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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO “LA IMPORTANCIA DE LA PRUEBA DE ADN EN LA CRIMINALÍSTICA” TESIS QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE LICENCIADO EN DERECHO P R E S E N T A : Martha Karina Ramírez Melgoza Asesor: Dr. José Ruano Ortiz México, D. F. 2010 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. AGRADECIMIENTO Ante todo gracias a Dios por la oportunidad de vida, a mis padres por su tolerancia y amor y a mi hijo por existir. Gracias a mi asesor por su tiempo dedicado y por permitirme aprender de su sabiduría CONTENIDO OBJETIVO PROPÓSITO CAPITULO I ANTECEDENTES 1.1 Historia de la genética. 1.2 Especulaciones antiguas acerca de la herencia. 1.3 Los filósofos griegos antiguos. 1.4 Descubrimiento de espermas y óvulos. 1.5 Teorías y experimentos de Maupertuis. 1.6 Contribuciones de Charles Darwin. 1.7 Teoría de Weismann sobre el Germoplasma. 1.8 Teoría de la mutación de Vries. 1.9 El descubrimiento del ADN y de los cromosomas. 1.10 El padre de la genética Gregorio Mendel. 1.11 La genética de principios del siglo XX. CAPÍTULO II DESCUBRIMIENTO DEL ADN Y CROMOSOMAS 2.1 Estructura del ADN. 2.2 ¿Qué es el ADN? y ¿Cómo ayuda a determinar la paternidad? CAPÍTULO III TÉCNICAS DE ANÁLISIS DEL ADN EN GENÉTICA FORENSE 3.1 Bases biomoleculares del estudio del ADN en Medicina forense. 3.2 Reacción en cadena de la polimerasa. 3.3 Secuenciación. 3.4 El ADN y la Medicina forense. 3.5 Polimorfismos del ADN. 3.6 Técnica de Análisis de estos Poliformismos en Genética Forense. 3.7 Genéticas o Huellas de ADN (DNA profile). 3.8 Análisis de los polimorfismos de ADN por PCR. 3.9 Resultados y discusiones. 3.10 Crece la demanda de pruebas de ADN. CAPITULO IV FUNDAMENTO LEGAL 4.1 Legislación española. 4.2 Legislación peruana. 4.3 Legislación estadounidense. 4.4 Legislación argentina (hace mención a la legislación británica) 4.5 Legislación mexicana. CAPÍTULO V. GUÍA PARA LA RECOLECCIÓN Y PRESERVACIÓN DE EVIDENCIA DE ADN 5.1 Manera de transferir evidencia biológica. 5.2 Depósito directo. 5.3 Transferencia secundaria (indirecta). 5.4 Recolección y preservación de evidencia biológica. 5.5 Guías para la documentación de la evidencia de ADN. 5.6 Conclusión. 5.7 Recolección de evidencia de ADN en la escena de un crimen. CAPÍTULO VI EVOLUCIÓN DE TÉCNICAS DE ESTUDIO DE LOS POLIFORMISMOS DE ADN 6.1 Componentes de PCR. 6.2 Primers. 6.3 Dexoxinucleótidos trifosfatos. 6.4 Taq-polimerasa. 6.5 ADN molde o template. 6.6 Adyuvantes de la PCR: 6.7 Electroforesis en geles verticales de poliacrilamida. 6.8 Futuras tecnologías. Biochips. 6.9 Aplicaciones de los biochips. CAPÍTULO VII PRUEBAS DE PATERNIDAD 7.1 Prueba voluntaria anónima. 7.2 Prueba voluntaria identificada. 7.3 Pruebas requeridas por el poder judicial peruano. 7.4 Método RFLP para la prueba de paternidad por ADN. 7.5 Descripción del método RPLP: 7.6 Método STR para la prueba de paternidad por ADN. CAPÍTULO VIII IDENTIFICACIÓN FORENSE POR ADN 8.1 AO.- Identificación de restos humanos. 8.2 Herencia. 8.3 Inmigración a los Estados Unidos. 8.4 Metodología de trabajo. CAPÍTULO IX LA IMPORTANCIA DE LA PRUEBA DEL ADN EN MÉXICO. CONCLUSIONES GLOSARIO DE TÉRMINOS DE USO FRECUENTE BIBLIOGRAFÍA OBJETIVO Promover un equipo eficaz de médicos y colaboradores en la realización de las pruebas, con estudios en el extranjero, para tener una mejor capacidad como país, de médicos legales que se hagan responsables de dichas pruebas con mayor conocimiento de causa y eficacia en el desarrollo de tal. Tenga apoyo para elevarla a categoría de ley, para una aplicación universal por voluntad del poder ejecutivo. Sería menos oneroso una prueba de ADN que el mantenimiento de un reo y que resulte inocente por el daño moral y físico que se le hace al presunto responsable y a su familia, también el daño moral que se le añade. Hacer valer las responsabilidades de las personas por los actos cometidos y los resultados de éstos. 1 JUSTIFICACIÓN El propósito de esta investigación es el proponer a la prueba de ADN, como la prueba más certera para la identificación de delitos y delincuentes, ya que tiene una veracidad del 99.99% en la identificación de personas. Y sería de gran ayuda un banco de datos de determinados delincuentes, ya que la mayoría reincide en la comisión de delitos. Realizar una iniciativa de ley para proponer el uso de esta prueba en delitos, como homicidios, violaciones o prueba de paternidad. Es factible para la eficacia de justicia y sigo insistiendo que sería menos oneroso el uso de esta prueba que valdría alrededor de 10,000 pesos realizada por la PGR, que una persona sentenciada por 30 ó 50 años inocentemente. Y como país sería un gran desarrollo, por lo que los médicos legistas estarías más preparados para la realización de la prueba y al momento de recolectar pruebas sea más cuidadoso, ya que es fundamental para la identificación del delincuente y al momento de capturarlo, comprobarlo con una prueba de ADN tendríamos la veracidad de la persona o no. Esto nos ayudaría a que México sea mejor país en la aplicación de su justicia y los verdaderos delincuentes estarían en los centros de reclusión y no gente inocente, que si llega a salir ya no la aceptan en un trabajo tan fácilmente, daña su imagen, su familia e hijos si los tiene y el pero de los casos es que si llega a salir, ya no es lo mismo, sale graduado en delincuencia por la convivencia entre violadores, secuestradores, ladrones y homicidas. Y teniendo como ejemplo a Inglaterra, España, Argentina, Perú, en este último fue iniciativa de ley y ahora es aplicable para la identificación de la 2 paternidad, homicidios y violaciones con gran resultado, aunque también en México se ha aplicado como en Tamaulipas y Monterrey, esta prueba se aplica para realizar identificaciones en los delitos de homicidios, violación y prueba de paternidad. Así se llegaría a lo más importante de la justicia que fuera justa y expedita con una certeza del 99.99%, sin equivocación y sería un mejor país, todo es tener un poco de fuerza de voluntad el realizar todos un mejor trabajo, los organismos de orden judicial, los senadores y diputados el proponer la ley, los médicos en su trabajo de metodología de la prueba, en la recolección, los jueces al considerar esta prueba contundente en determinados casos y hasta las mismas personas que cometen los delitos, porque ya se les tiene en el banco de datos y una reincidencia es una veracidad absoluta. Esto sería un gran paso para México en la aplicación de la justicia que tanto necesitamos, ya que la corrupción no ayuda para la aplicación de justicia y con estas pruebas se puede hacer algo positivo y demostrar que la persona recluida es culpable o inocente. 3 CAPÍTULO I ANTECEDENTES Esta gran travesía humana comienzaen África con un grupo de recolectores y cazadores, iniciado tal vez con una centena, termina alrededor de 200 años después con sus 6,500 millones de descendientes diseminados alrededor del mundo, viviendo en paz o en guerra. La trama en una gran saga de supervivencia, movimiento, aislamiento y conquista que en su mayor parte se desarrolla en el silencio de la prehistoria, en realidad queriendo saber de dónde venimos, cómo llegamos y dónde estamos hoy. Y durante décadas las únicas pistas eran los escasos huesos, objetos en su travesía de sus viajes. Sin embargo los últimos 20 años, los científicos han encontrado un registro de antiguas migraciones humanos en el ADN de la gente viva. Porque cada gota de sangre contiene un libro de historia, escrito en el idioma de nuestros genes. Existe un genetista poblacional y explorador Spencer Wells, el cual expone que nuestro código genético humano o genoma es 99.9% idéntico a todas las personas en el mundo y lo que resta es el ADN responsable de nuestras diferencias individuales, el color de ojos, de padecer ciertas enfermedades, pudiendo adquirir una mutación aleatoria e inofensiva, siendo heredada a todos los descendientes de esa persona. Al comparar marcadores en muchas poblaciones diferentes, los científicos pueden rastrear sus conexiones ancestrales. La mayor parte del enigma son los cambios que quedan ocultos por la reorganización genética que ocurre cada vez que el ADN de la madre o un padre se combinan para crear a un hijo. Existiendo un par de regiones que conservan las variaciones reveladoras una de ellas llamada ADN mitocondrial ADNmt se 4 transmite íntegra de madre a hijo y de manera similar de los cromosomas y viajando intacto del padre al hijo. Las mutaciones acumuladas en el ADNmt y los cromosomas Y constituyen dos filamentos en el enorme tapiz de personas que han contribuido a formar un genoma individual. Al comparar el ADNmt y los cromosomas Y en gente de poblaciones diferentes, los genetistas se forman una idea general de dónde y cuándo se separaron esos grupos en migraciones diferentes del planeta. A mediados de los años 80 el finaod Allan Wilson y sus colegas de la Universidad de California en Berkely, utilizaron ADNmt para ubicar el hogar ancestral de la humanidad, compararon el ADNmt de mujeres de todo el mundo y encontraron que aquellas de ascendencia africana mostraban el doble de diversidad que sus congéneres, creyendo así que deben haber vivido en África el doble de tiempo que en cualquier otro lugar Hoy en día los científicos calculan que todos los humanos estamos emparentados con una mujer en particular, quien vivió hace unos 150 mil años en África, una Eva mitocondrial, por