestra y la
emisión de luz es comparada con las muestras control, tratándose de una prueba
relativamente corta al medir, en un lapso de 5 a 30 minutos.
● Se utiliza comúnmente en ensayos ecotoxicológicos debido a su capacidad para
producir luz cuando se encuentra bajo estrés. Esta bioluminiscencia se puede medir
con facilidad y precisión utilizando equipos especializados, lo que permite a los
investigadores evaluar la toxicidad de sustancias químicas y otros contaminantes en
el medio ambiente.
● Es muy sensible a una amplia variedad de contaminantes, lo que la convierte en una
herramienta de prueba muy útil para evaluar la toxicidad de sustancias químicas y
otros contaminantes ambientales, como lo es el plomo.
● Es una especie bacteriana común en el medio ambiente marino, lo que la convierte
en un buen representante de la biodiversidad local.
Por tal motivo, la Vibrio fischeri es una herramienta valiosa para evaluar la toxicidad de
los contaminantes ambientales debido a su sensibilidad, bioluminiscencia,
representatividad y a su facilidad de encontrarla puesto que es común en ambientes
marinos. Debido a estas características, se utiliza comúnmente en ensayos
ecotoxicológicos.
Marco Teórico:
● Ecotoxicidad:
Es una disciplina integrada y desarrollada a partir de la toxicología, la biogeoquímica y la
química medioambiental, el principal objetivo es estudiar el efecto potencial de xenobióticos
en los ecosistemas a escala celular, individual, poblacional y comunitaria y su interacción con
el medio ambiente (Santana, L., 2014). Ha permitido la predicción de efectos adversos
producidos en la salud humana y organismos acuáticos generados a través del ingreso de
sustancias tóxicas e incluso nuevas sustancias con el uso no convencional de procesos de
detección, control y monitorización de los contaminantes presentes en el agua, suelo, residuos
y entre otros.
- Toxicidad: Es un parámetro primordial en la evaluación del impacto ambiental, de una
corriente contaminante, ya que las determinaciones físicas y químicas solas pueden resultar
insuficientes para la evaluación de los potenciales efectos sobre los seres vivos. (Gazulla, F.,
Gomez, M., Monfort E., y Orduña, M., 2004).
- Ensayos ecotoxicológicos: Es la determinación del efecto de un material o mezcla sobre un
grupo de organismos seleccionados bajo condiciones definidas. Mide las proporciones de
organismos afectados (efecto cuantal) o el grado de efecto (graduado) luego de la exposición
a la muestra. (Castillo Morales, Gabriela, 2004)
- Sistema o ensayo Microtox: Consiste en operar con bacterias liofilizadas (-25°C) que se han
desarrollado en condiciones ideales, las mismas que para ser utilizadas posteriormente
tendrán que ser rehidratadas. (Santana, L., 2014).
Es un ejemplo de un ensayo en bacteria ampliamente utilizado para la evaluación de la
toxicidad en sedimentos estuarinos y marinos. Normalmente usa la bacteria Vibrio Fischeri
para medir la disminución en la emisión de luz en un periodo de 5 a 30 minutos de
exposición a una muestra problema. Este método sirve como cribado ya que brinda
información ecotoxicológica para la rápida identificación de áreas de interés. (Lagomarsino,
A., 2022).
- Ensayo Biotox: Es un ensayo de luminiscencia bacteriana, adaptado a ciertas condiciones
de las muestras según se describe en el procedimiento del bioensayo. Está basado en la
norma ISO 11348:3 – 2007, donde el protocolo recomienda ajustar el pH de las diluciones
entre 6 – 8,5, pero debido a altas concentraciones de metales pesados en algunas muestras,
es recomendable no hacerlo. En síntesis, es un bioensayo que se encarga de la determinación
del efecto inhibitorio de las muestras de agua sobre la emisión de luz de Vibrio fischeri
(prueba de bacterias luminiscentes). (Vizarreta, G., 2021).
● Xenobiótico:
Sustancia exógena a un organismo. Es lo que se produce en el exterior perteneciente al efecto
potencial de los xenobióticos. (Santana, L., 2014).
- Plomo: Es un metal pesado muy importante, ya que se clasifica según su concentración en la
biosfera, siendo uno de los metales de mayor interés por los efectos nocivos que generan en
la salud humana. (González, G., 2007).
- EC50: Concentración de disolución y lixiviado (en la caracterización de residuos) a partir de
la cual se forma fracciones para obtener una inhibición del 50% de luminiscencia; o la
concentración del elemento, como un metal pesado, en la disolución en contacto con las
bacterias que produce una inhibición de la luminiscencia del 50%. (Gazulla, F., Gomez, M.,
Monfort E., y Orduña, M., 2004).
- EC20: Concentración que produce la menor disminución significativamente medible y
reproducible de la emisión de luz en ciertas condiciones experimentales, es decir, una
disminución del 20%. (Fulladosa, E., Murat, J., Martínez, M., Villaescusa, I., 2015).
- CI50: Concentración inhibitoria del 50%. Es la concentración o medida de una sustancia,
como un contaminante, que causa una inhibición del 50% del crecimiento y supervivencia,
así como funciones biológicas o bioquímicas específicas. (Vizarreta, G, 2021).
- TEL: Nivel de efecto umbral de cada sustancia contaminante a la media geométrica entre el
percentil 15 de datos de efecto y el percentil 50 de los datos de no efecto. Es el valor por
debajo del cual se encuentran concentraciones de una sustancia que no determinarán de
forma frecuente un efecto biológico adverso. (Lagomarsino, A., 2022).
