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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE QUÍMICA RESPUESTA TERMOLUMINISCENTE DE LA MEJORANA (Origanum majorana) IRRADIADA Y SU DETECCIÓN ANTE FACTORES AMBIENTALES. T E S I S QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: QUÍMICO DE ALIMENTOS P R E S E N T A : ESTEBAN RAMOS REYES MÉXICO, D.F. 2010 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. Facultad de Química, UNAM JURADO ASIGNADO: Presidente: Prof. Sofía Guillermina Burillo Amezcua Secretario: Prof. María Trinidad Martínez Castillo Vocal: Prof. Epifanio Cruz Zaragoza 1er. Suplente: Prof. Miguel Angel Hidalgo Torres 2do. Suplente: Prof. María de Lourdes Osnaya Suarez Sitio donde se desarrolló la tesis: Unidad de Irradiación y Seguridad Radiológica, Instituto de Ciencias Nucleares, UNAM. Asesor Dr. Epifanio Cruz Zaragoza Sustentante Esteban Ramos Reyes Facultad de Química, UNAM Agradecimientos A la UNAM, la Facultad de Química por ser como mi segunda casa durante la carrera y al ICN por permitirme llevar a cabo mi trabajo de tesis. Al Dr. Epifanio Cruz Zaragoza por el apoyo para realización del trabajo experimental y la redacción de este trabajo. A los miembros del jurado: Dra. Sofía Guillermina Burillo Amezcua y a la M. en C. María Trinidad Martínez Castillo por sus correcciones y valiosos comentarios para mejorar este trabajo. Al Dr. Francisco Brown del Departamento de Polímeros de la Universidad de Sonora por la caracterización de los poliminerales de mejorana. Al señor Francisco y Benjamín de la Unidad de Irradiación y Seguridad Radiológica del ICN que brindaron tiempo y esfuerzo para la realización de la tesis. Agradezco la facilidad otorgada en el proyecto PAPIIT IN121109 de DGAPA UNAM que me permitió el desarrollo de la tesis. Facultad de Química, UNAM Dedicatorias A mis padres: a Julián por brindarme su tiempo, trabajo y buenos consejos a lo largo de toda mi vida, por recordar que los sueños se cumplen con esfuerzo y dedicación. A Modesta que desde pequeño me dijo “échale muchas ganas” hoy gracias a su trabajo, esfuerzo y dedicación he recibido la mejor herencia que es el conocimiento y el mejor regalo es tenerlos a ustedes como padres. Recuerdo mucho estas palabras “hoy siembra una buena semilla y mañana cosecha éxitos y buenos momentos” que razón tienen, mil gracias por todo. A mi hermano Ventura que por el momento se encuentra un poco lejos, porque ha confiado en mi cuando otros no lo han hecho, echándome la mano cuando más lo he necesitado y a quien espero pronto devolverle los favores. Gracias a tu ayuda he podido llegar al final de una carrera y esto me permite participar en muchas otras. A mis hermanas: Claudia y Tere por los momentos de risas, las pláticas y las discusiones que ha nos han llevado a vivir grandes momentos como familia. Alégrense de la vida porque ella te da la oportunidad de amar, de trabajar, de jugar y de mirar a las estrellas. A Paty por compartir todos esos momentos inolvidables, las clases de cálculo, química, física, etc, todas esas palabras de aliento recibidas durante la carrera y además por dejarme entrar a su vida, por enseñarme que las cosas que suceden a nuestro alrededor tienen una finalidad gracias por todo. Si yo se que tú eres, y tú sabes que yo soy, quién va a saber quien soy yo cuando tu no estés. A los nuevos miembros de la familia: Dany, Mario, Elizabeth, Ximenita y Jaqueline porque son en quienes se siembra la esperanza de que la familia sea cada vez mejor, se que todavía no saben el significado de estas palabras pero algún día lo entenderán y espero que reciban la misma herencia. A la familia de Paty: Sra. Felipa, Juana, Luz, Vero, Norma, Betty, Diana, Lizbeth, Armando y Toño por acompañarme en estos últimos años. . Quiero decirles que la paciencia es un ejercicio de amor, fe y humildad que hace crecer a las personas. Facultad de Química, UNAM A mis amigos de la facultad: Josefina, Sandra, Cynthia, Sofía, Caro, Karla, Fany, Toña, Carlitos, Poucell, Sr. Juárez, Miguel Rangel, Miguel Gómez, Blanquita, Mónica, Susy, Susana, Rafa, Claudia, Alex, Alma por los momentos agradables en las clases y fuera de ellas, además por los consejos que hicieron de la estancia en la facultad un recuerdo inolvidable. A mis cuates: Jorge, Salvador, Alberto, Javis, Ricardo, Narciso, David, Jimmy, Fernando, Robert, Enrique, Cesar, Emanuel y los “guapos” por los buenos momentos y todos los años de amistad. Esteban Ramos Facultad de Química, UNAM Índice Índice Página Resumen..…………………………………………………………………............ 1 Objetivos….……………………………………………………………………………. 4 CAPITULO I. ANTECEDENTES 1.1 Generalidades de la Mejorana...................... 5 1.2 Principales variedades………………………...………… 6 1.3 Composición química de la mejorana…………… 6 1.4 Usos……………….………………………………………………… 7 1.5 Producción….…………………………………………………… 8 1.6 Minerales en los alimentos…………………………….. 8 1.7 Difracción de rayos X……………………………………… 10 1.8 Método de polvos……………………………………........ 12 1.9 Clasificación de los minerales…………………………. 12 1.10 Radiación ionizante..................................... 13 1.11 Cobalto 60 (60Co)……………………………………………. 16 1.12 Interacción de la radiación gamma con la ……………………….materia…………………………………………………………… 17 1.13 Producción de pares………………………………………... 17 1.14 Efecto fotoeléctrico………………………………………….. 18 1.15 Efecto Compton……………………………………………….. 18 1.16 Uso de las radiaciones ionizantes en los ………………alimentos................................................. 19 1.17 Unidades de radiación……………………………………… 20 1.18 Irradiación de alimentos…………………………………. 20 1.19 Métodos de detección de alimentos irradiados. 21 1.20 Métodos físicos…………………………………………….. 23 1.21 Métodos químicos………………………………………….. 24 1.22 Métodos biológicos………………………………………… 25 1.23 Termoluminiscencia………………………………………... 26 1.24 Luminiscencia en sólidos…………………………………. 27 1.25 Modelo de bandas…………………………………………. 31 1.26 Modelo de Randall-Wilkins………………………………. 34 1.27 Método del levantamiento inicial……………………. 36 Facultad de Química, UNAM Índice CAPITULO II. DESARROLLO EXPERIMENTAL 2.1 Materiales equipos y reactivos………………………….38 2.2 Extracción de poliminerales de la mejorana...... 39 2.3 Preparación de los poliminerales de mejorana …….53 y 149 ( m)…………………………………………………… 40 2.4 Determinación de las curvas de brillo............... 41 2.5 Reproducibilidad de las señales....................... 41 2.6 Efecto de la luz UV en las emisiones TL de los …….poliminerales……………………………………………………… 41 2.7 Efecto de la luz solar en la TL de los … .…………………..poliminerales……………………………………………………… 42 2.8 Efecto de la temperatura ambiente o fading ……. durante el almacenamiento de los poliminerales 43 2.9 Efecto de la temperatura o blanqueo térmico en …….los poliminerales………………………………………………… 43 2.10 Determinación de picos TL utilizando el ………..método Tmáx en función de Tstop................. 43 CAPITULO III. RESULTADOS Y ANÁLISIS 3.1 Separación de la fracción inorgánica polimineral 45 3.2 Identificación de la fracción polimineral por ……..Difracción de rayos X………………………… 46 3.3 Comportamiento de los poliminerales de mejorana a dosis bajas (0.5-400 Gy)…………………….. 47 3.4 Límite de detección………………………………………….. 51 3.5 Reproducibilidad de las señales……………………… 54 3.6 Efecto de la luz solar en la detección TL de la …….mejorana…………………………………………………………… 56 3.7 Efecto de la luz UV sobre la señal TL……………….. 59 3.9 Efecto de la temperatura ambiente o fading en …….la emisión TL……………………………………………………… 62 3.9 Efecto de la temperatura o borrado térmico de …….las señales TL. 65 3.10 Parámetro de energía de activación (E) y ………..frecuencia (s)…………………………………………………. 68 3.11 Determinación de picos TL por el método ………..Tmáx-Tstop.................................................. 72 CONCLUSIONES........................................................... 75 REFECRENCIAS…………………………………………………………………… 81 Facultad de Química, UNAM Índice Listado de figuras Página Figura 1.1 Representación gráfica de índices de Miller… 10 Figura 1.2 Representación esquemática del fenómeno DRX………………………………………………………………… 11 Figura 1.3 Espectro electromagnético…………………………… 14 Figura 1.4 Poder de alcance de los rayos , y ………… 15 Figura 1.5 Representación esquemática tridimensional para un cristal perfecto de un halogenuro alcalino…………………………………………………………… 28 Figura 1.6 Representación esquemática de un halogenuro de alcalino en dos dimensiones… 29 Figura 1.7 Representación esquemática de los centros de color más comunes…………………………………… 30 Figura 1.8 Mecanismo involucrado en el fenómeno de termoluminiscencia……………………………………….. 32 Figura 1.9 Modelo de bandas para el fenómeno TL.……… 33 Figura 1.10 Método de levantamiento inicial para una curva de brillo………………………………………………… 37 Figura 3.1 Difractograma de los poliminerales de la Mejorana de origen Mexicano (Puebla)………… 46 Figura 3.2 Comportamiento de los poliminerales de mejorana 53 y 149 m, irradiados a dosis bajas (0.5-400 Gy)……………………………………….. 