Deteccion-del-virus-del-Oeste-del-Nilo-por-NAT-en-candidatos-a-donacion-sangunea--estudio-multicentrico

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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO 
 
FACULTAD DE MEDICINA 
DIVISION DE ESTUDIOS DE POSTGRADO 
INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL 
HOSPITAL GENERAL CENTRO MEDICO NACIONAL 
“LA RAZA” 
 
 
 
 
DETECCION DEL VIRUS DEL OESTE DEL NILO POR NAT EN 
CANDIDATOS A DONACION SANGUINEA, “ESTUDIO 
MULTICENTRICO” 
 
 
 
T E S I S 
 
 
 
PARA OBTENER EL TITULO DE: 
 
PATOLOGIA CLINICA 
 
 
P R E S E N T A : 
 
DR. RAFAEL MAGAÑA DUARTE 
 
 
A S E S O R : 
 
DRA BARBARA A. I. NOVELO GARZA 
 
 
 
 
MEXICO, D.F. 2009 
 
 
 
 
UNAM – Dirección General de Bibliotecas 
Tesis Digitales 
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AGRADECIMIENTOS 
 
 
 
A MI ESPOSA E HIJOS 
 
POR TODO SU APOYO Y COMPRENSION, POR SER QUIENES ME MOTIVARON EN 
MOMENTOS DIFICILES. 
 
 
 
 
 
A MIS PADRES 
 
POR TODO EL APOYO INCONDICIONAL QUE ME HAN BRINDADO DURANTE 
TODA MI VIDA, POR SER QUIENES SIMENTARON MIS BASES, E IMPULSARME EN 
TODO MOMENTO Y PERMITIR LO QUE HOY DIA SOY. 
 
 
 
 
A TODOS LOS QUE COLABORARON CON MI FORMACION COMO 
ESPECIALISTA 
 
POR SU PACIENCIA, TIEMPO, ATENCIONES Y AMISTAD. 
 
 
 
 
 
 
 
GRACIAS 
 
 
 
 
INVESTIGADORES 
 
 
 
1.- Banco Central de Sangre (BCS) Centro Médico Nacional (CMN) La 
Raza. IMSS. 
Investigador Principal: 
Dra. Bárbara A. I. Novelo Garza1 
Dirección Banco Central de Sangre Centro Médico Nacional La Raza IMSS 
Domicilio: Seris y Consulado Col. La Raza S/N Delegación Azcapotzalco 
CP 02990 México DF. Tel: 57245900 Ext 24200 
Investigadores Asociados: 
Dr. Rafael Magaña Duarte 
Médico Residente de 3er. Año de Patología Clínica UMAE Hospital General 
Centro Médico Nacional La Raza 
Dra. Araceli Malagón Martínez 
Dr. Gamaliel Benítez Arvizu 
Dr. Ángel Guerra Márquez 
QFB Luz del Carmen Mávil Lara 
 
2.- Banco Central de Sangre del Centro Médico de Occidente. IMSS 
Dra. Ma. Isabel Hernández Lugo 
 
3.- Banco de Sangre de la Unidad Médica de Alta Especialidad Mérida, 
Yucatán. IMSS 
Dr. Jorge Eduardo Pérez Osorio 
QFB Rodríguez Carvajal Otilia del Carmen 
 
4.- Banco Central de Sangre Centro Médico Nacional SIGLO XXI. IMSS 
Dr. Raúl Ambríz Fernández 
Dra. Rebeca Rivera López 
 
5.- Banco de Sangre de la Unidad Médica de Alta Especialidad, 
Monterrey, Nuevo. León. IMSS 
Dr. González Santos Mario Alberto 
Dra. González Cabello Diana 
QCB Hernández Bonilla Sandra. 
QCB Fernández López Yolanda Máyela 
 
 
 
 
 
 
 
 
INDICE PAGINA 
 
 
 
 
RESUMEN………………………………………………………………………….1 
 
ANTECEDENTES CIENTIFICOS………………………………………………….2 
 
JUSTIFICACION………………………………………………………………….7 
 
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA……………………………………………..8 
 
OBJETIVO GENERAL……………………………………………………………..9 
 
HIPOTESIS…………………………………………………………………………10 
 
MATERIAL Y METODOS………………………………………………………….11 
 
RESULTADOS……………………………………………………………………...13 
 
DISCUSION………………………………………………………………………..14 
 
CONCLUSIONES………………………………………………………………….16 
 
ASPECTOS ETICOS………………………………………………………………..17 
 
RECURSOS FINANCIAMIENTO Y FACTIBILIDAD……………………………..18 
 
ASPECTOS DE BIOSEGURIDAD………………………………………………….19 
 
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS………………………………………………..21 
 
ANEXOS…………………………………………………………………………....23 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RESUMEN 
 
 
 
La infección del Virus del Oeste del Nilo (VON) es una infección emergente 
en los Estados Unidos y Canadá, tras reportarse casos de neuro-infecciones 
severas y estar asociada su transmisión por transfusión sanguínea, se 
implementa la detección de RNA viral mediante amplificación de ácidos 
nucleicos (NAT), debido a que los individuos asintomáticos donaron sangre 
en esta etapa de viremia. 
En México se desconoce cual es la condición epidemiológica del VON en 
humanos, existen reportes de un caso autóctono y tres casos probables 
reportados en los últimos años. 
Objetivo: Determinar la prevalencia de infección activa de VON en 
candidatos a donación sanguínea. 
Metodología: Se realizo un estudio descriptivo, observacional, transversal y 
prospectivo (Tipo encuesta) piloto. Se estudiaron 5141muestras de 
candidatos a donación sanguínea en 2 de los 5 centros de donación de 
sangre, que inicialmente participarían de Noviembre del 2007 a Septiembre 
del 2008. A cada candidato a donación sanguínea se le realizo la Historia 
clínica del donador y la determinación de RNA viral mediante 
amplificación mediada por transcripción (TMA) del ensayo Procleix WNV, 
tecnología de CHIRON BLOOD TESTING. Las muestras sanguíneas de los 
candidatos que resultaron positivas fueron enviadas al Centro Médico 
Nacional la Raza para repetir estudio y de ser positivas se enviaron a 
laboratorio de referencia para confirmación y genotipo. 
Resultados: Se corrieron en total 5141 muestras con resultados negativos en 
el 100 % de las muestras. 
Conclusiones: Aun cuando el resultado de todas las muestras fue negativo, 
no implica que no haya presencia de VON, por lo cual es conveniente en un 
futuro realizar la búsqueda en zonas endémicas del país ya conocidas y en 
poblaciones de mayor riesgo. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ANTECEDENTES CIENTIFICOS:
 
