INFORME 6 MICROBIOLOGIA

Vista previa del material en texto

INFORME PRÁCTICA DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
 PRÁCTICA VIRTUAL No 6: TÉCNICA DE LOS TUBOS MÚLTIPLES DE 
 FERMENTACIÓN PRUEBA NORMALIZADA
Lizeth Jimenez Tabares y Estefany Duran Londoño.
Universidad del Quindío. Facultad de Ciencias Agroindustriales.
MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS
 
CALCULOS DE LOS RESULTADOS
Para calcular la densidad de coliformes totales está basada en la combinación de los resultados de los tubos positivos y negativos obteniendo un volumen sembrado. Esta densidad se debe representar como número más probables de coliformes totales por 100ml.
El número más probable se obtiene a partir de la comparación de los resultados obtenidos de la muestra con tablas diseñadas. El código con el cual se debe de buscar el número en la tabla corresponde al NMP.
RESUMEN: Análisis microbiano de agua por número más probable NMP
¿Qué son las coliformes?: Son un grupo de bacterias en forma de bacilo Gram negativas que tienen ciertas características bioquímicas que les dan importancia relevante como indicadores relevantes de la contaminación del agua y de los alimentos. Se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y pueden introducirse al medio ambiente por medio de las heces de humanos y de animales; a los alimentos llega la contaminación por medio de insectos como las moscas. El grupo de está conformado por Escherichia, Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter.
 La técnica de número más probable (NMP) es una estrategia eficiente de estimación de densidades poblacionales, especialmente cuando una evaluación cuantitativa de células individuales no es factible. Está técnica se basa en la determinación de presencia o ausencia en réplicas de diluciones consecutivas; además de esto, la determinación de microorganismos coliformes totales por el método de NMP se fundamenta en la capacidad de este grupo microbiano de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas al incubarlos a 35°C durante 48 horas. 
PASOS: 
1. Lavar las manos con la técnica adecuada de lavado de manos y utilizar nuestro equipo de bioseguridad (bata, guantes, mascarilla). 
2. De la muestra (agua) inicial de 210 mL, se toma 10mL y se coloca en 5 tubos distintos de Caldo lauril sulfato doble para obtener una dilución de ½. Luego se toman 5 tubos de 9mL de Caldo lauril sulfato simple y se coloca una alícuota de 1mL en cada uno de estos tubos de Caldo lauril sulfato doble para obtener una dilución de 1/10. Luego se toma una alícuota de 0,1mL de Caldo lauril sulfato doble y se agrega enotros 5 tubos de Caldo lauril sulfato simple para obtener una dilución de 1/100.
3. Se incuban los tubos a 35°C por 24 a 48 horas. Para realizar la lectura de los tubos se debe de observar el gas que se presenta en la campanilla de Durham; esta presencia de gas indica que los tubos están positivos. Para está prueba se debe de utilizar dos tipos de medios; el primer medio es el de Bilis verde brillante al 2%, que es una prueba confirmatoria para coliformes totales y es presuntiva para coliformes fecales. Para este procedimiento se debe utilizar un asa en argolla e inocular de los tubos positivos en nuestros diferentes tubos; luego se incuba a 35°C por 24 a 48 horas. Ahora con el caldo E.C, es una prueba confirmatoria para coliformes fecales y es presuntiva para Escherichia Coli; con este procedimiento se tiene que hacer lo mismo mencionado anteriormente y se debe incubar a 44°C por 24 a 48 horas.
4. Para la lectura de tubos en ambos medios. En el Bilis verde brillante se observa la producción de gas en la campanilla de Durham. Se deben anotar los resultados, anotar el número de dilución del que son los tubos y luego se procede a hacer los resultados que se explicarán más adelante. Ahora con el medio E.C se hace el mismo procedimiento de observar el gas en la campanilla de Durham (tubos positivos) y se debe de confirmar en el medio EMB. Se debe sembrar en este medio para confirmar la presencia de Escherichia Coli. Se debe hacer también una batería microbiológica para identificar cualquier otro Gram negativo y se incuba a 35°C por 24 a 48 horas.
¿Cómo se reporta?: Para conocer este resultado lo que se debe de hacer es observar los resultados obtenidos en los tubos y contar la combinación de tubos positivos y luego ir a buscarlos a una tabla que nos deben de proporcionar. La primera combinación de tubos de Bilis verde brillante al 2% es 111, ya que hay crecimiento en los tres tubos y es de la misma dilución, entonces, el número más probable es de 6,1/100mL. Ahora con los tubos de E.C solo están positivos los primeros dos de la misma dilución entonces es 110 porque el último tubo dio negativo, entonces el NMP es de 4/100mL.
