PRACTICA ELECTROFORESIS

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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA 
FACULTAD DE CIENCIAS 
ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
INTEGRANTES: 
Álvarez Huaytan Katherine Aracely 
Herrera Perez Delfina Karen 
Otiniano Jiménez Patricia Alexandra 
Palacios Pascual Ainnie Mackenzy 
Rodríguez Espejo Manuel Isaías 
DOCENTE: 
Mg. William Capa 
CURSO: 
Ingeniería Genetics 
TEMA: 
Práctica N° 5 
CICLO: 
VI 
 
Nuevo Chimbote-Perú 
2021 
INGENIERÍA GENÉTICA 
 
 
 
PRACTICA N°5 
ELECTROFORESIS 
 
INTRODUCCION 
 
La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con 
la finalidad de separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa. 
Fue empleado por primera vez por en el año 1937, pero su importancia vino a incrementarse cuando en 
los años cincuenta E. L.Durrum y Arne W.K. Tiselius , impulsaron la electroforesis de zona, nombre que 
se asignó a la separación de materiales en un campo eléctrico en presencia de algún tipo de soporte; 
aunque este término se limitó originalmente al análisis de coloides y partículas submicroscopicas , se ha 
convertido en estos últimos años en una metodología aplicada a sustancias de bajo peso molecular. 
Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta son colocadas en un campo eléctrico, estas 
experimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta, dejando transcurrir cierto 
tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas 
cargadas positivamente se desplazaran hacia el ánodo (el polo positivo). 
La electroforesis de DNA y proteínas tiene muchas aplicaciones entre ellas, el comparar patrones de 
bandas de diferentes muestras biológicas, comparar muestras de individuo sano frente a individuo 
enfermo, para la identificación de ácidos nucleicos de la biodiversidad o de agentes infecciosos, así 
como también sirve para los trabajos de hibridaciones, amplificaciones, secuenciaciones, clonaciones y 
mejoramiento genético. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
INGENIERÍA GENÉTICA 
 
 
 
METODOLOGIA 
El presente trabajo tuvo que determinar el tamaño de fragmentos de ADN a partir de datos obtenidos de 
la fotografía del gel de la siguiente figura y tabla. Se tabularon los datos en el programa Microsoft Excel 
y se realizaron 2 tipos de regresiones. 
 
Figura 1. Fotografía del gel de agarosa (electroforesis) 
INGENIERÍA GENÉTICA 
 
 
 
Los datos de la tabla anterior se tabularon en el programa Microsoft Excel, siendo el tamaño de los 
fragmentos en bp la columna respecto a la variable independiente, mientras que la distancia medida en 
cm, en una columna al costado siendo esta última la relacionada a la variable dependiente. 
2.1. Regresión lineal 
Con el fin de describir la relación de dependencia entre el tamaño del fragmento y la distancia en 
cm, mediante el siguiente modelo matemático: 
𝑌 = 𝛽0 + 𝛽1𝑋 
Se realizó un gráfico de dispersión, en cuyo caso se le agregó una línea de tendencia lineal, el 
coeficiente de determinación 𝑅2 y la ecuación respectiva. (Grafica 1). 
2.2. Regresión logarítmica 
Con el fin de describir la relación de dependencia entre el tamaño del fragmento y la distancia 
medida en cm, mediante el siguiente modelo matemático: 
𝑌 = 𝑎 ∗ 𝑙𝑛(𝑋) + 𝑏 
Se realizó también un gráfico de dispersión, en cuyo caso se le agregó una línea de tendencia 
logarítmica, el coeficiente de determinación 𝑅2 y la ecuación respectiva (Grafica 2). 
 
 
 
INGENIERÍA GENÉTICA 
 
III. RESULTADOS: 
 
 III.1. GRÁFICA LINEAL 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Gráfica 1. Relación entre el tamaño de fragmentos en pares de bases y la distancia en cm en los 
datos obtenidos de los diferentes carriles, por regresión lineal. 
 
ECUACION DE LA RECTA 
La ecuación de la recta obtenida en el gráfico 1 es la siguiente: 
y = -0.0029x + 6.0424 
Sin embargo, se busca hallar el tamaño de los fragmentos por ello despejamos en función a x: 
𝒙 =
𝒚 − 𝟔. 𝟎𝟒𝟐𝟒
−𝟎. 𝟎𝟎𝟐𝟗
 
Una vez obtenida la función, pasamos a reemplazar los datos de la variable y (distancia en cm) 
 En el carril 4: 
Medida 4.1 cm: 
𝑥 =
4.1 − 6.0424
−0.0029
 