 
El Virus del Oeste del Nilo (VON) fue descubierto en Africa en 1937, en sangre 
de una mujer en Uganda provincia del oeste del Nilo, en Israel en 1957 se 
detecta el primer caso registrado de meningoencefalitis
VON y a finales de la década de 1990 en Rumania y Rusia. 
Como enfermedad emergente en 1999 se presenta en Estados Unidos de 
Norteamérica el primer brote en Queens, New York con 62 casos: 59 
reportados como meningoencefalitis y 3 casos 
Canada en Agosto del 2001 con 462 casos. 
En los años subsecuentes como puede observarse en la grafica 1, se aprecia 
claramente un incremento gradual de casos teniendo un repunte en el 
2003 y nuevamente observando este com
2006. Por otro lado fue particul
casos severamente complicados con meningoencefalitis fue mayor (2,946 
meningoencefalitis) en el 2002.
Hasta Diciembre del 2008 se han reportado en es
notorio una alta prevalencia en los estados colindantes con nuestro país 
como Texas y California 
 
 
Grafica 1 Número de casos de VON en humanos por año en Estados Unidos 
de América. 
 
 
 
 
 
 
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
1999 2000 2001
62 21 66
ANTECEDENTES CIENTIFICOS: 
El Virus del Oeste del Nilo (VON) fue descubierto en Africa en 1937, en sangre 
de una mujer en Uganda provincia del oeste del Nilo, en Israel en 1957 se 
detecta el primer caso registrado de meningoencefalitis severa causado por 
VON y a finales de la década de 1990 en Rumania y Rusia. 
Como enfermedad emergente en 1999 se presenta en Estados Unidos de 
Norteamérica el primer brote en Queens, New York con 62 casos: 59 
reportados como meningoencefalitis y 3 casos como síndrome febril y en 
Canada en Agosto del 2001 con 462 casos. 1, 2 
En los años subsecuentes como puede observarse en la grafica 1, se aprecia 
claramente un incremento gradual de casos teniendo un repunte en el 
2003 y nuevamente observando este comportamiento ascendente para el 
2006. Por otro lado fue particularmente importante que el nú
casos severamente complicados con meningoencefalitis fue mayor (2,946 
meningoencefalitis) en el 2002. 
Hasta Diciembre del 2008 se han reportado enese país 1,356 casos siendo 
notorio una alta prevalencia en los estados colindantes con nuestro país 
como Texas y California 1, 2, 3 Ver Grafica 1. 
Número de casos de VON en humanos por año en Estados Unidos 
2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008
66
4156
9862
2539
3000
4269
3630
1356
El Virus del Oeste del Nilo (VON) fue descubierto en Africa en 1937, en sangre 
de una mujer en Uganda provincia del oeste del Nilo, en Israel en 1957 se 
severa causado por 
Como enfermedad emergente en 1999 se presenta en Estados Unidos de 
Norteamérica el primer brote en Queens, New York con 62 casos: 59 
como síndrome febril y en 
En los años subsecuentes como puede observarse en la grafica 1, se aprecia 
claramente un incremento gradual de casos teniendo un repunte en el 
portamiento ascendente para el 
armente importante que el número de 
casos severamente complicados con meningoencefalitis fue mayor (2,946 
e país 1,356 casos siendo 
notorio una alta prevalencia en los estados colindantes con nuestro país 
Número de casos de VON en humanos por año en Estados Unidos 
2008
1356
 
El VON en México á sido bien documentado desde el año 2002 en diferentes 
especies animales, principalmente aves y equinos. 4, 5, 6. 
En un estudio realizado por el Centro Nacional de la Transfusión, por el Dr. 
Sergio Sánchez Guerrero y cols., de 3,856 muestras recolectadas en 29 
estados de la república mexicana, de Julio a Agosto del 2004, se encontró 
1 caso positivo mediante Ácidos Nucleicos (procleix), confirmado también 
por anticuerpos (Ac) IgM por ELISA en el norte de Chihuahua, que 
represento 0.03% a nivel nacional y 1 caso por cada 146 muestras (0.7%) en 
el estado de Chihuahua. 7 
En Julio del 2004 en la república mexicana se reporta el primer caso 
autóctono de VON en humano en el estado de Sonora, inicialmente 
diagnosticado como dengue, pero finalmente confirmado por cultivo 
celular como VON. En éste mismo año, se presento otro caso en Coahuila 
que curso con un cuadro neurológico diagnosticado como probable VON 
fundamentado en títulos de Ac mediante ELISA (Ac anti-VON IgG de 1:2560 
e IgM 1:40) y en 2006 se notifica de un caso en Santa María Tonameca, 
Oaxaca.8, 9,10 
Entre Julio del 2003 a Julio del 2006 en el noreste de la república mexicana, 
se estudiaron pacientes con infección activa por Dengue, donde el 79.5% 
de los sueros estudiados fueron positivos para Ac IgG contra VON, lo que 
confirma una reacción cruzada por Ac entre ambos virus, complicando el 
diagnostico de VON, ya que la prevalencia de Dengue es alta en nuestro 
país (40%) y la infección de VON puede ser falsamente diagnosticada como 
Dengue.11 
Es factible sospechar ante el creciente número de casos de Dengue en el 
norte de nuestro país del 2005 a la fecha, junto con el repunte de VON en el 
sur de EUA, que algunos casos de dengue sean en realidad VON, como se 
sugiere por Fernández-Salas I y cols. 12 
 
