Alteraciones morfométricas nucleares y citoplasmáticas en cambios benignos y malignos

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UNIVERSIDAD DE CARABOBO 
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD 
ESCUELA DE CIENCIAS BIOMEDICAS Y TECNOLOGICAS 
VALENCIA 
TRABAJO ESPECIAL DE GRADO 
ACTA DE APROBACION 
 
 
 
 
 
 
 
 
ALTERACIONES MORFOMÉTRICAS NUCLEARES Y 
CITOPLASMÁTICAS EN CAMBIOS BENIGNOS Y MALIGNOS DEL 
CUELLO UTERINO EVALUADAS MEDIANTE PROCESAMIENTO 
DIGITAL DE IMÁGENES 
 
 
 
 
 
 
AUTORES: 
PEREIRA GLENDY 
PEREIRA MERY 
PRIETO ANAIS 
PRINCIPAL NELLYBETH 
 TUTOR CLINICO: 
CIT. DOUGLAS DELGADO 
TUTOR METODOLOGICO: 
DR. ANTONIO EBLEN 
 
Valencia 26 de Octubre del 2011. 
 
UNIVERSIDAD DE CARABOBO 
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD 
ESCUELA DE CIENCIAS BIOMEDICAS Y TECNOLOGICAS 
VALENCIA 
TRABAJO ESPECIAL DE GRADO 
ACTA DE APROBACION 
 
 
 
 
 
 
 
ALTERACIONES MORFOMÉTRICAS NUCLEARES Y 
CITOPLASMÁTICAS EN CAMBIOS BENIGNOS Y MALIGNOS DEL 
CUELLO UTERINO EVALUADAS MEDIANTE PROCESAMIENTO 
DIGITAL DE IMÁGENES 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FECHA DE APROBACION: _____________________ 
 
JURADOS EVALUADORES: 
NOMBRE: ___________________ C.I:________________ FIRMA: ____________ 
NOMBRE: ___________________ C.I:________________ FIRMA: ____________ 
NOMBRE: ___________________ C.I:________________ FIRMA: ____________ 
 
UNIVERSIDAD DE CARABOBO 
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD 
ESCUELA DE CIENCIAS BIOMÉDICAS Y TECNOLÓGICAS 
DIRECCION DE ESCUELA 
COMITÉ DE INVESTIGACIÓN Y PRODUCCIÓN INTELECTUAL 
 
 
 
 
CONSTANCIA DE APROBACIÓN 
 
Quienes suscribimos, Prof. Lisbeth Loaiza, Directora de Escuela; y Prof. Maira 
Carrizales, Coordinadora del Comité de Investigación y Producción Intelectual de 
la Escuela, hacemos constar que una vez obtenidas las evaluaciones del tutor, 
jurado evaluador del trabajo en presentación escrita y jurado de la presentación 
oral del trabajo final de grado titulado: “ALTERACIONES 
MORFOMÉTRICAS NUCLEARES Y CITOPLASMÁTICAS EN 
CAMBIOS BENIGNOS Y MALIGNOS DEL CUELLO UTERINO 
EVALUADAS MEDIANTE PROCESAMIENTO DIGITAL DE 
IMÁGENES” cuyos autores son los bachilleres: Pereira Glendy, Pereira 
Merys, Prieto Anais y Principal Nellybeth, presentado como requisito para 
obtener el titulo de Técnico Superior Universitario en Citotecnología el mismo se 
considera APROBADO. 
 
En Valencia, a los veintiséis días del mes de octubre del año dos mil once. 
 
 
 
 
 
 
Prof. Lisbeth Loaiza Prof. Maira Carrizales 
Directora Coordinadora 
 
 
 
 
 
 
 
 
Alteraciones morfométricas nucleares y citoplasmáticas en 
cambios benignos o malignos del cuello uterino evaluadas 
mediante procesamiento digital de imágenes 
 
Glendy Pereira, Merys Pereira, Anais Prieto, Nellybeth Principal 
 
Carrera de Técnico Superior Universitario en Citotecnología 
Escuela de Ciencias Biomédicas y Tecnológicas. 
Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Carabobo. 
Bárbula, Valencia, Venezuela. 
 