NUMERO MÁS PROBABLE PARA DETERMINACIÓN DE COLIFORMESPaso 4: Resultados.
Paso 3: Lectura de tubos y siembra de Agar EMB.
Paso 2: Siembra en bilis verde brillante al 2% y caldo E.C.
Paso1: Preparación de diluciones.
Los casos tenían dos muestras de agua una se le identificó como muestra de agua de muelle son de la laguna de chirica huerto por el sistema lugar laguna de ensenada pabellones comprende bahía de altata ensenada pabellones y laguna de chirica aumenta en este caso las dos muestras se tomaron de la laguna de chirica huerto en dos puntos nada más a uno se le determinó laguna y al otro muelle en direcciones de ilusiones por triplicado menos 3 menos 4 y menos 5 igual aquí - 3 - 4 - 5 entonces las que dieron positivas solamente fueron 10-3 de muelle a la cual se identificó entre paréntesis con 1 porque fueron 2 y otra de 10-3 de muelle a la cual se le puso entre paréntesis 2 entonces ésta se resembraron bueno y también otra que era 10-4 de L que esta dio positiva 10-3 L junto con las 2 de M nada más presentaron turbidez pero para que una prueba sea positiva para coliformes tiene que dar no sólo turbidez sino también gas como puede apreciarse aquí entonces se resembraron y 10-3 L y 2 de 10-3 de M y la de 10-4 L pensando que pudieran contener coliformes se sembraron este es el caldo verde bilis que por su nombre lo dice es verde aquí podemos ver cómo se resembró 10-3 M entre (1) 10-3 M (2) corresponde a esta ya está 10-3 L la cual es esta que presentaba turbidez y nuevamente la que nos dio positiva que fue 10-4 L al presentar gas en nuestra prueba confirmativa pues presentó también turbidez y gas por lo tanto en esta es en la única en la que se han presentado coliformes igual en el caldo es la única que presentó resultados de turbidez y gas fue 10-4 L como ésta fue positiva en uno en cada uno de los tres tubos cada uno de estos tres tubos uno nada más dio positivo para coliformes para interpretar en la norma es sencillo bueno primero ya que se identificaron nuestros coliformes en 10-4 este de 10-4 sembrado en verde bilis para que sea más explícita todo eso se ha pasado a nuestro hagar y esto ya más que ser un coliforme fecal se trata exclusivamente por el tono verde de Escherichia coli que es la bacteria la cual es la bacteria que se identifica en este tipo de Hagar sigue presenta coloración verde brillante es porque hay Escherichia coli específicamente es el tipo específico de coliformes que crece en esos tubos de ensayo y por consejo por consiguiente en la laguna la luna de chirica tiene coliformes se utilizó la fórmula del método del número más probable establecía en la norma y se concluyó la laguna contiene 3000 coliformes por cada 100 mililitros de agua y para esto nos sirven el método del número más probable.
Determinación de NMP de coliformes en muestras solidas o alimentos 
	
LECTURA DE LA TABLA NMP PARA COLIFORMES TOTALES
Se habló de la tabla del número más probable que el cuya técnica nos permite cuantificar la cantidad de microorganismos presentes en una muestra que fue analizada, vamos a cómo aprender a graficar en la tabla hay que tener en cuenta que los microrganismos conforme son utilizados para cuantificar mediante esta técnica son coliformes totales, coliformes fecales y el Escherichia coli la expresión de resultado se da más probable por mililitros o númeromás probables por gramos este y bueno esta información pues está disponible en la página web de las normas covenin y aquí está el código especificado para pues buscarla poder hacer uso de si bien pues bueno comenzamos aquí tenemos un ejercicio pues simple se dice se realizó una vez metrológico un producto pues x canalizó leche entonces para determinar la posible presencia de coliformes totales pues también se utilizó una muestra de agua bueno se hizo la preparación de las muestras se procesó ella y bueno utilizaron tres tubos a eso también es un dato muy importante cada dilución conforman tablas que se vaya a utilizar hay unas tablas correspondientes y son para tres tubos o para cinco tubos por o sea la cantidad de tubos utilizados por dilución y hay una tabla que son para tres o para cinco tubos cada uno pues tiene están disponibles las tablas por ejemplo entonces se procesó y todo lo demás y en esta dilución que porque las diluciones tienen que ser consecutivas entonces de esta primera dilución dos de los tres tubos fueron positivos de esta segunda dilución uno de los tres tuvo positivo y ante esa decisión pues los estudios dieron negativo es decir se