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Microbiología básica para el área de la salud y afines 2.a edición Colección Salud © Hugo Humberto Montoya Villafañe © Editorial Universidad de Antioquia ISBN: 978-958-714-090-3 Segunda edición: marzo de 2008 Corrección de texto: Miriam Velásquez Diseño de cubierta: Anastasia Garzón Vidal Diagramación: Marcela Mejía Escobar Impresión y terminación: Imprenta Universidad de Antioquia Impreso y hecho en Colombia / Printed and made in Colombia Prohibida la reproducción total o parcial, por cualquier medio o con cualquier propósito, sin autorización escrita de la Editorial Universidad de Antioquia. Editorial Universidad de Antioquia Teléfono: (574) 219 50 10 Telefax: (574) 219 50 12, (574) 2198382 Página web: www.editorialudea.com E-mail: editorial@quimbaya.udea.edu.co Apartado 1226. Medellín. Colombia Imprenta Universidad de Antioquia Teléfono: (574) 219 53 30. Telefax: (574) 219 53 32 E-mail: imprenta@quimbaya.udea.edu.co El contenido de las obras corresponde al derecho de expresión de los autores y no compromete el pensamiento institucional de la Universidad de Antioquia ni desata su responsabilidad frente a terceros. Los autores asumen la responsabilidad por los derechos de autor y conexos contenidos en las obras, así como por la eventual información sensible publicada en ellas. Montoya Villafañe, Hugo Humberto Microbiología básica para el área de la salud y afines / Hugo Humberto Montoya Villafañe. — 2a. ed. — Medellín : Universidad de Antioquia, 2008. 254 p .: i l . ; 24 cm. — (Colección salud) Incluye glosario p. 229. Incluye bibliografía. ISBN 978-958-714-090-3 1. Microbiología médica 2. Bacteriología médica 3. Parasitología médica I. Tít. II. Serie. 616.01 cd 21 ed. A l 144896 CEP-Banco de la República-Biblioteca Luis Angel Arango http://www.editorialudea.com mailto:editorial@quimbaya.udea.edu.co mailto:imprenta@quimbaya.udea.edu.co 2.a edición Hugo Humberto Montoya Villafañe Microbiología básica para el área de la salud y afines Colección Salud Editorial Universidad de Antioquia Me llena de satisfacción e inmenso orgullo dedicar esta obra a mi madre, motivo de superación constante y motor de mi vida A esas personas irremplazables que partieron del núcleo fami liar y ahora se encuentran en compañía de Dios; a mi inolvida ble tía, “La gorda Betty”: estarás por siempre en mi memoria A mis estudiantes, para quienes cualquier esfuerzo de mi parte, es insuficiente Contenido Prefacio.................................................................................................. xix 1.Historia de la microbiología.............................................................. 1 Generación espontánea..................................................................... 2 Teoría del germen en la fermentación............................................... 4 Teoría del germen de la enfermedad................................................. 5 Postulados de Koch........................................................................ 6 Aplicaciones de la microbiología...................................................... 8 Distribución de los microorganismos............................................... 9 Clasificación de los microorganismos.............................................. 10 Microscopía....................................................................................... 12 Unidades utilizadas en microscopia............................................... 12 Tipos de microscopios................................................................... 13 1. Microscopio de luz, óptico o de campo claro............................ 13 2. Microscopio de luz ultravioleta................................................. 15 3. Microscopio de campo oscuro................................................... 15 4. Microscopio de contraste de fases............................................. 15 5. Microscopio de fluorescencia.................................................... 15 6. Microscopio electrónico............................................................ 17 Historia de la microbiología: sumario............................................... 18 Preguntas para autocontrol del aprendizaje....................................... 20 2 Morfología y fisiología de las bacterias............................................ 22 Características morfológicas mayores de las bacterias..................... 22 Tamaño........................................................................................... 23 Forma ............................................................................................ 23 Ordenamiento................................................................................. 23 Cocos............................................................................................. 23 Bacilos........................................................................................... 25 Espirales o helicoidales................................................................. 27 Características morfológicas menores de las bacterias..................... 28 Estructuras obligadas .................................................................... 30 Pared celular................................................................................... 31 Micoplasmas.................................................................................. 38 Membrana citoplasmática.............................................................. 39 Bacterias Gram positivas............................................................... 41 B acterias Gram negativas............................................................... 41 Membrana externa ........................................................................ 41 Periplasma..................................................................................... 43 Mesosomas..................................................................................... 43 Citoplasma..................................................................................... 43 Ribosomas...................................................................................... 44 Nucleoide....................................................................................... 44 Estructuras facultativas.................................................................. 45 Cápsula........................................................................................... 45 Limo o slime, capa mucosa o capa mucilaginosa.......................... 46 Glicocálix o glicocáliz................................................................... 46 Gránulos de almacenamiento......................................................... 47 Flagelos......................................................................................... 47 Fimbrias......................................................................................... 49 Pili.................................................................................................. 49 Esporo............................................................................................ 49 Germinación................................................................................... 53 Taxonomía......................................................................................... 53 Categorías taxonómicas (taxa)....................................................... 54 Nomenclatura................................................................................. 54 Género........................................................................................... 55 Especie.......................................................................................... 55 Nombres comunes de las bacterias................................................ 56 Nombres científicos de las bacterias.............................................. 56 Morfología y fisiología bacteriana: sumario..................................... 56 Preguntas para autocontrol delaprendizaje....................................... 56 3 Nutrición y metabolismo de las bacterias........................................ 58 Enzimas............................................................................................. 58 Propiedades fisicoquímicas........................................................... 59 Condiciones que afectan la actividad enzimática.......................... 61 Reacciones fundamentales............................................................. 61 Nomenclatura................................................................................ 61 Reglas para nombrar y clasificar las enzimas................................ 62 Naturaleza y mecanismo de la acción enzimática ........................ 62 Inhibición de la acción enzimática................................................. 63 Inhibición reversible...................................................................... 64 Inhibición irreversible.................................................................... 64 Metabolismo bacteriano.................................................................... 64 Nutrición........................................................................................... 65 Condicionantes fisicoquímicos del crecimiento bacteriano........... 66 Concentración de iones de hidrógeno: pH..................................... 67 La luz y otros tipos de radiación.................................................... 67 Temperatura................................................................................... 67 Presión osmótica............................................................................ 67 Potencial de óxido-reducción: eH.................................................. 68 Presencia de dióxido de carbono: C02 .......................................... 68 Humedad........................................................................................ 