lo que toda la humanidad está ligada a esta Eva mediante una cadena matrilineal continua y la cual se uniría con Adán cromosoma Y. Porque se ha confirmado con estudios precisos sobre el ADN, que todas las personas de la Tierra, a sus variadas formas y colores tienen una fusión ancestral con los cazadores y recolectores africanos. Existen muestras de fabricación de herramientas complejas, redes sociales, muestras de arte en África, los cuales son los más antiguos, opinión de arqueólogos. La evidencia genética sugiere que en Asia, la población se dividió, un grupo se estableció temporalmente en Oriente Medio y otro siguió la Península Arábiga, India y más allá. 5 Los nómadas llegaron hasta el sureste de Australia hace aproximadamente 545 mil años, encontrando restos de un hombre y objetos con unos 50 mil años de antigüedad, la cual es la evidencia más remota que existe fura de África. Los rasgos genéticos perduran en algunas etnias de las islas Andaman, cercanas a Myanmar, así como Malasia y de Papúa Nueva Guinea, son portadores de las señales de un linaje mitocondrial antiguo. Y la gente del resto de Asia y Europa comparten linajes de ADNmt y cromosomas Y, diferentes pero igualmente antiguos, que los convierten en descendientes de otra rama del éxodo africano. El poblamiento de América es uno de los capítulos más recientes y de los más polémicos, porque se tienen historias que los nativos americanos son descendientes de antiguos israelitas o de civilización perdida de la Atlántica, de hecho la mayoría de los científicos está de acuerdo con que los nativos americanos descienden de los antiguos asiáticos que cruzaron desde Siberia hasta Alaska, durante le último periodo glaciar, cuando el bajo nivel del mar pude haber dejado al descubierto un puente de tierra entre los continentes. Encontrándose en Meadowcrof Shelter en Pensilvania un sitio arqueológico de hace 16 mil años y otro en Monte Verde, en el sur de Chile con 14 años de antigüedad. Observando su necesidad de crecimiento de población y caza de animales se dispersaron entre mil y dos mil años por todo el continente americano y quizás la historia que ocultan nuestros genes sea que el intrincado nudo de nuestra diversidad genética global se desenrede y nos conduzca de regreso a África. 6 Historia de la Genética. La genética es una ciencia bastante nueva ya que prácticamente todos los conocimientos se han adquirido en el siglo XX y los mayores descubrimientos en los últimos treinta años. Encontrándonos con bases antiguas, como una tablilla babilónica de 4 000 años antes de Cristo, mostrando la genealogía de cinco generaciones de caballos, de cómo se transmitían las características de la cabeza y del crin, otros muestran hombres efectuando la polinización de la palma destilera, con intención de producir plantas híbridas que rindieran frutos superiores. En China indican que en esa región se empleaban principios genéticos para desarrollar variedades de mejoras de arroz. Especulaciones antiguas acerca de la herencia. Aunque las bases físicas de la herencia han sido conocidas sólo desde tiempos recientes de la antigüedad, se especulaba acerca de ella, dándose muchas hipótesis y varias de ellas apoyadas con observaciones. Los filósofos griegos antiguos Una de las especulaciones más antiguas que está registrada se atribuye a 1 Pitágoras un filósofo griego que murió alrededor del año 500 a.C., el cual propuso que durante la unión sexual un vapor desciende del cerebro de los nervios y de otras partes de un animal macho.; este vapor se condensa en el semen. El vapor que forma el semen es portador de una remembranza de las partes del cuerpo de la que se originó y transmite esta información al embrión en desarrollo. Así el 7 embrión se asemeja a su progenitor masculino, las similitudes maternas resultan de la influencia de la madre sobre el embrión durante la vida intrauterina. Empédocles hizo algunas enmiendas a este concepto, proponiendo que ambos progenitores, producen semen de la parte de su cuerpo y que es la combinación de los dos sémenes lo que forma al embrión. Observó también que los descendientes no muestran todas las características de ambos progenitores y esto lo explicó con la sugerencia de que no todas las partes del cuerpo contribuyen al conjunto de semen. Doscientos años más tarde Aristóteles, refinó estas ideas y propuso que el semen masculino es producido por la sangre, siendo sangre alyamentemente purificada. El flujo menstrual de una mujer es su semen, pero no está tan purificado como el del acho, cuando se unen la mujer aporta las sustancias del embrión, mientras que el semen del macho agrega las propiedades de dar forma. Refutación de las teorías de Aristóteles fueron aceptadas generalmente como hechos durante casi 2 000 años en libros médicos del siglo XVII se incluían ilustraciones que mostraban las diferentes etapas de la coagulación de los sémenes para producir un embrión, luego en Inglaterra (1651) William Harvey conocido por su descubrimientode la circulación de la sangre, inició investigaciones para poner a prueba dichas teorías, Harvey usó la hipótesis de que así como el hierro se magnetiza por fricción, así el útero por la fricción en el coito adquiere fuerzas magnéticas para concebir un embrión pero la sola fricción no es suficiente, se requiere del semen y del macho para vitalizar y dar vida al embrión 1 A.M. Winchester .pág. 31 Genética .Un estudio de los principios de le herencia 8 Descubrimiento de espermas y de óvulos. Un paso muy importante se dio en le última parte del siglo XVII permitió una mejor comprensión del proceso de la herencia fue una invención del microscopio. Todas las especulaciones anteriores habían sido hechas sin ningún conocimiento de la existencia de, los mamíferos de células espermáticas o de óvulos .Wolf propuso la teoría de la epigénesis, la cual sostenía que las células reproductoras contienen ciertos cuerpos definidos, los cuales después de la unión tienen fuerza para organizar las partes del cuerpo. En épocas posteriores se encontró, que los cromosomas Y, después de los genes situados en ellos, representan estos cuerpos. Teorías y experimentos de Maupertuis. En el siglo XVIII el francés Pierre Louis Moreau de Maupertuis, estudió, experimentó y escribió sobre conceptos de la herencia. Propuso la hipótesis de que ambos progenitores aportan semen y que éste está formado por partículas pequeñas, cada una de las cuales es destinada a formar una parte específica del cuerpo, una por cada una de los padres. Una de estas partículas podría ser dominante sobre la otra, de tal manera que un niño puede mostrar una característica de uno de sus padres que no está presente en el otro. También sugirió que las partículas de la herencia eran producidas en diversas partes del cuerpo y que luego emigraban a los órganos reproductores. Y mediante diversas cruzas, entre variedades distintas, demostró cómo la descendencia mostraba caracteres tanto del macho como de la hembra que los habían engendrado. 2 A.M. Winchester. pag. 33 Genética Un estudio de los principios de la herencia 9 Jean Baptista Lamark, nacido en Francia en 1744, propuso que en su vida diaria, un animal primero desarrolla ciertas necesidades, éstas luego conducían a deseos y daban como resultado el desarrollo de las partes del cuerpo, requeridas para satisfacer esos deseos, se volvían más grandes y más eficientes mientras que aquellas que se usaban poco tendían a reducirse de tamaño y a volverse menos eficientes, esta idea es conocida como uso y desuso. El error fue suponer que estas adaptaciones individuales se transmitían a generaciones futuras. Propuso también la creencia de que el clima, las condiciones geográficas y la cantidad de alimento influyen en los animales, ocasionando que aparezcan nuevos órganos y que los viejos desaparezcan o se modifiquen por darles uso diferente. Lamark creía en una Deidad Suprema que había sido el creador de la vida, pensando que si la vida había sido creada en forma tal que podía desarrollar muchas formas diferentes a través de los cambios evolutivos. Contribuciones de Charles Darwin. Darwin fue un inglés del siglo XIX que estudió las variaciones dentro de las especies y quien es más conocido por el empeño que puso en hacer resaltar la importancia de la selección natural de la evolución. El concepto de Darwin era que en una planicie de África, un par de antílopes produce un promedio de alrededor de 8 hijos, de éstos sólo dos sobreviven, los otros mueren en la competencia de la sobrevivencia, ésta misma selección se efectúa de generación en generación seleccionando así a los más aptos para continuar la especie. 3 Darwin propuso una hipótesis provisional de pangénesis, suponiendo que cada parte de un animal produce pequeñas gémulas que son transportadas por la sangre y se unen en las células reproductoras, estos pequeños cuerpos son transmitidos a la descendencia y han que las partes del cuerpo sean semejantes a aquellas que produjeron las gémulas. 