Aunque la principal forma de infección se lleva acabó por la picadura de 
mosquitos de diferentes géneros, existen otras vías de transmisión: Exposición 
ocupacional en laboratorio, trasplantes de órganos, alimentación al seno 
materno, vía transplacentaria y trasfusión sanguínea.7,13 
En EUA se reporto el primer caso de VON adquirido por transfusión 
sanguínea en 2002, de los 4156 casos documentados en ese año 23 casos 
(0.55%) fueron asociados a transfusión sanguínea, 43% fueron pacientes 
inmunocomprometidos con una mortalidad del 29%, extraordinariamente 
alta en comparación a la esperada cuando la infección es adquirida por 
la picadura del mosquito infectado en la que se tiene una mortalidad menor 
al 1 %. Por tal motivo ese país implementa la prueba de detección de VON 
en bancos de sangre, en ese mismo año el riesgo estimado de VON por 
transfusión sanguínea fue 1.46 a 12.33 casos por cada 10,000 unidades 
transfundidas. Posterior a la implementación de la técnica de Acidos 
Nucleicos (NAT) que permite la detección del genoma viral el riesgo 
disminuyo a 0.44 casos por cada 10,000 donaciones. 14,15 
 
 
Tras el uso de NAT se identificaron 818 donadores sanguíneos en fase de 
viremia en 2003, 224 en 2004, 417 en 2005, 361 en 2006, 352 en 2007 y 174 en 
2008, lo que implica un descarte importante de unidades sanguíneas con 
VON y la consecuente prevención de transmisión de esta infección. 
Grafica 2 
 
 
 
 
Grafica 2 Muestra el número de donadores sanguíneos identificados en 
fase de viremia del año 2003 al 2008.
 
 
 
 
 
Tras la implementación de la prueba de NAT en los bancos de sangre de 
Norteamérica se observo una disminución de la transmisión de VON por 
trasfusión: 23 casos en el
en el 2005 y dos en el 2006, estos últimos fueron pacientes inmunosuprimidos 
que desarrollaron enfermedad de VON neuroinvasiva después de recibir 
componentes sanguíneos de 1 donador asintomático infectad
 
 
HISTORIA NATURAL DE LA ENFERMEDAD.
El virus de VON pertenece a la familia 
virus RNA de una sola cadena transmitido de forma natural por la picadura 
de mosquitos, con pico estacional durante Junio a Noviembre.
El tiempo en que es detectable el genoma de VON es 7 días antes del inicio 
de la enfermedad, etapa asintomática pero altamente infectante y 
precisamente la de mayor impacto en los donadores “clínicamente sanos”, 
alcanzando 150 PFU/ml 2 a 3 días an
elevándose IgM al inicio del cuadro clínico y la IgG con elevación 
0
100
200
300
400
500
600
700
800
900
2003 2004
818
224
Tras el uso de NAT se identificaron 818 donadores sanguíneos en fase de 
en 2003, 224 en 2004, 417 en 2005, 361 en 2006, 352 en 2007 y 174 en 
2008, lo que implica un descarte importante de unidades sanguíneas con 
VON y la consecuente prevención de transmisión de esta infección. 
número de donadores sanguíneos identificados en 
fase de viremia del año 2003 al 2008. 
Tras la implementación de la prueba de NAT en los bancos de sangre de 
Norteamérica se observo una disminución de la transmisión de VON por 
trasfusión: 23 casos en el 2002, a 6 casos en el 2003, uno en el 2004, ninguno 
en el 2005 y dos en el 2006, estos últimos fueron pacientes inmunosuprimidos 
que desarrollaron enfermedad de VON neuroinvasiva después de recibir 
componentes sanguíneos de 1 donador asintomático infectad
HISTORIA NATURAL DE LA ENFERMEDAD. 
El virus de VON pertenece a la familia Flaviviridae, Genero 
virus RNA de una sola cadena transmitido de forma natural por la picadura 
de mosquitos, con pico estacional durante Junio a Noviembre.
El tiempo en que es detectable el genoma de VON es 7 días antes del inicio 
de la enfermedad, etapa asintomática pero altamente infectante y 
precisamente la de mayor impacto en los donadores “clínicamente sanos”, 
alcanzando 150 PFU/ml 2 a 3 días antes de la aparición de la sintomatología 
elevándose IgM al inicio del cuadro clínico y la IgG con elevación 
2005 2006 2007 2008
417
361
352
174
Tras el uso de NAT se identificaron 818 donadores sanguíneos en fase de 
en 2003, 224 en 2004, 417 en 2005, 361 en 2006, 352 en 2007 y 174 en 
2008, lo que implica un descarte importante de unidades sanguíneas con 
VON y la consecuente prevención de transmisión de esta infección. 17 Ver 
número de donadores sanguíneos identificados en 
Tras la implementación de la prueba de NAT en los bancos de sangre de 
Norteamérica se observo una disminución de la transmisión de VON por 
2002, a 6 casos en el 2003, uno en el 2004, ninguno 
en el 2005 y dos en el 2006, estos últimos fueron pacientes inmunosuprimidos 
que desarrollaron enfermedad de VON neuroinvasiva después de recibir 
componentes sanguíneos de 1 donador asintomático infectado. 16 
, Genero Flavivirus, es un 
virus RNA de una sola cadena transmitido de forma natural por la picadura 
de mosquitos, con pico estacional durante Junio a Noviembre. 11, 18 
El tiempo en que es detectable el genoma de VON es 7 días antes del inicio 
de la enfermedad, etapa asintomática pero altamente infectante y 
precisamente la de mayor impactoen los donadores “clínicamente sanos”, 
tes de la aparición de la sintomatología 
elevándose IgM al inicio del cuadro clínico y la IgG con elevación 
importante 3 semanas posterior a la infección. La presencia de IgM persiste 
más de 6 meses y hasta 500 días después. 
Ver Grafica 3 
 
 
Grafica 3
 
 
 
 
 
