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Aprendiendo Biologia
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FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA Carrera de Biología Laboratorio de Química Vegetal y Biotransformaciones Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1. TESIS QUE PARA OBTENER EL TITULO DE: BIÓLOGO PRESENTA: ROJO GARCIA OSVAN SAJID DIRECTORA DE TESIS: DRA. F. LEONORA SÁNCHEZ Y GARCÍA-FIGUEROA Ciudad de México, a 20 de Septiembre del 2016 PAPIME PE209015 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. El presente trabajo fue realizado en el Laboratorio de Química Vegetal y Biotransformaciones de la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza UNAM bajo la dirección de la Dra. F. Leonora Sánchez y García Figueroa y fue financiado por DGAPA a través del proyecto PAPIME PE209015 Agradecimientos. Quiero darle las gracias a Dios y al señor Santiago por darme la fortaleza, paciencia y salud para culminar un logro mas en mi vida. A la Universidad Nacional Autónoma de México a la cual es un orgullo pertenecer, en especial a la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza por formarme como profesionista y por pasar gratas experiencias que me han hecho crecer como persona. A la Dra. F. Leonora Sánchez y García Figueroa que ha sido una gran mentora, gracias por todo el apoyo, confianza, paciencia y orientación. A mi compañero y amigo Adan Garduño Escobedo quien sin su apoyo y dedicación este trabajo no se hubiera realizado. A la DGAPA por su apoyo económico a través del proyecto PAPIME PE209015. Al municipio de Olinalá Gro. gracias por compartir sus conocimientos y la hospitalidad que me brindaron, en especial al señor Leonardo García de Jesús y su señora esposa Paulina Limón Luna por abrirme las puertas de su casa y facilitarnos el material con el que se trabajo. A mis sinodales por darse el tiempo de leer y contribuir en la mejora del trabajo. Al Dr. Fausto Sánchez y García Figueroa por el apoyo y revisión para mejorar el presente trabajo. A mis amig@s de la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza gracias por escucharme, soportarme y brindarme consejos, sin duda hicieron ameno mi camino; en especial a Carlos, Raque, Adriana y Nacho por estar conmigo en las buenas y en las difíciles. A mis amig@s Andrea, Marisol, Luis y Fidel por su apoyo incondicional y nunca darme la espalda. A mis compañeros y amigos del “Laboratorio de Química Vegetal y Biotransformaciones” Toño, Paty, Luis y Frank por los momentos de diversión y consejo. Dedicatorias. Este trabajo de tesis está dedicado a: Mi madre Humberta Rosa María García Serrano por todo el amor, trabajo y sacrificio, por alentarme a seguir adelante sin rendirme por mas difícil que parezca una situación gracias por ayudarme a ser cada día una mejor persona te quiero. A mi padre José Primitivo Rojo Valencia por estar al pendiente de mi escucharme, alentarme a mirar siempre hacia delante, estar conmigo en mis desvelos, problemas y cuando perdía la paciencia, gracias por apoyarme te quiero. A mis tías Lilia y Josefina García Serrano por apoyarme incondionalmente y estar al pendiente de mi persona, muchas gracias por los momentos de alegría y cariño. A mi primo Jesús Arturo Santos Rojo la persona mas fuerte y valiente que conozco, todo un guerrero y un ejemplo gracias por los momentos de alegría y de buenas platicas. El presente trabajo fue presentado en partes en: XV FORO DE INVESTIGACIÓN ESCOLAR EN BIOLOGÍA FES ZARAGOZA, UNAM México D.F. 31 de Enero del 2014 Bajo el titulo “ Actividad hipoglucemiante de las hojas de Bauhinia variegata L”. XII ENCUENTRO PARTICIPACION DE LA MUJER EN LA CIENCIA León Guanajuato 14 de Mayo del 2015 Bajo el titulo “ Actividad hipoglucemiante de las hojas de Bauhinia variegata L”. ÍNDICE Página RESUMEN……………………………………………………………………………………………….…….………1 1. INTRODUCCIÓN………………………………………………………….……………………….………….....2 2. MARCO TEÓRICO…………………………………………………………………………………….……...…3 2. 1 Diabetes mellitus……………………….………………………………………………...…..…….3 2.1.1 Tipos de diabetes…………...…………………………………………………...……….…3 2.1.2 Complicaciones ….………………………...…………………..…………………..…..……4 2.1.3 Estadísticas………………………………………………..…………………………..….…...5 2.1.4 Tratamientos…………………………………………...…………………….………..…..….6 2.2. Insulina…………………………………………………………………………...…………...…….…..7 2.3. Plantas medicinales usadas contra la diabetes…………………………………...……..8 2.4 Género Bauhinia………………………...……………………………………………….…….……..9 2.4.1 Fitoquímica de Bauhinia sp. ....................................................................................10 2.5 Bauhinia variegata L…………………………………………………………………………..…..12 2.5.1 Distribución de Bauhinia variegata L…………………………………………....…14 2.6 Glucoquininas o insulina vegetal………………………….………………………………....14 2.7 Modelos animales de experimentación (diabetes inducida)…………………......16 2.7.1 Inducción química de la diabetes ……………………………………………………16 2.7.2 Aloxana…………………………………………………………………………………...........17 2.8 Alcaloides…………………………………………………………………………………………….17 2.8.1 Reconocimiento de los alcaloides……………………………………………………18 3 JUSTIFICACIÓN………………………………………………………………………………………….…..…..19 4 OBJETIVOS…………………………………………………………….…………………………………..……...19 4.1 Objetivo general………………………………………………………….…………….…..………19 4.2 Objetivos particulares……...……………………………………………………….…..……....19 5 HIPÓTESIS…………………………………………………………………………………………….…..…..….20 6 MATERIAL Y MÉTODOS……………………………………………………...……………….……………..21 6.1 Obtención y determinación del material vegetal…………............................………21 6.2 Reconocimiento de los alcaloides……………………………………………………………22 6.3 Obtención del extracto metanólico de Bauhinia variegata………………...………22 6.4 Obtención del extracto acuoso de Bauhinia variegata………………………...….....24 6.5 Obtención de proteínas de Bauhinia variegata………………….…………….………25 6.6 Determinación de la actividad hipoglucemiante…………………….…………….26 6.6.1 Grupos experimentales…………………………………………...…….………...…...27 6.6.2 Inducción de la diabetes……………………………………………………….……...27 6.6.3 Bioensayo………………………………………………………………….………………..28 6. 7 Extracción de órganos…………………………………………………………………..……….30 6.8 Análisis estadístico………………………………………………………………………………..30 7 RESULTADOS……………………………………………………………………………………………….…..31 7.1 Rendimiento del extracto metanólico y proteínas de Bauhinia variegata…………………………………………………………………………...…...31 7.2 Prueba de Dragendorff…………………………………………………………………………..31 7.3 Bioensayo de la actividad hipoglucemiante en hembras……………………………………………………………………………………..……327.3.1 Niveles de glucosa entre ratones hembras, sanas y diabéticas………………………………………………………………...……..33 7.3.2 Niveles de glucosa entre ratones hembras, diabéticas y extracto metanólico…………………………………………..……..34 7.3.3 Niveles de glucosa entre ratones hembra, diabéticas y extracto de proteínas ……………………………………………....35 7.3.4 Niveles de glucosa entre ratones hembras, diabéticas y extracto acuoso………………..…………………………………..….36 7.4 Bioensayo de la actividad hipoglucemiante en machos…………...……………………………………………………………………………….37 7.4.1 Niveles de glucosa entre ratones machos, sanos y diabéticos……………………………………………………..………………..38 7.4.2 Niveles de glucosa entre ratones machos, diabéticos y extracto metanólico……………….……………………………..…..39 7.4.3 Niveles de glucosa entre ratones machos, diabéticos y extracto de proteínas …………...……………………………..…..40 7.4.4 Niveles de glucosa entre ratones machos, diabéticos y extracto acuoso…………………………………………………....….41 7.5 Peso corporal y extracción de órganos en ratones hembras……………………………………………………………………...……….…..42 7.5.1 Peso corporal en ratones hembras…………………………………………...…43 7.5.2 Peso del bazo en ratones hembras………………...…………………..……….44 7.5.3 Peso del hígado en ratones hembras…………………….………………….…45 7.5.4 Peso del páncreas en ratones hembras…………………….….………………46 7.4.5 Peso de los riñones en ratones hembras…………………….………………..47 7.4.6 Peso de los ovarios en ratones hembras………….…………………………..48 7.6 Peso corporal y extracción de órganos en ratones machos……………………………………………………………………...…........…..50 7.6.1 Peso corporal en ratones machos ………………………….………………..…51 7.6.2 Peso del bazo en ratones machos …………………………….……….……….52 7.6.3 Peso del hígado en ratones machos …………………………………….…..…53 7.6.4 Peso del páncreas en ratones machos …………………………..……………54 7.6.5 Peso de los riñones en ratones machos……………………………..………..55 7.6.6 Peso de los testículos en ratones machos……………………..……....……..56 8 DISCUSIÓN………………………………………………………………………………………………………...57 9 CONCLUSIONES………………………………………………………………………………………………….60 10 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………………………………………...…….61 11 REFRENCIAS DIGITALES…………………………………………………………………………………..65 12 ANEXOS…………….……………………………………………………………………………………………..66 12.1Prueba de Tukey a los 0 minutos en ratones hembra...………………………………66 12.2 Prueba de Tukey a los 180 minutos en ratones hembra……..……………………..66 12.3 Prueba de Tukey a los 360 minutos en ratones hembra……………………..……..67 12.4 Prueba de Tukey a los 0 minutos en ratones machos……………………..…………67 12.5 Prueba de Tukey a los 180 minutos en ratones machos………………..…………..67 12.6 Prueba de Tukey a los 360 minutos en ratones machos…………..