68 Nutrientes como fuente de energía.................................................... 69 Autotróficas.................................................................................... 69 Heterótrofas.................................................................................... 69 Nutrientes necesarios para las bacterias............................................ 70 Nutrientes básicos.......................................................................... 70 Macronutrientes............................................................................. 70 Micronutrientes u oligoelementos................................................. 72 Metabolitos esenciales................................................................... 72 Factores de crecimiento................................................................. 72 Factores estimulantes..................................................................... 72 Origen de los nutrientes bacterianos.............................................. 73 Medios de cultivo.............................................................................. 73 Clasificación.................................................................................. 73 Consistencia................................................................................... 73 Origen ........................................................................................... 73 Composición y utilización ............................................................ 74 Fuentes de energía............................................................................. 75 Energía radiante............................................................................. 75 Energía química............................................................................. 76 Mecanismo de transmisión de la energía química............................. 76 Glucólisis....................................................................................... 78 Fermentación................................................................................. 80 Vía o ciclo de la pentosa fosfato.................................................... 81 Catabolismo de los carbohidratos..................................................... 82 Degradación de los monosacáridos................................................ 83 Ciclo del ácido cítrico.................................................................... 83 Reacción de transición................................................................... 84 Cadena de transporte electrónico................................................... 84 Catabolismo de las proteínas............................................................. 87 Catabolismo de los lípidos................................................................ 90 Reproducción y desarrollo bacterianos............................................. 90 Fisión binaria transversa................................................................ 90 Fragmentación............................................................................... 90 Esporas........................................................................................... 92 Gemación....................................................................................... 92 Ciclo de desarrollo normal de los cultivos bacterianos.................. 92 Fase lag o de adaptación................................................................ 93 Fase logarítmica o exponencial...................................................... 93 Fase estacionaria............................................................................ 94 Fase de declinación, decadencia o muerte .................................... 94 Periodo de transición entre las fases de desarrollo........................ 94 Metabolismo bacteriano: sumario..................................................... 94 Preguntas para autocontrol del aprendizaje....................................... 95 4 Genética bacteriana........................................................................... ..97 Ácido desoxirribonucleico (ADN).................................................... ..97 Ácido ribonucleico ........................................................................... ..98 Herencia de las características y la variabilidad................................ ..98 Variaciones fenotípicas o temporales (adaptaciones).................... ..99 Variaciones genotípicas o permanentes......................................... ..101 Tipos de mutantes bacterianos....................................................... ..107 Recombinación genética bacteriana.................................................. ..107 Conjugación.................................................................................. ..107 Sistema F+...................................................................................... ..109 Sistema Hfr.................................................................................... ..109 Transformación ............................................................................. ..110 Transducción.................................................................................. ..111 Genética bacteriana: sumario............................................................ ..113 Preguntas para autocontrol del aprendizaje....................................... ..114 5 Inmunología básica............................................................................ ..116 Reseña histórica................................................................................ ..116 Sistema inmunitario........................................................................... ..117 Inmunidad inespecífica.................................................................. ..118 Resistencia de especie o genética...................................................118 Barreras mecánicas y químicas......................................................120 Respuesta inflamatoria y fiebre...................................................... .120Interferón........................................................................................122 Complemento.................................................................................122 Inmunidad específica..................................................................... .122 Linfocitos T ....................................................................................123 Linfocitos B ...................................................................................123 Clases de antígenos............................................................................125 Anticuerpos........................................................................................126 Clases de anticuerpos o inmunoglobulinas.....................................127 Inmunoglobulina G ....................................................................... .127 Inmunoglobulina M .......................................................................128 Inmunoglobulina A ........................................................................128 Inmunoglobulina E ........................................................................ .130 Inmunoglobulina D ....................................................................... .131 Reacciones antígeno-anticuerpo....................................................... .131 Aglutinación...................................................................................133 Precipitación ..................................................................................133 Neutralización................................................................................134 Tipos de inmunidad específica ..........................................................135 Conceptos básicos de inmunología: sumario.....................................135 Preguntas para autocontrol del aprendizaje........................................136 6 Virus.....................................................................................................139 Reseña histórica.................................................................................140 Características de los virus................................................................140 Morfología......................................................................................... ..141 Composición...................................................................................... ..143 Estructura.......................................................................................... ..143 Acción de los agentes físicos y químicos sobre los virus................. ..144 Agentes físicos.............................................................................. ..144 Agentes químicos.......................................................................... ..145 Cultivo de los virus............................................................................ ..145 Animales de experimentación........................................................ ..145 Huevos embrionados...................................................................... ..145 Cultivos tisulares........................................................................... ..146 Cultivos celulares........................................................................... ..146 Detección del desarrollo de los virus................................................ ..148 Patogenia viral.....................................................................................150 Virus bacterianos............................................................................... ..150 Infección viral................................................................................... ..152 Ciclo lítico...................................................................................... ..152 Etapa 1: adsorción.......................................................................... ..153 Etapa 2: infección.......................................................................... ..153 Etapa 3: replicación....................................................................... ..153 Etapa 4: ensamblaje....................................................................... ..154 Etapa5:lisis................................................................................... ..154 Ciclo lisogénico............................................................................. ..154 “Ecología” y mecanismos de transmisión viral................................. ..155 Contacto directo persona-persona................................................. ..155 Transmisión de animal a animal.................................................... ..156 Transmisión si se tiene como vector un artrópodo ....................... ..156 Virus: sumario................................................................................... ..157 Preguntas para autocontrol del aprendizaje....................................... ..158 7 Hongos................................................................................................. ..159 Importancia........................................................................................ ..159 Composición..................................................................................... ..160 Morfología......................................................................................... ..160 Hongos unicelulares: levaduras..................................................... ..160 Hongos pluricelulares: mohos ...................................................... ..161 Reproducción ................................................................................... ..163 Reproducción asexual................................................................... ..163 Reproducción sexual..................................................................... ..164 Fisiología y nutrición ....................................................................... ..165 Medios de cultivo................................................................................165 Clasificación...................................................................................... ..166 Chytridiomycota-Chytridiomicetes................................................ ..167 Zygomycota-Zigomicetes.............................................................. ..167 Reproducción...................................................................................167 Ascomycota-ascomicetes.................................................................169 Levaduras.........................................................................................170 Basidiomycota-Basidiomicetes...................................................... ..173 Deuteromycota ................................................................................176 Hongos; sumario............. ................................................................. ..178 Preguntas para autocontrol del aprendizaje...................................... ...178 Referencias bibliográficas .................... ..............................................178 8 Introducción a la parasitología......................................................... ..179 Parásitos .............................................................................................180 Composición bioquímica ................................................................180 Respiración y metabolismo......... ................................................. ..181 Fisiología .................................................. ................................... ..181 Nomenclatura............................................................ ......................181 Fuentes de las parasitosis.............................................................. ..181 Vías de entrada................................................................................182 Sarcodina (ameboides)...................................................................... ..183 8A Protozoos............................................................................................183Ciclo biológico................................................................................184 Ciliophora (ciliados)............................................................................185 Mastigophora (flagelados)..................................................................187 Giardia lamblia (flagelado intestinal)............................................ ..187 Ciclo biológico.................................................................................188 Trichomonas vaginalis (flagelado atrial)........................................ ..189 Tripanosoma cruzi (hemoflagelado)................................................190 Ciclo biológico................................................................................190 Leishmania braziliensis (hemoflagelado)........................................192 Sporozoa o Apicomplexa (esporozoos)...............................................192 Plasmodium................. ................................................................. ..192 Ciclo biológico.................................................................................193 Toxoplasma gondii............................................. ........................... ..194 Nematelmintos (phylum Nematodá)....................................................195 Platelmintos (phylum Platyhelminthes)...............................................195 Clase Trematoda..............................................................................195 Clase Cestoda o Cestoidea..............................................................195 8B Helmintos...........................................................................................195 Nematoda o nematelmintos ............................................................196 Ascaris lumbricoides........................................................................196 Necator americanus..........................................................................197 Enterobius vermicularis...................................................................198 Platyhelminthes o platelmintos..................................................... ..199 Taenia solium.............. .................................................................. ..199 Taenia saginata................................................................................201 Introducción a la parasitología: sumario....................... ................... ..201 Protozoos.........................................................................................201 Helmintos.........................................................................................202 Preguntas para autocontrol del aprendizaje.........................................202 Importancia del control .....................................................................203 Terminología básica y su definición...................................................203 Condiciones para la acción de los agentes antimicrobianos .............204 Tipo o clase de microorganismo.....................................................204 Naturaleza del medio......................................................................205 Tiempo de exposición.................................................................... .205 Número de microorganismos......................................................... .205 Intensidad y naturaleza del agente físico....................................... .205 Temperatura aplicada a un agente químico.....................................205 Concentración del agente químico................................................. .205 Mecanismos de acción de los agentes antimicrobianos ................... .205 Daño de la pared celular................................................................ .205 Alteración de la permeabilidad de la membrana citoplasmática.... 206 Alteración de la naturaleza coloidal del citoplasma...................... .206 Inhibición de la acción enzimática................................................ .206 Formación de antimetabolitos....................................................... .206 Inhibición de la síntesis de ácidos nucleicos .................................207 Control con agentes físicos .............................................................. .208 Temperatura....................................................................................208 Temperaturas altas ........................................................................ .208 Calor seco...................................................................................... .209 Calor húmedo................................................................................. .210 Temperaturas bajas.........................................................................212 Liofilización................................................................................... .213 Presión osmótica........................................................................... .214 Radiación ...................................................................................... .215 Radiaciones ionizantes...................................................................215 Radiaciones no ionizantes.............................................................. .215 Mecanismo de acción de la luz ultravioleta...................................216 Fotorreactivación.............................................................................216 Reactivación oscura o escotorreactivación.....................................217 Filtración....................................................................................... .217 Limpieza física.............................................................................. .217 Ultrasonido......................................................................................217 Lavado............................................................................................ .217 Control con agentes químicos .......................................................... .221 Efectos de los agentes antimicrobianos sobre el crecimiento........... .222 Agente químico antimicrobiano apropiado....................................... .222 Principales grupos..........................................................................222 Fenol (ácido fénico) y compuestos fenólicos.................................222 Alcoholes........................................................................................222 Halógenos y sus compuestos..........................................................223 Metales pesados............................................................................. .223 Colorantes.......................................................................................223 Compuestos de amonio cuaternario............................................... .223 Aldehidos........................................................................................223 9 Control de microorganismos..............................................................203 Quimioesterilizantes gaseosos....................................................... 223 Concentración mínima inhibitoria (CMI)......................................... 224 Dilución en tubo............................................................................. 224 Difusión en agar............................................................................. 224 Antibióticos y otros agentes quimioterapéuticos.............................. 224 Historia de la quimioterapia.......................................................... 226 Antibióticos................................................................................... 226 Antibiótico útil .................. ........................................................... 226 Control de microorganismos: sumario.............................................. 226 Preguntas para autocontrol del aprendizaje....................................... 227 Referencias bibliográficas.................................................................227 Glosario............................... .................................................................. 229 Bibliografía............................................................................................ 253 índice analítico...................................................................................... 255 Prefacio E n el campo de la microbiología reaparece el libro Microbiología básica para el área de la salud y afines, en su segunda edición; me genera un gran placer por poder presentar esta obra a estudiantes, profesores, trabajadores del área de la salud y afines. El libro llega con un planteamiento diferente con respecto a la primera edición, un concepto que bien podría catalogarse como un nuevo texto. He modificado la estructura y contenidos adaptándolos en lo posible a los planes de estudio de las ciencias básicas, que en Colombia han sufrido cambios sustanciales. Además, la impresión en color de esta edición eleva notoriamente el valor pedagógico, porque muestra gráficos más claros, novedosos y atractivos. No se trata de un libro para especialistas en microbiología, por el contrario, es un texto para estudiantes de pregrado y otros profesionales que en su cotidianidad no tienen como prioridad esta especialidad, pero requieren el conocimiento de ciertos conceptos básicos para alcanzar un buen desarrollo en su disciplina laboral y mantener interrelación con otros campos del área de la salud. Mi vinculación actual como docente de la Universidad de Antioquia ads crito a la Facultad de Odontología, me enorgullece y me motiva a trabajar en pro de la docencia, por esto vislumbré la necesidad de esta segunda edición al comprender la importancia de avanzar en la producción académica a la par con los cambios curriculares propuestos. Creo que el texto adquiere un carácter multidisciplinario y una mirada pedagógica más amplia. Todos saben que la microbiología es una de las disciplinas más diversas y que exige interrelación con otros estudios muy cercanos, como la biología, la biología molecular, la bioquímica, la patología, la farmacología, entre otras. Obviamente, esta correlación genera gran cantidad de información sobre los microbios en general y los libros sobre microbiología se convierten en ver daderas enciclopedias, tan exhaustivos que se vuelven demasiado extensos, profundos y minuciosos para que al estudiante promedio del área de la salud le sean atractivos en su estudio cotidiano, más aún si se tiene en cuenta que deben cursar diferentes materias de forma simultánea. Sin embargo, reconocemos su incalculable valor como obras de consulta. Por causa de esta situación, surge una nueva tendencia de libros con énfasis en la brevedad, hasta el punto de proporcionar una información tan escasa, que no alcanza a cubrir, siquiera, lo que enseñan los docentes en sus clases. Otros textos ofrecen mucha información clínica, pero la información sobre microbiología básica resulta en realidad insuficiente. El texto de Microbiología básica para el área de la salud y afines, que ahora entrego, se escribió tras una experiencia de casi 20 años de docencia con estudiantes del área de la salud, y su principal propósito es presentar una obra amena, de fácil comprensión y profusamente ilustrada, que cumpla las necesidades de este grupo de personas y satisfaga sus necesidades en el área. Por eso, el lector encuentra un texto más breve, un lenguaje familiar y menos sofisticado que los grandes tratados sobre microbiología, pero que contiene toda la información que requiere cualquier persona que esté en proceso de formación en alguna de las áreas comprometidas con la salud. Así mismo, el libro es una herramienta de repaso, de gran utilidad para quienes piensen validar sus carreras y ejercer su profesión en otros países. La obra se divide básicamente en cuatro secciones, que abarcan igual núme ro de disciplinas fundamentales de la microbiología: bacteriología, virología, micología y parasitología. Los capítulos inician con una información general de la disciplina que tratan, así como información básica sobre clasificación, morfofisiología, metabolismo y genética de los organismos descritos. Al final se describen procesos, agentes, mecanismos o modos de acción de diferentes agentes físicos y químicos para lograr un efectivo y continuo control de microorganismos. Todos los temas se apoyan en figuras, esquemas y gráficos, tan claros y com prensibles que el texto explicativo, en realidad, resulta mínimo. Prácticamente, la totalidad de los apoyos visuales son de mi autoría o los he modificado y adaptado, con el fin de lograr los objetivos buscados: claridad, comprensión y motivación. Aunque soy consciente de que ningún libro de texto satisface por completo las necesidades de todos, me atrevo a afirmar que con esta obra nos aproximamos de for ma muy certera a la transformación académica que se desarrolla en la actualidad. De nuevo, agradezco a aquellas personas que me colaboraron en la primera edición, pues, gracias a ellos se abrió la puerta de entrada para esta nueva. Al estímulo e invaluable ayuda del doctor Uber Alberto Isaza Agudelo, Coordi nador del Eje de Complementación Alimentaria del programa, adscrito a la Gobernación de Antioquia, MANA. También dirijo mis agradecimientos, de forma especial, a quienes han colaborado, directa e indirectamente, con mayor o menor intensidad, en este nuevo proyecto. Gracias a mi madre y a otros seres allegados, a quienes durante muchos meses no pude darles la atención que se merecen. Igualmente, mi reconocimiento a otros colaboradores que, aunque anónimos, merecen mi más sincero agradecimiento. Para terminar, agradezco a los lectores del libro, quienes de hecho y defini tivamente son los verdaderos jueces de la obra que sale a la luz pública. Espero me disculpen por las erratas que puedan aparecer y tengan la seguridad de que si aparecen, en ningún caso es por falta de atención, sino que, a manera de duendes editoriales, lograron escabullirse de la lupa correctora del autor y de quienes colaboraron en esta función. Mil disculpas por esos involuntarios fallos en los cuales haya podido incurrir. Hugo H. Montoya Villafañe 1 Historia de la microbiología D e ese gran árbol de la ciencia que se conoce como biología y se ocupa del estudio e inves tigación de los seres vivos con ayuda de otras disciplinas como la química, las matemáticas, la física, entre otras, surge una rama descu bierta recientemente: la microbiología, la cual se encarga de estudiar los organismos vivos de tamaño microscópico. Entre los microorganis mos o microbios, cuyo estudio es la razón de la microbiología, se encuentran: los protozoos, estudiados por la protozoología\ los hongos, por la micología; las bacterias, por la bacte riología; las algas, por la. ficología', estructuras sub o acelulares como los virus y las partículas subvirásicas como los viroides y los priones, por la virología. El término microbiología se deriva de las palabras griegas mikros: pequeño; bios: vida y logos: tratado, por tanto, la microbiología, es la ciencia que trata acerca de los organismos imposibles de ser observados a simple vista (por causa de su ínfimo tamaño), de ahí el nombre de microorganismos o microbios. Una parte de la microbiología tiene carácter general y se encarga de estudiar las características morfofisiológicas, la genética, el metabolismo, las relaciones con otros grupos de organismos, el control e impor tancia en la industria, la relación con la salud y el bienestar humano. Otra parte de la microbio logía tiene un carácter sistemático y se encarga de la organización o taxonomía, de