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Cátedra de Química Analítica I Trabajos Prácticos Material disponible http://entornovirtual.unl.edu.ar/ CONSULTAR http://www. fbcb.unl.edu.ar/catedras/analítica Requisitos para el desarrollo de los TP Cada alumno deberá disponer de guardapolvo y 1 cuaderno, y asistir al laboratorio con cabello recogido y calzado cerrado. Los alumnos formarán comisiones de 2 personas. Cada comisión deberá contar con propipeta, trapo rejilla y 1 rollo de papel absorbente. Además, cada grupo de TP deberá traer 1 rollo de cinta de papel para rotular el material. NIVEL 3 2019 Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción 1 INTRODUCCIÓN Normas generales de seguridad en el laboratorio ................................................... 3 I.I. Recomendaciones generales referidas al laboratorio ........................................... 3 I.II. Recomendaciones generales de seguridad y orden personal .............................. 3 Primeros auxilios y procedimientos de emergencia ................................................ 4 I.III. Salpicaduras y derrames de productos químicos ................................................. 4 I.III.I. Si ocurre una salpicadura en los ojos .................................................................................... 4 I.III.II. Si ocurre una salpicadura o derrame en la ropa o la piel ....................................................... 4 Material del laboratorio analítico ................................................................................ 5 I.IV. Mediciones de masa ................................................................................................ 5 I.IV.I. Balanzas analíticas ................................................................................................................. 5 I.IV.II. Procedimiento para la medición de masa .............................................................................. 5 I.IV.II.I. Consideraciones para la correcta medición de masa: ................................................... 5 I.V. Medición de volumen de líquidos ........................................................................... 6 I.V.I. Material de vidrio para la medición de volumen ..................................................................... 6 I.V.I.I. Clasificación .................................................................................................................... 6 I.V.I.II. Temperatura de referencia ............................................................................................. 6 I.V.I.III. Límite de error o tolerancia ............................................................................................. 6 I.V.I.IV. Tiempo de espera y de escurrimiento ............................................................................ 7 I.V.I.V. Codificación impresa en materiales volumétricos .......................................................... 7 I.V.I.VI. Ejemplos ......................................................................................................................... 7 I.V.I.VI.I. Matraz aforado ........................................................................................................... 7 I.V.I.VI.II. Probeta graduada ....................................................................................................... 8 I.V.I.VI.III. Pipetas aforadas ......................................................................................................... 8 I.V.II. Material para la medición de volumen .................................................................................... 8 I.V.II.I. Medición confiable y exacta de volumen ........................................................................ 8 I.V.II.I.I. Pipetas ........................................................................................................................ 8 I.V.II.I.II. Matraces aforados ...................................................................................................... 9 I.V.II.I.III. Buretas ....................................................................................................................... 9 I.V.II.I.IV. Dispensadores con frascos botellas ......................................................................... 10 I.V.II.II. Otros materiales para medida de volúmenes ............................................................... 10 I.V.II.II.I. Pipetas graduadas .................................................................................................... 10 I.V.II.II.II. Probetas graduadas ................................................................................................. 10 I.V.II.III. Consideraciones para la lectura de volumen ............................................................... 11 Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción 2 I.VI. Lavado de material de laboratorio ........................................................................ 11 I.VI.I. Detergentes .......................................................................................................................... 11 I.VI.II. Agentes secuestrantes ......................................................................................................... 12 I.VI.III. Mezcla sulfocrómica ............................................................................................................. 12 I.VI.IV. Solventes orgánicos y soluciones hidroalcohólicas ............................................................. 12 I.VI.V. Agua regia ............................................................................................................................ 12 I.VI.VI. Hipoclorito de sodio 10% ...................................................................................................... 12 I.VI.VII. Secado del material .............................................................................................................. 13 Productos y/o reactivos químicos ........................................................................... 14 I.VII. Conceptos generales ............................................................................................. 14 I.VIII. Normas y códigos de calidad ................................................................................ 14 I.IX. Clasificación según su calidad ............................................................................. 15 I.X. Manipulación de productos y reactivos químicos ............................................... 15 I.X.I. Nivel de peligrosidad o riesgo .............................................................................................. 15 I.X.II. Estabilidad ............................................................................................................................ 16 I.X.III. Conservación y almacenamiento ......................................................................................... 16 I.XI. Etiquetado de productos y reactivos químicos ................................................... 17 I.XI.I. Ejemplos de etiquetas que siguen el sistema SGA .............................................................. 17 Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Normas generales 3 Normas generales de seguridad en el laboratorio I.I. RECOMENDACIONES GENERALES REFERIDAS AL LABORATORIO Para el ingreso y la permanencia en el laboratorio es indispensable usar guardapolvo o chaqueta de laboratorio, guantes y antiparras, vestir calzado cerrado y cómodo, no utilizar ninguna indumentaria por arriba del guardapolvo, tener el cabello recogido en caso de llevarlo largo, y evitar el uso de pulseras, mangas y bufandas. Está prohibido correr y obstruir los lugares de paso en el laboratorio. No abrir ni cerrar las puertas violentamente. Trabajar y circular en calmaen todo momento. No hacer bromas, distraer o interrumpir a las personas que estén realizando trabajo en el laboratorio. Está prohibido comer, beber y fumar en el laboratorio. No utilizar dispositivos electrónicos durante el trabajo de laboratorio (celular, tablets, computadoras portátiles). Reconocer las ubicaciones de los elementos de seguridad: salidas de emergencia, lavaojos y ducha de emergencia, extintor de incendios, botiquín, planos de evacuación, teléfonos y números de emergencia. Mantener siempre el orden de las zonas de trabajo y con un alto nivel de limpieza. Está prohibido guardar bebidas y alimentos en las heladeras de los laboratorios. Mantener siempre cerradas las puertas de los armarios donde se colocan los reactivos. No realizar experimentos que no hayan sido previamente autorizados o programados por los docentes a cargo. No manipular solventes inflamables cerca de fuentes de calor. Apagar luces, campana y mecheros antes de abandonar el laboratorio. Asegurar el orden antes de cerrar el laboratorio. I.II. RECOMENDACIONES GENERALES DE SEGURIDAD Y ORDEN PERSONAL Leer y analizar la Ficha de Datos de Seguridad (FDS o MSDS, de sus siglas en ingles Material safety data sheet) de cada reactivo y/o sustancia antes de su uso. Manipular sustancias tóxicas, fumantes y/o inflamables bajo campana de extracción. Utilizar siempre propipetas y/o pipetas automáticas para la succión de líquidos. NUNCA utilizar la boca para succionar reactivos o soluciones de trabajo. Utilizar elementos de seguridad para manipular material que haya sido calentado: pinzas o guantes aptos para alta temperatura. En caso de percibir olores, nunca acercar la nariz directamente a un recipiente; utilizar la mano para acercar hacia su nariz los vapores del recipiente. Mantener la higiene de sus manos en todo momento. Lavárselas luego de la manipulación de sustancias peligrosas. Todo derrame de cualquier producto químico debe ser neutralizado correctamente y ser limpiado inmediatamente. Evitar la formación de aerosoles en todos los procesos técnicos. En caso de accidentes, cortes o quemaduras, debe comunicarlo inmediatamente a los docentes a cargo. Rotular inmediatamente cualquier solución preparada para el análisis. Todos los recipientes deben estar perfectamente identificados. Ante la duda de cualquier reactivo, deberá ser descartado. Cerrar correctamente todos los recipientes que contengan tapa luego de su uso. Manipular todos los recipientes con precaución. Nunca tomar un recipiente por su cuello o tapa. Sostenerlos y manipularlos con ambas manos desde su cuerpo. La prevención de accidentes es responsabilidad de todos los que trabajan en el laboratorio y, por lo tanto, es necesaria la cooperación activa de cada uno. Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Material de laboratorio 4 Primeros auxilios y procedimientos de emergencia I.III. SALPICADURAS Y DERRAMES DE PRODUCTOS QUÍMICOS I.III.I. SI OCURRE UNA SALPICADURA EN LOS OJOS 1. Hacer fluir agua potable de una fuente inmediatamente en el ojo por al menos 15 minutos. No intentar neutralizar el líquido con ningún agente. USAR SOLO AGUA. 2. Utilizar el dedo pulgar e índice para mantener los párpados fuera del ojo, mover los ojos continuamente hacia arriba y abajo y hacia los lados para que el agua fluya atrás de los párpados y atrás del ojo. 3. Siempre que sea posible, utilizar una fuente de lavaojos. De lo contrario, la persona lesionada debe ser colocada sobre sus espaldas y se debe hacer fluir agua suavemente a través de las esquinas de los ojos por al menos 15 minutos. 4. Luego de haber brindado los primeros auxilio, comunicarse inmediatamente a un personal de salud o cuerpo médico. I.III.II. SI OCURRE UNA SALPICADURA O DERRAME EN LA ROPA O LA PIEL 1. Para pequeños derrames, lavar inmediatamente la zona afectada con agua potable continua por al menos 15 minutos. 2. Para grandes derrames, utilizar inmediatamente la ducha de seguridad: colocarse directamente debajo de la caída de agua y remover toda la ropa contaminada mientras se mantiene debajo de la ducha abierta. 3. Evitar contaminarse los ojos al quitarse las prendas contaminadas. 4. Lavar todas las zonas afectadas con abundante agua por al menos 15 minutos, a temperatura ambiente. 5. Luego de haber brindado los primeros auxilios, comunicarse inmediatamente a un personal de salud o cuerpo médico. Números de teléfono de emergencia Atención médica de urgencia COBEM: 103 UNISEM: 107 Derrames, fugas de productos químicos o incendios Bomberos: 100 Policía: 911 Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Material de laboratorio 5 Material del laboratorio analítico I.IV. MEDICIONES DE MASA I.IV.I. BALANZAS ANALÍTICAS Las balanzas analíticas son instrumentos muy delicados que deben ser manipulados con extremo cuidado. Deben mantenerse siempre limpias y cerradas, en un lugares libres de corrientes de aire. Las balanzas que pueden encontrarse en un laboratorio analítico se clasifican según su capacidad en: Macrobalanzas: son las balanzas más comúnmente presentes en los laboratorios analíticos y tienen una capacidad máxima que oscila entre 160 g y 200 g, con una precisión de 0.1 mg. Balanzas semimicroanalíticas: tienen una carga máxima de 10 g a 30 g con una precisión de 0.01 mg. Balanzas microanalíticas: tienen una capacidad de 1 g a 3 g, con una precisión de 0.001 mg. I.IV.II. PROCEDIMIENTO PARA LA MEDICIÓN DE MASA Las sustancias o drogas sólidas a pesar no deben ser colocadas directamente sobre el platillo de la balanza. Para ello se utilizan pesasustancias que pueden ser de diferentes tipos: Pesafiltros: son recipientes de vidrio que poseen una tapa esmerilada y que se utilizan para pesar drogas altamente higroscópicas o que presenten cierta peligrosidad para el operario. Embudos de pesaje: son recipientes de vidrio o plástico que poseen un vástago y que se utilizan para pesar todo tipo de sustancias. El vástago facilita trasvasar cuantitativamente la masa medida a un recipiente para su posterior disolución. Otros: vidrio de reloj, capsulas, crisoles. Los recipientes a utilizar para la medición de masa deben estar perfectamente limpios y secos. Los resistentes a temperatura se secan y conservan en estufa y para utilizarlos se deben dejar estabilizar hasta llegar a temperatura ambiente en condiciones libre de humedad. Por esto, al retirarlos de la estufa se utilizan desecadores, que son recipientes de vidrio o plástico con tapa que contienen un agente desecante que permite la reducción de humedad en su interior para evitar la fijación de humedad en el material a desecar. También se utilizan para almacenar drogas higroscópicas o sustancias que deban estar en ambiente libre de humedad. Algunos desecadores permiten trabajar en condiciones de vacío conectados a una bomba de vacío. Los recipientes utilizados para la medición de masa no deben ser nunca manipulados directamente con la mano a fin de evitar la posible transferencia de cantidades detectables de agua o materia grasa desde la piel al recipiente. Para evitarlo se utilizan guantes, pinzas, dedales de gamuza o tiras de papel. I.IV.II.I. Consideraciones para la correcta medición de masa Medición de masa de una DROGA SÓLIDA: para la medición de masa de una droga sólida es importante trabajar en un ambiente libre de humedad, para evitar errores en la lectura. Por lo tanto, el pesasustancia se debe acondicionar previamente en un ambiente seco. Para asegurar un ambiente libre de humedad en todo el proceso de medición, momentos antes de utilizar la balanza se coloca un agente desecante en su interior, que no esté en contacto con el plato de medición, y se mantiene cerrada el mayor tiempo posible. Es importante que la medición de masa se realice enun tiempo relativamente corto a fin de evitar el ingreso de humedad al desecador y a la balanza. Medición de masa de un LÍQUIDO: a diferencia de lo mencionado para una droga sólida, la balanza debe encontrarse en un ambiente saturado de humedad, a fin de evitar errores por evaporación. Por lo tanto, momentos antes de la medición se coloca un recipiente con agua en el interior de la balanza, que no esté en contacto con el platillo de medición, a fin de saturar de humedad su interior. Los recipientes a utilizar para las mediciones deben estar en las mismas condiciones que los mencionados anteriormente: limpios, secos y libres de humedad. Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Material de laboratorio 6 I.V. MEDICIÓN DE VOLUMEN DE LÍQUIDOS I.V.I. MATERIAL DE VIDRIO PARA LA MEDICIÓN DE VOLUMEN I.V.I.I. Clasificación El material de laboratorio para medición de volumen se distingue según el número de marcas indicadoras de volumen que contiene: Aforados: el material presenta una o dos marcas indicadoras (aforo) de volumen y puede leerse solo un volumen fijo establecido; por ejemplo: pipetas aforadas de simple y doble aforo, matraz aforado de 100.0 mL. Graduados: el material presenta varias marcas indicadoras de volumen y permite la medición de un volumen variable entre un máximo y un mínimo; por ejemplo: pipetas graduadas, buretas, probetas graduadas. Cada material de vidrio es ajustado al volumen correcto y calibrado por su fabricante de manera individual y siguiendo normas específicas. Dependiendo de la manera en que se realizó el ajuste de volumen y su calibración, los materiales se clasifican como: Para contener (TC: “To Contain”): el volumen del líquido contenido en el recipiente es exactamente la cantidad indicada mediante una marca que presenta el material en su exterior. Ejemplos: matraz aforado, probetas graduadas y pipetas capilares; Para dispensar (TD: “To Deliver”): la cantidad de líquido vertida corresponde exactamente al volumen indicado mediante una marca que presenta el material en su exterior. La cantidad de líquido que permanece adherida a la pared del material es considerado al realizar la calibración. Ejemplos: pipeta graduada, bureta. Según la Organización Internacional de Estandarizaciones (ISO) los materiales TC son designados como “In”, en referencia al volumen contenido en el interior del material y los TD son indicados como “Ex” en referencia al volumen extraído o dispensado. La denominación del material puede estar marcada en el recipiente, indicándose además la temperatura a la cual se ha realizado la calibración (TC 20ºC o In 20ºC). Además, los materiales volumétricos se puede clasificar como: Clase A: material volumétrico para trabajos de alta precisión. Los materiales TD pueden presentar la designación adicional ‘S’ que significa de vaciado rápido. Clase B: material volumétrico para análisis que acepten menor grado de precisión. I.V.I.II. Temperatura de referencia La temperatura de referencia normalizada, generalmente 20ºC, es la temperatura a la cual el instrumento debe contener o dispensar el volumen nominal indicado. En caso de que la calibración o la medición de volumen se realicen a temperatura diferente, los valores medidos deberán ser corregidos. Sin embargo, dado el bajo coeficiente de dilatación del vidrio, en la práctica la temperatura tiene baja relevancia ya que las desviaciones en la medición causada por la dilatación del volumen de los instrumentos de vidrio es despreciable en relación al límite de error establecido. El anexo I contiene los valores tabulados para la corrección del volumen en relación a la temperatura. I.V.I.III. Límite de error o tolerancia El límite de error o tolerancia es un valor establecido por las normas oficiales e indica la desviación máxima permitida por el instrumento con respecto a su valor nominal. Estos valores son especificados para el material de vidrio calibrado y dependerá de la clase a la que pertenezca. Los materiales clase A y clase AS presentan el mismo límite de error y siempre deberán tener indicado el tiempo de espera. Los de clase B tienen un error aproximadamente dos veces mayor a los materiales de clase A. Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Material de laboratorio 7 I.V.I.IV. Tiempo de espera y de escurrimiento Para el material de vidrio volumétrico TD o Ex, el volumen dispensado es siempre menor al volumen contenido debido a la humectación de la superficie interior, por lo que una parte de líquido quedará retenida en las paredes del material. La proporción de volumen retenido dependerá del tiempo de escurrimiento, el cual es considerado durante la calibración del material. El tiempo de escurrimiento es el periodo de tiempo necesario para el descenso del líquido por efecto de la gravedad desde el aforo superior hasta el inferior. Este tiempo debe tener contemplado, además, el tiempo de espera. El tiempo de espera es el tiempo que debe esperarse desde el momento en el cual el menisco permanece quieto a la altura de la marca de volumen inferior o bien de la punta del instrumento una vez vertido el líquido. En el tiempo de espera se escurren restos de líquido retenido en la pared del instrumento. I.V.I.V. Codificación impresa en materiales volumétricos Todo material de vidrio tiene impresa en su cuerpo la información específica que refiere a su fabricación y calidad. La información codificada que debe estar indicada en cada instrumento es: Marca: refiere al fabricante Volumen nominal: volumen máximo capaz de ser medido por el instrumento Unidad de medición: en mL o cm3 Temperatura de referencia: generalmente, 20 ºC Tipo de calibración: TD o TC (Ex o In) Clase: A, AS, B Tiempo de espera: indicado como, por ejemplo, “Ex + 5s” Adicionalmente, pueden estar impresos los siguientes datos: Límite de error: tolerancia Norma: código que especifica los requerimientos metrológicos y de construcción del material. I.V.I.VI. Ejemplos Ejemplos de codificación impresa encontrada en el material de vidrio disponible en nuestro laboratorio I.V.I.VI.I. MATRAZ AFORADO Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Material de laboratorio 8 I.V.I.VI.II. PROBETA GRADUADA I.V.I.VI.III. PIPETAS AFORADAS I.V.II. MATERIAL PARA LA MEDICIÓN DE VOLUMEN I.V.II.I. Medición confiable y exacta de volumen La medición confiable y exacta de volumen se realiza utilizando tres herramientas básicas: pipetas, matraces aforados y buretas. I.V.II.I.I. PIPETAS Permiten la transferencia de volúmenes medidos exactos entre recipientes. Las más comúnmente utilizadas son: Pipeta aforada de simple y doble aforo: (TD o Ex) transfieren un único volumen y se pueden encontrar de diversos volúmenes fijos (desde 0.5 mL a 100 mL). Para las de simple aforo, se debe dispensar el total del volumen medido y el líquido que queda remanente en la punta de la pipeta no debe ser expulsado. Para las de doble aforo se dispensa un volumen parcial, es decir, el contenido entre la marca superior e inferior de la pipeta, sin expulsar el volumen que queda por debajo de la marca inferior. Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Material de laboratorio 9 Micropipetas de vidrio con y sin constricción o pipetas Ostwald-Folin: (TD o TC – Ex o In) transfieren un volumen fijo en cantidades de microlitros. Presentan un aforo indicador de volumen. Estas pipetas son identificadas como “blow-out” debido a que se debe dispensar el total del volumen medido, expulsando por soplado el líquido que queda retenido en la punta. Pipetas automáticas de interface de aire de volumen fijo: se utilizan para transferir líquidos acuosos en el rango de microlitros y mililitros. Utiliza puntas desechables de plástico. Su funcionamiento se basaen el principio de cámara de aire: al desplazar el embolo en el vástago de la pipeta, se genera un vacío o sobrepresión parcial sobre el vástago generando la succión y expulsión, respectivamente, del líquido que queda separado del émbolo mediante una cámara de aire. En ningún momento se produce contacto del instrumento con el líquido. Pipetas automáticas de interface de aire de volumen variable: iguales a las anteriores pero su volumen puede ser regulado entre un mínimo y un máximo. Pipetas automáticas de interface de aire multicanal: iguales a las anteriores (de volumen fijo o variable) que permite realizar varias tomas de volumen simultáneamente. Pipetas de desplazamiento directo o capilar: (TC o In) a diferencia de las anteriores, se utilizan para transferir líquidos de alta y baja densidad, espumosos o de alta presión de vapor. Utilizan capilares de vidrio no desechables y son de alta precisión. Su funcionamiento se basa en el contacto directo del émbolo con el líquido, permitiendo expulsar todo el líquido y minimizar el líquido que queda retenido en las paredes. I.V.II.I.II. MATRACES AFORADOS Son fundamentales para la preparación de soluciones por disolución o dilución a un volumen fijo con exactitud. Son materiales calibrados por volumen contenido (TC o In). Son recipientes en forma de bulbo con fondo plano y un cuello afinado. Presentan una sola marca indicadora del volumen contenido en su cuello. Para evitar alteraciones en la forma del matraz y, por lo tanto, en el volumen que es capaz de contener, los matraces no deben someterse a temperaturas extremas, es decir, no deben ser calentados a fuego directo, colocados en estufa o almacenados en heladera. Los matraces son fabricados con capacidades que oscilan desde 1.0 mL hasta 6000.0 mL. El volumen indicado en el matraz es el obtenido en la calibración a la temperatura establecida e indicada en el material por el fabricante. Uso de matraz aforado: 1. Transferir al matraz la cantidad exactamente pesada de sustancia o medida de solución concentrada. 2. Llenar el matraz con disolvente hasta aproximadamente la mitad de su capacidad. 3. Agitar el matraz en forma circular, evitando proyecciones de líquido hacia el vástago, para facilitar la disolución o el homogeneizado de la solución. 4. Completar el volumen con el disolvente hasta que el menisco se ajuste exactamente a la altura del aforo. (Leer sección I.V.II.III. Consideraciones para la lectura de volumen) 5. Tapar el matraz y homogeneizar por inversión varias veces. I.V.II.I.III. BURETAS Las buretas, como las pipetas para medición, son instrumentos que permiten la transferencia de volúmenes variable entre un mínimo y un máximo. Son materiales que han sido calibrados por vertido, es decir, son materiales TD (o Ex) y sirven para la valoración de soluciones mediante titulación. Consisten en un tubo cilíndrico graduado que presenta un dispositivo de válvula por el cual se controla el flujo de vertido del líquido, y un vástago que termina en punta y permite dispensar el líquido en forma de gotas. Las válvulas pueden ser de vidrio, plástico o teflón. Las de teflón son las Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Material de laboratorio 10 más resistentes al deterioro por ataque de los reactivos y no requieren lubricante para su funcionamiento. Las buretas pueden ser de clase A, AS o B y tienen un tiempo de espera de generalmente 30s, significativamente mayor a las pipetas aforadas. Sin embargo, en el uso práctico, las buretas se utilizan de manera diferente a las pipetas. Durante la valoración se consume un volumen menor al nominal y cerca del punto final de la valoración, la solución se agrega gota a gota. Este agregado gota a gota requiere un tiempo mayor al tiempo de espera establecido, por lo que, en la aplicación práctica, no es necesario estrictamente considerar el tiempo de espera y escurrimiento de la bureta. Uno de los errores más usuales en la práctica es el de no expulsar el aire contenido en el vástago, es decir, la sección que queda por debajo de la válvula. Además, es común que durante el llenado de la bureta quede aire retenido en la región de la válvula. Para comenzar el trabajo de titulación, la bureta debe llenarse con líquido titulante desde el enrase en cero hasta su punta, eliminando todas las burbujas que puedan haber quedado retenidas en su interior. Uso de bureta: 1. Asegurarse de que la bureta se encuentre perfectamente limpia y que la válvula de cierre funcione correctamente, sin pérdidas. 2. Enjuagar con solución a utilizar y alinear la bureta de manera vertical, asegurándose de que quede firme. 3. Con la válvula cerrada, llenar la bureta hasta superar ligeramente el cero. El llenado de la bureta se realiza desde el extremo superior, manteniendo la válvula cerrada. Para eliminar el aire del vástago y las burbujas retenidas en la válvula, se abre la válvula al máximo dejando escurrir el líquido hasta que se libere el aire y luego se cierra la válvula. Si esto no resulta, la bureta puede ser llenada por aspiración de la solución por su punta, manteniendo la válvula abierta y cerrándola una vez que el líquido sobrepase el vástago. 4. Completar el llenado hasta enrase en cero. 5. Eliminar las gotas que eventualmente queden adherida a la punta de salida. 6. Abrir la llave de la bureta y agregar lentamente la solución titulante a la solución a titular. Los primeros mililitros pueden ser agregados en incrementos de 1 mL. Cerca del punto final, realizar agregados gota a gota. Durante la adición de titulante, agitar ligeramente el recipiente que contiene la solución a titular para favorecer la homogeneización y la reacción. 