………………..68 12.7 Prueba de Tukey del peso inicial en ratones hembra……………..……………....…68 12.8 Prueba de Tukey del peso final en ratones hembra……………..……………..……..68 12.9 Prueba de Tukey del peso inicial en ratones machos……………......……..……..…69 12.10 Prueba de Tukey del peso final en ratones machos…….…..............................…..69 12.11 Prueba de Tukey para el bazo de ratones hembras…………………………………69 11.12 Prueba de Tukey para el hígado de ratones hembras………………………...……70 11.13 Prueba de Tukey para el páncreas de ratones hembras……………….………….70 11.14 Prueba de Tukey para el riñón derecho de ratones hembras..…………….......70 11.15 Prueba de Tukey para el riñón izquierdo de ratones hembras…..…….……...71 11.16 Prueba de Tukey para el ovario derecho en ratones hembras…..………...…..71 11.17 Prueba de Tukey para el ovario izquierdo en ratones hembras...…..………...71 11.18 Prueba de Tukey para el bazo de ratones machos ……………...…..………………72 11.19 Prueba de Tukey para el hígado de ratones machos …………………………...….72 11.20 Prueba de Tukey para el páncreas de ratones macho…………………….….…....72 11.21 Prueba de Tukey para el riñón derecho en ratones machos…………………….73 11.22 Prueba de Tukey para el riñón izquierdo de ratones machos…………...……..73 11.23 Prueba de Tukey para el testículo derecho de ratones machos………………..73 11.24 Prueba de Tukey para el testículo izquierdo de ratones macho.……...………74 ÍNDICE DE FIGURAS Página Figura 1. Tipos de Diabetes ………………………………………………………………………….………4 Figura 2. Los 10 de países con personas diabéticas……………………………………………….6 Figura 3. Mostrando fisiopatología de la hiperglucemia y el objetivo de algunos fármacos hipoglucemiantes…………………………………….……….…....7 Figura 4. Flor de Bauhinia variegata………………………………………………………....….…...…12 Figura 5. Hojas de Bauhinia variegata……………………………………………………..…........…..12 Figura 6. Mapa de distribución mundial de Bauhinia variegata………………...……...…...14 Figura 7. Mapa y ubicación de Olinalá Gro. …………………………………………...……….....….21 Figura 8. Diagrama de extracción con metanol ……………………………………...……………..23 Figura 9. Diagrama de extracción con agua…………………………………………...……………...24 Figura 10. Diagrama de extracción de proteínas………………………………………………..…26 Figura 11. Diagrama del bioensayo………………………………………………………………………29 Figura 12. Prueba de Dragendorff en el extracto metanólico…………………………...……31 Figura 13. Media de glucosa entre ratones hembras, sanas y diabéticas durante el experimento a los 0, 180 y 360 minutos……………………..……….33 Figura 14. Media de glucosa entre ratones hembras, diabéticas y extracto metanólico durante el experimento a los 0, 180 y 360 minutos…………….34 Figura 15. Media de glucosa entre ratones hembras, diabéticas y extracto de proteínas durante el experimento a los 0, 180 y 360 minutos……….…35 Figura 16. Media de glucosa entre ratones hembras, diabéticas y extracto acuoso durante el experimento a los 0, 180 y 360 minutos……………………36 Figura 17. Media de glucosa entre ratones machos ,sanos y diabéticos durante el experimento a los 0, 180 y 360 minutos………………………….….38 Figura18. Media de glucosa entre ratones machos, diabéticos y extracto metanólico durante el experimento a los 0, 180 y 360 minutos……………39 Figura 19. Media de glucosa entre ratones machos, diabéticos y extracto de proteínas durante el experimento a los 0, 180 y 360 minutos…………40 Figura 20. Media de glucosa entre ratones machos ,diabéticos y extracto acuoso durante el experimento a los 0, 180 y 360 minutos………………….41 Figura 21. Media del peso corporal de ratones hembras al inicio y final de cada tratamiento………………………………………………………43 Figura 22. Media del peso del bazo en ratones hembras al final del tratamiento………………………………………………………………………..44 Figura 23. Media del peso del hígado en ratones hembras al final del tratamiento…………………………………………………………………………45 Figura 24. Media del peso del páncreas en ratones hembras al final del tratamiento…………………………………………………………………………46 Figura 25. Media del peso del riñón derecho en ratones hembras al final del tratamiento ……………………………………………………………………….47 Figura 26. Media del peso del riñón izquierdo en ratones hembras al final del tratamiento…………………………………………………………………………47 Figura 27. Media del peso del ovario derecho en ratones hembrasal final del tratamiento…………………………………………………………………………48 Figura 28. Media del peso del ovario izquierdo en ratones hembras al final del tratamiento…………………………………………………………………………49 Figura 29. Media del peso corporal de ratones machos al inicio y final de cada tratamiento………………………………………………………51 Figura 30. Media del peso del bazo en ratones machos al final del tratamiento………………………………………………………………………….52 Figura 31. Media del peso del hígado en ratones machos al final del tratamiento…………………………………………………………………………53 Figura 32. Media del peso del páncreas en ratones machos al final del tratamiento………………………………………………………………………….54 Figura 33. Media del peso del riñón derecho en ratones machos al final del tratamiento…………………………………………………………………………..55 Figura 34. Media del peso del riñón izquierdo en ratones machos al final del tratamiento………………………………………………………………………....55 Figura 35. Media del peso del testículo derecho en ratones machos al final del tratamiento………………………………………………………………………….56 Figura 36. Media del peso del testículo izquierdo en ratones machos al final del tratamiento………………………………………………………………………..57 ÍNDICE DE CUADROS Página Cuadro 1. Compuestos aislados de distintas especies del género Bauhinia………….…10 Cuadro 2. Clasificación taxonómica de Bauhinia variegata ……………………………..….…12 Cuadro 3. Propiedades biológicas Bauhinia variegata……………………………………..…….13 Cuadro 4. Secuencia de aminoácidos de insulina bovina comparada con insulina aislada de Canavalia ensiformis, Vigna unguiculata y Bauhinia variegata …………………………………………………………….…….……….15 Cuadro 5. Reactivos generales que se utilizan para detectar alcaloides………………….18 Cuadro 6. Formación de los grupos experimentales……………………………….………………27 Cuadro 7. Cronograma de la actividad hipoglucemiante………………………………..……….28 Cuadro 8. Rendimientos del extracto metanólico y de proteínas de Bauhinia variegata ………………………………………………………..31 Cuadro 9. Niveles de glucosa entre de ratones hembras, sanas y diabéticas……………33 Cuadro 10. Niveles de glucosa entre de ratones hembras, diabéticas y extracto metanólico……………………………………………………………….……..…34 Cuadro 11. Niveles de glucosa entre de ratones hembras, diabéticas y proteínas…..........................................................................................................................35 Cuadro 12. Niveles de glucosa entre de ratones hembras, diabéticas y acuoso…………………………………………………………………………………………....36 Cuadro 13. Niveles de glucosa entre de ratones machos, sanos y diabéticos………..…36 Cuadro 14. Niveles de glucosa entre de ratones machos, diabéticos y extracto metanólico……………………………………………………………………..…37 Cuadro 15. Niveles de glucosa entre de ratones machos, diabéticos y proteínas…..........................................................................................................................38 Cuadro 16. Niveles de glucosa entre de ratones machos, diabéticos y acuoso…………………………………………………………………………………………....39 Cuadro 17. Peso corporal de ratones hembras………………….…………………………………..43 Cuadro 18. Peso del bazo en ratones hembras………………………………………………………44 Cuadro 19. Peso del hígado en ratones hembras…………………………………………………...45 Cuadro 20. Peso del páncreas en ratones hembras………………………………………………..46 Cuadro 21. Peso de los riñones en ratones hembras……………………………………………..48 Cuadro 22. Peso de los ovarios en ratones hembras……………………………………….……..49 Cuadro 23. Peso corporal de ratones machos…………………...…………………………………..51 Cuadro 24. Peso del bazo en ratones machos………………………..………………………………52 Cuadro 25. Peso del hígado en ratones machos………………………………………………..…...53 Cuadro 26. Peso del páncreas en ratones machos……………………………………………..…..54 Cuadro 27. Peso de los riñones en ratones machos……………………………………..….……..56 Cuadro 28. Peso de los testículos en ratones machos…………………………………….