RESUMEN 
 
La valoración de frotis citológicos posee la ventaja de brindar varios esquemas de 
trabajo para el análisis de imágenes a través de la morfometría, lo cual es considerado 
como un excelente avance del estado actual en el citodiagnóstico ginecológico. El 
objetivo de la investigación es establecer criterios morfológicos digitales de valoración 
para el estudio de las Lesiones escamosas intraepiteliales y procesos benignos en la 
citología, basado en las alteraciones de la relación núcleo citoplasma mediante el 
procesamiento digital de imágenes. Se procesaron 90 imágenes digitales tomadas de 37 
frotis cervicales de igual número de pacientes elegidas al azar de instituciones públicas 
de salud. Se determinaron los diámetros y densidades celulares y nucleares mediante 
citomorfometría digital (ImageToolsv3.0, UTHSCSA, USA) en cada citología 
agrupándose según diagnóstico cruzado por dos expertos. Los diámetros nucleares, 
relativos a los valores de núcleos de citologías normales aumentaron diferencialmente: 
Lesiones concomitantes (Conc) +28,8%, lesiones intraepiteliares de bajo grado de 
malignidad (LIE-BG) +90,5% o de alto grado (LIE-AG) +77,2%, carcinoma (CA) 
+100% y carcinoma postradiación (POST-R) +140%. Los diámetros citoplasmáticos 
fueron menores a los normales: CONC -23,9%, VPH -34,2%, LIE-BG -13,6%, LIE-AG -
44,0 %, CA -50,2% y POST-R -35,8%. Los valores relativos de densidad nuclear 
fueron: CONC -8,6%, VPH 62,7%, LIE-BG 68,0%, LIE-AG 53,7%, CA 71,2%, POST-R 
27,6%. Mientras que las densidades citoplasmáticas: CONC 23,9%, VPH 34,2%, LIE-
BG 13,6%, LIE-AG 55,9%, CA 55,2%, POST-R 35,8%. Estos valores son 
estadísticamente significativos comparados con los valores de citologías normales 
(Mann-Whitney U; P<0,05). El presente estudio aporta valores referenciales cuantitativos 
de utilidad diagnóstica, de las variaciones de diámetros y densidades tanto nucleares 
como citoplasmáticos inducidos por las diferentes patologías diagnosticadas mediante 
citología de cuello uterino. 
 
Palabras clave: citología, densimetría, morfometría, procesamiento digital de imágenes. 
 
Morphometric Nuclear and cytoplasmatic alterations in benign or 
malign lesions of cervix evaluated by digital image processing 
 
 
ABSTRACT 
Valuation of cytological smear shows the advantage to bring different workflow to image 
analysis through digital morphometry, which is an excellent progress in the state of the 
art of gynecological cytodiagnostics. The aim of the present study is to establish the 
digital morphometry valuation criteria to study the cervical intraepithelial scaly lesions 
and benign processes in cytological smears, based on alterations of nucleus/cytoplasm 
ratios of diameter and density measured by digital image processing. A total of 90 digital 
images taken from 37 cervical smears from the same number of patients randomly picked 
from local public health institutions were analyzed. Nuclear diameter, related to normal 
cytology, differentially increased: concomitant lesions (Conc) +28,8%, low grade malign 
intraepithelial lesions (LIE-BG) +90,5% or high grade (LIE-AG) +77,2%, carcinoma 
(CA) +100% and post-irradiation carcinoma (POST-R) +140%. Cytoplasmatic diameters 
were lower than normals: CONC -23,9%, VPH -34,2%, LIE-BG -13,6%, LIE-AG -44,0 
%, CA -50,2% y POST-R -35,8%. Relative values for nuclear density were: CONC -
8,6%, VPH +62,7%, LIE-BG +68,0%, LIE-AG +53,7%, CA +71,2%, POST-R +27,6%, 
while cytoplasmatic density was: CONC +23,9%, VPH +34,2%, LIE-BG +13,6%, LIE-
AG +55,9%, CA +55,2%, POST-R +35,8%. These values were statistically significant 
when compared to values from normal cytologies (Mann-Whitney U; P<0,05). The 
present study gives quantitative differential values with diagnostic relevance about 
variation of diameter and density of both nucleus and cytoplasm induced by different 
cervical pathologies diagnosed by cytology. 
 
Key Words: cervical cytology, digital morphometry, digital densitometry, digital 
image processing. 
 
