Acción enzimática práctica 6

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ACCIÓN ENZIMÁTICA. PRÁCTICA #6
José Javier Doria, Amalfi Peralta, José Paternina
Universidad de Córdoba
Facultad de Ciencias Agrícolas
Ingeniería Agronómica
Montería
2016
Presentado a: Gabriel Montes Fuentes *
Docente Biología Celular y Molecular. Universidad de Córdoba
RESUMEN: Durante la práctica se trató de poner de manifiesto alguno de los factores que afectan la actividad enzimática.
Palabras Clave: Proteínas, enzimas, sustratos, reactivos, temperatura, catalasa.
Artículo de Biología Celular y Molecular N°1. Presentado el 12 de Octubre de 2016 – Grupo 03A
1. 
2. OBJETIVOS
• Interpretar con claridad los mecanismos subyacentes de la acción enzimática sobre sustratos específicos.
• Analizar los mecanismos subyacentes de la actividad de la catalasa en tejido animal y vegetal.
3. INTRODUCCIÓN
Las enzimas son proteínas globulares formadas por una o más cadenas polipeptídicas. Aceleran la velocidad de las reacciones químicas, participando en su mecanismo pero sin sufrir un cambio químico permanente. También influyen sobre el rendimiento, ya que aseguran que todo el reactivo se transforme en producto y que no aparezcan productos secundarios. Las enzimas actúan sobre sustancias llamadas sustratos, que es la molécula que se va a transformar, son altamente específicas, variando su actividad con la modificación del pH, la temperatura, concentraciones de enzima y sustrato; estas pueden ser inhibidas por sustancias llamadas venenos enzimáticos. 
Durante la práctica se tratará de poner de manifiesto alguno de los factores que afectan la actividad enzimática.
4. MARCO TEÓRICO
Las enzimas son moléculas de proteínas que tienen la capacidad de facilitar y acelerar las reacciones químicas que tienen lugar en los tejidos vivos, disminuyendo el nivel de la "energía de activación" propia de la reacción. A diferencia de los catalizadores químicos, las enzimas actúan en condiciones muy suaves, a temperaturas por debajo de los 70°C, a un PH alrededor de 7 y a una presión de una atmosfera. Las enzimas son generalmente proteínas globulares que pueden presentar tamaños muy variables, desde 62 aminoácidos como en el caso del monómero dela 4-oxalocrotonato tautomerasa, hasta los 2.500 presentes en la sintasa de ácidos grasos. Las actividades de las enzimas vienen determinadas por su estructura tridimensional, la cual viene a su vez determinada por la secuencia de aminoácidos
5. MATERIALES Y METODOS
Materiales: 
• Tubos de ensayo 
• Pinzas para tubos de ensayo 
• Solución de almidón al 1% 
• Saliva 
• Solución de lugol 
• Reactivo de Benedict 
• Pastillas de cuajo (renina) 
• Ácido clorhídrico al 10% y concentrado 
• 30 ml de leche
• Zanahoria 
• Gotero 
• Pipetas de 5 ml 
• Pera de succión 
• Guantes quirúrgicos 
• Cinta de enmascarar 
• Papa 
•Agua oxigenada (peróxido de hidrogeno) 
• Trozo de hígado 
• Hojas de afeitar 
Métodos
Actividad de la Amilasa
 
a) 
 2 ml de saliva 
2 gotas 10 gotas
4ml de Almidón 4ml de Almidón
 + +
6 gotas de Benedict 2 gotas de lugol
 +
Calentar x 3 minutos
b) 
2ml de saliva + 5 gotas de Hcl
	
2 gotas 10 gotas
4ml de Almidón 4ml de Almidón
 + +
6 gotas de Benedict 2 gotas de lugol 
 +
Calentar x 3 min.
Acción de la Renina
 
5ml de leche 5ml de leche
 + +
2 gotas de lugol 10 gotas de renina
 +
10 gotas de renina
Acción de la Catalasa
Papa 
Zanahoria
Hígado 
6. DATOS OBTENIDOS 
	
	
	Prueba a los 5minutos 
	Tubo N°
	Enzima (amilasa)
	lugol
	benedict
	1
	Activa 
	
	positivo
	2
	
	negativo
	
	3
	Inactiva
	
	positivo
	4
	
	positivo
	
	
Tubo N°
	Descripción de observaciones 
	1(leche + renina)
	La reacción fue más rápida y más intensa que la del tubo 2
	2(leche + renina + HCL al 100%)
	La reacción fue más lenta menos intensa que la del tubo 1
7. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADO.
7.1. ¿En qué tubo se muestra la actividad de la enzima de la saliva? ¿Cómo lo has demostrado?
En el tubo 2, donde la saliva a pesar de ser combinada con el reactivo de lugol sigue teniendo un control dominante sobre esta sustancia.
 