El tiempo en el que aparece el cuadro clínico es normalmente 8 días 
posterior a la infección manifestándose como un cuadro gripal leve, 
Síndrome febril o llegando hasta la Meningoencefalitis, esto en el 20% de los 
casos, ya que un 80% cursan asintomáti
 
El diagnostico de VON se basa principalmente en la detección de 
anticuerpos IgM e IgG en plasma por ELISA, aunque es mas sensible la 
detección de estos en Liquido Cefalorraquídeo, la detección de estos 
anticuerpos es de 7 a 14 días posteriores
detectar a individuos infectantes (asintomáticos), por lo que no es útil como 
prueba de tamizaje en los servicios de banco de sangre al igual que el 
Cultivo celular considerado el estándar de oro. 
Se han utilizado técnicas de biología molecular que permiten la detección 
del VON previo a la elevación de anticuerpos y por ende en individuos 
asintomáticos siendo estas pruebas de gran valor para el tamizaje en los 
bancos de sangre, entre las pruebas que se cuentan son la re
cadena de la polimerasa (PCR) y principalmente NAT; siendo la técnica de 
NAT la mas utilizada debido a sus caracteriscas, acortando el periodo con 
una especificidad mayor del 96.7%. 
importante 3 semanas posterior a la infección. La presencia de IgM persiste 
más de 6 meses y hasta 500 días después. 18 
 
El tiempo en el que aparece el cuadro clínico es normalmente 8 días 
posterior a la infección manifestándose como un cuadro gripal leve, 
Síndrome febril o llegando hasta la Meningoencefalitis, esto en el 20% de los 
casos, ya que un 80% cursan asintomáticos. 11, 18 
El diagnostico de VON se basa principalmente en la detección de 
anticuerpos IgM e IgG en plasma por ELISA, aunque es mas sensible la 
detección de estos en Liquido Cefalorraquídeo, la detección de estos 
anticuerpos es de 7 a 14 días posteriores a la infección, lo que no permite 
detectar a individuos infectantes (asintomáticos), por lo que no es útil como 
prueba de tamizaje en los servicios de banco de sangre al igual que el 
Cultivo celular considerado el estándar de oro. 
icas de biología molecular que permiten la detección 
del VON previo a la elevación de anticuerpos y por ende en individuos 
asintomáticos siendo estas pruebas de gran valor para el tamizaje en los 
bancos de sangre, entre las pruebas que se cuentan son la re
cadena de la polimerasa (PCR) y principalmente NAT; siendo la técnica de 
NAT la mas utilizada debido a sus caracteriscas, acortando el periodo con 
una especificidad mayor del 96.7%. 7, 18, 19 
importante 3 semanas posterior a la infección. La presencia de IgM persiste 
El tiempo en el que aparece el cuadro clínico es normalmente 8 días 
posterior a la infección manifestándose como un cuadro gripal leve, 
Síndrome febril o llegando hasta la Meningoencefalitis, esto en el 20% de los 
El diagnostico de VON se basa principalmente en la detección de 
anticuerpos IgM e IgG en plasma por ELISA, aunque es mas sensible la 
detección de estos en Liquido Cefalorraquídeo, la detección de estos 
a la infección, lo que no permite 
detectar a individuos infectantes (asintomáticos), por lo que no es útil como 
prueba de tamizaje en los servicios de banco de sangre al igual que el 
icas de biología molecular que permiten la detección 
del VON previo a la elevación de anticuerpos y por ende en individuos 
asintomáticos siendo estas pruebas de gran valor para el tamizaje en los 
bancos de sangre, entre las pruebas que se cuentan son la reacción en 
cadena de la polimerasa (PCR) y principalmente NAT; siendo la técnica de 
NAT la mas utilizada debido a sus caracteriscas, acortando el periodo con 
La detección de VON por NAT en EUA y Canada se inicio en 2003, lo cual 
previno cientos de casos de VON por transfusión sanguínea. 17, 20, 21 Ver 
Grafica 2 
 
Es necesario conocer la prevalencia de VON en nuestro país mediante un 
estudio multicentrico para inferir la importancia de su transmisión por 
transfusión sanguínea. 
 
 
 
 
 
JUSTIFICACION. 
 
 
El VON es actualmente considerada una infección emergente en Estados 
Unidos de Norteamérica y Canada, ha sido ampliamente documentada su 
transmisión por trasfusión, siendo esta vía con la cual se asocian los casos 
mas graves y de mayor mortalidad en pacientes inmunocomprometidos. 
Debido a su diseminación de norte a sur y a su repunte en el año 2006, así 
como el reporte de casos autóctonos en México se hace necesario conocer 
la prevalencia de la infección de VON en nuestros candidatos a donación 
para establecer, de ser necesario estrategias de selección del donador o 
medidas de tamizaje para mantener la seguridad transfusional. 
 
 
 
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA. 
 
 
En México existen datos parciales documentados de la presencia del VON 
en humanos, aunado a su importancia demostrada por transfusión 
sanguínea, estos dos hechos, nos obligan a conocer la prevalencia de la 
infección activa del VON en nuestro medio. 
 
¿Cuál es la prevalencia de infección activa de VON en candidatos a 
donación sanguínea? 
 
 
 
 
 
OBJETIVO GENERAL. 
 
 
Determinar la prevalencia de infección activa de VON en candidatos a 
donación sanguínea. 
 
 
 
 
HIPOTESIS. 
No requiere 
 
 
 
 
 
 
MATERIAL Y METODOS. 
 
 
Universo de trabajo: 
Candidatos a donación sanguínea en cada uno de los 5 centros de 
recolección de la muestra: Banco Central de Sangre (BCS) Centro Médico 
Nacional (CMN) La Raza, BCS CMN Siglo XXI de Cd. De México, BCS CMN de 
Occidente Guadalajara, Banco de Sangre Unidad Médica de Alta 
Especialidad (UMAE) Monterrey y Banco de Sangre UMAE Mérida. 
 
Tipo de estudio: 
Descriptivo, observacional, y transversal (Tipo encuesta) piloto. 
 