los grupos o taxones en los cuales se ubican los diferentes microbios. Los microorganismos, algunos útiles y otros dañinos, están íntimamente asociados a la vida. Muchos son habitantes del cuerpo humano. Algunos causan enfermedades y otros están implicados en actividades caseras o industrialescomo la fabricación del queso, el vino, el kumis, el yogur, etc.; la producción de antibióticos como la penicilina, la estreptomicina, las cefalospori- nas y en los procesos de tratamiento de aguas residuales. Como se mencionó antes, la microbiología es una ciencia relativamente joven, pues el mundo de los microorganismos se descubrió hace 300 años y debieron pasar otros 200 antes de apreciar y comprender su significado real. Durante las últimas cinco o seis décadas, la microbiología ha emergido como un campo muy significativo de la biología. Hoy los inves tigadores utilizan los microorganismos para el estudio de, prácticamente, todos los fenómenos biológicos importantes. En la evolución histórica de la microbiología intervienen destacados personajes que han hecho grandes aportes a esta ciencia. Algunos de los más destacados se presentan a continuación. Anthony van Leeuwenhoek (1632-1723), holandés, estudiante de historia natural quien, además, se desempeñó como mercader de oficio y tal vez no fue el único que observó los microor ganismos, pero sí el primero en dar a conocer sus observaciones con descripciones y dibujos muy exactos. Leeuwenhoek hizo estas observaciones al practicar su pasatiempo, que consistía en el pulido de lentes y construcción de elementales microscopios. Durante su vida construyó más de 200 microscopios, bastante rudimentarios, que constaban de una sola lente, pulida por métodos caseros, montada en latón y en plata, los más potentes podían aumentar la imagen del objeto 2 / Microbiología básica para el área de la salud y afines unas 200 a 300 veces. Con ellos, y gracias a su gran curiosidad científica, observó numerosos organismos microscópicos como bacterias, protozoos y hongos, algunos procedían de las muestras que tomaba de la cavidad bucal. Esos microscopios se parecían poco al micros copio compuesto actual, que utiliza una serie de lentes en un sistema capaz de amplificar de 1.000 a 2.000 veces una imagen. Pero las lentes que Leeuwenhoek usó en sus microscopios estaban muy bien hechas y lo principal era que él tenía esa apertura mental, tan importante para un inves tigador y además mantenía una correspondencia continua con la Royal Society de Londres. El 9 de junio de 1675, Leeuwenhoek escribió en su diario: “... al observar esta agua, yo tuve la idea de que descubría criaturas vivas; pero como eran tan pocas y no claramente detectables, no pude aceptar esto como c ie r to .Luego , volvió a sus observaciones y anotó: “... yo no tenía ninguna noción que iba a ver criaturas vivas, pero al observar vi maravillado más de un millar de criaturas vivas dentro de una gota de agua, Los “animálculos” eran de la clase más pequeña que yo había visto jamás hasta ahora.. Hizo dibu jos de las bacterias presentes en el agua lluvia, la saliva, el vinagre, además de otras sustancias y las describió con fascinantes palabras. Relató y envió sus emocionantes descubrimientos, en una serie de más de 300 cartas, a sus amigos de la Royal Society de Londres y de la Academia de Ciencias de Francia. Una carta del 17 de septiembre de 1683 con tiene los primeros dibujos registrados de las bacterias, observadas por Leeuwenhoek en una suspensión de sarro (placa dental o biopelícula dental), que había tomado de sus dientes. La meticulosidad y exactitud de sus observaciones las evidencian los dibujos que realizó. Diseñaba las células bacterianas indicando que eran esfé ricas (cocos), cilindricas o en forma de varilla (bacilos) o en espiral (espirilos). Las observaciones de Leeuwenhoek, ma nifestadas en sus cartas llenas de entusiasmo, se leyeron con interés, pero no se reconoció el significado de estos descubrimientos (véase figura 1.1). Figura 1.1 Dibujos de bacterias realizados por Leewenhoek y enviados a la Royal So ciety de Londres .Antes del siglo xix había poca conciencia sobre los microorganismos y, más aún, que ellos pudieran causar enfermedades o producir cambios químicos a la gran cantidad de mate riales que cotidianamente se encuentran en el entorno. A pesar de los grandes avances de la mi croscopía actual, todavía se reconocen estas 3 formas generales de las bacterias descritas por Leeuwenhoek. Generación espontánea El descubrimiento de un mundo invisible a sim ple vista avivó el interés por descubrir el origen de la vida. En el siglo xix se agudizó la polémica por causa de la teoría que afirmaba que los mi croorganismos aparecían espontáneamente, sin progenitores que les dieran la vida. Una de las preguntas más frecuentes de la época era: ¿de dónde vienen estos microorganismos? Historia de la microbiología / 3 Algunos respondieron que aparecían como resultado de la descomposición de tejidos vegeta les y animales muertos. En otras palabras, pensa ban que los organismos vivos surgían de materia sin vida, después de su descomposición. A este concepto se le conoció como generación espontánea o abiogénesis: abio: sin vida y genesis: origen. La idea básica de la generación espontánea era: “el alimento se pudre si permanece durante cierto tiempo a la intemperie y al examinar mi croscópicamente el alimento putrefacto, se observa que está repleto de bacterias”. Entonces surgía nuevamente la pregunta: ¿de dónde provienen estas bacterias que no se ven en el alimento fresco? La idea de la generación espontánea se remonta a la antigua Grecia, en donde se creía que la carne en descomposición producía gusa nos y que las moscas y ranas brotaban del barro, bajo condiciones climáticas apropiadas. Por eso, muchos argüyeron que los microorganismos se originaban por generación espontánea y también hubo muchos fanáticos que abogaban a favor de la generación espontánea de gusanos, insectos e incluso de animales como ratones y ranas. Hubo verdaderos líderes defensores y detrac tores de esta teoría, cada uno de ellos construyó nuevas y fantásticas explicaciones o empleó evi dencias experimentales, para tratar de demostrar su posición. John Needham (1713-1781). En 1749 realizó experimentos con carne cocida y observó que la carne presentaba microorganismos al iniciar el experimento, por eso, concluyó que estos se originaban de la carne cruda. Hubo, también, quienes tuvieron la valentía de demostrar los garrafales errores en que se apoyaba la teoría de la generación espontánea. Entre ellos se destacaron: Lázaro Spallanzani (1729-1799). Trató de refutar la generación espontánea con un experi mento en el cual utilizó matraces donde colocó una solución nutritiva (caldo de carne de buey), después los cerró herméticamente e hirvió la so lución, durante una hora. Como es lógico, después de cierto tiempo, no aparecieron microbios en el caldo contenido en los matraces. Pero estos resultados, confirmados en repetidos experi mentos, no lograron convencer a Needham quien defendía la teoría, e insistía en que el aire era esencial para la generación espontánea de microbios. Franz Schulze y Theodor Schwann (1815- 1873). Trataron de demostrar el error que defen dían los espontaneístas: Schulze hacía pasar aire a través de soluciones fuertemente ácidas y lo hacía llegar a los matraces que contenían caldo de carne hervido. Por su parte, Schwann pasaba el aire a través de tubos calentados al rojo y lo hacía llegar a los matraces que contenían caldo de carne hervido. En ninguno de los dos casos aparecieron mi crobios porque el ácido en el primer experimento y el calor extremo en el otro, les habían causado la muerte. Sin embargo, los persistentes defen sores de la generación espontánea no quedaron convencidos y argumentaban que el ácido y el calor alteraban el aire de tal manera que impe dían el crecimiento de los microorganismos. Los experimentos continuaron con menor o mayor éxito, pero no lograban convencer definitivamen te a los espontaneístas. Durante la misma época en que se realizaban estos experimentos emergía a la luz pública, en Francia, Louis Pasteur,un nuevo científico que re volucionaría la ciencia con sus grandes aportes. Louis Pasteur (1822-1895). Estudió química y adquirió fama nacional en Francia, a comienzos de su carrera, al descubrir la estructura química del ácido tartárico. Luego se interesó por la in dustria vinícola y los cambios que se producían en los procesos de fermentación, lo que lo llevó forzosamente a debatir sobre la generación es pontánea. En esta tarea revisó con cuidado todo trabajo realizado sobre fermentación y luego efectuó numerosos experimentos para comprobar el hecho de que los microorganismos solo pueden surgir de otros microorganismos en un proceso llamado biogénesis. Demostró que en el aire normal se encontraban estructuras muy simi lares a los microorganismos encontrados en el material putrefacto. Descubrió que esa diversidad de microorganismos del aire era indistinguible de los que se encontraban, aunque en mayor canti dad, en el material en putrefacción. Por tanto, 4 / Microbiología básica para el área de la salud y afines concluyó que los microorganismos encontrados en esa podredumbre se originaban a partir de los microorganismos del aire, porque estos estaban suspendidos y se depositaban constantemente sobre la superficie de cualquier tipo de objeto. Estos resultados lo envolvieron en debates muy acalorados con sus oponentes. Uno de los mayo res defensores de la generación espontánea, en la época de Pasteur, fue el naturalista francés Félix- Archiméde Pouchet, quien en 1859 publicó un amplio informe defendiendo la teoría. Pero chocó con el adversario más ferviente de la generación espontánea: Louis Pasteur, quien, irritado por lógi ca y por los datos publicados por Pouchet, realizó experimentos para acabar con sus argumentos. Utilizó