- PEL: Media geométrica entre el percentil 50 de datos de efecto y el percentil 85 de datos de
no efecto. Es el valor por encima del cual se encuentran concentraciones de una sustancia
que determinarán un efecto biológico adverso de forma frecuente. (Lagomarsino, A., 2022).
● Organismo Hidrobiológico:
Los organismos hidrobiológicos son aquellos que pasan toda su vida o una porción de ella en
un medio acuático que viven ya sea de manera natural en mares, ríos, etc o en lugar artificial
para la acuicultura por ejemplo. (Minagri, 2020). Lo que significa que podemos estar
hablando de organismos microscópicos hasta los más grandes mamíferos marinos como las
ballenas. Los productores en el ecosistema acuático son, en general, microscópicos como el
fitoplancton y las cadenas alimentarias suelen ser más largas que en un ecosistema
aeroterrestre. Estas últimas y también los organismos microscópicos son muy sensibles al
cambio del medio ya sea por el cambio del ph, temperatura, o por contaminantes como los
metales pesados. (CORDIS, 2013)
- Bacteria Vibrio Fischeri: Es un organismo marino unicelular, una bacteria anaerobia
facultativa, gramnegativa de la familia Vibrionacea cuya característica principal es la
luminiscencia natural. Tiene la capacidad de colonizar y persistir sin la necesidad de
continuar siendo huésped del calamar hawaiano Euprima scolopes y el pez Monocentris
japonicus, es decir, puede subsistir sin el órgano simbiótico del calamar y el pez. Siendo
muy utilizada usualmente en la valoración de muestras medioambientales a través de la
bioluminiscencia natural. (Santana, L., 2014).
En presencia de algunas sustancias tóxicas, su emisión de luz disminuye debido al daño
ocasionado en los procesos metabólicos asociados a la respiración bacteriana o por su
muerte. (Lagomarsino, A., 2022).
- Bioluminiscencia: Es la capacidad de emisión de luz que presentan ciertos organismos, una
característica que también está presente en algunas bacterias. Las enzimas que catalizan las
reacciones de bioluminiscencia reciben el nombre genérico de luciferasas. Los sustratos de
esta reacción se suelen denominar luciferinas. La única característica común en todos los
microorganismos/organismos que emiten luz es el requerimiento de oxígeno, requisito
imprescindible en la reacción bioluminiscente. Algunas bacterias, como la Vibrio Fischeri,
establecen simbiosis mutualistas con numerosospeces teleósteos, calamares y jibias que las
almacenan en órganos especializados. En los órganos luminosos de peces, las bacterias
tienen una localización extracelular y se encuentran empaquetadas en inclusiones tubulares,
alcanzando poblaciones muy elevadas. (Martin, A., Serrano, S., Santos, A., Marquina, D.,
Vasquez, C., 2010).
Metodología
● Materiales, equipos y recursos:
La presente investigación fue de alcance exploratorio, es decir, examinar un tema o problema
de investigación poco estudiado o novedoso, del cual se tienen muchas dudas o no se ha
abordado mucho. (Zamora, M., 2019). Se dio un enfoque cualitativo, es decir, abarca el
estudio, uso y recolección de una variedad de materiales empíricos como estudios de caso,
experiencia personal, historia de vida, entrevista, textos, que describen los momentos
habituales y problemáticos y los significados en la vida de los individuos. (Vasilachis, 2006, p.
25), usando el método inductivo, que es un proceso de razonamiento que se basa en la
observación para llegar a una conclusión general a partir de casos específicos, (QuestionPro,
2021), y se tuvo un diseño teórico fundamental, es decir, proponer una teoría derivada de
datos recopilados (Strauss y Corbin, 2002). Dicho esto, se llevó a cabo la investigación sobre
el uso de la bacteria Vibrio fischeri como herramienta para la evaluación de la toxicidad del
plomo. Para poder realizar este trabajo, se trabajaron con las bases de datos: Google
Académico, ScienceDirect y repositorios de universidades, realizando una búsqueda de varios
Artículos de Investigación, de entre ellos 10 fueron escogidos por su relevancia frente al tema
a estudiar, de los cuales 6 fueron revistas y 4 tesis.
Además se utilizaron los conceptos clave, Vibrio Fischeri, Plomo (Pb), y ecotoxicidad, en un
rango de tiempo, 2012 – 2022, ya que en estos tiempos se encontró más información
relevante, tanto de revistas y tesis. También se llevó a cabo, el objetivo general, que responde,
a la pregunta de investigación, como se llevó a cabo la investigación, y la razón de esta, y por
último se desarrolló la justificación, donde se justificó, mediante argumentos y explicaciones
fundamentadas, porque se escogió el tema investigado, cual fue la importancia de este y su
razón de ser investigado, cual fue su respuesta de la bacteria Vibrio Fischeri frente a la
toxicidad del plomo, a través de la EC50 o EC20, CI50, y ensayos Microtox o Biotox.
Por lo que se realizó la siguiente tabla, con el fin de ordenar la información recopilada.
Tabla 1: Matriz de Búsqueda de Artículos de Investigación
Art.
Inv.
