Expresión de las Claudinas en Biopsias Testiculares

Vista previa del material en texto

1	
	
	
							
	
	
	
	
	
UNIVERSIDAD	NACIONAL	AUTÓNOMA	DE	MÉXICO	
	
FACULTAD	DE	MEDICINA	
DIVISIÓN	DE	ESTUDIOS	DE	POSGRADO	
	
	
“EXPRESIÓN	DE	LA	FAMILIA	DE	LAS	CLAUDINAS	1,3,4	Y	6	EN	LAS	BIOPSIAS	TESTICULARES;	UN	
COMPORTAMIENTO	DINÁMICO	DE	LA	ESPERMATOGÉNESIS	EN	PACIENTES	CON	INFERTILIDAD”	
	
TESIS	
PARA	OBTENER	EL	TÍTULO	DE:	
MÉDICO	ESPECIALISTA	EN	BIOLOGÍA	DE	LA	REPRODUCCIÓN	HUMANA	
	
PRESENTA	
FRANCISCO	ALEJANDRO	SANDOVAL	GARCÍA	TRAVESÍ	
Hospital	Ángeles	Pedregal.	
	
TUTOR	DE	TESIS	
DR.	HÉCTOR	SALVADOR	GODOY	MORALES	
Hospital	Ángeles	Pedregal.	
	
ASESOR	METODOLÓGICO	DE	TESIS	
Dr.	José	Manuel	Lozano	Sánchez/	Dra.	Paola	Berenice	Merchand	Álvarez	
Hospital	Ángeles	Pedregal.	
	
2017	
Margarita
Texto escrito a máquina
Ciudad de México
Margarita
Texto escrito a máquina
Margarita
Texto escrito a máquina
 
UNAM – Dirección General de Bibliotecas 
Tesis Digitales 
Restricciones de uso 
 
DERECHOS RESERVADOS © 
PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL 
 
Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal 
del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). 
El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea 
objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para 
fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo 
mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, 
reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el 
respectivo titular de los Derechos de Autor. 
 
 
 
	
	
2	
	
ÍNDICE 
 
 
TEMA PÁGINA 
RESUMEN-ABSTRACT 5-6 
INTRODUCCIÓN 7-12 
JUSTIFICACIÓN 12-13 
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 13 
PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN 13 
HIPÓTESIS 13 
OBJETIVOS GENERALES Y ESPECÍFICOS 13-14 
TIPO Y DISEÑO DEL ESTUDIO 14-15 
GRUPO DE ESTUDIO 15 
TAMAÑO DE MUESTRA 15 
CRITERIOS DE INCLUSIÓN Y EXLUSIÓN 15 
CRITERIOS DE ELIMINACIÓN 15 
RECOLECCIÓN DE INFORMACIÓN 15-16 
MÉTODOS PARA CONTROL DE CALIDAD 16 
ASPECTOS ÉTICOS (NORMA OFICIAL 
MEXICANA) 
 16 
PLAN DE ANÁLISIS 16 
CONSIDERACIONES ÉTICAS 17 
RESULTADOS 17-18 
DISCUSIÓN 18-19 
CONCLUSIÓN 20 
TABLAS Y FIGURAS 20-22 
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES 23 
CARTA DE CONSENTIMIENTO INFORMADO 23-24 
BIBLIOGRAFÍA 25-26 
	
 
 
 
 
 
 
 
 
 
	
	
3	
	
Dedicatoria y Agradecimientos: 
 
Quiero dar gracias a Dios por permitirme llegar a este camino, permitirme seguir creciendo 
día con día como médico y como ser humano, darme la oportunidad de ser partícipe del 
milagro de la vida, por guiar mis manos y mis pensamientos en el actuar de mi profesión. 
A mis padres por apoyarme en todo momento, por ser mi guía y mi hombro, por darme las 
bases de responsabilidad y respeto que han guiado mi actuar hasta el día de hoy. 
Al Dr. Héctor Godoy por haberme abierto las puertas de su centro de reproducción y darme 
la oportunidad de aprender, también por los consejos que me dio a lo largo de mi estancia 
en ART, por impulsarme a mantenerme siempre en crecimiento profesional y personal 
constante siendo un ejemplo a seguir. Todo el tiempo que pude compartir con usted se ha 
convertido en una excelente experiencia. 
A mis maestros adjuntos del posgrado el Dr. José Manuel Lozano, Dra. Paola Berenice 
Merchand y al Biólogo Ricardo Mera Mejía por sus enseñanzas y amistad que siempre me 
brindaron y por haber creado un agradable ambiente de trabajo y estudio el cual ha sido 
ideal para dar todo lo mejor de mí. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
	
	
4	
	
“EXPRESIÓN DE LA FAMILIA DE LAS CLAUDINAS 1,3,4 Y 6 EN LAS BIOPSIAS 
TESTICULARES; UN COMPORTAMIENTO DINÁMICO DE LA ESPERMATOGÉNESIS 
EN PACIENTES CON INFERTILIDAD” 
 
 
 
Alumno de tesis: 
Dr. Francisco Alejandro Sandoval García Travesí. 
Residente de segundo año de la Sub Especialidad de Biología de la Reproducción 
Humana. 
Unidad de Medicina Reproductiva, Hospital Ángeles del Pedregal. 
Camino Santa Teresa 1055-129, colonia Héroes de Padierna. 
CP 10700, México, DF. 
Teléfono: 56525669 
E -mail: alejandro.travesi@gmail.com 
 
Tutor de tesis: 
Dr. Héctor Salvador Godoy Morales. 
Director de la Unidad de Medicina Reproductiva, Hospital Ángeles del Pedregal. 
Camino Santa Teresa 1055-129, colonia Héroes de Padierna. 
CP 10700, México, DF. 
Teléfono: 56525669 
E -mail: godoymd@prodigy.net.mx / art-reproduccion@gmail.com 
 
Co- asesor de tesis: 
Dr. José Manuel Lozano Sánchez. / Dra. Paola Berenice Merchand Álvarez 
Adscrito a la Unidad de Medicina Reproductiva, Hospital Ángeles del Pedregal. 
Camino Santa Teresa 1055-129, colonia Héroes de Padierna. 
CP 10700, México, DF. 
Teléfono: 56525669 
E -mail: mancer20@gmail.com 
 
 
	
	
5	
	
RESUMEN 
Introducción: La espermatogénesis humana está regulada a través de la actividad endocrina 
y parácrina, por medio de la interacción celular de las células de Sertoli y las células 
germinales. Esta interacción celular promueve la modificación y expresión de diferentes 
tipos de proteínas. Eso incluye a la familia de las claudinas que participan con las 
conexiones celulares entre el espermatozoide y las células de Sertoli. El objetivo de este 
estudio es demostrar la presencia y la localización de la familia de claudinas (1,3,4 y 6) en 
las biopsias de testículo humano obtenidos por TESE (extracción espermática testicular). 
Objetivos: Demostrar la presencia de la familia de las Claudinas en el TESE de biopsias 
testiculares humanas de parejas infértiles. 
 
