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1 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis está protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. 2 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE CIENCIAS CUANTIFICACIÓN DE SUSTANCIAS HÚMICAS PROVENIENTES DE LOS SEDIMENTOS EN LA ZONA CHINAMPERA, XOCHIMILCO, CIUDAD DE MÉXICO. T E S I S QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: LICENCIADA EN BIOLOGÍA P R E S E N T A : ELVIRA MARTÍNEZ GUERRA DIRECTOR DE TESIS: DRA. CLAUDIA ALEJANDRA PONCE DE LEÓN HILL Ciudad Universitaria, Cd. México, México. 2017 3 DATOS GENERALES Elvira Martínez Guerra Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Ciencias No. de cuenta: 307236586 DATOS DEL ASESOR Dra. Claudia Alejandra Ponce de León Hill Coordinadora de Ecología y Recursos Naturales JURADO ASIGNADO PRESIDENTE: DRA.IRMA AURORA ROSAS PÉREZ VOCAL: DRA. SILKE CRAM HEYDRICH SECRETARIA: DRA. CLAUDIA ALEJANDRA PONCE DE LEÓN HILL TUTOR SUPLENTE: DRA. AMADA LAURA REYES ORTIGOZA SUPLENTE: DR. RODOLFO OMAR ARELLANO AGUILAR DATOS DE LA TESIS Cuantificación de sustancias húmicas provenientes de los sedimentos en la zona chinampera, Xochimilco, Ciudad de México 89 páginas 2017 4 AGRADECIMIENTOS Gracias a todas aquellas personas que se han tomado el tiempo para leer este trabajo, así como por sus comentarios y sugerencias que me han servido bastante. Agradezco la asesoría de la Dra. Claudia Alejandra Ponce de León Hill, así como de su paciencia y tiempo. Al M. en C. Manuel, por instruirme en mis primeros pasos en el laboratorio, así mismo al M. en C. Horacio quien me compartió sus conocimientos al entrar a la Unidad de Análisis Ambiental, al Químico Giovanni que estuvo para aclararme algunas dudas, y a la M. en C. Carlette, que así como me compartió sus conocimientos, también me ayudó y me acompaño en la elaboración práctica de este trabajo. También al Dr. Cristóbal Flores quien me hizo desarrollar habilidades en el trabajo de laboratorio, además de compartir sus conocimientos, técnicas milenarias y bueno sobre todo por su amistad y paciencia. A la M. en C. María Pilar Fernández Lomelí quien me orientó en la parte estadística, gracias por su tiempo y paciencia. Así mismo quiero agradecer a cada uno de mis sinodales, porque con sus críticas han ayudado a que este trabajo tenga más formalidad. Para finalizar, agradezco a aquellos profesores de licenciatura que me han instruido en esta carrera científica, pero sobre todo a la UNAM. 5 6 ÍNDICE Abreviaturas………………………………………………………………………..9 Índice de Tablas………………………………………………………………….10 Índice de Figuras…………………………………………………………………12 Resumen………………………………………………………………………….13 1. Introducción………………………………………………………………………15 1.1. Materia orgánica………………………………………………………….15 1.2. Análisis de la materia orgánica…………………………………………18 1.3. Importancia de la materia orgánica…………………………………….19 1.4. Sustancias húmicas……………………………………………………...21 1.5. Ácidos húmicos…………………………………………………………..24 1.6. Ácidos fúlvicos……………………………………………………………26 1.7. Huminas…………………………………………………………………..27 1.8. Proceso de humificación………………………………………………...27 1.9. Métodos de estudio para las sustancias húmicas……………………30 1.10. Disoluciones de extracción para la obtención de sustancias húmicas……………………………………………………………………31 1.11. Importancia de las sustancias húmicas………………………………..32 2. Antecedentes……………………………………………………………………..33 2.1. Justificación……………………………………………………………….34 3. Objetivos………………………………………………………………………….36 4. Hipótesis………………………………………………………………………..…37 5. Área de estudio…………………………………………………………………..39 6. Método…………………………………………………………………………….42 6.1. Muestreo……………………………………………………………..……42 6.2. Cuantificación de carbono y nitrógeno orgánico total de los sedimentos………………………………………………………………..42 6.3. Cuantificación de sustancias húmicas…………………………………43 6.3.1. Porcentaje de humedad……………………………………………..44 6.3.2. Limpieza de la resina DAX-8………………………………………..44 6.3.3. Extracción de sustancias húmicas…………………………………45 7 6.4. Cuantificación de carbono orgánico de las sustancias húmicas……47 6.5. Análisis estadístico………………………………………………………47 7. Resultados………………………………………………………………………..50 7.1. Porcentaje de carbono, nitrógeno y relación C/N de los sedimentos………………………………………………………………..50 7.2. Cuantificación de carbono de las diferentes fracciones de las sustancias húmicas………………………………………………………53 7.3. Cuantificación de las sustancias húmicas…………………………….55 8. Discusión………………………………………………………………………….59 8.1. Porcentaje de carbono, nitrógeno y relación C/N de los sedimentos………………………………………………………………..59 8.2. Cuantificación de carbono de las diferentes fracciones de las sustancias húmicas………………………………………………………60 8.3. Cuantificación de las sustancias húmicas…………………………….63 8.4. Método de extracción de sustancias húmicas, aplicando resinas y distintas disoluciones alcalinas como ácidas…………………………65 9. Conclusiones…………………………..…………………………………………67 9.1. Porcentaje de carbono, nitrógeno y relación C/N de los sedimentos………………………………………………………………..67 9.2. Cuantificación de carbono de las diferentes fracciones de las sustancias húmicas……………………………………………………...67 9.3. Identificación de la composición de la materia orgánica de acuerdo a sus influencias antrópicas de los sitios de muestreo………………...67 9.4. Método de extracción de sustancias húmicas, aplicando resinas y distintas disoluciones alcalinas como ácidas…………………………68 9.5. Transformación de la materia orgánica que se incorpora al sistema con base en las sustancias húmicas presentes………………………68 10. Reflexiones……………………………………………………………………….69 11. Literatura Citada………………………………………………………………….70 Anexo 1 Anexo 2 8 Anexo 3 Anexo 4 9 ABREVIATURAS %C Porcentaje de carbono. %N Porcentaje de nitrógeno. AF Ácido fúlvico. AH Ácido húmico. C/N Relación carbono-nitrógeno. g C Kg Gramos de carbono en un kilogramo. DOC Dissolved organic carbon (Carbono orgánico disuelto). HON Hidrophobic organic neutral (Materia orgánica hidrofobica neutra). Hy Fracción hidrofilica. M.O. Materia orgánica. g/Kg p.s. Gramo sobre kilogramo en peso seco. O.D. Oxígeno disuelto. SH Substancias húmicas. TOC Carbono orgánico total. UAA Unidad de Análisis Ambiental. V Volumen. 10 ÍNDICE DE TABLAS T1. Compuestos orgánicos más importantes de la materia orgánica. Tomado de Navarro, 2003…………………………………………………………………………….17 T2. Clasificación de las sustancias húmicas (recopilado de Stevenson, 1994; Belzile et. al., 1996; McDonald et. al., 2004; Anuradha et. al., 2011)……………...22 T3. Grupos funcionales presentes en las sustancias húmicas. Tomado de Stevenson, 1994…………………………………………………………………………22T4. Análisis elemental de los ácidos húmicos en distintos orígenes (Senesi y Loffredo, 1999). Editado por Juárez et. al., 2006…………………………………….25 T5. Principales grupos funcionales de los ácidos húmicos en suelos (Schnitzer, 1999) Editado del Stevenson, 1994........................................................................25 T6. Análisis elemental de los ácidos fúlvicos en distintos orígenes (Senesi y Loffredo, 1999). Editado por Juárez et. al., 2006…………………………………….26 T7. Principales grupos funcionales de los ácidos fúlvicos en suelos (Schnitzer, 1999) Editado del Stevenson, 1994……………………………………………………26 T8. Sitios muestreados de la zona chinampera de Xochimilco………………………4 T9. Porcentaje de carbono y nitrógeno orgánicos totales y la relación de C/N de los sedimentos de los canales de la zona chinampera de Xochimilco…………….51 T10. Contenido de ácidos húmicos (AH), ácidos fúlvicos (AF), fracción hidrofílica (Hy) y materia orgánica hidrofobica natural (HON) en los cuatro sitios de muestreo………………………………………………………………………………….55 T11. Concentración de las fracciones de las sustancias húmicas en los sitios que presentan impacto agrícola……………………………………………………………..56 T12. Concentración de las fracciones de las sustancias húmicas en los sitios que presentan impacto urbano………………………………………………………………56 11 T13. Fracciones húmicas. Resultado de la comparación múltiple de Šidak, alfa 0.05………………………………………………………………………………………..57 T14. Comparación de los resultados obtenidos en la Unidad de Análisis Ambiental y el artículo de Van Zommeran y Commans 2007…………………………………..64 12 ÍNDICE DE FIGURAS F.1. Influencia del pH del suelo en la disponibilidad de los nutrientes en suelos. El grosor de las áreas sombreadas indica el grado de disponibilidad de nutrientes para la raíz vegetal. (Según Lucas y Davis, 1961). Tomado del Taiz y Zeiger, 2006……………………………………………………………………………………….20 F.2 .Proceso de humificación. Vía 1, síntesis de azúcares; vía 2, oxidación de polifenoles a quinonas; vía 3, derivados de la lignina convertidos a quinonas; vía 4, parte de la lignina para formar grupos carboxilos. Tomado del Stevenson, 1994.