48 Figura 3.3 Comportamiento de los poliminerales de mejorana 53 y 149 m, a) para dosis bajas (0.5-400 Gy), b) para 0.5-30 Gy………………… 50 Figura 3.4 Curvas de brillo de los poliminerales de mejorana de 53 y 149 m irradiados a 15 Gy comparadas con las curvas sin irradiar…… 53 Figura 3.5 Reproducibilidad de las señales de 53 y 149 m irradiadas a 15 Gy............................... 55 Figura 3.6 Curva de brillo y decaimiento de las señales TL de la mejorana irradiada a 15 Gy expuestos a luz solar para 53 y 149 m....... 56 Facultad de Química, UNAM Índice Figura 3.7 Curva de brillo y decaimiento de las señales TL de la mejorana irradiada a 15 Gy expuestos a luz UV para 53 y 149 m......... 60 Figura 3.8 Curva de brillo y decaimiento de las señales TL de la mejorana irradiada a 15 Gy expuestos a temperatura ambiente para 53 y 149 m………………………………………………………. 63 Figura 3.9 Curvas de brillo y decaimiento de las señales TL de la mejorana irradiada a 15 Gy expuestos a calentamiento en mufla de 25- 400 0C para 53 y 149 m......................... 66 Figura 3.10 a) Curvas de brillo para las muestras de mejorana irradiadas a 15 Gy para 53 y 149 m. b) Relación del Ln Intensidad TL en función de 1/T………………………………………………. 69 Figura 3.11 a) Curvas de brillo obtenidas con el método Tmáx-Tstop para 53 y 149 m e irradiadas a 15 Gy. b) Relación de Tmáx-Tstop………………………… 73 Facultad de Química, UNAM Índice Listado de tablas Página Tabla 1.1 Descripción taxonómica de la planta de mejorana………………………………………………………….. 5 Tabla 1.2 Principales variedades del género Origanum…… 6 Tabla 1.3 Composición química de la mejorana seca……… 7 Tabla 1.4 Producción nacional de mejorana 2008…………. 8 Tabla 1.5 Clasificación de la dosis según la finalidad……… 21 Tabla 3.1 Rendimiento de la extracción de los poliminerales……………………………………………………. 45 Tabla 3.2 Determinación del límite de detección TL de los poliminerales de mejorana deshidratada de 53 y 149 m………………………………………………………….. 52 Tabla 3.3 Pérdida de la señal TL de los poliminerales de mejorana irradiados a 15 Gy y expuestos a luz solar para 53 y 149 m………………………………….. 58 Tabla 3.4 Pérdida de la señal TL de los poliminerales de mejorana irradiados a 15 Gy y expuestos a luz UV de una lámpara de mercurio…………………….. 62 Tabla 3.5 Pérdida de la señal TL de los poliminerales de mejorana irradiados a 15 Gy y almacenados por 42 días a temperatura ambiente…………….. 64 Tabla 3.6 Pérdida de la señal TL de los poliminerales de mejorana irradiados a 15 Gy y calentados de 25-350 ºC en la mufla.................................. 67 Tabla 3.7 Energía de activación (E) y factor de frecuencia (s) para poliminerales de mejorana irradiados a 15 Gy…………………………………………………………….. 71 Facultad de Química, UNAM Resumen 1 Resumen En esta tesis se propone una metodología para la extracción de los poliminerales de la mejorana (Origanum majorana) deshidratada utilizando diferentes proporciones de etanol-agua bidestilada. Una vez extraídos, los poliminerales se caracterizaron de forma cualitativa por difracción de rayos X (DRX), mostrando que el polimineral está compuesto por cuarzo principalmente. Se separaron por tamaño de partícula de 53 y 149 m, en muestras duplicadas para cada tamaño. Las muestras se expusieron a dosis bajas de radiación gamma (0.5-400 Gy) de 60Co. Se obtuvieron las curvas de brillo para cada tamaño y dosis, observando una señal clara a partir de 1 Gy. La respuesta termoluminiscente (TL) en función de la dosis fue lineal a dosis bajas para los dos tamaños 53 y 149 m. Un parámetro importante encontrado en esta tesis fue el límite de detección en dosis que permite identificar al alimento irradiado. También se caracterizó una propiedad importante, de la fracción polimineral de la mejorana, la reproducibilidad de las señales TL. Las muestras fueron expuestas a 15 Gy en ocasiones sucesivas para cada tamaño, con el fin de detectar si las señales TL son estables o existe una pérdida de la señal después de ser expuesta en diferentes ocasiones a radiación gamma proveniente del 60Co. Después que una muestra es expuesta a radiación gamma la señal TL se va desvaneciendo por diferentes causas, los factores ambientales, la luz ultravioleta (UV), y la alta temperatura juegan un papel importante sobre la pérdida de la señal TL. El posible efecto de pérdida TL pueden provenir de la luz solar y luz UV, el tiempo de almacenamiento del alimento, y la temperatura. Con el finde simular el efecto de los factores ambientales tales como la luz UV, los poliminerales fueron irradiados a una dosis de 15 Gy para los Facultad de Química, UNAM Resumen 2 dos tamaños, y se expusieron a UV proveniente de una lámpara de mercurio, variando el tiempo de exposición de 0.5-240 minutos. Se observó que el primer pico TL en 86°C, desaparece por completo después de los 12 minutos de estar expuesto a la luz UV y el decaimiento de la señal se hace más lento para ambos tamaños. Por otro lado se analizó la influencia de la luz solar sobre la señal TL, irradiando las muestras a 15 Gy y con exposición desde 0.5 hasta 240 minutos. El resultado mostró una pérdida de la señal en un 63.55 % y 48.83 % para 53 y 149 m después de los 12 minutos de estar expuesto a luz solar, encontrando que la señal para el tamaño más grande disminuye rápidamente con respecto al otro en las mismas condiciones. En relación al efecto de la temperatura ambiente sobre la señal TL, llamado fading, las muestras fueron irradiadas a 15 Gy y se almacenaron por 42 días a temperatura ambiente en ausencia de luz. Para 53 m la señal disminuyó en 60.93 % y para 149 m la señal llegó a 75.65 % en los primeros dos días con la respectiva desaparición del primer pico para los dos casos, después de 5 días la señal TL ha disminuido en más de 50 % para los dos tamaños y la disminución de la señal es muy lenta. Los resultados de la tesis muestran que las curvas de brillo TL de la fracción polimineral de la Mejorana, tiene una estructura compleja, es decir, está conformada por varios picos TL. Una primera aproximación para conocer la estructura, se realizó un blanqueo térmico. Las muestras, para los dos tamaños de grano, se expusieron a 15 Gy y fueron calentadas por tres minutos en la mufla partiendo de 25 ºC hasta 350 ºC. Las señales disminuyeron al aumentar la temperatura de calentamiento, y se observaron claramente la cantidad de picos TL que conforman las curvas de brillo envolvente. Con los picos aislados se calculó la energía de activación (E): 0.74-1.0 eV para 53µm y 0.83 a 1.21 eV para 149 µm, con ligeros cambios de Facultad de Química, UNAM Resumen 3 valores de E en función de la variación de temperatura de blanqueo térmico. En tanto el valor del parámetro de frecuencia (s) estuvo entre 107 a 1011 s-1, lo que está de acuerdo con otros cálculos más precisos. Para asegurar la cantidad de picos TL, y su posición en temperatura (Tmáx), que conforman a la estructura de las curvas de brillo, se utilizó el método Tmáx en función de Tstop. Los dos tamaños de partícula 53 y 149 m presentan dos picos que fueron característicos en las otras medidas TL. Un primero en 84 ºC y el segundo alrededor de 130 ºC. Además 149 m presenta un tercer pico en 200 ºC, también se observa que la intensidad TL es casi cuatro veces mayor que la del tamaño de 53 m. Las mesetas relacionadas a las trampas existentes en el polimineral de la Mejorana, se encontraron en 55, 84, 94, 130 y 200 °C, y cada meseta se asocia a un pico TL. Estos valores están de acuerdo con los encontrados para los máximos de temperatura de las curvas de brillo del blanqueo térmico: 86, 132, 144, 160, 202, 193, 218 °C. Los máximos TL están asociados a la presencia del cuarzo en las muestras del polimineral de la especia mejorana de origen mexicano, que fue posible su análisis de sus propiedades termoluminiscente e identificación por el fenómeno TL. Facultad de Química, UNAM Objetivos 4 Objetivos En el desarrollo del trabajo de tesis aquí expuesto, se plantearon los siguientes objetivos basados en la hipótesis del contenido de la fracción inorgánica de poliminerales en la especia Mejorana. Que su fracción polimineral, cuarzo en este caso, puede retener información radiológica que podría analizarse por medio del fenómeno de termoluminiscencia (TL), tanto sus propiedades TL como su detección de que había sido o no expuesta a la radiación de tipo ionizante: Desarrollar una metodología para la separación de los poliminerales en laboratorio de la Mejorana de origen Mexicano. Analizar la propiedad termoluminiscente de los poliminerales de la mejorana (Origanum majorana) deshidratada e irradiada a dosis controladas, y además expuesta a factores ambientales como luz del sol, ultravioleta y temperatura ambiente. Analizar las propiedades de la señal termoluminiscente (TL) de los poliminerales en un intervalo de dosis amplio. Evaluar el comportamiento de la dosis-respuesta TL, determinar el límite de detección y reproducibilidad de la señal TL. Estudiar la estabilidad, como fading, de la señal TL de los poliminerales de Mejorana expuestos a radiación ionizante. Analizar la estructura de las curvas de brillo mediante la evaluación de la cantidad de picos TL, utilizando el blanqueo térmico y el método de Tmáx-Tstop. Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 5 CAPITULO I. ANTECEDENTES 1.1 Generalidades de la mejorana La planta de mejorana (Origanum majorana) es originaria del norte de África, aunque también se encuentra distribuida por el sur de Europa y suroeste de Asia en forma silvestre. Es una hierba anual o perenne de tallos leñosos, muy ramificados, que pueden alcanzar 30 a 60 cm de altura. Las hojas son ovales o espatuladas, el color varía de verde a gris-verdoso, dependiendo de la abundancia de pelos. Las plantas jóvenes son de color blanco-tomentosas, las adultas verdes grisáceas. Las flores son pequeñas de color blanco verdoso o blanco rojizo, reunidas en espigas, casi globulares, el cáliz es oblicuo y casi entero, con uno o dos labios; se agrupan cada tres, en la axila de las brácteas orbiculares. Las semillas son pequeñas, oblongas y de color pardo oscuro. Tabla 1.1 Descripción taxonómica de la planta de mejorana [2]. Reino: Plantae Subreino: Tracheobionta División: Magnoliophyta Clase: Magnoliopsida Subclase: Asteridae Orden: Lamiales Familia: Lamiaceae Género: Origanum Especie: Origanum majorana Toda la planta es extremadamente aromática; su sabor es dulce o amargo dependiendo de la variedad. La mejorana crece en suelos calizos, fértiles, con poca humedad. Los suelos muy arcillosos y fríos no le convienen. Requiere clima templado y templado-cálido; resiste poco Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 6 las heladas persistentes cuando estas descienden a temperaturas inferiores a -8ºC [1]. 1.2 Principales variedades El género Origanum está compuesto por alrededor de 20 especies de hierbas aromáticas de la familia Lamiaceae, en él se incluyen hierbas culinarias como la mejorana y el orégano. Las especies de este género, al igual que casi todas las de la familia, son hierbas que poseen unas diminutas glándulas, productoras de la esencia, que se localizan en las hojas y la corola. Tabla 1.2 Principales especies del genero Origanum [2]. Origanum acutidens Origanum rotundifolium Origanum amanum Origanum scabrum Origanum calcaratum Origanum sipyleum Origanum dictamnus Origanum syriacum Origanumlaevigatum Origanum vulgare Origanum leptocladum Origanum majoricum Origanum libanoticum Origanum microphyllum Origanum majorana Origanum onites 1.3 Composición química de la mejorana La mejorana contiene hasta 2 % de aceite esencial (base húmeda), del cual más del 50 % es terpenol; también posee taninos, carotenos, jugos amargos y vitamina C [3]. Los tallos y hojas contienen a los taninos, pentosas y minerales, pero el producto mas importante y fragante es la esencia de color amarillento o verdoso cuyo rendimiento oscila entre 0,30 y 0.40 % de la planta fresca. Esta esencia no es tóxica, contiene cantidades variables de terpenos principalmente terpineno,origanol (d-aterpineol), sabineno y pequeñas cantidades de sesquiterpenos. El aceite esencial es utilizado como en la http://es.wikipedia.org/wiki/Hierba http://es.wikipedia.org/wiki/Origanum_majorana http://es.wikipedia.org/wiki/Origanum_vulgare http://es.wikipedia.org/wiki/Origanum_majorana Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 7 base de la perfumería masculina. Su utilización en fresco está dirigida a las carnes rojas. Tabla 1.3 Composición química de la mejorana seca [3]. Agua 7.64 g Niacina 4.12 mg Proteína 12.66 g Vit. A Equiv. Retinol 403.00 mcg Grasa 7.04 g Vitamina B6 1.19 mg Carbohidratos 60.56 g Ác. Grasos Mono-Insat. 0.94 g Fibra Diet. Total 40.30 g Ác. Grasos Poli-Insat. 4.41 g Cenizas 12.10 g Ác. Grasos Saturados 0.53 g Calcio 1990.00 mg Folato Equiv. FD 274.00 mcg Fósforo 306.00 mg Potasio 1522.00 mg Hierro 82.71 mg Sodio 77.00 mg Tiamina 0.29 mg Zinc 3.60 mg Riboflavina 0.32 mg Magnesio 346.00 mg Vitamina C 51.00 mg Fracción Comestible 1.00 % 1.4 Usos Culinarios. Es una de las plantas más conocidas y usadas en la cocina española, italiana, griega y mexicana. Se suele usar seca más que fresca, en platos de sabor intenso en los que predominan ingredientes como pimientos, ajo, tomates, cebollas y vinos. Son ingredientes muy útiles para ensaladas, guisos, sopas, salsas, patés y platos de aves. Medicinales. Ayuda a las alteraciones digestivas, bronquitis, tos y asma. Muy utilizado interna o externamente en tratamientos de afecciones respiratorias pues posee acción expectorante. Además tiene propiedades sedantes digestivas. La infusión de las hojas de la mejorana se usa para aliviar la tos y el asma. En reglas dolorosas se emplea como calmante y regulador. Antiséptico de las vías respiratorias, también ayuda en mitigar dolores de reúmas como ungüentos de aceite y cataplasmas de la planta. Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 8 1.5 Producción En México el estado con la mayor producción de mejorana lo ocupa el Estado de México con el 75.26 % en el 2008, seguido por Baja California Sur (B.C.S.) con 15.96 % y en último lugar se encuentra el estado de San Luis Potosí (S.L.P.) con 11.17 % de acuerdo con cifras de la SAGARPA, México. Tabla 1.4 Producción nacional de mejorana 2008 [4]. Estado Superficie sembrada (Ha) Superficie cosechada (Ha) Producción (Ton) Rendimiento (Ton/Ha) PMR ($/Ton) Valor de producción (miles de pesos) B.C.S. 2 2 8.5 4.25 59,702.35 507.47 Edo. México 26 26 47.16 1.81 3,124.43 147.35 S.L.P. 2 2 7 3.5 10,000.00 70 En 2008 de la superficie nacional total dedicada a la agricultura, el 0.08 % está dirigido a la producción de mejorana, en éste mismo año aumento la superficie dedicada a la producción de esta planta con 14.3 % con respecto al año anterior lo que indica un crecimiento en la producción [5]. En el ámbito internacional, el principal proveedor de orégano crudo (entre ellos la mejorana) a nivel internacional durante el año 2006 fue Turquía con un 65 % del total, México en segundo lugar con un 31 % seguido de Brasil [6]. Mientras Estados Unidos fue el principal importador de orégano, con una importación total promedio de 6.500 toneladas anuales en los últimos 15 años, tanto orégano crudo y deshidratado. 1.6 Minerales en los alimentos En los alimentos de origen vegetal, se pueden encontrar fases minerales, principalmente cuarzos y los distintos feldespatos [7-9] que Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 9 pueden ofrecer información sobre su historia radiológica o del ambiente. Definiremos a los minerales o poliminerales como todo aquel sólido homogéneo con una composición química definida (aunque no necesariamente fija), que tiene una estructura cristalina determinada, estable para unas condiciones termodinámicas definidas, y además formado normalmente por un proceso inorgánico, en tales caso pueden considerarse el cuarzo y feldespatos naturales [10]. Cabe aclarar que los llamados minerales como nutrimentos se pueden encontrar en los alimentos en forma de sales tanto orgánicas como inorgánicas, un ejemplo es el fósforo que puede combinarse con proteínas y metales en enzimas. Existen más de 60 elementos minerales en los alimentos y es esta abundancia la que sugiere que se dividan los minerales en grupos: los componentes en forma de sales y los elementos de traza. Entre los elementos salinos se puede encontrar el potasio, sodio, calcio, magnesio, cloro, azufre (sulfatos), fosfatos y bicarbonato. Sin embargo, cuando están en composición fijas, podemos llamarles poliminerales como por ejemplo; el cuarzo (Si02), o feldespatos que en forma general se puede describir como Na1-xCax(Si3- xAl1+x)O8 donde el subíndice x puede tomar valores entre 0 y 1(100%), y tal composición puede variar dependiendo del elemento sustituyente en la estructura tales como el sodio, calcio o el potasio, lo cual puede generar desde la albita hasta la anortita, y de ésta hasta la ortoclasa dependiendo del porcentaje molecular en su composición del polimineral. Aunque la cantidad de los minerales encontrados y extraídos de los alimentos se encuentran en pequeñas cantidades y pueden ser del orden de mg por cada 50 g aproximadamente, para nuestros fines al conjunto de minerales encontrados o extraídos lo denominaremos poliminerales, que estarán compuestos normalmente de cuarzos y feldespatos. http://es.wikipedia.org/wiki/Oligoelemento http://es.wikipedia.org/wiki/F%C3%B3sforo http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Fosfoprote%C3%ADna&action=edit&redlink=1 http://es.wikipedia.org/wiki/Enzima http://es.wikipedia.org/wiki/Sal_(qu%C3%ADmica) http://es.wikipedia.org/wiki/Potasio http://es.wikipedia.org/wiki/Sodio http://es.wikipedia.org/wiki/Calcio http://es.wikipedia.org/wiki/Magnesio http://es.wikipedia.org/wiki/Cloro http://es.wikipedia.org/wiki/Azufre http://es.wikipedia.org/wiki/Sulfato http://es.wikipedia.org/wiki/Fosfato http://es.wikipedia.org/wiki/Bicarbonato Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 10 Los poliminerales se consideran micronutrientes sólidos naturales de los alimentos, éstos proporcionan la información relacionada con el proceso de radiación, con fines de conservación al que ha sido sometido el alimento y la mantienen por largos períodos de tiempo [11]. Esta propiedad de los poliminerales lo hacen atractivos para detectar a los alimentos que han sido tratados con radiación ionizante, como la gamma, rayos X o bien con electrones. 