Autor(es)
Año de
publicación
Título del artículo de
investigación
Palabras clave
Base de
datos
Nombre de la
revista/
Universidad
Link o DOI
01
An, J., Jeong, S.,
Moon, H., Jho, E.,
Nam, K.
2012
Predicción de la
toxicidad de Cd y Pb a
Vibrio fischeri utilizando
modelos bióticos
basados en ligandos en
suelo
Plomo (Cd), Biotox,
Vibrio Fischeri
ScienceDi
rect
Revista de
Materiales
Peligrosos
https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.
2011.11.085
02
Fulladosa, E.,
Murat, J., Martínez,
M., Villaescusa, I.
2015
Patrones de
envenenamiento por
metales y arsénico en
bacterias Vibrio fischeri
Bacteria Vibrio
fischeri, plomo,
EC20
ScienceDi
rect
Quimiosfera
https://doi.org/10.1016/j.chemos
phere.2004.12.026
03
Garcia-Ordiales, E.,
Roqueñí, N., Rico,
J., Cienfuegos, P.,
Alvarez, R.,
Ordoñez, A.
2019
Evaluación de la
toxicidad hacia Vibrio
fischeri en sedimentos
de un estuario
impactado por la minería
en el norte de España
Vibrio fischeri,
sedimentos,
toxicidad
ScienceDi
rect
Ciencia del Medio
Ambiente Total
https://doi.org/10.1016/j.scitoten
v.2019.01.086
04
Gazulla, F., Gomez,
M., Monfort, E., y
Orduña, M.
2014
Interferencias en la
caracterización de
residuos cerámicos
mediante el ensayo de
inhibición de la
luminiscencia
Inhibición,
luminiscencia, CE50
Google
Académic
o
Sociedad
Española de
Cerámica y Vidrio
https://www.researchgate.net/pr
ofile/Maria-Pilar-Gomez-Tena/pu
blication/289400587_Interferenc
es_in_ceramic_waste_character
isation_by_the_luminescence_in
hibition_assay/links/568e5d9508
aeaa1481b012f9/Interferences-i
n-ceramic-waste-characterisatio
n-by-the-luminescence-inhibition
-assay.pdf
05
Teodorovic, I,
Planojevic, I.,
Knezevic, P.
2013
Sensitivity of bacterial
vs. acute Daphnia
magnatoxicity tests to
metals
Vibrio Fischeri,
plomo, toxicidad
Google
Académic
o
Open Life
Sciences
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ment/doi/10.2478/s11535-009-0
048-7/html
https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2011.11.085
https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2011.11.085
https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2004.12.026
https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2004.12.026
https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2019.01.086
https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2019.01.086
https://www.researchgate.net/profile/Maria-Pilar-Gomez-Tena/publication/289400587_Interferences_in_ceramic_waste_characterisation_by_the_luminescence_inhibition_assay/links/568e5d9508aeaa1481b012f9/Interferences-in-ceramic-waste-characterisation-by-the-luminescence-inhibition-assay.pdf
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https://www.researchgate.net/profile/Maria-Pilar-Gomez-Tena/publication/289400587_Interferences_in_ceramic_waste_characterisation_by_the_luminescence_inhibition_assay/links/568e5d9508aeaa1481b012f9/Interferences-in-ceramic-waste-characterisation-by-the-luminescence-inhibition-assay.pdf
https://www.degruyter.com/document/doi/10.2478/s11535-009-0048-7/html
https://www.degruyter.com/document/doi/10.2478/s11535-009-0048-7/html
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06
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Microtox,
Microtox, metal
pesado, toxicidad,
CI50
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Ciencia del Medio
Ambiente Total
https://doi.org/10.1016/S0048-9
697(03)00451-0
07
Cukurluoglu, S.
Muezzinoglu, A.
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waters due to heavy
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atmospheric deposition
using Vibrio fischeri
Ecotoxicidad, Vibrio
Fischeri, plomo
Google
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Plomo, CE50, HA,
toxicidad
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Patterns of Heavy
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Fischeri, plomo,
Google
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co
KSEE
https://pdfs.semanticscholar.org/
a6cc/05ae181ea09b881c638ea
284c0bd0901a48c.pdf
Resultados
Los resultados presentados, se realizaron en base a cada artículo científico analizado. Los
resultados están enumerados de manera ordenada, del 1 al 10, según los trabajos presentados,
como se observa en la tabla anterior:
1) En la muestra control de toxicidad del plomo (0.1 mM, pH: 5.81), se obtuvo, 6.78(±0.686)
μMpara EC50, es decir, una inhibición de la luminiscencia del 50% en un lapso de tiempo de
5 minutos, utilizando la bacteria Vibrio Fischeri, lo que quiere decir que el plomo tuvo una
alta toxicidad, debido a que presentó un valor bajo, lo que significa que mientras bajo sea el
https://doi.org/10.1016/S0048-9697(03)00451-0
https://doi.org/10.1016/S0048-9697(03)00451-0
https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/10934529.2012.707840
https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/10934529.2012.707840
https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/10934529.2012.707840
https://doi.org/10.5296/jbls.v6i2.8174
https://doi.org/10.5296/jbls.v6i2.8174
https://doi.org/10.1016/j.ecoenv.2005.04.005
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https://doi.org/10.1016/j.ecoenv.2005.04.005
https://pdfs.semanticscholar.org/a6cc/05ae181ea09b881c638ea284c0bd0901a48c.pdf
https://pdfs.semanticscholar.org/a6cc/05ae181ea09b881c638ea284c0bd0901a48c.pdf
https://pdfs.semanticscholar.org/a6cc/05ae181ea09b881c638ea284c0bd0901a48c.pdf
valor, más tóxico es el contaminante a analizar. Donde en el presente trabajo, se hicieron
algunas pruebas para reducir su toxicidad utilizando cationes como Ca, Mg, y K, en
concentraciones de 0.250, 2.50, 12.5, y 25.0 mM, una para cada una; donde la EC50 del
plomo varió, de 0.339 a 0.679 o 0.762 μM cuando la actividad de Ca2+ o Mg2+ aumentó de
0,007 a 6,63 mM, respectivamente, sin embargo, no se evidenció ningún cambio significativo
entre la toxicidad del Pb y la actividad de K+.