………………………………………………………………………………………29 Figura 3. Mapa de localización de los sitios en los que se tomaron muestras de sedimento en los canales de la zona chinampera de Xochimilco………………….41 Figura 4. Pasos generales para la cuantificación de las sustancias húmicas…….43 Figura 5. Equipo Soxhlet………………………………………………………………..45 Figura 6. Proceso de extracción de las sustancias húmicas………………………..49 Figura 7. Diagrama de árbol del análisis multivariado de Cluster que agrupa a las muestras de acuerdo a su contenido de Corg…………………………………………52 Figura 8. Mapa de la zona chinampera de Xochimilco. Se señala con rojo, aquellos sitios que presentan alto contenido de carbono y de nitrógeno, con naranja aquellos que presentan contenido medio alto de carbono y medio de nitrógeno, de color amarillo se registra contenido medio de carbono y nitrógeno, los sitos con color verde son aquellos que contienen medio de C y medio bajo de N, con azul aquellos sitios con contenido medio bajo de C y bajo de N, y finalmente azul fuerte aquellos sitios con contenido bajo de C y N………………..53 Figura 9 Concentración de fracciones húmicas g/Kg de cada sitio de muestreo. AH: ácidos húmicos, AF: ácidos fúlvicos, HY: fracción hidrofílica, HON: materia orgánica neutra y TOC: es la suma de todas las fracciones húmicas……………..58 Figura 10. Porcentaje de carbono orgánico total (TOC) y la suma del carbono orgánico cuantificado en las fracciones de las sustancias húmicas……………….61 13 RESUMEN La materia orgánica se encuentra conformada por restos de organismos en diferentes estados de descomposición. Se clasifica en materia orgánica no húmica conformada por carbohidratos, lípidos, aminoácidos, etc. y materia orgánica húmica; constituida por moléculas complejas a base de quinonas y fenoles. En ambientes acuáticos, terrestres y sedimentos lacustres, la materia orgánica, en especial las sustancias húmicas, influyen en los organismos, en la geoquímica del suelo, sedimentos, y en la dinámica del ecosistema. Los especialistas en suelo han trabajado en obtener la estructura y compuestos de las sustancias húmicas a través de técnicas analíticas que ayuden a entender la relación de un ecosistema. Xochimilco cuenta con una zona chinampera que es importante para diversos organismos endémicos y migratorios. Además de que ofrece recursos para los humanos. Sin embargo, ha sido contaminada por aguas residuales y tratadas, los cultivos intensivos y el turismo. En este trabajo se investigó el grado de transformación de la materia orgánica, así como la cuantificación de sustancias húmicas, en sitios con diferente impacto antropogénico. A través de un método basado con resina, que además permitió obtener varias fracciones de las sustancias húmicas en un tiempo corto, usando disoluciones alcalinas así como acidas, se cuantificó el carbono y la materia orgánica húmica para cada sitio de muestreo. De acuerdo a los resultados de la prueba estadística, no se encontró diferencias significativas entre los sitios de muestreo. Se considera que la fuente de materia orgánica proveniente de las actividades antropogénicas, tiene gran impacto sobre la conformación, dinámica, concentración y calidad de la materia orgánica en los sedimentos, a comparación de los compuestos provenientes de la vegetación y fauna del sitio. Los ácidos húmicos, son el principal componente de la materia orgánica húmica en los sedimentos, mientras que las demás fracciones húmicas obtenidas 14 tienen proporciones muy bajas, también es el fracción que contiene más carbono. Esta fracción al ser la más abundante, y de acuerdo a la literatura, es el componente más importante de la materia orgánica que está influyendo en la fertilidad de los suelos chinamperos. 15 1. INTRODUCCIÓN 1.1. Materia orgánica La materia orgánica (M.O.) consiste de compuestos bioquímicos, macromoléculas heterogéneas que provienen de residuos, secreciones o material celular de organismos en diferentes estados de descomposición (Margalef, 1983; Meyers y Ishiwateri, 1993; Sparks, 2003; Graber y Borisover, 2004). Tales compuestos orgánicos son carbohidratos, lípidos, complejos nitrogenados, por mencionar algunos (Tabla 1). Existen compuestos orgánicos que son fáciles de degradar, mientras que otros, por su estructura molecular compleja son de difícil descomposición (Margalef, 1983; Tyson, 1995; Navarro, 2003; Sparks, 2003). Los principales organismos saprófagos que actúan bajo condiciones óxicas o anóxicas son; actinomicetos, basidomicetes, bacterias, nematodos, anélidos y artrópodos (Tyson, 1995; Sparks, 2003; Essington, 2004; Valverde et. al., 2005; Tan, 2009). No obstante, otro factor que influye en la descomposición y contenido de la materia orgánica es la temperatura (o clima), topografía (relieve), pH, oxígeno, tiempo, prácticas agrícolas así como la composición del material parental de los suelos (Tyson, 1995; Sparks, 2003; Essington, 2004; Weil y Magdoff, 2005; Juárez, et. al., 2006). El clima regula el establecimiento de las especies vegetales (así como la cantidad producida de su misma biomasa), y la intensidad de la actividad microbiana. Aunque para aquellos suelos con drenaje restringido o impedido (histosoles o inceptisoles), no es el factor más importante, debido a la escasez de oxígeno que evita la destrucción de la biomasa vegetal (Juárez, et.,al., 2006). La topografía influye en el nivel de materia orgánica a través de los factores que determina: el clima, evaporación, transpiración y escorrentía (microclima). Así, suelos en depresiones, con clima localmente húmedo, poseen mayor contenido encarbono que los climas localmente áridos (Juárez, et. al., 2006). 16 La composición del material parental o primaria afecta el contenido en carbono de un suelo a través de su influencia en propiedades física como la textura que determina la aireación, humedad, reactividad y disponibilidad de nutrientes (Juárez, et. al., 2006). La materia orgánica está presente tanto en suelos como en sedimento y también en la columna de agua, en los sedimentos provienen de dos fuentes; la alóctona y la autóctona. Los contribuyentes a la fuente autóctona derivan de residuos de plantas acuáticas, diatomeas, exoesqueleto de artrópodos acuáticos, material celular y extracelular proveniente del plancton y de organismos bentónicos. Mientras que la alóctona es la que proviene de escurrimientos, arrastre y depósitos de la materia orgánica del suelo, que es transportada por el viento o las lluvias (Sly, 1978; Wetzel, 1983; Meyers y Ishiwateri, 1993; Cole, 1994; Belzile et. al., 1996; Navarro, 2003; Sarmiento and Gruber, 2006; Filella 2008). Asimismo la materia orgánica se compone de dos partes. La fracción no húmica, que está conformada por biomoléculas tales como; lípidos, fosfolípidos, carbohidratos, polisacáridos, aminoácidos, proteínas, así como ceras y resinas, además de otros compuestos de bajo peso molecular. En tanto que la fracción de las sustancias húmicas; está compuesta con derivados de la degradación bioquímica de compuestos o residuos de plantas y animales (Wetzel, 1983; Schnitzer, 1989; Sparks, 2003; Essington, 2004; McDonald et. al., 2004; Tan, 2009; Anuradha et. al., 2011). 17 Tabla 1. Compuestos orgánicos más importantes de la materia orgánica. Compuestos Ejemplos Hidratos de carbono Monosacáridos: pentosas, hexosas Oligosacáridos: sacarosa, maltosa Polisacáridos: arabanas, poliurónidos Ligninas* Polímeros derivado del fenilpropano Taninos* Compuestos fenólicos Glucósidos Compuestos glucosa alcohol, fenol o aldehídos. Ácidos orgánicos, sales y esteres Ácidos oxálico, cítrico, málico, etc. Lípidos y afines Grasas y aceites: esteres glicéricos Ceras: esteres no glicéricos Aceites esenciales: derivados del terpeno Resinas* Ácidos resínicos Compuestos nitrogenados Proteínas, aminoácidos, aminas y bases orgánicas Alcaloides Purinas, pirimidinas, ácidos nucleicos Pigmentos Clorofilas Carotenoides Antocianinas Compuestos minerales Aniones y cationes *Se consideran de más difícil descomposición debido a su estructura molecular. Tomado de Navarro, 2003. 18 1.2. Análisis de la materia orgánica Es importante mencionar que existen parámetros como carbono orgánico total (TOC, total organic carbon), el carbono orgánico particulado (POM, particulate organic matter) y el carbono orgánico disuelto (DOC, disolved organic carbon), esenciales para la cuantificación de la materia orgánica en distintas matrices de un sistema acuático (McDonald et. al., 2004; Sarmiento y Gurber, 2006). El POC es considerado como la fracción que pasa a través de una membrana mayor a 0.45 µm; mientras que el DOC pasa a través de una membrana inferior de 0.45 µm. A veces no se considera el tamaño del poro para definir entre el POC o DOC, ya que las bacterias llegan a medir 0.4 µm. Por otra parte el DOC se encuentra en las corrientes o en la columna del agua, mientras que el POC está asociado a las partículas que llegan al sedimento (Wetzel, 1983; McDonald et. al., 2004; Sarmiento y Gruber, 2006). Para obtener los componentes de la M.O. en suelos, y sedimentos, se ha llegado emplear técnicas como cromatografía gas-pirolisis espectrometría de masas (py-GC/MS, por sus siglas en inglés), cromatografía por exclusión de tamaño, análisis elemental, espectrofotometría de infrarrojo, etc. (Fuhrmann et. al., 2008; Carr et. al., 2010; Fernández et. al., 2010). También existen índices de relación atómica que permiten obtener el grado de transformación, degradación, componentes alifáticos, así como las fuentes de la materia orgánica. Los índices de relación atómica C/N, C/H, O/H, y C/P, ayudan a determinar el grado de descomposición de la materia orgánica en sedimentos y suelos. Otros índices como; O/C, H/C y C/N, proporciona información sobre las posibles fuentes que componen la mayor parte de la M.O, la presencia de anillos aromáticos que a su vez indican la madurez de las sustancias húmicas en el suelo, y además dan información sobre los posibles compuestos alifáticos naturales (Tyson, 1995; Durand, et. al., 2004; Anuradha et. al., 2011; Giovanela et. al., 2010; Neves et. al., 2010; Couto et. al., 2011). 