1.7 Difracción de rayos X La fracción inorgánica polimineral, puede identificarse su composición utilizando la técnica de difracción de rayos X (DRX). Los rayos X difractados dan información estructural sobre la muestra, según sea el ángulo de incidencia del rayo. La caracterización de difracción de rayos X se fundamenta en la incidencia de un haz de rayos X con un determinado ángulo sobre una muestra plana. Figura 1.1 Representación gráfica de algunos índices de Miller La intensidad de la luz difractada resultante de la interacción del haz con el sólido es función de la distancia entre los planos cristalinos que configuran la estructura y del ángulo de difracción . Estas reflexiones son provocadas por una serie de planos paralelos dentro del cristal. La Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 11 orientación y el espacio interplanar de estos planos se define por los índices de Miller; h, k, l (figura 1.1). Si consideramos un haz de rayos X que incide en un par de planos paralelos P1 y P2 separados por una distancia interplanar d, los dos rayos incidentes paralelos 1 y 2 forman un ángulo con estos planos (figura 1.2). Figura 1.2 Representación esquemática del fenómeno de DRX. Si las ondas 1’ y 2’están en fase, obtendrá un haz reflejado de máxima intensidad. La diferencia entre la distancia que recorren los rayos, debe ser un número entero, n, de longitudes de onda . Esta relación puede expresarse matemáticamente por la ecuación de Bragg: nλ = 2dsen . En esta relación, los posibles valores de 2 en donde puede ocurrir una reflexión están determinados por la dimensión de la celda unitaria de cada cristal, mientras que las intensidades de las reflexiones están determinadas por la distribución de los electrones en la celda [12]. Debido a que la mayor densidad electrónica se localiza alrededor de los átomos, la intensidad queda en función de la naturaleza de los átomos y del lugar que ocupan en la celda unitaria, dando como resultado un espectro único y característico para cada especie cristalina. Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 12 1.8 Método de polvo El método del polvo cristalino es el único procedimiento de DRX que permite abordar el estudio cristalográfico de muestras en polvo. La desorientación relativa existente entre los numerosos cristales que componen la muestra hace que en los diagramas de difracción quede reflejada, tanto cualitativa como cuantitativamente. Este método utiliza la radiación monocromática y registra la información de las reflexiones en una computadora mediante un software apropiado. La muestra finamente pulverizada se extiende sobre un portaobjetos y se aglomera, cubriendo aproximadamente 2cm por lado. El portaobjetos puede girar según la trayectoria del haz de rayos X al mismo tiempo que el detector gira a su alrededor para captar las señales de los haces difractados. El detector no registra todas las reflexiones a la vez en una película sino que mantiene un orden para recibir por separado cada máximo de difracción [13], dependiendo de los planos de incidencia. El resultado es un diagrama de picos registrados en el cual se puede leer el ángulo 2 , mejor conocido como difractograma, cuyos picos agudos indicarían que se trata de regiones o muestras cristalinas. 1.9 Clasificación de los minerales Los minerales se suelen agrupar según criterios químico-estructurales; es decir, se establecen distintas clases en función del anión o aniones predominantes en una estructura [10]. De acuerdo con algunos autores, se puede hacer la siguiente clasificación: Silicatos, elementos nativos, haluros, óxidos, hidróxidos, carbonatos, nitratos, boratos, sulfuros y sulfatos. Los poliminerales contenidos en los alimentos deshidratados o frescos, generalmente son feldespatos y cuarzos naturales, aunque en distintas proporciones. Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 13 Silicatos: Son el grupo de minerales más abundantes en la corteza terrestre, representan la combinación del silicio con átomos de oxígeno par formar unidades estructurales de tetraedros de SiO2 solas o combinadas entre sí. Los silicatos son clasificados de acuerdo al tipo o unidad estructural que forman las unidades tetraédricas o en cadenas. Feldespatos: Son los silicatos más abundantes en la litósfera de la Tierra. Grupo de minerales constituidos químicamente por alumosilicatos de Na, K, Ca y Ba. Los feldespatos son elementos fundamentales de las rocas ígneas y metamórficas. Están formados siempre por tetraedros de dos tipos [SiO4] -4 y [AlO4] -5 unidos unos con otros por medio de todos sus oxígenos activos en forma de andamiajes tridimensionales indefinidos. Cuarzo (SiO2): El cuarzo es de los minerales más abundantes y constituyentes esenciales en muchas rocas ígneas, sedimentarias y metamórficas. Su estructura es de tipo prismas trigonales (cuarzo-alfa) y hexagonales cuarzo-beta), terminados en forma romboédrica o piramidal. La coloración es del cuarzo puede ser blanco, gris, rojo, púrpura, rosa, amarillo, verde, pardo y negro así como incoloro; dependiendo de la cantidad de iones, óxidos o bien debido a filtraciones de líquidos en las cavidades del cuarzo [14]. 1.10 Radiación Ionizante La emisión electromagnética es comúnmente clasificada según la frecuencia, como: radiofrecuencia, microonda, infrarrojo, visible (luz), luz ultravioleta, rayos X, partícula alfa, partícula beta y fotones gamma. Existen diferentes tipos de radiación, en la Figura 1.3 se muestra un espectro del intervalo de frecuencias o longitudes de onda de la radiación electromagnética. Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 14 La radiación , β, y tienen diferentes niveles de energía y difieren en su capacidad para penetrar materiales. Por ejemplo, si damos el valor de 1 al poder de penetración o alcance de las partículas , las partículas tendrían un valor de 100 y los rayos tendrían un valor de 10,000 [15]. Figura 1.3 Espectro electromagnético. Mientras la radiación apenas penetra las capas superficiales de la piel, mientras la radiación puede penetrar desde una hoja fina de papel hasta el grosor de un dedo como tejido vivo. Los rayos son tan energéticos que sólo pueden ser detenidos por materiales densos tales como una pared de concreto, plomo o varios metros de agua (Figura 1.4). Los rayos o fotones gamma, igual que los rayos X y los haces de electrones, que pueden tener alta energías sus haces son radiaciones ionizantes, ya que son capaces de arrancar electrones del material -con el que interactúan- fuera de sus órbitas normales, lo que se conoce como ionización. Esto hace que los átomos y moléculas del material expuesto a la radiación ionizante, no sean eléctricamente neutros y reaccionen con electrones u otros átomos que los neutralicen nuevamente. Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 15 Figura 1.4 Poder de alcance de los rayos y , y . Cuando los átomos o moléculas están cargados eléctricamente, se llaman iones o radicales libres y se dice que se han ionizado si fueron expuestos a la radiación ionizante. Los radicales libres son moléculas que tienen un electrón desapareado en capacidad de aparearse, por lo que son muy reactivos sobretodo en medios acuosos. El uso de la radiación ionizante es muy amplio, y actualmente las instalaciones como los irradiadores gamma emplean elementos radiactivos producidos en los reactores nucleares, como es el caso del 60Co. Este radioisótopo es empleado principalmente como una fuente de rayos gamma en los procesos de uso industrial o de investigación. Para detener la radiación gamma se utilizan diferentes materiales, la densidad de los materiales es diferente, es decir, cuanto mayor es la densidad de un material, menor es el espesor necesario para producir una absorción dada de la radiación. Es por ello que suelen usarse materiales densos, por ejemplo el plomo. Se necesita 5cm de espesor de plomo que constituye un blindaje estándar contra la radiación gamma, otro muy utilizado es el hormigón del cual se requiere un espesor mínimo de 50 cm para una protección estándar. Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 16 1.11 Cobalto 60 (60Co) El isótopo cobalto-60 (60Co) es la fuente de radiación gamma más empleada en investigación y procesos industriales, el cual es un isótopo radiactivo del 59Co estable. La reacción nuclear para obtenerlo es la siguiente: ConCo 6059 la cual se representa generalmente como ConCo 6059 ),( . Ello significa que se expone el cobalto-59 ante un haz de neutrones, como el de un reactor nuclear, donde los átomos cambian su masa en una unidad generándose así el isótopo 60Co. El radioisótopo producido (de forma metálica) puede alcanzar una actividad entre 1.85 - 3.7x1012 Bq/g, dependiendo del tiempo que permanezca enriqueciéndose en el reactor nuclear. Otra fuente de radiación gamma también empleada, pero en menos medida, que el 60Co es el radioisótopo 137Cs. El cesiose presenta en forma de sal, CsCl y es muy soluble en agua, lo que le da una desventaja frente al cobalto, el cual es un óxido insoluble en agua y presenta un alto punto de fusión y resulta muy eficaz como fuente de radiación gamma de alta intensidad o dosis. Los óxidos de cobalto son encapsulados herméticamente en tubos de acero inoxidable y sometidos a pruebas de calor e impacto como estándares de calidad internacional, con el fin de evitar contaminaciones que pudieran ocurrir, aunque la experiencia en el uso de los irradiadores gamma de alta actividad no ha mostrado lo contrario, las fuentes hechas de 60Co son seguras y confiables. Las fuentes de este tipo deben estar confinadas en un el blindaje adecuado, ya sea agua o concreto de alta densidad, o bien recipientes de plomo con paredes suficientemente gruesas para ofrecer al operador o al usuario la seguridad que se requiere a fin de evitar ionización. Fuentes comprendidas entre los 3.7x1012 Bq y los 3.7x1014 Bq se Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 17 emplean con fines de investigación en universidades, laboratorios militares, civiles y en procesos industriales para desinfestación o esterilización de diversos productos, mientras que las del orden de 3.7x1013Bq o menores se emplean en laboratorios de radiología médica. El 60Co decae al elemento 60Ni emitiendo radiación beta de baja energía y dos rayos gamma de energías 1.17 y 1.33 MeV, y éstos son los de utilidad para producir efectos en la materia, incluyendo su uso en las irradiaciones industriales. La reacción se representa como: El tiempo de vida media del isótopo 60Co es de 5.27 años [16]. 