Métodos: Las biopsias testiculares fueron obtenidas por TESE, con diagnóstico previo de 
azoospermia, las causas genéticas fueron excluidas. La expresión de la familia de las 
Claudinas se evaluó mediante inmunohistoquímica. La evaluación de la expresión se 
dividió en dos grupos (con las células germinales y sin células germinales) para evaluar la 
expresión de la familia de las Claudina en el estroma y túbulos realizados por el servicio de 
patología. 
 
Resultados: Se analizaron 41 biopsias de las cuales contaron con los criterios de inclusión 
veinte biopsias de testículos de parejas con infertilidad en TESE; Dividiéndose en dos 
grupos: Grupo 1: 7 pacientes con azoospermia y grupo 2:13 con la presencia de la 
espermatogénesis, el análisis inmunohistoquímico de las biopsias fue realizado con 
anticuerpos monoclonales y policlonales reactivos a claudinas 1,3,4 y 6. Los resultados 
mostraron que la expresión de Claudina 1 fue nuclear en las células de Sertoli y positivo en 
células espermáticas . En el grupo 2. (Fig. 1). Claudina 3 fue marca positiva nuclear en las 
células de Sertoli y células germinales, la expresión de Claudina 4 (Fig. 2) fue en la 
membrana basal de las células de Sertoli. (Fig. 3) y con respecto a la Claudina 6 fue marca 
negativa. En el grupo de azoospermia, la Claudina 3 resultó marca negativa, el resto de las 
familias de expresión de Claudinas eran los mismos, independientemente del nivel de la 
detención en la célula de germinal. 
 
Conclusiones: La familia de Claudina es positiva su expresión en los testículos humanos. 
La interacción con las células de Sertoli implican la presencia de: Claudina 3 y 4. Pero 
también indica que los espermatozoides tienen su Claudina personal para su interacción con 
las células de Sertoli (Claudina 1), La Claudina 6 marca negativa en este experimento. Las 
uniones celulares estrechas hacen una modifica en la membrana de espermatozoides 
durante su maduración cambiando la expresión proteica de la membrana de la célula 
germinal masculina como un mensajero para un correcto desarrollo celular y probable 
transcripción nuclear. 
 
Palabras clave: Infertilidad, Claudina, Biopsia testicular. 
 
 
 
	
	
6	
	
ABSTRACT 
 
Introduction: Human spermatogenesis is regulated through paracrine and endocrine 
activity, cell interaction with Sertoli promotes and maturates the germ cell. These cell−cell 
signaling promotes the modification and expressionof different type of proteins. That 
includes the Claudins family whose involved with sperm and Sertoli cells connections. The 
goal of this study is to demonstrate the presence and its localization of the Claudins family 
(1,3,4 and 6) at human testicle biopsies obtained by TESE. 
 
Objectives: Demonstrate the presence of Claudin family at TESE in human samples of 
infertile couples. 
 
Methods: Testicular biopsies were obtained by TESE, with previous diagnosis of 
azoospermia, genetic causes were excluded. Claudin family expression was evaluated by 
immunohistochemistry. Evaluation the expression divided the sample in two groups (with 
germ cells and without germ cells) to evaluate Claudin family expression at stroma and 
tubules conducted by pathology service. 
 
Results: We studied twenty testes biopsies of couples with infertility in TESE; They were 
divided in two groups: group 1: 7 patients with azoospermia and group 2: 13 with presence 
of spermatogenesis, immunohistochemically analysis of the biopsies was performed with 
monoclonal and polyclonal antibodies reactive to claudins 1,3,4 and 6. The results showed 
that claudin 1 express nuclear at Sertoli cells, and in positive in sperm cell at group 2. (Fig 
1). Claudin 3 had positive nuclear mark at Sertoli cells and germ cells, (Fig 2) Claudin 4 
expression at the basal membrane with Sertoli cells. (Fig 3) Claudin 6 had negative mark. 
At azoospermia group, they were Claudin 3 negative mark the rest Claudin family 
expression were the same, independently the level of the arrest at germ cell. 
 
Conclusions: 
 
The claudin family is positive express at human testes. The interaction with Sertoli cells 
involve claudin 3 and 4. But also indicates that sperm have its personal claudin for 
interaction with Sertoli cells Claudin 1, claudin 6 negative mark at this experiment. Tight 
junctions indicate that sperm membrane modifies during its maturation improving sperm 
quality as a messenger for nuclear development. 
 
Key words: Infertility, Claudin, Testicular Biopsy 
 
 
 
	
	
7	
	
INTRODUCCIÓN 
La infertilidad es la incapacidad de una pareja para concebir después de doce meses de 
relaciones sexuales, sin método anticonceptivo y de frecuencia regular. La infertilidad en el 
mundo afecta a 186 millones de personas1 con una incidencia que va en aumento con cifras 
que varían entre 15 y 20%; y, en México, se estima en 15%2. 
 
El 10% de los varones con infertilidad presentan defectos en la producción espermática. En 
consecuencia, se estima que alrededor del 1% de los hombres en edad fértil tendrán 
alteraciones graves en sus Espermatobioscopía3. Las principales causas de infertilidad 
masculina son oligozoospermia, astenozoospermia, teratozoospermia y azoospermia, lo que 
en conjunto representa del 20% al 25% de los casos4. 
 
El estudio del factor masculino se ha realizado desde el descubrimiento de la microscopía. 
A inicios del siglo 20, gracias a los trabajos clásicos de Benedict y Macomber5-6, se inició 
la evaluación de los espermatozoides por el método de la microscopía, dando oportunidad 
al estudio del varón infértil. 
 
El problema es cuando no hay células germinales en el eyaculado , definiendo eso como 
azoospermia, el estudio de la azoospermia se divide en obstructiva y no obstructiva7. 
 
Para estos casos la biopsia testicular (TESE) con Inyección Intracitoplasmática de 
Espermatozoides (ICSI) pueden mejorar el pronóstico de parejas con factor masculino 
alterado, aunque esto no modifica la epigenética y epigenómica del gameto8. 
 