 
INTRODUCCIÓN 
En el mundo la primera causa de muerte por cáncer en la mujer es por neoplasia 
maligna del cuello uterino; el 85 % de estas muertes se producen en las naciones 
subdesarrolladas y el otro 15 en naciones desarrolladas (1). Estas cifras de 
importancia médica, socioeconómica y humana contrastan con el hecho de ser el 
más curable, fácil de diagnosticar, el más prevenible de todos los cánceres y el 
principal problema de salud pública en las mujeres en actividad sexual de los 
países subdesarrollados debido a la ausencia y/o deficiencia de programas de 
detección temprana con el Papanicolau, ácido acético o lugol. En las naciones 
desarrolladas que poseen programas preventivos, la incidencia y mortalidad ha 
declinado enforma significativa (2). El programa asimismo es la pauta para 
emprender investigaciones científicas, no solo en cáncer de útero, sino también 
para cualquier tipo de atípia celular y así dar apoyo al especialista para facilitar el 
citodiagnóstico ginecológico. 
Muchos investigadores han utilizado herramientas de procesamiento digital de 
imágenes para estudiar la citología. En Colombia en el 2006, Muñoz (3) clasificó 
75 células del epitelio vaginal, empleando operaciones de preprocesamiento, 
segmentación y representación de imágenes digitales, con la aplicación de un 
software que permite analizar parámetros de clasificación en las células 
superficiales, intermedias, basales, parabasales y displásicas, estas ultimas 
presentes en el cáncer de cuello uterino. En España en el 2008, Alayon y Sánchez 
realizaron la segmentación automática de núcleos solapados en imágenes de 
citología (4), en España en el 2010, Romani y Sobrerilla estudiaron el color del 
citoplasma en imágenes de citología cérvico vaginal (5). 
Es por esto indispensable mencionar que la citología ginecológica, desde su 
introducción por Papanicolau y Traut en la década de los cuarenta, se ha 
convertido en una técnica de ámbito mundial, con una utilidad preventiva de 
primer orden, salvando miles de vidas. Para informar sus hallazgo la 
nomenclatura Bethesda se emplea unificando criterios y recogiendo los mas 
reciente avances en el diagnostico citológico y en conocimiento de la 
carcinogénesis cervical (6). Así mismo la constitución histológica de la mucosa 
vaginal no esta cornificada y se extiende desde el tercio interno de los labios 
menores hasta el exocervix presentando un epitelio plano estratificado 
conformado por capas de células basales, parabasales, intermedia y superficiales 
sufriendo una transición paulatina en el cuello uterino transformándose en un 
epitelio cilíndrico simple de células endocervicales y endometriales (7). 
Es necesario resaltar que el alcance de esta herramienta es de ser un complemento 
en la identificación y valoración de células del epitelio vaginal, no sustituye al 
especialista, ya que en cuestiones de diagnostico medico, siempre será 
fundamental el concepto humano. 
Sin embargo, el aumento o la pérdida de la relación núcleo citoplasma es crucial 
en el citodiagnóstico de cáncer de cuello uterino. Esto lleva a la distribución 
irregular de la cromatina entre las células de cáncer hijas, que a su vez se refleja 
morfológicamente en la variación en el tamaño del núcleo, la forma, y el 
contenido de cromatina observado en células cancerígenas en frotis cervicales y 
cortes histológicos. El concepto actual de carcinoma de células escamosas del 
cervix es que el tumor invasivo es precedido por el desarrollo de cambios 
precancerosos en el epitelio plano de la zona de transformación. Estas lesiones 
cancerosas son conocidas como "Lesión Intraepitelial Escamosa (LIE)" (8). A 
continuación se presenta un cuadro comparativo de diferencias morfológicas entre 
células epiteliales normales y cancerigenas vigentes internacionalmente (8) 
 Células benignas Células cancerígenas 
Tamaño y forma 
celular 
Límites normales reflejando 
la división celular normal y 
la maduración del epitelio. 
Variación del tamaño y forma 
reflejando división celular y 
maduración anormales 
Tamaño nuclear Límites normales reflejando 
división celular y 
maduración normales 
Variación significativa del 
tamaño nuclear (anisocitosis) 
reflejando división celular y 
maduración anormales 
Forma nuclear Generalmente redondas, 
ovales o en alubia 
Forma anormal 
Estructura de la 
cromatina en el 
núcleo en interfase 
Cromatina finamente 
granular uniformemente 
distribuida en el núcleo 
Cromatina granular gruesa 
irregularmente distribuida por 
todo el núcleo 
Contenido de 
cromatina en el 
núcleo en interfase 
Cromatina granular 
finamente regularmente 
distribuida en el núcleo 
Cromatina aumentada, pero la 
cantidad y su distribución varían 
entre núcleos, debido a la 
división celular anormal. 
Hipercromasia Raramente visto, si está 
presente refleja cambios 
regenerativos 
Común reflejando un aumento 
de cromatina o un recambio 
celular rápido o ambos 
Multinucleación No frecuente. Si está 
presente los núcleos son de 
tamaño uniforme 
No es común. Los núcleos 
varían en tamaño y forma 
Nucleolos Pequeños, uniformes, poco 
numerosos 
Grande, irregular, de tamaño y 
forma variables y en números 
variables 
Cohesividad Uniones celulares bien 
formadas 
Pérdida de la cohesividad 
Mitosis Ocasionalmente visto en la 
capa basal del epitelio 
Las mitosis anormales se 
encuentran frecuentemente por 
todo el epitelio 
Tabla 1. 
Sistematización diferencial de las características nucleares y citoplasmáticas en 
células benignas y malignas presentes en la citología de cuello uterino. 
 