X=670 bp 
 En el carril 5: 
Medida 5.3 cm: 
y = -0.0029x + 6.0424 
R² = 0.872 
0
1
2
3
4
5
6
7
8
0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600
D
is
ta
n
ci
a 
(c
m
) 
Tamaños de fragmentos (bp) 
Tamaños de fragmentos vs Distancia 
INGENIERÍA GENÉTICA 
 
𝑥 =
5.3 − 6.0424
−0.0029
 
X=256 bp 
 En el carril 6: 
Medida 6.4 cm: 
𝑥 =
6.4 − 6.0424
−0.0029
 
X= -123 bp 
 En el carril 7: 
Medida 4.4 cm: 
𝑥 =
4.4 − 6.0424
−0.0029
 
X=566 bp 
 
 
 
 
III.2. GRÁFICA LOGARITMICA 
 
Gráfica 2. Relación entre el tamaño de fragmentos en pares de bases y la distancia en cm en los 
datos obtenidos de los diferentes carriles, por método logarítmico. 
 
y = -1.794ln(x) + 15.295 
R² = 0.998 
0
1
2
3
4
5
6
7
8
0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600
D
is
ta
n
ci
a 
(c
m
) 
Tamaños de fragmentos (bp) 
Tamaños de fragmentos vs Distancia 
INGENIERÍA GENÉTICA 
 
 
ECUACION DE LA RECTA 
La ecuación de la recta obtenida en el gráfico 1 es la siguiente: 
y = -1.794ln(x) + 15.295 
Sin embargo, se busca hallar el tamaño de los fragmentos por ello despejamos en función a x: 
𝒙 = 𝒆𝐲 −𝟏𝟓.𝟐𝟗𝟓/−𝟏.𝟕𝟗𝟒 
Una vez obtenida la función, pasamos a reemplazar los datos de la variable y (distancia en cm) 
 En el carril 4: 
Medida 4.1 cm: 
𝒙 = 𝒆𝟒.𝟏 −𝟏𝟓.𝟐𝟗𝟓/−𝟏.𝟕𝟗𝟒 
X=513 bp 
 En el carril 5: 
Medida 5.3 cm: 
𝒙 = 𝒆𝟓.𝟑−𝟏𝟓.𝟐𝟗𝟓/−𝟏.𝟕𝟗𝟒 
X=263 bp 
 En el carril 6: 
Medida 6.4 cm: 
𝒙 = 𝒆𝟔.𝟒 −𝟏𝟓.𝟐𝟗𝟓/−𝟏.𝟕𝟗𝟒 
X=142 bp 
 En el carril 7: 
 
Medida 4.4 cm: 
𝒙 = 𝒆𝟒.𝟒−𝟏𝟓.𝟐𝟗𝟓/−𝟏.𝟕𝟗𝟒 
X=434 bp 
 
 
 
 
 
 
 
 
INGENIERÍA GENÉTICA 
 
IV. DISCUSIONES 
 
Respecto a los resultados obtenidos en la gráfica 1 y 2, se observa el análisis de regresión para estimar 
las relaciones entre el tamaño del fragmento del ADN y la distancia en cm, sin embargo, un dato muy 
relevante es el hecho de que en la gráfica de regresión lineal, las diferencias entre los valores observados 
y los valores de predicción del modelo son pequeñas, pero en algunos puntos, esta diferencia crece 
significativamente, circunstancia que no sucede en la gráfica 2 de regresión logarítmica. Esto puede 
explicarse por los valores de coeficientes de determinación 𝑅2, que aunque ambos están en un rango 
aceptable, el coeficiente del primer tipo de regresión tan solo explia el 87.2% de la varianza, mientras 
que el de la regresión logarítmica explica 99.9%, lo que indica que los puntos de los datos de este 
último, estarán más cerca de la línea de regresión ajustada. 
 
 
V. CONCLUSIONES 
Podemos concluir que en el carril n°4 se obtiene una longitud de 670 pares de bases mediante el 
método de regresión lineal, siendo este resultado el mayor con respecto a los carriles 5, 6, 7. Sin 
embargo, mediante el método logarítmico resulto 513 pares de base de longitud. 
Por otro lado, en el carril n°5 se obtuvo una longitud de 256 pares de bases, mediante regresión 
lineal y por el método logarítmico, 263 pares de bases. 
Además, el carril n°6 nos dio como resultado -123 pares de base de longitud luego de ser sometido 
a regresión lineal, mientras que por el método logarítmico, este nos dio una longitud de 142 pares 
de bases. 
finalmente, en el carril n°7 se obtuvo 566 pares de bases siendo este el ultimo carril analizado por 
el método de regresión lineal, sin embargo, por el método logarítmico nos dio un resultado de 434 
pares de bases. 
 