el calor para eliminar los microor ganismos contaminantes, pues él ya utilizaba el concepto de la destrucción microbiana por calor. Igualmente, otros científicos investigado res habían demostrado que si se colocaba una solución nutritiva como el caldo de carne, en un matraz de vidrio, luego se sellaba herméti camente, se calentaban hasta ebullición por un tiempo determinado y la solución, en su interior, no se descomponía y permanecía por muchísimo tiempo incorrupta. Claro que los defensores de la generación espontánea alegaban que era necesa rio el aire fresco para que se diera la generación espontánea y que el aire del interior del matraz se modificaba por causa del calentamiento, e impedía así la generación espontánea. Pasteur preparó soluciones nutritivas en matraces de vidrio en forma de balón, los cuales poseían un cuello largo y estrecho o cuello de cisne (hoy se conoce como matraz Pasteur) y las llevó a ebullición, dejando entrar y salir el aire sin hacerle ningún tratamiento y sin filtrar. Después, al enfriarse el matraz, el aire podía pasar libremente. En los caldos no aparecieron microor ganismos. La razón de esto era que las partículas de polvo que contenían los microorganismos, no podían llegar hasta el caldo nutritivo, porque se habían sedimentado en la parte en forma de U del tubo en cuello de cisne y las corrientes de aire eran tan reducidas que las partículas de polvo no habían sido arrastradas hasta el interior de los matraces (véase figura 1.2). Pero si el matraz se inclinaba lo suficiente como para permitir que el caldo nutritivo estéril hiciera contacto con el cuello en U del matraz, el caldo se llenaba de mi croorganismos y obligatoriamente se presentaba la putrefacción. Con este sencillo pero brillante experimento, Pasteur aclaró en definitiva la con troversia suscitada por la teoría de la generación espontánea y con ella a sus defensores. En la Sorbona de París, Pasteur expuso sus resultados el día 7 de abril de 1864 y como sus ma traces no mostraban signo alguno de vida, dijo: Yo les he resguardado y sigo aún resguardándo los de la única cosa que está por encima de las posibilidades del hombre hacer; los he resguar dado de los gérmenes que flotan en el aire, los he resguardado de la vida... Con la exuberancia de su refinado y florido lenguaje, Pasteur lanzó una serie de dardos con tra los que disentían de él: ... no hay ninguna condición en la que se pueda afirmar que los seres microscópicos vienen al mundo sin gérmenes, sin padres semejantes a ellos mismos. Los que alegan esto, han sido víctimas de sus ilusiones, de experimentos defectuosos, vicia dos por los errores que ellos no han sido capaces de percibir y que no han sabido cómo evitar... Con la aceptación del concepto de biogé nesis se desterró por completo y para siempre a los espontaneístas, se facilitó el camino para trabajos futuros y Pasteur continuó sus estudios sobre fermentación y luego sus investigaciones sobre microorganismos como agentes causales de enfermedades. Teoría del germen en la fermentación En la antigüedad, muchas culturas desarrollaron bebidas y alimentos que eran producto de la fermentación microbiana. Grecia fue uno de los países más sobresalientes por la producción de vino; Mesopotamia, 500 años a. C., tenía la pro fesión de cervecero; las salsas de soya de China Historia de la microbiología / 5 y Japón, obtenidas de legumbres fermentadas, se han fabricado durante siglos; el kumis, bebida alcohólica fermentada y elaborada a partir de leche de muía o de camello, la disfrutaban desde mucho tiempo atrás las tribus de Asia Central. En esas épocas la gente iba mejorando la cali dad de sus productos de fermentación con base en prueba y error, sin saber que la calidad dependía de las condiciones de crecimiento de los microor ganismos responsables de la fermentación. Hacia 1850, Pasteur enfocó su atención en una de las industrias más importantes de Francia: la fabricación del vino. Al examinar muchos lotes de vino, descubrió microbios de diferentes clases. En los lotes buenos encontró predominio de cierta clase de microorganismos; en los lotes malos o peores estaban presentes otras clases. Posterior mente, Pasteur determinó que con la selección apropiada de un microorganismo, el fabricante obtendría un producto consistente, bueno y uniforme. Para lograr esto debía eliminar los mi crobios que ya estaban en los mostos y comenzar una nueva fermentación con un cultivo (masa de microorganismos en crecimiento), procedente de una cava de vino que había sido satisfactorio. Pasteur sugirió que las clases de microbios indeseables podrían eliminarse calentando los mostos, no tanto como para estropear el aroma del zumo de frutas, pero sí lo suficiente para matar esos microbios. Descubrió que sometiendo los mostos a temperaturas de 62,8 °C (145 °F) por 30 min se lograba el objetivo deseado. Este proceso se conoce en la actualidad como pasteu rización, y se utiliza ampliamente en industrias de fermentaciones, como en la láctea, para des truir los microorganismos presentes en la leche y derivados que causan enfermedades. Teoría del germen de la enfermedad Esta teoría también causó gran revuelo entre los investigadores (incluso antes de aparecer Pasteur se mencionaba), pero lógicamente también la sustentaron teorías populares con buenos defen sores. Entre otras, las que más auge tuvieron y obviamente las de mayor popularidad fueron: 1. Teoría teúrgica. Afirmaba que la enferme dad afectaba a una persona debido a un castigo divino, por causa de las ofensas que los humanos hacían a los dioses. 6 / Microbiología básica para el área de la salud y afines 2. Teoría miasmática. Decía que la enfermedad la causaban los miasmas o pestilencias que emana ban de las calles, los pantanos, las basuras, los cuer pos enfermos o la materia en descomposición. 3. Teoría contagium fom ites. Atribuía la en fermedad a un contagio causado por objetos in animados utilizados por una persona enferma. 4. Teoría contagium vivo. La enfermedad se produce por contagio directo de una persona enferma a otra sana. En 1546, Fracastoro de Verona (1483-1553)sugirió que la enfermedad la podrían causar or ganismos demasiado pequeños para ser vistos, que se transmitían de una persona a otra. En 1762, Von Plenciz de Viena no solo asegu raba que estos agentes vivos eran los causantes de la enfermedad, sino que sugería que diferentes agentes eran responsables de una gran variedad de enfermedades. También hubo planteamientos no muy exi tosos en un comienzo, como los del médico y letrado Oliver Wendell Holmes, quien en 1843 insistía en que la fiebre puerperal, una grave y con frecuencia fatal enfermedad de la madre después del parto, era contagiosa y que probablemente la causaban microorganismos transportados de una madre a otra por comadronas y médicos. En 1870, el médico alemán Robert Koch (1843- 1910) se dejó tentar por la nueva y fascinante ciencia de la bacteriología y contribuyó de forma decisiva al desarrollo de la microbiología. Aisló y cultivó las bacterias (bacilos) productores del car bunco, a partir de la sangre de ovejas que habían muerto por causa de esta enfermedad. Cultivó en su laboratorio las bacterias, supuestamente responsables y las observó al microscopio para estar seguro que solo había una clase de ellas y luego las inyectó en ratones, para ver si desarro llaban la enfermedad. A partir de estos ratones, aisló bacterias iguales a las que había encontrado originalmente en las ovejas que habían muerto de carbunco. Así demostró por primera vez que una bacteria era el agente causal de una enfer medad en un animal. Luego Koch descubrió las bacterias causantes de la tuberculosis y el cólera. Los criterios obtenidos en los experimentos de Koch se conocen como postulados de Koch, los cuales se convirtieron y siguen como normativa para tener evidencia de que una enfermedad la causa un microorganismo específico. Postulados de Koch 1. Un microorganismo específico puede en contrarse siempre asociado a una enfermedad determinada. 2. El microorganismo puede aislarse y culti varse en un cultivo puro en el laboratorio. 3. El cultivo puro del microorganismo produce la enfermedad al ser inyectado en un organismo sano, a partir del animal infectado experimentalmente. 4. Es posible, por procedimientos de labora torio, recuperar el microorganismo inyectado a partir del animal infectado. Estas demostraciones tuvieron éxito gracias a la implementación de los laboratorios de bac teriología y al uso de medios de cultivo, como el agar con nutrientes que facilita el crecimiento y desarrollo de los microorganismos. Una nue va terminología comenzó a utilizarse rutina riamente, destacándose, entre otros, términos como: 1) colonia: grupo de microorganismos de la misma especie que puede observarse macroscópicamente; 2) cultivo: grupo de micro organismos en crecimiento, y 3) cultivo puro o cepa pura: grupo de colonias conformadas por microorganismos de la misma especie. En 1880, Pasteur aisló y cultivó la bacteria causal del cólera aviar que estaba produciendo estragos en las aves de corral. Para demostrar que había aislado en un cultivo puro la bacteria responsable de esta enfermedad, hizo uso de las técnicas fundamentales diseñadas por Koch y organizó una demostración pública en la que repitió un experimento que había tenido éxito en muchos ensayos previos realizados en su laboratorio. Inoculó, es decir, le inyectó a pollos sanos sus cultivos puros del cólera aviar y esperó a que se desarrollara la enfermedad y murieran. Pero ante su asombro, los pollos no enfermaron ni se murieron (véase figura 1.3). Desconcertado revisó con detalle cada uno de los pasos de su experimento y encontró que acci dentalmente había utilizado en la demostración Historia de la microbiología / 7 8 / Microbiología básica para el área de la salud y afines los cultivos viejos (que tenían varias semanas de sembrados), en lugar