19 1.3. Importancia de la materia orgánica La calidad y cantidad de la materia orgánica influye en las propiedades físicas y químicas del suelo/sedimento como en el color, densidad, agregación de partículas, capacidad de intercambio catiónico, así como de proveer estructura, y capacidad de retención de agua (Sparks, 2003; Tan, 2009). De igual manera, las reacciones de la descomposición de la materia orgánica afectan las propiedades del suelo/sedimento como la producción de CO2, que ocasiona una disminución en el pH, y a su vez influye en la disponibilidad de los nutrientes o a través de sus grupos funcionales que donan o ganan H+ (Taíz y Zeiger 2006; Tan, 2009). Un ejemplo que tiene la materia orgánica sobre el pH, se muestra en la Figura 1. Adicionalmente la materia orgánica moviliza al Fe(II) y al Mn(II), que son fuente de macro y micronutrientes para los organismos, además actúa como cementante entre las partículas del suelo y favorece la formación de agregados (Sparks, 2003; Graber y Borisover, 2004; Stumm, 2004). Es vital en los ciclos biogeoquímicos como el carbono, fosforo, nitrógeno y oxígeno (Begon et.al, 2006). Cabe mencionar que ésta llega a adsorber contaminantes orgánicos y forma compuestos carcinogénicos a través de procesos bióticos y abióticos (tales como metilmercurio, dimetilarsina, selenuro de dimetilo y nitrosaminas) (Stevenson, 1994). Tiene un importante efecto en la bioactividad, persistencia, y biodegradibilidad de los contaminantes orgánicos presentes en el suelo/sedimento (Sparks, 2003; Weil y Magdoff, 2005). Haitzer et. al., (1998), concluyen que la materia orgánica disuelta (también citada como DOM, por sus siglas en inglés), puede decrecer la concentración de químicos orgánicos en ambientes acuáticos y, su composición conduce a variaciones en la concentración de compuestos orgánicos. 20 Figura 1. Influencia del pH del suelo en la disponibilidad de los nutrientes en suelos. El grosor de las áreas sombreadas indica el grado de disponibilidad de nutrientes para la raíz vegetal. (Según Lucas y Davis, 1961). Tomado del Taiz y Zeiger, 2006. Por otra parte, la influencia del carbono orgánico en el ecosistema se da a través de los organismos o en la turbidez, pH, movilización de metales y transporte de contaminantes (Wetzel, 1983; McDonald et. al., 2004). Lambert y Sommer (2007), mencionan que el DOC y POC son un recurso para la existencia de organismos acuáticos. 21 1.4. Sustancias húmicas Las substancias húmicas (SH) son productos de la descomposición de restos orgánicos (p.e. ligninas, celulosa, aminoácidos y carbohidratos), que la microbiota tarda más en degradar porque está compuesta de moléculas muy complejas (Schnitzer, 1989; Stevenson, 1994; Almendros y Hernández, 2009). Estas sustancias tienen un color característico que va de amarillo a negro, son de carácter anfifílico (se compone de una parte hidrofóbica y otra hidrofílica), y con estructura aromática, así como de una composición orgánica heterogénea (gran cantidad de grupos funcionales presentes) (Schnitzer, 1989; Stevenson, 1994; Almendros y Hernández, 2009). Tales sustancias húmicas se clasifican de acuerdo a su solubilidad en disolucionesalcalinas o ácidas (Tabla 2). Los científicos que estudian el suelo enfocado a las sustancias húmicas, se orientan principalmente en los ácidos húmicos (AH), ácidos fúlvicos (AF) y huminas. Aunque, algunos oceanógrafos y geólogos marinos consideran a las huminas como protokerógeno o kerógeno (materia orgánica insoluble en disolventes orgánicos, precursora del petróleo) (Konanova, 1982; Margalef, 1983; Schnitzer 1989; Meyers y Ishiwateri 1993; Stevenson 1994; Tyson, 1995; Belzile et. al., 1996; McDonald et. al., 2004; Almendros y Hernández, 2009; Anuradha et. al., 2011) Las sustancias húmicas constituyen la mayor porción de la materia orgánica del suelo, sedimento, agua dulce y marina. Estas representan cerca del 25% del carbono orgánico total en la tierra y el 50-70% del carbono orgánico disuelto en el agua. En los sedimentos jóvenes constituyen el 60-70%, y en los sedimentos viejos más del 90% (Schnitzer, 1989; Meyers y Ishiwateri, 1993; Hammock et. al., 2003; McDonald et. al., 2004). 22 Tabla 2. Clasificación de las substancias húmicas (recopilado de Stevenson, 1994; Belzile et. al., 1996; McDonald et. al., 2004; Anuradha et. al., 2011). Sustancia Característica Ácido húmico Es la fracción soluble en solventes alcalinos, pero que precipitan o son insolubles a un pH de 1 ó 2. Ácido fúlvico Es la fracción que permanece soluble en el medio alcalino y en ácido débil. Humina Es la fracción que permanece insoluble bajo cualquier condición de pH del solvente. La función de las sustancias húmicas en el ambiente (estructura del suelo, quelación de metales pesados, y absorción de pesticidas y otros contaminantes tóxicos), depende de sus grupos funcionales presentes. Entre los más importantes se encuentran el grupo amino, carboxilo, enol, quinona, etc. (Tabla 3). Tabla 3. Grupos funcionales presentes en las substancias húmicas. Grupo Funcional Estructura Amino Amida Alcohol H R N H OH C O C R R’’ R’ N R H H 23 Aldehído Carboxil Ion carboxilato Enol Cetona Ácido ceto C O H R C O OH R R O O- CH3 C OH CH2 O R1 C R2 R C COO H O 24 Anhídrido Imina Imino Éter R CH2 O CH2 R’ Éster R COOR’ Quinona Hidrixiquinona Tomado de Stevenson, 1994. 1.5. Ácidos húmicos Los ácidos húmicos (AH) tiene un peso molecular de >500 Da. (Juárez et. al., 2006). Su composición elemental se presenta en la Tabla 4, mientras que en la Tabla 5 se mencionan los principales grupos funcionales derivados de suelos en climas subtropicales y tropicales. R C O O C O R R C NH H NH 25 Tabla 4. Análisis elemental de ácidos húmicos en distintos orígenes (Senesi y Loffredo, 1999). Elemento % Sub-tropical Tropical IHSS estándar C 53.6-55.00 54.4-54.9 58.1 H 4.4-5.0 4.8-5.6 3.7 N 3.3-4.6 4.1-5.5 4.1 S 0.8-1.5 0.6-0.8 0.4 O 34.8-36.3 34.1-35.2 34.1 Editado de Juárez et. al., 2006 El carbono, es uno de los compuestos elemental más abundante seguido del oxígeno. Mientras que el azufre es uno de elementos en menor proporción. Las diferencias entre un clima sub-tropical y tropical no son muy grandes, sin embargo, contamos con un estándar. En climas sub-tropical los AH tienen presentes más grupos carboxilo, quinona, cetona que en los climas tropicales, pero el grupo metoxilo (OCH3) abunda más en climas tropicales. Tabla 5. Principales grupos funcionales de los ácidos húmicos en suelos (Schnitzer, 1977). Grupo Funcional C. Subtropical C. Tropical COOH 420-520 380-450 Quinona C=O 80-150 30-140 Cetónico C=O 80-150 30-140 Metoxilo OCH3 30-50 60-80 La concentración se reporta en in cmole/Kg (Editado de Stevenson, 1994. 26 1.6. Ácidos fúlvicos Algunos autores como Stevenson (1994) y Carpena (1969), mencionan que los ácidos fúlvicos son más ácidos y que son percusores de los ácidos húmicos. Su peso molecular es alrededor de 100 Da. En las Tablas 6 y 7 se puede definir que los AF contienen más azufre y oxígeno que los AH en suelos de climas tropicales. Tabla 6. Análisis elemental de ácidos fúlvicos en distintos orígenes (Senesi y Loffredo, 1999). Elemento % Sub-tropical Tropical IHSS estándar C 42.2-44.3 42.8-50.6 50.6 H 5.9-7.0 3.8-5.3 3.8 N 3.1-3.2 2.0-3.3 2.7 S 2.5 1.3-3.6 0.6 O 43.1-46.2 39.7-47.8 43.7 Editado de Juárez et. al., 2006 La concentración de grupos funcionales de los AF entre el clima sub-tropical y tropical es diferente. El grupo carboxilo, cetónico y OCH3 es más abundante en un clima tropical, sin embargo las concentraciones del grupo quinona abundan en un clima sub-tropical. Tabla 7. Principales grupos funcionales de los ácidos fúlvicos en suelos (Schnitzer, 1997). Grupo Funcional C. Subtropical C. Tropical COOH 520-960 720-1120 Quinona C=O 120-260 30-150 Ketonic C=O 120-260 160-270 OCH3 80-90 90-120 La concentración se reporta en in cmole/Kg Editado de Stevenson, 1994. 27 1.7. Huminas Las huminas tienen un peso molecular variable, Stevenson (1994) cita que esta fracción es considerada como la porción que permanece en el suelo después de la extracción con diluciones alcalinas. Además ésta fracción puede estar constituida de uno o más de los siguientes componentes citados: -Ácidos húmicos que están íntimamente enlazados a la materia mineral (p.e. arcillas). Los dos no pueden ser separados. -Compuestos altamente condensados (humificados), la materia húmica con un alto contenido de carbono (>60%) y por lo tanto insoluble en disoluciones alcalinas. -Melaninas fungales. -Substancias parafinicas. 