Sujeto de estudio: Candidato a donación sanguínea. 
Definición. Todo individuo aparentemente sano que se presento a los Bancos 
de Sangre con la intención de donar y que se le realizo historia clínica del 
donador (Anexo 1). 
 
Variable de interés: Prevalencia de infección activa. 
Definición conceptual. Proporción de candidatos a donación con detección 
de VON del total de candidatos a donación. 
Definición Operacional. La proporción de casos de VON en sangre de 
candidatos a donación sanguínea se realizo mediante la detección de 
RNA viral con el equipo Procleix-WNVR tecnología de CHIRON BLOOD 
TESTING (Ver anexo 2) el cual combina cuatro metodologías: captura de 
híbridos por perlas magnéticas, amplificación mediada por transcripción 
(TMA), marcaje del RNA amplificado por protección de híbridos y 
detección por luminometría. Las muestras doblemente reactivas fueron 
enviadas al BCS CMN La Raza para correr una tercer prueba, en caso 
positivo se enviaron a un laboratorio de referencia internacional para 
confirmación y detección de Ac IgM e IgG por ELISA y Genotipo. 
Indicador: Presencia o ausencia de infección por VON. 
Escala de Medición: Nominal (dicotómica) 
Criterios de inclusión: 
Todos aquellos candidatos a donación sanguínea que aceptaron participar 
mediante la firma de la carta de consentimiento informado y que se les 
haya realizado historia clínica del donador. 
Criterios de exclusión: No aplica. 
Criterios de eliminación: 
Complicaciones técnicas o logísticas que impidieron obtener y/o procesar la 
muestra de sangre venosa. 
 
 
Descripción General del Estudio: 
Todos los candidatos a donación sanguínea que se presentaron en 
cualquiera de los 5 centros de estudio participantes, que se les realizo la 
historia clínica del donador y que aceptaron participar mediante la firma de 
consentimiento informado por escrito (ver anexo 3), durante el periodo de 
Noviembre del 2007 a Septiembre del 2008. 
Se realizo un estudio multicentrico en los siguientes 5 Centros que contaron 
coninfraestructura necesaria, tanto para la captación y procesamiento de 
las muestras: 
Dos en Cd México en BCS C.M.N. La Raza y BCS C.M.N. Siglo XXI, 1 en Banco 
de Sangre (BS) UMAE Monterrey, Nuevo León; 1 en Banco de Sangre C.M.N. 
de Occidente Guadalajara, Jalisco; 1 en BS UMAE Mérida, Yucatan. 
Se analizaran 5141 muestras de los centros de recolección, obtenidas de 
candidatos a donación sanguínea captados durante los meses de 
Noviembre del 2007 a Septiembre del 2008. 
Cada muestra sanguínea se recolecto en 2 tubos Vacutainer PPT (Plasma 
Preparation Tube) y uno de ellos fue utilizado para realizar la TMA para 
VON. 
Las muestras positivas se corrieron por duplicado, y las repetidamente 
reactivas fueron enviadas con la historia clínica del donador al BCS CMN La 
Raza para nuevo estudio, junto con el segundo tubo recolectado, de resultar 
nuevamente reactivas se enviaron a un laboratorio de referencia 
internacional para corroborar diagnóstico, detección de Ac IgM e IgG y 
realizar genotipo viral. 
Ver Figura 4 
 
 
Muestras positivas se corrieron por duplicado 
En caso positivo En caso negativo 
 
 Se descarta 
Se corrió una tercera muestra en BCS CMN La Raza 
En caso positivo En caso negativo 
 
 Se descarta 
Se envió a laboratorio de referencia internacional para confirmación, detección de Ac IgM e 
IgG por ElISA y Genotipo viral 
 
Figura 4 
 
Tamaño de la muestra: Se realizo un estudio piloto con 5141 muestras. 
 
 
 
 
 
 
 
Resultados: Se corrieron en total 5141 muestras con resultados negativos en 
el 100 % de las muestras. 
 
 
 
 
 
 
 
Discusión: El hecho de no encontrar casos positivos de VON en nuestra 
población de candidatos a donación sanguínea, no implica que no haya 
presencia del VON en el país, ya que sería algo adecuado en el futuro llevar 
acabó la búsqueda de VON en una población más seleccionada como 
enfermos de vías respiratorias y síndromes febriles, así como aquellos casos 
de infecciones virales del sistema nervioso central, ya que nuestra población 
es generalmente sana en los bancos de sangre debido a los filtros aplicados 
para la selección de donadores aunado al período de viremia tan corto del 
VON, además de que no participaron los bancos de sangre que pudieran 
tener una mayor probabilidad de encontrar individuos infectados. Por otro 
lado también es conveniente tomar en cuenta que quizás el tamaño de la 
muestra no fue el adecuado ya qué por problemas de logística algunos de 
los centros no recolectaron muestras, en tanto que otros perdieron las 
muestras por falta de seguimiento de la red fría, recolectando al final solo 
5,141 muestras de las 25,000 contempladas inicialmente y de acuerdo a 
calculo de muestra con IC 99% y alfa 0.01 nuestro tamaño de muestra 
necesario era de 9,972. Hay que considerar también que en nuestro país por 
investigaciones previas los estados que han presentado un número mayor 
de animales infectados por VON es en el norte del país y sureste mexicano, 
sitios de los cuales lamentablemente no pudimos obtener muestras, en los 
cuales sería muy conveniente realizar estudios en un futuro con una 
población más seleccionada como la ya mencionada. Algo que en nuestro 
país a complicado probablemente de forma importante la detección del 
VON es la presencia del Dengue, ya que ambos son Flavivirus y por estudios 
previos se comprobó que las pruebas serológicas para la detección de 
Dengue presentan reacción cruzada con VON, por lo que lo ideal sería 
realizar las pruebas mediante tecnología de NAT lamentablemente el 
período de viremia es muy corto para su detección; algunos investigadores 
han propuesto que existe una protección cruzada hacia VON y 
probablemente por este fenómeno la ausencia de casos, no dejando de 
lado tampoco la posibilidad de que debido a que el VON es una 
enfermedad emergente y que hasta hace poco tiempo no se tenía 
conocimientos mayores en nuestro continente y por lo tanto tampoco la 
pericia del personal médico para detectarlo debido al gran parecido del 
cuadro clínico inicial tanto de Dengue como VON, es probable que se 
hayan diagnosticado erróneamente como Dengue, ya que inicialmente 
ambos pueden cursar con un Síndrome febril y datos de afección 
respiratoria, remitiendo muchos sin llegar a las complicaciones, además de 
que estos síntomas impiden que una persona sea candidata para donación 
sanguínea. 
 