obtuvo una combinación de dos que corresponde a primera dilución uno de la segunda dilución y cero de la tercera dilución esa es la combinación, entonces vamos y nos ubicamos en las tablas que hay disponible para tres tubos y aquí está este las diluciones consecutivas el 101 , 102 y 103 entonces graficamos la combinación que nos dio el resultado 2-1-0 es decir que nos da un total de número más probable de 15 es decir 15 número más probables por mililitros o por gramos eso va a depender del origen o el estado de la muestra si es sólido o líquido muy bien pero este también pues nos da otro tipo de resultado poco frecuente pero también para tenerlo en consideración y aquí está supongamos que nos dio un resultado de una combinación de 2-0-2 es decir 2 que corresponde a que la primera de dilución en dos tubos nos dieron positivos de 3 en la segunda todo negativos y en la tercer igualmente nos dio dos de tres tubos positivos como sabemos que está positivo que tenemos esto es importante estar tan positivos para producción de gas es decir anteriormente aquí voy a restar y aquí dice por ejemplo que este la producción de gas es decir en presencia de oxígeno en los tubos eso se detecta positivo para este caso y puede hacer la cuantificación entonces bueno como mencione después la combinación que nos dio 2-0-2 yo busco en la tabla y buscó entonces 2-0-1 y aquí vemos que las siguientes 2-1-0 es decir que la tabla pues es pero en el resultado no es no se puede ubicar en la tabla que esté que se hace en este caso normalmente cuando se obtiene este tipo de resultados este se vuelve a resembrar porque si yo tomo de esta dilución que proviene de esta y ésta que proviene de ésta o sea tiene que dar esa ésta que quería de aquí tiene que dar lo mismo no es posible hoy me tiene que dar un valor menor o un valor igual pero nos da un valor de o sea que y presencia y aquí no entonces algo va solo si hay que volver a sembrar porque puede ser tipo esta dilución estos tres tubos de esta segunda dilución pues puede ser que estuvo un mayor tiempo expuesto a temperatura o tuvo una temperatura mayor que estos dos durante el análisis microbiológico es decir que pudo alterar y bueno entonces normalmente reaccionar pero es igualmente lo piden graficar entonces vamos a la tabla y éste se busca en la combinación más alto y más acertado entonces sí tengo 2-0-1 está por delante ésta es la que viene este pues se tomó pero qué pasa se toma se ve el caso pues se tomó esta que es 2-1-1 debido a adquirir solamente sólo porque tiene el símbolo positivo que pasa por este símbolo positivo esto que está aquí se utilizó ya no se utiliza pero en este caso particular que hice un límite de confianza en de un 95% hace referencia a que este símbolo positivo esté límite de confianza o sea está fuera de este límite de confianza es decir que los números que tiene un símbolo positivo no obtiene un límite de confianza de un 95% es decir que tiene un rango digamos un rango un límite de confianza inferior decir el nivel de significancia usted es mayor si hay un mayor cantidad de error entonces por eso este se toma este porque está pues cercano aunque bueno sea igual si se toma el de esta combinación es 2-1-0 igual queda un 15 número plural el programa pues en nuestra mano ya no está mal porque es el número más alto más aceptado sólo que en este caso es tomo esto para que ya hace referencia que agua tiene un símbolo positivo es decir que bueno éste no tiene un límite cumple antes de un 95% sino de un límite de confianza inferior esto un margen de error sólo por eso que se tomó como por ejemplo si a mí me da una combinación extraña y entonces yo la ubicó en esta 39 número más probable yo no me voy a ir a esta combinación sólo porque tiene un símbolo positivo o sea no ya sería el extremo usted sólo porque está acerca si se utiliza en realidad sólo toma la más cercana solo la más cercana está bien lo más este igualmente no pasa nada.
TABLA DE COMBINACION
BIBLIOGRAFIA
· Soto A y López B (05 de julio de 2020). Análisis Microbiológico de Agua por Numero Más Probable –NMP-. Recuperado el 09 de abril del 2021, del video: https://www.youtube.com/watch?v=p5TBOmFKVFo
 Heymaxi (26 de junio 2018). NMP: NÚMERO MAS PROBABLE PARA DETERMINACION DE COLIFORMES. Recuperado el 09 de abril del 2021 https://www.youtube.com/watch?v=emdJA-9BPSM 
 Eucaris Perdomo (08 de octubre de 2020). Lectura de la tabla NMP para Coliformes totales. Recuperado el 09 de abril del 2021 https://www.youtube.com/watch?v=V3IvYaXpbBY