7. Finalizada la titulación, leer el volumen valorado. Tener en cuenta que para las buretas es posible registrar un volumen de hasta 1/5 de la mínima división marcada por el instrumento. (Leer sección I.V.II.III. Consideraciones para la lectura de volumen) I.V.II.I.IV. DISPENSADORES CON FRASCOS BOTELLAS Tienen un frasco que contiene la solución reserva y un sistema de medición para dispensar volúmenes fijos, variables o volúmenes repetitivos, según el modelo. También se suelen considerar como dispensadores, las nuevas buretas electrónicas de 30 mL o 50 mL de capacidad, que suelen tener una exactitud mejor a ± 0.2 % y una reproducibilidad mayor a ± 0.1 %. I.V.II.II. Otros materiales para medida de volúmenes I.V.II.II.I. PIPETAS GRADUADAS Pipetas graduadas de Mohr: (TD o Ex) son pipetas graduadas que permiten la transferencia de cualquier volumen desde un mínimo hasta su valor nominal. El líquido retenido en la punta no debe ser expulsado, por ejemplo, por soplado. Pipetas serológicas graduadas: (TD o Ex) son iguales a las pipetas graduadas pero el volumen que permanece en la punta debe ser expulsado. I.V.II.II.II. PROBETAS GRADUADAS Son cilindros graduados que llevan marcas que permiten su llenado a volúmenes especificados. Si bien están destinadas a transferir la cantidad de líquido señalada en la marca, son materiales de Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Material de laboratorio 11 calibración TC (o In). Su uso más frecuente es para dispensar fracciones de líquidos. Algunas probetas con tapa, al igual que los matraces aforados, pueden ser utilizadas para preparar soluciones. Pueden ser de clase A y B. I.V.II.III. Consideraciones para la lectura de volumen El “menisco” describe la curvatura que adopta la superficie de un líquido en contacto con una pared. Puede adoptarla de forma cóncava o convexa y resulta de la relación de fuerzas entre adhesión y cohesión. En soluciones acuosas, el líquido adopta una curvatura cóncava, es decir, hay un aumento en el ángulo de contacto del líquido con la pared. Para realizar una medición exacta de volumen, el menisco debe estar bien ajustado. Para soluciones acuosas, la lecturadel volumen se realiza a la altura del punto más bajo de la superficie del líquido. La base del menisco debe estar exactamente en el borde superior de la división de la escala o del aforo. Para evitar errores de paralaje, la lectura del volumen debe realizarse a la altura de los ojos del operador, es decir, el instrumento debe estar en posición perfectamente vertical y los ojos del operador deben posicionarse a la altura del menisco. Es aconsejable colocar una tarjeta opaca o cinta negra por debajo del aforo para localizar la posición precisa del menisco y establecer el nivel de lectura con mayor exactitud. De esta manera, el aforo deberá verse como una perfecta línea horizontal. I.VI. LAVADO DE MATERIAL DE LABORATORIO El lavado del material de laboratorio es una práctica muy importante y debe realizarse inmediatamente después del trabajo de laboratorio. Debe evitarse que las sustancias utilizadas durante el trabajo o la suciedad se sequen sobre el material debido a que es perjudicial y removerlo implica métodos más agresivos de limpieza. En caso de no ser posible su limpieza inmediata, se deberá dejar el material sumergido en agua hasta el momento de lavado. El lavado se realiza a baja temperatura y en cortos periodos de tiempo. Los métodos de limpieza varían de acuerdo a las sustancias que deban eliminarse, al material que compone el instrumento, y al tipo de determinación para el que será destinado. I.VI.I. DETERGENTES Existen detergentes formulados especialmente para uso en el laboratorio de análisis, con propiedades diferentes a los de empleo doméstico. Estos detergentes pueden estar compuestos por tensioactivos aniónicos (por ej. alquilbencenosulfonatos) y no-iónicos (por ej. del tipo de los alquilfenoles etoxilados). Estos detergentes tienen la propiedad de ser biodegradables. Además, a diferencia de los de uso doméstico, estos detergentes no generan espuma y no dejan residuos posteriormente a su enjuague. El uso de tensioactivos junto a compuestos capaces de remover los iones del medio (secuestrantes, complejantes) posibilitan la limpieza eficiente del material de laboratorio, dejándolo Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Material de laboratorio 12 libre de sustancias proteicas, grasas, e incluso trazas de iones, de influencia nociva y errática en procesos enzimáticos. I.VI.II. AGENTES SECUESTRANTES Son sustancias que permiten la eliminación de iones metálicos polivalentes mediante la formación de complejos. Por ejemplo: Hexametafosfato y tripolifosfato de sodio: tienen excelentes propiedades emulsionantes y gran aptitud para complejar iones polivalentes. Sales sódicas de ácido etilendiaminotetracético (EDTA): son complejantes de alto rendimiento, y su asociación a los polifosfatos permiten la eliminación de la mayoría de los cationes presentes. I.VI.III. MEZCLA SULFOCRÓMICA Se trata de un agente limpiador agresivo, utilizado para la destrucción de materia orgánica degradada o seca. Es una solución ácida oxidante de acción lenta. Por ello, el lavado se realiza sumergiendo el material y dejándolo por un tiempo prolongado. A continuación de la inmersión se procede a una vigorosa acción de enjuague para remover totalmente la sustancia oxidante que puede retornarse a su envase y reutilizarse mientras mantenga su poder oxidante. La solución recién preparada presenta un característico color naranja que va tornándose verde a medida que va perdiendo su poder oxidante. Cuando la solución está completamente de color verde, debe descartase y prepararse una nueva. Una desventaja de esta solución es que deja residuos en las paredes del material, difíciles de remover. Por ello, no debe emplearse para limpiar plásticos ni para material destinado a análisis óptico tal como cubetas para espectrofotometría. Debe tenerse en cuenta que esta solución presenta acción destructiva sobre vestimenta y mobiliario y puede ocasionar lesiones y quemaduras sobre la piel. I.VI.IV. SOLVENTES ORGÁNICOS Y SOLUCIONES HIDROALCOHÓLICAS Cuando la suciedad del material exhiba características de adherencia grasa se recomienda el enjuague con solventes orgánicos puros como acetona o alcohol etílico. Las soluciones hidroalcohólicas tienen acción más rápida que la mezcla sulfocrómica y se usan como agentes desengrasantes. I.VI.V. AGUA REGIA Se utiliza principalmente cuando hay que eliminar óxidos metálicos o metales precipitados que no pudieron ser removidos con ácido. Es una solución ácida oxidante muy reactiva compuesta de 3 partes de HCl concentrado y 1 parte de HNO3 concentrado. Se debe tener precaución durante su manipulación debido a que el producto de reacción (dióxido de nitrógeno) es un gas muy tóxico. I.VI.VI. HIPOCLORITO DE SODIO 10% Comúnmente llamada agua lavandina, se utiliza para desinfectar áreas y materiales que han sido expuestos o han estado en contacto con material biológico. Produce la inactivación del material biológico y es útil, además, para la remoción de restos de colorantes utilizados en análisis biológicos como azul de metileno y violeta de genciana. Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Material de laboratorio 13 Resumen de soluciones lavadoras comúnmente utilizadas en laboratorios de análisis: Solución lavadora Constitución Elimina Detergentes Surfactantes iónicos y no iónicos Materia grasa Detergentes y secuestrantes Surfactantes y complejantes (EDTA) Materia grasa y cationes Mezcla sulfocrómica Solución saturada de Na2Cr2O7 en H2SO4 concentrado. Materia orgánica Solventes orgánicos Acetona o etanol Materia orgánica (lípidos) Solución hidroalcohólica Solución de NaOH 6 mol L –1 en etanol 60 % Desengrasante. Precaución: disuelve el vidrio. HNO3 Solución HNO3 5 % Iones Agua regia Solución HNO3 y HCl (1:3) Metales nobles Solución piraña H2O2 30 % en H2SO4 concentrado (1:3) Materia orgánica Secuestrantes EDTA 3 % Cationes Hipoclorito de sodio Agua lavandina 10 % Material biológico y colorantes I.VI.VII. SECADO DEL MATERIAL El secado del material de laboratorio se realiza en estufa de secado. Para ello el material debe estar perfectamente limpio y enjuagado finalmente con 2 porciones de agua destilada. El material de vidrio, goma, porcelana, plástico, etc., debe secarse en estufas que no superen los 50 ºC, siendo preferible a 37 ºC. Nunca debe secarse material de vidrio en estufas de esterilización (120-180 ºC), ya que la rápida evaporación del agua provoca depósitos salinos y la alta temperatura perjudica la buena calibración del material. El material calibrado nunca debe secarse a temperaturas que superen los 50 ºC. Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Productos y reactivos químicos 14 Productos y reactivos químicos I.VII. CONCEPTOS GENERALES Un producto o reactivo químico o bioquímico es una sustancia que puede adquirirse comercialmente y es para uso en el laboratorio analítico. La selección de los productos y reactivos químicos a utilizar en una determinación se realiza considerando una serie de factores que estarán sujetos al buen criterio del analista y que determinará el éxito de los análisis. Entre los factores a considerar se encuentran: Pureza y/o calidad Tipo de determinación analítica Riesgo y peligrosidad Estabilidad Costo I.VIII. NORMAS Y CÓDIGOS DE CALIDAD Estas sustancias son clasificadas según su calidad y su uso siguiendo especificaciones establecidas por ciertas instituciones nacionales e internacionales. Existen organismos especiales que editan periódicamente normas y códigos que tienen como objeto mejorar la calidad de los productos y los reactivos, obligar a que se respete lo declarado en el rotulo comercial y elegir los métodos de análisis para evaluar las especificaciones establecidas. Una sustancia cumple con una norma cuando satisface todos los requisitosindicados en el cuadro de especificaciones exigido por dicha norma, es decir, que su título, actividad biológica o concentración, es igual al establecido o que el contenido de impurezas está limitado a los máximos fijados. Entre los códigos y las normas más utilizadas, se encuentran: IRAM: Instituto Argentino de Normalización y Certificación ACS: American Chemical Society ASTM: American Society for Testing and Materials NCCLS: National Committee for Clinical Laboratory Standards Por otro lado, las farmacopeas son materiales bibliográficos que se pueden definir como casos especiales de códigos y normas. Son manuales de química publicados periódicamente a través de organismos oficiales, en los que se establecen las características de las sustancias necesarias para preparar y analizar fármacos, con el objetivo de evitar o disminuir los contaminantes peligrosos para la salud en los medicamentos, así como también de asegurar su eficacia. Las más utilizadas son la Farmacopea Argentina (FA), norteamericana (USP) y británica (BP). Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Productos y reactivos químicos 15 I.IX. CLASIFICACIÓN SEGÚN SU CALIDAD Denominación Calidad Características Criterio científico Calidad reactivo Grado reactivo Reactivo analítico Reactivo analítico calidad ACS Para análisis (p.a.) Sustancias de alta calidad, con nivel superior al 99% y que responden a normas internacionales. Calidad farmacopea Sustancias que se usan en farmacia y medicina. Deben estar exentas de contaminantes peligrosos para la salud. Las siglas de la farmacopea y las normas que siguen el producto deberás estar claramente indicadas en la etiqueta del producto y en la información provista en los catálogos comerciales. Criterio técnico Puro Purísimo Químicamente puro Purificado Productos de alta pureza (95-96%), pero que no alcanzan a cumplir con los requisitos de una norma internacional. Calidad técnico Calidad comercial Productos de calidad indeterminada (menor pureza que los anteriores). Se usan generalmente como preparaciones auxiliares y reactivos. El % y la naturaleza de las impurezas del producto usado en la preparación, no deberá interferir en el método analítico. Uso especial indicado Certificada para uso especial Sustancias de pureza excepcional, aptas para un uso científico o analítico particular (ej.: inmunoquímico, microbiológico, electroforético, cromatográfico, espectrofotométrico). I.X. MANIPULACIÓN DE PRODUCTOS Y REACTIVOS QUÍMICOS Conocer el correcto manejo de cualquier producto y reactivo químico es indispensable para el trabajo de laboratorio, debido a que será posible reconocer el producto en virtud de su peligrosidad y poder tomar acciones preventivas y de acción en caso de accidentes o incidentes ocurridos en el laboratorio. Para ello es importante reconocer la información que proveen los productos y reactivos químicos a fin de clasificarlos, manipularlos, etiquetarlos y almacenarlos de manera correcta. Las dos herramientas más importantes de información en los productos y reactivos químicos son sus etiquetas y sus fichas de datos de seguridad (FDS o MSDS). La etiqueta debe contener, entre otras cosas, información acerca de su peligrosidad y su estabilidad en forma de símbolos y pictogramas. Las hojas de seguridad contienen información adicional acerca de su forma de almacenamiento y manipulación. I.X.I. NIVEL DE PELIGROSIDAD O RIESGO Para indicar la peligrosidad de las sustancias se han establecido diferentes clases de peligro según las propiedades fisicoquímicas, toxicológicas y ecotoxicológicas basadas, entre otras cosas, en los efectos sobre la salud y el medio ambiente. Dependiendo el sistema de clasificación utilizado, el código presente en las etiquetas de los productos químicos que representan el nivel de riesgo y peligrosidad de las sustancias será diferente. Por ejemplo: Sistema de clasificación NFPA (National Fire Protection Association) 704: emplea un rombo dividido en 4 colores, que indican el grado de peligrosidad mediante una numeración entre 0 y 4 (0- Insignificante; 1-Bajo; 2-Moderado; 3-Alto; 4-Extremo), excepto el color blanco, que incluye símbolos y letras. Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Productos y reactivos químicos 16 Sistema de clasificación según Naciones Unidas/NTC 1692: los productos están separados en 9 clases y cada clase se subdivide en subclases empleando un sistema de números y símbolos indicadores específicos del producto químico. Las diferentes clases indican el tipo de producto químico según: 1-Explosivo; 2-Gases; 3-Líquidos inflamables; 4-Solidos inflamables; 5-Comburentes y peróxidos orgánicos; 6-Sustancias toxicas e infecciosas; 7-Sustancias radiactivas; 8-Sustancias corrosivas; 9-Sustancias peligrosas varias. Frases R/S: son frases de riesgo (R) y seguridad (S) que sirven de guía para el etiquetado de productos peligrosos. Las frases R aportan una descripción general de los riesgos físico-químicos, ambientales y de salud de una sustancia; mientras que las frases S proporcionan información sobre el almacenamiento, el manejo y la eliminación seguros, los primeros auxilios y la protección de los trabajadores. I.X.II. ESTABILIDAD Existen productos químicos y bioquímicos que se pueden alterar con el paso del tiempo debido a sus características químicas. Se debe tener en cuenta que la mayoría de los productos bioquímicos tienden a descomponerse a temperatura ambiente (15-30 °C). A continuación se especifica una lista de las siglas comúnmente utilizadas para indicar características de estabilidad: A- alterabilidad genérica IG- higroscópico C- alterabilidad de color M- posible formación de mohos D- delicuescente O- oxidable E- eflorescente P- polimerizable F- posible alteración de la envase S- alteración de la superficie ID- hidrolizable I.X.III. CONSERVACIÓN Y ALMACENAMIENTO En términos generales, toda sustancia debe conservarse en el recipiente adecuado y herméticamente cerrado, en sitio seco y fresco, protegido del polvo y la luz directa, y evitando los cambios drásticos de temperatura. Algunas sustancias que tienden a descomponerse a temperatura ambiente deben conservarse refrigeradas a temperaturas inferiores a 0 ºC. Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Productos y reactivos químicos 17 I.XI. ETIQUETADO DE PRODUCTOS Y REACTIVOS QUÍMICOS El Sistema Globalmente Armonizado de Clasificación y Etiquetado de Productos Químicos (SGA o GHS, por su sigla en inglés) es un sistema acordado a nivel internacional, creado por las Naciones Unidas, que está formulado para unificar la comunicación de productos peligrosos. Según el sistema SGA, la etiqueta de todo producto y reactivo químico deberá presentarse en la lengua oficial, de forma clara, legible e indeleble, conteniendo, al menos, la siguiente información codificada: 1. Identificador de producto 2. Palabra indicadora 3. Pictogramas GHS 4. Indicaciones de peligro 5. Indicaciones de precaución 6. Información del proveedor 7. Requisitos adicionales del cliente I.XI.I. EJEMPLOS DE ETIQUETAS QUE SIGUEN EL SISTEMA SGA Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos Introducción: Productos y reactivos químicos 18 Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP01: Introducción al trabajo de laboratorio 19 TRABAJO PRÁCTICO Nº 1 Introducción al trabajo de laboratorio 1.1. Objetivos ............................................................................................................... 20 1.2. Actividad Nº 1: Introducción al laboratorio de química analítica ...................... 20 1.3. Actividad Nº 2: Calibración de material volumétrico ......................................... 20 1.3.1. Introducción ....................................................................................................................201.3.1.1. Fundamento de la determinación .............................................................................. 20 1.3.1.2. Conceptos relacionados con la calibración de material volumétrico ......................... 20 1.3.1.3. Método indirecto de calibración de material volumétrico: ......................................... 21 1.3.2. Procedimiento experimental ...........................................................................................22 1.3.2.1. Calibración de material TD (o Ex): pipeta aforada .................................................... 22 1.3.2.2. Calibración de material TC (o In): matraz aforado .................................................... 26 1.4. Actividad Nº 3: Preguntas Globalizadoras ......................................................... 27 Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP01: Introducción al trabajo de laboratorio 20 1.1. OBJETIVOS Conocer los fundamentos y las herramientas básicas de un laboratorio de análisis químico analítico; Reconocer los procedimientos generales básicos desarrollados en un laboratorio de química analítica; Afianzar la práctica en el uso de balanzas analíticas; Aprender prácticas de calibración de material volumétrico por método indirecto Interpretar e informar resultados analíticos con criterios de calidad. 1.2. ACTIVIDAD Nº 1: INTRODUCCIÓN AL LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA En esta instancia, se reproducirá un video realizado por miembros de la cátedra a fin de introducir los conceptos básicos y generales que serán utilizados en los trabajos prácticos durante el desarrollo de la asignatura. El video está disponible en internet y puede accederse desde YouTube mediante el siguiente enlace: https://www.youtube.com/watch?v=Xj92mbp1kWA&t=951s En el video se introducen, entre otros, todos los contenidos que se encuentran en la sección Introducción al laboratorio de química analítica, Material de laboratorio. 