Tabla 2
Composición química de los medios de prueba utilizados para la prueba de toxicidad y
valores de EC50 de 5 min determinados experimentalmente para Vibrio fischeri
Nota. Efectos que causan los cationes sobre el valor del EC50 de plomo. Tomado de
Prediction of Cd and Pb toxicity to Vibrio fischeri using biotic ligand-based models in soil., J.
An et al. / Journal of Hazardous Materials 203–204 (2012) 69–76.
Figura 1
Efectos de las actividades de los cationes que compiten en EC50{Cd2+} (paneles a–c) y
EC50{Pb2+} lo que indica una disminución de la toxicidad de Cd o Pb en mayores
actividades de Ca2+ o Mg2+.
2) Se analizaron varios metales pesados usando el Método Microtox, preparándose 8 a 10
muestras para cada metal con un pH de 6 y 7, y para el caso del Plomo se usó una
concentración de 0.15–1.35 mg/L, donde se utilizó también el EC20, es decir, una
disminución del 20% de emisión de luz en un lapso de tiempo de 15 minutos. En este trabajo
se evaluó primero la relación dosis-respuesta; varias cantidades de concentraciones de los
metales pesados y la emisión de luz relativa de la bacteria en pH 6.0 y 7.0. Como podemos
ver en la Figura 1, a mayor concentración del plomo hace que se inhiba la emisión de la luz.
Notándose que baja drásticamente los valores ya al principio con pocas dosis. Además, se
observa que es más tóxico este metal en un pH 6.0 que en pH 7.0. Luego se evaluó el EC20
del plomo en un pH 6.0 y 7.0 como se muestra en la Tabla 1. Como resultado se observa que
el plomo a EC20 tiene una concentración de 0,04 mg/l con un error estándar de 0.02 en pH
6.0 y 0.06 mg/l en pH 7.0 concluyendo que el plomo tiene una toxicidad muy alta a
comparación de otros metales hacia la bacteria. También los autores nos mencionan que la
tóxicidad del Plomo puede ser relacionado a la tendencia de este metal con los grupos -SH.
Figura 2
Decrecimiento de la emisión de luz de la bacteria V. fischeri luego de 15 minutos de
exposición con diferentes dosis.
Nota. Dosis-respuesta de varios metales pesados incluido el Pb(II) en pH 6.0 y 7.0. Tomado
de Patterns of metals and arsenic poisoning in Vibrio fischeri bacteria (p.45), por Fulladosa,
E., Murat, J., Villaescusa, I. et al, 2004, Chemosphere.
Tabla 3
EC20 después de 15 minutos de exposición de V. fischeri a diferentes soluciones de metales en
un pH 6.0 y 7.0
Nota. El valor de EC20 de diferentes metales y su pH con su error estándar.Tomado de
Patterns of metals and arsenic poisoning in Vibrio fischeri bacteria (p.47), por Fulladosa, E.,
Murat, J., Villaescusa, I. et al, 2004, Chemosphere.
3) La inhibición de la luminiscencia se midió después de 30 min de incubación, como la
concentración de sedimento (mg/L) que causó una reducción del 50% de la bioluminiscencia
bacteriana (EC50), pero en este caso la inhibición se expresó como unidades de toxicidad por
g de suelo seco (TU50), en unidades g/L, donde se usó concentraciones de 45, 22.5, 11.25 y
5.625% (v/v) de elutriato diluido. Se tomaron 14 puntos de monitoreo, donde la toxicidad
promedio del plomo, respecto a la prueba de Microtox, fue de 499 TU g−1 que superan los
criterios de toxicidad de Environment Canada (2002) establecidos en TU g−1 > 100. En el
estuario, la toxicidad aumenta en el canal hasta el área cercana a los puertos (de 18 TU g−1 en
la estación N01 a 748 TU g−1 en la estación N10) para disminuir posteriormente a lo largo
del canal hacia el mar (31 TU g−1 en la estación N14). En las zonas portuarias (estación N09,
N11 y N12) la toxicidad alcanza los valores máximos, especialmente perceptibles en la
estación N12 (1470 TU g−1) que muestra la mayor toxicidad.El autor utiliza el valor de
medida (TU g-1) la cual se deriva del valor de EC50 con esta fórmula:
TU (g-1)= (1/EC50)*100
Por ende, la toxicidad promedio tendría como valor EC50= 0.223 mg/L
4) Se utilizó la EC50 para poder realizar el ensayo ecotoxicológico, donde la concentración de
plomo utilizada fue de 10 mg/L, en medio NaCL al 2% y un pH de 7.