 
La totalidad de estas características citomorfológicas son detectadas y evaluadas 
por el patólogo y/o citotecnólogo basándose en su visualización por microscopia 
directa y en su experiencia, sin embargo, como se desprende de la tabla 1, el 
diagnóstico es fundamentalmente cualitativo. Son escasos los estudios 
cuantitativos que permitan profundizar en el análisis matemático de estos 
parámetros y su relación con el diagnóstico y pronóstico de las lesiones de cuello 
uterino, con este fin, en el presente estudio, se aplicó el procesamiento digital y 
con morfometría digital de imágenes citológicas, lo cual representa un excelente 
área de avance en el diagnóstico en citología ginecológica. Este trabajo de 
investigación emplea un conjunto de herramientas digitales de precisión con el 
objetivo de enmarcar y establecer criterios de valoración para el estudio de 
alteraciones morfométricas nucleares y citoplasmáticas en cambios benignos y 
malignos del cuello uterino. Dada la progresividad de las lesiones cervicales, sus 
diagnósticos graduados pueden ser considerados una escala semi-cuantitativa con 
lo benigno en un extremo y lo maligno en el otro. 
 
MATERIALES Y METODOS: 
 
Recolección de los frotis Cérvico-vaginales 
Los frotis fueron suministrados por el Servicio de Anatomía Patológica del 
Hospital Oncológico “Dr. Miguel Pérez Carreño” de la ciudad de Valencia. Se 
tomaron casos de los años 2010 y 2011 de citologías cérvico-vaginales teñidas 
con la técnica de Papmart, con los siguientes diagnósticos: Dentro de los limites 
normales (DLN), Alteraciones concomitantes (Conc) que incluyó lesiones 
inflamatorias, procesos benignos asociados a vaginosis bacteriana, trichomonas 
vaginalis, y candidas sp, lesiones por el virus de papiloma humano (VPH), Lesión 
intraepitelial escamosa de bajo grado (LIE-BG), de alto grado (LIE-AG), 
carcinoma in situ y epidermoide (CA) y carcinoma posterior a irradiación (PostR). 
Todas estas láminas fueron montadas nuevamente y cubiertas con cubreobjeto 
para evitar refringencia en el momento de capturar las imágenes. 
 
Adquisición digital de imágenes 
Se empleó un microscopio marca Zeiss® Axiostar plus conectado a una cámara 
digital (Canon® Power Shot G9) de 12 megapíxels, controlada por la aplicación 
Axio Visión Rel v4.7.1. Las imágenes digitalizadas con un campo enfocado en 
objetivo de 40X, fueron almacenadas en color RGB en formato JPEG en una 
tarjeta de memoria de 8GB. Se analizaron un total de 90 imágenes de células del 
epitelio cérvico-vaginal a partir de 37 pacientes con frotis citológicos. 
 
Procesamiento de imágenes 
Se empleó el programa ImageTool®V3.0 desarrollado por el Centro de Salud de 
la Universidad de Texas en San Antonio, EEUU., (UTHSCSA). Las imágenes se 
convirtieron a tonos de grises de 8 Bits para una escala de 256 tonos de grises 
proporcionales desde el blanco (0) hasta el negro (256). Mediante cursores 
digitales asignados manualmente se midieron los diámetros mayores de núcleo y 
citoplasma por separado en 15 células seleccionadas aleatoriamente. Se 
seleccionaronlas células completamente definidas viables y enteras para las 
mediciones. 
Las distancias se calibraron mediante mediciones de los diámetros eritrocitarios 
presentes en el mismo frotis. La densidad tanto nuclear como citoplasmática se 
calibró para cada toma con la sustracción de la intensidad de la luz de fondo del 
frotis. 
 
Estadística 
Los resultados citomorfométricos se tabularon y agruparon para cada diagnóstico 
citológico. Los datos fueron procesados estadísticamente mediante el programa 
PAST V1.2, se calcularon la mediana y los percentiles 25 y 75 para cada variable 
cuantitativa. Las comparaciones entre los valores de cada grupo se evaluaron con 
la prueba no paramétrica de Mann-Whitney aceptándose como significativas 
diferencias P<0,05. Se realizó el análisis de correlación y regresión lineal de 
Pearson entre las variables citomorfométricas y el diagnóstico citológico de 
gravedad progresiva siendo éste último considerado en el presente estudio como 
variable semicuantitativa con valor del 1 al 7 en forma gradual y proporcional al 
grado de gravedad, correspondiendo a los diagnósticos DLN, CONC, VPH, LIE-
BG, LIE-AG, CA y POSTR respectivamente. 
 