1.8. Proceso de humificación Para la formación de las sustancias húmicas Carpena (1969) y Navarro (2003) citan las siguientes reacciones involucradas en el proceso que son; 1) la degradación, 2) la descomposición de cadenas laterales, 3) demetilación y metoxilación, 4) oxidación de quinonas, 5) dimerización y polimerización, y 6) adición de compuestos nitrogenados. Además, existen propuestas sobre el material principal para la formación de las sustancias húmicas. Waksman (1932), supone que la lignina es modificada y que el nitrógeno de los AH es el resultado de su condensación. Por otra parte, Flaig (1966) supone que las quinonas provenientes de la oxidación y dimetilización de la lignina son polimerizadas bajo oxidación enzimática para unirse con compuestos nitrogenados y formar a los AH y AF (citado en Carpena, 1969; Stevenson, 1994; Navarro, 2003). También cabe mencionar que algunos experimentos como el de Kononova y Aleksandro (1956, 1958), en donde emplearon cultivos con bacterias y hongos como Penicillium, Aspergillus niger y Actinomyces globusporus. En dichos cultivos 28 usaban el azúcar como fuente de alimentación, después de un tiempo se observó una formación de sustancias oscuras similares a la de los ácidos húmicos. Estas sustancias se dializaban y pasaban por una electrodiálisis para ser purificadas. Empleando la espectrofotometría de infrarrojo analizaban las bandas, las cuales correspondían a grupos funcionales como el carboxilo, fenol y compuestos nitrogenados aromáticos que se han detectado en los ácidos húmicos (citado en Kononova, 1982). Felbeck (1971), supone que existen diferentes vías para la formación de las sustancias húmicas. A partir de compuestos orgánicos provenientes de las plantas se forman los AH y huminas de alto peso molecular, subsecuentemente se forman los AF. Otros compuestos provenientes de las células de las plantas son degradados, estos se transforman en fenoles y aminoácidos, que luego son oxidados y polimerizados. Sin embargo, otros compuestos derivados de la autolisis celular como; azucares, aminoácidos y otros compuestosaromáticos, también son condensados y polimerizados (citado en Schnitzer, 1989). Más adelante, Stevenson (1994) resume cuatro posibles vías para la formación de las sustancias húmicas, que se describen en los siguientes párrafos y son representadas en la Figura 2. 29 Vía 1. En los suelos existe una gran cantidad de azúcares y aminas que son provenientes de los microorganismos. La condensación del azúcar-amina involucra la adición de la amina al grupo aldehído del azúcar para formar una base Schiff (grupo funcional que contiene un doble enlace carbono-nitrógeno con el átomo de nitrógeno conectado a un alquilo), de esta base se forma un producto de Amadori, el cual se re-organiza formando productos cafés. Vía 2. Los biopolímeros derivados de las células de las plantas son descompuestos a unidades monoméricas y estas son polimerizadas para formar ácidos fúlvicos, seguido de ácidos húmicos y las huminas. Otro grupo químico de las plantas que es utilizado son los polifenoles, que a través de la polifenoloxidasa Figura 2 .Proceso de humificación. Vía 1, síntesis de azúcares; vía 2, oxidación de polifenoles a quinonas; vía 3, derivados de la lignina convertidos a quinonas; vía 4, parte de la lignina para formar grupos carboxilos. Tomado del Stevenson, 1994. Residuos de plantas Transformación por microorganismos 1.Azúcares 2.Polifenoles 3. Productos de la descomposición de la lignina Quinonas Quinonas 4. Lignina Modificada Sustancias Húmicas 30 son convertidas a quinonas, y estas a su vez reaccionan con compuestos nitrogenados para formar los compuestos húmicos. Vía 3. Durante la biodegradación de la lignina se libera aldehídos fenólicos y ácidos. Estos compuestos se transforman a quinonas. Posteriormente son polimerizados en presencia o ausencia de compuestos aminos, para formar macromoléculas como los húmicos. Vía 4. Por último la fuente principal es la lignina, que requiere oxígeno para su despolimerización. La lignina se encuentra conformada por unidades de fenilpropano. Las bacterias dimetilan y oxidan las cadenas de fenilpropano, conduciendo a la formación de grupos COOH- y fenólico OH-. Durante el procedimiento se va perdiendo grupos de metoxilo (OCH3). 1.9. Métodos de estudio para las sustancias húmicas Con base a métodos de espectrofotometría (UV-vis y FTIR), se ha identificado algunos grupos funcionales como el COOH, fenólico, enólico, quinona, hidroxiquinona, lactóna, éter, carbonilo, metoxilo y alcohólico (Stevenson, 1994; Belzile et. al, 1996; Essington, 2003; Nebbioso y Alessandro, 2011). La relación de absorbancia 465 y 665 (E4/E6) es asociado con las fracciones de ácido húmico maduro, caracterizado por abundantes compuestos aromáticos y alto grado de condensación (Couto et. al., 2011). Además de otras técnicas o métodos analíticos como fluorescencia, espectrometría de masas con plasma de acoplamiento inductivo (ICP-MS, por sus siglas en inglés), técnicas de resonancia magnética nuclear, marcaje isotópico, cromatografía por exclusión de tamaño (SEC, por sus siglas en inglés), cromatografía por exclusión de tamaño a alta presión (HPSEC, por sus siglas en inglés), ultracentrifugación secuencial, radiocromatogramas, y electroforesis, permiten conocer su estructura, sus compuestos, así como sus interacciones con metales (Franke et. al., 2004; McDonald et al., 2004; Nebbioso y Alessandro, 2011; Nebbioso et. al., 2014). 31 1.10. Disoluciones de extracción para la obtención de sustancias húmicas Se han empleado sales orgánicas, sales minerales, ácidos, alcoholes y métodos de cromatografía para la extracción de las sustancias que conforman el suelo o sedimento (Stevenson 1994; Kononova 1982). La sociedad internacional de sustancias húmicas (IHSS, International Humic Substances Society), ha propuesto un método de extracción muy general. Tal método se basa de disoluciones alcalinas diluidas, seguidos por una acidificación y el uso de resina para desorber los ácidos fúlvicos. Stevenson (1994) considera una extracción ideal aquella que no altere el material, que se pueda extraer las sustancias húmicas libres de contaminantes inorgánicos, tales como arcillas, cationes polivalentes así como que además sean fracciones representativas. Bremner y Lees (1949) recomiendan el empleo de NaOH y Na4P207, pues mencionan que resulta ser más eficiente (citado en Schnitzer, 1989). Otros métodos sugeridos para obtener las fracciones de las sustancias húmicas requieren más tiempo como el de Belzile et. al., (1996) o Almendros y Hernández (2009). Por ejemplo en el método de Belzile et. al., (1996), antes de proceder a la extracción de las sustancias húmicas remueve la materia orgánica lábil, después usa dos soluciones de extracción (NaOH y Na4P2O7) mismas que se extraen por separado para las dos fracciones húmicas (AH y AF). Por otra parte Almendros y Hernández (2009), usan estas mismas disoluciones extractantes pero juntan los extractos para después separar las fracciones húmicas. El tiempo requerido para las extracciones húmicas varia en horas y días, en ambos métodos. Para obtener las fracciones húmicas separadas Belzile et. al., (1996), emplea HCl mientras que Almendros y Hernández (2009) usa H2PO4. Para el proceso de purificación de los AH, en el primer método se usa HCl-HF, mientras que para el segundo método emplea NaOH. Sin embargo ambos métodos asegura obtener las fracciones purificadas, es decir, sin las sales que llegan a unirse a las moléculas de las sustancias húmicas cuando estas son empleadas 32 para las extracciones, por lo que pasan a ser dializadas. En el primero método son los AF y en el segundo son los AH quienes son purificados. 1.11. Importancia de las sustancias húmicas Las SH son importantes en la geoquímica porque forman compuestos solubles e insolubles con metales, minerales y otros compuestos orgánicos e influyen en su movilización así como en su concentración (Schnitzer, 1989; Stevenson, 1994; Hammock et. al., 2003; Franke et. al., 2004; Warwick et. al., 2005). Asimismo reducen los daños fisiológicos en organismos acuáticos ocasionados por metales tóxicos (Cd, Fe, Hg, Cu, por mencionar los más citados). También reaccionan con el arsénico en aguas naturales, y con el cloro durante el tratamiento de aguas, produciendo productos carcinogénicos (Aiken et. al., 1986; Warwick et. al., 2005). Desde hace un tiempo se ha ido evaluando la asimilación de iones metales a diferentes concentraciones de AH, en organismos acuáticos. Hammock et. al., (2003), estudian la asimilación de iones de Hg, Zn y Cd en diferentes concentraciones de AH en huevos de salmón (Onchrhynchus tohawytscha). Encontraron que a concentraciones de 0.001 g/L de AH reducen un 44% de la asimilación de Hg así como en Cd y Zn. Mientras que Kamude y MacPhail (2011) reportan que los AH reducen significativamente la acumulación de Cd en la trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss). Los AH son importantes en la agricultura, por su influencia en el crecimiento de las plantas y en el desarrollo de raíces secundarias o laterales, reflejando que actúa como antioxidante y promueve la actividad de las auxinas (Calderín et. al., 2014; Couto et. al., 2011). En un estudio por Canellas et. al., (2012), correlacionaron la emergencia de raíces con el material húmico a través de un análisis de PLS (partial least squares regression). Se cree que los materiales húmicos contienen fitohormonas que estimulan la ramificación y crecimiento de raíces, así como su área superficial. Estas mismas sustancias también reducen la fitotoxicidad por Hg en hortalizas (Cozzolino et.al., 2016). 