Bioquimica Prática

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TÉCNICA DE SOUTHERN BLOT-HIBRIDACIÓN 
Es la técnica de hibridación usada para teste de hibridación en fragmentos de DNA separados por electroforeses em gel, por acción de las enzimas de restrición.
La hibridación es un proceso crucial en el campo de la ingeniería genética. El uso de sondas para identificar y caracterizar ADN permite, en base a las propiedades de los mismos, especialmente el emparejamiento de bases por enlace de hidrógeno y de desnaturalización y renaturalización de las cadenas complementarias. Estas reacciones se producen entre los ácidos nucleicos, independientemente de su naturaleza, sólo es necesario que sean de cadena sencilla (ADN: ADN, ARN: ADN o ARN: ARN). La técnica de hibridación es importante para el análisis de los genes expresados ​​como genes no expresados​​. La visualización de estos genes de interés se produce por hibridación de las sondas que están marcadas por radioactividad, quimioluminiscencia o por un anticuerpo. Existen varias técnicas de biotecnología utilizando como principio de hibridación del método, como del Norte - Blot, Southern Blot - Colonia - Blot.
Identificación por ADN afectado la vida de miles de personas en el planeta y ha sido sistemáticamente utilizada en la medicina forense y la medicina forense para resolver crímenes, probar la paternidad, identificar a las víctimas de los desastres, catástrofes o atentados terroristas, y probar los cambios de clonación y estudio que ocurren en la secuencia de ADN.
Southern blot
É um método para análise da estrutura de DNA que se baseia na clivagem com enzimas de restrição. Qualquer célula pode ser utilizada como fonte, exceto as hemáceas, pois não possuem núcleo. 
Os fragmentos distintos de DNA (gerados por clivagem com enzima de restrição) são separados por eletroforese em gel, na qual os fragmentos pequenos movem-se mais depressa que os maiores, quando submetidos à corrente elétrica. Eles são marcados com um isótopo radioativo e exposto a um filme de raio X, que escurece na posição da sonda devido à emissão de partículas radioativas da sonda marcada.
Técnica de Southern Blot
. 
Es una técnica desarrollada por E. M. Southern en la década de 70 que permite la detección de fragmentos de ADN. En esta técnica, el DNA se digiere con enzimas de restricción y los fragmentos resultantes se separan por electroforesis en gel de agarosa. Después de la desnaturalización del ADN y la transferencia a una membrana, híbrida con una sonda adecuada y visualizar los resultados. La transferencia de Southern para detectar RFLPs, VNTRs y modificaciones de ADN genómico, que se utiliza para el diagnóstico molecular.
Southern blotting: Nesta metodologia, o DNA é extraído de células e tratado com enzimas que rompem as ligações químicas entre determinadas bases nitrogenadas da molécula de DNA. Essas enzimas, extraídas de bactérias, são conhecidas por endonucleases de restrição. Os fragmentos da molécula de DNA resultantes do tratamento enzimático são separados (ou fracionados) eletroforeticamente. Entretanto, a separação dos fragmentos de DNA somente poderá ser revelada por meio das suas impressões extraídas do gel de agarose da eletroforese para uma membrana de náilon ou de nitrocelulose, como se fosse um "mata borrão" ou "blotting" (em inglês) e reveladas por sondas radioativas. Essa técnica foi descrita pelo pesquisador E. M. Southern em 1975, surgindo daí o "Southern blotting". O grande problema atual deste método é o tempo consumido para a revelação dos resultados que chega a ser de aproximadamente uma semana (1, 2, 5).
Northern blot
La transferencia de Northern es una técnica análoga a la transferencia de Southern, que sólo difieren en el ácido nucleico en estudio, este caso es ARN. Este tipo de análisis es importante para verificar la expresión de un gen determinado, el tipo de tejido o célula donde se produce y los factores que la regulan.
Colony-blot
En la técnica de la colonia-blot de detección se realizan en un número de colonias transformadas con bibliotecas de ADNc o ADN genómico de un organismo dado. Después de cultivar estas colonias se transfieren a una membrana de nylon y después de la lisis celular y la fijación del ADN sobre la membrana se hibridó con una sonda (ADNc o ADN genómico) para el gen a ser estudiado. Es visualizaron por autorradiografía que la colonia que contenía el ADN que hibrida con la sonda y aislar el plásmido correspondiente.
UTILIDAD
Las alteraciones genéticas son de dos procesos: mutación y recombinación ("crossover").
El primero puede inducir cambios heredables en el ADN y el segundo puede producir copias maternos y paternos de una región particular del ADN por apareamiento y trasladar esta información durante la formación de esperma y óvulos. A veces, la recombinación puede generar cambios en el ADN que conducen a enfermedades genéticas.
Estos dos procesos son los cambios fundamentales en el ADN para la evolución humana.
Los investigadores están caracterizando las reglas básicas que controlan la recombinación que se produce en el ADN humano y afectar la diversidad genética en la población humana. Por lo tanto, clarificar la dinámica de la evolución del ADN humano y los factores que influyen en la integridad de nuestro ADN, así como la forma en que se transmiten a nuestros descendientes.
Papiloma vírus humano
A detecção direta dos genomas do HPV e seus
transcritos pode ser conseguida com procedimentos que
incluem imunoperoxidase, hibridizações Southern blot,
Northern blot, dot blot e in situ, PCR, captura híbrida e
seqüenciamento de DNA, dentre outros
13
.
A sensibilidade e especificidade dos vários métodos
de detecção do HPV disponíveis variam amplamente. São
três as categorias que avaliam a sensibilidade dos métodos
de análise: os de baixa sensibilidade (imunoperoxidase,
imunofluorescência e hibridização in situ), por só detectarem
o vírus quando presente em mais de 10 cópias do DNA viral
por célula; os considerados de moderada sensibilidade
(Southern blot, dot blot e hibridização dot reversa), por só
detectarem o vírus quando de 1 a 10 cópias do DNA viral
estiverem presentes e os de alta sensibilidade (PCR), por
detectarem o vírus quando menos de uma cópia do DNA
viral estiver presente
25,39
. Para a análise do HPV, hibridização Southern blot e
seqüenciamento de DNA são procedimentos de excelente
qualidade, mas consomem muito tempo e dinheiro e podem
requerer grande quantidade de DNA purificado de alta qualidade. Recentemente, os dois métodos mais amplamente usados e que têm equivalência em sensibilidade são captura hí-
brida e PCR com primers gerais. Este tipo de PCR é potencialmente capaz de detectar todos os HPVs mucosos. Protocolos genéricos de PCR extensivamente aplicados fazem uso
de um dos pares de primers consenso GP5+/GP6+ e primers
degenerados MY09/11
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