 
RESULTADOS 
 
La técnica de tinción de frotis citológico utilizada de Papmart evidenció la 
proporcionalidad en el aumento de contraste y definición en los núcleos y 
citoplasmas de las células sometidas a evaluación para el análisis y diagnostico 
digital. La figura 01 LIE-AG presenta la interfase de morfometría usada en este 
estudio (ImageTool) en la opción de medición lineal de núcleo celular. El panel 
izquierdo corresponde a la base de datos de las mediciones realizadas. 
 
 
Fig.1. Interfase del programa ImageTools usado para el procesamiento digital de 
las imágenes. La fotografía en proceso corresponde a una citología con 
diagnóstico LIE-AG, teñida con Pap-Mart tomada a 40X. La columna de 
mediciones corresponde a los diámetros citoplasmáticos (μm). 
 
Diámetros Nucleares 
 
Los valores obtenidos por morfometría digital de los diámetros nucleares en cada 
uno de los grupos de patología evaluados se presentan en la Tabla 2. 
 
La determinación digital de los diámetros de los núcleos demostró un aumento del 
+28,8% en los núcleos de citologías con diagnóstico de CONC al comparar con 
los DLN. No se detectaron diferencias significativas entre las citologías DLN y 
las de VPH. 
Las citologías con diagnóstico de LIE-BG mostraron un +90,5% de incremento en 
el diámetro nuclear al compararlo con las citologías DLN. En el caso de las 
citologías LIE-AG este aumento fue del +77,2% y aquellas con diagnóstico de CA 
fue de +100% de aumento y el máximo incremento del diámetro nuclear fue de 
+140% para las citologías POST-R. %, todos estos valores expresados 
anteriormente, fueron arrojados en comparación con citologías de DLN, en el caso 
de LIE-BG Y LIE-AG el incremento del núcleo fue +13,3 % en los LIE-BG con 
respecto a LIE-AG. El Análisis de regresión entre el diámetro nuclear expresado 
en μm y el diagnóstico de gravedad progresiva en citologías de cuello uterino de 
las 37 pacientes no detectó asociación significativa (r2=0,87; F=3,27; P=0,25). 
Tabla 2. Valores de diámetro nuclear expresados en μm y medidos en 
citologías de cuello uterino en diferentes patologías, comparadas con 
valores citológicos normales. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
(*) 
Comparación DLN con cambios celulares benignos y malignos según test no paramétrico de 
MANN-WHITNEY. (**) Comparación LIE-BG con LIE-AG. (***) Comparación con CA. 
Δ% Diferencia porcentual con DLN. Abreviaturas: DLN: Dentro de los limites normales; 
CONC: Concomitante; VPH: Virus de Papiloma Humano; LIE-BG: Lesión Intraepitelial 
Escamosa de Bajo Grado; LIE-AG: Lesión Intraepitelial Escamosa de Alto Grado; CA: 
Carcinoma; POST-R: Post-radiación, NS: no significativo. 
Diagnóstico Mediana 
μm 
P25% 
μm 
P75% 
Μm 
Δ % P 
DLN 1,13 1,01 1,41 - 
CONC 1,45 1,23 1,70 +28,8 * 
VPH 1,45 0,88 1,95 +28,8 NS 
LIE-BG 2,15 1,69 3,01 +90,5 * 
LIE-AG 2,0 1,47 2,88 +77,2 */** 
CA 2,26 1,86 2,83 +100 * 
POST-R 2,71 2,29 3,0 +140 */*** 
Diámetros Citoplasmáticos 
Los valores obtenidos por morfometría digital de los diámetros citoplasmáticos en 
cada uno de los grupos de patología evaluados se presentan en la Tabla 3. 
En cuanto a la morfometría digital de los diámetros de los citoplasmas, se 
evidenció una disminución del -23,9% en los citoplasmas de frotis citológicos con 
diagnóstico de CONC; seguidamente en VPH se observó una disminución de -
34,2%, en LIE-BG -13,58, LIE-AG -44%, CA -50,2 y POST-R -35,8, todos estos 
valores fueron resultados de comparación de estos diversos diagnósticos con 
cuadro citológicos DLN, en lo concerniente a POST-R y CA disminuyó 14,4% 
POST-R en comparación con CA. 
 
Tabla 3 
Valores de diámetro citoplasmático en citologías de cuello uterino 
en diferentes patologías, comparadas con valores citológicos 
normales. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
(*) Comparación DLN con cambios celulares benignos y malignos según test no paramétrico 
de MANN-WHITNEY. (**) Comparación LIE-BG con LIE-AG. (***) Comparación con 
CA. Abreviaturas: DLN: Dentro de los limites normales; CONC: Concomitante; VPH: Virus 
de Papiloma Humano; LIE-BG: Lesión Intraepitelial Escamosa de Bajo Grado; LIE-AG: 
Lesión Intraepitelial Escamosa de Alto Grado; CA: Carcinoma; POST-R: Post-radiación. 
 