3 A.M. Winchester. Genética .Un estudio de los principios de la herencia .pág. 36 10 Sugiriendo que las gémulas no sólo emigran de los granos al polen o a óvulos sino también a las plantas leñosas. Para explicar el hecho de que los animales más simples pueden regenerar patas y colas perdida, sugirió que en la región de la lesión se reunía una agregación de émulas que estimulaban el crecimiento del miembro faltante. Para explicar cómo en algunos casos en un infante, se expresaban caracteres que habían tenido los abuelos, pero no los pares. Darwin propuso que no todas las gémulas son empleadas para producir un embrión y que las sobrantes pueden entrar en las células reproductoras y afectar a la siguiente generación. Aunque esta hipótesis era incorrecta, estimuló el pensamiento y la experimentación en estas líneas y por lo tanto contribuyó al desarrollo de nuestros conceptos modernos de la herencia. Teoría de Weismann sobre el Germoplasma. Casi a fines del siglo XIX el biólogo alemán, Augusto Weismann,4 propuso que la vida de un ser humano principia cuando se efectúa la unión del germoñlasma procedente de sus dos progenitores, mediante repetidas divisiones celulares, este germoplasma produce las diversas partes del cuerpo humano, pero una porción del germoplasma permanece aislada y sin diferenciarse y en ésta la parte que da origen a las células reproductoras, así hay una continuidad del germoplasma que existe en forma algo praparasitaria del somatoplasma que ha formado. Efectuó varios experimentos como cuando cortó la cola de ratones recién nacidos por 22 generaciones, pero al ver que en la 236 nacían con la cola, sacudió la teoría de pangénesis. 4 A.M. Winchester.Un estudio de los Principios de la Herencia Genética .pág 40 11 En la década de 1870 se habían descubierto los cromosomas en las células en división y pronto se les reconoció como la base física de la herencia. Su primera gran idea de la continuidad del germoplasma ha resultado ser esencialmente correcta y forma una base de conceptos genéricos, la segunda idea de un aislamiento del germoplasma al principio del desarrollo embirionario es correcta en parte y debe ser modificada con la ampliación de que varias células del somatoplasma, pueden en ciertas condiciones, producir individuos complejos, ya que ellas al igual que las células germinales contienen todos los elementos de la herencia. Teoría de la mutación de Vries. El holandés Hugo de Vries hizo observaciones importantes en 1901, 5 propuso la teoría de la mutación, postulando que los organismos vivientes ocasionalmente producen nuevos tipos hereditarios, por medio de cambios súbitos, esto es mutaciones en las unidades de la herencia. Con el tiempo encontrándose que las variantes de la vellotina de la tarde observadas por Vries eran debidos a cambios cromosomáticos y que no eran verdaderas mutaciones genéticas. De Vries fue una de las tres personas que redescubrieron el Trabajo de Gregorio Mendel en 1900. El descubrimiento del ADN y de los cromosomas. Ahora se oye hablar bastande del ADN (ácido desoxirribonucleico), la sustancia de que están compuestos los genes y se tiende a pensar que es un descubrimiento reciente, pero en realidad fue descubierto en el siglo XIX. 5ªA.M. Winchester.Un estudio de los Principios de la Herencia. Genética .pag42 12 En 1869, un científico suizo Friedrich Miescher, hizo 6 una separación química de las partes de las células de pus que había colectado de las heridas de los pacientes en un hospital, obteniendo núcleos celulares y de estos núcleos extrajo un material gelatinoso al que llamó nucleína. Ésta era la sustancia que se teñía fuertemente con colorantes básicos, de modo que se consideró como unácido nucleico. A medida que mejoró la calidad de los microscopios y se ampliaron los estudios de las células teñidas, no pasó mucho tiempo para que se descubrieran los cromosomas. En 1873, los alemanes Walter Flemming y E. Strasburger, entre otros, en el periodo de 1875 a 1882,7 describieron el comportamiento de los cromosomas en las células de división de animales y plantas. Óscar Hertwing y Hermann Fol, en 1875, habían observado la unión de los núcleos masculinos y femeninos durante la fecundación. En 1882, el belga Edouard van Benedenvio observó la fecundación de Ascaris, vio que dos cromosomas de cada progenitor forman un solo núcleo con cuatro cromosomas, que es el número que se encuentra en las células del cuerpo. El padre de la genética Gregorio Mendel. Nació en 1822 en Checoeslovaquia, después de un corto periodo en Olmutz, se vio forzado por falta de recursos, luego se convirtió en monje agustino en el monasterio de Brno, fue enviado a Viena a efectuar estudios para ser maestro, después regresó a Brno y empezó con éxito una carrera de maestro de ciencias en la escuela secundaria, en sus tiempos libres, hizo cruzamientos entre varios tipos de chícharo en un anexo al monasterio, escogiendo los chícharos por la facilidad de conseguir cierto número de variedades, experimentos que inició porque observó en plantas ornamentales que por hibridación se podían obtener nuevas variedades. 6 A.M .Winchester. Un estudio en los principios de la herencia.pág. 43 7 Idem-pág 44 13 Mendel presentó sus resultados en la Sociedad de Ciencias Naturales de Brno en 1865 y el informe fue publicado en el periódico de la Sociedad. Continuó investigaciones y cruzamientos de otras plantas y también con abejas, pero entonces fue promovido a la dignidad de abad en el monasterio y sus últimos años los pasó ocupado con cuestiones relacionadas con el conflicto entre iglesia y el estado y murió en 1884, sin saber que sería venerado como el “padre de la genética moderna”. La genética de principios del siglo XX. El botánico danés, Wilhelm Johannsen hizo estudios interesantes en el frijol y en 1908 expuso 8 su concepto de línea pura, seleccionando para la siembra sólo los frijoles más amplios y grandes, obteniendo una estirpe que producía frijoles notoriamente más grandes que los de tamaño ordinario. Dentro de sus líneas puras encontró cierta variación en el tamaño de la semilla, pero se halló que esas diferencias eran debidas por las condiciones de crecimiento, e introdujo la palabra gene que remplazó al término factor empleado por Mendel. En Alemania Edwin Baur y Carl Correns encontraron que no todos los genes se segregan en forma independiente, como lo describiera Mendel, sino que algunos de ellos tienden a moverse, junto con una unidad en las generaciones subsecuentes, éste fue el principio para comprender el ligamiento de los genes, que se encuentran en el cromosoma. En Inglaterra, W. Bateson y R.G. Punnett y el principio del ligamiento de genes quedó demostrado en forma definitiva. Punnett ideó un método para diagramar los cruzamientos genéticos llamado el cuadro de Punnett y predecir las proporciones de diferentes tipos de descendencia que debe esperarse. En Estados Unidos de América las primeras investigaciones de genética se centraron en la Universidad de Columbia, 8 A.M .Winchester. Un estudio de los principios de la Herencia .pág 45 14 Wilson fue el pionero en citogenética e hizo descubrimientos de importancia en las relaciones entre los cromosomas y la herencia. 9 W.S. Sutton un estudiantes de Wilson aportó las pruebas críticas para demostrar que los genes se encuentran en los cromosomas. Thomas Hunt Morgan también de Columbia fue el primero en emplear la Drosophila en experimentos de crianza genética. William Castla en Harvard fue un precursor en genética de los mamíferos. 10 Lysenko en la Unión Soviética realizó una buena lección objetiva sobre el intento de imponer un control gubernamental a los resultados de las investigaciones científicas. Expone la idea de que los cambios en las condiciones de vida traen aparejados cambios en el tipo de desarrollo en los organismos vegetales. Finalmente con la muerte de Stalin y la caída de Khrushchev mejoraron mucho las condiciones para la investigación genética, efectuándose investigaciones a un nivel competente de experimentación genética científica. 9 A.M. Winchester. Un estudio de los principios de la herencia ,pág. 46 10 idem pág. 47 15 CAPÍTULO II DESCUBRIMIENTO DEL ADN Y CROMOSOMAS Desde el inicio de la humanidad se ha querido saber de dónde se hereda el carácter de padre a hijo y se había estudiado teóricamente, con flores, caballos más veloces, maíces, etc. Fue hasta el año de 1865 que un monje agustino Gregorio Mendel descubrió que la herencia estaba determinada por un factor discreto que después se conoció como genes, los cuales son heredados de los padres y su estudio riguroso y matemático permitió que la genética se transformara de arte a ciencia. Como resultado de sus experimentos concluye que los padres tienen 2 pares de genes y que los genes no se mezclan, que la herencia sigue ciertas reglas y que los genes son cosas reales, y Mendel en vez de ver las plantas de chícharos se enfocó a las características de los frutos y publicó su trabajo en 1865 con el título de “Experimentos de Hibridación de Plantas” y hasta 1900 fue confirmado, ya que en esa época se aceptaba a la célula como la unidad más pequeña e indivisible de vida y se concluye que los genes están dentro de la célula. El concepto de en de Mendel se confirmó aún más en el siglo XX, al estudiar la división celular o mitosis usando tinturas y se pudo apreciar el proceso de transmisión de herencia en el ámbito celular. El ácido ribonucleico ADN como componente químico del núcleo celular fue descubierto más o menos por la época de Mendel y Darwin, 1859 aproximadamente. Archibal Garrod en 1902, George Beadle y Edgard Tantum en 1941, confirmaron que el ADN y las proteínas son moléculas clave en el núcleo de una célula. 