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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MÉXICO FACULTAD DE MEDICINA DIVISION DE ESTUDIOS DE POSGRADO I.S.S.S.T.E. CENTRO MÉDICO NACIONAL 20 DE NOVIEMBRE SERVICIO DE REPRODUCCIÓN HUMANA TITULO DE TESIS TRANSFERENCIA DE EMBRIONES EN ETAPA DE BLASTOCISTO COMPARADO CON TRANSFERENCIA EMBRIONARIA EN DÍA 3, IMPACTO EN EL RESULTADO REPRODUCTIVO DE LAS PACIENTES DEL SERVICIO DE REPRODUCCIÓN HUMANA DEL CENTRO MÉDICO NACIONAL 20 DE NOVIEMBRE DE ENERO DE 2010 A DICIEMBRE DE 2014 TESIS PARA OBTENER EL TITULO DE ESPECIALISTA EN BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN HUMANA PRESENTA DRA. LAURA HELENA CARRILLO AGUILAR ASESOR DE TESIS DR. JESÚS DANIEL MORENO GARCÍA MÉXICO, DISTRITO FEDERAL; 2016 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 2 FIRMAS DE AUTORIZACIÓN DE TESIS ______________________________________________ DR. AURA ARGENTINA ERAZO VALLE SOLÍS SUBDIRECTORA DE ENSEÑANZA E INVESTIGACIÓN ______________________________________________ DR. JESÚS DANIEL MORENO GARCÍA PROFESOR TITULAR DEL CURSO UNIVERSITARIO DE POSGRADO DE BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN HUMANA ASESOR DE TESIS ______________________________________________ DRA. LAURA HELENA CARRILLO AGUILAR MÉDICO RESIDENTE FOLIO DEL DEPARTAMENTO DE INVESTIGACIÓN DE LA DIRECCIÓN MÉDICA: 181.2015 Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 3 AGRADECIMIENTOS A las divinidades, que me han trazado un camino guiado por el bien y la justicia; y me han enseñado a través de lecciones reales que la principal fuente de la felicidad es disfrutar el momento y solo dejar fluir. Para la mejor mujer de este mundo que es mi madre, mi guía, mi mejor amiga, mi compañera de vida, por formarme con ética y rectitud, aunque sabemos este camino no es fácil, es el correcto. Te amo mamá. Gracias a Alejandro por estar, por tolerar y por darme tanto amor: Amor gracias por darme el mejor regalo del mundo, gracias por darme a Kali. Gracias a mi familia por ser y tolerar. En especial a mi otra compañera de vida, que me ha enseñado la felicidad de los pequeños momentos, Güiniviere Carrillo eres mi adoración. Agradezco a los que ya no están físicamente a nuestro lado: abuelitos, tía “Melita”, tía Mary, sé que nuestro camino se volverá a unir (esperemos no muy pronto), sigan apoyándonos desde donde estén. Gracias a mis maestros por tener la paciencia y la disposición para transmitir sus conocimientos (inclusive los de la vida), por todos los buenos momentos que hemos pasado en estos 2 años, agradezco infinitamente la confianza que me han brindado y espero seguir aprendiendo de ustedes y contando con su amistad. Gracias Dr. Moreno, Dr., Chávez, Dr. Muraira, Dra. Peraza, Dra. Estrada y Dra. Sondón. También gracias a la jefa Natalia que siempre nos apoya y ayuda incondicionalmente. Gracias a mis amigos, por estar ahí aunque no nos veamos seguido y aunque nuestra vida se ha transformado en algo más parecido a lo adulto que cuando nos conocimos, y aun así nos damos tiempo de seguir en contacto y seguir siendo nosotros mismos (con todo el caos de vida que esto conlleva) los quiero: Mario Lucas, Berenice, Meju, Linda, Kangu, J. Lo, Gamita, Solano. También gracias a los que no son mis amigos porque a pesar de todo me han dejado grandes lecciones de vida. Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 4 INDICE Portada ………………………………………………………………………………...…..1 Firmas de autorización de tesis……………………………….…………………………2 Agradecimientos ………….………………………………………………………………3 Índice…………………………………………………………………………………….….4 Resumen...…………………………………………………………………………………5 Summary…………….……………………………………………………………………..6 Introducción.………….……………………………………………………………………7 Marco teórico ……………………………………..……………………………………….9 Objetivos.…………………………………………………………………………………13 Hipótesis.………………………………….………………………..…………………….13 Justificación.…………………………………………………………………….………..13 Material y métodos………………………………………………………………………14 Resultados ……………………………………………………………………………….18 Discusión.…………………………………………………………………………………23 Conclusiones.…………………………………………………………………………….26 Referencias.………………………………………………………………………………27 Anexos.………………………………..