 
 
 
Diagnóstico Mediana 
μm 
P25% 
μm 
P75% 
Μm 
Δ % P 
DLN 12,09 11,04 14,48 
CONC 9,20 7,67 10,52 -23,9 * 
VPH 7,95 6,44 11,07 -34,2 * 
LIE-BG 10,45 7,14 12,33 -13,6 * 
LIE-AG 6,77 5,33 8,77 -44,0 */** 
CA 6,02 4,58 7,51 -50,2 * 
POST-R 7,75 6,12 9,80 -35,8 */*** 
 
Fig.2 
Análisis de regresión entre el diámetro citoplasmático expresado en 
μm y el diagnóstico de gravedad progresiva en citologías de cuello uterino 
de 37 pacientes. 
 
 
Curva de ajuste lineal estadísticamente significativa, r2:0,82; F: 22,62; 
p:0,005. Ecuación de regresión: 
Diagnóstico = (Diámetro citoplasmático [μm] x 0,112) – 0,288 
 
Relación de tamaño Núcleo/Citoplasma 
Al realizar el análisis de regresión entre los tamaños de los citoplasmas y de los 
núcleos no se observó relaciones estadísticamente significativas entre ambos 
parámetros en los valores de las citologías de los grupos DLN y CONC, sin 
embargo si se encontró en el grupo VPH la cual es: Tamaño Citoplasma (μm) = 
49,13+ (Tamaño núcleo [μm] x 1,51); r2=0,15; F=15,9; P=0,0001. 
 
Densidades nucleares 
 
Los valores obtenidos por densimetría digital de las densidades nucleares en cada 
uno de los grupos de patología evaluados se presentan en la Tabla 4. 
 
 
 
Tabla 4. 
Valores de densitometría digital nuclear en citologías de cuello 
uterino en diferentes patologías, comparadas con valores 
citológicos normales. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
(*) Comparación DLN con cambios celulares benignos y malignos según test no 
paramétrico de MANN-WHITNEY. (**) Comparación LIE-BG con LIE-AG. 
Abreviaturas: DLN: Dentro de los limites normales; CONC: Concomitante; VPH: 
Virus de Papiloma Humano; LIE-BG: Lesión Intraepitelial Escamosa de Bajo 
Grado; LIE-AG: Lesión Intraepitelial Escamosa de Alto Grado; CA: Carcinoma; 
POST-R: Post-radiación. 
 
En lo que compete a densimetría digital de los núcleos se observó una 
disminución de -8,6 % en la densidad de los núcleos de extendidos citológicos con 
diagnostico de CONC al comparar con citologías DLN, posteriormente en los 
diagnósticos de VPH aumento el 62,7%, en LIE-BG 68%, LIE-AG 53,7, CA 
71,2%, POST-R 27,6% todos estos valores diagnósticos en comparación con 
citologías DLN. Aunque disminuyó 43,6% en los extendidos citológicos de 
POST-R con respecto a CA. 
Fue evidente la distribución granular e irregular de la cromatina, la presencia de 
reforzamiento de la membrana nuclear y coilocitosis (en el caso de los extendidos 
de V.P.H.) 
 
Diagnostico Mediana 
UA 
P25% 
UA 
P75% 
UA 
Δ % P 
DLN 94,0 89,0 102,0 
CONC86,0 64,5 97,25 -8,6 * 
VPH 153,0 132,0 161,25 62,7 * 
LIE-BG 158,0 143,0 176,0 68,0 * 
LIE-AG 144,5 125,3 174,75 53,7 * 
CA 161,0 143,8 186 71,2 */** 
POST-R 120,0 91,25 140,75 27,6 */** 
 
Fig.3 
Análisis de regresión entre la densidad nuclear expresada en unidades 
de densidad arbitrarias (AU) y el diagnóstico de gravedad progresiva en 
citologías de cuello uterino de 37 pacientes. 
 
 
 
 
Diagnóstico = (Densidad Nuclear (UA) x 0,422)-3,017 (r2:0,92; F:57,49; p=0,0006) 
 
 
Densidades citoplasmáticas 
Los valores obtenidos por densimetría digital citoplasmática en cada uno de los 
grupos de patología evaluados son presentados en la Tabla 5. 
 
 
 
 
 
Tabla 5. 
Valores de densitometría digital citoplasmática en citologías de 
cuello uterino en diferentes patologías, comparadas con valores 
citológicos normales. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
(*) Comparación DLN con cambios celulares benignos y malignos según test no 
paramétrico de MANN-WHITNEY. (**) Comparación LIE-BG con LIE-AG. 
Abreviaturas: DLN: Dentro de los limites normales; CONC: Concomitante; VPH: 
Virus de Papiloma Humano; LIE-BG: Lesión Intraepitelial Escamosa de Bajo 
Grado; LIE-AG: Lesión Intraepitelial Escamosa de Alto Grado; CA: Carcinoma; 
POST-R: Post-radiación. 
 