……..57 ABREVIATURAS. L. Linneo. dL. Decilitro pc Peso corporal ip Intraperitoneal kDA Kilodalton Fig Figura Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 1 RESUMEN La diabetes mellitus es un problema de salud pública de primera magnitud en México, se utilizan alrededor de 150 especies de plantas en el tratamiento empírico de esta enfermedad. Bauhinia variegata L., es un árbol conocido como pata de vaca de origen asiático, sus hojas y el tallo de corteza se han utilizado con frecuencia en la medicina popular como remedio para diferentes tipos de patologías, en particular la diabetes, infecciones, dolor y los procesos inflamatorios; los habitantes del municipio de Olinalá, Guerrero, utilizan sus hojas en infusión como tratamiento para la diabetes. Existen estudios de esta especie en otros países, sin embargo en México no se han realizado trabajos que corroboren el efecto hipoglucemiante de esta especie que crece en nuestro país, por lo que en la presente tesis se investigó la actividad hipoglucemiante de sus extractos metanólicos, acuosos y de proteínas en ratones hembras y machos con diabetes inducida por aloxana. Se recolectaron hojas de Bauhinia variegata se secaron a 60°C, molieron y por maceración con alcohol metílico de forma exhaustiva, el disolvente se eliminó a presión reducida obteniendo así el extracto metanólico, las proteínas totales se extrajeron mediante el método de Khanna y el extracto acuoso se preparó a una concentración de 10 g/L que es la utilizada por los habitantes de Olinalá Gro. Se utilizaron 60 ratones de los cuales 30 eran machos y 30 hembras de la cepa CD-1 de 12 semanas que se dividieron en 10 grupos de 6 ratones cada uno, a 8 grupos se les indujo diabetes con tres dosis de aloxana (150 mg/kg pc/ip.) aplicadas cada 48 h. Al presentarse niveles de glucosa mayores a los 150 mg/dL se procedió a administrar las diferentes fármacos que fueron el extracto metanólico de pata de vaca (500 mg/Kg pc/ip) , el extracto acuoso de pata de vaca 0.5 ml por ratón (10 g/L) y las proteínas totales de Bauhinia (0.48 mg /ratón) otros dos grupos quedaron como controles diabético y absoluto (sanos) a los que se les administró solución salina. Durante todo el experimento, se registró: peso corporal y concentración plasmática de la glucosa con un glucómetro convencional. Al sacrificio se extrajeron hígado, riñones, páncreas,bazo, órganos reproductores. Los resultados indican que las proteínas de Bauhinia variegata bajaron los niveles de glucosa a los 360 min. 19% en ratones hembra y 15% en los machos, el bazo aumento de peso 95% en hembras y 100% en los machos en comparación con el control sano, esto se podría atribuir a la presencia de alcaloides. Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 2 1 INTRODUCCIÓN En la medicina tradicional, la diabetes mellitus se trata con dieta, ejercicio físico y con plantas medicinales. A pesar de que más de 1200 plantas se utilizan en todo el mundo en el control empírico de la diabetes, la mayoría de ellas no han sido farmacológica y químicamente investigadas. El efecto hipoglucemiante se ha confirmado ya sea clínicamente o experimentalmente en casi 350 plantas (Pérez-Gutiérrez et al., 1998). En México, alrededor de 150 plantas se utilizan para controlar la diabetes (Ramos, 1994). Bauhinia variegata L, conocida como pata de vaca o árbol de orquídeas, es un árbol caducifolio que pertenece a la familia Caesalpiniaceae que crece en lugares soleados y cálidos. El fruto es una vaina de 20 a 30 cm de longitud que contiene varias semillas (Rzedowski y Rzedowski, 2001). En esta planta se han encontrado glucoquininas que son proteínas con una estructura similar a la insulina de cerdo con un peso molecular de 6 kDa. (Azevedo et al., 2006). Estas proteínas fueron descubiertas por Collip en 1923 y se han encontrado en plantas superiores (Sangeetha, 2009) y presentan una acción similar a la insulina en ratones con diabetes inducida, además los medicamentos hoy disponibles para el tratamiento de la diabetes, en particular las sulfonilureas, la metformina o las glitazonas no son capaces de restablecer la normalidad de la homeostasis de la glucosa y aunque compensan parcialmente las alteraciones metabólicas provocadas por la diabetes, no corrigen las lesiones bioquímicas subyacentes (Torres et al., 2013). Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 3 2 MARCO TEÓRICO 2.1 Diabetes mellitus Es una enfermedad endocrina que se caracteriza por mantener elevados los niveles de glicemia en la sangre del individuo afectado. Tiene implicaciones importantes a nivel sistémico, como: angiopatía, neuropatía, retinopatía y nefropatía, entre otras. Estas complicaciones tienen su origen en eventos biomoleculares desencadenados por la hiperglicemia. Las razones por la que un paciente diabético no puede controlar normalmente su glicemia esta relacionada con defectos en la síntesis de la insulina, secreción de esta hormona o en la disminución del número de sus receptores y/o en su afinidad por la insulina (Mendoza et al., 2005). 2.1.1 Tipos de diabetes Se clasifica en cuatro grupos (Campuzano, 2010): Diabetes tipo 1: resultante de la destrucción de las células β del páncreas, usualmente llevando a una deficiencia absoluta de insulina, con frecuencia de origen autoinmune (Fig. 1). Diabetes tipo 2: resultante de un defecto progresivo de la secreción de insulina, en el contexto de resistencia gradual a la insulina (Fig. 1) Diabetes gestacional: la que se diagnostica en el curso del embarazo. Otros tipos de diabetes debidos a distintas causas: por ejemplo, defectos genéticos en la función de las células β del páncreas o en la acción de la insulina, enfermedades exocrinas del páncreas como la fibrosis quística, y la diabetes inducida por drogas o químicos, entre otros. Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 4 Figura 1. Tipos de diabetes (tomada y modificada de IDF.org , 2015) 2.1.2 Complicaciones (American Diabetes Association, 2016). ENFERMEDADES CARDIOVASCULARES: Afecciones en el corazón y la presión arterial creando complicaciones en las arterias coronarias provocando ataques al corazón. ENFERMEDADES RENALES (NEFROPATÍA DIABÉTICA): causadas por daños en los pequeños vasos sanguíneos de los riñones provocando que cada vez menos eficientes o fallen por completo ENFERMEDADES NERVIOSAS (NEUROPATÍA DIABÉTICA): La diabetes puede causar daños en el sistema nervioso de todo el cuerpo cuando la glucosa en sangre y la presión arterial son demasiado altas. Esto puede conducir a problemas con la digestión, disfunción eréctil y muchas otras funciones. Algunas de las áreas más comúnmente afectadas son las extremidades, especialmente los pies. Las lesiones en los nervios de estas zonas se llaman neuropatía periférica, y pueden acarrear dolor, hormigueo y pérdida de sensibilidad. Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 5 ENFERMEDADES OCULARES (RETINOPATÍA DIABÉTICA): la mayoría de las personas con diabetes desarrollarán algún tipo de enfermedad ocular (retinopatía) con disminución de la visión o ceguera 2.1.3 Estadísticas La diabetes mellitus tipo I es una enfermedad grave que afecta principalmente a niños y adolescentes, con una prevalencia inferior al 1% mientras que 6-7% de la población adulta presenta diabetes mellitus tipo II que es menos rica en síntomas pero constituye un problema mundial de salud por su prevalencia elevada. Tanto los países industrializados como en los considerados en vías de desarrollo esta prevalencia se encuentra en aumento (Torres et al., 2013). La diabetes es un serio problema de salud pública y es así como la humanidad se enfrenta a una verdadera epidemia (Fig. 2). De acuerdo con la Organización Mundial de la Salud (OMS), cuando en el año 1985 la población mundial de diabéticos era de 30 millones de pacientes (Smyth, 2005), en el año 2009 había aumentado a 220 millones de individuos con diabetes (Campuzano, 2010), y se estima que de continuar con esta tendencia, llegaría a 366 millones en el año 2030 (Wild, 2004) . En México desde 1940 , la diabetes ya se encontraba dentro de las primeras 20 causas de mortalidad, con una tasa de 4.2 por cada 100 000 habitantes. El impacto de la enfermedad progresó a partir de 1970, año en que la diabetes ocupó el 15vo lugar como causa de muerte. Diez años después, en 1980, ocupó el noveno lugar y en 1990 alcanzó la cuarta causa de mortalidad general. A partir de 1998 la diabetes mellitus ocupa los primeros lugares como causa básica de muerte en México, coincidiendo con el cambio a la Clasificación Internacional de Enfermedades CIE-10 A partir del año 2000 ocupa el primer lugar como causa de muerte en México ocasionando 10.7% de todas las muertes en ese año (Rojas et al., 2015). Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 6 Figura 2. Los 10 de países con personas diabéticas (tomada y modificada de IDF.org , 2015) 2.1.4 Tratamientos La diabetes es una enfermedad que se maneja con gran cantidad y diferentes tipos de fármacos, sin embargo, el uso de una sola droga no es efectiva para el control de la hiperglicemia de acuerdo a su mecanismo de acción se utilizan diferentes combinaciones de agentes orales (Fig. 3) como son sulfonilureas y metformina (Sangeetha, 2009). Los medicamentos hoy disponibles para el tratamiento de la diabetes, en particular las sulfonilureas,la metformina o las glitazonas no son capaces de restablecer la normalidad de la homeostasis de la glucosa y aunque compensan parcialmente las alteraciones metabólicas provocadas por la diabetes, no corrigen las lesiones bioquímicas subyacentes. Incluso el tratamiento insulínico no restaura completamente la homeostasis de la glucosa en los pacientes con diabetes de tipo I y sin contar que las sobredosis de insulina pueden incrementar el riesgo de aterogénesis y de episodios de hipoglucemia (Torres et al., 2013). Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 7 Figura 3. Mostrando Fisiopatología de la hiperglucemia y el objetivo de algunos fármacos hipoglucemiantes (tomada y modificada de Sangeetha, 2009) 2.2 Insulina La insulina es una hormona polipeptídica que es sintetizada y secretada por las células β de los islotes de Langerhans en el páncreas corresponden al 65% de la totalidad de las células de los islotes. Químicamente, la insulina es una molécula pequeña, que contiene 254 átomos de carbono, 337 de hidrógeno, 65 de nitrógeno, 75 de oxígeno y 6 de azufre. Consta de dos cadenas polipeptídicas, una cadena «A» y una cadena «B» de 21 y 30 aminoácidos respectivamente (Mendoza et al., 2005). Biológicamente, la insulina es una de las hormonas anabólicas más importantes, es necesaria para: 1) El transporte de glucosa y aminoácidos a través de las membranas celulares. 2) La formación de glucógeno en el músculo esquelético. 3) La síntesis de lípidos. 4) Síntesis de ácidos nucleicos 5) La síntesis de las proteínas. Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 8 Su principal función metabólica consiste en aumentar la velocidad del transporte de la glucosa hacia el interior de las células musculares y adiposas (Mac, 1997). 2.3 Plantas medicinales usadas contra la diabetes Las plantas medicinales con actividad antidiabética pueden aportar una fuente útil de nuevos compuestos orales hipoglucemiantes, ya sea como entidades farmacéuticas o coadyuvantes de las terapias existentes (Day y Bailey, 1988). Otra razón importante para estudiar el uso de las plantas es validar científicamente su efectividad para poder recomendar su uso (Deas et al., 1997). Los principales principios activos reportados con actividad hipoglucemiante en plantas son alcaloides, glucosidos, galactomanano, polisacáridos, peptidoglucanos, esteroides, carbohidratos, glicopéptidos, terpenoides, aminoácidos, iones inorgánicos y proteínas (Anwer et al., 2013). En los últimos años, se ha observado con gran importancia un nuevo interés hacia las plantas medicinales para ser investigadas ya que muchas de las medicinas tradicionales de pueblos primitivos han demostrado tener un fundamento científico al contener principios activos susceptibles de ser aislados y, posteriormente modificados (Torres et al., 2013). Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 9 2.4 Género Bauhinia Este género consiste aproximadamente de 300 especies que son comúnmente conocidas como pata de vaca o casco de vaca debido a que la forma de sus hojas semeja la pisada de una vaca. Se distribuye ampliamente en los países tropicales y sus hojas y corteza son usados frecuentemente en la medicina tradicional como remedio para diferentes tipos de patologías, particularmente diabetes, infecciones, dolor y procesos inflamatorios (Cechinel, 2000). En años recientes el interés en este género ha ido en aumento, desde que estudios confirmaron y reportaron propiedades terapéuticas en diferentes especies de Bauhinia. Fitopreparaciones y metabolitos purificados han sido investigados en diversos experimentos in vivo e in vitro La especie más estudiada del género es la Bauhinia forticata de la cual se reportó que el extracto etanólico de hojas no disminuye los niveles de glucosa en sangre en ratas diabéticas inducidos con estreptotizina (Pepato et. al., 2004). Pero después de un mes de administración de una decocción acuosa de hojas frescas en ratas diabéticas, estas mostraron una disminución de glucosa en la orina en comparación al grupo control (Silva et al., 2002). En México se ha experimentado el efecto hipoglucemiante en ratones sanos con la Bauhinia divaricata en donde hubo una disminución significativa de glucosa comparada con el control (Roman et al., 1992) Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 10 2.4.1 Fitoquímica de Bauhinia sp. Los estudios fitoquímicos realizados en el género Bauhinia han mostrado una predominancia de terpenos, esteroides, alcaloides y en especial de flavonoides. Se han realizado diversos estudios de actividad hipoglucemiante, actividad antibacterianas y de un uso potencial como analgésico en varias especies del género (Da Silva y Cechinel, 2002). Pizzolatti et al. (2003) aislaron varios flavonoides de extractos de hojas de B. forticata incluyendo kaempferol y otros cuatro glucósidos flavonoides identificados como kaempferinas. En el cuadro 1 se muestran las estructuras químicas y especies del género Bauhinia de donde se han aislado algunos compuestos. Cuadro 1. Compuestos aislados de distintas especies del genero Bauhinia. Nombre del compuesto Estructura química Especie Órgano de la planta Referencia Kaempferitrina B. forficata Hojas Pizzolatti et al. (2003) (2S)-5,7dimetoxi- 3′,4′metilen- flavanona B. variegata Corteza de raíz Reddy et al. (2003) BIOLOGICAL POTENTIAL OF PLANTS FROM GENUS BAUHINIA 1351 Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd. Phytother. Res. 23, 1347–1354 (2009) DOI: 10.1002/ptr activity, and that treatment of pregnant diabetic female rats with B. forficata did not control maternal hyper- glycemia, hyperlipidemia or hypercholesterolemia, but it did increase the amount of hepatic glycogen, decreased the uric acid concentration, and increased the glutathione activity. This suggests that the extract of the plant acts as an antioxidant defense system, probably due the presence of the previously detected flavonoids (da Silva et al., 2000; da Silva and Cechinel Filho, 2002; Pizzolatti et al., 2003). A recent report demonstrated that the stem-bark extract of B. racemosa does not alter the hematological parameters, liver and kidney functions, at doses of 100 and 200 mg/kg body weight in mice, indicating that it is free of toxic effects. However, at a higher dose (400 mg/kg), the treated groups exhibited significant alterations in their hematological profile and hepatorenal functions and metabolism (Kumar et al., 2005). Similarly, Reid et al. (2006) found that leaf extract of B. galpinii showed antimutagenic properties in the presence of metabolic activator S9 and that it did not cause any mutagenic response against Salmonella typhymurium bacterial strains in the Ames assay, confirming its non-toxic effects. PHYTOCHEMICAL KNOWLEDGE OF THE GENUS BAUHINIA An earlier review of the chemical composition of the genus Bauhinia showed a predominance of terpenes, steroids, alkaloids and especially flavonoids (da Silva and Cechinel Filho, 2002). This review describes metabo- lites isolated from the genus Bauhinia after 2002. Due to their biological properties, which have been confirmed in experimental models, B. forficata and B. variegata are the most studied species. Pizzolattiet al. (2003) isolated several flavonoids from the leaf extract of B. forficata, including kaempferol and four flavonoid glycosides identified as kaempferitrin (1), 3,7-di-O-α-L-rhamno- pyranosylquercetin, 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β- D-glucopyranosyl]-7-O-X-L-rhamnopyranosylkaempferol and 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranosyl]- 7-O-α-L-rhamnopyranosylquercetin. From the flowers, only the flavonoid 7-O-α-rhamnopyranosylkaempferol was isolated. It is interesting to note that flavonoid 1, is present only in B. forficata, making it a suitable chemi- cal marker for phytopreparations containing this plant (da Silva et al., 2000); taking this into account, Pinheiro et al. (2006) recently developed a chromatographic method (LC) to quantitatively determine 1 in medicinal extracts of B. forficata leaves, and compared the kaemp- feritrin content in leaf extracts of plants collected from two different geographical areas in the south of Brazil. The results showed a significant variation in the con- centration of 1 in both samples (368.68 and 77.91 µg/ mL in aqueous extracts; 1952.59 and 211.61 µg/mL in hydroalcohol extracts), confirming the influence of environmental conditions and other factors in the pro- duction of secondary metabolites (Cechinel Filho and Yunes, 1998; Gobbo-Neto and Lopes, 2007). A recent quality control study of six commercial samples based on B. forficate, using TLC and HPLC and the flavonoid kaempferitrin (1) as a chemical marker, showed that only three samples (50%) contained B. forficata, indicating that the method developed is effective for determining the adulteration of plant extracts contain- ing B. forficata (Engel et al., 2008). Reddy et al. (2003) investigated the root bark extract of B. variegata and reported the isolation of a new flavonone, (2S)-5,7-dimethoxy-3′,4′-methyleneflavanone (2) and a new dihydrodibenzoxepin, 5,6-dihydro-1,7- dihydroxy-3,4-dimethoxy-2-methyldibenz[b,f]oxepin (3), together with the three known flavonoids quercetin 7- methyl ether, kaempferol 7,4′-dimethyl ether 3-O-β-D- glucopyranoside and kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside. Zhao et al. (2005) isolated a new phenanthraquinone, 2,7-dimethoxy-3-methyl-9,10-dihydrophenanthrene-1,4- dione (bauhinione, 4), from the stem extract of B. variegata. More recently, Rao et al. (2008), searching for new anti- inflammatory natural agents, isolated six known flavonoids from the aerial parts of B. variegata, namely kaempferol, ombuin, kaempferol 7,4′-dimethyl ether 3-O-β-D- glucopyranoside, kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside, isorhamnetin 3-O-β-D-glucopyranoside and hesperidin, together with one triterpene caffeate, 3-β-trans-(3,4- dihydroxycinnamoyloxy) olean-12-en-28 oic acid. Another