33 2. ANTECEDENTES La zona chinampera tiene suelos fértiles debido a la integración de la materia orgánica proveniente de diversas fuentes como por ejemplo, aguasnegras, lixiviados de composta, biomasa vegetal, que entra todos los días (González y Torres, 2014). Esta zona se encuentra contaminada por las aguas residuales domésticas que alimentan a los lagos y canales, así como el empleo de fertilizantes, insecticidas y el avance urbano (Stephan-Otto y Zlotnik, 2001). En el Parque Ecológico de Xochimilco (PEX) se han venido realizando conferencias sobre el agroecosistema, además existen diversos trabajos de investigación sobre el aspecto social, urbano, histórico, ganadero y ecológico en la zona chinampera de Xochimilco. Algunos de los artículos que es interesante destacar para este trabajo son; “Evolución de las Fracciones Húmicas de los Suelos de Chinampas por Reyes y García (2004), y “Suelos Artificiales en la Ciudad de México” por Ramos et. al., (2011). En Reyes y García (2004) evalúan la distribución del carbono y el contenido de las fracciones húmicas en diferentes horizontes. Resaltan diferencias significativas en el contenido de carbono a causa del manejo antropogénico. Además de que el pH y la humedad así como el nivel freático, no influyen en la evolución del humus pero sí influye en el contenido de metales, y la materia orgánica incrementa conforme a la profundidad. Por otra parte en Ramos et. al., (2011) caracterizan la morfología y las propiedades de los suelos. Determinan que existe un incremento de materia orgánica conforme a la profundidad. Aunque, son ligeras las diferencias en contenido de materia orgánica entre horizontes. Por otra parte, los suelos están influenciados de materiales piroclásticos así como por la actividad agrícola. Otro estudio que resulta interesante para este trabajo es el de Anuradha et. al., (2004). Debido a que compararon tres sedimentos provenientes de sitios ecológicamente diferentes; un manglar, un estuario con influencia antropogénica y la boca de un estuario. Los datos obtenidos en este estudio, muestran que el 34 manglar, cuyo aporte de materia orgánica es proporcionado por la flora y fauna (p.e. aves migratorias y mangle), tiene un mayor contenido de ácidos húmicos seguido por el estuario (entrada de M.O. dada por la descarga de aguas residuales) y la boca del estuario. Estos estudios demuestran que a pesar de que el contenido de carbono orgánico pueda ser el mismo, la composición de la M.O. es muy diferente, y esto implica una dinámica ambiental muy distinta. Además de que los compuestos químicos orgánicos provenientes de diversos organismos a comparación de los compuestos provenientes de aguas residuales, son determinantes para su concentración en suelos/sedimentos, pero también pueden llegar a ser muy influyentes. 2.1. Justificación La zona chinampera es considerada como reserva ecológica que da abasto a las aves migratorias y no migratorias, así como alojamiento a organismos endémicos acuáticos y plantas. Llega a ofrecer recursos para la subsistencia de los seres humanos a través de la agricultura y el turismo. La cantidad y composición de la materia orgánica húmica influye en el crecimiento y desarrollo de organismos terrestres al igual que los acuáticos. Cabe agregar que se encuentra involucrada en algunos ciclos bioquímicos como el del carbono, nitrógeno y fósforo. Incluso se considerada reservorio de carbono para el ecosistema. El contenido y la calidad le confieren la fertilidad a la zona chinampera. Mientras que la presencia de las sustancias húmicas (componentes de la materia orgánica), influye en el crecimiento y desarrollo de la vegetación (especialmente en los cultivos), en la disponibilidad y asimilación de metales pesados en los organismos acuáticos. Las sustancias húmicas, son polímeros considerados como reserva de nutrientes para las plantas, son una parte importante de la materia orgánica y por 35 eso su estudio ha consistido en la identificación de grupos funcionales, en la cantidad y concentración en suelos y/o sedimentos lacustres, así como en obtener distintas fracciones. Las distintas fracciones que se han logrado identificar han sido ácidos húmicos, ácidos fúlvicos y huminas. Sin embargo, otros autores mencionan más grupos derivados de los ácidos húmicos o transiciones entre estos grupos principales. Aunque, el obtener diferentes fracciones y su estudio particular, permite entender las diversas funciones de las sustancias húmicas en el ecosistema. 36 3. OBJETIVOS Cuantificar la materia orgánica en los sedimentos en la zona Chinampera de Xochimilco, y determinar la presencia de las diferentes sustancias húmicas. Objetivos particulares Cuantificar el porcentaje de carbono y nitrógeno orgánico total de los sedimentos de los canales de la zona chinampera de Xochimilco y calcular la relación C/N. Aplicar un método con resinas para cuantificar las sustancias húmicas y su carbono, de la materia orgánica de los sedimentos en cuatro sitios, que reciben aportes de materia orgánica de diferentes fuentes. Identificar las diferencias en composición de la materia orgánica de acuerdo a las influencias antrópicas de los sitios de muestreo. Discutir el grado de transformación que presenta la materia orgánica que se incorporó al sistema, con base en las sustancias húmicas presentes. 37 4. HIPÓTESIS Se espera obtener altas concentraciones de carbono, debido a la entrada de hidratos de carbono, aminas, pigmentos derivados de la composición celular de las plantas y microorganismos, que se encuentran en el área de estudio así como en los cultivos. También, por los compuestos cíclicos provenientes de la materia fecal que se usa en las compostas, más los compuestos que se encuentren en las aguas que entran por las descargas de las plantas de tratamiento. Mientras que las concentraciones de nitrógeno se verán afectadas por la captación de la tasa metabólica de los microorganismos que componen la biota del suelo y sedimentos. Sin embargo, se espera que sea alto a consecuencia de la entrada de compuestos nitrogenados como las aminas, proveniente de las células de los organismos del ecosistema (en especial de las plantas). A su vez las concentraciones de ambos elementos, indicaran que existe una poca transformación de materia orgánica, debido a la entrada diaria de los compuestos orgánicos que son de estructura molecular compleja provenientes del arrastre de suelo y composta, las aguas residuales, las deyecciones de los organismos acuáticos, de aves y terrestres, sobre todo de la flora del sitio. Para la obtención de las sustancias húmicas, se espera que el método Batch de Van Zoomeran y Comands (2007) permita obtener cantidades representativas de los ácidos húmicos y ácidos fúlvicos así como de otras fracciones que conforman las sustancias húmicas. Las concentraciones de las distintas fracciones húmicas y su carbono, se espera que ayude a identificar el o los aportes principales de la materia orgánica a los sedimentos lacustres así como las diferencias que implica que la fuente de la materia orgánica sea de impacto urbano o agrícola. 38 El tipo de impacto agrícola tendrá una mayor cantidad materia orgánica húmica a comparación del impacto urbano, pues las células vegetales contienen compuestos moleculares de difícil degradación por la microbiota (p.e. la lignina). Mientas que los compuestos que pueden ingresar por el impacto urbano, al no ser tan complejos, su degradación será rápida, por lo tanto, no habrá tanta materia húmicas. Uno de los grupos químicos que la conforman la materia fecal es el indol. 39 5. ÁREA DE ESTUDIO La delegación Xochimilco se ubica al sur de la Ciudad de México, tiene una extensión de 88°09’04’’-87°99’00’’ al oeste y 19°17’35’’-19°08’57’’al norte. Limita con la delegación Coyoacán, Iztapalapa, Milpa Alta, Tláhuac y Tlalpan. El clima que presenta de acuerdo al sistema de clasificación de Köppen modificado por García (1989) es templado sub-húmedo con lluvias en verano, temperatura media del mes más frío oscila entre los -3 a 18°C (García, 2004). Las chinampas que datan de hace 4 mil años, son consideradas como agroecosistemas desarrollados en un ecosistema lacustre de la cuenca del Valle de México (Sptephan-Otto, 2001, 2005). En el gobierno de Acantonalli, los xochimilcas (una tribu nahuatlaca), construyeron estás chinampas con capas subsecuentes de tierra apisonada y con troncos de Salix bonplandia (ahuejote) que delimitaban el área de la parcela. Estas parcelas eran empleadas para cultivos de hortaliza y ornamento (por ejemplo; legumbre, cempalxochitl, albahacas, lirios y malvas aromáticas) (Garzón, 2002; Acevedo, 2007; Chávez, 2013). Se reporta que tuvieron un apogeo en el año 1327 a 1400 d.C., pues podían alimentar a 150,000 ó 200, 000 personas (Stephan-Otto, 1998). Los canales eran alimentados por los 14 manantiales que se encontraban en la zona así como por el río Ameca (Garzón, 2002; Chávez, 2013). Actualmente se sigue cultivando plantas ornamentales y de hortaliza (como por ejemplo; jitomate, cempaxúchitl, noche buena, coliflor, maíz, por mencionar algunos) (Chávez, 2013). A principios del siglo XX se construyeron redes hidráulicas para llevar el agua de los manantiales de Xochimilco a la Ciudad de México. Para fines de 1950 los canales estaban desecándose y en 1959 fueron suministrados con aguas provenientes de plantas de tratamiento del Cerro de la Estrella, San Luis Tlaxialtemalco y San Lorenzo Tezonco, de nivel terciario (Garzón, 2002; Aréchiga, 2004; González, 2014). 