de los recién sembrados. Unas semanas después, repitió el experi mento utilizando 2 grupos de pollos: el primero, había sido inoculado en la primera demostración, con cultivos viejos que habían sido ineficaces. El segundo, no había sido previamente expuesto a estos cultivos. Ambos grupos se inocularon con bacterias de cultivos frescos y jóvenes. Esta vez los pollos del segundo grupo murieron y los del primer grupo permanecieron vivos. Pasteur explicó convincentemente el hecho: las bacterias pueden, de alguna manera, perder su poder de virulencia, o sea, la capacidad para producir enfermedad, después de permanecer en reposo y hacerse viejas. Sin embargo, estas bacterias atenuadas o menos virulentas, pueden todavía estimular al hospedero (en el caso des crito, el pollo), para que produzca anticuerpos; es decir, sustancias de defensa orgánica contra la infección causada por una nueva exposición al microorganismo virulento. De esta manera, Pasteur llamó a los cultivos atenuados de bacterias vacunas y a la inmuniza ción con cultivos atenuados vacunación. Con este experimento Pasteur demostró que el cultivo viejo, aunque incapaz de producir la enfermedad, podía hacer que los pollos produje ran en su sangre sustancias protectoras denomi nadas anticuerpos. Después del descubrimiento de la vacuna contra el cólera aviar, continuó con sus estudios inmunológicos y descubrió la vacuna contra la rabia o hidrofobia. Para hacerlo, inoculaba un conejo con saliva de perro rabioso, luego obtenía un extracto del cerebro y la médula espinal del conejo del cual, atenuaba el virus y lo inyectaba al paciente que había contraído la rabia. La figura 1.4 lo ilustra claramente. Aplicaciones de la microbiología Existen diferentes ramas que se generan del propio tallo de la microbiología, entre ellas se destacan, por causa de su interés en las pato logías infecciosas humanas, la microbiología médica y la clínica, pero ninguna de las dos puede calificarse como ciencia independiente del ser humano porque ambas comprenden en >u vertiente general sistemática, la inmunología microbiana (respuesta del hospedador u hospe dero a los agentes infecciosos), la bacteriología, la protozoología, la micología, la virología y el estudio de los priones (se exceptúan las algas porque rara vez tienen interés en la enfermedad humana). Las siguientes son las principales divi siones y aplicaciones de la microbiología: 1. Microbiología del suelo. Se encarga de los microorganismos que mejoran la fertilidad de los teiTenos convirtiendo el nitrógeno atmosférico en compuestos nitrogenados que luego utilizarán las plantas para la síntesis de proteínas. También estudia la transformación de materia orgánica, que llevan a cabo los microorganismos en compuestos inorgáni cos haciéndolos así utilizables por las plantas. 2. Microbiología de los alimentos. Estudia los microorganismos implicados en la contami- Historia de la microbiología / 9 nación de alimentos que pueden causar enfer medades o intoxicaciones. También incluye los microorganismos utilizados industrialmente para mejorar la calidad de los alimentos o para obte ner productos nuevos a partir de un compuesto orgánico determinado. 3. Microbiología de la leche. Investiga los microorganismos que pueden ser utilizados en la fabricación de quesos, leches fermentadas, mantequillas y una gran diversidad de productos lácteos. 4. Microbiología de las fermentaciones indus triales. Estudia los productos que se obtienen en escala industrial, utiliza las actividades bioquí micas de los microorganismos: medicamentos, suplementos vitamínicos, bebidas alcohólicas, enzimas, ácidos orgánicos, concentrados para animales y vacunas, entre otros. 5. Microbiología del carbón y del petróleo. La intervención de los microorganismos en la forma ción del carbón de piedra es importante, aunque limitada a la conversión del material orgánico en humus y a algunas modificaciones ulteriores, en el estado de turba (depósito de materias vegetales en descomposición, de color pardusco y estructura porosa). En la formación del petróleoparece que los microorganismos actúan oxidando la materia orgánica hasta obtener compuestos de estructura semejante a la del petróleo. 6. Microbiología de drenajes. Desde los albores de la ciencia sanitaria y la ingeniería se utilizan los microorganismos para depurar los residuos domésticos e industriales. 7. Microbiología acuática. Se ocupa de los microorganismos que se encuentran en el mar, los estuarios y las aguas dulces: lagos, manan tiales, ríos, etc. 8. Microbiología médica. Esta rama de la microbiología se relaciona directamente con la sa lud, se dedica al estudio de los microorganismos patógenos, es decir, que causan enfermedad y a los que hacen parte, imprescindible, de la flora bacteriana normal. 9. Microbiología clínica. Aplica los conoci mientos adquiridos en la microbiología médica, para el diagnóstico de los eventos infecciosos humanos con fines asistenciales. 10. Microbiología bucal. Se circunscribe al estudio de los microorganismos que habitan normalmente en la cavidad bucal y los que por medio de sus propios mecanismos logran im plantarse en la boca y producir enfermedades. La microbiología bucal hace parte de las dos ramas anteriores y sin duda tiene en sus aspectos generales y sistemáticos los mismos contenidos, lógicamente enfatiza en los microorganismos propios y relacionados con la cavidad bucal y la respuesta de esta frente a aquellos. También estudia la ecología bucal, es decir, las relaciones que los microorganismos establecen entre sí y con los tejidos bucales. 11. Microbiología del espacio. También se conoce con el nombre de exobiología, estudia la posible presencia de microbios en el espacio exterior, así como su empleo potencial como pro visión alimenticia y energética de los astronautas y para mantener, en los vehículos espaciales, el equilibrio conveniente entre el oxígeno y el dióxido de carbono. Distribución de los microorganismos Los microorganismos se encuentran dispersos en casi toda la naturaleza. Las corrientes de aire los llevan desde la superficie de la tierra a las capas superiores de la atmósfera. Aun los procedentes del océano pueden encontrarse a mucha distancia sobre las montañas más elevadas. Igualmente, se han hallado microorganismos en el fondo del océano en profundidades donde la vida normal sería imposible. El suelo rebosa de ellos. Los arroyos y los ríos arrastran microorganismos a los lagos y grandes embalses. Se presentan en más abundancia cuando encuentran materias nutritivas, humedad y temperatura favorable para su desarrollo y multiplicación. Las condiciones que favorecen la supervi vencia y el crecimiento de muchos microor ganismos son las que rodean normalmente al hombre, por lo que es inevitable vivir entre una multitud de microbios. Están en el aire y en los alimentos, se encuentran en la superficie del cuerpo humano, los intestinos, la boca, la nariz, y en otras cavidades abiertas del organismo. Por 10 / Microbiología básica para el área de la salud y afines fortuna, la mayoría de los microorganismos son inocuos. Además, disponemos de los medios para resistir la invasión de aquellos que puedan causar daño. Clasificación de los microorganismos En microbiología, como en cualquier otra rien da, clasificación significa la disposición ordena da de las unidades en estudio, formando giupos de unidades mayores. En 1753, el botánico sueco Linneus intentó clasificar todas las especies que se conocían hasta ese entonces, en categorías inmutables. Muchas de esas categorías todavía se usan en biología actual. La clasificación je rárquica linneana se basaba en la premisa que las especies eran la menor unidad y que cada especie (o taxón), está comprendida dentro de una categoría superior o género. Los nombres científicos de animales, plantas y microorganismos se escriben con dos palabras que corresponden al género y la especie. Linneus también denominó a este concepto nomenclatura binomial, y eligió el latín, en ese entonces el len guaje de los “hombres cultos” en todo el mundo, para su escritura, con el objeto de asegurar que todos los científicos entendieran la nomenclatu ra. En la actualidad aún se utiliza el latín por ser una lengua muerta. Hasta el siglo xviii, la clasificación de los organismos vivos colocaba a todos los organis mos dentro de uno de los dos reinos existentes: vegetal y animal, clasificación que venía desde la época de Aristóteles, pero a medida que se obtenían mayores conocimientos acerca de los microorganismos se evidenciaba que algunos de ellos no encajaban adecuadamente en ninguno le los dos reinos. Una de las primeras propuesta? para la clasificación mejorada de los reinos la hizo, en 1866, el zoólogo alemán E. H. Háeckel, quien sugirió que se creara el reino protista (primera vida), donde solo se incluyeran los microorganis mos unicelulares con características intermedias entre animales y plantas. El reino protista, a su vez, se subdividió en protistas inferiores o célu las procarióticas y protistas superiores o células eucarióticas. 1. Protistas inferiores o células procarióti- cas. Presentan un nucleoide no delimitado por membrana, un solo cromosoma circular, son haploides y no presentan nucléolo, cloroplas- tos, aparato de Golgi, mitocondrias ni retículo endoplásmico; no hacen mitosis, meiosis ni picnocitosis, su citoplasma es coloidal y poco fluyente. Su membrana celular no contiene este róles, pero sí actividad metabólica, pues algunas de estas células realizan procesos biológicos como respiración y fotosíntesis. Otras poseen mesosomas y la pared celular la conforman pepti- doglucanos. 