La EC50 para el plomo fue de 5.5±0.6 mg/L, siendo el 2do elemento más tóxico en los
bioensayos realizados. Además también se investigó 1) La influencia del pH, donde a un pH
de 2 la Ec50 fue menor a 0.1, mientras que para 7 y 11, la EC50 fue 5.4±0.6 mg/L y “No
inhibe”, 2) La influencia de la materia orgánica, hasta una adición de 250 mgO2/L, actúa
como un potenciador de luminiscencia, probablemente por ser un nutriente para las bacterias,
pero para otro tipo de materia orgánica puede suceder lo contrario; alterando el resultado y
efecto inhibidor del Pb sobre la Vibrio Fischeri.Tabla 4
Soluciones ensayadas para el estudio del efecto del plomo, Cinc, Boro y Calcio sobre la
toxicidad de una disolución de plomo,
Nota. Para las mezclas 3.6 y 7 se han aumentado las concentraciones de boro y plomo de
forma que permitiesen el cálculo de la EC50..Tomado de Interferencias en la caracterización
de residuos cerámicos mediante el ensayo de inhibición (p.4), por M.F, Gazulla, M.P. Gomez,
E. Monfort, M.Orduña, et al, 2004, Boletin de la sociedad española.
.
Tabla 5
Valores de EC50 obtenidos para las soluciones monoelementales del plomo, cinc y boro
Nota. El cinc es el catión con una EC5O más baja lo que significa que es el más
tóxico.Tomado de Interferencias en la caracterización de residuos cerámicos mediante el
ensayo de inhibición (p.4), por M.F, Gazulla, M.P. Gomez, E. Monfort, M.Orduña, et al, 2004,
Boletin de la sociedad española.
Tabla 6
Valores de EC50 obtenidos para una solución de 10 MG L-1 de Pb en NaCl 2% en función
del pH
Nota. Se detallan ensayos realizados sobre el efecto del pH sobre una disolución de
plomo.Tomado de Interferencias en la caracterización de residuos cerámicos mediante el
ensayo de inhibición (p.4), por M.F, Gazulla, M.P. Gomez, E. Monfort, M.Orduña, et al, 2004,
Boletin de la sociedad española.
5) En este trabajo se utilizó el protocolo LUMIStox bioassay (DIN 38412-L34). Se prepararon
seis soluciones con metales pesados mixtas manteniendo la concentración de una de los
metales a 1mg/L y los demás a la mínima concentración calculada a partir de los flujos de
deposición de los metales. Las condiciones de las muestras fueron de pH entre 5,1-7,7
ajustado a 2% de NaCl. Se midió el EC50 durante 15 minutos y como resultado se obtuvo
0.41 mg/L con un error estándar de 0.02. El autor menciona que a mayor concentración no
hay mucha diferencia del porcentaje de inhibición. El pb es menos tóxico que el Cr y Cd, más
tóxico de Cu, Zn y Ni. El pH y Eh son parámetros importantes a considerar.
Tabla 7
Valores EC50 de las soluciones de metales pesados.
Nota.Se utilizaron métodos a y b para el cálculo de EC50.Tomado de Assessment of toxicity
in waters due to heavy metals derived from atmospheric deposition using Vibrio fischeri.
Sibel Cukurluoglu and Aysen Muezzinoglu, 2012, Journal of Environmental Science and
Health.
6) Se utilizó la prueba de toxicidad aguda Microtox, que se basó en la reducción de la
bioluminiscencia de la bacteria marina, V. fischeri, luego de la exposición directa de la
muestra a la suspensión bacteriana, donde cada prueba consistió en cinco concentraciones
diferentes. Donde se analizaron 13 soluciones de metales, donde de los 1000 ppm, se usaron
cinco concentraciones diferentes (uno de control y cuatro de diluciones con un factor de
dilución de 0.5), en un pH de 6.5-7.5. Se llevaron a cabo dos tipos de análisis, 1) La
estimación puntual, para determinar la concentración de tóxico que causaría un efecto adverso
observable en un porcentaje dado de los organismos (como como 50% de concentración
inhibitoria, CI50), 2) Se usaron datos de toxicidad crónica para determinar la concentración
sin efecto observable (NOEC) y la concentración mínima con efecto observable (LOEC)
mediante procedimientos de prueba de hipótesis.
Por lo que para el caso del plomo, la IC50, fue 669±95.7μg/l (0.669±0.95 mg/l), mientras que
su NOEC fue de 313–626 μg/l (0.313-0.626 mg/l), y su LOEC de 626–1250 μg/l (0,626-1.250
mg/l). Presentando un bajo efecto adverso en la inhibición de luz, siendo el doceavo
contaminante menos tóxico en este trabajo.
Tabla 8
Toxicidad de 13 metales contaminantes prioritarios en el ensayo de toxicidad crónica
Microtox y comparación con los criterios de calidad del agua ambiental (AWQC)
Nota. Basado en 3 experimentos 5 diluciones y 4 a 5 repeticiones por dilución.Tomado de
Toxicity of the 13 priority pollutant metals to Vibrio fisheri in the Microtox chronic toxicity
test (pag 41), Chi-Ying Hsieh, Meng-Hsiun Tsai , David K.Ryan , Oscar C.Pancorbo, 2004,
Elsevier.