 
ESPERMATOGÉNESIS 
 
 
Aspectos principales de la espermatogénesis 
Esta se lleva a cabo en los túbulos seminíferos secundario al estímulo de las gonadotropinas 
provenientes de la hipófisis. Los túbulos contienen en su borde externo a las 
espermatogonias, las cuales se diferencian para formar a los espermatozoides. En la primer 
etapa de división celular de estas, las espermatogonias primitivas que están en la membrana 
basal o tipo A, se dividen y originan a las espermatogonias tipo B. Las espermatogonias 
tipo A se diferencian a espermatocitos primarios, los que se a su vez se dividen para formar 
dos espermatocitos secundarios para posteriormente lograr 4 espermátides. Cada 
espermátide se convierte en espermatozoide, para lograr este paso los espermatocitos 
secundarios tuvieron que perder citoplasma, reorganizar la cromatina del núcleo, formar la 
	
	
8	
	
cabeza compacta, acumular el citoplasma residual y de la membrana celular en un extremo 
de la célula para formar la cola. Todas las divisiones celulares de la espermatogénesis dura 
aproximadamente 75 días.9 
Para llevar a cabo el cambio gradual de espermatogonia a espermatozoide intervienen: 
diversas hormonas, factores de crecimiento, la regulación de la temperatura e interacción 
con las células de Sertoli. En caso de que existan defectos en la especialización 
ectoplásmica (alteración en la estructura de las células de Sertoli y superficie acrosomal de 
las espermátides) se llevará a cabo la detención de la espermatogénesis en la meiosis.9 
Una de las funciones de las céluas de Sertoli es sintetizar proteína fijadora de andrógenos 
(ABP), factores de crecimiento, transferrina, inhibina; además están en contacto con las 
células germinales y participan en su división celular, la síntesis de estas es activada por la 
hormona folículo estimulante (FSH). Las células de Sertoli tienen actividad secretora 
modulada por las células germinales. La hormona luteinizante (LH) actúa en las células de 
Leydig para que produzcan testosterona la cual es indispensable para la actividad 
espermatogénica, además provoca la división meiótica de los espermatocitos primarios para 
que produzcan espermatocitos secundarios. La FSH estimula a las células de Sertoli, lo cual 
es indispensable para el proceso de espermiación.9 
La hormona del crecimiento (HC) activa de manera específica la división temprana de las 
espermatogonias, se ha observado que en su ausencia hay deficiencia o ausencia de 
espermatogénesis.9 
Los receptores de hormona FSH se localizan en las células de Sertoli y en la 
espermatogonia10. 
En caso de que que exista apoptosis acelerada, esta puede inducir al decremento en el 
numero de espermatogonias, por lo tanto concluimos que que las alteraciones en el control 
y la regulación de la apoptosis pueden involucrarse en la patogénesis de la 
hipoespermatogénesis de origen desconocido11-12. 
 
Cromosomas y espermatozoides: meiosis 
Al dividirse el espermatocito primario forma dos espermatocitos secundarios, permitiendo 
que pasen 23 cromosomas impares hacia cada espermatocito secundario. Posteriormente se 
divide el espermatocito secundario formando dos espermátides. Cada espermátide tiene 23 
cromosomas impares y cada espermatozoide maduro contiene también sólo cromosomas 
impares.13 
	
	
9	
	
Cromosomas sexuales 
Cada espermatogonia tiene 23 pares de cromosomas con la información genética que 
confiere el sexo de los futuros individuos. Este para esta formado por un cromosoma X que 
representa al sexo femenino y un cromosoma Y que representa al sexo masculino. Durante 
la meiosis los cromosomas sexuales se distribuyen entre los espermatocitos secundarios, 
constituyendo una equivalencia de 50% de espermatozoides masculinos y 50% femeninos. 
Al existir alguna alteración en alguno de los procesos de división celular para formar el 
espermatozoide puede presentarse la detención de espermatogénesis. Las causas se dividen 
en primarias y secundarias.13 
Causas primarias o congénitas de la detención espermática 
Las principales son: Anomalías cromosómicas como el Síndrome de Klinefelter, 
translocación de un segmento autonómico del cromosoma X o Y, disminución del brazo 
largo del cromosoma Y, trisomía 21; y las anomalías de las células germinales que impiden 
o afectan el proceso meiótico de la espermatogénesis13. 
Los efectos sobre la mutagénesis química en las fases tardías de la espermatogénesis oel 
daño no permanente en la espermatogonia puede tener consecuencias transitorias. En caso 
de que no estuvieran los mecanismos que reparan el ADN de los espermatozoides o en sus 
precursores aumenta las posibilidades de recibir daño. Se ha observado que la acumulación 
de las mutaciones en los gametos masculinos se incrementa con la edad del paciente siendo 
estos vulnerables a la no disyunción. Estudios realizados en pacientes infértiles indican que 
la deleción de la porción distal del cromosoma Y (Yq11) la cual tiene uno o más genes 
indispensables para la espermatogénesis (factor azoospérmico, AZF) se asocia con 
alteraciones espermatogénicas severas y es importante investigarlo en pacientes con 
azoospermia sin causa aparente. Además, se encontró un gen de expresión testicular 
específica en el cromosoma Y el cual tiene su efecto principal en la diferenciación 
posmeiótica de las espermátides a espermatozoides 13-14. 
Las mutaciones y polimorfismos en lo que respecta al receptor de andrógenos debe ser 
estudiado en varones infértiles. En más del 85% de varones azoospérmicos y 90% con 
oligozoospermia severa no tienen deleciones, sin embargo pudieran tener mutaciones, 
polimorfismos o duplicaciones en genes específicos del cromosoma Y.14 
Causas secundarias 
Entre	estas	se	encuentran	agentes	quimioterapéuticos	como:		
• Clorambucilo	
• Ciclofosfamida		
	
	
10	
	
• Doxorrubicina	
• Procarbacina	
• Vincristina	
• Vinblastina	
Se	 ha	 relacionado	 además	 la	 exposición	 a	 radioterapia,	 sin	 embargo	 en	 este	 caso	 es	 dosis-
respuesta	pudiendo	 causar	 azoospermia	 temporal	o	permanente,	por	ejemplo,	 al	utilizar	menos	
de	100	rads	la	función	testicular	normal	suele	recuperarse	en	un	rango	de	9	a	18	meses,	30	meses	
para	dosis	de	200-300	 rads	 y	mayor	o	 igual	 a	5	 años	para	dosis	de	400-600	 rads.	 La	 infertilidad	
permanente	se	relaciona	con	una	dosis	única	de	600	a	800	rads.10	
La desventaja de las espermatogonias tipo B es que son las células más radio sensibles, sin 
embargo los espermatocitos que se encuentran en división celular, específicamente en fase 
de preleptoteno siendo 10 veces más resistentes al daño secundario a radiaciones.10 
Los gonadotóxicos pueden causar diversos efectos tóxicos en las células germinales tales 
como muerte o daño celular y cambios genéticos, aquellas células que mueren son 
fagocitadas por las células de Sertoli, mientras que las células que mueren por apoptosis no 
afectan a las células germinales o de Sertoli que se encuentran cercanas11. 
Diversos mecanismos pre testiculares, testiculares o pos testiculares pudieran interferir en 
la secreción de andrógenos con la consiguiente afectación de la espermatogénesis, tal como 
en el caso de pacientes afectados por micro litiasis testicular quienes pudieran tener hipo 
espermatogénesis de grado variable.15 
 