1.3. ACTIVIDAD Nº 2: CALIBRACIÓN DE MATERIAL VOLUMÉTRICO 1.3.1. INTRODUCCIÓN 1.3.1.1. Fundamento de la determinación La calidad de los resultados generados por un laboratorio de análisis tiene dos componentes fundamentales: el hábito de trabajo del analista y los medios materiales utilizados durante el análisis. En esto último, la calidad se concentra, fundamentalmente, en las características o prestaciones de los materiales y los instrumentos y su adecuado mantenimiento. Para garantizar la calidad, los materiales deben ser cuidadosamente utilizados y sometidos a calibración habitualmente. Calibrar significa comprobar la respuesta de un instrumento con un material de propiedades conocidas en condiciones perfectamente establecidas. En el laboratorio analítico se calibra todo tipo de material e instrumento, por ejemplo, material volumétrico de vidrio, balanzas analíticas, estufas, hornos (muflas), etc., como también, instrumentos más complejos, tales como espectrofotómetros de absorbancia, cromatógrafos líquidos y gaseosos. Los materiales volumétricos de vidrio utilizados rutinariamente en los laboratorios de análisis deben ser calibrados siguiendo las especificaciones del fabricante. El proceso de calibración tiene por objeto determinar el valor exacto medido por el instrumento en condiciones perfectamente conocidas, independientemente de lo que haya sido establecido por el fabricante como valor nominal a la temperatura declarada. En el proceso de calibración se evalúan la exactitud y la precisión del instrumento en su medición. 1.3.1.2. Conceptos relacionados con la calibración de material volumétrico Tolerancia o límite de error: valores de error fijados y tabulados por organismos de estándares a los que deben ajustarse los fabricantes al confeccionar el instrumento. Indican el https://www.youtube.com/watch?v=Xj92mbp1kWA&t=951s Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP01: Introducción al trabajo de laboratorio 21 volumen por exceso o defecto permitido en la lectura de volumen en su valor nominal. Por ejemplo, una tolerancia de 0.05 mL para una pipeta aforada de volumen nominal de 50.00 mL indica que el volumen total dispensado por el material oscila entre un mínimo de 49.95 y un máximo de 50.05 mL. Incertidumbre: cada lectura registrada o medición de volumen está sujeta a una incertidumbre establecida. Esta incertidumbre da idea de la precisión del instrumento al realizar una única medición. Cada material de vidrio volumétrico presenta una incertidumbre asociada la que se determina mediante calibración. En general, si no se conoce la incertidumbre real de una medición (generalmente el intervalo de confianza) se utiliza la tolerancia del material como incertidumbre absoluta (Ia) de la medición. Exactitud: se refiere a la diferencia entre el volumen medido y el volumen nominal (indicado por el fabricante) y es evaluada mediante un parámetro estadístico que indica la inexactitud de la medida, denominado error absoluto (Ea). El Ea se obtiene según: 𝐸𝑎 = �̅� − 𝑥 donde �̅� es el valor medido promedio obtenido durante el proceso de calibración y x es el valor nominal informado. Precisión: se refiere a la reproducibilidad del resultado obtenido y se evalúa mediante un parámetro estadístico que indica la impresión de la medida, denominado desviación estándar (s). La s se obtiene según: 𝑠 = √ ∑ (𝑥𝑖 − �̅�) 2𝑁 1 𝑛 − 1 donde xi es el valor individual medido de cada N medición; �̅� es el valor medido promedio obtenido durante el proceso de calibración y n es el número de mediciones realizadas en el proceso de calibración. 1.3.1.3. Método indirecto de calibración de material volumétrico: El método indirecto de calibración de material volumétrico se realiza mediante la medición de masa de un líquido de densidad conocida, generalmente agua, que es dispensado o contenido en el material de vidrio a calibrar. Todo el proceso de calibración debe realizarse a temperatura conocida y controlada. Para materiales TD (o Ex) es necesario considerar, entre otras cosas, el tiempo de descarga o escurrimiento, a fin de minimizar los errores en la medición. La temperatura de medición es un parámetro muy importante a tener en cuenta debido a que el volumen de un líquido es dependiente de la temperatura a la cual está sometido. Generalmente, una temperatura de 20°C se considera temperatura estándar. Todos los materiales de vidrio deben tener especificado el volumen nominal y la temperatura a la que se realizó la calibración. Así, es posible obtener el volumen correcto corregido por efecto de temperatura. Si la temperatura de calibración es diferente a la informada por el fabricante, se debe realizar una corrección a partir de los datos de densidad tabulados a diferentes temperaturas del líquido utilizado para la determinación. El tiempo de descarga y espera son un parámetros que debe tenerse en cuenta durante el uso y la calibración de los materiales de vidrio TD (o Ex). Este valor indica el tiempo mínimo de escurrimiento que debe respetarse a fin de asegurar la transferencia correcta del líquido medido. Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP01: Introducción al trabajo de laboratorio 22 1.3.2. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 1.3.2.1. Calibración de material TD (o Ex): pipeta aforada Material volumétrico a calibrar Pipeta aforada de vidrio IVA Volumen nominal: 10mL Tolerancia: ±0.020. Clase AS TD (o Ex + 15s) 20ºC Método Método indirecto por medición de masa de agua destilada. Material necesario 1. Pipeta aforada de 10.00 mL a calibrar 2. Propipeta 3. Agua destilada 4. Erlenmeyer de 50 mL 5. Termómetro 6. Balanza analítica 7. Tabla de volúmenes específicos (Anexo I) Procedimiento Etapa 1: operatoria experimental 1. Colocar un recipiente pequeño con agua destilada en el gabinete de la balanza a fin de saturarel ambiente de humedad. 2. Colocar el erlenmeyer vacío y limpio en el platillo de la balanza y llevar la balanza a cero. Las balanzas disponibles en el laboratorio cuentan con la opción de “tara”, que permite llevar a cero la pantalla. 3. Cargar la pipeta a calibrar con agua destilada y trasferir el líquido al erlenmeyer sin retirarlo de la balanza y respetando el tiempo de escurrimiento. 4. Registrar la masa del volumen dispensado y la temperatura del agua cuando se realizó la medición. 5. Sin descartar el líquido, llevar la balanza a cero. 6. Repetir un total de 10 veces los pasos 3 a 5. Etapa 2: tabulación de datos experimentales Los valores son presentados a modo de ejemplo Medición Masa de agua medida (g) (magua) Temperatura del agua ºC) 1 9.9700 21 2 9.9768 21 3 9.9791 21 4 9.9820 21 5 9.9874 21 6 9.9785 21 7 9.9509 21 8 9.9662 21 9 9.9650 21 10 9.9540 21 Etapa 3: cálculos para la obtención de volumen de agua dispensada Para convertir el valor de masa a valor de volumen es necesario emplear el valor de volumen específico correspondiente a la sustancia utilizada a la temperatura en la que se realizó la medición. Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP01: Introducción al trabajo de laboratorio 23 En el Anexo I se encuentran los valores tabulados de volúmenes específicos para agua destilada a diferentes temperaturas. Así, empleando la expresión de cálculo para la conversión de masa a volumen, se obtiene: 𝑣𝑜𝑙𝑎𝑔𝑢𝑎 [𝑚𝐿] = m𝑎𝑔𝑢𝑎 [𝑔] × 𝑣𝑜𝑙𝑒𝑠𝑝 [ 𝑚𝐿 𝑔 ] a 20 ºC De esta manera, siguiendo el ejemplo, se obtienen: Medición Masa de agua medida (g) (magua) Volumen específico (mL/g) para Tagua = 21 ºC Volumen de agua (mL) a 20 ºC 1 9.9700 1.00301 10.00001 2 9.9768 1.00301 10.00683 3 9.9791 1.00301 10.00914 4 9.9820 1.00301 10.01205 5 9.9874 1.00301 10.01746 6 9.9785 1.00301 10.00853 7 9.9509 1.00301 9.98085 8 9.9662 1.00301 9.99620 9 9.9650 1.00301 9.99499 10 9.9540 1.00301 9.98396 Etapa 4: obtención y expresión del resultado analítico Para la correcta expresión del resultado analítico en un procedimiento que incluye réplicas de una medición se debe proseguir de la siguiente manera: 1. Obtención del número de cifras significativas mediante la estrategia de propagación del error A partir de la expresión de cálculo utilizada para la obtención del volumen es posible identificar los factores que contribuyen al error. En este caso experimental, el error está dado por el error instrumental de la balanza analítica, es decir, su incertidumbre absoluta (Ia,balanza) en cada medición, y la incertidumbre del volumen específico. Hay que tener en cuenta que en el procedimiento experimental se realizaron dos lecturas por cada registro de masa: 1- tara de balanza al inicio del procedimiento y 2- lectura de la masa de agua dispensada. La incertidumbre de la masa de agua medida se obtiene considerando entonces que se realizó una resta entre el valor del recipiente antes y después del agregado de agua. Así, 𝐈𝐚,magua = √(𝐈𝐚,tara) 2 + (𝐈𝐚,medicion) 2 = √(𝐈𝐚,balanza) 2 + (𝐈𝐚,balanza) 2 = √(0.1 𝑚𝑔)2 + (0.1 𝑚𝑔)2 𝐈𝐚,magua = 0.14 𝑚𝑔 Por otro lado, para los datos tabulados se considera que la incertidumbre absoluta está en la última cifra significativa. De esta manera, para el volumen específico (1.00301 mL/g) se tiene que: 𝐈𝐚,volesp = 0.00001 𝑚𝐿/𝑔 Una vez obtenidas las incertidumbres absolutas de cada término, se calculan las incertidumbres relativas (Ir) de cada factor involucrado en el cociente de la expresión de cálculo, es decir, magua y volesp, según: 𝐈𝐫,magua = 𝐈𝐚,magua magua = 0.14 𝑚𝑔 9950.9 𝑚𝑔 = 1.4 × 10−5 Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP01: Introducción al trabajo de laboratorio 24 (Aclaración: cuando se tiene una serie de valores para una dada medición, se sugiere realizar el cálculo de Ir utilizando en el denominador el valor más pequeño, debido a que será el que introduce mayor error) 𝐈𝐫,volesp = 𝐈𝐚,volesp volesp = 0.00001 𝑚𝐿/𝑔 1.00301 𝑚𝐿/𝑔 = 1.0 × 10−5 Finalmente, la Ir del resultado se obtiene según: 𝐈𝐫,vol𝑎𝑔𝑢𝑎 = √(𝐈𝐫,magua) 2 + (𝐈𝐫,volesp) 2 = √(1.4 × 10−5)2 + (1.0 × 10−5)2 = 1.7× 10 −5 Y, por lo tanto: 𝐈𝐚,vol𝑎𝑔𝑢𝑎 = 𝐈𝐫,vol𝑎𝑔𝑢𝑎 × 𝑣𝑜𝑙𝑎𝑔𝑢𝑎 = 1.7× 10 −5 × 10.01746 𝑚𝐿 𝐈𝐚,vol𝑎𝑔𝑢𝑎 = 1.7 × 10 −4 𝑚𝐿 = 0.00014 𝑚𝐿 Con el valor de Ia del resultado se ajustan todos los valores calculados de volumen al número correspondiente de cifras significativas, en este caso, al 4 to decimal. Los valores del ejemplo quedaran expresados como: Volumen de agua medido (mL) Volumen de agua ajustado (mL) 10.00001 10.0000 10.00683 10.0068 10.00914 10.0091 10.01205 10.0121 10.01746 10.0175 10.00853 10.0085 9.98085 9.9809 9.99620 9.9962 9.99499 9.9950 9.98396 9.9840 2. Detección de valores atípicos mediante test Q o test de Dixon En primer lugar, los valores ajustados obtenidos en el paso anterior deben ser ordenados de manera ascendente o descendente a fin de evaluar los extremos de la serie de datos. Los datos del ejemplo se ordenaron de manera descendente y se obtuvieron los valores Q experimentales para cada valor extremo: 10.0175 - 10.0121 -10.0091 - 10.0085 - 10.0068 - 10.0000 - 9.9962 - 9.9950 - 9.9840 – 9.9808 𝑄𝑒𝑥𝑝,1 = | 10.0175 − 10.0121 10.0175 − 9.9808 | = 0.15 y 𝑄𝑒𝑥𝑝,2 = | 9.9808 − 9.9840 10.0175 − 9.9808 | = 0.09 Considerando una serie de n=10 datos y una confianza del 90%, se obtiene el valor de tabla Q10,0.01=0.412 (Anexo I). Para ambos extremos, Qexp<Qtabla y, por lo tanto, NO se rechaza ningún valor de la serie. 3. Obtención de estadísticos y cálculo de intervalo de confianza La obtención de los estadísticos involucra el cálculo de los estimadores de la media (�̅�, promedio) y la desviación estándar (s). Así, para n=10: Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP01: Introducción al trabajo de laboratorio 25 �̅� = 1 𝑛 ∑ 𝑥𝑖 𝑛 𝑖=1 = 10.00099 𝑚𝐿 y 𝑠 = √ 1 𝑛−1 ∑ (𝑥𝑖 − �̅�) 2𝑛 𝑖=1 = 0.012 𝑚𝐿 Para el cálculo del intervalo de confianza (IC) se necesita el valor de t-Student tabulado para n-1 grados de libertad y 95% de confianza. Del anexo I se tiene que t9,0.95 = 2.26. Finalmente, el IC se obtiene según: 𝐼𝐶 = 𝑡9,0.95 × 𝑠 √𝑛 = 2.26 × 0.012 𝑚𝐿 √10 = 0.009 𝑚𝐿 4. Expresión correcta del resultado Para la expresión correcta del resultado se debe considerar el número de cifras significativas del IC y, si es necesario, ajustar el resultado nuevamente. De esta manera, el resultado final se expresa como �̅� ± 𝐼𝐶. Para el presente caso, el resultado de la calibración del material volumétrico se informa como: Etapa 5: análisis estadístico de los resultados A fin de evaluar el resultado y extraer conclusiones analíticas acerca de los valores obtenidos, se obtienen parámetros estadísticos adicionales y se realizan test de hipótesis. Para este caso, se realizará un test t que permita comparar el valor experimental promedio (�̅�) con el valor aceptado como verdadero (μ), es decir, el valor nominal del instrumento calibrado. Para realizar el test, se consideran los valores a comparar y se obtiene un valor t experimental según la siguiente expresión: 𝑡𝑒𝑥𝑝 = |�̅� − 𝜇| 𝑠 √𝑛 ⁄ Utilizando los valores obtenidos en las etapas anteriores, se tiene que: 𝑡𝑒𝑥𝑝 = |10.001 − 10.00| 0.012 √10 ⁄ = 0.263 Considerando n-1 grados de libertad (n=10) y una confianza del 95%, se obtiene el valor de tabla t9,0.05=2.26 (Anexo I). Como texp<ttabla y, por lo tanto, se acepta la hipótesis de igualdad de medias: El valor promedio obtenido no presenta diferencia estadísticamente significativa con el valor nominal. Finalmente, al comparar el valor obtenido de incertidumbre del resultado, en este caso, de intervalo deconfianza, con el valor informado de tolerancia o límite de error, se observa que el valor experimental (± 0.009 mL) es inferior al valor de tolerancia establecido por el fabricante (± 0.020 mL) Estos valores indican el material conserva la calidad en su medición en términos de exactitud y precisión. Etapa 6: informe de resultados Modelo de informe sintético Volumen de calibración: (10.001 ± 0.009) mL a 20ºC Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP01: Introducción al trabajo de laboratorio 26 1.3.2.2. Calibración de material TC (o In): matraz aforado Material volumétrico a calibrar Matraz aforado de vidrio IVA Volumen nominal: 10mL Tolerancia: ±0.025 Clase A TC (o In) 20ºC Método Método indirecto por medición de masa de agua destilada. Material necesario 1. Matraz de 10.00 mL a calibrar 2. Agua destilada 3. Termómetro 4. Balanza analítica 5. Tabla de volúmenes específicos (Anexo I) Procedimiento Etapa 1: operatoria experimental 1. Colocar un recipiente pequeño con agua destilada en el gabinete de la balanza a fin de saturar el ambiente de humedad. 2. Colocar el matraz aforado de 10.00 mL vacío y seco con su tapa en el platillo de la balanza y registrar la lectura de la balanza como matraz vacío. 3. Cargar el matraz con agua destilada hasta su enrase y tapar. 4. Registrar la masa del matraz lleno y la temperatura del agua cuando se realizó la medición. 5. Vaciar el matraz tomándolo con pinzas o con un paño. 6. Repetir un total de 10 veces los pasos 3 a 5. Etapa 2: tabulación de datos experimentales Medición Masa de matraz (g) (mmatraz) Masa de agua medida (g) (magua) Temperatura del agua (ºC) Matraz vacío 7.8654 - 21 1 17.8354 17.8354–7.8654 = 9.9700 21 2 17.8445 9.9768 21 3 17.8474 9.9791 21 4 17.8528 9.9820 21 5 17.8439 9.9874 21 6 17.8163 9.9785 21 7 17.8316 9.9509 21 8 17.8304 9.9662 21 9 17.8194 9.9650 21 10 17.8445 9.9540 21 Material de laboratorio: Pipeta aforada simple aforo Volumen nominal 10 mL Informaciones del material: Tolerancia 0.02mL Clase AS; TD (o Ex + 5s) 20ºC Determinación: Calibración de material TD Método: Indirecto por diferencia de masa. Resultado: (10.001 ± 0.009) mL a 20ºC Observaciones: Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP01: Introducción al trabajo de laboratorio 27 Etapa 3 cálculos para la obtención de volumen de agua contenida; -4: obtención y expresión del resultado analítico; -5: análisis estadístico de los resultados; -6: informe de resultados Seguir los pasos indicados en las etapas 3-6 de la sección 1.3.2.1. 1.4. ACTIVIDAD Nº 3: PREGUNTAS GLOBALIZADORAS 1. La diferencia entre un material TC (o In) y TD (o Ex) radica en: a. El uso para el que se dispone b. La calidad del material c. La manera en que ha sido calibrado de fábrica 2. La medición de temperatura durante la calibración de material volumétrico por método indirecto se realiza porque: a. Permite corregir el volumen calculado a la temperatura a la que el material ha sido calibrado b. Afecta a la lectura de la masa del líquido c. Afecta al volumen medido del líquido 3. Respetar el tiempo de descarga o escurrimiento de los materiales TD (o Ex): a. Es necesario solo durante el proceso de calibración del material para asegurar su calidad b. Es necesario para evitar errores en el uso del material durante todo su vida útil c. No es estrictamente necesario porque no introduce errores significativos de lectura de volumen Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP02: Sustancias y soluciones 28 TRABAJO PRÁCTICO Nº 2 Sustancias y soluciones 2.1. Objetivos ..................................................................................................................... 29 2.2. Actividad Nº 1: Análisis de sustancias y productos químicos (PQ) ........................ 29 2.2.1. Introducción ........................................................................................................................... 29 2.2.1.1. Catálogos comerciales ................................................................................................... 29 2.2.2. Procedimiento experimental .................................................................................................. 29 2.3. Actividad Nº 2: Preparación de solución patrón primario ....................................... 31 2.3.1. Introducción ........................................................................................................................... 31 2.3.1.1. Soluciones patrones ....................................................................................................... 31 2.3.1.1.1. Solución patrón primario – SPP .................................................................................. 31 2.3.1.1.2. Solución patrón secundario – SPS ............................................................................. 32 2.3.2. Preparación de Solución Patron Primario ............................................................................. 33 2.3.2.1. Planteo del problema analítico ....................................................................................... 33 2.3.2.2. Procedimiento experimental ........................................................................................... 33 2.4. Actividad Nº 3: Determinación de humedad de una sustancia ................................ 36 2.4.1. Introducción ........................................................................................................................... 36 2.4.1.1. Fundamento de la determinación ................................................................................... 36 2.4.1.2. Métodos analíticos para la determinación del % de humedad....................................... 37 2.4.1.3. Operatoria general para la determinación del %H por método indirecto ....................... 