species, B. microstachya, showed the presence of phenolic metabolites (da Silva and Cechinel Filho, 2002) as well as vitexin, methyl gallate and hexatriacontane (Bianco and Santos, 2003). Pettit et al. (2006), searching for new anticancer natural products, studied the aerial parts of B. purpurea collected in India and isolated four new oxepin derivatives named bauhiniastatins (5–8), together with the known phacharin. BIOLOGICAL POTENTIAL OF PLANTS FROM GENUS BAUHINIA 1351 Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd. Phytother. Res. 23, 1347–1354 (2009) DOI: 10.1002/ptr activity, and that treatment of pregnant diabetic female rats with B. forficata did not control maternal hyper- glycemia, hyperlipidemia or hypercholesterolemia, but it did increase the amount of hepatic glycogen, decreased the uric acid concentration, and increased the glutathione activity. This suggests that the extract of the plant acts as an antioxidant defense system, probably due the presence of the previously detected flavonoids (da Silva et al., 2000; da Silva and Cechinel Filho, 2002; Pizzolatti et al., 2003). A recent report demonstrated that the stem-bark extract of B. racemosa does not alter the hematological parameters, liver and kidney functions, at doses of 100 and 200 mg/kg body weight in mice, indicating that it is free of toxic effects. However, at a higher dose (400 mg/kg), the treated groups exhibited significant alterations in their hematological profile and hepatorenal functions and metabolism (Kumar et al., 2005). Similarly, Reid et al. (2006) found that leaf extract of B. galpinii showed antimutagenic properties in the presence of metabolic activator S9 and that it did not cause any mutagenic response against Salmonella typhymurium bacterial strains in the Ames assay, confirming its non-toxic effects. PHYTOCHEMICAL KNOWLEDGE OF THE GENUS BAUHINIA An earlier review of the chemical composition of the genus Bauhinia showed a predominance of terpenes, steroids, alkaloids and especially flavonoids (da Silva and Cechinel Filho, 2002). This review describes metabo- lites isolated from the genus Bauhinia after 2002. Due to their biological properties, which have been confirmed in experimental models, B. forficata and B. variegata are the most studied species. Pizzolatti et al. (2003) isolated several flavonoids from the leaf extract of B. forficata, including kaempferol and four flavonoid glycosides identified as kaempferitrin (1), 3,7-di-O-α-L-rhamno- pyranosylquercetin, 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β- D-glucopyranosyl]-7-O-X-L-rhamnopyranosylkaempferol and 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranosyl]- 7-O-α-L-rhamnopyranosylquercetin. From the flowers, only the flavonoid 7-O-α-rhamnopyranosylkaempferol was isolated. It is interesting to note that flavonoid 1, is present only in B. forficata, making it a suitable chemi- cal marker for phytopreparations containing this plant (da Silva et al., 2000); taking this into account, Pinheiro et al. (2006) recently developed a chromatographic method (LC) to quantitatively determine 1 in medicinal extracts of B. forficata leaves, and compared the kaemp- feritrin content in leaf extracts of plants collected from two different geographical areas in the south of Brazil. The results showed a significant variation in the con- centration of 1 in both samples (368.68 and 77.91 µg/ mL in aqueous extracts; 1952.59 and 211.61 µg/mL in hydroalcohol extracts), confirming the influence of environmental conditions and other factors in the pro- duction of secondary metabolites (Cechinel Filho and Yunes, 1998; Gobbo-Neto and Lopes, 2007). A recent quality control study of six commercial samples based on B. forficate, using TLC and HPLC and the flavonoid kaempferitrin (1) as a chemical marker, showed that only three samples (50%) contained B. forficata, indicating that the method developed is effective for determining the adulteration of plant extracts contain- ing B. forficata (Engel et al., 2008). Reddy et al. (2003) investigated the root bark extract of B. variegata and reported the isolation of a new flavonone, (2S)-5,7-dimethoxy-3′,4′-methyleneflavanone (2) and a new dihydrodibenzoxepin, 5,6-dihydro-1,7- dihydroxy-3,4-dimethoxy-2-methyldibenz[b,f]oxepin (3), together with the three known flavonoids quercetin 7- methyl ether, kaempferol 7,4′-dimethyl ether 3-O-β-D- glucopyranoside and kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside. Zhao et al. (2005) isolated a new phenanthraquinone, 2,7-dimethoxy-3-methyl-9,10-dihydrophenanthrene-1,4- dione (bauhinione, 4), from the stem extract of B. variegata. More recently, Rao et al. (2008), searching for new anti- inflammatory natural agents, isolated six known flavonoids from the aerial parts of B. variegata, namely kaempferol, ombuin, kaempferol 7,4′-dimethyl ether 3-O-β-D- glucopyranoside, kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside, isorhamnetin 3-O-β-D-glucopyranoside and hesperidin, together with one triterpene caffeate, 3-β-trans-(3,4- dihydroxycinnamoyloxy) olean-12-en-28 oic acid. Another species, B. microstachya, showed the presence of phenolic metabolites (da Silva and Cechinel Filho, 2002) as well as vitexin, methyl gallate and hexatriacontane (Biancoand Santos, 2003). Pettit et al. (2006), searching for new anticancer natural products, studied the aerial parts of B. purpurea collected in India and isolated four new oxepin derivatives named bauhiniastatins (5–8), together with the known phacharin. Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 11 5,6-dihidro-1,7- dihidroxi-3,4- dimetoxi-2- metildibenz- oxepina B. variegata Corteza de raíz Reddy et al. (2003) 2,7-dimetoxi-3- metil-9,10- dihidrofenantren- 1,4- diona B. variegata Tallo Zhao et al. (2005) 5- hydroxi 7,3’,4’,5’- tetra-metoxiflavona B. variegata Semillas Yadava y Reddy (2001) Bauhiniastatina 4-hidroxi-8,10- dimetoxi-9- metildibenzoxepina B. purpurea Tallo Pettit et al. (2006) Harmano B. unglulata Hojas Maia et al. (2008) Eleagnina B. unglulata Hojas Maia et al. (2008) BIOLOGICAL POTENTIAL OF PLANTS FROM GENUS BAUHINIA 1351 Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd. Phytother. Res. 23, 1347–1354 (2009) DOI: 10.1002/ptr activity, and that treatment of pregnant diabetic female rats with B. forficata did not control maternal hyper- glycemia, hyperlipidemia or hypercholesterolemia, but it did increase the amount of hepatic glycogen, decreased the uric acid concentration, and increased the glutathione activity. This suggests that the extract of the plant acts as an antioxidant defense system, probably due the presence of the previously detected flavonoids (da Silva et al., 2000; da Silva and Cechinel Filho, 2002; Pizzolatti et al., 2003). A recent report demonstrated that the stem-bark extract of B. racemosa does not alter the hematological parameters, liver and kidney functions, at doses of 100 and 200 mg/kg body weight in mice, indicating that it is free of toxic effects. However, at a higher dose (400 mg/kg), the treated groups exhibited significant alterations in their hematological profile and hepatorenal functions and metabolism (Kumar et al., 2005). Similarly, Reid et al. (2006) found that leaf extract of B. galpinii showed antimutagenic properties in the presence of metabolic activator S9 and that it did not cause any mutagenic response against Salmonella typhymurium bacterial strains in the Ames assay, confirming its non-toxic effects. PHYTOCHEMICAL KNOWLEDGE OF THE GENUS BAUHINIA An earlier review of the chemical composition of the genus Bauhinia showed a predominance of terpenes, steroids, alkaloids and especially flavonoids (da Silva and Cechinel Filho, 2002). This review describes metabo- lites isolated from the genus Bauhinia after 2002. Due to their biological properties, which have been confirmed in experimental models, B. forficata and B. variegata are the most studied species. Pizzolatti et al. (2003) isolated several flavonoids from the leaf extract of B. forficata, including kaempferol and four flavonoid glycosides identified as kaempferitrin (1), 3,7-di-O-α-L-rhamno- pyranosylquercetin, 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β- D-glucopyranosyl]-7-O-X-L-rhamnopyranosylkaempferol and 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranosyl]- 7-O-α-L-rhamnopyranosylquercetin. From the flowers, only the flavonoid 7-O-α-rhamnopyranosylkaempferol was isolated. It is interesting to note that flavonoid 1, is present only in B. forficata, making it a suitable chemi- cal marker for phytopreparations containing this plant (da Silva et al., 2000); taking this into account, Pinheiro et al. (2006) recently developed a chromatographic method (LC) to quantitatively determine 1 in medicinal extracts of B. forficata leaves, and compared the kaemp- feritrin content in leaf extracts of plants collected from two different geographical areas in the south of Brazil. The results showed a significant variation in the con- centration of 1 in both samples (368.68 and 77.91 µg/ mL in aqueous extracts; 1952.59 and 211.61 