Estudio biopsia testicular 
Es la única manera de obtener el diagnóstico certero y definitivo en el caso de que exista 
azoospermia de causa no identificada, es fácil de realizar y solo se requiere un fragmento 
testicular ya sea para el estudio histológico o citogenético.16 
 
ROL DE LAS UNIONES CELULARES 
 
Familia de las Claudinas 
Las claudinas conforman una familia de al menos 26 proteínas, identificadas por primera 
vez en 1998. Son componentes muy importantes de las uniones estrechas que se encargan 
de mantener la permeabilidad intercelular además de que regulan el intercambio iónico 
entre células en la mayoría de los epitelios. Tienen un peso molecular que varía entre 21-28 
	
	
11	
	
kD, poseen 4 dominios transmembrana, 2 asas extracelulares, 2 dominios citoplasmáticos 
—uno amino y el otro carboxilo terminal— y una corta vuelta citoplasmática. La primera 
asa extracelular (ECL1) consiste de aproximadamente 50 aminoácidos con un motivo 
común (GLWCC)7 y contiene aminoácidos cargados positiva y negativamente los cuales 
favorecen la regulación de la selectividad iónica a través de efectos electrostáticos. La 
segunda asa extracelular (ECL2) consiste en aproximadamente 25 aminoácidos con un 
motivo predicho de hélice-vuelta–hélice que media las interacciones intracelulares de las 
claudinas. El carboxilo terminal contiene el dominio de unión PDZ que interactúa con las 
proteínas submembranales ZO; esta interacción es esencial para mantener la estructura del 
cito esqueleto celular. En el epitelio germinal, las claudinas confieren y regulan la 
selectividad iónica de la unión estrecha del epitelio lo que genera diferencias en la 
resistencia transepitelial y en la permeabilidad celular17. 
En relación a las gónadas se ha demostrado que las Claudinas 4, 5, 8, 11 y 14 se expresan 
en las células de Leydig que conforman normalmente la barrera hematotesticular. A 
continuación hablaremos de las Claudinas que buscamos en nuestro estudio. 
Claudina 1 
Un estudio realizado por Gregory et. al en los epidídimos de ratas demostró que Claudina-1 
también se encuentra presente a lo largo de las membranas plasmáticas laterales entre 
células principales en áreas distales a la uniones estrechas, así como entre células 
principales y basales, donde las uniones estrechas se encuentran ausentes. Esto sugiere que 
Claudina-1 no se encuentra localizada exclusivamente a las uniones estrechas18. La 
Claudina 1 se encontró positiva en un estudio piloto de casos y controles donde se 
incluyeron a 23 pacientes que iban a ART, donde 15 tenían afección en los parámetros 
seminales y 8 sanos, sin diferencia en la edad de ambos, la muestra fue obtenida mediante 
masturbación y alcanzaron estado de blastocito con 83% de sensibilidad y 93% 
especificidad19. 
Claudina 3 
Esta funciona como una barrera, se expresa en amplias variedades de epitelio como lo es el 
respiratorio, urinario, tracto gastrointestinal, glándulas mamarias y salivares. Es uno de los 
constituyentes de la barrera hematoencefálica y hematotesticular. Su sobreexpresión no 
induce disminución de la permeabilidad transepitelial en ninguna de sus localizaciones10,11. 
Claudina 4 
Se expresa fuertemente en el riñón, primordialmente en los túbulos colectores y en el 
pulmón. Además se encuentra positiva en la próstata de modelos animales, próstata 
humana, vesícula biliar, vejiga, islotes pancreáticos, epidermis, ojo, epidídimo, glándulas 
	
	
12	
	
salivales, glándulas gustativas, y glándulas gástricas proximales, su sobreexpresión se ha 
observado en adenocarcinoma de ovario, adenocarcinoma colorrectal, cáncer prostático, 
cáncer de seno. Dependiendo del tipo de células que estén en investigación, la Claudina 4 
actúa como una barrera en general, como la barrera de Na sin afectar la permeabilidad del 
cloro. En el riñón se ha postulado20-21. 
Claudina 6 
Se ha encontrado en epitelio embrionario en el trofoectodérmo siendo muy importante 
factor vectorial para el transporte de iones y agua para generar el blastocéle y en cultivo de 
ratones en los cuales se ha inhibido la Claudina 6 se ha observado una inhibición de la 
formación normal del blastocisto, pero no afecta su desarrollo, viabilidad ni 
comportamiento. Su sobreexpresión en la epidermis de ratones transgénicos induce una 
deficiencia en la barrera para las macromoléculas con la consecuente perdida transdérmica 
de agua acompañada de muerte neonatal. Su sobreexpresión en humanos se ha observado 
en túbulo proximal neonatal, túbulo ascendente grueso, túbulo contorneado distal y túbulo 
colector, pero no en riñón adulto20-21. 
 
JUSTIFICACIÓN 
 
La prevalencia de infertilidad en México es del 32.2 %. Se sabe que en el 50% de los casos 
la causa es debida a lo que se conoce como factor masculino y también se sabe que en el 16 
% de estos casos, la alteración es severa.2 Las causas más frecuentes de alteraciones severas 
están relacionadas con cambios de estilo de vida y alteraciones o insultos en los procesos de 
producción en la línea germinal. La incidencia de la infertilidad y su impacto en la 
correlación con otras enfermedades son, de maneraparcial, resultado del deseo de 
reproducción en parejas mayores, siendo las parejas añosas aquellas que tienen un mayor 
riesgo de poseer patologías que no les permiten lograr una correcta fertilización, ya que la 
función reproductiva es un lujo metabólico para un organismo enfermo, y es un desgaste 
para un ovocito viejo. 
 
Los marcadores de evaluación en la infertilidad secundaria a el factor masculino son 
limitados y básicamente morfológicos sin tener, hasta la fecha, un sustento que los pueda 
relacionar con alteraciones en los mecanismos de espermiogénesis y espermatogénesis, así 
como en la adecuada función, al momento de la fertilización, de todos los procesos 
involucrados en lograr la fertilización. 
 