………………………………………………..29 Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 5 RESUMEN Objetivo: Determinar los resultados reproductivos en el Centro Médico Nacional 20 de Noviembre perteneciente al I.S.S.S.T.E, en las pacientes que se transfirieron embriones en etapa de blastocisto comparándolas con aquellas en las que se realizaron transferencias de embriones en día 3 post fertilización. Diseño: estudio descriptivo retrospectivo de tipo transversal. Se incluyeron a las pacientes en quienes se realizó transferencia embrionaria en día 3 y etapa de blastocisto en nuestro Centro de Reproducción durante el periodo comprendido de enero de 2010 a diciembre de 2014, analizando tasas de embarazo, nacidos vivos y aborto; así mismo se estudió si la transferencia en estas 2 etapas embrionarias es determinante sobre la probabilidad de embarazo y nacidos vivos, se analizó si existe algún esquema de estimulación ovárica que determine el desarrollo de embriones que progresen hasta etapa de blastocisto. Resultados: las tasas de embarazo (43% vs 36%) y nacidos vivos (29% vs 26%) fueron mayores en las pacientes en quienes se practicó la transferencia de blastocisto, se obtuvieron tasas similares de aborto en ambos grupos (31% vs 30%). Al realizar un análisis de correlación no se encontró significancia entre la etapa de transferencia embrionaria y la probabilidad de embarazo ni de nacido vivo; así como tampoco se encontró relevancia en algún esquema de estimulación que favorezca el desarrollo de embriones en etapa de blastocisto. Conclusiones: la transferencia de embriones en etapa de blastocisto conlleva una ventaja para las pacientes reflejada en las tasas de embarazo y nacidos vivos. Palabras clave: transferencia embrionaria, blastocisto, tasa de embarazo, tasa de nacidos vivos, tasa de aborto. Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 6 SUMMARY Objective: To determine reproductive outcomes in our National Medical Center 20 de Noviembre, ISSSTE belonging, in patients who embryos were obtained in blastocyst stage comparing with those in which embryo transfers were performed on day 3 post fertilization. Design: Retrospective descriptive cross-sectional study. The patients who were included was those in with the embryo transfer was perform on Day 3 and blastocyst stage in our Reproduction Center,the study was conducted during the period January 2010 to December 2014, analyzing pregnancy rates, live births rates, abortion rates, and determining whether transfer in these two embryonic stages is determinant for the probability of pregnancy and live birth, we will examine whether there is any type of ovarian stimulation that determines the development of embryos that will progress to the blastocyst stage. Results: pregnancy rates and live births were greater in patients in whom blastocyst transfer was performed 43% vs 36% and 29% vs 26% respectively; we obtained similar abortion rates in both groups (31% vs 30%). When we performing an analysis of correlation significance between the stage of embryo transfer and likelihood of pregnancy and live birth, no relevance was found; neither a stimulation scheme that favors the development of embryos in blastocyst stage. Conclusions: the transfer of embryos in blastocyst stage involves an advantage for patients, reflected in the rates of pregnancy and live birth. Key words: embryo transfer, blastocyst stage, pregnancy rate, live birth rate, abortion rate. Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 7 INTRODUCCION El éxito de un programa de reproducción asistida puede ser medido por la tasa de embarazos, y, más certeramente, por medio de la tasa de nacidos vivos. Los factores que se ven implicados en los resultados de un centro de reproducción son numerosos, principalmente se encuentra la experiencia del personal para realizar una adecuada estimulación ovárica, captura oocitaria, manejo adecuado de gametos y por último la transferencia embrionaria. La calidad oocitaria y embrionaria, puede verse afectada por estos procesos, si bien, los factores más determinantes de éstas se tratan de variantes independientes y totalmente atribuibles a cada paciente. Por lo anterior, es frecuente el arresto de embriones antes de alcanzar la etapa de blastocisto, dándose con frecuencia en la práctica clínica la transferencia en etapas anteriores, principalmente, en día 3 post fertilización con el fin de evitar la cancelación del ciclo e intentar lograr el embarazo. Existen varias tendencias en la práctica de técnicas de reproducción asistida que incluyen la congelación embrionaria y transferencia en un ciclo posterior de preparación endometrial, sin embargo en nuestro medio dada la limitación económica de nuestra población (lo cual no excluye al medio institucional), se realiza generalmente la transferencia en fresco de embriones, iniciando con soporte de fase lútea posterior a la captura oocitaria, y transfiriendo embriones de acuerdo a su evolución morfológica. Se ha propuesto que la transferencia de embriones en día 5 (blastocistos) mejora la tasa de implantación, embarazo clínico y nacidos vivos; en comparación con ciclos en que la transferencia es realizada en día 2 o 3 post fertilización, y por esta razón en muchos centros de reproducción a nivel mundial se prefiere dejar evolucionar todos los embriones hasta esta etapa con la finalidad de mejorar su resultado reproductivo, aunque esto, pueda conllevar la cancelación de ciclos de estimulación por arresto en el crecimiento embrionario. Lo anterior, ha llevado a imitar en múltiples centros de reproducción a nivel mundial, la tendencia de únicamente transferir a las pacientes cuyos embriones alcancen la etapa de blatocisto, ya que, se explica que un embrión que ha llegado a día 5 tendrá una mejor calidad, y que, por selección natural es más probable que este embrión logre un nacido vivo en casa. Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 8 Sin embargo, a pesar de que existe evidencia de lo anterior, la práctica de transferir embriones en día 2 o 3 post fertilización no ha sido abandonada, y aún sigue logrando resultados reproductivos óptimos en muchos centros. Por lo que no existe un estándar de oro en cuanto a la práctica recomendada para determinar el día de transferencia embrionaria, ya que, en muchas ocasiones, ambas prácticas no dependen de las características individuales de cada paciente sino de la tendencia seguida por cada médico y centro de reproducción en el cual ejerce. Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 9 MARCO TEORICO En cada ciclo menstrual el ovario libera un oocito; el cual será captado por las fimbrias de la tuba uterina para ser transportado mediante los cilios y el peristaltismo tubárico hacia el útero. Cuando existe la fertilización del óvulo dentro de la tuba uterina comienza un proceso de división celular hasta alcanzar un estado 8 células compactas (aproximadamente 3 días posterior a la fertilización), conocido como mórula la cual migrará, a la cavidad uterina donde continuará dividiéndose y posteriormente se cavitará, realizará una compactación celular interna y realizará una eclosión de la zona pelúcida para dar lugar, a la implantación; ésta iniciará aproximadamente en el día 5 post fertilización. 1 Existen diferentes etapas de formación del blastocisto (Fig 1): Blastocisto temprano: comienza a formarse la cavidad y empieza la diferenciación celular. Blastocisto cavitado: el blastocele ocupa más del 50% del volumen del embrión. Blastocisto expandido: se observa el blastocele rodeado por una monocapacelular o trofoectodermo, que formará la placenta, y una masa celular interna, que generará el embrión. Blastocisto eclosionado o hatching: el blastocisto comienza a salir a través de una zona pelúcida. Blastocisto eclosionado o hatched el blastocisto está completamente fuera de la zona pelúcida. Figura 1 Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 10 Además de por su estadio se clasifica de acuerdo al tipo de masa celular interna y el trofoectodermo (Fig. 2). De acuerdo a la masa celular interna se clasifica en: A: compacta, con mucha células, redonda y bien definida. B: varias células agrupadas de aspecto laxo. C: muy pocas células. D: ausente o degenerada. Por las características del trofoectodermo se clasifica en: A: completo, formado por muchas células. B: incompleto, presenta alguna zona lineal. C: formado por pocas células. D: con células degeneradas. Figura 2 Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 11 De acuerdo a lo anterior debe elegirse para la transferencia los blastos con mayor expansión, con trofoectodermo con epitelio más homogéneo y con masa celular interna cuyas células estén compactas (Fig 3). 5 Figura 3 No todas los embriones en estado de mórula progresarán a un blastocisto estructuralmente normal; y aproximadamente la mitad de los que llegan a este estadio, no se implantarán. El factor masculino es determinante en esta etapa, ya que, la expresión de ARN mensajero (ARNm) se inicia cuando el embrión tiene de 4 a 8 células lo que refleja la activación del genoma paterno, por lo que al existir alguna alteración, la adhesión celular durante la compactación y los pasos posteriores para la formación del blastocisto se verán comprometidos. 1 A pesar de lo anterior expuesto, las tasas de implantación en transferencia de blastocistos prácticamente sondel doble comparadas con la trasferencia de embriones en día 2 o 3, lo que se explica, por la eliminación de embriones que fallarán en su división y diferenciación normal por una multitud de propiedades dependientes tanto del oocito, como del espermatozoide. Por lo anterior, la tendencia en algunos países, es al aumento de transferencias en etapa de blastocisto que, además han mejorado las tasas de embarazo. 1 Esto siempre se verá determinado por la cantidad de embriones de buena calidad disponibles en día 3, ya que si se cuentan con 4 o 5 embriones de buena calidad el cultivo puede ser extendido hasta día 5, con la finalidad, de mejorar la selección embrionaria y las tasas de embarazo; cuando la paciente no cuenta con embriones suficientes de buena calidad en día 3, se debe proceder a la transferencia de embriones aún en estado de división por el riesgo de cancelación de ciclo por falta de desarrollo de blastocisto. Aproximadamente un 39.2% de los ciclos alcanzará al menos un embrión con desarrollo de blasto y de éstos aproximadamente un 51% logrará la implantación. 