40 Según el sistema RAMSAR 1363, el Sistema Lacustre Ejidos de Xochimilco y San Gregorio Atlapulco cubre una superficie de 2,657 ha (SEMANART, 2015). Para este trabajo se tomaron 45 muestras de sedimentos en toda la zona chinampera de Xochimilco como se muestra en la Tabla 3 y en la Figura 3. Tabla 8. Sitios muestreados de la zona chinampera de Xochimilco Numeración Sitio Geoposicionamiento X Y 1 La Santisima 490108 2130112 2 San Diego 489586 2130157 3 Trancatitla 489883 2131675 4 Continuación Tancatitla 489731 2131054 5 Laguna Tlilac 490086 2132356 6 Otenco 489914 2131488 7 Canal de la Virgen 490474 2131234 8 Paralelo a Apatlaco 490685 2130531 9 Cienega 491879 2131322 12 Cienega (cubierta de lirio) 492021 2131172 13 Atizapa (cruce de canales) 489858 2132074 14 Bordo 490362 2132371 15 Ampampilco 490376 2131015 16 Laguna de la Virgen 490778 2131663 17 La Draga 489012 2130908 18 Pizacoxpa 491213 2129830 19 Perpendicular a San Pedro 490201 2130664 20 Perpendicular a Coctetexpan 489789 2130816 21 Puente de Urrutia 492034 2129699 22 Amoloya 490479 2131953 23 Tuchán 490059 2130716 24 Otenco 489685 2131323 25 Laguna Texhuilo 490774 2131874 26 Cuemanco 489246 2131557 27 Almoloya 490336 2131608 28 Paralelo al Bordo 489393 2132431 29 Paso del Águila 490882 2130951 30 Cienega (vacas) 492026 2131678 31 Ayeca 489581 2120968 41 32 Comunidad 490711 2131725 33 Laguna Asunción 489350 2130647 34 Continuación Trancatitla 489800 2131283 35 Acoxcoma (CIBAC) paralelo al sitio 1 489387 2131912 36 Tlicuili Sur 491326 2131460 37 Tlicuili Norte 491606 2131969 38 Entrada Cienega San Gregorio 491670 2129923 39 Apatlaco 1 490804 2129991 40 Entrada canal Pixocoxpa 490355 2129975 41 Cerca Los Galicia 491069 2130331 42 Comunidad 490401 2131906 45 Camino Asunción 489603 2130778 Figura 3. Mapa de localización de los sitios en los que se tomaron muestras de sedimento en los canales de la zona chinampera de Xochimilco. 42 6. MÉTODO 6.1. Muestreo Las 45 muestras de sedimento lacustre fueron colectadas usando una draga Pona Petite, que se tomaron en el centro del canal y de la parte superficial del sedimento lacustre. Cada muestra se almacenó en frascos de vidrio previamente etiquetados y lavados de capacidad de un litro. Se almacenaron con elementos refrigerantes hasta su traslado a la Unidad de Análisis Ambiental, Facultad de Ciencias. Después las muestras se mantuvieron a 4°C hasta su manejo. 6.2. Cuantificación de carbono y nitrógeno orgánico total de los sedimentos Se aplicó una prueba cualitativa de contenidos de carbonato (Anexo 1) a los sedimentos; para saber si se estaba evaluando carbono orgánico. Posteriormente fueron liofilizadas y llevadas al Departamento de Edafología, Instituto de Geografía, UNAM. A las muestras se les determinó el porcentaje de carbono y de nitrógeno en un analizador elemental CNHS/O Perkin Elmer 2400 series II, por duplicado en el modo CHN bajo las siguientes condiciones analíticas: Temperatura de combustión 980°C Temperatura de reducción 640°C Detector: Conductividad térmica Compuesto de calibración: Acetanilida Material de referencia: LECO soil calibration simple for CNS part 502-309. A partir de los datos de carbono y nitrógeno del sedimento lacustre, se escogieron cuatro sitios específicos para estudiar la composición de la materia orgánica, para tratar de elucidar de cuál podría ser su principal fuente de la materia orgánica al sedimento y así poder hacer un análisis detallado sobre la composición y transformación de la misma. Se seleccionaron cuatro muestras de sedimento lacustre, para extraer las sustancias húmicas. Los sitios Ampampilco y Apatlaco fueron considerados como 43 de impacto agrícola, mientas que el sitio La Draga y Lagunas Asunción como de impacto urbano. El tipo de impacto fue de acuerdo a lo observado en campo 6.3. Cuantificación de sustancias húmicas Para la cuantificación de las SH fue necesario obtener el porcentaje de humedad de los sedimentos y limpiar previamente la resina DAX-8 antes de comenzar la extracción de las sustancias húmicas. Con base a la clasificación de las sustancias húmicas de acuerdo a su solubilidad; se empleó diversas disoluciones alcalinas y ácidas a diferentes concentraciones. Los pasos se describen en los siguientes sub-apartados. En la Figura 4, se muestra de manera general el procedimiento en este trabajo. Figura 4. Pasos generales para la cuantificación de las sustancias húmicas. 1-Cuantificación del porcentaje de humedad en la muestra Trabajo de Laboratorio 2-Limpieza de la resina DAX-8. Previo a la extracción de las SH en las muestras. 3-Extracción de las sustancias húmicas. A través de las mediciones de volumen de los extractos y disoluciones empleados, se cuantifica cada fracción de las sustancias húmicas usando las ecuaciones presentadas en el anexo 2. 4. Lectura del carbono en las diferentes fracciones de las sustancias húmicas obtenidas a través del equipo TOC Analyzer Apollo 9000. 44 6.3.1. Porcentaje de humedad El porcentaje de humedad es requerido para cuantificar las diferentes fracciones de las sustancias húmicas. Para ello se pesó 5 gr de sedimento húmedo y se secó en la estufa durante 24 horas. Al siguiente día se dejó a que alcanzará su temperatura ambiente, para volver a ser pesado. Con los datos de los pesos registrados, se sustituyeron en la siguiente ecuación: 6.3.2. Limpieza de la resina DAX-8 La resina es limpiada para las impurezas orgánicas que puedan contaminar la muestra, para esto se siguió el método de Van Zomeran y Comands (2007). De la resina DAX-8 se pesó 100 g, a la cual se le hizo una serie de extracciones con distintas disoluciones a concentraciones mínimas. En un frasco de policarbonato se le agregó la resina y el HCl a 0.1 M. Se mantuvo en agitación durante 24 horas, pasado este tiempo se decantó y se recuperó la resina; esto se repitió cinco veces. Despuésde estas extracciones con ácido, a la resina se le agregó NaOH a 0.1 M y se mantuvo en agitación durante 24 horas, pasado este tiempo se decantó y se repitió cinco veces el procedimiento. En seguida se montó el equipo Soxhlet (Figura 5) y se elaboró un cartucho con papel filtro de celulosa, donde se colocó la resina. En el matraz se le agregó 500 ml de acetonitrilo y durante 24 horas se dejó funcionando. Luego se cambió el solvente, agregando al matraz 500 ml de metanol y otra vez se dejó durante 24 horas. Al término de la extracción con el Soxhlet, la resina fue lavada, para esto se colocó en un embudo Büchner unido a un kitasato y a una bomba de vacío. En este paso se utilizó un filtro 42 Whatman. Los siguientes pasos fueron los siguientes: primero se le vertió 1 L de agua desionizada, luego 1 L de HCl a 0.1 M y por último 1 L de agua desionizada. Después la resina se almacenó hasta su uso en un frasco de polipropileno con agua desionizada a temperatura ambiente. 45 6.3.3. Extracción de las fracciones de las sustancias húmicas Antes de leer este sub-apartado, se notará que se citan los volúmenes sin una secuencia lógica, esto es porque al momento de hacer los cálculos fue más práctico seguir las ecuaciones de acuerdo al orden que tienen el método de Van Zomeran y Comands (2007). Fue muy importante cuantificar la cantidad de las disoluciones usadas, así como la recuperación de las distintas fracciones húmicas. Con los volúmenes obtenidos (tanto de extractos como de disoluciones), se sustituyeron en las ecuaciones que se presentan en el anexo 3 y en la Figura 6, se presenta el diagrama con el método para separar las distintas fracciones de las sustancias húmicas. Se pesó 20 g de sedimento húmedo en un vaso de precipitados de 200 ml. Simultáneamente se le fue agregando gota a gota HCl a 1 M y registrando el pH hasta obtener una disolución de pH 1. Posteriormente se transfirió a un frasco de polipropileno (previamente marcado a un volumen de 200 mL), y se le agregó HCl a 0.1 M, cuanto baste para 200 mL. El volumen agregado de HCl de ambas concentraciones se registró como volumen 6. Después se colocó en agitación por 1 hora y se centrifugó a 5000 rpm por 15 minutos. Posteriormente se recuperó el precipitado y el sobrenadante. El Figura 5. Equipo Soxhlet. 46 sobrenadante es la parte que corresponde a los ácidos fúlvicos, fracción hidrofílica y la materia orgánica hidrofóbica neutra (FAHYHON1, por sus siglas en inglés). Este se almacenó a 4°C para su posterior procesamiento y se registró su volumen obtenido como V7. Por otra parte, al precipitado se le agregó NaOH a 1 M hasta alcanzar un pH de 7 y se transfirió a un frasco de polipropileno (previamente marcado a un volumen de 200 mL), después se le agrego NaOH a 0.1 M, cuanto baste para 200 mL. La alcalinización se ejecutó bajo una atmosfera de nitrógeno para evitar la auto-oxidación; al final se obtuvo un pH ≥ 12 y se dejó en agitación por 12 horas. Transcurrido este tiempo se centrifugó a 5000 rpm por 15 minutos. El precipitado fue desechado (huminas insolubles en disoluciones alcalinas), mientras que el sobrenadante se midió y se registró como V1, el cual corresponde a los ácidos húmicos disueltos con el NaOH. Después fue acidificado (pH 1) con HCl a 6 M y la cantidad agregada se registró como V2, luego se dejó durante 12 horas en reposo para precipitar los ácidos húmicos. Pasadas las 12 horas se centrifugó a 5000 rpm por 15 minutos. El sobrenadante fue medido y registrado como V8. La fracción sobrenadante corresponde a los ácidos fúlvicos, fracción hidrofílica, y materia orgánica hidrofóbica neutra (FAHYHON2). El FAHYHON2 se almacenó a 4°C hasta ser procesado. Mientras que los ácidos húmicos se disolvieron con KOH a 0.1 M, la cantidad agregada de esta disolución se registró como V5. Una vez disuelto se almacenó a 4°C hasta ser leído por el equipo TOC Analyzer Apollo 9000. Los sobrenadantes que corresponden a FAHYHON 1 y 2 (volúmenes 7 y 8) se filtraron a través de una membrana de 0.45 µm con la ayuda de una bomba de vacío. Posteriormente se tomó una alícuota de 50 ml, al cual se le agregó 8 gr de resina DAX-8. Luego se dejó agitando por una hora y después se decantó. La solución obtenida se recuperó y se almacenó hasta su lectura en el equipo TOC 47 Analyzer Apollo 9000. Esta fracción recuperada corresponde a la fracción hidrofílica (Hy 1 y 2 respectivamente). Finalmente los ácidos fúlvicos fueron desorbidos de la resina al ponerlos en agitación con 20 mL de KOH a 0.1 M por una hora. Luego se esperó por 5 min a que la resina se asentara para luego decantar. La obtención de los AF fue secuencial (i=4). El sobrenadante recuperado se almacenó hasta su lectura en el equipo TOC Analyzer Apollo 9000. 