Como ya mencioné, la Claudina, es una molécula de las familias de proteínas que 
conforman las uniones celulares estrechas y son las responsables de mantener no solo la 
unión célula –célula en los epitelios, sino que también sostienen la resistencia transepitelial 
	
	
13	
	
y la polaridad de las células. Se ha demostrado la expresión de la Claudina en la barrera 
hematotesticular sin embargo nunca se ha intentado evaluar si el comportamiento de la 
familia de las Claudinas varía dependiendo el grado de maduración espermática, a 
sabiendas de que la comunicación entre estas dos células (espermatozoides y Sertoli) es la 
base del proceso de formación, maduración y capacitación espermática. Se han realizado 
múltiples estudios, sobre las propiedades de los espermatozoides y las moléculas que 
expresan durante el proceso de diferenciación, pero estos solo se han realizado en animales. 
La función y capacitancia de los espermatozoides sin embargo es aún más limitada en 
pacientes azoospérmicos. La evaluación de la expresión de claudinas en biopsias 
testiculares tiene la finalidad de demostrar indirectamente que la interacción célula de 
Sertoli-espermatozoide, así su interacción conforme su etapa de maduración ya que como 
toda unión célula-célula la expresión de claudinas en ambas superficies celulares es 
esencial para mantener la estabilidad de dicha unión y facilitar la cascada de eventos 
posteriores. La viabilidad de este proyecto se justifica al tratar de A) evaluar al 
espermatozoide de forma más funcional, y B) demostrar la presencia de proteínas de 
uniones estrechas en los procesos de maduración y fertilización del espermatozoide. Esto 
proyecto se realizará en el centro reproductivo ART reproducción en el hospital Ángeles 
Pedregal. En todos los casos los individuos participantes serán sujetos a una sesión 
informativa para en caso de que acepten participar en el proyecto firmen una carta de 
consentimiento informado, así como otra de privacidad. 
 
 
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 
Actualmente no se conoce el comportamiento de la familia de las Claudinas en testículo. La 
expresión de esta proteína podría reflejar el proceso de interacción del espermatozoide con 
las células de Sertoli, en caso de positividad podría valorar comportamiento en pacientes 
azoospérmicos según etapa de arresto. 
 
PREGUNTA DE INVESTIGACION 
¿Existe presencia de Claudina 1, 3, 4 y 6 en biopsias testiculares de pacientes 
azoospérmicos en estudio? 
 
HIPÓTESIS 
Las Claudinas 1, 3, 4 y 6 estarán expresadas en las biopsias testiculares, se espera encontrar 
una relación significativa entre la expresión con el grado de arresto espermático. 
 
 
OBJETIVO GENERAL 
Determinar la expresión de Claudina 1, 3, 4 y 6 en biopsias testiculares humanas de 
pacientes con diagnóstico de azoospermia en estudio obtenidos por TESE. 
 
	
	
14	
	
OBJETIVOS ESPECÍFICOS 
Determinar la localización de la Claudina 1, 3, 4 y 6 en biopsias testiculares de pacientes 
con infertilidad. 
 
TIPO Y DISEÑO GENERAL DEL ESTUDIO 
Estudio piloto experimental observacional prospectivo. Se incluyeron a las biopsias de las 
parejas con diagnósticos de azoospermia en estudio e infertilidad del centro ART 
reproducción de enero 2010 a julio del 2016. 
 
Diseño general de estudio: 
Se somete al varón a biopsia testicular por TESE para obtención de muestra y envío a 
patología para diagnóstico confirmatorio. 
Las biopsias se manejaron por inmunohistoquímica en la Universidad Autónoma de 
México para marcaje de las Claudinas. Las muestras de biopsia testicular fueron fijadas en 
tampón neutro 4% ρ-formol a 4 º c durante la noche y fueron posteriormente impregnado 
con parafina. Antes de realizar inmunohistoquímica, secciones de los tejidos se tiñeron con 
hematoxilina-eosina para corroborar la utilidad de la biopsia. Las secciones seriales, 4 µm 
espesor, fueron utilizadas para inmunohistoquímica. La recuperación del antígeno fue 
alcanzado por las muestras en 0.01 M citrato de sodio, pH de 6 por 2 min de ebullición. 
El amortiguamiento de la peroxidasa endógena fue alcanzado por la incubación con 
peróxido de hidrógeno 0.3% en agua destilada durante 30 min a temperatura ambiente. 
Después de lavar con fosfato tampón salino (PBS), las diapositivas fueron incubadas con 
solución de albúmina de 2% durante 2 h a temperatura ambiente y extensivamente lavadas 
con PBS. Las diapositivas se incubaron a 4 º C en cámara húmeda durante la noche con 
anticuerpo primario diluido en solución salina tamponada con Tris que contiene 
seroalbúmina bovina al 1%. 
Los anticuerpos son policlonales de conejo y anti-claudin 1 (#GTX81609 y #GTX54539, 
respectivamente, dilución 1:50, Gene Tex, Inc. Irvine, CA), anti-claudin 3, anti-claudin 4 y 
anti-claudin-6 (#34-1700, #51-6100 y #34-1600, dilución 1:50 y 1: 75 respectivamente, 
Invitrogen, Camarillo, CA) y receptor de la anti-phospho-progesterona (Ser 190) (#3171, 
dilución 1:750, célula de señalización de tecnología, Inc); Anticuerpo de Cabra anti-claudin 
1, anti-claudin 4, anti-claudin 6 (#sc-17660, sc-17664 # y #sc-17669, respectivamente, 
dilución 1: 200, Santa Cruz biotecnología, Inc.). 
Al final del tiempo de incubación, las muestras fueron lavadas en PBS y etiquetados con el 
sistema anticuerpo específico marcado con biotina por 2 segundos h (dilución 1: 200) 
 
(Kit LSAB * sistema HRP (DAKO North America Inc. Carpinteria, CA)), seguido por una 
incubación de 30 min con estreptavidina marcada con peroxidasa, también incluido en el kit 
	
	
15	
	
DAKO. Al final y después de lavar amplio la reacción fue revelada con el lenguado por 2 
min, lavada con PBS/Tween-20 y núcleos fueron contra tinción con hematoxilina de gato 
(Bio Care Med., Concord, CA). Las diapositivas fueron montadas usando oro puente 
montaje (#E01-100, laboratorios de GBI, Bothell, WA) a temperatura ambiente y evaluado 
con un microscopio Nikon Eclipse E600 equipado con una cámara fotográfica. 
 
Se tomaron fotografías de tres campos por diapositiva y se determinó el número de células 
positivas. La intensidad de la coloración se determinó mediante la detección de puntos por 
punto (dpp) en las fotografías con el software de análisis de imagen J. Todo el dato se 
compiló y se construyó una hoja de base de datos. Los anticuerpos se titulan inicialmente 
para determinar la dilución óptima de trabajo. 
 
GRUPO DE ESTUDIO 
Parejas con infertilidad y azoospermia en estudio. 
 
UNIVERSO/ SELECCIÓN Y TAMAÑO DE MUESTRA 
Parejas que acuden a la clínica de infertilidad ART reproducción en el Hospital Ángeles del 
Pedregal a las cuales se les diagnostica azoospermia y se propone TESE. Tamaño de la 
muestra por conveniencia. 
 
CRITERIOS DE INCLUSIÓN 
• Pacientes que acuden a ART reproducción por infertilidad y deseo de embarazo. 
• Pacientes con azoospermia en estudio. 
 
CRITERIOS DE EXCLUSIÓN 
• Micro deleciones positivas al momento del estudio o que cuenten con el 
antecedente. 
• Pacientes conocedores de cariotipo alterado. 
 