4 Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 12 Al comparar el éxito de la transferencia de blastocistos, contra la de transferencia de embriones en día 3, se observaron mejores resultados con significancia estadística en tasa de embarazo clínico, tasa de nacidos vivos y tasa de implantación; no se observaron diferencias en las tasas de embarazos múltiples ni en las de abortos. 4 Cuando además estos embriones en etapa de blastocisto deben ser congelados, éstos deben de tener características específicas que determinan un mejor porcentaje de éxito de implantación al ser descongelados: calidad >2.5, masa celular interna diferenciada > 70% de la superficie de la zona pelúcida debe ser rodeada de trofoectodermo con células en forma de hoz. 1 Este tipo de clasificaciones tienen como bemol la subjetividad inter observador, así como, los múltiples debates acerca de que parámetro tiene un valor pronóstico más alto para seleccionar los mejores blastocistos. Está demostrado que la velocidad del desarrollo del embrión es una variable importante a considerar para valorar calidad de los mismos, inclusive se ha observado que los embriones que comienzan su división más tempranamente tienen mejores tasas de implantación, y esto aplica, cuando el blastocisto se desarrolla en día 5 contra los que se desarrollan en día 6. 2 Se ha demostrado que cuando la paciente tiene mayor edad, la tasa de implantación disminuye 1.7% por cada año transcurrido. Otro factor determinante de la calidad embrionaria, tanto en día como en etapa de blastocisto es el número de oocitos capturados, ya que se ve una disminución de 1% por cada oocito capturado de más posterior a 10. Por lo anterior, se han recomendado terapias de mínima a moderada estimulación; que además de proveer mejor calidad embrionaria, disminuirán el síndrome de hiperestimulación ovárica. 1 Además, la tendencia de los protocolos de fertilización in vitro ha apuntado hacia la transferencia de un único embrión con la finalidad de prevenir los embarazos múltiples. 2 En cuanto a los resultados perinatales, la transferencia de embriones en fresco se ha asociado a menor riesgo de partos pretérmino, bajo peso al nacimiento y fetos pequeños para la edad gestacional, en la transferencia de blastocistos se ha observado un menor riesgo de fetos pequeños para la edad gestacional, si bien no se ha determinado una mayor prevalencia de partos pretérmino , también, se ha encontrado que los productos provenientes de transferencia de blastocistos tienen mayor tendencia a ser del sexo masculino. 3 Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 13 TRANSFERENCIA DE EMBRIONES EN ETAPA DE BLASTOCISTO COMPARADO CON TRANSFERENCIA EMBRIONARIA EN DÍA 3, IMPACTO EN EL RESULTADO REPRODUCTIVO DE LAS PACIENTES DEL SERVICIO DE REPRODUCCIÓN HUMANA DEL CENTRO MÉDICO NACIONAL 20 DE NOVIEMBRE DE ENERO DE 2010 A DICIEMBRE DE 2014 OBJETIVOS GENERAL Determinar los resultados reproductivos en nuestro Centro Médico Nacional 20 de Noviembre, en las pacientes que se transfirieron embriones en etapa de blastocisto comparándolas con aquellas en las que se realizaron transferencias de embriones en día 3 post fertilización. ESPECÍFICOS Analizar si existen características en las pacientes (niveles hormonales basales, edad), que determinen una tendencia a desarrollar embriones de mejor calidad, que puedan evolucionar hasta la etapa de blastocisto. Establecer si los diferentes esquemas de estimulación ovárica tienen relación con la calidad embrionaria y el desarrollo a blastocisto. Determinar las tasas de embarazo y nacidos vivos en pacientes con transferencia de embriones en día 3 contra las mismas tasas en pacientes con transferencia de embriones en etapa de blastocisto. Hipótesis La transferencia de embriones en etapa de blastocisto, se asociará a mayores tasas de embarazo y nacidos vivos, comparada con la transferencia de embriones en día 3 de buena calidad. Justificación Dado que la evidencia bibliográfica apunta hacia mejores resultados con la transferencia de embriones en etapa de blastocisto, se valorará si ésta ha tenido un impacto positivo en las tasas de embarazo y nacidos vivos en relación con la Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 14 transferencia de embriones de buena calidad en día 3 de desarrollo. Se determinará si la transferencia de embriones en etapa de blastocisto pudiera implementarse como procedimiento habitual, para mejorar el pronóstico reproductivo en pacientes con infertilidad. Material y métodos Diseño y tipo de estudio. Previa autorización de la realización del protocolo por los Comités de Investigación, Ética en Investigación y Bioseguridad del Centro