Fig.4 
Análisis de regresión entre la densidad citoplasmática expresada 
en unidades de densidad arbitrarias (AU) y el diagnóstico de 
gravedad progresiva en citologías de cuello uterino de 37 pacientes. 
 
 
Ecuación de regresión: Diagnóstico = (Densidad citoplasmática x -0,097) + 
10,53 (r2:-0,56; F: 6,276; p=0,05) 
 
Diagnóstico Mediana 
UA 
P25% 
UA 
P75% 
UA 
Δ % P 
DLN 2,5 -13,0 29,0 * 
CONC 5,0 -13,0 25,0 23,9 * 
VPH 63,5 40,0 103,5 34,2 * 
LIE-BG 112,0 63,0 129,0 13,6 * 
LIE-AG 96,0 72,25 120,0 55,9 * 
CA 91,0 62,5 119,25 55,2 */** 
POST-R 67,5 50,25 90,75 35,8 */** 
Los frotis mostraron un aumento en la densidad citoplasmática al compararlos con 
el grupo DLN en un CONC 23,9%, VPH 34,2%, LIE-BG 13,6%, LIE-AG 55,9%, 
CA 55,2% y finalmente POST-R con un 35,8%, sin embargo, en los extendidos de 
POST-R disminuyó un -19,42% en comparación a extendidos de CA. 
 
DISCUSIÓN 
En el presente estudio se realizó la cuantificación por citomorfometría digital de 
las relaciones núcleo/citoplasma de células en frotis citológicos de cuello uterino 
de pacientes agrupadas según los diversos diagnósticos citológicos. 
 
Respecto a los valores obtenidos en lo relacionado a morfometría digital del 
núcleo se establece que en los extendidos de diagnósticos citológicos del grupo 
CONC aumentó significativamente en comparación con frotis citológicos del 
grupo DLN probablemente debido al grado de inflamación (en diversos grados). 
Al comparar el tamaño nuclear entre los grupos DLN y LIE-BG se confirmó en 
éste último, la positividad del criterio de malignidad por medio del aumento del 
tamaño nuclear de casi el doble. 
 
Al aumentar el criterio diagnóstico de malignidad como ocurre en el grupo LIE-
AG se apreció que el porcentaje de aumento del diámetro nuclear, si bien es 
mayor que en el grupo DLN, fue menor estadísticamente que el del grupo LIE-
BG. La explicación de este hallazgo es la presencia en estos frotis de células del 
epitelio glandular, que en cuanto a su morfología varían notablemente respecto a 
las células del epitelio escamoso, por otro lado, el pleomorfismo nuclear que estas 
células presentan indiferentemente a que tejido pertenezcan, logrando modificar 
dichos valores en cuanto a los diámetros de sus núcleos en la población celular 
evaluada en el frotis. 
Los frotis del grupo portador de CA mostraron un aumento el 100% de sus 
núcleos, lo cual confirma que en este grado avanzado de neoplasia el núcleo 
muestra signos evidentes de anisocitosis, lo cual es consecuencia de la alteración 
de los procesos metabólicos propios de la célula maligna. 
En el grupo de frotis provenientes de pacientes portadores de CA y sometidos a 
radioterapia, se observó que a las alteraciones propias de la malignidad, se 
añadieron las generadas por la exposición del tejido a la radiación incrementando 
el tamaño nuclear aún más que en los casos de lesión maligna sin tratamiento. 
 
Referente a los valores de diámetro de los citoplasmas, resaltamos que a medida 
que la célula experimenta cambios celulares benignos y malignos se puede 
evidenciar la reducción del tamaño del citoplasma comparados con los valores del 
grupo DLN. Esta reducción es mas intensa en los casos de CA y aún mas intensa 
en el grupo POST-R siendo este último un indicativo de la efectividad de la 
terapia de post-radiación. 
Tomando como referencia los valores obtenidos en el estudio de densimetría 
digital nuclear de las muestras del grupo DLN, se observó una reducción de la 
picnosis en los casos del grupo CONC, esto puede ser debido a que estos frotis 
son casos de procesos inflamatorios crónicos y severos, siendo este el producto 
del proceso de presión osmótica celular experimentada. En los casos LIE-BG, 
LIE-AG y CA la hipercromacia se acentuó debido al estadio de la malignidad de 
la lesión y al aspecto de disposición de la cromatina. La radioterapia redujo 
notablemente la cromacidad como lo evidenció los valores del grupo POST-R 
probablemente por la reducción en la actividad metabólica nuclear descontrolada. 
 