1. 12 Interacción de la radiación gamma con la materia Los rayos gamma son emitidos por el núcleo, cuando éste se encuentra en un estado excitado decae a un nivel inferior de energía. La emisión de rayos X tiene lugar cuando ocurre una transición entre un estado de excitación del átomo a otro de inferior de energía, por el cambio de un electrón a una órbita inferior. La energía de los rayos gamma abarca un intervalo de keV a MeV (dependiendo del tipo de núcleo), y los rayos X de valores próximos a cero hasta 50 keV. La interacción de los rayos X y gamma con la materia es el mismo en esencia, difieren solamente en la cantidad de energía que disipan en la materia al ser absorbidos [16]. Los tres mecanismos principales de interacción de la radiación electromagnética con la materia son los siguientes. 1. 13 Producción de pares Cuando la energía del rayo incidente es muy alta, al ser absorbido por la materia se transforma en masa y produce dos partículas , una negativa (negatrón) y otra positiva (positrón). Como dos masas de Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 18 electrón son producidas, es necesaria al menos una energía equivalente a ellas (2x0.51=1.02MeV). Si la energía del rayo inicial es mayor que este valor del umbral, el exceso de energía a dicho valor se utiliza en comunicar energía a las dos partículas. El negatrón a su vez causa ionización y el positrón existe hasta que interacciona con otro electrón para neutralizar el par, produciéndose ahora 2 rayos de 0.51 MeV cada uno, conocidos como radiación de aniquilación, por lo que el proceso de aniquilación puede ser considerado hasta cierto punto como el inverso de la formación de pares. 1. 14 Efecto fotoeléctrico Una de las formas de interacción de los rayos con la materia. Consiste en que la totalidad de la energía de un rayo es transferida a un electrón orbital de uno de los átomos que constituyen el medio atravesado por la radiación, este electrón llamado fotoelectrón es desplazado del átomo desde una órbita exterior al núcleo. A su vez, pierde energía causando producción de pares iónicos. La vacante orbital es ocupada por otro electrón proveniente de órbitas exteriores, o sea de niveles superiores de energía, emitiendo un rayo X con una energía específica, igual a la diferencia entre energías de amarre de los electrones a ambos niveles. Pero, en vez del rayo X, ésta energía puede ser transferida a otro electrón en una orbita cercana al núcleo con un nivel bajo de energía, mismo que es lanzado del átomo y se conoce como electrón Auger. 1. 15 Efecto Compton Consiste en que un fotón o rayo gamma transfiere una fracción de su energía a un electrón orbital de uno de los átomos que constituyen el Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 19 material atravesado por la radiación y este electrón es desplazado del átomo, formándose un par de iones o par iónico. El fotón incidente queda con menor frecuencia, menor energía, mayor longitud de onda y en consecuencia con una mejor disposición para interaccionar con los átomos vecinos, hasta que se produce el efecto fotoeléctrico y es absorbido. El rayo gamma o fotón dispersado puede sufrir varias colisiones, antes de ser absorbido por el efecto fotoeléctrico. Si el electrón lanzado pertenece a una órbita cercana al núcleo de bajo nivel energético, tendrá lugar la emisión de rayos X o el electrón Auger, igual que durante el efecto fotoeléctrico. 1.16 Uso de las radiaciones ionizantes en los alimentos La principal radiación ionizante empleada en la irradiación de alimentos hoy en día son los rayos gamma de elementos radiactivos como el 60Co, haces de electrones de aceleradores grandes y rayos X, pero siempre de energías limitadas para evitar que se induzca radiactividad en los medios con los que interacciona la radiación. Para la irradiación de alimentos conviene emplear emisiones que tengan una mayor penetración, de manera que no sólo inactiven a los microorganismos y a las enzimas de la superficie sino que también produzcan los mismos efectos en el interior del alimento. Por lo que generalmente se emplean partículas beta y rayos gamma, para la irradiación de alimentos, siendo éste último el tipo de radiación seleccionada para este trabajo. En el caso de los haces de electrones que se producen por aceleradores, pueden producirse rayos X y el límite superior de energía es de 5 MeV, mientras que el límite de la energía de los rayos-X deben ser menores Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 20 de 10 MeV para ser usados en irradiación de alimentos. Estos límites son los permisibles en las normas de irradiación de alimentos [17]. 1.17 Unidades de radiación Desde 1938 L. H. Gray [18], propuso utilizar el concepto de “Energía absorbida por unidad de masa” como una medida del efecto de la radiación ionizante, dando lugar al concepto de dosis absorbida el cual fue admitido por la Comisión Internacional de Unidades Radiológicas y Medidas (ICRU), en 1953, con el nombre de dosis absorbida [19]. Anteriormente se utilizaba el rad que es la cantidad de radiación de 100 ergios de energía absorbida por gramo de material irradiado (1 rad = 100 erg/g), pero la unidad más utilizada ahora es el Gray. La relación entre rad y Gray es 1Gy=100 rad [20]. En la actualidad, la dosis absorbida se define como la energía promedio depositada por la radiación ionizante en un elemento de materia y su unidad es el gray (Gy), el cual equivale a un joule por kilogramo (J/kg) [21]. La razón o tasa de dosis absorbida (D), es el cambio de la dosis absorbida por unidad de tiempo, es decir D = dD/dt en unidades de Gy/s. 1.18 Irradiación de alimentos Irradiar un alimento significa exponerlo a una fuente emisora de radiación ionizante (usualmente 60Co o 137Cs), de electrones acelerados o rayos X con el propósito de esterilizarlos o alargar la vida de su conservación (retrasando los procesos de maduración o putrefacción por microorganismos, etc.). Cuando la energía de estas radiaciones es suficiente para que los átomos o las moléculas pierdan electronesse Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 21 generan iones, se dice que se presenta el proceso de ionización. Este fenómeno se presenta cuando se irradia al alimento. El intervalo habitual para la irradiación de alimentos es generalmente desde 50 hasta 10,000 Gy, dependiendo del alimento de interés y del efecto deseado [17]. Actualmente el CODEX Alimentarius [22], constituye una serie de sugerencias a los gobiernos con el fin de implementar la tecnología de irradiación a los alimentos con fines de alargamiento de la vida de anaquel o lograr una sanitización adecuada, además de ser una alternativa al método de fumigación que pronto serán prohibidos, en el año 2015, por su impacto al ambiente y a la salud del hombre. Desde el punto de vista práctico, hay tres tipos de aplicaciones generales y categorías de dosis para los alimentos tratados con radiaciones ionizantes. Tabla 1.5 Clasificación de dosis según la finalidad. Radurización Dosis baja: menor que 1kGy Inhibición de germinación Retraso de la maduración Desinfección de insectos Radicización Dosis media: 1 a 10 kGy Reducción de microorganismos alterantes Reducción de los patógenos no esporulados Retraso de la maduración Radapertización Dosis alta: 10 a 50 kGy Reducción de microorganismos a niveles de esterilidad 1.19 Métodos de detección de alimentos irradiados Es importante el desarrollo de tecnologías que nos permita diferenciar entre alimentos irradiados de los no irradiados y cuantificar la dosis de radiación que originalmente recibió el alimento. Los métodos Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 22 actualmente disponibles para la detección de alimentos irradiados están basados en cambios físicos, químicos biológicos y microbiológicos. Los cambios son inducidos en el alimento durante el proceso de irradiación, el cambio inducido debe ser medible y detectarse durante la vida útil del alimento. Además, el método debe permitir cuantificar la “dosis absorbida” por el alimento, bajo que condiciones fue irradiado, el tipo de irradiación al que fue sometido, razón de dosis y temperatura, e idealmente debiera aplicarse a una gran variedad de productos alimenticios. La utilidad de detectar al alimento irradiado proviene de la necesidad de reconocer, mediante fenómenos o métodos de acuerdo al cambio de sus propiedades, cuáles alimentos han sido expuestos a la radiación. Esto debido a que la dosis generalmente es acumulativa y sucesivas exposiciones pueden degradar las propiedades de los productos. Existe una clasificación de los métodos para la detección de alimentos irradiados, los cuales se