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TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR
DRA. DANITZA CLAUDIA JUANIQUINA CALIZAYA
QUE SON LAS TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR
En principio se denomina así a todas las técnicas de laboratorio que se usan para aislar ADN o extraerlo en alta pureza, visualizarlo para ver su estado, cortarlo y pegarlo, amplificar una región en una enorme cantidad de moléculas (clonación de fragmentos en bacterias u otros vectores como virus , PCR Etc.
IMPORTANCIA DE LAS TECNICAS MOLECULAR
Todas estas técnicas tiene diversas aplicaciones generalmente en el diagnóstico de enfermedades hereditarias, búsqueda de alelos , diagnóstico de contaminación bacteriana en alimentos , diagnóstico viral o de infección viral (VIH, Hepatitis C, PIF, otros),selección de marcadores moleculares para asistir en el mejoramiento genético de una especie, test de paternidad, diagnóstico de identidad forense, etc.
EXTRACCION DEL ADN
La primera técnica que todas las demás necesitan es la extracción del ADN, y para ello es necesario purificarlo desde cualquier tejido aunque usualmente se hace a partir de sangre. Se basa en una serie de lavados de la muestra y agregado de proteinasas que eliminan las proteínas del medio, detergentes para eliminar las membranas plasmáticas y luego ir purificando el ADN de esa mezcla de ARN proteínas y restos celulares.
EXTRACCION DEL ADN
Asi se ve el ADN extraido en alcohol
Reaccion en Cadena polimerasa
•Conocer Los fundamentos de la técnica de amplificación de ADN por PCR
• Usos y aplicaciones de PCR
• Ventajas y desventajas del PCR
REACCION EN CADENA DE POLIMERASA
• Es un método para amplificar selectivamente un segmento de ADN.
• El segmento puede ser una pequeña parte o una larga y compleja parte de ADN.
• Es un método para copiar trozos de ADN
• El producto del PCR puede ser digerido, secuenciado o clonado
 La PCR se realiza en un “thermocycler” o termociclador
* Es una maquina que calienta y enfría la reacción de periodos cortos
de tiempo.
PROCESO DE PCR INCLUYE 3 PASOS
1: DESNATURALIZACION: Consiste en separar la doble hebra de ADN y
convertirla en hebra sencilla.
Típicamente se usa a una temperatura de 25°C – 95°, Por 15 a 40 segundos.El tiempo depende del tamaño del genoma
2: APAREAMIENTO O “ANNELING”:
Los cebadores “primers” previamente diseñados, reaccionan con la hebra sencilla del ADN y se pega a lugares específicos por complementariedad de base. Por eso se deja bajar la temperatura
Ej: 55° C por 30 segundos. La temperatura y el tiempo puede variar entre cebadores según sea el caso.
3. POLIMERACION O EXTENSION.
Una polimerasa de ADN extiende los “primers” en el espacio comprendido entre ambos “primers”, y coloca dinucleotidos trifosfatados (dNTP´s) de 5´a 3´leyendo el ADN de 3´a 5. de esta forma se sintetiza la secuencia complementaria de las hebras de ADN molde.
REACCION DE PCR
APLICACIONES
• Detección de agentes infecciosos como : hepatitis B y C, papiloma virus, VIH, entre otros.
• Análisis de ADN de cualquier organismo vivo o muerto, análisis de fósiles.
• Mutagénesis dirigida (cambios en la información contenida através de los “primers” con mutaciones)
• Investigación forense
• Pruebas de paternidad
IMPORTANCIA DEL PCR
• A partir de una muestra pequeña de ADN se puede obtener una cantidad considerable para el estudio que se vaya a realizar.
• El proceso se puede utilizar para clonar, secuenciar y análisis.
• Se puede amplificar el ADN de cualquier organismo vivo o muerto.
• Sus aplicaciones son multiples, medicina forense, diagnostico, análisis prenatales, etc.
WESTERN BLOT
 Es una técnica analítica usada para detectar proteínas especificas en una muestra determinada. Mediante una electroforesis en gel se separan las proteínas.
 Las proteínas son transferidas desde el gel a la membrana electroforética