16 11 Se descubre que el gen genera proteína y están constituidos de ADN y que está configurada una escalera retorcida, que el ácido ribonucleico ARN es un mensajero entre ADN y proteína, y la molécula de ADN se compone de A adenina, T tiamina, C citosina y G guanina y según su orden elaboran el código o programa de fabricación de proteínas y por ende la construcción celular de tejidos y organismos como el hombre. Las bases nitrogenadas se unen siempre del mismo modo (adenina con tiamina y guanina con citosina) a través de los puentes de hidrógeno. El ADN fue aislado por primera vez de las células del pus y del esperma de salmón estudiado por Friedrich Miescher en 1869, lo llamó nucleína debido a la participación en el núcleo celular, se necesitaron casi 70 años de investigación para poder identificar por completo los sillares principales y la estructura del esqueleto de los ácidos nucleicos, pero con la ayuda de las computadoras de alta capacidad, con las modernas técnicas y con los aparatos de análisis químico, revolucionando la Medicina forense genética. Estructura del ADN. La molécula de ADN está constituida por 12 dos largas cadenas de nucleotidos unidas entre sí formando una doble hélice. Las dos cadenas de nucleotidos unidas entre sí formando un enlace entre las bases nitrogenadas quedando enfrentadas adenina con tiamina y la guanina con la citosina, residiendo en estas bases la información genética del ADN. Se forman enlaces entre las bases nitrogenadas de ambas cadenas que quedan enfrentadas. 11www.unida.edu.mx Dc Ernesto García Marín 29 de septiembre de 2003. 1712 La unión de las bases se realiza mediante puentes de hidrógeno y éste apareamiento está condicionado químicamente en forma de adenina A, sólo se puede unir con timina T y la guanina G con la citosina C. ¿Qué es el ADN? y ¿Cómo ayuda a determinar la paternidad? 13 El ADN (ácido desoxirribonucléico) constituye el material genético de las células del cuerpo humano. Con un tipo de excepción el ADN se encuentra exclusivamente en el núcleo de las células, en el genoma (conjunto integral) y secuenciado del ADN) humano se estima que hay aproximadamente 27 000 genes. Los genes son trozos funcionales de ADN compuestos a su vez de 1 000 hsta 200 000 unidades cada uno llamadas nucleótidos. 12Ideograma de la celula y la estructura de adn .Doblan Laboratorios.2003 13 Cal Teba María Luisa.2001 Analisis de Poliformismos Microsatélite de Cromosoma. Tesis Doctoral .Universisdad de Santiago Compostela 18 14 Los nucleótidos se encuentran organizados formando un par de cadenas abrazadas que toman la forma tridimensional de un doble hélix. Hay más de 3 000 000 000 tres mil millones de pares de bases que constituyen el genoma de una célula humana. Cada nucleótido del ADN está compuesto por tres subunidades: una base nitrogenada, una desoxirribosa y un grupo fosfato; hay cuatro tipos de bases nitrogenadas en los nucleótidos del ADN: timina (T); citosina (C), guanina (G), adenina (A). Es importante resaltar que así como hay regiones con función conocida o supuesta (los genes) sucede que casi la mitad del ADN del genoma humano consiste en regiones (intrones) con función hasta hoy desconocida y que tienen una secuencia de nucleótidos repetitiva en muchos casos pero con patrones hipervariables en muchas regiones del genoma. Es precisamente la hipervariabilidad (polimorfismos) de estas regiones del ADN de lo que se aprovecha para detectar diferencias o semejanzas entre un ser humano y otro estudiando su ADN. Las regiones repetitivas pueden presentarse como tandas repetitivas, cortas o largas. A esto se le llama VNTRS “Variable Number of Tandem Repeat” entre los que están los STR (Short Tandem Repeat) que son las regiones hipervariables que estudiamos nosotros para las pruebas moderneas de paternidad. Toda célula nucleada contiene 46 cromosomas excepto los gametos: los espermatozoides en el hombre y los óvulos en la mujer, que tienen 23 cromosomas cada uno, los cromosomas son tan solo la forma como la célula ordena su ADN combinándolo con ciertas proteínas. 14 www.unida.edu.mx 29 de septiembred e 2003 Dr Ernesto García Marín en Ciencia Política. 19 15 En el momento de la concepción se necesitan 46 cromosomas para procrear un nuevo ser humano. En consecuencia una persona debe recibir exactamente la mitad de su material genético de su madre biológica y exactamente la otra mitad del padre biológico. La prueba del ADN está basada en un análisis exacto de los perfiles genéticos de la madre del niño o niña y del presunto padre. Si se conocen los perfiles genéticos de la madre y de su hijo o hija, el perfil genético del padre puede ser deducido con certeza casi total. Si no se hace la prueba a la madre, los perfiles de ADN del niño o niña serán comparados al perfil del ADN del supuesto padre. La técnica utilizada por nosotros permite obtener el mismo grado de exactitud (probabilidad de paternidad) en los análisis en que no se examina el ADN de la madre sino sólo el ADN del hijo o hija y el ADN del presunto padres. El ADN se puede extraer a partir de una variedad de muestras: • Células epiteliales de la mejilla. • Glóbulos blancos de la sangre. • Folículos pilosos. • Células fetales (provenientes del líquido amniótico) en cultivo. • Semen. • Otras muestras biológicas (tejidos, indicios fluidos,; orina, vómitos, sinovial y céfalo-raquídeo, estos últimos líquidos raramente como indicios únicos. 15 Martínez Murillo Salvador. Medicina Legal. Su importancia en Aspectos Científicos, Definiciones. En Medicina Legal XIII edición México D.F. p1-28 20 16 El ADN (ácido desoxirribonucleico) es el material genético de la célula y aparece en forma de filamentos débilmente entrelazados a modo de ovillo denominados cromatina, en el núcleo de cada célula, justo antes de que la célula se divida, la cromatina se espiraliza y se forman cromosomas, la molécula de ADN es una larga doble hélice enrollada sobre sí misma, semejante a una escalera de caracol, en ella, dos ramales compuestos de moléculas de azúcar (desoxirribosa) y fosfato se conectan gracias al apareamiento de cuatro moléculas denominadas bases, que forman los eslabones de la escalera, en los eslabones, la adenina se aparea con la timina y la guanina con la citosina. Así cada par de bases está unido por un enlace de hidrógeno, un gen es un segmento de ADN que tiene una determinada función y está constituido por una secuencia específica de bases. 16www.unida.edu.mx. 29 de septiembre 2003 Dr Ernesto García Marin en Ciencia Política. 21 CAPÍTULO III TÉCNICAS DE ANÁLISIS DEL ADN EN GENÉTICA FORENSE El desarrollo social ha traído consigo una modificación de tipología delictiva que ha hecho relativamente frecuente determinados tipos de actos criminales caracterizados por su violencia con una notable desproporción de fuerzas entre víctima y agresor, por una utilización de documentos y armas que hacen que la evidencia o indicio dejados en el lugar de los hechos por el autor o autores sean mínimas. Y paralelamente el desarrollo científico ha posibilitado la aplicación de nuevas tecnologías que han ido profundizando a su capacidad identificatoria sobre indicios cada vez más pequeños, siendo el máximo exponente el ADN. Desde su primera aplicación en Inglaterra por Alec Jeffreys en el año 1985, para la resolución de un caso de inmigración de un joven procedente de Ghana y posteriormente utilizado dos años más tarde a la investigación criminal identificando a Robert Welias un peón de Bristol de 32 años de edad como autor de una agresión sexual a una mujer enferma de polio y a Nigel Davis como autor del denominado caso del condado de Leicestershire, en el que se produjo una violación y muerte de dos mujeres del condado, la primera en 1983 y la segunda en 1985 y donde los métodos serologiacos clásicos no pudieron lograr una individualización suficiente con los indicios biológicos obtenidos de las víctimas, su uso se ha extendido y generalizado a una velocidad sólo comprensible y justificable por la efectividad y versatilidad de la tecnología. 17 Esta aceptación ha conllevado a un notable desarrollo con una evolución de técnicas aplicables para la identificación forense y en un periodo de aproximadamente 10 años se ha pasado de fragmentos de ADN de longitud 17Lorente Acosta J.A .Lorente Acosta, E, Villanueva Cañadas. Cuaderno de Medicina Forense No 3 enero 1996 22 medio de su amplificación mediante una reacción de cadena de polimerasas (PCR). Estos indicios biológicos que posteriormente van a ser de gran importancia para la identificación de personas durante procesos, es donde se debe de tener mucho cuidado al momento de recoger, almacenar y envío debe cuidarse extremadamente, ya que si el médico forense no es consciente de esto, se perderán y se degradarán o se contaminarán, invalidando cualquier investigación posterior privando así a la administración de justicia. Así la identificación de un perfil genético que tenga características óptimas para su utilización y valoración en el proceso judicial, tendrán más certeza en sus resultados- Bases biomoleculares del estudio del ADN en Medicina forense. 18 El ADN es un polinucleótido constituido por dos cadenas antiparalelas de unidades de desoxirribonucleótidosunidos covalentemente dispuestos de una forma complementaria y adoptando una estructura enrollada en doble hélice dextrogira. Las bases que forman los nucleótidos son la adenina A, guanina G, citosina C y timina T. Su estructura fue descubierta por James Watson y Francis Crack en 1953, lo cual permitió afrontar su estudio en forma directa evitando los complejos caminos utilizados hasta entonces. La función del ADN se divide en 2 grupos. I.