6.4. Cuantificación del carbono orgánico de las fracciones húmicas Para la cuantificación del carbono en las distintas fracciones de las sustancias húmicas, se usó el equipo TOC Analyzer Apollo 9000. A diferencia de la cuantificación de carbono anterior realizado en el Instituto de Geografía, aquí la cuantificación fue líquida. Para la cuantificación se elaboró una curva patrón de 0 a 50 ppm usando agua desionizada y biftalato de potasio (HOCOC6H4COOK), a diferentes concentraciones. Se tomó 40 mL de cada fracción húmica obtenida para medirlo en viales de capacidad de 50 mL. Cada muestra fue leída por duplicado además de que se trabajó cada sitio con un duplicado de muestra. Durante la lectura del carbono, se fue intercalando viales de la curva patrón. También se registró el carbono orgánico de la resina para saber si contribuye su carbono con la lectura de carbono de los AF. Además de que el valor de carbono de la resina es usado como blanco en las ecuaciones descritas en el anexo 2, para la cuantificación de las sustancias húmicas. 6.5. Análisis estadístico. Con los datos del carbono, nitrógeno, se hizo un análisis multivariado cluster con el programa de Stadistica (Versión 10, Statsoft) y a partir de estos resultados, se seleccionaron cuatro sitios para el análisis de sustancias húmicas. Se aplicó una 48 prueba de F para varianza desconocidas, y con base al resultado se aplicó una prueba de t student o t student prima (Anexo 3, seguimiento de selección de estadístico), además de realizarse una prueba de múltiple de comparación Šidak’s o corrección de Šidak. El análisis estadístico y las gráficas se realizaron en los programas de Microsoft Office Excel 2007 y en GraphPad Prism 6. 49 Figura 6. Proceso de extracción de las sustancias húmicas. 20 g de sedimento húmedo pH 1 (V6) Centrifugar (FAHYHON1, V7) Disolver el precipitado con NaOH 0.1 M Centrifugar y medir el sobrenadante (V1) Filtrar Agregar HCl 6.0 M (V2) hasta un pH 6 Centrifugar AH disolver con KOH 0.1 M (V5) TOC AH TOC FAHYHON 1 Tomar 50 mL (V4) Agitar y Decantar Agregar KOH 0.1 M (V9) a los solutos TOC AF1 (i=4) TOC HY1 Decantar y rescatar el sobrenadante (FAHYHON2) repetir los pasos del FAHYHON 1. V7 y V9 cambian a V8 y V10 respectivamente 50 7. RESULTADOS 7.1. Porcentaje de carbono, nitrógeno y relación C/N de los sedimentos Los datos de carbono, nitrógeno orgánico así como la relación C/N de los sedimentos analizados se presentan en la Tabla 9. Como se puede observar los valores de carbono orgánico son más altos que los del nitrógeno y el promedio de la relación C/N es de 12.294±1.69 para todas las muestras de la zona chinampera de Xochimilco. En la misma tabla se exponen de mayor a menor los valores de relación C/N, sin embargo, no refleja los valores demayor a menor de carbono y de nitrógeno. Por lo tanto, aquellos sitios que tuvieron un mayor porcentaje de carbono orgánico total fueron La Cienega (cubierta de lirio) con 17.316 %, considerada de impacto agrícola, El Bordo con 17.309%, es una zona de pastos (visto en campo), diversidad fitoplanctónica, el agua que suministra a este canal proviene de plantas de tratamiento así como de drenajes clandestinos (López, et. al., 2015), y es paso de lanchas así como de trajineras, Comunidad con 16.624% y Almoloya con 16.615%, una zona con parcelas y pastizales, además de Laguna Asunción con 15.828%, con edificaciones de casas. Mientras que aquellos sitios con bajo carbono orgánico total fueron; San Diego con 5.958%, este sitio es característico de impacto urbano por las edificaciones, entrada Cienega San Gregorio con 9.982%, sitio en donde hay presencia de invernaderos así como casas, Puente de Urrutia con 9.895%, con presencia de invernaderos y paso de trajineras. En tanto que aquellos sitios con alto contenido de nitrógeno orgánico total fueron; Comunidad con 1.585%, Laguna Asunción con 1.526%, Cienega (cubierta de lirio) con 1.457% y El Bordo con 1.339%. Así mismo cabe mencionar aquellos sitios con bajo contenido de nitrógeno orgánico total; San Diego con 0.528%, La Draga con 0.682%, el cual se encuentra la descarga de aguas de tratamiento del 51 Cerro de la Estrella, y Tlicuili con 0.789%, considerada como sitio de impacto agrícola. Tabla 9. Porcentaje de carbono y nitrógeno orgánicos totales y la relación C/N de los sedimentos de los canales de la zona chinampera de Xochimilco. Sitito % C total % N total C/N Impacto La Draga 10.731 0.682 15.733 Urbano Acoxcoma (CIBAC) 12.009 0.822 14.605 Agrícola Cerca Los Galicia 12.659 0.907 13.964 Agrícola La Santisima 13.407 0.981 13.657 Urbano Tlicuili Sur 12.110 0.888 13.647 Agrícola Cienega 10.843 0.823 13.261 Agrícola Tlicuili Norte 10.454 0.789 13.255 Agrícola Perpendicular a San Pedro 15.072 1.139 13.230 Urbano Amoloya 14.067 1.065 13.203 Agrícola Cienega (vacas) 15.626 1.193 13.105 Agrícola Perpendicular a Coctetexpan 14.942 1.151 12.980 Agrícola Otenco 11.533 0.892 12.937 Agrícola Bordo 17.309 1.339 12.924 Urbano Tuchán 15.129 1.180 12.820 Agrícola Entrada canal Pixocoxpa 12.148 0.950 12.795 Urbano Almoloya 16.615 1.311 12.670 Agrícola Laguna Texhuilo 13.342 1.063 12.579 Agrícola Paso del Águila 14.223 1.140 12.475 Agrícola Trancatitla 12.579 1.012 12.426 Agrícola Paralelo a Apatlaco 12.167 0.980 12.420 Agrícola Pizacoxpa 11.129 0.903 12.346 Agrícola Puente de Urrutia 9.895 0.808 12.258 Agrícola Canal de la Virgen 12.757 1.044 12.216 Agrícola Entrada Cienega San Gregorio 9.982 0.827 12.078 Agrícola Laguna de la Virgen 14.747 1.228 12.016 Agrícola Comunidad 14.365 1.201 11.963 Agrícola Ampampilco 13.478 1.133 11.893 Agrícola Cienega (cubierta de lirio) 17.316 1.457 11.893 Agrícola Otenco 12.780 1.097 11.652 Agrícola Continuación Tancatitla 13.798 1.213 11.380 Agrícola San Diego 5.958 0.528 11.292 Urbano Ayeca 14.013 1.249 11.223 Agrícola Apatlaco 1 10.383 0.943 11.021 Agrícola Laguna Tlilac 14.439 1.316 10.970 Urbano Atizapa (cruce de canales) 13.385 1.221 10.968 Agrícola Camino Asunción 14.343 1.316 10.899 Urbano Paralelo al Bordo 13.527 1.271 10.643 Agrícola Cuemanco 13.378 1.260 10.622 Urbano Comunidad 16.624 1.585 10.490 Agrícola Laguna Asunción 15.828 1.526 10.375 Urbano 52 Con base a estos resultados del porcentaje carbono y nitrógeno orgánico total, se hizo un análisis multivariado de Cluster, en el cual se aprecia seis grupos (Figura 7), cada grupo engloba aquellos sitos que presentan concentraciones similares de carbono orgánico así como de nitrógeno orgánico total. Figura 7. Diagrama de árbol del análisis multivariado de Cluster que agrupa a las muestras de acuerdo a su contenido de Corg. Los sitios con alto contenido de C y de N, se ubican principalmente al norte de la zona chinampera (Figura 8), estos en su mayoría presentan impacto agrícola. En cuanto a los sitios con contenido medio de carbono y medio de Contenido medio de C y medio bajo de N Contenido medio alto de C y medio de N Contenido medio de C y de N Contenido alto de C y de N Contenido bajo de C y de N Contenido medio bajo de C y bajo de N 53 nitrógeno se centran hacia el sur. Mientras que los sitios con contenido medio bajo de carbono y de nitrógeno, se puede ver que se ubican al sur-oeste de la zona chinampera, además de encontrarse cerca de los asentamientos urbanos y construcciones. Figura 8. Mapa de la zona chinampera de Xochimilco. Se señala con rojo, aquellos sitios que presentan alto contenido de carbono y de nitrógeno, con naranja aquellos que presentan contenido medio alto de carbono y medio de nitrógeno, de color amarillo se registra contenido medio de carbono y nitrógeno, los sitos con color verde son aquellos que contienen medio de C y medio bajo de N, con azul aquellos sitios con contenido medio bajo de C y bajo de N, y finalmente azul fuerte aquellos sitios con contenido bajo de C y N. 7.2. Cuantificación de carbono de las diferentes fracciones de las sustancias húmicas En la Tabla 10 se presenta la concentración del carbono contenido en las distintas fracciones húmicas, para los cuatro sitios de muestreo seleccionados. Los cuales son los siguientes: 1 En los canales de Apatlalco y Ampampilco, las chinampas son usadas para el cultivo de diversas angiospermas y gimnospermas. Además en 54 los sistemas de cultivo se emplean fertilizantes orgánicos e inorgánicos. Como fertilizante orgánico se usa el abono, que suele estar hecho de estiércol de bovinos. También se hace uso de insecticidas y fertilizantes químicos. La contribución de carbono al sistema puede atribuirse principalmente a la biomasa de las plantas, así como a los lixiviados de la composta. 2 En el canal La Draga se encuentra la descarga de la planta de tratamiento del Cerro de la Estrella (aguas semi-tratadas), que seguramente es la gran fuente de carbono. 