Médico Nacional “20 de Noviembre”, se recabaran datos de las pacientes del servicio de Reproducción Humana C.M.N. 20 de noviembre a las que se les realizó ciclo de fertilización in vitro y transferencia embrionaria en el periodo comprendido entre enero 2010 y diciembre 2014. Se realizará un estudio descriptivo retrospectivo de tipo transversal. Población de estudio. Se incluirán a todas las pacientes del Servicio de Reproducción Humana del Centro Médico Nacional 20 de noviembre en quienes se realizó ciclos de fertilización y transferencia embrionaria entre el periodo comprendido de enero de 2010 a diciembre de 2014. Universo de trabajo Se incluirán a todas las pacientes que hayan logrado transferencia embrionaria posterior a un ciclo de fertilización in vitro para valorar el éxito reproductivo de acuerdo a la etapa de crecimiento de los embriones que fueron transferidos en el periodo de enero de 2010 a diciembre 2014 en el Centro Médico Nacional 20 de Noviembre. Tiempo de ejecución El tiempo de ejecución será de 6 meses para la recolección de datos de los expedientes clínicos de las pacientes atendidas por medio de fertilización in vitro y transferencia embrionaria desde enero de 2010 hasta enero diciembre de 2014. Criterios de inclusión Pacientes del servicio de Reproducción Humana de nuestro Centro Médico con infertilidad que fueron sometidas a estimulación ovárica para el programa de Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 15 fertilización in vitro y transferencia embrionaria en día 3 o día 5 (blastocisto)entre el año 2010 y el año 2014. Criterios de exclusión Pacientes que fueron sometidas a estimulación ovárica en el periodo establecido cuyos ciclos de estimulación fueron cancelados por falta de desarrollo folicular. Pacientes que fueron sometidas a estimulación ovárica sin lograr captura oocitaria. Criterios de eliminación Pacientes que fueron sometidas a estimulación ovárica para fertilización in vitro con arresto embrionario en cualquier etapa de desarrollo. Muestra Se analizaron los expedientes de los ciclos realizados para fertilización in vitro en el periodo a estudiar 2010: 154 pacientes 2011: 42 pacientes 2012: 194 pacientes 2013: 152 pacientes 2014: 118 pacientes El total de expedientes a estudiar son 660 de las cuales únicamente 176 pacientes cumplieron con los criterios de selección de muestra Descripción operacional de las variables Edad materna: edad cumplida en años al recibir el ciclo de estimulación. Blastocisto: embrión, 5 ó 6 días después de la fecundación, con masa celular interna, capa externa de trofoectodermo y cavidad o blastocele lleno de líquido. Embarazo clínico: embarazo diagnosticado por visualización ecográfica de uno o más sacos gestacionales o signos clínicos definitivos de embarazo. Esto incluye embarazo ectópico. Nota: múltiples sacos gestacionales son contados como un solo embarazo clínico. Nacimiento vivo: expulsión completa del cuerpo de su madre del producto de la fecundación, independientemente de la duración del embarazo, si después de la separación respira o muestra cualquier otra evidencia de vida, tales como latido del corazón, pulsación del cordón umbilical, movimiento definido de músculos Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 16 voluntarios, independientemente de si el cordón umbilical ha sido cortado o si la placenta está unida. Estimulación ovárica convencional: tratamiento farmacológico en el cual las mujeres son estimuladas para inducir el desarrollo de múltiples folículos ováricos para obtener múltiples ovocitos en la aspiración folicular. En nuestro centro de reproducción se considera al tratamiento farmacológico con dosis de FSHr de 225 a 300 UI a partir del segundo o tercer día del ciclo menstrual hasta el día de disparo de maduración folicular. Ciclo largo convencional: administración de agonista de GnRH en la fase lútea tardía del ciclo previo a la estimulación generalmente día 21 de ciclo menstrual y posterior administración de FSHr a dosis de 225 a 300 UI a partir del día 2 o 3 del ciclo menstrual hasta el día de disparo para maduración folicular. Ciclo de mínima estimulación: procedimiento mediante el cual los ovarios son estimulados con gonadotropinas y/o otros compuestos con la intención de limitar el número de ovocitos obtenidos para FIV a menos de siete. Mínima estimulación A: estimulación en la cual se administra 5 miligramos de letrozole del día 3 al 7 del ciclo menstrual y posterior administración de FSHr 150 UI a partir del día 8 hasta el día de disparo para maduración folicular. Mínima estimulación B: estimulación en la cual se administra 5 miligramos de letrozole del día 3 al 7 del ciclo menstrual y se agrega FSHr 150 UI a partir del día 5 del ciclo menstrual hasta el día de disparo para maduración folicular. Mínima estimulación C: estimulación