CRITERIOS DE ELIMINACIÓN 
• Pacientes que no cuenten con todos los resultados o con expediente clínico 
incompleto. 
• Pacientes quienes decidan abandonar el estudio de manera voluntaria. 
• 
 
PROCEDIMIENTOS PARA LA RECOLECCIÓN DE INFORMACIÓN 
INSTRUMENTOS A UTILIZAR 
 
• Microscopíaóptica: La evaluación de la muestra por microscopía óptica se 
efectuará con personal capacitado, biólogo en turno del hospital Ángeles del 
	
	
16	
	
Pedregal, el cual valorará características físicas y parámetros de la biopsia testicular 
siguiendo los criterios de la OMS, según el manual de procedimientos de 
laboratorio. El resultado presentado se da por escrito en un reporte. 
• Inmunofluorescencia: Utilizando un microscopio con focal Leica. Las muestras de 
espermatozoides incubadas con el anticuerpo anti-claudina 1, 3, 4 y 6 se describe 
anteriormente. Este equipo se encuentra a disposición en el departamento de 
Embriología de la Facultad de Medicina en la Universidad Nacional Autónoma de 
México. 
 
 
MÉTODOS PARA EL CONTROL DE CALIDAD DE LOS DATOS 
• Métodos para control de calidad son que todos los procesos de fertilidad los realizan 
personas capacitadas y certificadas por la RED LARA. 
• Métodos en laboratorio son realizados con la certificación NOM hospitalaria. 
 
PROCEDIMIENTOS PARA GARANTIZAR ASPECTOS ÉTICOS EN LAS 
INVESTIGACIONES CON SUJETOS HUMANOS. 
 
Se respeta en el protocolo los aspectos éticos con la base de la norma de expediente clínico. 
• NOM-012-SSA3-2012 Establece criterios para ejecución proyectos de investigación 
en seres humanos. 
• NOM-004-SSA3-2012 Referente al expediente clínico. 
• NOM-087-ECOL-SSA1-2003 Referente al manejo de residuos biológico 
infecciosos. 
• NOM-EM-003-SSA-1994 Disposición de órganos y tejidos de seres humanos con 
fines terapéuticos excepción de sangre y sus componentes. 
• NOM-253-SSA1-2012 Disposición de sangre humana y sus componentes con fines 
terapéuticos. 
 
PLAN DE ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS MÉTODOS Y MODELOS DE 
ANÁLISIS DE LOS DATOS SEGÚN TIPO DE VARIABLES 
 
Dado el tamaño de la muestra que se consideró para el presente estudio se utilizaran 
pruebas no paramétricas con normalización de datos con Shapiro Wilk. Se realizará 
estadística descriptiva. 
 
 
 
 
 
	
	
17	
	
PROGRAMAS A UTILIZAR PARA ANÁLISIS DE DATOS 
 
Los valores obtenidos, serán analizados mediante el programa estadístico “SPSS versión 
23¨, utilizando medidas no paramétricas para su interpretación estadística, secundario a 
tamaño de la muestra. 
CONSIDERACIONES ÉTICAS 
 
La participación en este estudio de investigación, será de manera voluntaria. A los 
participantes se les proporcionará toda la información necesaria, con un lenguaje claro y 
sencillo, de manera que una vez aclarada cualquier duda el participante otorgue el 
consentimiento informado de manera voluntaria, y firme la carta de confidencialidad previo 
a la obtención de la muestra, explicando los beneficios, riesgos y las posibles consecuencias 
de su participación en el estudio. Se hará mención que el método de toma de la muestra 
sanguínea se realizará con punción capilar, en donde los riesgos y complicaciones 
asociados a la toma de muestra con aguja son nulos. Se asegurará a los participantes del 
estudio, confidencialidad e integridad del manejo de los datos que se obtengan del presente 
estudio. 
 
Se pretende de esta manera realizar el estudio conforme a los principios éticos para la 
investigación médica en humanos establecidos en la Declaración de Helsinki, aclarando que 
este proyecto de investigación, será revisado por el consejo de ética de ART reproducción, 
quienes se encargarán de la aprobación del estudio, previo a la realización del mismo. El 
consentimiento informado que se les proporcionara a los participantes de este ensayo 
clínico se anexa al presente documento. 
 
RESULTADOS 
 
Se analizaron 41 biopsias testiculares, de las cuales contaron con los criterios de inclusión 
20 de ellas. 
 
Los resultados de patología se observan en el cuadro 1. 
 
Patología e inmunohistoquímica. 
 
Las biopsias por TESE se dividieron en dos grupos: Grupo 1: siete pacientes con 
azoospermia y grupo 2: trece con la presencia de espermatogénesis. Cuadro 2. 
 
	
	
18	
	
Los resultados mostraron que la expresión de Claudina 1 fue nuclear en las células de 
Leydig y positivo en células espermáticas . Imágen 1. 
 
En el grupo 2 la Claudina 3 fue marca positiva con distribución nuclear en las células de 
Sertoli y células germinales. Imágen 2. 
 
En el grupo 1 (Síndrome de solo células de Sertoli, Fibrosis hialina tubular y Arresto en la 
maduración) la Claudina 3 resultó con marca negativa. 
 
La expresión de Claudina 4 se observó en la membrana basal de las células de Sertoli. 
Imágen 3. 
 
Con respecto a la Claudina 6, esta tuvo marca negativa en las biopsias. Imagen 4. 
 
 
DISCUSIÓN 
La distribución de diagnósticos histopatológicos en pacientes infértiles concordó con lo 
reportado en la literatura. 
Llama la atención la incidencia de casos del Síndrome de solo Células de Sertoli, el cual se 
caracteriza por no observar células germinales y tiene una incidencia menor al 13 – 16 % 
en las parejas que se estudian por azoospermia según lo publicado por Mario Mancini en el 
200922. En todas las muestras hay presencia de células agregadas a la espermatogénesis que 
puede influir en la expresión proteica.23 
En nuestro estudio, investigamos la presencia de expresión de las familias de las Claudinas, 
en específico 1, 3, 4 y 6 en tejido testicular obtenido por TESE de pacientes con 
infertilidad. 
Se discutirán individualmente las proteínas encontradas: 
Claudina 1: Esta proteína de unión esta presente en los túbulos seminíferos, 
específicamente, en el 90% de los casos, en las células de Sertoli y en caso de los reportes 
de patología con espermatogénesis completa se encontró positiva en células germinales a 
partir del estadio de espermatocito secundario. Hoy en día solo el trabajo de grupo de 
México de ART Reproducción menciona la presencia de esta proteína en eyaculado como 
marcador de madurez espermática, concordando con la presencia de la misma en los 
	