- ADN codificante o esencial. Encargado de almacenar la información genética en los genes. La secuencia de aminoácidos de las proteínas que codificaban y el grado de expresión del gen a cada tejido y en cada tiempo. 18M.Lorente Acosta, J, A. Lorente Acosta E, Villanueva, Cañadas. Cuadernos de Med Forense No 3 enero 1996. 23 II.- ADN no codificante. Aunque no sea una función muy específica y es desconocida en la actualidad, juega un importante papel en la estructura y función de cromosomas, actuando como puntos calientes de recombinación. Teniendo dos tipos un ADN espaciador, formado de una secuencia sencilla de bases que se disponen entre regiones codificantes del genoma y el ADN repetitivo que lo forma una secuencia que al contrario del espaciador se dispone por todo el genoma debido a la existencia de múltiples copias. A su vez este ADN repetitivo se divide según las características de la secuencia “Secuencias repetidas en tandem” en la que existe una secuencia común relativamente corta que se repite en tandem de manera continua una tras otra en un fragmento de ADN. Las características generales del ADN no codificante lo hacen especialmente útil para su aplicación de la identificación de la Medicina forense. El ADN no codificante presenta una gran variabilidad de unos individuos a otros, ya que estas secuencias no son conservadoras al no afectar sus cambios a la fisiología del individuo. Los métodos más extendidos y de común aplicación en Medicina forense para estudiar el ADN son: Hibridación de sondas. 19 Consiste en la identificación de una gran región determinada mediante el uso de una sonda, que es un fragmento monocatenario de ADN complementario a una secuencia de bases conocidas. 19M.Lorente Acosta, J.A..Lorente E. Villanueva Cañadas Cuadernos de Medicina Forense No3 24 Esta sonda marcada con un producto radiacativo o quimioluminescente, se pone en la solución con el ADN de la muestra y se visualiza después de una serie de procesos para separar los diferentes alelos que pueden existir con base en la longitud de los mismos. Reacción en cadena de la polimerasa. Esta técnica realizó una verdadera revolución en el estudio del ADN, inventada por Kary Mullis en 1987, 20 le supuso el premio Nóbel de Química. Gracias a esta técnica se puede amplificar una determinada región del ADN que esté delimitada por una secuencia específica y complementaria a unas pequeñas sondas denominadas primers que actúan como iniciadores de la reacción de polimerización que lleva a cabo una enzima, habitualmente la Taq polimerasa. Esta enzima va uniendo desoxinucleótidos, que nosotros incluimos en la reacción de forma de forma complementaria a cada uno de los fragmentos en las cadenas que se delimitan por los primers que son tomadas como moldes. La repetición cíclica de este proceso permite la obtención de múltiples copias de dicha región en una cantidad suficiente para ser estudiada. El ADN amplificado se puede visualizar mediante la separación de los alelos de diferente tamaño y tensiòn o estudiando las variaciones de una secuencia. En este caso es posible que cuando tengamos una escasa cantidad de ADN en un indicio o esté parcialmente degradado sea posible amplificarlo y obtner una cantida suficiente para su análisis. Secuenciación. 21En Medicina forense se aplica fundamentalmente para el análisis del ADN mitocondrial por sus especiales características. 20M.lorente Acosta. J.A. Lorente E .Villanueva Cañadas Cuadernos de Medicina Forense No3 25 Es necesario en todos los casos que exista polimorfismo, es decir, que el fragmento o secuencia que se estudia sea polimórfico, o sea con variabilidad de formas diferentes para identificar a los individuos. Todo lo anterior nos lleva a destacar dos grandes aspectos de la investigación del ADN en nuestra especialidad: I.- Se trata de ADN no codificantes, es decir, que la información obtenida tras su análisis no nos puede aportar nada sobre ninguna de las características fenotípicas del individuo. Conforme se va avanzando las investigaciones sobre el Proyecto Genoma Humano se va descubriendo que parte del ADN no codificante está relacionado con alguna característica fenotípica, fisiológica o patológica. Aun siendo un poco significativa su información ayuda más al interés científico que practicó. Al igual que en tantos otros métodos de identificación médico forense es necesario llevar a cabo una comparación entre el perfil genético obtenido del indicio muestra y el genotipo de un individuo o evidencia orgánica. El ADN y la Medicina forense. 22 El análisis de ADN y sus implicaciones forenses son analizados por varios científicos, particularmente de los Estados Unidos y Europa Cal Teba, Ma Luisa (2001), señala casi desde hace un siglo para estudiar las variaciones entre individuos en Medicina forense se utilizan los llamados Poliformismos Genéticos o Marcadores Genéticos-Moleculares, son caracteres estables que se transmiten por herencia Mendeliana simple y constituyen una expresión de la diversidad genética entre los individuos en la misma especie. 21M.Lorente Acosta J.A. Lorente E. Villanueva Cañadas Cuadernos de Medicina Forense No 3 22 idem. 26 23 En la capacidad que tiene el ADN de hacer copias o réplicas de su molécula es un proceso fundamental para la transferencia de la información genética de generación en generación. Esta capacidad es el fundamento de análisis que se aplica en la metodología de la Medicina forense. La doble hélice se separa y cada una de las cadena sirve de molde para la síntesis de una nueva cadena complementaria. El resultado final son dos moléculas idénticas a la original. Hace pocos años en Medicina forense los análisis estaban basados en marcadores genéticos convencionales tales como antígenos eritrocitarios (de eritrocitos) y leucocitarios, proteínas séricas o del suero de la sangre, y enzimas (catalizadores de digestión o construcción biológica de eritrocitos. En la década de 1980 se presenta un avance científico espectacular en el campo de la genética forense a raíz del descubrimiento de las regiones hipervariables del ADN (Jeffreys 1985). A partir de este momento se empieza a generalizar en la Medicina forense de los países desarrollados el uso de la prueba de ADN para identificador de características y herencias genéticas y va disminuyendo el uso de las pruebas convencionales. El ADN es la molécula que contiene toda la información genética del individuo, es decir, es el programa de constitución del organismo. El genoma humano está compuesto por 3.3 mil millones de pb. 1.- El ADN expresivo que es el 30% también llamado codificante tiene una función conocida, por ejemplo, la expresión de un gen cuyo producto final es una proteína, soporta gran presión selectiva por lo que tiene una variabilidad de regiones limitadas. 23M.Lorente Acosta J.A Lorente E, Villanueva Cañadas Cuadernos de Medicina Forense No 3 27 2.- El ADN no codificante que es el 70% comprende funciones de ADN transcripcionalmente inactivas de funciones diversas como promotores de genes y en muchos casos de función desconocida o de función aparente. Este tipo de ADN puede ser altamente polimórfico y tiene mucha importancia para la identificación forense de individuos se puededividir en: ADN de copia única. ADN de copia múltiple. Polimorfismos del ADN. 24 Este término se usó por Ford en 1940 (Cal Taeba 2001) para asignar la parición conjunta en un lugar de dos o más formas discontinuas de una especie. En el ADN codificante existe poca variabilidad individual y los poliformismos suelen acompañarse de modificaciones fenotípicas. En el ADN no codificante por el contrario a no estar sujeto a presión selectiva puede soportar grandes niveles de variabilidad sin que reproduzca representación fenotípica. Esta característica hace que este ADN sea la mayor fuente para la investigación en Medicina forense. Técnica de Análisis de estos Poliformismos en Genética Forense. La técnica de análisis directo del ADN y no de la proteína generada se ha aplicado con los descubrimientos de 1980 en adelante. El trabajo de Wyman y White en 1980 (Cal Teba 2001), dieron el primer paso en la identificación genética por medio del ADN al descubrir un locus polifórmico caracterizado por un número de fragmentos de restricción de longitud variable, bajo condiciones poco rigurosa de hibridación dando lugar a un complejo patrón de bandas. 24 M.Lorente Acosta .J.A. Lorente E. Villanueva Cañadas Cuadernos de Med Forense No 3 28 Los primeros polimorfismos que se utilizaron fueron los RFLPs, “Restriction Fragment Lenght Polymorphsm” basados en la longitud de los fragmentos de restricción y posteriormente de hibridación con sondas. El problema de legalidad de inmigración en el Reino Unido fue el primer caso resuelto con estos polimorfismos. Genéticas o Huellas de ADN (DNA profile). Aunque el verdadero uso en la Medicina forense se inicia por Jeffreys y colaboradores en 1985. Después se comienza a utilizar sondas que detectan un único locus (Wrong et al. 1987) denominadas unilocus (Single Locus Probe, SLPS) que proporcionan dos sondas según el carácter homocigótico (semen u óvulo) o heterocigoto (células de tejidos) del individuo. De esta forma se obtiene un perfil unilocus de ADN (ADN profile). En el 2003 sólo las sondas unilocus debidamente caracterizadas están reconocidas para usos forenses. Han supuesto una mejora en la investigación biológica de la paternidad pero aún tiene limitaciones importantes para su uso en criminalística. 