en la cual se administra FSHr a dosis menores a 225 UI desde el día 3 del ciclo menstrual hasta el día de disparo para maduración folicular. Tasa de embarazo: el número de embarazos expresados por 100 ciclos iniciados, ciclos de aspiración o ciclos de transferencia de embriones. Nota: cuando se expresen las tasas de embarazo clínico, el denominador (iniciados, aspirados o transferencias) debe ser específicado. Tasa de nacimientos vivos: número de nacimientos que hayan resultado en al menos un nacido vivo expresado por 100 ciclos iniciados, ciclos de aspiración, o ciclos de transferencia de embriones. Cuando se exprese la tasa de nacidos vivos el denominador (ciclos iniciados, aspirados o de transferencias) debe especificarse. Procesamiento de datos Los datos se obtuvieron de los expedientes físicos y electrónicos de acuerdo a la relación de ciclos de estimulación llevada por el laboratorio de gametos de nuestro servicio; se recolectaron en tabla de datos electrónica en sistema Excel de Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 17 Microsoft (Anexo 1) y posteriormente se realizó un análisis de las variables en sistema Prisma 5. Se realizó un análisis electrónico de las características basales de los grupos de pacientes que fueron transferidas con embriones en día 3 de desarrollo y las que fueron transferidas en etapa de blastocisto, para valorar si existe alguna tendencia para la inclusión a uno u otro grupo. Se calculó la tasa de embarazo clínico y nacidos vivos de forma manual en ambos grupos. Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 18 Resultados Características de las pacientes Media Desviación estándar Significancia estadística Edad Blastocisto 35.59 ± 0.28 3.58 p = 0.85 Día 3 35.52 ± 0.26 3.49 Niveles de FSH Blastocisto 7.33 ± 0.26 3.33 p = 0.92 Día 3 7.29 ± 0.24 3.21 Niveles de estradiol Blastocisto 52.55 ± 2.50 31.57 p = 0.67 Día 3 51.11 ± 2.30 30.72 Oocitos capturados Blastocisto 7.24 ± 0.40 5.14 p = 0.84 Día 3 7.35 ± 0.38 5.05 En ambos grupos se encontraron resultados similares, así como, p no significativa para valorar diferencias en edad, niveles de hormona folículo estimulante basal, estradiol basal y número de oocitos capturados. Lo anterior fue analizado por medio de prueba de T student con corrección de Welch y denota una muestra homogénea en ambos grupos de estudio (Anexo 2). Edad de las pacientes de acuerdo a ciclo de estimulación Tipo de estimulación Mediana Mínima Máxima Media Desviación estándar Convencional 36 26 43 35.29 2.97 Largo convencional 36 28 44 35.96 4.31 Mínima A 37 28 43 36.41 3.92 Mínima B 36 30 43 36.42 2.74 Mínima C 32 26 42 33.71 4.42 Se realizó un análisis para valorar si existían diferencias en la edad de las pacientes para la utilización de uno u otro esquema de estimulación ovárica, sin embargo, no se encontraron (prueba T student). Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 19 La tasa de embarazo por transferencia que se obtuvo en la muestra seleccionada fue de 38% (67/176), al dividir la muestra para obtener la tasa de embarazo que se obtuvo con embriones transferidos en día 3 y blastocisto se obtuvieron tasas de embarazo por transferencia de 36% (54/146) y 43% (13/30) respectivamente. La tasa de nacidos vivos por transferencia obtenida en pacientes con embriones transferidos en día 3 fue de 26% (38/146), mientras que en aquellas en quienes se transfirieron 32% 34% 36% 38% 40% 42% 44% Día 3 Blastocisto Total Tasa de embarazo Día 3 Blastocisto Total 24% 25% 26% 27% 28% 29% Día 3 Blastocisto Total Tasa de NV Día 3 Blastocisto Total Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 20 blastocistos fue de 29% (9/30). La tasa total de la muestra de nacidos vivos fue de 26% (47/176). Las pacientes con transferenciade embrión en día 3 que presentaron embarazo positivo y se obtuvo un recién nacido vivo fueron un 70% (38/54) mientras aquellas que fueron transferidas con embrión en blastocisto fue de 69% (9/13), por lo que se obtuvo una tasa de aborto por embarazo bioquímico de 31% para pacientes que fueron transferidas en etapa de blastocisto y de 30% en pacientes a quienes se les transfirieron embriones en día 3. Embarazos de acuerdo a día de transferencia De la muestra total (176 pacientes), 30 fueron transferidas con embrión en etapa de blastocisto y 146 en con embrión en día 3 de desarrollo, se obtuvieron pruebas positivas de embarazo en 13 pacientes de las transferidas en etapa de blastocisto y 54 pacientes transferidas en día 3. Se realizó el análisis estadístico con Chi 2 / Fisher test encontrando una p = 0.5404. Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 21 De las 67 pacientes con prueba de embarazo positiva 47 lograron concluir su embarazo con el nacimiento vivo por lo menos un producto viable. Entre las pacientes con embarazo logrado mediante transferencia de blastocisto 9 concluyeron su proceso gestacional con un recién nacido vivo en casa mientras que las pacientes que lograron un embarazo con embrión transferido en día tres 38 pacientes tuvieron el mismo resultado. El análisis estadístico se realizó mediante Fisher test encontrando una p = 1.00. Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 22 Para comparar los resultados en cuanto a obtención de embriones por tipo de estimulación ovárica, se encontraron que en las pacientes que recibieron ciclo convencional 69 obtuvieron embriones en día 3 y 17 en blastocisto; para ciclo largo convencional 24 pacientes lograron desarrollo de embriones hasta día 3 y 3 hasta blastocisto; con mínima estimulación A 20 pacientes lograron desarrollo embrionario en día 3 y 3 para blastocisto; con mínima B 22 pacientes lograron desarrollo embrionario en día 3 y 2 a blastocisto y con mínima estimulación C 12 pacientes lograron desarrollo embrionario a día 3 y 5 a blastocisto. El análisis estadístico se realizó con Chi 2 obteniendo una p = 0.339. Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 23 DISCUSION Nuestro estudio contó con una muestra homogénea, en cuanto a edad y características hormonales basales de las pacientes, esto, corroborado por la no significancia estadística de ambos grupos; así mismo, se realizó un análisis para valorar si existían diferencias en cuanto a la edad de las pacientes, para determinar si ésta estaba relacionada con la elección del ciclo de estimulación ovárica, lo cual no fue corroborado, ya que, en todos los grupos de acuerdo a tipo de estimulación la media fue similar, lo que descarta que uno u otro protocolo de estimulación sea determinante para la obtención de embriones de una etapa más avanzada (blastocisto). La tasa de embarazo por transferencia obtenida en nuestra población de estudio fue de 38%, lo cual, considerando que la media de edad fue de 35 años se encuentra dentro de lo establecido por la literatura, ya el Centro de Control de Enfermedades (CDC por sus siglas en inglés) con sede en Atlanta, tiene la principal casuística reportada por la Sociedad de Tecnología en Reproducción Asistida con más de 174 962 ciclos al año, y reportó en el año 2013 tasas de embarazo de 37.8% en transferencias de embriones en fresco 6 para el grupo de edad principal que se trató en nuestra población. Se decidió comparar nuestros resultados con los datos reportados en Estados Unidos, ya que, estadísticamente son los más confiables por tratarse de una casuística considerable. Valorando la tasa de embarazo por transferencia de acuerdo a la etapa de desarrollo embrionario obtenida en nuestra población, se encontró, una diferencia de 7%, obteniendo mejores resultados cuando se transfieren embriones en etapa de blastocisto, con una mejora de la tasa de embarazo por transferencia hasta en 43%, lo que evidencia de inicio el beneficio de la transferencia embrionaria en día 5, además, de acuerdo a la tasa obtenida cuando se transfieren embriones en día 3 ésta se encuentra un 2% por debajo de lo reportado como promedio en la literatura. La tasa de nacidos vivos por transferencia en nuestro centro de reproducción fue de 26% lo cual se encuentra debajo de lo reportado por el CDC con una tasa de nacidos vivos en general del 30.6%, cuando se analizó la misma tasa de acuerdo a la etapa de transferencia embrionaria se encontró una tasa de nacidos vivos por Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 24 transferencia de 26% para embriones transferidos en día 3, y de 29% para los transferidos en etapa de blastocisto; este último dato se encuentra más cercano a las tasas reportadas en Estados Unidos, lo que también podría conllevar una ventaja para los resultados reproductivos de nuestro centro médico. El porcentaje de pacientes que tuvieron embarazo bioquímico y progresaron hasta la obtención de un recién nacido vivo en ambos grupos fue similar, obteniendo un bebé en casa en 7 de cada 10 pacientes con prueba positiva de embarazo, lo que evidencia que la buena calidad embrionaria de los embriones transferidos (independientemente de la etapa en que ésta se realice), es fundamental para obtener resultados favorables en las parejas infértiles. De lo anterior se deduce una tasa de aborto por embarazo bioquímico de 30.5% para nuestra muestra; lo cual se encuentra dentro de lo reportado a nivel mundial, que dependiendo del Centro de Reproducción valoran dicha tasa entre un 10 y un 30%, siendo este último porcentaje atribuible en muchos casos a la edad materna mayor de 35 años. Dado que en nuestra muestra la media de edad se encontró en 35.5 años cumplidos ésta tasa se encuentra acorde con lo reportado a nivel mundial. Así mismo, la similitud de dicha tasa, se encuentra acorde con lo reportado a nivel mundial, donde no existen