7) En este trabajo se utilizó ISO 11348- 3:2007 usando Biofix Lumi. Para la preparación de la
muestra se utilizaron tabletas de bacterias activadas por una solución de la misma
manufacturera. Estabilizando la solución por 30 min a 4 °C. Diluyendo la suspensión original
(10^8 células por mililitro) con la solución para bacterias liofilizadas en una proporción de
1:50 (v:v). Se trabajó en tubos de ensayo, incubados por 15 °C por 30 min para la toma inicial
y luego en frasco con los contaminantes expuestos por 30min (Agua con 2% de NaCl). Se
midió el EC50 y LOEC durante 30 minutos. Como resultado se obtuvo un EC50: 35,97 mg/L
y un LOEC: 6,26 mgPb/L. El autor menciona que aparentemente el plomo no es muy tóxico
como el zinc. Sin embargo es más tóxico que Cd y Mn en este presente estudio.
Tabla 9
Toxicidad de Cd 2 +, Zn 2 +, Pb 2 + y Mn 2 + para D. magna, V. fischeri y P. putida
Nota. Se alcanzó una inhibición del crecimiento del 50% en concentraciones más altas ( Pb,
Mn, Zn). Tomado de Sensitivity of bacterial acute Daphnia magna toxicity tests to metals
(p.486), por Teodorovic, I., Planojevic, I., Knezevic, P., Radak, S., Irena Nemet. et al, 2009,
Versita.
Figura 3
Curvas de dosis-respuesta: prueba de determinación de rango de toxicidad de A-Cd2+,
B-Zn2+, C-Pb2+ y D-Mn2+ para V. fischeri.
Nota. Dosis-respuesta de determinación del rango de toxicidad. Tomado de Sensitivity of
bacterial acute Daphnia magna toxicity tests to metals (p.486), por Teodorovic, I., Planojevic,
I., Knezevic, P., Radak, S., Irena Nemet. et al, 2009, Versita
8) Se aplicaron los bioensayos de Vibrio Fischeri, usando la técnica de EC50, entre 5 a 15
minutos, siguiendo el protocolo de ensayo básico Microtox, para los tóxicos a estudiar. Se usó
25 mg/L de Pb, con un pH de 6 y se adiciono 0.1N-HCL.
Para el caso del Pb, la intensidad de la luz y su valor de EC50 a las 5 minutos fue de un
promedio de 26.41% y 6.6 mg/L, mientras que para 15 minutos el promedio de intensidad de
luz fue de 23.33% y su EC50 de 5.83 mg/L, siendo el metal menos tóxico de los analizados,
tanto como para 5 y 15 minutos, además que al aumentar el tiempo de exposición a 15
minutos, todos los metales aumentan su toxicidad, sin embargo, el Pb siguió siendo el metal
de menor toxicidad en este trabajo.
Tabla 10
Valores estimados de EC50 basados en la intensidad de la luz, después de 5 y 15 minutos de
tiempo de exposición de Vibrio fischeri a metales divalentes simples y pesticidas.
Nota.Los valores indican la concentración bioensayada para cada tóxico
correspondiente..Tomado de Toxicity of Some Pesticides, Heavy Metals and Their Mixtures
to Vibrio fischeri Bacteria and Daphnia magna.Alia A. Abdel-Hamid, Azza W. Ibrahim, 2015,
Macrothink Institute.
9) Se usó 10 mg/L de Pb, mientras que los ácidos húmicos (HA) fueron evaluados usando 1, 10
y 20 mg/L que se prepararon con un HA estándar de 100 m/L, con un pH de 10. Para analizar
las muestras, se usó el ensayo Microtox dentro de un tiempo de exposición corto de 15 min,
utilizando también la EC50 para los metales en presencia y ausencia de HA en tiempos de 0.5,
2 y 4 h.
El plomo (Pb), exhibió un efecto tóxico similar al cobre (Cu), donde su EC50 fue de 0.48
mg/L, con un rango de confianza de 0,37–0,63 mg/L, siendo el segundo metal más tóxico en
el trabajo. Mientras que al adicionarle AH, sin importar el tiempo de exposición, en los
metales Cu y Zn, se redujeron la toxicidad de estos metales, sin embargo en el caso del Pb, se
observó un fuerte aumento de la toxicidad del metal de hasta 1 mg/L, mientras que para
concentraciones más altas la toxicidad fue casi constante, alcanzando hasta el 90%.
Tabla 11
Efecto de HA sobre la toxicidad de Cu, Zn, y Pb en función del tiempo de contacto de HA
Nota. La toxicidad de Cu disminuyó con el aumento de la concentración HA y tiempo de
contacto .Tomado de Interactive toxic effects of heavy metals and humic acids on Vibrio
fischeri (p.161), V. Tsiridisa,b, M. Petala,b,P. Samarasc , S. Hadjispyroud , G.
Sakellaropoulosa,b, A. Kungolose, 2019, Elsevier.
Figura 4
Comparación de las curvas de respuesta a la dosis para soluciones de Pb y Pb/HA después
de 2 h de tiempo de contacto
Nota. Fuerte aumento de metal en concentraciones de Pb puro hasta 1 mg/L .Tomado de
Interactive toxic effects of heavy metals and humic acids on Vibrio fischeri (p.161), V.
Tsiridisa,b, M. Petala,b, P. Samarasc , S. Hadjispyroud , G. Sakellaropoulosa,b, A. Kungolose,
2019, Elsevier.