25 Un método importante alternativo y en determinados casos que el uso de sondas unilocus utilizadas en la Medicina forense es el método de la Reacción en Cadena de la Polimerasa, PCR (Polimerase Chain Reaction). En los últimos años se ha avanzado en varias tecnologías encauzadas al análisis de STRs tales como Light Cycler, tecnología que permite llevar a cabo en una misma reacción las amplificaciones por PCR de un fragmento de ADN; Chips o Arrays de ADN, 25 M .Lorente Acosta J.A. Lorente E. Villanueva Cañadas Cuadernos de Medicina Forense No 3 29 que es un sistema en miniatura que incorpora cientos de miles de sondas en fases aléticas y que según los expertos promete mucho, Espectrofotometría de Masas, que permite el análisis en cuestión de segundos pero requiere de cadenas superiores de 100pb. Los productos a analizar se cristalizan, se volatizan y se someten a un campo eléctrico en fase gaseosa, determinándose así el peso molecular del ADN en función del tiempo de recorrido. Para separar el ADN satélite del ADN genómico restante se somete a centrifugación en gradiente de densidad de Plata-Sulfato de Cesio obteniéndose dos bandas, la de menor densidad corresponde al ADN satélite. Se distinguen los tipos I; II; III; IV en función de su densidad que está en la relación con el mayor o menor contenido de GC (Singer 1982) y representan el 2 al 6% del genoma. Análisis de los polimorfismos de ADN por PCR. 26 La técnica de reacción en cadena de la Polimerasa, PCR ha venido a solucionar muchos problemas de análisis del ADN. Esta es una técnica de ampliación in Vitro. Se basa en la facilidad que tiene el ADN para desnaturalizarse y renaturalizarse. La reacción se lleva a cabo en un termocilardor (aparato que genera ciclos térmicos) que se maneja automáticamente a tres temperaturas: .93-95ºC para desnaturalizar el ADN. .50-65ªC para el acoplamiento de los primers. -72ºC para que la polimerasa copie la cadena de ADN. 26M.Lorente Acosta, J. A. Lorente Acosta E. Villanueva Cañadas Cuadernos de Medicina Forense No 3 enero 1996 30 Algunos autores destacas que la técnica de PCR permite identificar con gran exactitud el polimorfismo por lo que es de mucha utilidad en la Medicina forense. Los sistemas de electroforesis semiautomáticos y secuenciadores automáticos han permitido además automatizar el análisis por esta técnica facilitando su aplicación cotidiana y permiten errores mínimos i no es que nulos estadísticamente y es relativamente sensible con pequeñas cantidades de ADN. Por otra parte el ADN de la mitocondria también se ha utilizado en análisis para identificar genética de poblaciones mas no es útil para el estudio biológico de la paternidad, ya que éste sólo se hereda de la madre. 27 El ADNmt es ideal para el análisis de cabellos y de pelos sin bulbo, restos óseos y vestigios en los que no sea posible encontrar el ADN del núcleo de la célula. El cromosoma Y de herencia exclusiva paterna también está suscitando interés antropológica o médico legal. Para el análisis es necesaria la estandarización de las muestras, para que cualquier polimorfismo de ADN pueda ser utilizado en la práctica forense es necesario conocer unos valores que expresan la frecuencia de aparición de esta variación de población. Es imprescindible que existan unas directrices aceptadas por toda la comunidad científica de la región o más con la que se facilita la creación de bases de datos comunes y la realización de contras periciales. En Europa varios países constituyeron en 1989 European DNA Profiling Group (EDNAP): En Norteamérica se tiene el Scientific Working Group on DNA Análisis Merhoda (SWGDAM); representantes de ambas constituyen la DNA Comisión of the Internacional Society for Forensic Genetics (ISFG) que también 27M.Lorente Acosta , J. A. Lorente Acosta E. Villanueva Cañadas .Cuadernos de Medicina Forense N0 3 enero 1996 31 emite recomendaciones anuales sobre el uso de marcadores de ADN con fines forenses, incluyendo nomenclatura, estadística, gestión y control de calidad. Resultados y discusiones. Según Martínez y Saldívar (1982) el desarrollo de la medicina legal en la provincia mexicana ha sido lento debido a factores económicos y de poco interés de los médicos en esta disciplina, la falta de local apropiado, lo reducido de los emolumentos y la responsabilidad que se adquiere hace que haya pocos médicos en esta materia. Por otra parte la tecnología de análisis de ADN para usos forenses está disponible, los costos comparativos, la complejidad y la dificultad de la aplicación de la prueba han disminuido significativamente. Podría decirse que un laboratorio con el equipo, con personal técnico capacitado y un banco de datos de genética de ADN de la población de estudio, puede cumplir los requisitos de certificación para el análisis así como prueba forense de aplicación en la justicia mexicana. En México la aplicación de esta prueba forense y de muchas otras, son un poco empleadas, tiene que ver con la disponibilidad o escasez permanente del recurso fiscal y tributario, enfermedad crónica que padece el erario público desde el periodo colonial, y además de la falta de voluntad y capacidad de los personajes encargados de la toma de decisiones y de la poca acción ciudadana. El estado de Tamaulipas, no es ajeno a estos problemas del sistema mexicano e informa que la prueba de ADN forense se aplica limitadamente desde hace 30meses (Luna 2003) Com Per,algunos médicos entrevistados en Cd. Victoria consideran importante la aplicación de la prueba, pero la mayoría considera que existen falta de recursos económicos. Por otra parte el abogado neolonés Isaí Rosas Ramírez, comenta que en el estado de Nuevo León está utilizándose muy bien y que esto se hace por voluntad del poder ejecutivo a través 32 de la procuradora general de justicia de esta entidad que incluso está tratando de elevarse a categoría de ley para aplicación universal, pero aún existe oposición de congreso y argumentan legisladores locales son las de tipo económicas. Hay que considerar a este proyecto de leyes que en México en materia de legislación la voluntad política de las élites legislantes están históricamente supeditadas al poder ejecutivo prevaleciente así que desde la Constitución de 1917, por ejemplo se elevó a categoría de ley el derecho al trabajo, a la vivienda, a la educación, a la tierra, a la seguridad social, aunque hoy no se puede cumplir universalmente (García Marín) 2003, así que el asunto de elevar a categoría de ley el uso de la prueba de ADN debe ser visto de nuevo desde la óptica de la falta de voluntad política de los gobernantes mexicanos. El efecto, la dependencia de México para el caso de la prueba forense de ADN se parece continuamente ilustrada, por medios informativos por ejemplo el periódico El economista de México, La Jornada, El Norte y la revista Proceso, encontrándose 1,140 documentos relacionados a asuntos forenses con el ADN en el que indican que algunos técnicos extranjeros harán el estudio pericial en algún determinado caso. Hay mucha certeza sobre la validez y seguridad de la prueba del ADN para demostrar la vinculación de delitos, como hemos constatado en la revisión bibliográfica de las pruebas científicas empíricas que lo demuestran y se observa que el avance de la tecnología hace que cada vez esta prueba sea más certera en sus conclusiones, sin embargo aún en ocasiones se tienen sus dudas, así por ejemplo en Nueva York, El Economista reporta que se liberan a tres hombres condenados por pruebas de ADN y que fueron detenidos durante más de 18 años por la violación y muerte de una joven de Long Islan, en 1984, luego de someterse a una nueva serie de pruebas de ADN, éstas revelaron que eran inocentes y fueron liberados en el 2003, ellos habían sido condenados a 30 años de prisión por violación y muerte de una adolescente de 15 años en un suburbio de Nueva York, uno de ellos confesó, pero se retractó luego y los tres habían clamado inocencia, un primera prueba de ADN había puesto en duda la condena a 33 principios de los 90 pero no fue considerado concluyente por los jueces, una serie de pruebas efectuadas con tecnología más moderna demostró que el esperma encontrado en la víctima no pertenecía a ninguno de los tres hombres luego del pago de una fianza de 300.00 dólares fueron liberados, las pruebas de ADN fueron financiadas principalmente por Innocence Project (Proyecto Inocencia una ONG creada por una facultad de derecho neoyorquina la Cardozo Law School especializada en la reapertura de casos en los que los condenados claman su inocencia y pueden ser eventualmente absueltos gracias a los últimos avances en materia de pruebas de ADN. Las organizaciones civiles tienen un gran efecto en la promoción de aplicación de estas pruebas por el efecto de costos, se sabe que la formación de empresas tipo ONG y otras asociaciones civiles de defensa ciudadana son propiciadas por el sistema tributario de fiscal de los países. Por esta razón en los desarrollos, particularmente en EUA, Holanda, Inglaterra y otros países de Europa se han creado una gran cantidad de ONG en defensa de los indiciados como contrapeso a las fallas inherentes del sistema de justicia, en este sentido el sistema tributario fiscal mexicano es muy complicado y no propicia la formación de estas asociaciones hasta el 2003, lo dificulta y en ocasiones lo imposibilita, las reformas del 2001 han propiciado la integración de asociaciones civiles para servicios de salud o educación (Teletón, Fundación Azteca) pero la mayoría del resto de las donaciones captables no son legalmente deducibles por la ley del