 
 
 
 
Por otro lado debemos considerar la influencia geográfica y climática, ya 
que en los sitios con grandes precipitaciones pluviales y con extensa 
vegetación ofrecen un ambiente más propicio para los mosquitos Culex, 
que fungen como vectores, considerando esto debemos tomar en cuenta 
que los bancos de sangre se encuentran en zonas urbanas (con población 
urbana) con escaza vegetación, con un ambiente entonces menos propicio 
para la presencia de los mosquitos Culex caso contrario a los medios rurales 
donde abunda la vegetación, canales y charcas. Es entonces muy 
importante tomar en cuenta todo lo anteriormente mencionado antes de 
descartar la presencia de VON en nuestro país. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Conclusiones: Aun cuando el resultado de todas las muestras fue negativo, 
no implica que no haya presencia de VON, por lo cual es conveniente en un 
futuro realizar la búsqueda en zonas endémicas del país ya conocidas y en 
poblaciones de mayor riesgo. 
 
 
 
 
 
ASPECTOS ETICOS. 
 
 
El presente proyecto no interfirió en ningún momento con la atención del 
candidato a donación sanguínea, se le Informo de manera amplia y clara 
en qué consistía su participación asegurando la confidencialidad, además 
de que los procedimientos están de acuerdo con las normas éticas, el 
Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Investigación para la 
Salud y con la declaración de Helsinki y sus enmiendas con el código de 
Núremberg y el informe de Belmont, se anexa carta de consentimiento 
informado. Los individuos que resultaron positivos se les notifico y se les 
entregaron sus resultados, junto con las demás pruebas que se realizaron 
para el estudio del donador como marca la norma para la disposición de 
sangre y sus componentes para uso terapéutico (NOM-SSA-003-1993). 
 
 
 
 
 
 
RECURSOS FINANCIAMIENTO Y FACTIBILIDAD. 
 
 
Se conto con la infraestructura necesaria para la obtención de la muestra y 
el proceso en cada uno de los dos centros participantes, junto con el 
personal acorde para el desarrollo de este proyecto, al tener personal 
capacitado en la obtención, separación, conservación, y estudio de la 
muestra. 
Chiron Blood Testing S. De R.L. De C.V. colaboro con el equipo y su 
instalación, con reactivos, tubos, capacitación para el manejo del equipo y 
los estudios complementarios al laboratorio de referencia. 
Registros Sanitarios COFEPRIS: 
El equipo con los números 1271E2004 SSA, 1103E2004 SSA, 0618R2007 SSA y los 
reactivos con el No. 1275R2006 SSA. (Anexo 4) 
Registro en Cuadro Básico ante el IMSS: 
El equipo consta con el siguiente registro 533.342.1468 
Los reactivos están fuera del cuadro básico. 
Se anexo carta de confidencialidad (Anexo 5) donde se aclara que el 
análisis de resultados se llevo acabó por el grupo de investigadores, sin la 
participación de la empresa que proporciono el equipo y el reactivo. 
 
 
 
 
 
 
 
EN CASO PERTINENTE ASPECTOS DE BIOSEGURIDAD. 
Las muestras se manejaron en base al empleo de las normas de manejo de 
biológico-infecciosos y del laboratorio clínico. 
 
 
 
 
 
 
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 
 
 
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current situation in animals and humans. Comp Immunol Microbiol Infect Dis 
2004; 27: 343-55. 
2. Guharoy R, Gilroy SA, Noviasky JA, Ference J. West Nile Virus Infection. 
AMJ Health-Syst Pharm. 2004; 61:1235-41. 
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humans in the United States 1999 trough 2007. www.cdc.gov 
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Mexico: Evidence of Widespread Circulation since July 2002. Emerg Infect 
Dis 2003; 9:1604-7. 
5. Loroño-Pino MA, Blitvich BJ, Farfán-Ale JA et al. Serologic Evidence of 
West Nile Virus Infection in Horses, Yucatan State, Mexico. Emerg Infect Dis 
2003; 9(7): 857-9. 
6. Blitvich BJ, Fernández SI, Contreras-Cordero et al. Serologic Evidence of 
West Nile Virus Infection in Horses, Coahuila State, Mexico. Emerg Infect Dis 
2003; 9(7): 853-5. 
7. Sanchez-Guerrero SA, Romero-Estrella S, Rodríguez-Ruíz A et al. Detection 
of West Nile Virus in the Mexican blood supply, Transfusion 2004; 46:111-17. 
8. Elizondo-Quiroga D, Davis CT, Fernandez-Salas I et al. West Nile Virus 
Isolation in Human and Mosquitoes, Mexico. Emerg Infect Dis 2005; 11: 1149- 
52 
9. Díaz-Olachea CG, Maza-Flores M, Dondis-Camaño D, Lamas-Padilla BE. 
Probable encefalitis por virus del oeste del Nilo. Arch Neurocien 2005; 10 (4): 
264-6 
10. Secretaria de Salud/SAGARPA. Anuario de Virus del Oeste del Nilo 2006. 
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11. Fernandez-Salas I, Garza-Rodríguez ML, Beaty BJ y cols. Presencia del 
virus del oeste del Nilo en el noreste de México. Salud Publica Mex 2007; 
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12. Boletín de Epidemiologia, semana 19. Vigilancia, Prevención y Control 
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www.mex.opsoms.org/contenido/dengue/mexicodeng.htm. 
13. Sampathkumar P, West Nile Virus Epidemiology, Clinical presentation, 
Diagnosis and Prevention, Mayo Clin Proc; 78: 1137-44. 
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through blood transfusion in the USA 2002 .Transfusion 2003; 43: 1007-17. 
 