µg/mL in hydroalcohol extracts), confirming the influence of environmental conditions and other factors in the pro- duction of secondary metabolites (Cechinel Filho and Yunes, 1998; Gobbo-Neto and Lopes, 2007). A recent quality control study of six commercial samples based on B. forficate, using TLC and HPLC and the flavonoid kaempferitrin (1) as a chemical marker, showed that only three samples (50%) contained B. forficata, indicating that the method developed is effective for determining the adulteration of plant extracts contain- ing B. forficata (Engel et al., 2008). Reddy et al. (2003) investigated the root bark extract of B. variegata and reported the isolation of a new flavonone, (2S)-5,7-dimethoxy-3′,4′-methyleneflavanone (2) and a new dihydrodibenzoxepin, 5,6-dihydro-1,7- dihydroxy-3,4-dimethoxy-2-methyldibenz[b,f]oxepin (3), together with the three known flavonoids quercetin 7- methyl ether, kaempferol 7,4′-dimethyl ether 3-O-β-D- glucopyranoside and kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside. Zhao et al. (2005) isolated a new phenanthraquinone, 2,7-dimethoxy-3-methyl-9,10-dihydrophenanthrene-1,4- dione (bauhinione, 4), from the stem extract of B. variegata. More recently, Rao et al. (2008), searching for new anti- inflammatory natural agents, isolated six known flavonoids from the aerial parts of B. variegata, namely kaempferol, ombuin, kaempferol 7,4′-dimethyl ether 3-O-β-D- glucopyranoside, kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside, isorhamnetin 3-O-β-D-glucopyranoside and hesperidin, together with one triterpene caffeate, 3-β-trans-(3,4- dihydroxycinnamoyloxy) olean-12-en-28 oic acid. Another species, B. microstachya, showed the presence of phenolic metabolites (da Silva and Cechinel Filho, 2002) as well as vitexin, methyl gallate and hexatriacontane (Bianco and Santos, 2003). Pettit et al. (2006), searching for new anticancer natural products, studied the aerial parts of B. purpurea collected in India and isolated four new oxepin derivatives named bauhiniastatins (5–8), together with the known phacharin. BIOLOGICAL POTENTIAL OF PLANTS FROM GENUS BAUHINIA 1351 Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd. Phytother. Res. 23, 1347–1354 (2009) DOI: 10.1002/ptr activity, and that treatment of pregnant diabetic female rats with B. forficata did not control maternal hyper- glycemia, hyperlipidemia or hypercholesterolemia, but it did increase the amount of hepatic glycogen, decreased the uric acid concentration, and increased the glutathione activity. This suggests that the extract of the plant acts as an antioxidant defense system, probably due the presence of the previously detected flavonoids (da Silva et al., 2000; da Silva and Cechinel Filho, 2002; Pizzolatti et al., 2003). A recent report demonstrated that the stem-bark extract of B. racemosa does not alter the hematological parameters, liver and kidney functions, at doses of 100 and 200 mg/kg body weight in mice, indicating that it is free of toxic effects. However, at a higher dose (400 mg/kg), the treated groups exhibited significant alterations in their hematological profile and hepatorenal functions and metabolism (Kumar et al., 2005). Similarly, Reid et al. (2006) found that leaf extract of B. galpinii showed antimutagenic properties in the presence of metabolic activator S9 and that it did not cause any mutagenic response against Salmonella typhymurium bacterial strains in the Ames assay, confirming its non-toxic effects. PHYTOCHEMICAL KNOWLEDGE OF THE GENUS BAUHINIA An earlier review of the chemical composition of the genus Bauhinia showed a predominance of terpenes, steroids, alkaloids and especially flavonoids (da Silva and Cechinel Filho, 2002). This review describes metabo- lites isolated from the genus Bauhinia after 2002. Due to their biological properties, which have been confirmed in experimental models, B. forficata and B. variegata are the most studied species. Pizzolatti et al. (2003) isolatedseveral flavonoids from the leaf extract of B. forficata, including kaempferol and four flavonoid glycosides identified as kaempferitrin (1), 3,7-di-O-α-L-rhamno- pyranosylquercetin, 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β- D-glucopyranosyl]-7-O-X-L-rhamnopyranosylkaempferol and 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranosyl]- 7-O-α-L-rhamnopyranosylquercetin. From the flowers, only the flavonoid 7-O-α-rhamnopyranosylkaempferol was isolated. It is interesting to note that flavonoid 1, is present only in B. forficata, making it a suitable chemi- cal marker for phytopreparations containing this plant (da Silva et al., 2000); taking this into account, Pinheiro et al. (2006) recently developed a chromatographic method (LC) to quantitatively determine 1 in medicinal extracts of B. forficata leaves, and compared the kaemp- feritrin content in leaf extracts of plants collected from two different geographical areas in the south of Brazil. The results showed a significant variation in the con- centration of 1 in both samples (368.68 and 77.91 µg/ mL in aqueous extracts; 1952.59 and 211.61 µg/mL in hydroalcohol extracts), confirming the influence of environmental conditions and other factors in the pro- duction of secondary metabolites (Cechinel Filho and Yunes, 1998; Gobbo-Neto and Lopes, 2007). A recent quality control study of six commercial samples based on B. forficate, using TLC and HPLC and the flavonoid kaempferitrin (1) as a chemical marker, showed that only three samples (50%) contained B. forficata, indicating that the method developed is effective for determining the adulteration of plant extracts contain- ing B. forficata (Engel et al., 2008). Reddy et al. (2003) investigated the root bark extract of B. variegata and reported the isolation of a new flavonone, (2S)-5,7-dimethoxy-3′,4′-methyleneflavanone (2) and a new dihydrodibenzoxepin, 5,6-dihydro-1,7- dihydroxy-3,4-dimethoxy-2-methyldibenz[b,f]oxepin (3), together with the three known flavonoids quercetin 7- methyl ether, kaempferol 7,4′-dimethyl ether 3-O-β-D- glucopyranoside and kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside. Zhao et al. (2005) isolated a new phenanthraquinone, 2,7-dimethoxy-3-methyl-9,10-dihydrophenanthrene-1,4- dione (bauhinione, 4), from the stem extract of B. variegata. More recently, Rao et al. (2008), searching for new anti- inflammatory natural agents, isolated six known flavonoids from the aerial parts of B. variegata, namely kaempferol, ombuin, kaempferol 7,4′-dimethyl ether 3-O-β-D- glucopyranoside, kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside, isorhamnetin 3-O-β-D-glucopyranoside and hesperidin, together with one triterpene caffeate, 3-β-trans-(3,4- dihydroxycinnamoyloxy) olean-12-en-28 oic acid. Another species, B. microstachya, showed the presence of phenolic metabolites (da Silva and Cechinel Filho, 2002) as well as vitexin, methyl gallate and hexatriacontane (Bianco and Santos, 2003). Pettit et al. (2006), searching for new anticancer natural products, studied the aerial parts of B. purpurea collected in India and isolated four new oxepin derivatives named bauhiniastatins (5–8), together with the known phacharin. BIOLOGICAL POTENTIAL OF PLANTS FROM GENUS BAUHINIA 1351 Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd. Phytother. Res. 23, 1347–1354 (2009) DOI: 10.1002/ptr activity, and that treatment of pregnant diabetic female rats with B. forficata did not control maternal hyper- glycemia, hyperlipidemia or hypercholesterolemia, but it did increase the amount of hepatic glycogen, decreased the uric acid concentration, and increased the glutathione activity. This suggests that the extract of the plant acts as an antioxidant defense system, probably due the presence of the previously detected flavonoids (da Silva et al., 2000; da Silva and Cechinel Filho, 2002; Pizzolatti et al., 2003). A recent report demonstrated that the stem-bark extract of B. racemosa does not alter the hematological parameters, liver and kidney functions, at doses of 100 and 200 mg/kg body weight in mice, indicating that it is free of toxic effects. However, at a higher dose (400 mg/kg), the treated groups exhibited significant alterations in their hematological profile and hepatorenal functions and metabolism (Kumar et al., 2005). Similarly, Reid et al. (2006) found that leaf extract of B. galpinii showed antimutagenic properties in the presence of metabolic activator S9 and that it did not cause any mutagenic response against Salmonella typhymurium bacterial strains in the Ames assay, confirming its non-toxic effects. PHYTOCHEMICAL KNOWLEDGE OF THE GENUS BAUHINIA An earlier review of the chemical composition of the genus Bauhinia showed a predominance of terpenes, steroids, alkaloids and especially flavonoids (da Silva and Cechinel Filho, 2002). This review describes metabo- lites isolated from the genus Bauhinia after 2002. Due to their biological properties, which have been confirmed in experimental models, B. forficata and B. variegata are the most studied species. Pizzolatti et al. (2003) isolated