	
19	
	
estadios finales.24 Respecto a la Célula de Sertoli y su marcaje positivo concuerda con lo 
expuesto en la literatura de Gye M. Et al en el 2003 y Meng et al en el 200525-26 en modelos 
animales en el cual se identificó positiva en los testículos de ratón7 a los 3 días postnatal, 
los cuales se incrementaban para el día 10, pero disminuían en los días 16 y 30. Esto nos 
demuestra la íntima interacción que hay en el proceso de espermiogénesis entre la célula de 
Sertoli y el espermatozoide en el tránsito tubular. 
Claudina 3: Esta proteína de unión esta presente en la biopsias testiculares de forma 
positiva en los túbulos seminíferos, identificando la localización en células de Sertoli 
confirmado por los estudios de patología. Esto corresponde a la literatura ya que la 
Claudina 3 es uno de los componentes presentes en la barrera hematotesticular, como lo 
publicado en la literatura por Morita K. y Morrow CM25,27 en modelos animales donde 
estudiaron cortes testiculares de ratón; contradiciendo el trabajo de Kaitu’u-Lino et al. en el 
2007 quien realizó cultivos de células de Sertoli in vitro del día 19 a 21 del nacimiento de 
ratones no encontrando la proteína 29. Esto sugiere que la Claudina 3 juega un papel 
importante en la permeabilidad de la membrana hematotesticular, ya que resulta negativa 
en aquellos casos de fibrosis, esto se puede explicar por que no existe presentación de 
antígeno en el testículo con barrera íntegra (sin fibrosis)30 . 
Claudina 4: Esta proteína de unión también se vio presente en los túbulos seminíferos, 
específicamente en células de Sertoli independiente del diagnóstico de patología. Esto 
corresponde a la literatura ya que la Claudina 4 esta reportado en barreras celulares, como 
en el riñón que se menciona en la barrera renal dependiente de sodio; en lo reportado por 
Gerd Krause en el 2008 y Mario Mancini en el 200920-21. La Claudina 4 también se 
encuentra altamente expresada en próstata, esto puede tener relación o asociación a 
receptores de GnRH o intranucleares de testosterona, ya que ambos tejidos (testicular y 
prostático)son afectados por las concentraciones de la hormona mencionada. En los 
trabajos como el de Romanov V 2014, Lei Ding 201331-32 se reporta que la sobreexpresión 
de la proteína promueve mecanismos oncológicos celulares en mama, ovario y próstata. En 
nuestros pacientes no se reportó ningún caso de neoplasia. 
Claudina 6: Esta proteína de unión celular fue negativa en nuestro estudio, según la 
literatura los pacientes con esta proteína de unión positiva tienden a una predisposición a 
cáncer testicular (Länsi y cols. en el 2010)33, donde relacionó su presencia con carcinoma 
embrionario y teratocarcinoma. 
 
 
 
 
	
	
20	
	
CONCLUSIONES 
 
La biopsia testicular es un elemento diagnóstico para pacientes con infertilidad, la presencia 
las proteínas de unión celular (familia de las claudinas) nos orienta a que existe una 
interacción entre la célula germinal y célula de Sertoli en el proceso de maduración. Esta 
interacción implica la presencia de: Claudina 3 y 4 en las células de Sertoli y Leydig en la 
barrera hematotesticular como traducción de una integridad de la misma, y en los 
espermatozoides solo se identificó la Claudina 1 en estadios haploides. La Claudina 6 fue 
negativa ya que se asocia a procesos oncológicos testiculares que ninguno de nuestros 
pacientes presentó. Las uniones celulares estrechas modifican la membrana de los 
espermatozoides durante su proceso de maduración en el túbulo seminal interactuando 
dinámicamente y cambiando la expresión proteica dejando abierta una línea de 
investigación de segundos mensajeros de transcripción nuclear. 
 
TABLAS Y FIGURAS 
Cuadro 1. 
 
Resultado de patología Casos 
Normal 10 
Síndrome de Células solo 
Sertoli 
5 
Hipoespermatogénesis 3 
Fibrosis hialina tubular 1 
Arresto en la maduración 1 
Total 20 
 
Cuadro 2. 
 
Grupos Resultado de patología Casos 
Grupo 1 
Síndrome de solo células de Sertoli, 
Fibrosis hialina tubular y Arresto en 
la maduración 
7 
Grupo 2 Normal e hipoespermatogénesis 13 
Total 20 
 
	
	
21	
	
Imágen 1. 
 
 
 
Imágen 2. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Imágen	 1	 .	 Micrografía	 panoramica	 de	 biopsia	 de	 testículo	 con	 aumento	 (100x)	 donde	
Señalamos	marca	positiva	de	Claudina	1	en	células	de	Leydig	y	células	espermáticas.		
Imágen	 2.	Micrografía	 panoramica	 de	 biopsia	 de	 testículo	 con	 aumento	 (100x)	 donde	 	 se	
señala	sitio	de	exresión	de	la	claudina	3	en	células	de	Sertoli	y	células	germinales	
	
	
22	
	
 
Imágen 3. 
 
 
 
Imágen 4. 
 
 
 
 
 
 
 
Imágen	3.	Micrografía	panoramica	de	biopsia	de	testículo	con	aumento	(100x)	donde		se	
señala	sitio	de	exresión	de	la	claudina	4	en	células	de	Sertoli.	
Imágen	4.	Micrografía	panoramica	de	biopsia	de	testículo	con	aumento	(100x)	se	señala	
espermatogonia.	No	presenta	marca	de	Claudina	6.	
	
	
23	
	
 
Cronograma de actividades. 
 
Diciembre 
2016 
 
Enero 
2017 
 
Febrero 
2017 
 
Febrero 
2017 
 
Marzo-Abril 
2017 
Recolección de 
bibliografía 
 
Elaboración del 
protocolo 
 
Sometimiento y 
probable 
aprobación 
 
Recolección de 
datos y 
análisis de 
datos 
 
Presentación de 
resultados y 
publicación del 
documento 
 
 
 
 
 CARTA DE CONSENTIMIENTO INFORMADO (ADULTOS) 
CARTA DE CONSENTIMIENTO INFORMADO PARA PARTICIPACION EN PROTOCOLOS DE INVESTIGACIÓN 
Nombre del estudio Protocolo de Investigación Inmunomarcaje Andro 
Patrocinador externo (Si aplica) ART Reproducción 
Universidad Nacional Autónoma de México 
Procedimientos Seminograma y toma de muestra de sangre periférica 
	
	
24	
	
 
En caso de colección de material biológico (si aplica): 
 No autorizo que se tome la muestra 
 Si autorizo que se tome la muestra solo para este estudio 
 Si autorizo que se tome la muestra para este estudio y estudios futuros 
 
 
 
Nombre y firma del sujeto Nombre y firma de testigo 
 
 
 
Nombre y firma de testigo 
 
 
 