ISR, apareciendo de nuevo la falta de voluntad. Lo que es importante resaltar es que la aplicación de esta prueba se adolece en México más por razones de prioridades políticas que de aspectos como la falta de recurso económico. El uso de las pruebas de ADN se empieza a aplicar en México a fines del gobierno de Zedillo, en 1999 en la Procuraduría General de la República, en el caso de servicios periciales de la PGR cuenta con 16 especialidades, entre ellas el 34 laboratorio de Genética Forense, donde se emplean las técnicas de punta para identificar a las personas a través del Genoma Humano (ADN) y un banco de datos genético conocido como Codis utilizado en Europa y Estados Unidos este equipo se implementó en el 2000 a propuesta del Presidente Fox con autonomía y más recursos y labora ya en forma autónoma e independiente a cualquier organigrama de la PGR, para ser utilizado en las investigaciones criminales como de particulares, las nuevas instalaciones cuentan con las características de funcionalidad, espacio de ventilación, iluminación, comodidad y seguridad en su laboratorio dando paso a los trámites de certificación de técnicas, equipos y personal bajo de norma internacional ISO-9002 en servicios periciales, se anuncio en el 2000 la separación de la PGR de los servicios periciales y la institución en respuesta –se comunicó- a la puesta en marcha en sus nuevas instalaciones, el proyecto tuvo un costo superior a los 30 millones de pesos que estaba prevista por la administración del Presidente Zedillo con Jorga Madrazo Cuellar, para fortalecer el trabajo de la investigación que desde el paso del tiempo ha sido el dolor de cabeza de la PGR. Los objetivos de los programas son el de indagar los crímenes de estado de las décadas de 1960 y 1970, es el primer eje concerniente a los programas jurídico ministeriales, consiste en integrar las averiguaciones previas iniciadas y que se daban a iniciar, con motivo de las denuncias o querellas formuladas por hechos probablemente constitutitvos de delitos federales de su competencia y entre las acciones destaca la recepción de los 532 casos que envió la Subprocuraduría de Procedimientos Penales y el análisis de clasificación total de los expedientes de queja que integran el Informe Especial en el que continúe la recomendación 26/2001 de la Comisión Nacional de los Derechos Humanos, para tal efecto se utilizaron pruebas de ADN en las muestras disponibles para elucidar la identidad de las víctimas: En el boletín Nº 816 de septiembre del 2002 la PGR informa que se inaugura un curso sobre identificación humana por el análisis de ADN y se aplicarán los métodos más modernos para reaccionar ante diversos ilícitos y del 14 al 18 de mayo especialistas de la policía científica de Francia 35 imparten en la PGR el curso de Formación en Biología Molecular, y en varios boletines sucesivos se informa sobre el avance en la especialidad de la aplicación de esta tecnología en el gobierno federal. Cabe destacar sin embargo que corresponde a los estados la investigación de homicidios en sus correspondientes jurisdicciones y la aplicación de las técnicas parciales en las entidades pero en el caso del ADN aún hay atraso. En el estado de Tamaulipas, por ejemplo, desde hace 30 meses se adquirió un equipo para la prueba de polimorfismos de ADN según informa el Director de Servicios Periciales de la Procuraduría de Justicia de la entidad. (Luna 2003 Com. Per) A cargo están dos laboratorios clínicos que se entrenan en laboratorio de análisis de ADN de la procuraduría del Distrito Federal, en entrevista con un laboratorista señalaque se han efectuado 150 muestreos, que se da servicio a todo el estado y que las muestras de casos de otras ciudades son recolectadas por algún químico designado por servicios periciales y se trasladan bajo custodia policial al laboratorio y que desconocen el costo del análisis (o no lo informaron), que no disponen de una base de datos de ADN de la población tamaulipeca y que la están formando sobre la base de los 150 análisis efectuados desde la apertura. Las instalaciones de servicios periciales del gobierno de Tamaulipas son de 100 m2 de laboratorio y cuarto de revelado, se desconoce por qué no lo informaron, -el método o métodos de análisis- dice que usa todos lo métodos (Tania 2003). Para una estimulación del costo de cada análisis podemos considerar que en virtud de que cada una de las dos analistas arroja un resultado de 6,500 pesos mensuales más prestaciones, el costo sólo de nómina sin prestaciones es de 390,000 pesos en el periodo mencionado y dividiendo en 150 análisis arroja un resultado de 2,600 por muestra analizada, en promedio esto no incluye otros costos muy importantes tales como reactivos, gastos de operación, gastos de administración, depreciaciones y prestaciones al personal y otros, así que sobre esta poca utilización del laboratorio es posible que el costo sea muy superior a 10,000 que se estima como costo promedio por muestra en el método de PCR, otro dato importante es que en Tamaulipas no se dispone de una base de 36 datos referencial requerida para validar la prueba de acuerdo al protocolo internacional, el lugar de los hechos y los indicios biológicos, recogida, almacenamiento y envío al laboratorio. 28 Las posibilidades de la tecnología del ADN no deben distraer en el momento de recolección de indicios hallados, ya que es muy importante su recolección porque se trata rebuscar la única o determinada evidencia ya que se perdería su actividad biológica o podría invalidarse por algún defecto en la investigación preliminar. No olvidar que en los laboratorios sólo se estudia aquello que se remite y que el análisis se inicia sobre el indicio en las condiciones en las que llegan no en las que se manda, de ahí la enorme importancia del indicio en el lugar de los hechos. Existiendo algunas pautas que debe seguir todo Médico Forense a la hora de recoger y enviar los indicios criminales hallados sobre personas o en la escena del crimen, conociendo las posibilidades técnicas existentes y en consecuencia el valor de cada uno de los indicios. La escena del crimen es el lugar relacionado con la comisión del delito en alguna de sus fases y en el que debe haber quedado alguna huella o signo del autor o de alguna de las características del hecho. La escena del crimen primaria al lugar donde se encuentra el cadáver (o cuerpo del delito), ya que suele ser donde se inicia la investigación, sin embargo puede haber dos o más escenas del crimen denominada escenas secundarias y suelen estar en relación a: Lugar desde donde se trasladó el cadáver. Lugar donde se produjo el ataque. Lugar donde falleció la víctima. 28Guia para la Recolección y Preservación de la Evidencia del ADN .Depto. de Justicia de los Estados Unidos. Despacho Federal de Investigaciones 37 Lugar donde se descubre cualquier indicio. Vehículo usado para transportar el cuerpo. Puntos forzados para entrar. Ruta de huída. Sospechoso (ropa, manos y cuerpo). La importancia de la escena del c rimen (primaria o secundaria) se debe a que aporta los datos necesarios para iniciar o continuar la investigación por medio de los indicios. Indicio.- redefine como todo lo que el sospechoso deje o se lleve del lugar del delito o que de alguna manera pueda conectarse con este último. Los indicios pueden ser diversos clasificándolos según los siguientes grupos: • Según su origen animal, orgánicos/no orgánicos. • Según su tamaño y la posibilidad de visualizarlos a simple vista, macroscópicos/microscópicos. • Según se dejen o se tomen del lugar de los hechos, positivos/negativos. Simonin los clasifica en: • Según pudieran trasladarse o no al laboratorio, concretos/descriptivos. • Según puedan identificar a un individuo o a un grupo, características individuales/características de clase. De la clasificación anterior se deduce que los indicios pueden ser muy diversos, con gran importancia haciendo una gran actuación, siendo una pieza fundamental en el rompecabezas que todo caso judicial supone. 28 Guía para la Recolección y Preservación de la Evidencia del ADN .Depto dem Justicia de los Estados Unidos DE America Despacho Federal de Investigaciones, 38 La investigación pericial consta de tres grandes etapas: 1. Búsqueda en la escena del crimen o sobre las víctimas y/o los implicados. 2. Recogida y envío al laboratorio. 3. Exámenes analíticos y su interpretación. En las dos primeras, el papel del Médico Forense es fundamental en relación a los vestigios orgánicos, debido a que está familiarizado con ellos y con sus peculiaridades y de ahí que se deba saber también la forma de cogerlos y enviarlos adecuadamente. Tras ser reconocido, todo indicio debe ser adecuadamente filiado, recogido, empaquetado y preservado: • Si no es adecuadamente filiado, su origen puede ser cuestionado. • Si no es recogido correctamente, su actividad biológica se puede perder. • Si es incorrectamente preservado, su degradación y descomposición puede afectar el estudio. En la filiación se debe apuntar perfectamente cómo y dónde se encontraba el indicio, describiéndolo y relacionándolo con otros objetos o indicios, todo lo cual debe de hacerse antes de moverlo, la relación de fotografías y esquemas es de gran utilidad. Durante la recogida, conservación y envío debe evitarse la contaminación, ya que cualquier material orgánico procedente de los manipuladores puede imposibilitar su estudio, debiendo seguir las siguientes normas generales: • Procurar las máximas condiciones de esterilidad, usando guantes, patucos si se entra en la escena del crimen e instrumentos esterilizados o limpiados adecuadamente. 