10) Se usó el protocolo Microtox. Las muestras biológicas se disolvieron a temperatura ambiente
y se inyectaron en un medio de cultivo esterilizado y se mantuvieron a 15-25 25°C durante 24
horas para activar las bacterias que emiten luz. Se utilizaron las concentraciones, a partir de la
solución estándar de 1000 mg/L de Pb; 1, 2,3,4 y 5 mg/L con un pH de 7. Se obtuvo como
resultado de EC50 de 3.76 mg/L.
Figura 5
Curva de inhibición de metales pesados
Tomado de Patterns of Heavy Metals in a continuous toxicity monitoring system using
bioluminescent Bacteria (p.70), Kil-soo Lee., Seung-Joo Lee., Chang-Keun Wang., Young-
Gyun Chou., Keum-Yong Hong 2020, KSEE.
Tabla 12
Inhibición expuesta a metales pesados para microtox CTM
Tomado de Patterns of Heavy Metals in a continuous toxicity monitoring system using
bioluminescent Bacteria (p.70), Kil-soo Lee., Seung-Joo Lee., Chang-Keun Wang., Young-
Gyun Chou., Keum-Yong Hong 2020, KSEE.
Tabla 13
Resultados de las variables comunes de las fuentes estudiados
Parámetro de
inhibición
Bioensayo Concentraciones Efecto de inhibición
De entre todas las
variables estudiadas
para poder
determinar el efecto
de inhibición de la
bioluminiscencia, la
principal y más
usada, es la EC50 y
EC20 con diferentes
períodos de tiempo
que ronda entre los 5
a 30 minutos
En la mayoría de los casos, la
bacteria V. Fischeri, se
consiguieron en forma liofilizada
y se activó con una solución de
reconstitución. Donde
posteriormente, se usó el
bioensayo Microtox como el más
utilizado y además se utilizaron
los protocolos ISO 11348-
3:2007 usando Biofix Lumi y
LUMIStox bioassay (DIN
38412- L34), además de un
medio salino, ya sea 2% NaCl,
NaOH o HCl.
En el caso del Ph, este variaba de
entre 5.8 hasta 7, por lo que
probablemente se podría afectar
la toxicidad de los resultados a
analizar.
La mayoría de las muestras
se da entre una
concentración mínima de 1
mg/L hasta 25 mg/L como
máximo diluidos
Además, el Pb era diluido
usando un factor de 0.5, por
lo que será 5 veces la
solución inicial, o en otros
casos hasta 9 veces, para
poder determinar una
mayor cantidad de
diferentes concentraciones,
normalmente en agua
desionizada.
El efecto de inhibición varió para cada
autor, esto debido a las distintas
concentraciones usadas, al igual que el
tiempo que se usó, pero en la mayoría
se dio entre 5 a 15 minutos. Además,
cabe mencionar que, en los casos
estudiados, la EC50, varía según la
presencia de cationes, materia
orgánica y el pH.
La EC50 fue de hasta 0.41 – 6.78
mg/L, esto debido a las
concentraciones de Pb que diferentes
autores decidieron usar, donde se
determinó en mayoría de casos, que el
Pb representa una alta toxicidad, y
este dato es aún más representativo
cuando la concentración de Pb usada
es menor, causando un mayor efecto
de inhibición de luz.
Discusión
El contaminante a analizar, Pb, posee un efecto muy tóxico para en el ser humano, ya que se
encuentra presente en el ambiente de manera continua por variadas actividades industriales,
entrando por distintas vías, independientemente de su concentración (Rodríguez, A., Cuéllar, L.,
Maldonado, G., y Suardiaz, M., 2016 ). Por lo que hoy en día, se realizan varios bioensayos para
analizar su toxicidad, de entre ellos, el uso de la bacteria Vibrio Fischeri, mostró resultados
positivos e interesantes, por ello:
Tras analizar el uso de la bacteria Vibrio Fischeri para la evaluación de la toxicidad del plomo,
entre los años 2012 - 2022, descritos en los 10 artículos de investigación analizados, se llegó a la
conclusión de que
en la mayoría de bioensayos realizados, utilizando la técnica Microtox, ya que opera con
bacterias liofilizadas que posteriormente son reconstituidas y brinda información para la rápida
identificación de áreas de interés (Lagomarsino, A., 2022), y el parámetro de la EC50, el
contaminante demostró un alto efecto de inhibición de bioluminiscencia sobre el organismo
hidrobiológico en la mayoría de casos analizados, entre 5 a 15 minutos, por lo que posee un alto
efecto tóxico en un intervalo de tiempo muy corto, ocasionado daños en los procesos metabólicos
asociados a la respiración bacteriana (Lagomarsino, A., 2022).
Demostrando un efecto de inhibición de luz (EC50), de 0.41 a 6.78 mg/L, en la mayoría de los
casos analizados, lo que significa que el contaminante analizado representa ser tóxico, debido a
que mientras menor sea el valor de la EC50, mayor es la toxicidad del plomo analizada, estando
solo por debajo del Zn y el Cu, ya que estos metales pesados estuvieron presentes y se
compararon con el Pb.
Además, las variables como el pH, concentración, tiempo, la materia orgánica y/o cationes
presentes, juegan un papel importante, debido a que afectan el resultado de estos bioensayos.
Comenzando con la concentración, en la mayoría de los casos analizados, se observa que
mientras menor concentración de Pb se use al momento de realizar el bioensayo, se obtendrá una
EC50 menor, es decir una mayor toxicidad, como el caso de Mansour, S., Abdel-Hamid, A.,
Ibrahim, A., Mahmoud, N., y Moselhy, W (2015); Gazulla, F., Gomez, M., Monfort, E., y
Orduña, M. (2014); Lee, K. Lee, S., Wang, C (2020); Teodorovic, I, Planojevic, I., Knezevic, P.