37 2.4.2. Procedimiento experimental .................................................................................................. 38 2.5. Actividad Nº 4: Preparación de una solución muestra ............................................. 41 2.5.1. Introducción ........................................................................................................................... 41 2.5.2. Procedimiento experimental .................................................................................................. 41 2.5.2.1. Planteo del problema analítico ....................................................................................... 41 2.5.2.1. Preparación de la solución muestra ............................................................................... 41 2.6. Actividad Nº 5: Preguntas globalizadoras ................................................................. 43 DOCUMENTACIÓN ANEXA ..................................................................................................... 45 Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP02: Sustancias y soluciones 29 2.1. OBJETIVOS Adquirir criterios analíticos para el análisis y la selección de productos químicos. Adquirir destreza en la preparación de soluciones de diferente naturaleza. Desarrollar criterio analítico para reconocer y diferenciar las soluciones y sustancias utilizadas y/o analizadas en un laboratorio de análisis químico. Desarrollar criterios analitos para realizar el análisis de una muestra. Determinar parámetros de calidad de una sustancia. 2.2. ACTIVIDAD Nº 1: ANÁLISIS DE SUSTANCIAS Y PRODUCTOS QUÍMICOS (PQ) 2.2.1. INTRODUCCIÓN 2.2.1.1. Catálogos comerciales Para seleccionar el producto químico más adecuado para el análisis que ha de realizarse, deben considerarse varios aspectos importantes en términos de calidad, pureza y finalidad analítica. Para ello, debe realizarseun exhaustivo análisis de la información provista en los catálogos de los proveedores de reactivos y productos químicos como también de sus etiquetas. Un catálogo comercial, además de la oferta comercial de sustancias y PQ, provee información química relevante acerca de la naturaleza del producto que se desea adquirir. Los comúnmente utilizados son los catálogos provistos por las casas comerciales de Sigma-Aldrich y Merck-Millipore, que actualmente se encuentran unificadas como Merck. El portal de internet de Sigma-Aldrich ( www.sigmaladrich.com) cuenta con una vasta variedad de productos de diversa calidad y especificaciones. A modo de ejemplo, se muestra la captura de pantalla de las primeras opciones obtenidas en la búsqueda de la sustancia sólida de cloruro de sodio (NaCl). El NaCl también puede encontrarse en solución, especificándose en cada caso su concentración molar y el solvente en el que ha sido preparada, o formando parte de otras soluciones. 2.2.2. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL En esta actividad se analizará la información suministrada por el catálogo comercial de Sigma- Aldrich y Merck-Millipore para el PQ NaCl. Se analizará la información de las diferentes opciones http://www.sigmaladrich.com/ Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP02: Sustancias y soluciones 30 evaluando al PQ en términos de calidad, pureza, especificaciones especiales, usos y precio. Para ello se utilizarán las hojas de especificaciones de cada uno que se encuentran al final de este trabajo práctico y los detalles que abajo se describen. 1. Opción 1: Merck 2. Opción 2: Sigma–Aldrich 3. Opción 3: Sigma–Aldrich 4. Opción 4: Sigma–Aldrich Código: 106406 Descripción: 99.99 Suprapur® Precio: 50G- 134.40 U$D 500G- 492.00 U$D Código: 31434 Descripción: purísimo, p.a., reactivo ACS, reactivo ISO, reactivo Ph.Eur, 99.5% (Sigma- Aldrich) Precio: 500G- 160.54 U$D 1KG- 229.16 U$D Código: S3014 Descripción: para biología molecular, DNasa, RNasa y proteasa, no detectadas 98% (titulación) (Sigma) Precio: 500G- 90.63 U$D 1KG- 186.44 U$D Código: PHR1321 Descripción: estándar secundario farmacéutico, material de referencia certificado (Sigma- Aldrich) Precio: 5G- 90.63 U$D Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP02: Sustancias y soluciones 31 2.3. ACTIVIDAD Nº 2: PREPARACIÓN DE SOLUCIÓN PATRÓN PRIMARIO 2.3.1. INTRODUCCIÓN 2.3.1.1. Soluciones patrones En un laboratorio de análisis químico, las soluciones patrones cumplen un rol primordial en la mayoría de los métodos de análisis, siendo fundamentales en los métodos de análisis por valoración. Es por ello que resulta necesario conocer las características que presentan las diferentes soluciones, como también, considerar cómo es su preparación y la expresión de su concentración. De esto dependerá la validez del resultado analítico alcanzado. Las soluciones patrones pueden ser de dos tipos: primario y secundario. Una de las principales diferencia entre estas soluciones es la manera en la que se establece la concentración exacta de la solución preparada. Una solución patrón puede ser preparada por disolución de la sustancia sólida o por dilución de una solución más concentrada. Para la disolución de una sustancia se debe tener en cuenta, entre otras cosas, su solubilidad en el solvente que se utilizará para la preparación. En cambio, para la dilución de una solución más concentrada se debe considerar el solvente en el que ha sido preparada la solución a diluir y el solvente en la que se preparará la solución diluida. El solvente utilizado universalmente para la preparación de soluciones patrones es el agua de laboratorio (destilada, ultra- pura, de ósmosis inversa); en caso de haber sido preparada con otro solvente, debe estar claramente especificado en su rótulo. 2.3.1.1.1. SOLUCIÓN PATRÓN PRIMARIO – SPP Son soluciones preparadas a partir de sustancias que cumplen con las especificaciones de una sustancia estándar primario o sustancia patrón primario (spp). Se utilizan para la valoración de muestras o soluciones que no cumplen las especificaciones de patrón primario. Una spp (sustancia) es un compuesto de alta pureza que se utiliza como material de referencia en métodos de valoración gravimétricos y volumétricos. Un compuesto considerado spp debe reunir los siguientes requerimientos: tener una pureza mayor al 99.9%, con un nivel de impureza tolerable de 0.01-0.02%, especificándose los métodos establecidos para confirmar su pureza, ser indefinidamente estable a temperatura ambiente y estable a temperaturas de secado, no contener agua de hidratación para evitar modificaciones en su composición con las variaciones de humedad, presentar una masa molar razonablemente elevada de manera de minimizar el error relativo al pesar una masa del patrón, ser de fácil obtención y relativamente de bajo costo. Hay muy pocos compuestos y soluciones que cumplen con los requisitos descritos y sólo se dispone de un número limitado de patrones primarios. Preparación de una SPP por disolución de una spp Una SPP puede ser preparada por pesada de una masa correspondiente de spp y posterior disolución. Las spp deben secarse siempre antes de utilizarse a fin de eliminar trazas de agua adsorbida desde la atmósfera. Para la preparación de una SPP se utilizan balanzas analíticas calibradas y material de vidrio para medición de volumen exacto, de alta calidad, por ejemplo, matraz aforado y pipeta aforada. Debido a la elevada pureza de la sustancia (spp, 99.9%) y el uso de material volumétrico exacto de alta calidad, la concentración de estas soluciones se obtiene directamente a partir de la relación entre la masa pesada y el volumen preparado. Por ejemplo, la concentración expresada en mol/L de una SPP, se calcula según [𝐒𝐏𝐏] [ 𝑚𝑜𝑙 𝐿 ] = 𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑝𝑒𝑠𝑎𝑑𝑎 [𝑔] 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑝𝑟𝑒𝑝𝑎𝑟𝑎𝑑𝑜 [𝐿] × 1 𝑃𝐹 [ 𝑔 𝑚𝑜𝑙 ] Química Analítica I, FBCB, UNL Trabajos Prácticos TP02: Sustancias y soluciones 32 Entonces, para asegurar la veracidad de la concentración de la solución es necesario extremar los cuidados durante su preparación, entre ellos, realizar una pesada meticulosa de la sustancia sólida, realizar una transferencia cuantitativa de la sustancia pesada a un matraz volumétrico y completar exactamente el volumen con el solvente, sin cometer errores de paralaje. Preparación de una SPP por dilución de una SPP concentrada Una SPP puede ser preparada también por dilución de una SPP más concentrada. En ese caso, la concentración se determina a partir del factor de dilución aplicado a la mayor concentración y su incertidumbre se calcula a partir de la propagación de los errores asociados a la dilución y la concentración de la solución más concentrada. Una SPP preparada por dilución no necesita ser valorada debido a que su carácter de patrón primario se mantiene si se respetan las consideraciones experimentales necesarias para su correcta preparación, entre otras cosas, la utilización de material volumétrico exacto. Así, la concentración de la SPP preparada por dilución se obtiene considerando que el número de moles de sustancia contenidos en un volumen V de concentración molar [SPP] son iguales en ambas soluciones, concentrada y diluida, es decir: [𝐒𝐏𝐏𝒄𝒐𝒏𝒄] [ 𝑚𝑜𝑙 𝐿 ] × 𝑉𝑐𝑜𝑛𝑐[𝑚𝐿] = [𝐒𝐏𝐏𝒅𝒊𝒍] [ 𝑚𝑜𝑙 𝐿 ] × 𝑉𝑑𝑖𝑙[𝑚𝐿] De esta relación, se tiene que [𝐒𝐏𝐏𝒅𝒊𝒍] [ 𝑚𝑜𝑙 𝐿 ] = [𝐒𝐏𝐏𝒄𝒐𝒏𝒄] [ 𝑚𝑜𝑙 𝐿 ] × 𝑉𝑐𝑜𝑛𝑐[𝑚𝐿] 𝑉𝑑𝑖𝑙[𝑚𝐿] = [𝐒𝐏𝐏𝒄𝒐𝒏𝒄] × 𝐷 Siendo D el factor de dilución aplicado a la concentración de la solución más concentrada. En términos experimentales, Vconc se refiere al volumen de la alícuota tomada de la solución concentrada, que ha de tomarse con pipeta aforada y Vdil es el volumen de solución diluida
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