3 Mientras que en el canal Laguna Asunción, hay edificaciones de casas, incluso se observó un castillo de estilo gótico y sobrepoblación de lirio (Eichornia crassipes). La biomasa vegetal de esta planta acuática, se considera como la fuente principal de carbono más la descarga de aguas residuales domésticas sin tratar. Dentro de las cuatro diferentes fracciones húmicas obtenidas, los ácidos húmicos llegan a contener el mayor porcentaje de carbono, a comparación de las demás fracciones. Sin embargo, a simple vista los resultados no reflejan las diferencias entre el impacto urbano y agrícola. Para una mejor interpretación de los resultados, se aplicó una prueba de F y t de student para saber que tanto difieren en concentración de carbono orgánico, entre los sitios de impacto urbano e impacto agrícola (Anexo 4). Con base en los resultados, no existe diferencia significativa entre ellos. Por lo tanto, se basa en el promedio del contenido de carbono para comparar los resultados con otros estudios sobre la degradación del suelo. 55 Tabla 10. Contenido de ácidos húmicos (AH), ácidos fúlvicos (AF), fracción hidrofilica (Hy) y materia orgánica hidrofobica natural (HON) en los cuatro sitios de muestreo. Sitio AH g C kg AF g C Kg HY g C Kg HON g C Kg Suma g C Kg Ampampilco 5.791 1.218 0.089 1.149 8.247 Ampampilco replica 5.824 1.124 0.079 1.052 8.078 Apatlaco 4.957 1.312 0.079 1.238 7.586 Apatlaco replica 4.443 1.242 0.080 1.172 6.936 Draga 4.390 1.226 1.026 1.964 8.605 Draga replica 5.619 1.258 0.849 1.809 9.534 Laguna Asunción 4.466 1.143 0.074 1.065 6.749 Laguna Asunción replica 5.273 1.433 0.079 1.371 8.156 Promedio 5.095 1.246 0.294 1.352 7.986 7.3. Cuantificaciónde las substancias húmicas La cuantificación de las fracciones de las SH para el impacto agrícola y urbano se obtuvo con las ecuaciones descritas en el Anexo 2. Los resultados obtenidos se muestran en la Tabla 11 y 12 respectivamente. Se aplicó una comparación múltiple Šidak (Anexo 4), para saber si existe diferencias significativas entre el contenido de las fracciones húmicas en los sedimentos de los sitos de muestreo con impacto agrícola y urbano. En el impacto agrícola, el contenido de los ácidos húmicos tiene una mayor contribución de las sustancias húmicas, seguido de los ácidos fúlvicos. Mientras que para la fracción hidrofilica y la materia orgánica neutra, se reporta valores muy bajos. Sin embargo, las fracciones AF, Hy, y HON no difieren entre ellas de manera significativa (p>0.9999). En tanto que los AH no existe diferencia significativa con la suma de las fracciones húmicas. 56 Tabla 11. Concentración de las fracciones de las sustancias húmicas en los sitios que presentan impacto agrícola. Sitio Sustancias Húmicas AH AF HY HON SUMA (g/kg p.s.) (g/kg p.s.) (g/kg p.s.) (g/kg p.s.) (g/kg p.s.) Apatlaco 47.729 6.558 0.362 0.785 55.433 Apatlaco replica 42.624 6.211 0.353 0.769 49.956 Ampampilco 67.023 5.536 0.382 1.525 74.467 Ampampilco replica 58.664 5.107 0.327 1.361 65.460 AH= ácidos húmicos, AF= ácidos fúlvicos, HY= fracción hidrofílica, HON= materia orgánica neutra, y SUMA= es la suma de todas las fracción húmicas mencionadas. Tabla 12. Concentración de las fracciones de las sustancias húmicas en los sitios que presentan impacto urbano. Sitio Sustancias Húmicas AH AF Hy HON SUMA (g/kg p.s.) (g/kg p.s.) (g/kg p.s.) (g/kg p.s.) (g/kg p.s.) La Draga 38.545 4.715 3.542 3.862 50.663 La Draga replica 41.365 4.839 3.145 5.238 54.587 Laguna Asunción 64.434 6.857 0.542 3.257 75.068 Laguna Asunción replica 59.219 8.167 0.492 2.583 70.461 AH= ácidos húmicos, AF= ácidos fúlvicos, HY= fracción hidrofílica, HON= materia orgánica neutra, y SUMA= es la operación algebraica que arroja el total de sustancias húmicas obtenidas para cada sitio en particular. Por su parte en el impacto urbano, los ácidos húmicos de igual forma se encuentran en mayor proporción que las demás fracciones. Además de no haber diferencia significativa entre los ácidos húmicos y la suma de las fracciones húmicas (ácidos húmicos, ácidos fúlvicos, materia orgánica neutra y fracción hidrofílica). De manera semejante al impacto agrícola, las fracciones de los ácidos 57 fúlvicos, la fracción hidrofílica y la materia orgánica neutra, no parecen diferir significativamente (p>0.9999). Para la comparación múltiple Šidak, se sacó el promedio de cada fracción húmica. Con base a estos resultados, se observó que no existe diferencia significativa entre el impacto agrícola y el urbano para cada fracción húmica (Tabla 13). Tabla 13. Fracciones húmicas. Resultado de la comparación múltiple Šidak, alfa 0.05. Fracción Húmica Imp. Agrícola Imp. Urbano Diferencia Significativo Valor de p ajustado AH 54.01±10.96 50.89±12.86 3.120 No >0.9999 AF 5.85±0.65 6.14±1.67 0.291 No >0.9999 HY 0.36±0.03 1.93±1.64 1.574 No >0.9999 HON 1.11±0.39 3.73±1.13 2.625 No >0.9999 SUMA 61.33±10.86 62.69±11.89 1.366 No >0.9999 En la figura 9, se hizo una grafica en la cual pretende exponerse la diferencia que existe en contenido de los ácidos húmicos, ácidos fúlvicos, Hy, HON y TOC, dentro de los distintos impactos (agrícola y urbano). Los ácidos húmicos tanto el TOC, son las fracciones más significativas encontradas en el impacto agrícola y urbano, incluso se asemejan en su contenido para los distintos impactos. En tanto, que aquellas fracciones como los ácidos fúlvicos, no son tan representativos en la composición de la materia orgánica de los sedimentos, tampoco se logran apreciar que exista una diferencia entre el contenido AF en los sedimentos provenientes de sitios con impacto agrícola e impacto urbano. La fracción Hy no se percibe los resultados, principalmente en el impacto urbano, por la cantidad que se obtuvo. Por lo tanto no muestra que sea una fracción con alto peso en la composición de la materia orgánica de los sedimentos. 58 El HON, muestra que está implicado en la composición de la materia orgánica en los sedimentos provenientes de los sitios con impacto urbano, en tanto que, los sedimentos provenientes de impacto agrícola, la fracción HON no se aprecia como un componente de la materia orgánica de sus sedimentos, así como la fracción Hy. F r a c io n e s h ú m ic a s S it io s C on ce nt ac ió n g/ K g p. s. A g r ic o l a U r b a n a 0 2 0 4 0 6 0 8 0 H A F A H y HON TO C Figura 9 Concentración de fracciones húmicas g/Kg de cada sitio de muestreo. AH: ácidos húmicos, AF: ácidos fúlvicos, HY: fracción hidrofílica, HON: materia orgánica neutra y TOC: es la suma de todas las fracciones húmicas. 59 8. DISCUSIÓN 8.1. Porcentaje de carbono, nitrógeno y relación C/N de los sedimentos Dentro de la introducción a la materia orgánica, se había mencionado que en ella se encuentra un reservorio de carbono además de influir en este ciclo así como en el ciclo del nitrógeno. La materia orgánica puede seguir tres rutas; 1) incluirse en el humus del suelo, 2) ser totalmente mineralizada y pasar a CO2 y 3) incorporarse a la masa microbiana (Juárez et al, 2006). La relación C/N es un reflejo del proceso de humificación y de la actividad de los microorganismos del suelo, así como de la síntesis y de la acumulación de la materia orgánica y sobre todo refleja la fuente de donde provienen las sustancias húmicas. Así mismo nos indica hacia donde se dirige el carbono y el nitrógeno. El resultado de la mineralización de los restos vegetales depende, entre otros factores, de la relación C/N en el material orgánico. Cuando es alta (>30:1, como en la paja de trigo), el nitrógeno se queda en los microorganismos que descomponen el material, pero si la relación es menor de 20:1 (por ejemplo en el trébol) la liberación del nitrógeno se dará en el inicio de su descomposición (Juárez et al., 2006). Cuando la descomposición de la M.O. es completa, la relación C/N abarcan valores de 10 (Giovanela et. al., 2010). Las plantas acuáticas no vasculares tienen una relación C:N de 2 a 10 y las plantas vasculares terrestres presentan valores de 20 ó más (Giovanela et. al., 2010). Neves et. al., (2010) considera un alto índice de descomposición de la M.O. a los valores >23 y entre 10 a 20 corresponden a principios de su descomposición. Sin embargo, Froehner et. al., (2010) asocia altas concentraciones de Corg toal, nitrógeno y relación C/N orgánico a la contaminación por actividades urbanas. Además se basa en biomarcadores como coprostanol que no solo es encontrado en las heces de mamíferos, sino que además llega a ser producido por cianobacterias y protozoarios. En la misma fuente menciona que los sedimentos 60 ricos en materia orgánica contienen gran cantidad de compuestos hidrofóbicos, entre los citados están los esteroles. 8.2. Cuantificación de carbono de las diferentes fracciones de las sustancias húmicas En el estudio de Van Zommeran y Commans (2007), emplearon muestras provenientes de composta, turba y lixiviados de los desechos de basura para extraerles las distintas fracciones de las sustancias húmicas y cuantificar su carbono. El promedio del contenido de carbono de los ácidos húmicos de los sedimentos en los cuatros sitios, se asemeja al contenido de carbono de los lixiviados de desechos de basura (6.1 g C/kg p.s). Mientras que para los ácidos fúlvicos se asemejan a los datos que se obtienen de la composta (1.7 g C/kg p.s.). Para la fracción hidrofílica cuyas concentraciones son las más bajas e incluso al compararlo con los
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