 
 
 
 
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Nile Virus among blood donors in the United States, 2003-2004. N Engl J Med 
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blood transfusion – South Dakota 2006, Morb Mortal Wkly, 2007; 56(4): 76-9. 
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18. Sampathkumar P. West Nile Virus: Epidemiology, Clinical Presentation, 
Diagnosis, and Prevention. Mayo Clin Proc 2003; 78:1137-44. 
19. Makar RS, Stowell CP, West Nile Virus: An Emerging Infection in 
Transfusion Medicine. Clin Microbiol Newsl 2004; 26 (9):65-70 
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West Nile Virus RNA by Nucleic Acid Amplification Test, N Engl J Med 2005; 
353: 460-7. 
21. Graigs S. H. Gen-Probe Transcription-Mediated Amplification: System 
Principles; Gen-Probe Incorporated, 10210 Genetic Center Drive, San 
Diego, CA 92121. 
 
 
 
 
 
 
 
 
ANEXOS. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ANEXO 1: Historia Clínica del donador (FBS-1) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ANEXO 2 Insertos de Técnicas. 
 
 
 
 
GEN-PROBE 
ALT WNV Assay 
Solo para su uso en Investigación 
Las características de desempeño de este producto no han sido 
establecidas. 
Equipo para 5000 Pruebas 
 
USO PREVISTO 
El Procleix® WNV Ensaye * es un cualitativo en el vitro la prueba de 
amplificación ácida nucleica para el descubrimiento de virus de Nilo 
Oriental (WNV) RNA en el plasma humano de las donaciones voluntarias de 
los componentes de sangre total y de sangre para la transfusión, y plasma 
como fuente futura de fabricación, y de donaciones de tejido y de órganos. 
El ensayo se piensa para el uso de tamizaje al donador en prueba individual 
o en pools de plasma humano comprendiendo alícuota iguales de no más 
de 16 donaciones individuales. 
 
RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA 
El WNV es un flavivirus transportado por un mosquito que se asocia con la 
enfermedad humana que va de una apacible gripe a los síntomas de 
enfermedad neurológico severa1,2 .La mayoría de las infecciones de WNV 
son asintomáticas y aproximadamente el 20% llevan a una enfermedad 
apacible conocido como fiebre del virus de Nilo Oriental. Se estima que 
menos del 1% de las infecciones causan la enfermedad neurológica seria, el 
factor de riesgo más significativo es la edad avanzada3. Antes del brote 
Queens Nueva York en 1999, la presencia del virus en América del Norte no 
había sido documentada. Desde el brote original de Nueva York, el virus que 
es transportado predominantemente por el mosquito Culex sp., ha 
continuado expandiéndose del oeste y ahora se piensa que se ha 
establecido permanentemente en América del Norte4. Un número de 
grande especies aviarias sirven como reservorio huésped para el virus, 
considerando que se cree que los humanos y animales, como los caballos y 
otros mamíferos, son huéspedes incidentales5. A partir de enero del 2003, el 
CDC reporto casi 4000 casos humanos positivos del WNV y 259 casos 
humanos fatales en los EE.UU.. La ruta principal de infección de WNV 
humano ha sido el piquete de un mosquito infectado. En 2002, nuevos 
mecanismos de transmisión de persona a persona fueron documentados, 
incluyendo la posible infección de madre a hijo a través de leche materna 
infectada, infección transplacentaria, y la transmisión a través de la 
donación de órganos y de la transfusión de sangre. A partir de enero de 
2003, catorce casos de transmisión de WNV asociada a la transfusión se han 
confirmado6-7. 
En la mayoría de las infecciones humanas, el WNV se multiplica a niveles 
relativamente bajos que produce una viremia transitoria que puede ser 
detectada en la sangre total y en el plasma. El método de prueba de ácidos 
nucleicos (NAT) es capaz detectar la antes de la presencia de anticuerpos 
durante la fase virémica. El anticuerpo Inmunoglobulina M (IgM) puede 
detectado en suero o en fluido cerebroespinal (liquido cefalorraquídeo) 
(CSF) recolectado dentro de los 8 días del inicio de la enfermedad. Los IgM y 
las células T de memoria pueden permanecer en el cuerpo por años3,5. Los 
métodos actuales para el diagnóstico de WNV son el 
inmunoenzayoenzimático IgM, el ensayo de Placa de Reducción de la 
Neutralización, y los métodos NAT. Porque los ensayos serológicos se basan 
en la detección de la respuesta inmune del huésped, después de la fase 
virémica primaria, no pueden ser apropiados para el tamizaje de la sangre. 
El tamizaje de las donaciones de sangre total con NAT ha sido 
implementado en los Estados Unidos desde principios de 1999 y se 
concedieron las licencias se para el tamizaje de VIH-1 y de HCV en 2002. El 
Procleix WNV Ensaye, usa la misma tecnología que el Ensayo Procleix VIH-
1/HCV para detectar el RNA del WNV8. 
 
PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO 
El Ensayo Procleix® WNV comprende tres etapas principales que tienen lugar 
en un sólo tubo: Preparación de la muestra; amplificación selectiva del RNA 
del WNV mediante amplificación mediada por transcripción (TMA)9 y 
detección de los productos de amplificación (amplicón) por el ensayo de 
protección de hibridación (HPA)10. 
 
Durante la preparación de la muestra, se aísla el RNA de las muestras de 
plasma mediante el uso de una captura selectiva. El plasma se trata con un 
detergente para solubilizar la envoltura viral, desnaturalizar proteínas y liberar 
el RNA genómico viral. Los oligonucleótidos (“oligonucleótidos de captura”) 
que son homólogos a las regiones altamente conservadas del WNV, se 
hibridan para la selección del RNA en la muestra. La selección hibridada se 
captura luego mediante micropartículas magnéticas que se separan del 
plasma en un campo magnético. A continuación se realizan lavados 
sucesivos para eliminar los componentes superfluos del plasma del tubo de 
reacción. La separación magnética y los lavados se lavado con el Chiron 
Procleix TCS. 
 