agrupan de acuerdo a características comunes y tipos de alimentos [10]. Esencialmente si un alimento cambia sus propiedades químicas o forma nuevos compuestos entonces se puede utilizar un método químico, en caso de que se persiga eliminar bacterias presentes en el alimento puede usarse un método biológico para la cuantificación de la población remanente. En el caso de que el alimento cambie sus propiedades físicas, pero esencialmente del polimineral que contenga, entonces puede emplearse un método físico y dependiendo del tipo de muestras hidratadas o deshidratadas. En este último caso, muestras deshidratadas, es importante la detección del alimento por el método físico de luminiscencia, en particular la luminiscencia estimulada térmicamente (TL) o conocida más comúnmente como termoluminiscencia. La ventaja de este método reside en que un alimento puede determinarse si fue irradiado (a partir de la emisión de luz intrínseca) Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 23 aún transcurridos varios meses o años, aunque el alimento debe estar en condiciones apropiadas de medio ambiente como escasa luz u obscuridad y evitar altas temperaturas con el fin de preservar la información TL que pueda contener el polimineral contenido en el alimento. Existe una gran cantidad de métodos desarrollados en el ámbito de la detección de alimentos irradiados [7; 10] la práctica con los alimentos ha hecho que se reduzcan a dos particularmente; la resonancia de espín de electrón y la termoluminiscencia. Estos métodos resultan de particular interés para los alimentos sólidos deshidratados o que contienen sólidos en su composición, tal es el caso de las hierbas y especias. 1.20 Métodos físicos a) Espectroscopía de resonancia de espín de electrón (REE, EPR, ESR) La espectroscopia de resonancia de espín de electrón es una técnica física que detecta especies con electrones desapareados, por ejemplo, los radicales libres que se producen en los alimentos una vez que éstos han sido expuestos a la radiación ionizante. Estas especies químicas al poseer un electrón desapareado tienen un campo magnético que es capaz de interactuar con un campo magnético externo, y dicha interacción puede ser detectada, siendo esto último el fundamento de la ESR. En los productos alimentarios con un contenido en humedad relativamente alto, los radicales inducidos desaparecen muy rápidamente. Por otra parte si el alimento contiene componentes con una materia seca relativamente alta, los radicales se pueden atrapar y permanecer lo suficientemente estables para ser detectados por ESR. b) Medición de la luminiscencia Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 24 La luminiscencia se ha empleado como método para detectar alimentos irradiados debido a que éstos contienen en su composición materia inorgánica (minerales) que permiten la ocurrencia del fenómeno físico. Además se ha demostrado que la extracción de dicha fracción mineral del alimento es posible facilitando la aplicación de esta técnica de detección. La luminiscencia en un sólido constituye la emisión de radiación como consecuencia de una absorción previa de radiación. El fenómeno de termoluminiscencia (TL) consiste en la emisión de luz de un material semiconductor o aislante, previamente expuesto a radiación ionizante o no ionizante, y posteriormente estimulado con energía calorífica. El proceso de termoluminiscencia inicia con la exposición previa del material a una temperatura T0, seguido de una estimulación térmica a una temperatura T > T0, la cual generalmente es lineal y que tiene por objeto la medición de la intensidad de luz emitida como función de la temperatura, obteniendo con ello la curva TL llamada curva de brillo (glow curve). La curva de brillo presenta uno o varios máximos (bandas de TL) como consecuencia de los procesos de recombinación de portadores de carga liberados térmicamente. Dado que la termoluminiscencia fue el método utilizado en este trabajo, se presenta más adelante una exposición del fenómeno físico implicado. 1.21 Métodos químicos a) Análisis de hidrocarburos volátiles La mayoría de los productos volátiles formados en el alimento por la radiación se originan a partir de la fracción lipídica; por lo tanto Nawar en 1970 [23], propuso que la medición de los productos radiolíticos de los lípidos en los alimentos, podrían formar la base de los métodos químicos para identificar a los alimentos irradiados. Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 25 Experimentalmente observó que los ácidos grasos al ser sometidos a dosis altas (del orden de kGy) de irradiación presentaban rupturas de enlaces dando origen a hidrocarburos volátiles. Este fenómeno de ruptura de los enlaces C-C suele presentarse en las posiciones y con respecto al grupo carbonilo formándose alcanos y alquenos. Sin embargo, esta información puede no encontrarse a dosis bajas del orden de Gy. Para realizar estos análisis se emplea la cromatografía de gases, cromatografía liquida o espectrometría de masas, y ha demostrado ser muy efectivo para detectar carnes irradiadasde pollo, vaca y cerdo. b) 2-Alquilciclobutanonas LeTellier y Nawar en 1972 aislaron una serie de compuestos cíclicos a partir de los triglicéridos simples irradiados en vacío a 60kGy. Estos compuestos se sabe que son ciclobutanonas sustituidas por un grupo alquilo localizado en la posición 2 del anillo. Las 2-Alquilciclobutanonas son empleadas como marcadores para alimentos irradiados que contienen grasa ya que no es detectada en carnes crudas o cocidas, pero se presenta cuando la muestra es irradiada, la duración de las ciclobutanonas es de aproximadamente 20 días a una temperatura de 4º C. 1.22 Métodos biológicos a) “Ensayo cometa” de ADN Ahora está ampliamente aceptado que el ADN es el mayor objetivo celular de la radiación ionizante. El daño en el ADN inducido por la radiación es el responsable de la inactivación de los microorganismos, destrucción de insectos, inhibición en la formación de brotes, etc. La radiación ionizante en dosis altas, induce tres clases principales de daños en el ADN: puede romper la doble hélice, rompe la hélice simple y daña Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 26 la base, la posterior hidroxilación es la primera de estos cambios que se pueden observar y cuantificar utilizando varias técnicas. Una de las técnicas es la electroforesis en microgel. Esta técnica facilita el análisis de la fuga del ADN de las células simples o extraídas del núcleo del material alimentario y bañado en gel de agarosa en portaobjetos. El fragmento de ADN se escapa del núcleo durante la electroforesis formando una cola en la dirección del ánodo. De este modo las células dañadas tendrán la apariencia de un cometa cuando el gel se tiña de un colorante fluorescente y se observe a través del microscopio. Las células de muestras no irradiadas aparecerán sin colas o apenas observadas. b) Detección inmunológica de bases de ADN modificadas Cuando se expone al ADN a radiación ionizante, una proporción de la timidina presente se convierte en dihidrotimidina por interacción con radicales libres. El método de ELISA ha permitido la detección de la dihidrotimidina en algunos alimentos irradiados [23]. 1.23 Termoluminiscencia La termoluminiscencia como fenómeno, se define como la emisión de luz estimulada térmicamente, para que se presente debe haber previamente una absorción de energía por parte de la materia en estudio. En general dicha absorción es debida al efecto de la radiación. Para que se desarrolle este fenómeno se requieren de tres requisitos; el material debe ser aislante o semiconductor. Debe absorber energía de la radiación durante la exposición a ésta y la emisión de luz es provocada por el calentamiento. Dado que la fracción polimineral de la mejorna es como un aislante debido a su contenido de cuarzo, el fenómeno de termoluminiscencia se debe presentar, como veremos en los resultados de esta tesis. Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 27 En general, la emisión luminiscente se explica por la transferencia de energía de la radiación a los electrones del sólido. Así los electrones pasan de un estado energético basal a uno excitado, o bien se ionizan para quedar libres y ser atrapados por defectos tales como vacancias o impurezas que pueden estar presentes en el sólido [24]. Los electrones en estado excitado cuando reciben energía del calentamiento, es decir, cuando se les excita con calor o luz, regresan a un estado más estable. La energía que se libera en esa transición se manifiesta como emisión de fotones, es decir, cierta intensidad de luz que puede detectarse con el equipo de termoluminiscencia que realiza un barrido de temperatura controlada, y finalmente la señal la convierte en una curva de brillo de cada muestra irradiada. Las curvas de brillo, generalmente presentan bandas con máximos, y cada pico o máximo se relaciona con un tipo de trampa; mientras que la temperatura a la que aparece el pico indica la energía necesaria para activarlas. Es decir, se le puede asociar una energía de activación para liberar a la carga de su trampa donde estaba retenida. El área bajo cada pico es indicativa del número de cargas retenidas en las trampas, lo que depende de la cantidad de radiación impartida o dosis. De aquí la importancia de encontrar una región lineal de dosis-respuesta TL, y el análisis de las curvas de brillo que serán particulares para cada tipo de material cristalino o polimineral como en el caso de los alimentos. 