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Escuela de Medicina PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR Escuela de Medicina – 1 – PRÁCTICA N° 03 Microscopía óptica y observación de células procariota y eucariota I. INTRODUCCIÓN: El microscopio es un instrumento que aumenta el tamaño de la imagen de un objeto. El más usado en laboratorio de biología es el microscopio compuesto que usa la luz visible comprendida de los 400 a 750 nm, con el cual podemos observar células eucariotas (10 a 50µm) y con cierta limitación a células procariotas (5 a 10 µm). La eficiencia del microscopio está dada por el poder de resolución y la capacidad de aumento de sus lentes. Los organismos vivos están compuestos de células. Los organismos pueden ser unicelulares o multicelulares. La mayoría de las células no son visibles a simple vista. Para observar y estudiar las células, se usan diferentes tipos de microscopios. Una importante división biológica, separa a las células eucariotas (organismos que contienen un núcleo limitado por una membrana) de las procariotas, en los cuales el DNA no está físicamente separado del citoplasma. II. COMPETENCIAS Discrimina entre célula procariota y eucariota, haciendo uso y manejo responsable del microscopio óptico; ejerciendo un pensamiento crítico y reflexivo. III. MATERIAL Mandil. Guantes quirúrgicos. Mascarillas. Microscopios. Láminas portaobjetos. Col. GRAM, azul de metileno. Material biológico: catáfila de cebolla, muestra de mucosa bucal y sarro dental. IV. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA USO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO: - El docente mostrará y explicará las partes estructurales del microscopio, así como su uso. - El estudiante reconocerá las partes del microscopio que le será proporcionado. - En el esquema, enumere y coloque las partes del microscopio óptico. Escuela de Medicina – 2 – OBSERVACIÓN DE CÉLULAS PROCARIOTAS (BACTERIAS): Extraer una muestra de mucosa de la cara interna de la boca y extenderlo (frotis) sobre dos láminas portaobjeto limpio y desengrasado. Fijar la muestra y agregar cristal violeta dejar por 1 minuto. Lavar con agua corriente. A agregar Lugol dejar por 1 minuto Lavar con agua corriente. Decolorar con alcohol acetona Agregar safranina dejar por 30 segundos Lavar con agua corriente. Dejar secar al medio ambiente o con ayuda del mechero. Observar una de las láminas al microscopio con objetivos de 4X, 10X, 40X y 100X. Observar, esquematizar y explicar. OBSERVACIÓN DE CÉLULAS EUCARIOTAS ANIMALES (CÉLULAS EPITELIALES): Observar la otra lámina coloreada en el paso anterior, al microscopio con objetivos de 100X. Observar, esquematizar y explicar. OBSERVACIÓN DE CÉLULAS EUCARIOTAS VEGETALES (CÉLULAS DE CATÁFILA DE CEBOLLA): Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la membrana delgada que está adherida por su cara inferior cóncava. Depositar el fragmento de membrana en una lámina portaobjetos con unas gotas de agua. Si es preciso, estirar el trozo de epidermis con ayuda de dos agujas. Escurrir el agua, añadir unas gotas de azul de metileno sobre la membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. Con el cuentagotas bañar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante. Colocar sobre la preparación un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarla al microscopio a diferentes aumentos. Observar, esquematizar y explicar. 4.2. Resultados: análisis e interpretación Uso y manejo del microscopio: Escuela de Medicina – 3 – Partes del sistema mecánico: …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… Partes del sistema óptico: …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… Partes del sistema de iluminación: …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… Observación de células procariotas (bacterias): Escuela de Medicina – 4 – Interpretación: …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… Observación de células eucariotas animales (células epiteliales): Interpretación: …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… Observación de células eucariotas vegetales (células de catáfila de cebolla): Escuela de Medicina – 5 – Interpretación: …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… V. PRECAUCIONES Y BIOSEGURIDAD 1. Ingresar al laboratorio con su guardapolvo. Esta ropa protectora deberá sacarse inmediatamente antes de abandonar el laboratorio. 2. Es obligatorio la utilización de guardapolvo que le cubra brazos, piernas y torso; deben portar además guantes de látex y mascarilla. 3. Está prohibido el uso de sandalias, pantalones y faldas cortos, gorras, bufandas y otros accesorios en el laboratorio. La persona inapropiadamente vestida para trabajar en el laboratorio no podrá ingresar. 4. Toda persona con cabello largo, deberá sujetarlo y recogerlo. VI. CONCLUSIONES …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………………………… ANEXOS: PREGUNTAS DE APLICACIÓN 1. Explique las diferencias entre el microscopio óptico y microscopio electrónico. 2. Elabore un esquema con ejemplos de células procariota y eucariota según su tamaño. 3. Explique la diferencia entre la pared celular de las bacterias gran positivas y las gram negativas.
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