(2013); que usando una concentración de 25, 10, un promedio del 1 al 5, y 1 mg/L, obtuvieron
una EC50 de 6.60 (5min) - 5.83 (15min), 5.5, 3.76, y 0.41 mg/L, respectivamente.
Esto podría significar que se está presentando la ley de Arndt-Schulz, la cual establece que la
respuesta biológica a un agente químico, en este caso el Pb, aumenta con la dosis hasta que se
alcanza un punto máximo, después del cual la respuesta disminuye con dosis más altas. En otras
palabras, a menores concentraciones, los efectos tóxicos pueden ser más graves debido a que el
agente químico no se diluye tanto en los organismos a analizar, y puede interactuar de forma más
efectiva.
Otra razón sería que las otras variables del bioensayo alteren algún cambio sobre este efecto
tóxico que genera el Pb sobre la bacteria Vibrios Fischeri, dando resultados distintos a los
esperados.
En el pH, eset varió entre 5.8 a 7, lo cual a simple vista no afecte mucho, si embargo, al momento
de usar un pH inferior 7, se presenta un aumento en la toxicidad de sus muestras, en cambio si
este es mayor a 7, no presenta un resultado tóxico, como en el caso de, Gazulla, F., Gomez, M.,
Monfort, E., y Orduña, M. (2014), el cual a un pH de 2, 3, 5, 7, y 11, obtuvo un EC50 de, >0.1,
>0.2, 5.2±0.5, 5.4±0.6 mg/L, y “No inhibe”. Es por ello que usa un medio salino, con el fin de
neutralizar el pH.
En el caso del tiempo, este fue entre 5 a 15 minutos, sin embargo el organismo hidrobiológico, al
estar a un mayor tiempo de exposición aumenta el efecto de inhibición de luz de la bacteria, esto
se comprueba por Mansour, S., Abdel-Hamid, A., Ibrahim, A., Mahmoud, N., y Moselhy, W.
(2015), que realizaron una comparativa de la toxicidad del Pb, tanto para 5 y 15 minutos, donde
los EC50 fueron, 6.60 y 5.83 mg/L.
Para el caso de los cationes y materia orgánica presente, en el caso de los cationes, estos actuarán
de forma que hagan que compitan con los iones metálicos, mitigando su toxicidad, donde An, J.,
Jeong, S., Moon, H., Jho, E., Nam, K., 2012, su EC50 de la muestra control de Pb fue de 6.78
(±0.686) μM, y varió, de 0.339 a 0.679 o 0.762 μM cuando la actividad de Ca2+ o Mg2+
aumentó de 0,007 a 6,63 mM, respectivamente. Por lo que estos cationes, lograron reducir latoxicidad del contaminante, reduciendo posiblemente su biocaumulación, con excepción del K+,
que no tuvo un efecto relevante.
Para el caso de la materia orgánica, estos cumplen la función de poder reducir la toxicidad de los
contaminantes, ya estos suelen actuar como un potenciador para la bioluminiscencia o un
nutriente para las bacterias, donde Gazulla, F., Gomez, M., Monfort, E., y Orduña, M. (2014),
afirma dicho enunciada ya que adicionando hasta 250 mgO2/L de materia orgánica, se logra un
aumento en la EC50, pasando de 5.5±0.6 a 18±2 mg/L, reduciendo la toxicidad. Sin embargo,
con otro tipo de materia organica puede suceder lo contrario, como en el caso de Tsiridis, V.,
Petala, M., Samaras, P., Hadjispyrou, S., Sakellaropoulos, G., Kungolos, A. (2016), donde la
adición, sin importar el tiempo de exposición, en los metales Cu y Zn, se redujo su toxicidad,
pero para el Pb, se observó un fuerte aumento de la toxicidad del metal, usando desde 1 mg/L,
mientras que para concentraciones más altas la toxicidad fue casi constante, alcanzando hasta el
90%, por lo que adición de este tipo de materia orgánica sólo logró aumentar la toxicidad del
contaminante, pasando de EC50, 0.50 (0.38–0.65) hasta 0.14 (0.09–0.25), 0.49 (0.38–0.63) hasta
0.22 (0.06–0.26), y 0.44 (0.36–0.52) hasta 0.09 (0.04–0.23) mg/L.
Por último, la presente investigación determinó que el contaminante plomo (Pb), en la mayoría
de casos, presentó una alta toxicidad para el organismo hidrobiológico Vibrio Fischeri, por ende,
su uso para analizar este tipo de contaminante será muy útil y relevante al momento de realizar
este tipo de bioensayos, presentando resultados satisfactorios, pero siempre y cuando teniendo en
cuenta las variables descritas.
Por lo que será necesario realizar más de este tipo de investigaciones y experimentos de
bioensayo para poder tener mayor cantidad de datos e información sobre este tema, y
compararlos con los investigados en el presente trabajo. Además dado la efectividad de la
bacteria estudiada, sería interesante poder analizarla en base a otros contaminantes que también
generan gran cantidad de contaminación en el ambiente y enfermedades en varias personas,
como el Cadmio (Cd), Mercurio (Hg), el Zinc (Zn) o el Cobre (Cu).
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