28Guia para la recolección y Preservación de Evidencia del ADN. Depto de Justicia de los Estados Unidos de America Despacho Federal de Investigaciones 39 • Volver a limpiar o utilizar un nuevo instrumento par recoger un indicio diferente, en caso de que estén utilizando guantes, cambiarlos. • Usar diferentes recipientes para cada indicio, aunque hayan sido recogidos en lugares muy próximos o estuviese juntos. • Etiquetar perfectamente cada uno de los recipientes haciendo referencia al caso judicial, con fecha, hora, identificación de la víctima, localización del indicio, tipo de indicio y número del mismo y nombre de la persona que recoge con el número de diligencias. • Enviar lo más rápidamente posible al juzgado o laboratorio, asegurando que las muestras que lo necesitan lo hagan en condiciones adecuadas (frío). • Es fundamental y básico tomar muestras testigo de la víctima y/o sospechoso. Lo haremos posible extrayéndole sangre o en su defecto un raspado o frotis de la cavidad bucal. • Tomar la filiación de las personas que han intervenido o colaborado en la recogida de las evidencias por si se produce algún problema a contaminación. Después de las normas generales se complementarán con aquellas que son específicas a determinados vestigios orgánicos y a su forma de presentación. Indicios líquidos. • Se deben recoger con una jeringa estéril, la sangre debe mantenerse anticoagulada preferiblemente. También se puede utilizar para su recogida algodón, gasas o hisopos estériles, dejándolos secar antes de almacenar. 28Guia para la Recolección y Preservación de Evidencia del ADN. Depto de Justicia de los Estados Unidos de America.Despacho Federal de Investigaciones 40 Indicios húmedos. • Hay que dejarlos secar a temperatura ambiente sin aplicar ninguna fuente de color. No deben guardarse en estado húmedo, ya que la humedad favorece el crecimiento bacteriano que puede afectar a la calidad del indicio (las enzimas restrictoras pueden degradar el ADN). Manchas secas. • Las podemos encontrar en objetos transportables como cuchillos, sábanas, teléfonos o en objetos no transportables; se procede a raspar la mancha con un instrumento estéril o al menos limpio depositando el raspado en una papel de similares caracteres que se doblará e introducirá en un recipiente hermético limpio para mantener el indicio, en caso que se encuentren salpicaduras, se debe raspar o tratar de recuperarlas aplicando sobre ellas una cinta adhesiva. Restos sólidos. • Cuando resulten ser antiguos los restos sólidos se podrán recoger usando guantes, si resultan ser recientes, frágiles o maleables, se usarán pinzas. Pelos. • Serán recogidos con pinzas, con un almacenamiento diferente en cada pelo a pesar de que aparezcan todos juntos o que parezcan de una misma persona, manteniendo una cadena de frío (4ºC), no congelarlo porque 28Guia de Recolección y Preservación de Evidencia del ADN Depto de Justicia de los Estados Unidos de America Despacho Federal de Investigaciones 41 • invalidaría las muestras de ADN. Se debe contactar con el Médico Forense del juzgado correspondiente, enviando los indicios criminales, procurando no romper la cadena de frío teniendo una gran custodia, porque pueden ser manipulados, sustraídos o destruidos por diversos interesados, por lo que hay que custodiar Crece la demanda de pruebas de ADN. Febrero del 2006. Estudios genéticos para conocer la verdad, consultivas privadas y ordenadas por la justicia. De acuerdo con las cifras de los centros de investigación, la mayoría recibe actualmente más solicitudes de manera privada, aproximadamente 40 solicitudes por mes, incluyendo privados y judiciales. Si bien aún no existe una legislación que regule los exámenes de ADN, hay un fallo de la Suprema Corte de Justicia de octubre del 2003 en el caso de Evelia Vázquez Ferrá, hija de desaparecidos, el tribunal estableció que no podía realizarse compulsivamente la prueba de ADN “si la persona es mayor de edad y no quiere conocer su verdadera identidad”; el Estado no puede obligarla a investigar ni promover acciones judiciales destinadas a establecerlas, de hecho el debate de las pruebas se instaló hace más de una década, vinculado a las causas de hijos desaparecidos. Son 18 laboratorios entre públicos y privados los que realizan estudios de filiación en el país, según datos de la Sociedad Argentina de Genética Forense (SAGF). En el ámbito público en el Hospital Durand funciona el Banco Nacional de Datos Genéticos donde también se realizan estudios de paternidad, con este tipo 42 de exámenes no es considerado un servicio de salud, los que acuden a este centro deben abonar los 1,000 pesos promedio que cuesta la prueba. Existe en Argentina un kit para realizar test de paternidad en forma totalmente anónima con un costo de 950 pesos, los padres que dudan deben cortarse las uñas y también las de su hijo y colocarlas en un recipiente que viene en el kit, se envía a la casilla de correo y en un mes reciben los resultados, en Estados Unidos se realizan 1000 estudios de paternidad por día utilizando este método. Se reciben más solicitudes privadas que judiciales, lo informa la Dra. Viviana Bernath, la gente trata de resolver más de manera privada que la intervención de la justicia. 43 CAPÍTULO IV FUNDAMENTO LEGAL Legislación española. Madrid, España. Torpedero, Tucumán, 28, 1ª A 28016, Uno de sus principios en ordenamiento jurídico es el consentimiento, informado, configurándose como un requisito esencial para toda intervención médica y como un derecho fundamental que asiste a toda persona, en este sentido la 30 Ley Orgánica 15/1999 de Protección de Datos de Carácter Personal (LOPD) viene a dar cumplimiento al artículo 18.4 de su Constitución (en cuanto a la limitación del uso de información para garantizar el honor, la intimidad personal y familiar y el legítimo ejercicio de los derechos) y así como el art. 5 y 6 si objetó es la recabación de datos y con un fin del por qué van a ser utilizados y sean informados por el responsable fichero y los derechos que les asisten al acceso, llevando a cabo el tratamiento de sus datos de carácter personal. El artículo 8 de la LOPD, autoriza a los centros sanitarios públicos y privados y a los profesionales correspondientes a que realicen un tratamiento de los datos de carácter personal relativo a la salud de las personas de acuerdo con disposiciones de la LOPD, Y el artículo 7 de la LOPD establece que los datos de carácter personal que hagan referencia al origen racial, a la salud y a la vida sexual sólo podrán ser recabados, tratados y cedidos cuando por razones de interés general, así lo 30 Ley Orgánica de Protección de Datos Art 5,6,18 Legislación Española 44 disponga una ley o el afectado consienta expresamente, necesitando una norma que regule la recogida y almacenamiento de ADN en defecto del consentimiento expreso del afectado o interesado. Por otra parte, excepcionalmente la LOPD prevé algunos supuestos en donde no será necesario el consentimiento expreso del afectado o interesado, y son cuando resulte necesaria la prevención o diagnóstico médico, la prestación de asistencia necesaria, tratamientos médicos o gestión de servicios médicos, siempre que se realice por un profesional sanitario sujeto al secreto profesional. Tomando un ejemplo, en el Reino Unido existe desde hace años un archivo genético de delincuentes que se quiere ampliar con muestras genéticas de personas con antecedentes penales. España establece en su legislación, Ley Orgánica de Protección de Datos de Carácter Personal (LOPD), un supuesto, en que no precisa el consentimiento del afectado para recoger los datos relativos a la salud cuando lo requiere una investigación policial. El art. 22 dispone que la obtención y tratamiento por las fuerzas y cuerpos de seguridad de los datos de salud podrá realizarse exclusivamente en los supuestos en que sea absolutamente necesario para los fines de una investigación concreta. Así la legislación española utiliza el material genético de las personas sin consentimiento del afectado a priori, una vulneración de los derechos fundamentales (derecho a no declararse contra sí mismo a la presunción de su inocencia, a la libertad e intimidad personal, etc.), y en este sentido la normatividad sobre protección de datos lo restringe a supuestos muy excepcionales y se constituye un marco idóneo para la defensa de los derechos de los titulares de unos datos que son merecedores de especial protección, estudiando el legislador la legitimidad de las autoridades competentes para recabar esa información tan sensible de definir en que supuestos y circunstancias debería hacerse. 45 Legislación peruana. Fundamentos. El desarrollo social a traído consigo una modificación de tipología delictiva que ha hecho relativamente frecuente determinados tipos de actos criminales caracterizados por su violencia con una notable desproporción de fuerzas entre víctima y agresor y por la utilización de instrumentos y armas que hacen que evidencias e indicios dejados en el lugar de los hechos por el autor y paralelamente el desarrollo científicamente ha posibilitado la aplicación de nuevas tecnologías que ha ido profundizando en su capacidad identificadora sobre indicios cada vez más pequeños; el máximo exponente en el momento actual es la denominada tecnología
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