1.24 Luminiscencia en sólidos El fenómeno de termoluminiscencia (TL) consiste en la emisión de luz al calentar, por debajo de su temperatura de incandescencia, una sustancia sólida previamente expuesta a un agente excitante tal como las radiaciones ionizantes. Este fenómeno se conoce desde hace casi cuatro siglos. La primera observación que se registra en la literatura se Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 28 debe a Boyle, quien en 1663 informó ante la Royal Society of London que al calentar un diamante en la oscuridad éste emitía un extraño destello [25]. Sin embargo, no fue sino hasta 1950 en que Daniels en Wisconsin EUA [26] propusieron usar el fenómeno físico, aún desconocido, consistente en la liberación por medios térmicos de la energía almacenada en un material la cual había sido inducida por la radiación, para la detección de la radiación ionizante. La luminiscencia se presenta en una gran variedad de materiales tales como: cristales inorgánicos, vidrios, cerámicas, compuestos orgánicos como el polietileno y el teflón, entre otros, así como en ciertos materiales bioquímicos y biológicos. Sin embargo los materiales de interés para la dosimetría en la actualidad, están representados por los sólidos dieléctricos con un amplio intervalo de transparencia óptica. La existencia de defectos en la red cristalina de un sólido en importante para que se produzca el fenómeno de luminiscencia cuando el cristal es expuesto a la radiación ionizante. Ion alcalino Ion halogenuro Figura 1.5 Representación esquemática tridimensional para un cristal perfecto de un halogenuro alcalino. En un sólido cristalino perfecto, los átomos ocupan posiciones ordenadas en una estructura reticular periódica (ver figura 1.5). La existencia de cualquier alteración en esta estructura constituye un defecto. Los cristales reales no presentan estructura ideal sino que tienen una gran cantidad de imperfecciones o defectos de la red. Entre los diversos tipos Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 29 + + de imperfecciones que pueden presentarse en un cristal están los defectos puntuales, que son anomalías localizadas en ciertas regiones del mismo y con un tamaño comparable al de los iones de la red (figura 1.6). + ion alcalino - ion halógeno + vacancia de ion alcalino - vacancia de ion halógeno + ion alcalino intersticial - ion halógeno intersticial Figura 1.6 Representación esquemática de un halogenuro alcalino en dos dimensiones. a) Estructura ideal, b) vacancias, c) y d) Iones intersticiales y vacancias al mismo tiempo. La vacancia es un defecto puntual producido por la ausencia de un ion en una posición normalmente ocupada en la red cristalina. Los iones o átomos que ocupan los espacios de la red que normalmente deberían estar vacios, se denominan intersticiales y pueden corresponder a átomos de cristales desplazados de su posición normal en la red o bien a átomos de impurezas. En general, un defecto será cualquier alteración de la red cristalina. Los defectos puntuales, son alteraciones del cristal en algún sitio, y consisten en la ausencia o exceso de iones, estos a su vez pueden ser intrínsecos cuando exista un átomo o ión extra donde no debía de haber (llamado defecto Frenkel)ó que falte uno de los átomos o iones dentro del cristal, conocida como vacancia, esta puede ser de un ión negativo o positivo (defecto Schottky). Mientras los defectos extrínsecos son impurezas, iones distintos a los que forman la red, pueden ser sustitucionales (que ocupa un lugar donde normalmente no hay nada), o intersticiales (en los espacios libres Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 30 + + entre iones). Estos defectos se producen o se inducen de manera que se mantienen la estequiometría y la neutralidad eléctrica [12]. Cuando un sólido cristalino es expuesto a la radiación ionizante, se producen electrones libres y consecuentemente “agujeros”. Estos portadores de carga o entes móviles migran por el cristal hasta quedar atrapados en las imperfecciones antes mencionadas, si un electrón se atrapa en una vacancia a ese par se conoce como centro F o centro de color. + ion alcalino - ion halógeno + vacancia de ion alcalino - vacancia de ion halógeno + ion alcalino intersticial - ion halógeno intersticial Electrón Agujero Figura 1.7 Representación esquemática de los centros de color más comunes (a) centro F mostrando a un electrón atrapado en una vacancia aniónica, (b) centro F mostrando que la distribución del exceso de electrones es principalmente sobre los cationes adyacentes a la vacancia aniónica, (c) centro H consistente en un agujero atrapado en un anión intersticial y (d) centro A, consistente en la asociación de un anión intersticial con una vacancia de ion negativo. Los centros de color pueden tener niveles de energía que producen bandas de absorción óptica en longitudes de onda a las que el cristal es normalmente transparente y pueden determinarse experimentalmente [27]. La posibilidad de absorber luz hace que el cristal se coloree, de ahí el nombre de centro de color. La figura 1.7 muestra en forma esquemática algunos de los centros de color más comunes. La desexcitación de un centro de color puede tener lugar mediante la disipación de su exceso de energía, o bien por la emisión de un fotón. Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 31 Cuando ocurre el segundo proceso, se le conoce como fenómeno de luminiscencia. En el caso más general, la desexcitación de un centro de color puede ocurrir por una combinación de estos dos procesos, su estudio es complejo. Los centros F son en realidad importantes porque son responsables también de la emisión termoluminiscente en las muestras sólidas como en el caso de los poliminerales compuestos normalmente de cuarzo y feldespatos. 1.25 Modelo de bandas El fenómeno de luminiscencia recibe nombres particulares de acuerdo con el tipo de energía que se proporciona a los centros luminiscentes para desexcitarlos. Si esta energía se suministra por medio de radiación de frecuencia óptica, al fenómeno de emisión se le llama radiofotoluminiscencia (RFL), si es con luz de cierta longitud de onda entonces será luminiscencia ópticamente estimulada (OSL), y si la desexcitación se logra con energía térmica, se le conoce como termoluminiscencia. Esta última, consiste en la emisión de fotones de luz visible por un material que ha sido expuesto previamente a la radiación, al calentarlo por debajo de su punto de incandescencia sin involucrar la emisión de cuerpo negro. El nombre correcto del fenómeno es el de luminiscencia térmicamente estimulada; sin embargo la costumbre ha impuesto la denominación de termoluminiscencia (TL). Los mecanismos involucrados en la termoluminiscencia se muestran esquemáticamente en la figura 1.8 cuando se irradia el material, algunos de los electrones se excitan de la banda de valencia (BV) a la banda de conducción (BC), generándose pares de electrones en la banda de conducción y los correspondientes huecos en la banda de valencia. Los portadores de carga permanecen en las bandas por un Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 32 tiempo breve, luego pueden caer en trampas con niveles de energía dentro del gap, donde permanecen hasta que se les proporciona energía suficiente y adquieran cierta frecuencia de movimiento para liberarse y se recombinen para la emisión de luz. Figura 1.8 Mecanismo involucrado en el fenómeno de termoluminiscencia. En la etapa de calentamiento, también conocida como etapa de lectura usando un detector sensitivo a la luz, tal como un fotomultiplicador. La gráfica que se obtiene al registrar la emisión de la luz en función de la temperatura se llama curva de emisión termoluminiscente, o curva de brillo y está formada por uno o más picos de emisión, algunos de los cuales pueden incluso traslaparse. Para explicar la ocurrencia de un pico TL, es necesario suponer que existen por lo menos dos tipos de imperfecciones en el cristal: en la excitación inicial una captura de electrones y la otra captura de huecos. Los electrones y los huecos se producen en pares debido a la aplicación de la radiación. Las energías de estos portadores de cargas están relacionadas a estados de atrapamientos asociados con las imperfecciones, y las energías están dentro de la banda prohibida del Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 33 cristal [28]. Estos estados son metaestables, pero normalmente a bajas temperaturas de excitación sus tiempos de vida son muy largos. Para propósito de discusión, el estado de atrapamiento del electrón se considera más cercano a la banda de conducción y el estado de atrapamiento del hueco a la banda de valencia. En este modelo, la muestra es calentada y los electrones son térmicamente liberados hacia la banda de conducción, y después puede recombinarse con huecos atrapados, produciéndose así la emisión de fotones. En esta situación el estado de atrapamiento del hueco es llamado centro luminiscente o centro de recombinación y el estado de atrapamiento del electrón es llamado trampa. La energía térmica que se proporciona al material al