several flavonoids from the leaf extract of B. forficata, including kaempferol and four flavonoid glycosides identified as kaempferitrin (1), 3,7-di-O-α-L-rhamno- pyranosylquercetin, 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β- D-glucopyranosyl]-7-O-X-L-rhamnopyranosylkaempferol and 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranosyl]- 7-O-α-L-rhamnopyranosylquercetin. From the flowers, only the flavonoid 7-O-α-rhamnopyranosylkaempferol was isolated. It is interesting to note that flavonoid 1, is present only in B. forficata, making it a suitable chemi- cal marker for phytopreparations containing this plant (da Silva et al., 2000); taking this into account, Pinheiro et al. (2006) recently developed a chromatographic method (LC) to quantitatively determine 1 in medicinal extracts of B. forficata leaves, and compared the kaemp- feritrin content in leaf extracts of plants collected from two different geographical areas in the south of Brazil. The results showed a significant variation in the con- centration of 1 in both samples (368.68 and 77.91 µg/ mL in aqueous extracts; 1952.59 and 211.61 µg/mL in hydroalcohol extracts), confirming the influence of environmental conditions and other factors in the pro- duction of secondary metabolites (Cechinel Filho and Yunes, 1998; Gobbo-Neto and Lopes, 2007). A recent quality control study of six commercial samples based on B. forficate, using TLC and HPLC and the flavonoid kaempferitrin (1) as a chemical marker, showed that only three samples (50%) contained B. forficata, indicating that the method developed is effective for determining the adulteration of plant extracts contain- ing B. forficata (Engel et al., 2008). Reddy et al. (2003) investigated the root bark extract of B. variegata and reported the isolation of a new flavonone, (2S)-5,7-dimethoxy-3′,4′-methyleneflavanone (2) and a new dihydrodibenzoxepin, 5,6-dihydro-1,7- dihydroxy-3,4-dimethoxy-2-methyldibenz[b,f]oxepin (3), together with the three known flavonoids quercetin 7- methyl ether, kaempferol 7,4′-dimethyl ether 3-O-β-D- glucopyranoside and kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside. Zhao et al. (2005) isolated a new phenanthraquinone, 2,7-dimethoxy-3-methyl-9,10-dihydrophenanthrene-1,4- dione (bauhinione, 4), from the stem extract of B. variegata. More recently, Rao et al. (2008), searching for new anti- inflammatory natural agents, isolated six known flavonoids from the aerial parts of B. variegata, namely kaempferol, ombuin, kaempferol 7,4′-dimethyl ether 3-O-β-D- glucopyranoside, kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside, isorhamnetin 3-O-β-D-glucopyranoside and hesperidin, together with one triterpene caffeate, 3-β-trans-(3,4- dihydroxycinnamoyloxy) olean-12-en-28 oic acid. Another species, B. microstachya, showed the presence of phenolic metabolites (da Silva and Cechinel Filho, 2002) as well as vitexin, methyl gallate and hexatriacontane (Bianco and Santos, 2003). Pettitet al. (2006), searching for new anticancer natural products, studied the aerial parts of B. purpurea collected in India and isolated four new oxepin derivatives named bauhiniastatins (5–8), together with the known phacharin. Sub-fraction EAc-2 (752.0 mg) was further purified over Sephadex LH-20 by elution with MeOH to give 51 fractions, which were pooled to 14 fractions after TLC analysis. Fraction EAC-2/12 afforded quercetin (1, 47.3 mg) (Agrawal, 1989). Chromatography over Sephadex LH-20 by elution with MeOH of sub-fraction EAc-3 (188.6 mg) yielded nine fractions according to TLC analysis. The fraction EAc-3/6 yielded the quercetin arabinofuranoside (2, 5.6 mg) (Mark- ham et al., 1978). Chromatography over Sephadex LH-20 by elution with MeOH of sub-fraction EAc-4 (1.23 g) yielded 41 sub-fractions, which were pooled to nine fractions after TLC analysis. Flash chromatography of the frac- tion EAc-4/7 (554.3 mg) by elution with EtOAc, acetone and MeOH as binary mixtures of increasing polarity yielded compound quercitrin (3, 7.0 mg) (Markham et al., 1978). Recrystallization of fraction EAc-7 on MeOH yielded 3-O- methyl-D-pinitol (4) (Dhorman et al., 1970). Another 50.0 g of the EtOH extract was dissolved with 10% HCl solution under stirring for 4 h. The reaction mix- ture was further extracted with AcOEt (4! 100 ml) and the remaining acid aqueous solution was basified to pH 9 with ammonium hydroxide under ice-bath conditions. The basified solution was extracted with AcOEt (3! 200 ml) and the organic phase was washed with water, dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The alkaloid fraction (0.507 g) was then subjected to column chromatography over Sephadex LH-20 by elution with MeOH. A total of 51 sub-fractions were collected and combined on the basis of TLC analysis. Successive silica gel chromatography of fractions 18e22 (100.5 mg) by elution with AcOEt, acetone and MeOH as binary mixtures of increasing polarity yielded the pure compounds 5 (harmane) (16.8 mg) (Seki et al., 2000) and 6 (eleagnine) (20.2 mg) (Fiot et al., 2006). O OR O HO OH OH OH 1 R = H 2 R = arabinofuranose 3 R = rhamnose OH OH OH OH OMe HO 4 6 N N MeH H 5 N N MeH 4. Chemotaxonomic significance Flavonoids are characteristic of the Leguminosae family and possess large occurrence on the Bauhinia genus. Quercetin (1), quercetin arabinofuranoside (2) and quercitrin (3) have been isolated from many species including Bau- hinia purpurea (Ramachandran and Joshi, 1967), Bauhinia reticulata (Rabate, 1938), Bauhinia splendens (Cechinel Filho et al., 1995), Bauhinia tomentosa (Subramanian and Nair, 1963), Bauhinia uruguayensis (Iribarren and Pomilio, 1989) and Bauhinia vahlii (Sultana et al., 1985). On the other hand, alkaloids are very rarely encountered on this genus and only few compounds have been reported so far: the pyridine trigonellin in Bauhinia candicans (Iribarren and Po- milio, 1983) and the carbazols mahainbine, bicycloamhanimbine and girinimbine in Bauhinia variegata (Zhao et al., 2005). 228 M.M. Neto et al. / Biochemical Systematics and Ecology 36 (2008) 227e229 Sub-fraction EAc-2 (752.0 mg) was further purified over Sephadex LH-20 by elution with MeOH to give 51 fractions, which were pooled to 14 fractions after TLC analysis. Fraction EAC-2/12 afforded quercetin (1, 47.3 mg) (Agrawal, 1989). Chromatography over Sephadex LH-20 by elution with MeOH of sub-fraction EAc-3 (188.6 mg) yielded nine fractions according to TLC analysis. The fraction EAc-3/6 yielded the quercetin arabinofuranoside (2, 5.6 mg) (Mark- ham et al., 1978). Chromatography over Sephadex LH-20 by elution with MeOH of sub-fraction EAc-4 (1.23 g) yielded 41 sub-fractions, which were pooled to nine fractions after TLC analysis. Flash chromatography of the frac- tion EAc-4/7 (554.3 mg) by elution with EtOAc, acetone and MeOH as binary mixtures of increasing polarity yielded compound quercitrin (3, 7.0 mg) (Markham et al., 1978). Recrystallization of fraction EAc-7 on MeOH yielded 3-O- methyl-D-pinitol (4) (Dhorman et al., 1970). Another 50.0 g of the EtOH extract was dissolved with 10% HCl solution under stirring for 4 h. The reaction mix- ture was further extracted with AcOEt (4! 100 ml) and the remaining acid aqueous solution was basified to pH 9 with ammonium hydroxide under ice-bath conditions. The basified solution was extracted with AcOEt (3! 200 ml) and the organic phase was washed with water, dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The alkaloid fraction (0.507 g) was then subjected to column chromatography over Sephadex LH-20 by elution with MeOH. A total of 51 sub-fractions were collected and combined on the basis of TLC analysis. Successive silica gel chromatography of fractions 18e22 (100.5 mg) by elution with AcOEt, acetone and MeOH as binary mixtures of increasing polarity yielded the pure compounds 5 (harmane) (16.8 mg) (Seki et al., 2000) and 6 (eleagnine) (20.2 mg) (Fiot et al., 2006). O OR O HO OH OH OH 1 R = H 2 R = arabinofuranose 3 R = rhamnose OH OH OH OH OMe HO 4 6 N N MeH H 5 N N MeH 4. Chemotaxonomic significance Flavonoids are characteristic of the Leguminosae family and possess large occurrence on the Bauhinia genus. Quercetin (1), quercetin arabinofuranoside (2) and quercitrin (3) have been isolated from many species including Bau- hinia purpurea (Ramachandran and Joshi, 1967), Bauhinia reticulata (Rabate, 1938), Bauhinia splendens (Cechinel Filho et al., 1995), Bauhinia tomentosa (Subramanian and Nair, 1963), Bauhinia uruguayensis (Iribarren and Pomilio, 1989) and Bauhinia vahlii (Sultana et al., 1985). On the other hand, alkaloids are very rarely encountered on this genus and only few compounds have been reported so far: the pyridine trigonellin in Bauhinia candicans (Iribarren and Po- milio, 1983) and the carbazols mahainbine, bicycloamhanimbine and girinimbine in Bauhinia variegata (Zhao et al., 2005). 