2. Protistas superiores o células eucarióticas. Presentan núcleo delimitado por la membrana nuclear con uno o más cromosomas lineales, son diploides y hacen división nuclear por mitosis. Estas células poseen nucléolo, histonas, mitocon drias, aparato de Golgi, retículo endoplásmico, membrana celular con esteróles y sin actividad metabólica. Carecen de peptidoglucanos, pueden hacer picnocitosis y algunas células presentan cloroplastos. Un esquema de clasificación de 5 reinos lo propuso R. H. Whittaker, en 1969, en él se incluían las bacterias y cianobacterias en un reino que se denomina Mónera. Este reino se reemplazó por el reino Prokaryotae. De esta manera los microorganismos se encontraban ubicados en 3 de los 5 reinos: 1) rei no Fungi, que comprende levaduras y hongos filamentosos o mohos; 2) reino Protista, que incluye algas y protozoos microscópicos, y 3) reino Prokaryotae, en él se ubican las bacterias y las cianobacterias (antes se conocían como algas verdes, azules o cianofíceas). Sin embargo, por causa de su carácter provisional y evidentemente discutible, siguieron surgiendo nuevas propues tas de clasificación. Woese y colaboradores, entre 1981 y 1990, fueron los primeros en realizar estudios molecu lares comparativos para analizar la sistemática filogenética de los organismos celulares. A partir de estos estudios, se establecen relaciones entre diversos organismos y se reúnen en árboles filogenéticos de carácter universal. A partir de las secuencias de RNA ribosomal, descubrieron Historia de la microbiología / I I que el reino Prokaryotae incluía dos grupos filogenéticos distintos: Archeobacterias, que se encuentran en nichos ecológicos con condiciones de vida extremas, incluyen los microorganismos que producen metano (metanógenos o metano- génicos), ciertos metabolizadores del azufre que pueden crecer en ambientes muy ácidos y calientes (termófilos extremos) y otros que viven en ambien tes salinos (halobacterias o bacterias halófilas) y Eubacterias que son las formas más habituales y se encuentran en cualquier nicho ecológico, aisla das en su mayoría del cuerpo, el suelo y el agua. Observándolas microscópicamente, todas las bacterias parecen similares, además la escasez de fósiles ha dificultado el establecimiento de las relaciones evolutivas entreambos grupos. La evidencia presentada por la biología mole cular sugiere que los primitivos procariotas se separaron en esos dos grupos muy temprano en el desarrollo de la vida en la tierra, de modo que los descendientes de estas dos líneas son: Eubacterias y Archeobacterias consideradas como el sexto reino (véase figura 1.5). La conclusión más sorprendente que se extrae de estos estudios filogenéticos es que las arqueobacterias tienen mayor relación con los eucariotas que las eubacterias. Se ha determinado que la acumulación de mutaciones concretas en eubacteria es más baja que en plantas y animales, por lo cual, los procariotas han requerido del doble de tiempo para poder evolucionar. Así, según las teorías de Woese y sus colabo radores, la vida en la Tierra puede clasificarse en 3 dominios celulares: Bacteria (bacterias), Archaea (arqueobacterias) y Eucarya (eucariotas). En la figura 1.5 aparece un esquema con una raíz única que tiene en su base a Luca, úl timo antepasado común universal de las células modernas, equivale a lo que es Lucy en el árbol evolutivo de Homo sapiens, es decir, no la pri mera célula, sino una célula ya evolucionada, con todas las características de sus futuros descen dientes: los actuales procariotas y eucariotas. Muchos autores han realizado diversas pro puestas y otros continúan haciéndolo con base en avances bioquímicos, moleculares, etc., per. 12/ Microbiología básica para el área de la salud y afines aún no cuentan con amplia aceptación de la comunidad científica en general. Los virus, las partículas subvirales, viroides, virusoides, ARN satélites y los priones, son entidades no celulares que por poseer caracte rísticas muy peculiares no están incluidos en este esquema de los seres vivos. Actualmente existe una propuesta para incluirlos en un nuevo grupo o imperio o dominio (solo en el caso de ser aceptada la propuesta de considerarlos como seres vivos), que se llamaría Viridae. Microscopía El conocimiento necesario para la inteipretación de los fenómenos, a los cuales se refiere esta primera parte, se ha desarrollado principalmente en los últimos 100 años. A finales del siglo x v i i i , cuando muy pocos creían en la existencia de microorganismos y no se conocían todavía lentes perfeccionadas que permitieran su es tudio. apareció en escena el holandés Anthony van Leeuwenhoek e inició el desarrollo de la microscopía, utilizaba lentes convergentes de gran potencia, para la época, que producían una imagen virtual muy aumentada de un objeto situado en el foco, de esta manera lograba un poder de resolución que le permitía observar partículas hasta de dos mieras (jum) de diáme tro. Este primer y rudimentario microscopio se modificó paulatinamente y en la época actual se cuenta con una muy buena variedad de estos implementos indispensables para el estudio de la microbiología (véase figura 1.6). Unidades utilizadas en microscopía La unidad de medida es la miera = jli, equiva lente a la unidad de medida micrómetro = jum. En este texto para facilitar la comprensión se Historia de la microbiología / 13 Tabla 1.1 Equivalencia de las unidades métricas de longitud utilizadas en microscopia Unidad Prefijo Equivalencia métrica Decímetro (dm) Deci = 1/10 0,1 m = 10'1 Centímetro (cm) Centi = 1/100 0,01 = 10"2 Milímetro (mm) Mili = 1/1.000 0,001 = 10'3 Micrómetro o miera (pm o p) Micro = 1/1.000.000 0,000001 m = 10~6 Nanómetro (nm) Nano = 1/1.000.000.000 0,000000001 =10 8 Angstrom (Á) La unidad Angstrom no pertenece al sistema métrico, pero como su uso está muy extendido en microbiología, se incluye en esta tabla 0,0000000001 = 10“10 refiere el micrómetro (|iin) como unidad de medida microscópica. Las equivalencias de las unidades utilizadas en microscopia aparecen en la tabla 1.1. Tipos de microscopios Una de las herramientas más importantes para el estudio de la microbiología es el microscopio. Este aparato aumenta el tamaño de una imagen hasta tal punto que facilita su visualización. A partir del primer microscopio, elaborado por Anthony van Leeuwenhoek, esta invaluable ayuda ha sufrido cambios paulatinos que lo han perfeccionado cada vez más. En la actualidad existe gran variedad de microscopios ópticos compuestos que se emplean según las necesi dades de observación: 1. Microscopio de luz, óptico o de campo claro En esencia, fue el primero que se desarrolló cuando la microbiología hizo su aparición. Inicialmente era un microscopio tan simple que sólo poseía una lente biconvexa y la fuente de luz que iluminaba la muestra era externa y tan elemental como la llama de una vela. Después se perfeccionó adicionándole un sistema de lentes separados con los cuales se conseguía mayor au mento, por esto, tomó el nombre de microscopio compuesto, que es el mismo microscopio óptico o microscopio de luz conocido actualmente. El microscopio óptico, utilizado con mayor frecuencia para la mayoría de los estudios, utili za el sistema de iluminación que se conoce con el nombre de campo claro, en el cual el campo del microscopio se ilumina brillantemente, mientras que el objeto que se va a estudiar se ve oscuro o coloreado. Se ve coloreado cuando se somete a procedimientos en los cuales se utilizan uno o varios colorantes específicos que permiten ver con más detalle el objeto que se observa. En este sistema el aumento se consigue gracias al empleo de varias lentes ópticas. La mayoría de los microscopios alcanzan los 1.000 y algunos hasta los 2.000 aumentos, con ocula res de 10 diámetros y objetivos de 100 diámetros de aumento, haciendo posible que partículas de- 0,2 jim de diámetro pueda ser amplificadas a 0,2 mm, así resultan claramente visibles. En este tipo de microscopio, mayor amplificación no da mejor resolución de los detalles, porque se reduce el área de observación o campo visual (véase figura 1.7). El poder de resolución del microscopio óptico, en condiciones ideales, es aproximada mente la mitad de la longitud de onda de la luz empleada. El factor que limita el aumento en el microscopio ordinario es el poder de resolucíc n 14 / Microbiología básica para el área de la salud y afines que corresponde a la distancia que debe separar a dos fuentes luminosas puntiformes, para que se visualicen como dos imágenes diferentes. En la mayoría de los laboratorios relaciona dos con microbiología se encuentran microsco pios de luz equipados con tres o cuatro objetivos con amplificaciones diferentes cada uno. El grado de amplificación se calcula multiplicando el poder de amplificación del ocular por el poder de amplificación del objetivo correspondiente. Por lo general, el poder de amplificación es de diez veces, aunque pueden encontrarse oculares de menor y mayor aumento. NA del objetivo + NA del condensador Longitud de onda de la luz Poder de resolución = Longitud de onda de la luz NA del objetivo + NA del condensador NA = apertura numérica NA = n seno 0 Donde: n: es el índice de refracción del medio que se encuentra entre el objeto y la lente. 0: es la mitad del ángulo del cono de luz que entra en el objetivo. Cuando el medio entre la lente y el objeto es el aire, la apertura numérica es siempre menor que 1.0: en consecuencia, el poder de resolución obtenido es de 0,3 a 0,4 jum. Cuando se coloca aceite de inmersión, la apertura alcanza valores entre 1,2 y 1,4, y el poder de resolución alcanza un máximo de 0,2 |um, es decir, que con el uso de aceite de inmersión pueden observarse los objetos cuyo tamaño esté en las cercanías de las 2 |im o más (véanse figuras 1.7-1.10). Historia de la microbiología í 15 Ocular IPX Objetivo 4X yAumento total 10Xx4X= 40 Portaobjetos } Distancia de enfoque Ocular 10X Objetivo 10X ’ Aumento total 10Xx 10X= 100 Portaobjetos Distancia de / enfoque Ocular 10X Objetivo: 40X Ocular 10X Objetivo. 100X Portaobjetos Aumento total 10X x 40X= 400 Distancia de Aceite de '} enfoque
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