 
La amplificación de la selección se realiza a través de TMA, un método de 
amplificaciónde ácidos nucleicos basado en transcripción que emplea dos 
enzimas, MMLV transcriptasa inversa y T7 RNA polimerasa. La transcriptasa 
inversa se utiliza para generar una copia del ADN (que contiene un promotor 
de la secuencia para T7 RNA polimerasa) de la secuencia de la selección. 
La T7 RNA polimerasa produce varias copias de amplicón de RNA a partir de 
la plantilla de copia del ADN. El ensayo Procleix WNV emplea el método TMA 
para amplificar regiones del RNA del WNV. 
 
La detección se logra mediante HPA usando sondas de ácidos nucleicos 
monocatenarios con marcadores quimioluminiscentes que son 
complementarios al amplicón. Las sondas de ácidos nucleicos marcadas 
hibridan específicamente al amplicón. El reactivo de selección distingue 
entre sondas hibridadas y no-hibridadas mediante la inactivación de la señal 
de las sondas no hibridadas. Durante la fase de detección, la señal 
quimioluminiscente generada por la sonda hibridada se mide en un 
luminómetro y se expresa en unidades relativas de luz (RLU). 
 
Se agrega un control interno en cada muestra de ensayo, control externo o 
calibrador mediante el reactivo de captura selectiva que contiene el control 
interno. El control interno de este reactivo controla las etapas de 
amplificación y detección durante el procesamiento de las muestras. La 
señal del control interno de cada tubo o reacción del ensayo se discrimina 
de la señal emitida por WNV debido a la cinética diferencial de emisión de 
luz de las sondas con marcadores diferentes11. El amplicón específico del 
control interno se detecta mediante una sonda con emisión de luz rápida 
(señal rápida cualificada, flasher). El amplicón específico de WNV se 
detecta mediante sondas de emisión de luz con cinética relativamente más 
lenta (señal prolongada cualificada, glower). El ensayo de cinética doble 
(DKA) es un método que se emplea para diferenciar las señales rápidas 
(flasher) de las prolongadas (glower)11. Cuando se utiliza para la detección 
de WNV, el ensayo Procleix WNV distingue entre señales emitidas por el 
control interno y la señal del WNV. 
 
Para mayor información remitase al manual del operador. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ANEXO 3 Carta de consentimiento informado 
 
México D.F., a _____de_____________del 2007 
Por medio de la presente acepto participar en el proyecto de investigación titulado: 
 
 
DETECCION DEL VIRUS DEL OESTE DEL NILO POR NAT EN CANDIDATOS A 
DONACIÓN SANGUÍNEA, “ESTUDIO MULTICENTRICO” 
 
 
Registrado ante la Comisión Nacional de Investigación Científica con el número 2007 785 
075. 
El objetivo de este estudio es: Determinar la prevalencia de Virus del Oeste del Nilo en 
candidatos a donación sanguínea. 
Se me ha explicado que mi participación consistirá en: Proveer aproximadamente 10 mL de 
sangre los cuales serán tomados por la misma punción de la vena realizada durante la 
toma de muestras para la donación de sangre. 
Declaro que se me ha informado ampliamente sobre los posibles riesgos, inconvenientes y 
molestias derivadas de mi participación en el estudio, que son las siguientes: 
Moretón, dolor y/o hinchazón en el sitio de toma de la muestra de sangre, así como se me 
ha informado que se me entregaran los resultados de la prueba. 
El investigador responsable se ha comprometido a darme información así como a responder 
cualquier pregunta y aclarar cualquier duda que le plantee relativo al estudio para 
determinar la prevalencia de Virus del Oeste del Nilo. 
Entiendo que conservo el derecho de negarme a participar en el estudio, sin que ello 
afecte la atención en el proceso de la donación por parte del Banco Central de Sangre 
Centro Médico Nacional “La Raza”. 
El Investigador Responsable me ha dado seguridades de que no se me identificará en las 
presentaciones o publicaciones que deriven de este estudio y de que los datos 
relacionados con mi privacidad serán manejados en forma confidencial. 
En caso de dudas o preguntas relacionadas con el estudio comunicarse al Tel. 57245900 
extensión 24200. 
 
 
 
 
 
________________________________________________ 
Nombre, firma del candidato a donación sanguínea 
 
 
_____________________________________________________ 
Investigador Responsable Dra. Bárbara Novelo Garza Matrícula 6604102 
 
 
________________________ _________________________ 
Testigos 
 
 
 
 
 
ANEXO 4 Registro sanitario COFEPRIS: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ANEXO 5: Carta de Confidencialidad. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ANEXO 6: Sabana de recolección de datos: 
 
 
 
 
 
 
 
CENTRO B.S. 
CMN 
LA 
RAZA 
B.S. 
CMN 
SXXI 
B.S. CMN 
OCCIDENTE 
B.S. 
UMAE 
MONTERREY 
UMAE 
MERIDA 
NAT VON 
NAT VON 
POR 
DUPLICADO 
 
Concordancia 
NAT /CMN La 
Raza 
 
NAT 
LABORATORIO 
REFERENCIA 
 
LUGAR DE 
RESIDENCIA 
NAT POSITIVOS 
 
ANTECEDENTES 
VIAJES NAT 
POSITIVOS 
 
Ac POSITIVOS 
NAT POSITIVOS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
	Portada
	Índice
	Resumen
	Antecedentes Científicos
	Justificación
	Planteamiento del Problema
	Objetivo General
	Hipótesis
	Material y Métodos
	Resultados
	Discusión
	Conclusiones
	Aspectos Éticos
	Recursos , Financiamiento y Factibilidad
	En Caso Pertinente Aspectos de Bioseguridad
	Referencias Bibliográficas
	Anexos