Los valores obtenidos de densimetría citoplasmática, orientados a la cromacidad, 
se confirma que en los frotis con cambios benignos la densidad es baja 
probablemente debido a que se mantiene el equilibrio de las funciones 
metabólicas de la célula, en contraste, la densidad citoplasmática en los grupos 
LIE-BG, LIE-AG y CA se incrementó significativamente; lo cual es consecuencia 
de un incremento notable de la tasa metabólica y de la síntesis protéica que 
repercuten directamente en el núcleo fomentando la producción de proteínas de 
alto peso molecular al medio acuoso alterando así su aspecto. Nuevamente, los 
resultados del grupo sometido a radioterapia reducen estos valores de densidad 
citoplasmática evidenciando que la terapia de radiación ha sido efectiva en la 
reversión de los cambios malignos. 
 
Respecto a la relación núcleo citoplasma es uno de los mayores parámetros 
discriminatorios a la hora de emitir un diagnostico; ya que este juega un rol 
indispensable en la adquisición de información descriptiva en el citodiagnóstico; 
puesto que en dependencia de cómo se presenta el núcleo va a ser criterio 
definitivo para identificar cambios celulares benignos o una neoplasia y en que 
estadio se encuentra; cabe resaltar que debe hacerse referencia a una correlación 
cito histológica para confirmar dichos resultados y así prevenir de esta manera lo 
menos posible los falsos positivos y falsos negativos. 
Seguidamente el método propuesto para calcular densidades de núcleos y 
citoplasma, por medio de escalas de grises constituye un sistema sólido de 
extracción de características de cromacidad, que resultara de gran utilidad para 
otras etapas de consolidación en la visualización o análisis de la célula, cabe 
destacar que esta información debe incorporarse con un sistema general en donde 
se estudie y analiza la información de diámetros, para que los resultados de 
diagnostico, diferenciación sean mas precisos y completos, ya que los valores 
arrojados por el programa en la tinción, puede verse afectados por errores en el 
control de calidad interno en la fase del procesamiento del frotis. El valor y 
utilidad diagnóstica del estudio de correlación y regresión se evidencia al aportar 
las ecuaciones que permiten, de forma simple, objetiva y cuantitativa, asociar el 
diámetro celular y las densidades nucleares y citoplasmática con un posible 
diagnóstico de benignidad o malignidad. 
Así mismo, el programa ImageTool v3.0 es la pauta para emprender 
investigaciones no solo en el campo de citología ginecológica; si no para 
cualquiertipo de citología o investigación científica de otra índole, enmarcada en 
el ramo de la salud; ya que le proporciona un conjunto de herramientas útiles al 
especialista para facilitar la identificación y criterio diagnostico a través del 
procesamientos de imágenes debido a su sencillez y generalidad para emplearlo. 
 
AGRADECIMIENTOS 
Los autores muestran su profundo agradecimiento al personal del hospital 
oncológico “Dr. Miguel Pérez Carreño”, especialmente al laboratorio 
anatomopatológico, por su invaluable colaboración de proporcionarnos las 
muestras, y al “Centro de Investigaciones Médicas y Biotecnológicas de la 
Universidad de Carabobo” (CIMBUC) por facilitar el fotomicroscopio. 
 
BIBLIOGRAFÍA. 
1. Arauzo, G. Epidemiología del carcinoma de cuello uterino, Perú, 
2010. 
2. Novak, E. Woodruff, J. Carcinoma of the Cervix. In: Novak´s 
Gynecology and Obstetrics Pathology with Clinical and Endocrine 
Relation,pp 97-140,1974. 
3. Muñoz, k. Identificación de células displásicas en el epitelio vaginal 
umbral científico, Colombia. pp. 104-114, 2006. 
4. Alayon, S. Sánchez, J. Segmentación automática de núcleos 
solapados en imágenes de citologías, España, 2008. 
5. Romaní, S. sobrerilla, P. Caracterización del color del citoplasma en 
imágenes de citología cérvico vaginal. España, 2010. 
6. Pelea, c. González J. Citología ginecológica de papanicolau a 
Bethesda. Madrid .Editorial complutense. p.p 205,2003. 
7. Hans, F. Citodiagnóstico ginecológico. Buenos aires. Editorial medica 
panamericana. p.p 9-10-12-13,2004. 
8. www.eurocytology. Citología cervical. Editorial Sapport. Europa, 2011. 
Sec1. 
9. http://www.eurocytology.eu/static/eurocytology/esp/cervical/LP1Conten
tGcont.html, 4 de abril de 2011. 
 
http://www.eurocytology.eu/static/eurocytology/esp/cervical/LP1ContentGcont.html
http://www.eurocytology.eu/static/eurocytology/esp/cervical/LP1ContentGcont.html