7.2. ¿en qué tubo se ha inactivado la enzima? ¿por qué no ha actuado?
En el tubo N°4 donde la coloración fue más intensa dando un color positivo de color más oscuro al agregarle el reactivo de Benedict.
7.3. ¿Por qué se hace necesario esperar cinco minutos para observar los resultados?
Se debe esperar 5 minutos para que el reactivo surja efecto en la reacción.
7.4. Cuál es la función del HCL en esta reacción. 
Es muy corrosivo y ácido. Se emplea comúnmente como reactivo químico y se trata de un ácido fuerte que se disocia completamente en disolución acuosa. Una disolución concentrada de ácido clorhídrico tiene un pH de menos de 1; una disolución de HCl 1 M da un pH de 0. 
El clorhídrico se utiliza sobre todo como ácido barato fuerte y volátil. El uso más conocido es el de desincrustante para eliminar residuos de caliza (carbonato cálcico: CaCO3). En esta aplicación se transforma el carbonato cálcico en cloruro cálcico más soluble y se liberan dióxido de carbono (CO2) y agua
7.5. ¿Cuál es el efecto del ácido clorhídrico sobre la catalasa? 
Al aplicar el ácido clorhídrico en la catalasa, hubo una disminución de velocidad de las reacciones.
7.6. Al cocinar los alimentos demasiado ¿Cómo influye en la actividad de las enzimas? 
La temperatura influye mucho en la desnaturalización de proteínas (enzimas). En las enzimas un aumento de temperatura provoca un aumento en la velocidad de reacción hasta una cierta temperatura óptima. Cada enzima tiene un intervalo óptimo de temperatura en el cual se logra mayor actividad enzimática, la mayoría de las enzimas tiene su temperatura óptima entre 30 y 45° y se inactiva a mayor de los 55°C. 
Así que cuando calientas demasiado los alimentos puede que la enzima inactive, o puede que acelere aumente la velocidad de reacción. 
Cuando mayor es la temperatura mayor es la velocidad de reacción y la actividad enzimática. La velocidad de reacción aumenta debido a que hay más moléculas con la energía suficiente para entrar al estado de transición. 
7.7. Cuando el H2O2 es agregado a heridas produce burbujas ¿Qué indica esto?
El peróxido de hidrogeno, H2O2, Es un líquido oxidante, que al entrar en contacto con materia orgánica, se reduce a agua común liberando oxígeno, que es lo que mata a las bacterias.
8. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS.
7.1 ¿Qué cambios puede sufrir, en relación a la estructura químicas y el número inicial de moléculas, de sustrato y la enzima en una reacción química?
R: // El sustrato tiende a disminuir su concentración ya que es modificado por la enzima, esta suele permanecer constante ya que solo actúa como catalizador. El número de enzimas permanece igual, lo que hace que la enzima es acelerar la velocidad en la que el sustrato se vuelve producto, así que el sustrato disminuye hasta llegar a un equilibrio
7.2 Relacione los siguientes conceptos en un párrafo de no más de diez renglones: enzima alostérica, interacción alostérica y efector alostérico.
La interacción alostérica consiste en el cambio estructural de una proteína, es decir, sus receptores cambian las enzimas alostéricas poseen dos sitios activos en el primero se unirá un sustrato determinado, mientras que en el segundo también conocido como sitio alostérico, se une un factor el cual produce un cambio en la proteína, llevándolos a una regulación de actividad de estos. Los factores pueden ser tanto negativos como positivos. En caso de los positivos, favorecen la entrada de sustrato, en cambio el factor negativo modifica la estructura de la proteína, de la forma que el sustrato no pueda unirse al sitio activo de este.
7.3 Cite cinco ejemplos de enzimas con sus sustratos respectivos.
1. Maltasa hidroliza lamaltosa (sustrato) en dos unidades de glucosa (producto) 
Hidrolizar: romper enlaces con participación del agua 
Por lo tanto la Maltasa es una hidrolasa, se encuentra en el intestino delgado. 
2. Amilasa (hidrolasa): la alfa amilasa actúa sobre los enlaces de las unidades de glucosa que componen el almidón. 
Sustrato el almidón -------> unidades libres de glucosa 
3. Catalasa es una oxidasa 
descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno 
2 H2O2 ----------> 2H2O + O2 
Se encuentra en los glóbulos rojos 
4. Fosforilasas enzimas que agregan grupos fosfato a una molécula 
ADP + Pi + energía -------> ATP 
5. Lipasas rompen enlaces ésteres 
grasas --------> ácidos grasos + glicerol
8 CONCLUSIÓN
Del análisis de los resultados de laboratorio se pudo determinar que la temperatura es un factor determinante en las reacciones enzimáticas, porque acelera o retarda la acción de las enzimas, lo que se evidencia con la producción de burbujas. Por otra parte la catalasa funciona correctamente, debe tener un pH neutro y a temperatura ambiente, sin embargo, al disminuir la temperatura, los choques entre las moléculas disminuyen también.
9. BIBLIOGRAFIA
Lehninger. Principios de bioquímica (2006) David L. Nelson; Michael M. Cox. 4ª Edición. Ediciones Omega. Principios de Bioquímica (2001) Albert L. 
Lehninger, David L. Nelson; Michael M. Cox. (1997) (2ª y 3ª edición). Ediciones Omega. 
Matthew C.K., Van Holde K.E. y Ahern, K.G. (2002) Bioquímica 3ª edición. Ed. Addison Wesley. Bioquímica (1989) Rawn, J.D. Interamericana McGraw-Hill (1º y 2º volúmenes) 
Stryer, L. (2002 3ª edición. Ed. Reverté. Fersht, A. (1985) Enzyme structure and Mechanism. W. H. Freeman and Company, New York.
 Jenks, W.P. (1987) Catalysis in Chemistry and Enzymology. Dover Publications Inc. New York. Christensen, H.N. y Palmer, G.A. (1980) Cinética enzimática. Ed. Reverté. Barcelona.