VI. CUESTIONARIO 
 
1. ¿Qué es un marcador o ladder? ¿Por qué éste es considerado un estándar en el laboratorio? 
Los marcadores de 100 bp DNA Ladder son una combinación única de productos de PCR y 
plásmidos preparados con los enzimas adecuados
de restricción para proporcionar 11 
fragmentos que son ideales para usarse como marcador estándar para geles de agarosa y es 
comúnmente usada en laboratorios de biología molecular, al igual que, en áreas como la 
medicina, la agricultura, la industria, entre otras. 
INGENIERÍA GENÉTICA 
 
 
2. ¿Por qué cada grupo de laboratorio necesita correr su propia ladder? 
Para determinar analíticamente y gráficamente el tamaño de algunos fragmentos de DNA. 
 
3. ¿Cómo el tamaño del fragmento de ADN afecta su movimiento o la migración a través del gel 
de agarosa durante la electroforesis? 
Esto es debido a la movilidad electroforética de las moléculas, porque mientras mayor sea su 
tamaño, más disminuye esta característica, ya que mayor es la fricción de la molécula con el 
medio y menor es su carga por unidad de superficie. 
 
4. Nombre tres compuestos que se encuentran en el tampón de carga de muestra. ¿Cuál es el 
propósito de cada uno de estos compuestos? 
• Sacarosa 
• Azul De Bromofenol 
• EDTA 
6x (concentración) 
Es una solución que por lo general contiene agua, sacarosa y un colorante, el objetivo de añadir 
este tampón a la muestra se debe a su doble función ya que por una parte aumenta la densidad de 
la muestra de forma que esta permanezca en el pocillo una vez depositada, esto se consigue debido 
a la sacarosa que incluye el tampón, por otra parte, permite ver el frente de avance del gel gracias 
al colorante azul que contiene, esto permite determinar el momento en que podemos detener la 
corriente y finalizar el proceso de separación 
 
5. ¿Por qué se añade tampón 1X TAE a la caja de electroforesis? 
Porque estos son Ideales para recuperación de DNA y manipulaciones en gel, poseen Baja 
fuerza iónica y ayudan a una Mejor resolución de grandes fragmentos de ADN:> 12Kb en 
proceso de electroforesis 
 
6. ¿Cómo puede saber que una enzima de digestión de restricción ha cortado correctamente una 
secuencia de DNA teniendo un gel de agarosa? 
Las enzimas de restricción son enzimas que cortan ADN. Cada enzima reconoce una o un 
número pequeño de secuencias blanco y corta el ADN en o cerca de esas secuencias. 
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Después de tratar el DNA con las diferentes enzimas, los fragmentos son separados por su 
tiñe para revelar los patrones de bandas formados en el gel que corresponden a fragmentos 
de diferentes tamaños. 
Cuando moléculas cargadas son colocadas en un campo eléctrico, estas migran hacia el polo 
positivo (ánodo) o polo negativo (cátodo) de acuerdo a su carga. 
Permite producir fragmentos definidos que se pueden separar mediante una electroforesis 
horizontal. 
 
7. ¿Habrá alguna influencia de separar secuencias de DNA ricas G+C en un gel de agarosa en 
comparación a otras secuencias en cantidades variables de G, C, T, A? 
No, debido que a las secuencias ricas en G+C solo le otorgan resistencia a la desnaturalización por 
efecto de la temperatura, mientras que la migración de las moleculas en gel de agarosa depende 
exclusivamente de su carga eléctrica y su masa. Además, las moleculas de ADN obtienen su carga 
eléctrica debido a sus grupos fosfato y no a bases nitrogenadas específicas. 
 
8. ¿Cuál es la diferencia de usar bromuro de etidio y gel red en el teñido del gel de agarosa? 
La diferencia entre ambos es que Gel Red es mucho más sensible que el bromuro de etidio sin 
requerir pasos de desteñido, virtualmente poseen el mismo espectro, así que es posible reemplazar 
directamente el Bromuro de etidio por GelRed sin cambiar el sistema de imagen existente. El 
bromuro de etidio es la más empleada para la visualización de material genético ya que al incidir luz 
ultravio- leta sobre el gel las moléculas de este, emiten fluorescencia. 
 
 
 
INGENIERÍA GENÉTICA 
 
 
BIBLIOGRAFIA 
 
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agrícolas de la ingeniería genética aplicada al cultivo del arroz. Revista Colombiana de 
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http://www.cbgp.upm.es/index.php/es/?option=com_content&view=article&id=18&x=1429
http://www.cbgp.upm.es/index.php/es/?option=com_content&view=article&id=18&x=1879
http://dx.doi.org/10.1104/pp.17.00980
http://dx.doi.org/10.1104/pp.17.00980
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