diferencias entre los embriones transferidos en día 3 y los transferidos en etapa de blastocisto. Al realizar un análisis estadístico para valorar si la transferencia de blastocistos conlleva a un mayor número de embarazos, no se encontró significancia estadística con el grupo transferido con embriones en día 3, lo que no descarta que se trate de un error tipo II, que pudiera ser corregido con el aumento del tamaño de muestra, principalmente, de casos con transferencia de blastocisto; ya que, en nuestra muestra únicamente el 17% de la población se sometió a este proceso. Los resultados del análisis estadístico para evaluar si la transferencia en etapa de blastocisto presentaba ventajas en cuanto a la obtención de recién nacido vivo con respecto a la transferencia de embriones en día 3 en las pacientes que presentaron embarazo bioquímico, no arrojaron tampoco significancia estadística de asociación, sin embargo, no se descarta igual que en el caso anterior sea debido a que la muestra de transferencia de blastocisto es muy baja, por lo que, nuevamente esta falta de asociación discordante con la literatura actual y los reportes a nivel mundial sean debido a un error tipo II, que pudiera ser corregido con el incremento del tamaño de la muestra. Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultadoreproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 25 La comparación para asociar un tipo de ciclo de estimulación ovárica con la probabilidad de desarrollo de embriones en etapa de blastocisto, no arrojo diferencias estadísticamente significativas; es imposible determinar si esto se debe igualmente a un error tipo II, o sí, en efecto, el resultado no significativo determina que no existe un esquema “ideal” que predetermine el desarrollo de embriones de mejor calidad que evolucionen hasta el día 5; ya que tampoco, existe correlación en la literatura al respecto; se ha descrito una tendencia a que los ciclos convencionales son los que mejor beneficio tienen para la paciente, sin embargo, dado que el ciclo convencional es el esquema de estimulación más utilizado a nivel mundial (con excepción de los países asiáticos), no es posible determinar por la falta de experiencia con otro tipo de esquemas si existe alguna asociación de éstos con el desarrollo de embriones hasta etapa de blastocisto. Por lo que es necesario más estudios aleatorizados con muestras representativas poblacionales para realizar o descartar este tipo de asociación. Por todo lo anterior, creemos, que dado que las tasas de embarazo apuntan a que la transferencia de blastocisto conlleva ventajas en el resultado reproductivo, es necesario, realizar un estudio con mayor muestra para realmente determinar si existen a nivel estadístico significancias; que apunten ventajas reales para la transferencia de blastocistos en nuestro centro de reproducción, ya que, como se comentó anteriormente la tendencia mundial y la evidencia apunta a que éstas existen, lo que no descarta que nuestro estudio rechace la hipótesis debido a un error por falta de muestra. Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 26 CONCLUSIONES La transferencia de embriones en etapa de blastocisto parece tener una ventaja en las tasas de embarazo por transferencia comparado con la transferencia de embriones en día 3. La tasas de nacidos vivos por transferencia son ligeramente más altas cuando se realiza transferencia de embriones en etapa de blastocisto. Las tasas de aborto son muy similares en pacientes con transferencia de embriones en día 3 y en etapa de blastocisto. En nuestra muestra, no se encontraron diferencias estadísticamente significativas en la comparación de los grupos de pacientes en las que se realizó transferencia embrionaria en día 3, y las que se hizo en día 5, con respecto a: embarazo bioquímico, nacidos vivos y uso de diferentes esquemas de estimulación ovárica. La falta de significancia estadística en nuestro estudio, puede deberse a un error de tipo II, debido a que la proporción de pacientes en las que se realizó transferencia de blastocisto fue casi 4 veces menor, comparado con las pacientes a quienes les fueron transferidos embriones en día 3. Se deberá realizar un estudio en nuestro centro de reproducción ampliando el tamaño de la muestra, para verificar si nuestros resultados son correctos y no se encuentran acordes con lo reportado en la literatura (probablemente debido a factores de nuestra población), o sí, efectivamente, existe un sesgo de los resultados por falta de muestra. Transferencia de embriones en etapa de blastocisto comparado con transferencia embrionaria en día 3, impacto en el resultado reproductivo. Dra. Laura Helena Carrillo Aguilar Página 27 Referencias 1. Bronte A. Stone, Charles M. March, Guy E. Ringler,et. al. 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