228 M.M. Neto et al. / Biochemical Systematics and Ecology 36 (2008) 227e229 Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 12 2.5 Bauhinia variegata L. Conocida como pata de vaca o árbol de orquídeas, es un árbol caducifolio que pertenece a la familia Caesalpiniaceae que crece en lugares soleados y cálidos. El fruto es una vaina de 20 a 30 cm de longitud que contiene varias semillas (Rzedowski y Rzedowski 2001), sus hojas varían de entre 4 a 12.5 cm de largo y de 5 cm de ancho (Fig. 5) lobadas menos de 1/3 de su longitud, anchamente ovadas, subcoriáceas y el ápice de los lóbulos obtuso. Inflorescencias en racimos cortos, 1 a 4 flores; Flores bisexuales (Fig.4) cáliz 1.5 cm a 2 cm largo, 1 cm a 1.5 cm ancho, pétalos de 3 cm a 5 cm largo y 1-3 cm ancho rosados a lila con el pétalo central rojizo, o blancos, con 5 estambres fértiles de 1.5cm a 4 cm largo ( Torres et al., 2009). Figura 4. Flor de Bauhinia variegata Figura 5. Hojas de Bauhinia variegata Cuadro 2. Clasificación taxonómica de Bauhinia variegata. REINO Plantae DIVISION Magnoliophyta CLASE Magnoliopsida ORDEN Fabales FAMILIA Caesalpiniaceae GENERO Bauhinia ESPECIE Bauhinia variegata En Brasil, las hojas se usan como tratamiento tradicional para la diabetes (Azevedo et al., 2006) al igual que en México en el municipio de Olinalá, Guerrero. Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 13 En la India su corteza se emplea para la gota, diabetes, disentería, diarrea, dolor, procesos inflamatorios y presenta actividad antitumoral (Parekh y Shanda, 2007). En China la decocción de la raíz se usa como antídoto para mordeduras de serpientes (Gupta et al., 1984) y se ha encontrado actividad antibacterial de los extractos metanólicosen B. cereus, S. epidermidis, E. aerogenes, P. vulgaris, S. typhimurium (Parekh y Shanda, 2007), en el Cuadro 3 se muestran las propiedades biologicas reportadas en Bauhinia variagata. Cuadro 3. Propiedades biológicas Bauhinia variegata (Cechinel, 2009) PROPIEDAD BIOLÓGICA PRINCIPIO ACTIVO PARTE DE LA PLANTA REFERENCIAS Anti-protozoario ND DESCONOCIDO Aswal et al., 1984 Anti-tumoral Flavonoides TALLOS Rajkapoor et al., 2003 Anti -úlcera ND TALLOS Rajkapoor et al., 2003 Hepatoprotector ND RAIZ Macedo et al., 2007 Citotóxico ND TALLOS Rajkapoor et al., 2006 Quimioprotectivo ND TALLOS Bodakhe y Ram, 2007 ND= no determinado Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 14 2.5.1 Distribución de Bauhinia variegata Es una planta de distribución pantropical (Fig. 6) es decir se distribuye en la mayoría de los países con climas tropicales incluidos África, Asia y Sudamérica Figura 6. Mapa de distribución mundial de Bauhinia variegata L. Discoverlife (2015) 2.6 Glucoquininas o insulina vegetal Son proteínas de un peso aproximado a los 6 KDa parecidas a la insulina animal que pesa 5.8 KDa, ambas han sido investigadas desde su descubrimiento por Collip J.B. en 1923 El método de extracción que utilizo fue con etanol ácido, desde entonces se han encontrado en otras especies como en hojas de cebolla y en raíces de cebada (Xavier et al., 2003). Las glucoquininas se han aislado y patentado como principios activos y se les ha nombrado: p-insulina (Khanna et al, 1976). Se han identificado en un amplio rango de plantas, algas, hongos, cianobacterias y en procariotas como Escherichia coli (Azevedo et al., 2006). Este método se ha hecho en frutos y semillas de Momordica charantia (Khanna et al., 1976) en semillas de Vigna unguiculata (Venáncio et al., 2003) y en espirulina (Anwer et al., 2012) con un rendimiento de 1 gramo por cada 100. Click on maps to zoom in and on points for data. Discover Life | Global Mapper Help | About | Find place | Menu | Demo Customize this map (add species, change resolution, filter points, etc. -- See all options). © Designed by The Polistes Corporation Bauhinia variegata @ Plant Bug (1); Chinese Virtual Herbarium (1); California Department of Food and Agriculture, Thematic Collection Network (4); Botanical Exploration in Myanmar (1); Flora of Singapore, Raffles Museum (1); Exotic Pest Plant Council, Southeast (14); Global Biodiversity Information Facility (308) [NMNH Botany Collections (71); Missouri Botanical Garden (58); Herbario XAL del Instituto de Ecología, A.C., México (IEXAL) (29); Nationaal Herbarium Nederland (27); Instituto de Ciencias Naturales (18); NSW herbarium collection (17); PRECIS (17); Actualización del banco de datos florístico de la Península de Yucatán (BAFLOPY) (16); Bishop Museum Natural Sciences Data (15); Herbarium of The New York Botanical Garden (12); Harvard University Herbaria (10); RBGE Herbarium (E) (9); UA Herbarium (8); Herbarium of Taiwan Forestry Research Institute (6); Fairchild Tropical Botanic Garden Virtual Herbarium Darwin Core format (6); Plantae, TAIF (Taiwan eLearning and Digital Archives Program, TELDAP) (6); Phanerogams herbarium specimens (6); Field Museum of Natural History (Botany) Seed Plant Collection (6); Consortium of California Herbaria (6); Universidad de Málaga: MGCCormof (5); The Himalayan Uplands Plant database (HUP Version 1) (4); Repatriación de datos del Herbario de Arizona (ARIZ) (4); CONN (4); West, Central and East African Plants Databases (2); Botany (UPS) (2); Instituto de ciencias naturales (2); Arizona State University Vascular Plant Herbarium (2); University of Ghana Ghana Herbarium (2); Herbario IEB del Instituto de Ecología, A.C., México (IEBAJíO) (2); iNaturalist researchgrade observations (2); Herbario de la Universidad de Granada: GDA (2); Institute of Ecology and Evolutionary Biology, National Taiwan University (2); Royal Botanic Gardens, Kew (2); Herbario del Jardín BotánicoHistórico La Concepción: HBC (2); Herbarium, Biodiversity Research Center, Academia Sinica, Taipei (1); Colección Herbario Federico Medem Bogotá FMB (1); Instituto de Botánica Darwinion (1); SysTax Herbaria (1); herbier de nouvellecaledonie (1); Diversidad vegetal en un gradiente en la Sierra Madre Occidental: flora y vegetación de la Región de San Javier y Yécora, Sonora (1); California State University, Chico (1); Flora de las Barrancas del Cobre (1); herbario (1); University of British Columbia Herbarium (UBC) Vascular Plant Collection (1); SANT herbarium vascular plants collection (1); Herbarium (1); Herbarium Berolinense (1); Herbarium Specimens of Bonin and Ryukyu Islands (1); CAS Botany (BOT) (1); Jardi Botanic de Valencia: VAL (1); Plants of Papua New Guinea (1); Visual Plants (144.41.33.158) Private collection of Rainer Bussmann (1); WII Herbarium Dataset (1); Vascular plants of southcentral China (1); Herbarium Specimen of the Institute of Traditional Medicine, Tanzania (1); Fundación Carl Faust: Herbario del Jardí Botànic Marimurtra: HMIM (1) accessed through the GBIF Data Portal. Each record tells when. See dataset links for citations & terms of use.]; iNaturalist (11); Lost Ladybug Project (1); Hattaway, Bobby (2); Missouri Botanical Garden (57); Smithsonian Tropical Research Institute Herbarium, SCZ, Panama (2); Plants Database, United States Department of Agriculture (5) Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 15 En Bauhinia variegata se han extraído estas proteínas de los cloroplastos de las hojas mediante electroforesis (Azevedo et al., 2006). La presencia de esta proteína en plantas se ha vuelto un paradigma debido a que contradice el punto de vista general de que la insulina está presente solamente en el linaje de los metazoo (Xavier et al., 2003). Estas proteínas vegetales que muestran una actividad similar a la insulina animal, disminuyendo los niveles de glucosa, son prometedoras para obtener insulina de manera natural para un mundo que lo necesita con exigencia (Sangeetha, 2009). Algunos consideran que un hecho fundamental de su existencia es la secuencia semejante entre la insulina bovina y la proteínas aisladas en Canavalia ensiformis, Vigna unguiculata, mientras que en Bauhinia variegata solo se ha identificado una secuencia parcial semejante (Xavier et al., 2003). Cuadro 4. Secuencia de aminoácidos de insulina bovina comparada con insulina aislada de Canavalia ensiformis, Vigna unguiculata y Bauhinia variegata (Xavier et al., 2003). Especie Secuencia de insulina Cantidad aminoácidos Cadena α de insulina bovina GIVEQCCASVCSLYQLENYCN 25 Cadena α de Canavalia ensiformis GIVEQCCASVCSLYQLENYCN 25 Cadena α de Vigna unguiculata GIVEQCCASVCSLYQLENYCN 25 Cadena α Bauhinia variegata GIVEQ 5 Cadena β de insulina bovina FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKA 30 Cadena β de Canavalia ensiformis FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKA 30 Cadena de β Vigna unguiculata FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKA 30 Cadena β Bauhinia variegata FVNQH 5 Actividad hipoglucemiante de los extractos de las hojas de Bauhinia variegata L. en ratones de la cepa CD-1 OSVAN SAJID ROJO GARCIA 16 2.7 Modelos animales de experimentación (diabetes inducida) La inducción de la diabetes se ha logrado por medio de diversas técnicas experimentales -Pancreatectomia total: se extirpa completamente el páncreas -Pancreatectomia subtotal: extirpación de menos del 90% del páncreas -Diabetes hipofisaria: extirpación de la hipófisis -Inducción química : uso de agentes químicos que destruyen o dañan
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