calentarlo después de irradiado, libera al ente móvil que estaba atrapado, el cual después de viajar por el cristal se recombina con un centro luminiscente que existe en la banda prohibida emitiendo un fotón de luz (figura 1.9). Figura 1.9 Modelo de bandas para el fenómeno TL [29]. Debido a que el proceso de emisión luminosa implica la desocupación de varias trampas de diferentes energías, el ente móvil es liberado a Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 34 diferentes temperaturas, lo que da lugar a una curva de termoluminiscencia la cual es característica de cada material. a) Al irradiar el cristal los electrones son transferidos de la banda de valencia (BV) a la banda de conducción (BC) dejando los correspondientes agujeros en la BV; los electrones y agujeros viajan por el cristal hasta ser atrapados en estados metaestables de la banda prohibida. También puede ocurrir que centros F que quedan retenidos en estructuras más complejas. Durante el calentamiento: b) La carga (electrón) se recombina con un agujero atrapado; c) El agujero se recombina con una carga atrapada; d) La carga y agujero se recombinan en un centro luminiscente de la banda prohibida para emitir luz. La mayor parte de los descubrimientos e investigaciones relativos al fenómeno de termoluminiscencia han estado dirigidos hacia su aplicación en la dosimetría de la radiación ionizante y hacia la obtención de materiales dosimétricos más sensibles y estables para monitorear ambientes desde baja hasta alta radiación, incluyendo sitios fuera de la atmósfera terrestre. La dosimetría termoluminiscente se basa fundamentalmente en el hecho de que la cantidad de luz emitida por el material termoluminiscente irradiado es proporcional a la dosis de radiación recibida por alguna fuente. 1.26 Modelode Randall-Wilkins El primer modelo matemático de aceptación general desarrollado para explicar las características generales de las curvas de termoluminiscencia fue desarrollada por Randall y Wilkins en 1945 [30]. Este modelo, llamado modelo de Randall-Wilkins, asume una cinética de primer orden para termoluminiscencia (TL). Supone la existencia de dos tipos de niveles: uno de atrapamiento y otro de recombinación y excluye Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 35 la posibilidad de re-atrapamiento de electrones que has sido liberados térmicamente. Los electrones en las trampas tienen una distribución de Maxwell de energías térmicas; de ahí la probabilidad p, de que un electrón escape de una trampa de profundidad E (energía de activación, eV) a una temperatura T (ºK) está dada por la ecuación de Arrhenius: Donde s (s-1) es el factor de frecuencia y k es la constante de Boltzmann. El factor de frecuencia s es conocido como la frecuencia de “intento de escape” de la carga de su trampa que lo retiene. Tomando en consideración lo anterior tenemos que la intensidad luminosa I, está determinada por la proporción de electrones liberados de las trampas en un momento dado a una temperatura constante, en donde el signo negativo indica la pérdida de electrones y n (m-3) es la densidad de ocupación de electrones en la trampa en el tiempo t (s), por lo que I(t) está determinada por I(t) el número de fotones emitidos por unidad de volumen por unidad de tiempo (m-3s-1) y e[-E/kT] es la función de Boltzmann, la cual es proporcional a la probabilidad de que un electrón atrapado se escape térmicamente de la trampa. Si el material se calienta a una rapidez constante =dT/dt, esto es el calentamiento en el equipo de manera lineal constante, puede obtenerse: En donde n representa la concentración de electrones cuando la temperatura alcanza el valor T. suponiendo que todos los electrones se recombinan radiativamente, con un centro de recombinación cercano a la banda de valencia, la intensidad I (proporcional a la razón de desatrapamiento o escape) TL es Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 36 Combinando las ecuaciones 3 y 4 I(t) toma la forma Esta ecuación permite graficar la intensidad I de luminiscencia en función de la temperatura T y la curva resultante sería una aproximación a una curva de brillo experimental dada. El modelo de Randall-Wilkins supone solo un tipo de trampa, por lo que la ecuación anterior genera un solo pico. En un experimento la curva de brillo suele exhibir más de un máximo de emisión, cada uno relacionado con una trampa distinta y en principio puede involucrar la existencia de distintos centros de recombinación. 1.27 Método del levantamiento inicial Este método de levantamiento inicial fue propuesto por primera vez por Garlick y Gibson en 1948 [31]. Sirve para determinar la energía de activación de un pico aislado y es independiente del orden de la cinética, para evitar el error debido a una disminución en el número de electrones que quedan atrapados, es necesario restringir el rango de temperatura de tal manera que la intensidad de la termoluminiscencia alcanzada no exceda del 15% de la intensidad máxima del pico, es decir, la parte inicial de la elevación del pico, también asume que en esta región la cantidad de electrones atrapados es constante y por ende la dependencia inicial con la temperatura es despreciable; esto se muestra en la figura 1.10 Facultad de Química, UNAM Capitulo I. Antecedentes 37 Figura 1.10 Método de levantamiento inicial para una curva de brillo. En este método de levantamiento inicial, se utiliza la ecuación de Arrhenius que tiene la expresión I e[-E/kT], y aplicando logaritmos se obtiene ln(I)= -E/kT de donde comparando los términos de esta ecuación con una recta de la forma y=mx se tiene que la pendiente es m= -E/k donde k es la constante de Boltzman. Esta es una forma de obtener la energía de activación de una trampa para una curva de brillo que tiene solamente un pico. El modelo considera que al tener un calentamiento lineal , la intensidad termoluminiscente I es directamente proporcional a la velocidad de desatrapamiento a una temperatura máxima, la cual coincide con la Tmáx, puede deducirse la expresión para una cinética de primer orden y a partir de ella también se puede calcular el factor de frecuencia s: max)/( max 2 kTEse kT E en donde los términos cinéticos E, β, K son conocidos y el término Tmax depende de la temperatura de la curva de brillo experimental. Facultad de Química, UNAM Capitulo II. Desarrollo experimental 38 CAPITULO II. DESARROLLO EXPERIMENTAL Desarrollo experimental Este capítulo está dirigido al desarrollo de la parte experimental en esta tesis, se expone la metodología que se siguió para la extracción de los poliminerales de la muestra de mejorana (Origanum majorana) de origen Mexicano. Se mencionan los materiales, equipos y reactivos utilizados. Las muestras de mejorana fueron expuestas a la radiación gamma en el irradiador Gammacell-200 instalado en la Unidad de Irradiación y Seguridad Radiológica del Instituto de Ciencias Nucleares UNAM. Para desarrollar este trabajo experimental se utilizaron equipos del laboratorio de Luminiscencia y de Seguridad Radiológica que tiene la Unidad de Irradiación del Instituto de Ciencias Nucleares UNAM. La preparación de las muestras se realizó para obtener los poliminerales y exponerlos a la radiación gamma para obtener las dosis de interés que permitieran realizar el estudio de esta tesis. Las muestras de poliminerales irradiados fueron detectadas en un equipo de termoluminiscencia con atmósfera de nitrógeno y conectado a una computadora personal para obtener datos y analizarlos posteriormente. 2.1 Materiales, equipos y reactivos Para la separación y homogeneización del tamaño de partícula (53 y 149 m) de las muestras de mejorana se utilizaron los siguientes materiales de laboratorio: Facultad de Química, UNAM Capitulo II. Desarrollo experimental 39 Vasos de precipitados de 250 y 1000mL Alcohol etílico (CH3COH) Matraz Erlenmeyer de 250 y 500 mL Agua bidestilada Probetas de 250 y 1000 mL Peróxido de hidrógeno (H2O2) al 30% Pipetas pasteur Acetona Vidrios de reloj Irradiador Gammacell-200 autoblindado con 60Co Cajas petri de vidrio Lector luminiscente modelo Harshaw TLD3500 Agitadores magnéticos Parrilla de agitación Osyma Thermolyne Espátulas Balanza digital Ohaus Pizeta Cribas de No 100 y 270 (tamaño de poro 149 y 53 m) Cronómetro Discos de aluminio Pinzas para crisol Mufla Thermolyne modelo 47900 Para las irradiaciones de las muestras se usaron los sitios de las cámaras de irradiación de los irradiadores Gammacell-200 autoblindado para dosis bajas. Una lámpara de luz ultravioleta (UV) de vapor de mercurio (Hg) con potencia de radiación 218 μW/cm2, modelo OS-9286, 120 VAC/60 Hz, marca Pasco Scientific. 2.2 Extracción de poliminerales de la Mejorana (Origanum majorana) Para realizar la separación de los poliminerales de mejorana se utilizaron muestras de origen Mexicano provenientes del Estado de Puebla. Las extracciones se realizaron con 25 g de muestra seca previamente triturada, las cuales se colocaron en vasos de precipitado de 1 L con una mezcla de alcohol etílico y agua en una proporción de 30:70, 20:80, 10:90 y agua destilada, con agitación constante por 12 horas a 180 Facultad de Química, UNAM Capitulo II. Desarrollo experimental 40 rpm con el objeto de separar la parte orgánica de la inorgánica. Se
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