Lugar y Fecha 
Número de Registro 
	
	
25	
	
Referencias bibliográfícas 
1. Marcia C Inhorn, Pasquale Patrizio. Infertility around the globe: new thinking on 
gender reproductive technologies and global movements in the 21 st century. 
Human reproduction update 2015 Jul ;21(4):411-26 
2. Godoy-Morales HS, Mamani- Cancino AD, Ponce-Barberena P, Lozano-Sánchez 
JM y col. Evaluación de los parámetros seminales en parejas con infertilidad. Rev 
Mex Reprod 2013;5:178-185. 
3. World Health Organization (2010) WHO laboratory manual for the examination 
and processing of human semen. (5th edn.), Geneva pp. 271. � 
4. Pacey AA (2012) Assessment of male factor. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol 
26(6): 739-746. 
5. Benedict A. Enumeration of spermatozoids. NY State J Med 1910;191:1169. 
6. Macomber O, Sanders M. The spermatozoa count. Its value in the diagnosis, 
prognosis and treatment of sterility. N Engl J Med 1929;200:981. 
7. Cocuzza M, Alvarenga C, Pagani R. The epidemiology and etiology of 
azoospermia. Clinics 2013;68(S1):15-26. 
8. V. Vloeberghs, G. Verheyen, P. Haentjens et al. How successful is TESE-ICSI in 
couples with non-obstructive azoospermia? Human Reproduction, Vol.30, No.8 
pp. 1790–1796, 2015 
9. Diana S. Chu and Diane C. Shakes. Spermatogenesis. Springer Science. 2013:p 
171-196. 
10. Sandro C. Esteves,
 
Ricardo Miyaoka et al. An update on sperm retrieval 
techniques for azoospermic males. CLINICS 2013;68(S1):99-110. 
11. Huma Mushtaq, Saeed Alam et al. Histopathological Patterns of Testicular 
Biopsies in Male Infertility. Journal of Islamabad Medical & Dental College 
(JIMDC);2013;2(4):81-86 
12. Su-Ren Chen and Yi-Xun Liu. Regulation of spermatogonial stem cell self-
renewal and spermatocyte meiosis by Sertoli cell signaling. Reproduction (2015) 
149 R159–R167 
13. C. Krausz, C. Chianese�et al. The Y chromosome-linked copy number variations
and male fertility. J. Endocrinol. Invest. 34: 376-382, 2011. 
14. Szczygiet M, Kurpisz M. Chromosomal anomalies in human gametes and pre-
implantation embryos, and their potential effect on reproduction. Andrologia 
2001;33(5):249-65. 
15. Aizenstein RI, Di Domenico D, Wilbur AC. Testicular microlithiasis: association 
with male infertility. J Clin Ultrasound 1998;26(4):195-8. 
16. Jamal AA, Mansoor I. Morphological profile of testicular biopsies associated with 
infertility. Saudi Med J 2001;22(11): 992-4. 
	
	
26	
	
17. Furuse M. Molecular basis of the core structure of tight junctions. Cold Spring 
Harb Perspect Biol. 2010 Jan;2(1):a002907. � 
18. Gregory M, Dufresne J, Hermo L, Cyr D. Claudin-1 is not restricted to tight 
junctions in the rat epididymis. Endocrinology. 2001 Feb;142(2):854–63. 
19. Godoy Morales MD et al. Could sperm expression of Claudin 1 represent a novel 
parameter for sperm quality?. J Assist Reprod Genet (2016) 33:1693 8071– 
20. Niloufar Ilani, Nancy Armanious, Yan-He Lue et al. Integrity of the blood–testis 
barrier in healthy men after suppression of spermatogenesis with testosterone and 
levonorgestrel. Human Reproduction, Vol.27, No.12 pp. 3403–3411, 2012. 
21. Gerd Krause, Lars Winkler, Sebastian L. Structure and function of claudins. 
Biochimica et Biophysica Acta 1778 (2008) 631–645 
22. Mario Mancini. Sertoli Cell Only Syndrome. Springer Berlin Heidelberg. 2009. pp 
1921-1922 
23. Dorothee Günzel and Alan S. L. Yu. Claudins and the modulation of tight junction 
permeability. Physiol Rev 93: 525–569, 2013 
24. José Manuel Lozano Sánchez; Héctor Salvador Godoy Morales et al. The 
expression of claudin-1 in the human sperm improves early embryo development . 
Andrology. 4:54, MAY 2016 
25. Morrow CM, Mruk D, Cheng CY, Hess RA. Claudin and occludin expression and 
function in the seminiferous epithelium. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 365: 
1679 – 1696, 2010. 
26. Gye M. C. 2003bExpression of claudin-1 in mouse testis. Arch. Androl. 49, 271–
279. 
27. Morita K, Sasaki H, Fujimoto K, Furuse M, Tsukita S. Claudin-11/OSP-based 
tight junctions of myelin sheaths in brain and Sertolicells in testis. J Cell Biol 145: 
579 –588, 1999. � 
28. Meng, J., Holdcraft, R. W., Shima, J. E., Griswold, M. D. & Braun, R. E. 2005 
Androgens regulate the permeability of the blood – testis barrier. Proc. Natl Acad. 
Sci. USA 102, 16 696 – 16 700. 
29. Kaitu’u-Lino, T. J., Sluka, P., Foo, C. F. & Stanton, P. G. 2007 Claudin-11 
expression and localisation is regulated by androgens in rat Sertoli cells in vitro. 
Reproduction 133, 1169–1179. 
30. Lise Aksglæde, Anne M. Wikström et al. Natural history of seminiferous tubule 
degeneration in Klinefelter síndrome. Hum Reprod Update (2006) 12 (1): 39-48. 
31. Romanov V et al. A claudin 3 and claudin 4-targeted Clostridium perfringens 
protoxin is selectively cytotoxic to PSA-producing prostate cancer cells. Cancer 
Letters 351 (2014) 260–264 
32. Lei Ding et al. The claudin family of proteins in human malignancy: a clinical 
perspective. Cancer Management and Research 2013:5 367–375 
33. Länsi et al. Twist is inversely associated with claudins in germ cell tumors of the 
testis. The Authors Journal Compilation, APMIS 118: 640–647. 
	
	
27	
	
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
34. Szczygiet M, Kurpisz M. Chromosomal anomalies in human gametes and pre-
implantation embryos, and their potential effect on reproduction. Andrologia 
2001;33(5):249-65. 
35. Aizenstein RI, Di Domenico D, Wilbur AC. Testicular microlithiasis: association 
with male infertility. J Clin Ultrasound 1998;26(4):195-8. 
36. Jamal AA, Mansoor I. Morphological profile of testicular biopsies associated with 
infertility. Saudi Med J 2001;22(11): 992-4. 
 
	Portada 
	Índice 
	Resumen 
	Texto 
	Conclusiones 
	Referencias Bibliográficas